Anlisis de Materiales Orgnicos

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3. ANLISIS DE MATERIALES
ORGNICOS
Anlisis de Materiales Orgnicos
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3. ANLISIS DE MATERIALES ORGNICOS
3.1. INTRODUCCIN
3.1.1. Fundamento
El objeto de esta prctica es que el alumno se familiarice con el
tratamiento y anlisis de muestras reales orgnicas. Como ejemplo
representativo se ha seleccionado un producto crnico. No obstante, el
procedimiento analtico a seguir as como los distintos tratamientos
(extracciones, digestiones, disgregaciones etc) son extrapolables a otro tipo de
alimentos y en general a cualquier tipo de sustancia o orgnica.

3.1.2. Toma de la muestra
Como la carne y sus derivados tienden a ser muy heterogneos, la
preparacin de una muestra verdaderamente representativa con fines
analticos presenta a menudo muchas dificultades. Por ello debe ponerse
mucho cuidado en la preparacin de la misma.
Se toma una muestra de carne, lo ms representativa posible. Para carne
y productos crnicos separar la carne del hueso y de la piel, as como de la
capa superficial. La carne o mezcla se har pasar por una mquina picadora
para convertirla en picadillo fino. Posteriormente se transferir a un mortero
de gata donde se macerar. El picado y macerado, se har al menos dos
veces. Debe cuidarse de reincorporar los tejidos conjuntivos o jugos que se
hayan separado durante el picado. En el caso de los embutidos, se quita la
piel.
En el caso de muestras previamente comercializadas como
homogeneizado (ej. pastas de pats, carnes deshidratadas...), se vierte el
contenido entero o parte de l en un vaso de precipitados con una esptula.
Finalmente, se transfiere la muestra a un recipiente etiquetado y cerrado que
se guarda en un refrigerador.


3.1.3. Recipientes para muestras
Para almacenar las muestras de alimentos se utilizarn frasco de vidrio o
polietileno. Estos recipientes tienen que secarse cuidadosamente antes del
uso. Hay que prestar especial atencin a la tapadera. El agua puede quedar
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retenida en el enroscado de la tapadera dando lugar a resultados errneos
durante el anlisis.

3.1.4. Etiquetado y hojas de registro
Una vez tomada la muestra sta se etiquetar y registrar
inmediatamente. La informacin mnima requerida para identificar la muestra
es la siguiente: nmero consecutivo de la muestra, tipo de muestra, nmero
del lote o producto, fecha y hora de la toma de muestra, fecha de recepcin,
fecha de recepcin en el laboratorio, fecha de anlisis, analista, suministrador
de la materia prima, caractersticas especiales (si las hay).
ESQUEMA DE ANLISIS
Obtenida la muestra analtica se proceder a continuar el procedimiento
analtico seleccionado para este tipo de muestras, atendiendo al esquema
mostrado en la Figura 3.1. A partir de la muestra seca:









Figura 3.1. Esquema de anlisis elegido para la prctica n 3.
Pesar xg de muestra
1. Calcinacin 2. Digestin con MW
Redisolucin
Determinacin de
Ca (volumetra)
Determinacin de Cu,
Fe, Zn por AA
Determinacin de
P (colorimetra)
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3.2. DETERMINACION DE LA HUMEDAD MEDIANTE SECADO EN ESTUFA

Fundamento
Secar a 100C hasta peso constante

Material
Vasos de precipitados de 100mL
Varillas de vidrio con punta aplastada
Desecador provisto de deshidratante

Aparatos
Balanza de precisin
Estufa

Procedimiento
Las determinaciones de humedad de cada muestra se realizaron por
triplicado.
1. Secar los vasos de vidrio durante treinta minutos en la estufa a 100C.
2. Sacar los vasos de la estufa e introducirlos en el desecador durante
media hora.
3. Dejar enfriar los vasos hasta que alcancen la temperatura ambiente, y
pesarlos.
4. Tomar un peso de muestra e introducirla en los vasos.
5. Pesar con las muestras.
6. Secar la muestra en la estufa.
7. Retirar los vasos de la estufa y colocar en el desecador
8. Repetir las operaciones de secado hasta peso constante.

Cuestiones
1. Describa el aspecto de la muestra analizada e identifquela
correctamente.
2. Determine el contenido en humedad de la muestra.
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3.3. DIGESTIN DE LA MUESTRA
En general, las etapas seguidas en la determinacin son:
1. Destruccin de la materia orgnica del elemento por calcinacin u
oxidacin en horno microondas y disolucin de los elementos inorgnicos
en medio cido.
2. Separacin o enmascaramiento de las sustancias que interfieren.
3. Determinacin del elemento que interesa, casi siempre
colorimtricamente.
Cuando se determinan elementos traza hay que poner especial cuidado en
la limpieza de todos los aparatos, usar reactivos de grado ms puro y llevar a
cabo determinaciones de blanco.

3.3.1. DESTRUCCIN DE LA MATERIA ORGNICA POR CALCINACIN

El mtodo es aplicable a todos los tipos de productos alimenticios con la
excepcin de los alimentos ricos en grasa >50%.

Fundamento
La materia orgnica se quema a la temperatura ms baja posible y la
materia inorgnica remanente se enfra y pesa. El calentamiento se realiza en
etapas, primero para eliminar el agua, a continuacin para carbonizar el
producto totalmente y finalmente, para incinerar en horno de mufla a 550C.
Posteriormente, se extraen las cenizas con cidos.

Reactivos
Agua desionizada
Acido clorhdrico concentrado 35%
Acido ntrico concentrado 65%
Disoluciones estndar de 1000ppm de Fe, Cu y Zn

Aparatos
Horno de mufla controlado termostticamente a 550C.
Placa de calentamiento elctrica provista de control termosttico.
Crisoles (si las cenizas van a utilizarse para anlisis de elementos traza,
limpiar los crisoles por ebullicin con cido ntrico al 10% y lavar con agua
destilada).
Desecadores con slica gel fresca como desecante.

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Procedimiento
1. Se toman las cpsulas de slice necesarias (teniendo cuidado de que no
estn corrodas) y se limpian mantenindolas en un bao de cido
ntrico al 10%. Lavar las cpsulas con agua e introducirlas en la mufla a
500
o
C y secar hasta peso constante, con una precisin de 0,0001g.
2. Pesar en cada crisol, con exactitud, una cantidad de producto lo ms
cercano posible a 2g y aadir a todos los crisoles 1g de carbonato de calcio,
excepto al destinado a la determinacin de Ca como oxalato.
3. A uno de los crisoles se deber aadir, adems un determinado volumen de
disolucin de estndar de Zn, Cu y Fe, de manera que, teniendo en cuenta
el volumen final de enrase de la muestra, la concentracin sea de 2ppm.
4. Introducir las cpsulas en la mufla y aplicar el programa de temperaturas
indicado a continuacin:

Temperatura (
o
C) Tiempo (min)
25 2
100 30
150 30
200 30
400 60
475 30
475 12 h

4. Terminada la calcinacin, trasladar las cpsulas al desecador.
5. Pesar con precisin de 0,0001g.
6. Cada una de estas dos cpsulas se destinar a fines distintos, segn los
cuales se realizarn distintos tratamientos a las cenizas:
Determinacin de Ca, indicado posteriormente.
Determinacin de elementos traza, tambin indicado posteriormente.




3.3.2. DESTRUCCIN DE LA MATERIA ORGNICA HACIENDO USO DE LA
RADIACIN MICROONDAS
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Fundamento
El mtodo puede aplicarse a todo tipo de productos alimenticios. La
materia orgnica se destruye y oxida por la accin de cido ntrico en
ebullicin. A diferencia de la digestin por va hmeda convencional, la
muestra es calentada a travs de aquellas sustancias existentes en la
mezcla (muestra + cido) capaces de absorber la radiacin microondas,
generndose un aumento de temperatura y presin en el interior de la
bomba de digestin que favorece la digestin de la muestra.

Reactivos
cido ntrico concentrado (60%)
Disoluciones estndar de 1000ppm de Fe, Cu y Zn

Material
Bomba de digestin
Recipiente de tefln
Microondas

Procedimiento
1. Pesar entre 0,2000 y 0,2500g de muestra seca, con precisin. Nunca
sobrepasar la cantidad de 0,2500g de muestra.
2. Introducir la muestra en la bomba y aadir 4mL de HNO
3
sub-boiling.
3. Una de las parejas de la mesa deber aadir al crisol un determinado
volumen de disolucin de estndar de Zn, Cu y Fe, de manera que,
teniendo en cuenta el volumen final de enrase de la muestra, la
concentracin sea de 2ppm.
4. Introducir la bomba cerrada dentro de la carcasa.
5. Colocar en el interior del microondas y aplicar el siguiente programa de
digestin:




Potencia (W) Tiempo (s)
250 60
0 30
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250 60
450 120
600 120
0 120
Ventilacin 60

6. Finalizada la digestin, enfriar las bombas en un bao de agua fra
durante unos 45min.
7. Abrir la bomba.
8. Transferir cuidadosamente el contenido de la bomba a un matraz de
25mL.
9. Lavar el interior de la bomba con agua ultrapura y transferir al
matraz.
10. Aforar con agua destilada.
11. La disolucin resultante ser empleada para la determinacin de
elementos traza por absorcin atmica.

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3.4. DETERMINACIN DE ELEMENTOS TRAZA (Cu, Fe, Zn) POR
ABSORCIN ATMICA
El mtodo puede aplicarse a la determinacin de calcio, cobre, hierro,
magnesio, manganeso, potasio, sodio y cinc en los productos alimenticios.

Fundamento
Una vez eliminada la materia orgnica por incineracin seca (segn se
indica en el apartado 3.3.1) o digestin hmeda (apartado 3.3.2), el residuo
se disuelve en cido diluido. La solucin se pulveriza en la llama de un aparato
de absorcin atmica y se mide la absorcin o emisin del metal objeto de
anlisis a una longitud de onda especfica.

Reactivos
Acido clorhdrico 6N, 3N y 0,3N. Preparar 0,5L para toda la mesa.
Agua desionizada de calidad MilliQ.
Papel de filtro Albet 145.
Soluciones patrn de Fe, Cu y Zn, de1000mg/L.
Soluciones patrn. Preparar las disoluciones indicadas a continuacin a
partir de los patrones concentrados de cada elemento, aadiendo 50L de
HNO
3
sub-boiling si las disoluciones se enrasan a 50mL y 100L si se
enrasan a 100mL (SUGERENCIA: puede utilizarse un solo matraz para las
concentraciones ms elevadas de los tres metales, otro para las
concentraciones intermedias y un tercero para las concentraciones ms
bajas):
- Solucin patrn de Zn de 0,50, 0,75, y 1ppm para obtener la recta de
calibrado.
- Solucin patrn de Fe de 0,5, 1,5 y 3ppm, para obtener la curva de
calibrado.
- Solucin patrn de Cu de 0,5, 1,5 y 3ppm para obtener la recta de
calibrado.

Aparatos
Espectrmetro de absorcin atmica. El instrumento requiere
calibracin con patrones conocidos para cada serie de determinaciones de
cada elemento.
Material de vidrio especial utilizado para el anlisis de trazas. Todo el
material de vidrio debe lavarse perfectamente con cido ntrico diluido antes
de uso. Mantener el material de vidrio utilizado para anlisis de metales
traza separado de otro material de vidrio de uso general.
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Procedimiento a seguir para el caso de las muestras calcinadas segn
apartado 3.3.1
1. Tratar las cenizas obtenidas por va seca con 5-10mL de HCl 6N hasta
mojarlas totalmente y a continuacin desecar cuidadosamente sobre
placa caliente a temperatura moderada. Repetir el procedimiento, al
mismo tiempo, sobre un crisol limpio con el fin de OBTENER UN
BLANCO fiable.
2. Aadir 15mL de HCl 3N y calentar el crisol sobre la placa caliente
hasta que la solucin comience a hervir. Repetir para blanco.
3. Enfriar y filtrar a travs de papel de filtro hacia un matraz
volumtrico (elegir un matraz volumtrico con capacidad adecuada para
que la concentracin del metal en la solucin final se encuentre dentro
del margen de trabajo), reteniendo en el crisol la mayor cantidad posible
de slidos. Repetir para blanco.
4. Aadir 10mL de HCl 3N al crisol y calentar hasta que la solucin
comience a hervir. Repetir para blanco.
5. Enfriar y filtrar hacia el matraz volumtrico. Repetir para blanco.
6. Lavar el crisol al menos tres veces con agua y filtrar los lavados hacia
el matraz. Repetir para blanco.
7. Lavar perfectamente el papel del filtro y recoger los lavados en el
matraz. Repetir para blanco.
8. Enfriar y diluir el contenido del matraz hasta enrase (25mL). Repetir
para blanco.


Calibracin del aparato y medida de las muestras obtenidas a partir del
tratamiento anterior y de la digestin hmeda (apartado 3.3.2)
1. Poner en marcha el equipo de acuerdo con las instrucciones.
2. Medir las soluciones de calibracin y la solucin blanco de los reactivos.
3. Mientras se estn midiendo las muestras comprobar peridicamente que
los valores de calibracin permanecen constantes.
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4. Para los metales objeto de anlisis preparar una curva de calibracin
representando grficamente los valores de absorcin o emisin frente a la
concentracin del metal en g/mL.
5. Introducir las muestras y realizar las lecturas en absorbancia.
6. Los datos obtenidos, se sustituyen en la recta de calibrado
correspondiente obteniendo los resultados en ppm.

Cuestiones
1. A partir de las curvas de calibrado, calcule el contenido de cada uno de
los metales determinados en la muestra inicial.
2. Teniendo en cuenta que los cationes se determinarn a partir de la
disolucin obtenida tras la redisolucin del residuo de calcinacin,
indicar qu cationes podrn determinarse y qu otros pueden haber sido
volatilizados.
3. Para los elementos a determinar y en las concentraciones en que estos se
encuentran, considera que la tcnica de absorcin atmica es la ms
adecuada. Contraste la respuesta. Proponga al menos dos mtodos
alternativos.
4. Comparar y justificar los resultados obtenidos a partir de los dos tipos de
digestiones.
5. Calcule el porcentaje de recuperacin de Cu, Fe y Zn a partir de los
resultados obtenidos con y sin adicin.

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3.5. DETERMINACIN DE CALCIO COMO OXALATO POR
VALORACIN CON PERMANGANATO
Fundamento terico
El calcio precipita como oxalato a pH 4 (para impedir interferencia de los
iones fosfato), el oxalato se disuelve en sulfrico y el cido oxlico que se libera
se valora con una disolucin de permanganato potsico de normalidad
conocida.

Reactivos
Acido clorhdrico 5N y 2N.
Amoniaco diluido (1:2). Preparar un litro para toda la mesa.
Acido sulfrico diluido. 20mL de cido sulfrico concentrado se aaden
poco a poco y con agitacin a 180mL de agua y se deja enfriar la disolucin.
(Preparar un litro para toda la mesa)
Acido actico diluido. Un volumen de cido actico glacial y dos volmenes
de agua.
Oxalato amnico (disolucin saturada).
Permanganato potsico (0,05N). Prepararla justo antes de la valoracin.

Material
Probeta de 25 50mL
Calefaccin a ebullicin
Pipetas pasteur
Filtrar (embudo cnico)

Procedimiento
1. Las cenizas, fras obtenidas por va seca, se tratan con 10mL de HCl
5N, y se evapora la mezcla sobre una placa calefactora teniendo cuidado
de que no hierva.
2. Se aaden 10mL de HCl 2N, se calienta a ebullicin, se diluye con
10mL de agua y se filtra en un vaso de 250mL, intentando retener la
mayor cantidad posible de partculas slidas en la cpsula.
3. Se repiten la extraccin cida, dilucin y filtracin.
4. Los filtrados reunidos se llevan justamente a alcalinidad con
amoniaco diluido. La disolucin resultante se acidula con cido actico
diluido y se aade un exceso de 0,5mL de cido actico glacial.
5. Se calienta a ebullicin y se adicionan, lentamente 10mL de
disolucin saturada de oxalato amnico (medir pH).
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6. A continuacin se va aadiendo amoniaco diluido a la disolucin
caliente hasta pH aproximado de 3,8.
7. La disolucin se filtra a travs de papel Albet 145, comprobando que los
filtrados no precipitan ms por adicin de oxalato amnico.
8. Se lava el filtro con disolucin muy diluida de oxalato amnico.
9. Se perfora el papel con una punta de varilla de vidrio y se arrastra el
precipitado a un matraz de boca ancha mediante un chorro fino de agua
fra, luego con 10mL de cido sulfrico diluido, caliente (60C) .
10. Finalmente con agua caliente hasta un volumen final de unos 150mL.
11. La disolucin se valora con permanganato potsico 0,05N a 75C y
agitando con un termmetro hasta que el color rosa del permanganato
persista durante 30s.
1mL de KMnO
4
0,05N 0,001002g de Ca 0,001402g de CaO.

Valoracin de KMnO
4
Se realiza con sal de Mohr (Fe(NH
4
)
2
(SO
4
)
2
):
Preparar una disolucin 0,05M de sal de Mohr, ayudndose de un medio
cido sulfrico (1-2mL por litro). Preparar 250mL por mesa.
Transferir 10mL de la solucin a un erlenmeyer y aadir agua.
Realizar la valoracin en caliente.
Valorar por triplicado.

Cuestiones
1. Indique el fundamento qumico de la determinacin.
2. Calcule el contenido en calcio como % en peso respecto a la muestra
inicial.
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3.6. DETERMINACIN DE FSFORO EN CARNE Y PRODUCTOS
CRNICOS. COLORIMETRA DE FOSFATOS EN FORMA DE
FOSFOMOLIBDATO DE VANADIO.
Fundamento
El mtodo se basa en la reaccin de Misson, en la cual el fsforo presente,
como ortofosfato, reacciona con un reactivo de vanadato-molibdato, dando
lugar a la formacin de un complejo amarillo-naranja cuya densidad ptica se
mide a 420nm.

Reactivos especiales
Reactivo vanado-molibdato. Se disuelven por separado en agua 20g de
molibdato amnico y 1g de vanadato amnico y se mezclan ambas
disoluciones. Se acidula la mezcla con 140mL de cido ntrico concentrado
y se diluye a 1L.
Disolucin estndar de fosfato. Se disuelven en agua 1,917g de fosfato
monopotsico (desecado a 105C) y se diluye a 1L (disolucin). Se diluyen
50mL de la disolucin anterior a 250mL (1 mL de disolucin= 0,2mg de
P
2
O
5
).

Material
Un aforado de 250 mL, 8 aforados de 100 mL
Pipeta de 25 y 50 mL

Aparatos
Espectrofotmetro

Procedimiento
1. Se pesa una cantidad adecuada de muestra (por ejemplo 5g) en un crisol
de slice y se aade 1g de carbonato de calcio y un pequeo volumen de
agua. Preparar blanco (sin muestra).
2. Se mezcla bien el conjunto, se lava cualquier material adherido a la
varilla agitadora y se calcina la muestra a 500C.
3. Las cenizas, fras, se pasan a un vaso con ayuda de 20mL de agua y
se aaden, cuidadosamente 12mL de HCl concentrado y posteriormente
5mL de cido ntrico concentrado.
4. Se hierven suavemente durante 15min.
5. Se filtra en un matraz aforado de 250mL (si en el filtro quedase una
cantidad apreciable de residuo, se calcina el papel y se vuelven a tratar
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las cenizas con la mezcla cida y se aade la disolucin al filtrado). Se
afora a 250mL con agua y se mezcla bien.
6. Se toma un volumen tal que contenga unos 40mg de muestra inicial, se
lleva a un matraz aforado de 100mL, se aaden 25mL de reactivo
vanado-molibdato e inmediatamente se diluye la mezcla con agua hasta
los 100mL.
7. Para la obtencin de la recta de calibrado y sabiendo que 1mL de
disolucin estndar de fosfato equivale a 0,2mg de P
2
O
5
, preparar
disoluciones de fosfato, a partir de dicha solucin estndar, que
contengan entre 5 y 15 ppm de P
2
O
5
. Para ello, tener en cuenta que, al
igual que se hizo con las muestras, es necesario aadir 25mL del reactivo
vanadato-molibdato para poder realizar la medida, antes de enrasar el
volumen a 100mL. Se agitan bien las soluciones, se dejan reposar
durante 10 minutos y al cabo de ellos se miden sus densidades pticas a
420nm en cubetas de 1cm.


Cuestiones
1. Indicar las reacciones que tienen lugar durante el procedimiento anterior.
2. Calcular el contenido en fsforo de la muestra en relacin a la muestra
inicial.
3. Compare los resultados obtenidos para todos los elementos cuantificados
a lo largo de la prctica, con la composicin especificada por el fabricante y
justifique las diferencias encontradas.




Anlisis de Materiales Orgnicos
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RESIDUOS

Destruccin MATERIA ORGNICA POR MICROONDAS: disoluciones a
bidn residuos cidos.
Determinacin de CALCIO CON PERMANGANATO POTSICO: disolucin
de valoracin a bidn de residuos de metales pesados.
Determinacin de ELEMENTOS TRAZA por absorcin atmica:
disoluciones a bidn de residuos de metales pesados.
Determinacin de FSFORO: disoluciones a bidn de residuos de
metales pesados.