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2013/14

Daiana Esquier Galeano


Enzimologa e interacciones moleculares
Segundo de Bioqumica
UNIVERSIDAD DE LAS ISLAS BALEARES
SUPERXIDO DISMUTASA
NDICE

1. Introduccin
2. Caractersticas
Reaccin que cataliza
Estructura
Sustratos, productos, cofactores e inhibidores
Localizacin celular
Mecanismo de accin
3. Funcin Biolgica


















1. INTRODUCCIN

La Superxido dismutasas (SODs), es un antioxidante endgeno que fue descubierta por
McCords y Fridovich en 1969, consiguieron aislarla mediante el aislamiento de los eritrocitos.
Su nmero EC es 1.15.1.1, lo cual nos indica que pertenece a la familia de las oxidoreductasas,
es decir, que realiza una reaccin general de oxido- reduccin. A grandes rasgos podemos
decir que cataliza la reaccin de disimulacin del radical superxido en oxgeno molecular y
perxido de hidrgeno, Esto convierte la convierte en un sistema de defensa antioxidante muy
importante en la mayora de clulas expuestas a oxgeno.
Son un grupo de metaloenzimas presentes frecuentemente en organismos aerbicos,
aerotolerantes y algunos anaerobios obligados. Esta enzima es esencial para su defensa contra
la toxicidad que producen los metabolitos parcialmente reducidos, que se generan durante la
reduccin biolgica normal del oxgeno molecular. Su funcin consiste en eliminar el radical
superxido antes de que ste reaccione con molculas biolgicas susceptibles u origine otros
agentes txicos, ya que es muy reactivo.


2. CARACTERSTICAS

Reaccin que cataliza

La reaccin que cataliza es la misma para todas los
0rganismos:
Es una de las enzimas ms rpida que se conocen (K= 2 x x109 M-1S-1 para la CuZn-SOD). Por
ello la SOD se encuentra en las vas de sntesis de etileno y en las de degradacin de radicales
libres.

Estructura
La estrucutura de la enzima depende bastante del organismo al cual pertenezca, nos
centraremos en los tres tipos de SODs que se pueden encontrar en los seres humanos: SOD1,
SOD2 y SOD3. La primera es un dmero y las otras dos son dmeros. Adems se sabe que SOD1
y SOD3 contienen cobre y zinc en su centro activo mientras que SOD2 contiene manganeso.
Las 3 formas de SODs se diferencian segn s el metal que tienen en su centro activo. Estas a su
vez pueden dividirse en 2 familias filogenticas diferentes: CuZn-SODs y Fe/Mn-SODs.

Entre ellas no existe homologa de secuencias ni de estructuras de orden superior, lo que
indica que evolucionaron independientemente en respuesta a una presin evolutiva comn: la
presencia del oxgeno y la amenaza de su toxicidad.

Sustratos, productos, cofactores e inhibidores
El sustrato de la reaccin es siempre el mismo, superxido y protones, y el producto tambin
es el mismo para todas las reacciones, oxigeno y perxido de hidrgeno. Por otro lado los
cofactores que utiliza este enzima son iones metlicos (Cu
2+
, Mn
2+
, Zn
2+
y Fe
3+
). Esta enzima en
humanos tiene diversos inhibidores como pueden ser el 5,5'-dithiobis(2-nitrobenzoate), CN
-
,
perxido de hidrgeno, N3-, peroxinitrito, etc.

Localizacin celular
En eucariotas existen 3 tipos de SODs como ya hemos dicho, se trata de tres isoenzimas
diferentes que dependen del metal que contengan en su centro activo y cuya localizacin es
diferente dependiendo de la isoenzima de la que se trate. En su conjunto contribuyen a la
regulacin de las concentraciones del radical superxido. Las tres isoenzimas son: Mn-SOD
mitocondrial, CuZn-SOD citoslica y CuZn-SOD extracelular y Fe-SOD. En estudios realizados
en hepatocitos de rata se encontr que el 20 % de los radicales superxido formados en la
mitocondria pueden pasar al citosol, mientras el 80 % restante puede ser neutralizado por la
enzima mitocondrial.

Mecanismo de accin
El anin superxido como ya hemos dicho es una especie muy txica y reactiva, que se genera
como intermediario o como producto de la incompleta descomposicin del oxgeno en la
transformacin del oxgeno a agua. El mecanismo de toxicidad aceptado actualmente se conoce
como la Reaccin de Haber-Weiss.




- En la primera etapa el superxido interacta con un metal, por el Cu(II) o Fe(III), que se
encuentra disponible en la clula, dando como resultado la respectiva especie reducida.
- En la segunda etapa una molcula de agua oxigenada es reducida por ese catin,
produciendo un ion y un radical oxhidrilo. Este radical, deficiente en electrones, es un
potente e indiscriminante oxidante y un iniciador de reacciones por radicales libres. En
algunas bacterias esta actividad SOD est asociada a un centro que contiene hierro y en
algunos otros organismos contiene manganeso.








Fe-SOD y Mn-SOD. (Hu & Ribbe, 2012) Cu, Zn-SOD. (Hu & Ribbe, 2012)

La SOD de Cu/Zn se conoce desde 1938, pero fue en 1970 cuando por fin qued claramente
establecida la presencia de zinc en la misma y la reaccin global catalizada, que es la siguiente:


El agua oxigenada que se genera como resultado de la reaccin es descompuesta por la catalasa y de
esta manera ambas enzimas (SOD y catalasa), trabajando en equipo, protegen a las clulas de los
subproductos txicos, generados en la produccin de oxgeno.
La SOD mejor estudiada es la extrada de eritrocitos de bovinos, es una enzima de peso molecular
no muy elevado (32 kDa) y est constituidas por dos subunidades cada una de las cuales contiene
un tomo de cobre y uno de zinc. Ambos centros metlicos estn unidos por un puente de imidazol
deprotonado. Las esferas de coordinacin, tetracoordinadas, se completan con otros tres nitrgenos
imidazolnicos en el caso del cobre, mientras que el zinc las completa con dos nitrgenos del mismo
tipo, y un oxgeno, proveniente de un residuo de cido asprtico.








Sitio activo de la Cu, Zn-SOD. En H63 se puede apreciar el puente imidazol. (Miller, 2004)



La esfera de coordinacin del zinc es un tetraedro bastante regular mientras que, como se ve en la
figura de arriba, la del cobre es ms irregular, lo que seguramente aumenta la reactividad de este
sitio.

Hay numerosas evidencias que sugieren, con toda claridad, que el cobre es realmente el sitio activo
donde ocurre la dismutacin. Con lo que llegamos a la conclucion de que el zinc debe desempear
un papel meramente estructural, ayudando a generar condiciones geomtricas optimas que faciliten
la reaccin. La reaccin puede describirse, formalmente, as:




Desde el punto de vista qumico, es muy interesante el hecho de que los dos iones metlicos estn
unidos por un puente imidazolato, por otra parte esta no es una configuracin usual para complejos
de imidazol, los que habitualmente se presentan en forma de complejos polimricos, unidos por un
puente de imidazolato: -M-N-im-N-M-N-im-N-M-N-im-N-M-

Durante la reaccin, que es muy rpida, se supone que el anin superxido llega al centro activo a
travs de un mecanismo de gua electrosttica. Es decir, existen una serie de residuos de
aminocidos cargados positivamente, cercanos al centro activo activo y que van guiando al anin,
hacia este sitio (figura 1).
- La Arg143 se asocia con el ion superxido desplazando a una molcula de agua. El
superxido se une directamente a Cu (II) y transfiere su electrn hacia la esfera interior. El
puente Cu-His63 se rompe.
- El dioxgeno se difunde fuera del canal del centro activo y se sustituye por una molcula de
agua proveniente de los puentes de hidrgeno.
- En la segunda mitad del ciclo de la reaccin, otro ion superxido entra en el canal del centro
activo, desplaza una molcula de agua y al enlace de hidrgeno con Arg143. Como el
electrn se acepta del Cu(I), a travs de una transferencia de electrones de esfera externa, el
superxido acepta simultneamente un protn de una molcula de agua.
- Posteriormente, el Cu(II) , restablece el puente con His63 desprotonada. El perxido de
hidrgeno elctricamente neutro se difunde fuera del canal del centro activo, para ser
reemplazado por una molcula de agua. No hay cambios significativos en la protena en el
ciclo cataltico (Miller, 2004).

























Figura 1. Mecanismo de accin de la Cu, Zn-SOD. (Miller, 2004)

Eso explica tambin porque ciertos aniones de cargas elevadas, como el ortofosfato o los vanadatos,
inhiben fuertemente a la enzima, bloqueando de alguna maenra el transporte de sustrato. Algunos
otros, ligandos pequeos tales como el fluoruro o el cianuro, son tambin capaces de inhibir el
sistema, aunque en este caso probablemente actan bloqueando directamente el sitio activo.

Algunos estudios espectroscpicos realizados con esta enzima, han revelado informacin sobre las
caractersticas del sitio bimetlico. En particular, una gran cantidad de trabajos se han realizado
utilizando la espectroscopaelectrnica, estudiando a la enzima sustituida en uno, o en los dos, de
sus sitios metlicos, por otros cationes. Algunos resultados se resumen a continuacin, agrupados
por sistemas:

a) Sistemas I. Cu
2
M
2
-SOD, donde M puede ser Zn, Co, Cd o Hg.
b) Sistemas II. Cu
2
E
2
-SOD, donde E significa sitio vaco.
c) Sistema III. Ag
2
Cu
2
-SOD.
d) Sistema IV. Cu
2
Cu
2
-SOD.



3. FUNCIN BIOLGICA

Como ya hemos dicho se conocen 3 formas de SODs segn el metal que tienen en su centro activo,
que a su vez pueden dividirse en 2 familias filogenticas diferentes: CuZn-SODs y Fe/Mn-SODs.
Entre ellas no existe homologa de secuencias ni de estructuras de orden superior, lo que indica que
evolucionaron independientemente en respuesta a una presin evolutiva comn: la presencia del
oxgeno y la amenaza de su toxicidad.
Como las concentraciones fisiolgicas de radical superxido son normalmente bajas, la reaccin
depende de su difusin. Sin embargo, la asociacin de la enzima con su sustrato no es una simple
cuestin de difusin y colisin. La estructura submolecular de la enzima, la distribucin de carga
electrosttica, interacciones de apantallamiento por solventes inter e intramoleculares, y las
interacciones hidrodinmicas, pueden afectar tanto a la difusin del radical superxido como a su
asociacin con la enzima. Se ha encontrado que el campo elctrico de la SOD favorece 30 veces la
velocidad de asociacin del anin.
Los estudios con mutantes deficientes de la SOD evidencian que la enzima, dentro de este sistema
de defensa, tiene una funcin fundamental. El perxido de hidrgeno generado por la accin de la
enzima, es eliminado por la catalasa y/o la glutatin peroxidasa.
El gen que codifica a esta enzima, se encuentra ubicado en el cromosoma 21 y ms especficamente
en el segmento extra (21q22) que aparece en el sndrome de Down, de ah que los niveles de SOD
se encuentren elevados en la generalidad de estos casos.
El interes bioqumico y biolgico en eliminar los radicales libre como el ion superxido parte del
hecho de que los mismos pueden ocasionar daos celulares a diferentes niveles como por ejemplo:
Atacan a los lpidos y protenas de la membrana celular por lo que la clula no puede
realizar sus funciones vitales (transporte de nutrientes, eliminacin de deshechos, divisin
celular...).
Atacan al DNA impidiendo que tenga lugar la replicacin celular y contribuyendo al
envejecimiento celular.
Estrs oxidativo: se da cuando los radicales libres oxidan muchas estructuras biolgicas
dandolas, se produce cuando hay un desequilibrio en el cual la produccin de radicales
libres es mayor que su eliminacio. Las principales consecuencias del estrs oxidativo son:

Envejecimiento: cuando toman el electrn que les hace falta de las clulas del
tejido colgeno de la piel, dando como consecuencia, que la piel pierda su
elasticidad al daarse las fibras elsticas y la aparicin precoz de arrugas y
sequedad.
Cncer: Pueden contribuir al crecimiento anormal de las clulas, al perder stas
la capacidad de reconocer las clulas vecinas. Esa proliferacin sin control se
produce en los tumores benignos o malignos.
Ateroesclerosis: Peroxidacin de lpidos en las partculas de LDL con dao de
otros componentes.
Cataratas: Modificaciones irreversibles en las protenas.
Cuadros Inflamatorios Crnicos: Activacin de genes relacionados con la
respuesta inflamatoria.





















Bibliografa:

http://es.wikipedia.org/wiki/Super%C3%B3xido_dismutasa
http://bvs.sld.cu/revistas/ibi/vol14_1_95/ibi01195.htm
http://www.brenda-
enzymes.org/php/result_flat.php4?ecno=1.15.1.1&Suchword=ho&organism[]=Homo+sapiens
&show_tm=0
http://www.ebi.ac.uk/thornton-srv/databases/cgi-
bin/pdbsum/GetPage.pl?pdbcode=4ff9&template=interfaces.html&o=RESIDUE&l=1
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/401540/exe/leccin_37_enzimas_cupricas_tipo_i_y_su
perxido_dismutasa.html
http://www.federacioncafe.com/Documentos/CafeYSalud/CafeYAntioxidantes/Radicales%20
libres.pdf