Resonancia Magntica Nuclear

5.8 Experimentos multipulsos

Un espectro de RMN-TF se obtiene mediante la aplicacin de un pulso, seguido de la
adquisicin del FID que es posteriormente transformado al dominio de las frecuencias. El
procedimiento se repite tantas veces como se desee para incrementar la relacin
seal/ruido. En este proceso se aplican muchos pulsos, pero todos tienen la misma
funcin: la creacin de magnetizacin transversal detectable. Sin embargo, se reserva el
nombre de experimentos multipulsos a aquellos en los cuales cada secuencia contiene
pulsos con diferente funcin. Los experimentos multipulsos son muy utilizados en RMN
con diferentes fines. Para comenzar mostraremos varios experimentos multipulsos que se
utilizan para la determinacin de los tiempos de relajacin.
5.8.1 Determinacin de tiempos de relajacin.
Como hemos visto en RMN, la emisin espontnea es muy ineficiente. Despus de su
excitacin, el equilibrio del sistema de espines se recupera mediante procesos no-
radiativos, los procesos de relajacin. El regreso al equilibrio se caracteriza en los casos
ms simples por TB
1
B y TB
2
B, los tiempos de relajacin longitudinal y transversal
respectivamente (o sus recprocos, las velocidades especficas de relajacin longitudinal y
transversal RB
1
B y RB
2
B). Ambos parmetros estn relacionados, entre otros factores, con la
estructura molecular y determinan el diseo del experimento de RMN. En las ecuaciones
fenomenolgicas de Bloch estos parmetros aparecen en los trminos asociados con el
acercamiento exponencial al equilibrio. As para la relajacin longitudinal tenemos:

1
0
T
M M
dt
dM
z z

= B

B [5.44]

=

1
1
0
T
t
z
e M M [5.45]
Para ncleos con I=1/2 el mecanismo de relajacin generalmente ms efectivo es el
resultante del acoplamiento dipolar entre ncleos magnticos.
5.8.1.1 Determinacin experimental de TB
1
B. Experimento de inversin-recuperacin.
En este experimento (Figura 5.97) se utiliza la secuencia: 180P
0
P - - 90P
0
P AQ.
El pulso inicial de 180P
0
P invierte la magnetizacin. Durante el intervalo siguiente se
produce relajacin longitudinal cuya magnitud depende de la duracin de dicho intervalo.
El pulso final de 90P
0
P crea coherencia que permite determinar el grado de recuperacin del
equilibrio trmico por parte del sistema.
169
Resonancia Magntica Nuclear

Figura 5.97 Secuencia del experimento de
inversin - recuperacin

La secuencia del experimento puede dividirse en 3 etapas:
-preparacin del sistema, durante el cual se alcanza el equilibrio trmico en el intervalo
de relajacin (relaxation delay, RD, que debe ser apreciablemente mayor que los valores
de TB
1
B a determinar) y finalmente inversin de la magnetizacin longitudinal por el pulso
de 180P
0
P)
-evolucin del sistema bajo la accin de la relajacin longitudinal durante el intervalo .
-creacin y deteccin de la magnetizacin transversal creada por el pulso final de 90P
0
P.
La secuencia puede repetirse el nmero de veces que sea necesario para alcanzar una
relacin seal/ruido aceptable. Realizando el experimento para diferentes valores del
intervalo puede determinarse el valor de TB
1
B para las distintas seales (entornos
moleculares de un ncleo atmico) en el espectro.
En la Figura 5.98 se muestra la evolucin del vector de magnetizacin durante la
secuencia del experimento.
La determinacin de TB
1
B se hace ajustando la intensidad de la seal A en funcin del
periodo de evolucin :
( ) ) / exp( 2 1
1
T A A

=

[5.98]
Una estimacin aproximada del valor de TB
1
B puede lograrse determinando el valor de
que anula la seal:
B
0
B = 0.693 TB
1
B [5.99]

170
Resonancia Magntica Nuclear

Figura 5.98 Vector de magnetizacin en el experimento de inversin-recuperacin. La
intensidad de la seal est modulada por el tiempo de evolucin.

En la Figura 5.99 se muestran los resultados de un experimento de inversin recuperacin
para evaluar los tiempos de relajacin longitudinales de P
13
PC. La irradiacin protnica
durante la deteccin elimina los acoplamientos P
13
PC-P
1
PH en los espectros. La
representacin de los espectros obtenidos a diferentes valores de se hace con
desplazamientos laterales para evitar la superposicin de las seales.


Figura 5.99 Experimento de inversin-recuperacin para la piridina en
DB
2
BO. Espectros con = 1-12s y 50s. CB
4
B tiene una relajacin longitudinal
ms efectiva que los otros carbonos.


171
Resonancia Magntica Nuclear
5.8.1.2 Determinacin experimental de TB
2
B. Eco de espines
En principio la evaluacin de TB
2
B podra realizarse mediante la medicin de la anchura de
las seales a altura media, pero en la prctica este parmetro est dominado por la
inhomogeneidades (BB
0
B) del campo magntico, que es de carcter instrumental. El ancho
de la seal se asocia entonces con el valor de TB
2
B efectivo, ( ):
*
2
T
2
*
2
T T

0 2
*
2
2 1 1
B T T
+ =

[5.100]
Para evaluar al tiempo de relajacin transversal TB
2
B, eliminando el efecto de las
inhomogeneidades del campo BB
0
B, se hace uso de la tcnica del eco de espines
desarrollada por Hahn en 1950.
La secuencia de pulsos del eco de espines o de Hahn se muestra en la Figura 5.100.

Figura 5.100 Secuencia de pulsos del eco de espines de Hahn. La
deteccin puede realizarse un tiempo tB
d
B despus de cada pulso de 180P
0
P

Se puede medir la magnetizacin transversal a partir de un tiempo tB
d
B despus de un
determinado nmero de pulsos de 180P
0
P. La seal se va debilitando a medida que nos
alejamos del pulso de excitacin de 90P
0
P de acuerdo al valor de TB
2
B natural, sin
contribuciones debidas a las inhomogeneidades de BB
0
B, las que son reenfocadas por cada
pulso de 180P
0
P.
El pulso inicial de 90P
0
P crea magnetizacin transversal o coherencia que se va debilitando
debido a la accin de las inhomogeneidades y la relajacin natural. Asumiendo la seal
en resonancia, tal como se muestra en la Figura 5.101, el proceso puede visualizarse
como la apertura de un abanico de vectores cuyo eje permanece fijo en y: los
componentes que experimentan un campo magntico BB
0
B ms intenso que el promedio se
adelantarn, mientras que lo contrario ocurrir con aquellos componentes que
172
Resonancia Magntica Nuclear
experimentan un campo magntico BB
0
B ms dbil, los que se atrasarn. La aplicacin del
pulso de 180P
0
P hace rotar a los vectores alrededor del eje x e invierte el proceso de
dispersin por inhomogeneidad: los vectores se reenfocan totalmente al cabo de un
tiempo adicional tB
d
B y la secuencia logra eliminar los efectos de la inhomogeneidad.

Figura 5.101 Representacin de la evolucin de la magnetizacin en una secuencia del eco
de Hahn. En la parte inferior se representa la evolucin de la magnetizacin en el plano xy.

El reenfoque puede lograse en la direccin positiva del eje y si el pulso de 180P
0
P se aplica
por y.
El experimento de eco de espines es crtico en cuanto a imperfecciones en el pulso de
180P
0
P. Si por relajacin longitudinal despus del pulso inicial de 90P
0
P se han creado
componentes de magnetizacin en z al aplicar un pulso imperfecto de 180P
0
P se van a crear
componentes parsitos de magnetizacin transversal y, lo que es ms grave, los efectos
sern acumulativos a lo largo de la secuencia. Estos efectos indeseados pueden eliminarse
cambiando mediante el mtodo de Carr-Purcell-Meiboom-Gill, como se muestra en la
Figura 5.102. La aplicacin de un pulso imperfecto de 180P
0
P (en este caso muy corto) genera
magnetizacin transversal espuria que interfiere en la determinacin. Estos efectos se compensan
aplicando un programa de fases para el pulso de 180P
0
P (por x y por x) y sumando los FID
obtenidos. Los FID resultantes tienen anulados estos artefactos por compensacin.
Esto constituye un ejemplo sencillo de programacin de fases, extensamente utilizada en
RMN.
La secuencia del eco de Hahn permite evaluar el tiempo de relajacin transversal
ajustando la intensidad de la seal del eco en funcin del tiempo transcurrido desde la
aplicacin del pulso de 90P
0
P (cada exponencial).

173
Resonancia Magntica Nuclear

Figura 5.102 Mtodo de Carr-Purcell-Meiboom-Gill

Eco de espines: efectos del desplazamiento qumico.
El efecto del pulso de 180P
0
P en la secuencia del eco de espines muestra interesantes
propiedades en cuando al reenfoque o anulacin de la dispersin de los vectores
componentes de la magnetizacin transversal. Estas propiedades nos van a permitir
manipular la evolucin de la magnetizacin de acuerdo a los objetivos concretos en un
experimento multipulsos. Veamos primeramente el efecto sobre la dispersin de seales
por desplazamiento qumico. Supongamos que aplicamos un pulso inicial de 90P
0
P, que
crea magnetizacin transversal y que este pulso est ligeramente fuera de resonancia para
un ncleo con desplazamiento qumico relativo (u offset ). Cualquiera sea el
desplazamiento qumico hay un reenfoque de todas las seales y de las
inhomogeneidades hacia el eje y en el experimento simple de Hahn, tal como se
muestra para la magnetizacin en el plano x en la Figura 5.103


Figura 5.103 Efectos del pulso de 180P
0
P sobre la evolucin del desplazamiento qumico

A partir de la creacin de magnetizacin transversal o coherencia por el pulso de 90P
0
P
comienza la evolucin de dicha coherencia de acuerdo con su desplazamiento qumico (la
frecuencia de la coherencia mostrada es superior a la frecuencia del pulso, se adelanta en
el sistema de coordenadas rotatorio) y simultneamente comienza su dispersin producto
de la inhomogeneidad del campo magntico BB
0
B y la relajacin transversal. El pulso de

174
Resonancia Magntica Nuclear
180P
0
P reenfoca los desplazamientos qumicos -cualquiera sea su valor- y las
inhomogeneidades.
Eco de espines: efectos del acoplamiento heteronuclear
Analicemos la accin del pulso de 180P
0
P sobre la evolucin de los acoplamientos
heteronucleares durante un experimento de eco de Hahn. En la Figura 5.104 se muestra la
evolucin del acoplamiento heteronuclear en un sistema AX (por ejemplo el doblete
nico en el espectro de P
13
PC del cloroformo sin desacoplamiento protnico). Se asume
que el pulso de 90P
0
Px sobre P
13
PC se aplica en resonancia, aunque esto no es necesario toda
vez que el eco de espines reenfoca los desplazamientos qumicos como acabamos de ver.
Este pulso genera magnetizacin transversal (coherencia) que evoluciona posteriormente
bajo la accin del acoplamiento heteronuclear. En dependencia de la proyeccin de espn
del protn acoplado, los componentes de la magnetizacin transversal o coherencias del
P
13
PC se adelantarn o atrasarn. El ngulo , que expresa el desfasaje entre estos
componentes, depende la constante de acoplamiento J y el tiempo tB
d
B:

d
Jt 2 = [5.101]
El pulso se aplica al ncleo con magnetizacin transversal (P
13
PC) y revierte la
tendencia reenfocando las coherencias en el eje y negativo al cabo de un nuevo intervalo
tB
d
B.
0
180
x
El eco de espines reenfoca los efectos del acoplamiento heteronuclear.

Figura 5.104 Efecto del pulso de 180P
0
P sobre el acoplamiento heteronuclear.
No se han representado el efecto de las inhomogeneidades que son tambin
reenfocadas al final del perodo del eco


175
Resonancia Magntica Nuclear
Eco de espines: efecto del acoplamiento homonuclear
Una situacin bien diferente se presenta en el caso de los acoplamientos homonucleares,
mostrada en la Figura 5.105 En este caso el pulso de 180P
0
P, no selectivo, afectar a los
dos ncleos involucrados en el acoplamiento y no slo har rotar 180P
0
P los vectores
correspondientes a la coherencia observada, sino tambin invertir los espines de su
pareja de acoplamiento.

Figura 5.105 Efecto del pulso de 180P
0
P sobre el acoplamiento
homonuclear

El eco de espines no reenfoca el acoplamiento homonuclear. Este evoluciona durante
todo el perodo y el ngulo formado por los vectores componentes en el mximo del
eco depender de 2tB
d
B y de la constante de acoplamiento homonuclear.
Eco de espines: generalizacin
La secuencia de eco de espines es muy utilizada en diferentes experimentos multipulsos y
multidimensionales. En esta secuencia evoluciona el acoplamiento homonuclear y puede
eliminarse la evolucin de desplazamientos qumicos y/o los acoplamientos
heteronucleares. El sistema de espines puede manipularse de acuerdo a lo que se desee
que evolucione, aplicando diferentes secuencias de eco de espines como se muestra en la
Figura 5.106
El pulso de 180P
0
P aplicado al ncleo en coherencia elimina la evolucin del
desplazamiento qumico.
El pulso de 180P
0
P aplicado a cualquiera de los ncleos acoplados elimina la evolucin del
acoplamiento mutuo.
El pulso de 180P
0
P aplicado a los dos ncleos acoplados permite la evolucin del
acoplamiento mutuo.
176
Resonancia Magntica Nuclear

Figura 5.106. Eco de espines: generalizacin. El
pulso inicial (90P
0
P), anterior al eco crea coherencia,
el pulso central es de 180P
0
P.

5.8.1.3 Tcnica del Attached Proton Test (APT)
Esta tcnica permite determinar el nmero de hidrgenos unidos directamente a un
carbono mediante modulacin de la intensidad de las seales por el acoplamiento
heteronuclear en un perodo de evolucin tipo espn-eco. Esta informacin facilita la
asignacin de espectros de RMN-P
13
PC. En la Figura 5.107 se muestra la secuencia de
pulsos del APT.

Figura 5.107 Secuencia de pulsos del APT

Como se puede deducir del diagrama se obtendrn espectros de P
13
PC en forma de singletes
(desacoplamiento protnico durante la adquisicin). La intensidad de estas seales estar
modulada por la evolucin del acoplamiento heteronuclear durante el primer intervalo tB
d
B.
Durante el segundo intervalo no evoluciona el acoplamiento heteronuclear pues estamos
177
Resonancia Magntica Nuclear
desacoplando a los protones. Al final del periodo de evolucin (final del segundo periodo
tB
d
B) se reenfocan los desplazamientos qumicos de P
13
PC y las seales estarn moduladas
slo por JB
CH
B.
Para un grupo CH el ngulo de desfasaje entre los componentes del doblete es:

CH d
J t 2 = [5.102]
Si se escoge los componentes del doblete se desfasarn en 2 y se encontrarn
en el eje y negativo pues un componente se adelanta en y el otro se atrasa en . El
pulso de 180P
0
P los lleva al eje y dando una seal positiva. El resultado se muestra en la
Figura 5.108.
1
= J t
d
La situacin es ms compleja para grupos CHB
2
B y CHB
3
B. En el grupo CHB
2
B los componentes
mviles se desfasan en 4 (diferencia de frecuencias 2J), mientras el componente central
permanece estacionario, por lo que coincidirn los 3 en el eje +y. El pulso de 180P
0
P los
lleva al eje y dando seales negativas. En el grupo metilo los componentes exteriores
se desfasan en 6 (diferencia de frecuencias 3J) y los interiores en 2 (diferencia de
frecuencias J) coincidiendo en el eje -y al final del primer tB
d
B. El pulso de 180P
0
P los lleva
al eje +y dando seales positivas. Por su parte los carbonos cuaternarios no son
afectados por el acoplamiento heteronuclear y aparecen como seales negativas.

Figura 5.108 Evolucin de los multipletes de grupos CH, CHB
2
B y
CHB
3
B para un tB
d
B = JP
-1
P.


178
Resonancia Magntica Nuclear
Se utiliza comnmente un valor de compromiso de tB
d
B que se acerque a la media de los
valores de las constantes de acoplamiento directas presentes en la muestra. El xito del
experimento depende del intervalo de valores de P
1
PJB
CH
B, que debe ser estrecho, lo que
constituye una limitacin importante de esta tcnica.
En la Figura 5.109 se muestra un espectro APT. Las seales de los grupos CHB
3
B y CH son
positivas mientras que las correspondientes a los carbonos CH y cuaternarios son
negativas (incluyendo el triplete del cloroformo deuterado a 77 ppm).

Figura 5.109 Espectro APT del acetato de colesterilo en CDClB
3
B. tB
d
B = 7ms (JB
CH
B =140Hz).

5.8.1.4 Transferencias de poblacin o polarizacin
Estas tcnicas permiten transferir polarizacin (diferencias de poblacin entre niveles) de
un ncleo a otro, en particular de un ncleo ms sensible, usualmente el protn, a otro de
menor sensibilidad (P
13
PC, P
15
PN) a travs del acoplamiento escalar entre los mismos.
Los experimentos de transferencia de polarizacin dependen de la presencia de
acoplamiento escalar entre los ncleos. Sobre la base de los mismos se han desarrollado
tcnicas para establecer conectividades entre tomos de extensa aplicacin en la
determinacin estructural. Las transferencias de polarizacin pueden ser homonucleares o
heteronucleares, ambos casos se analizarn a continuacin.


179
Resonancia Magntica Nuclear
Transferencia de poblacin selectiva (SPT) e inversin de poblacin selectiva (SPI).
Caso homonuclear.
En un sistema de espines acoplados AX la irradiacin de una lnea en el multiplete A
altera las poblaciones de equilibrio de los dos estados involucrados en la transicin y
modifica tambin las intensidades de las lneas del multiplete X. La irradiacin debe ser
capaz de alterar selectiva y eficazmente las poblaciones de los estados involucrados en la
transicin. Esto puede lograrse irradiando continuamente a la frecuencia de resonancia de
la transicin (saturacin) o aplicando un pulso selectivo de 180P
0
P a la misma (inversin).
En el caso de 2 ncleos del mismo tipo dbilmente acoplados AX, la irradiacin selectiva
prolongada de una de las transiciones de A satura la misma e iguala la poblacin de los 2
niveles involucrados. Esto afecta la intensidad de las restantes transiciones del sistema
AX como puede observarse en la Figura 5.110. Los crculos representan
esquemticamente las diferencias de poblacin de los estados. En el equilibrio trmico
(izquierda) denotan el exceso de poblacin relativo en el estado , valores
intermedios en los estados y y la menor poblacin del estado . La saturacin
de la transicin 13 iguala la poblacin de estos estados y modifica la intensidad de las
transiciones que dependen de estas diferencias de poblacin (doblete de X).


Figura 5.110 Transferencia de poblacin selectiva (SPT). La
saturacin de la transicin 13 de A modifica las intensidades de las
lneas 12 y 34 del multiplete de X.

Obsrvese que se trata de una redistribucin de intensidades dentro del doblete X, la
intensidad total (4 unidades arbitrarias) es la misma que antes de saturar a uno de los
componentes de A.
180
Resonancia Magntica Nuclear
Efectos ms drsticos pueden obtenerse aplicando pulsos selectivos de 180P
0
P, que
producen inversin de poblacin entre los estados involucrados en la transicin tal como
se muestra en la Figura 5.111. La aplicacin de un pulso de 180P
0
P selectivo a la transicin
13 de A invierte las poblaciones relativas de los 2 estados involucrados. Se modifican
profundamente las intensidades de los componentes del doblete de X. De nuevo
observamos que se trata de una redistribucin de intensidades dentro del doblete de X, la
intensidad total de la seal no cambia.

Figura 5.111 Inversin de poblacin selectiva (SPI)

Transferencia de poblacin selectiva (SPT) e inversin de poblacin selectiva. Caso
heteronuclear.
El efecto que tiene la saturacin o inversin de una de las transiciones de un ncleo sobre
la distribucin de las intensidades en la seal de otro ncleo acoplado con aquel es mucho
ms significativo en el caso heteronuclear. Ilustraremos lo anterior con un grupo P
13
PC-P
1
PH
(cloroformo) y slo para el caso de la inversin. Ahora las diferencias de poblacin de los
niveles son ms complejas que en el caso homonuclear. Si tenemos en cuenta los valores
de razones magnetogricas (P
1
PH/ P
13
PC 4), las diferencias de poblacin corresponden a la
relacin 10:8:2:0. En la Figura 5.112 se muestra el diagrama de niveles correspondientes
al sistema CH. El doblete del hidrgeno tiene lneas 4 veces ms intensas que el doblete
del P
13
PC (equilibrio, izquierda). La inversin de las poblaciones asociadas a la transicin
13 del protn deforma intensamente el doblete del P
13
PC, la lnea correspondiente a la
transicin 34 se hace 5 veces ms intensa y la correspondiente a la transicin 12 se
hace negativa y 3 veces ms intensa que la original (derecha). No se han representado las
variaciones en el doblete del hidrgeno despus de la inversin.
181
Resonancia Magntica Nuclear


Figura 5.112 Inversin de poblacin selectiva heteronuclear

Como se observa en la Figura 5.113 no hay efecto neto sobre la intensidad total de la
seal de P
13
PC, es de 4 unidades arbitrarias tanto en el sistema no perturbado como despus
de la inversin. Decimos que las componentes del doblete del P
13
PC estn en antifase. P

PSin
embargo la polarizacin interna dentro del doblete puede ser aprovechada si dejamos
actuar al acoplamiento durante un intervalo de tiempo tB
d
B = (2J)P
-1
P despus de la inversin
para eliminar el desfase de las lneas como se muestra en la Figura 5.110

Figura 5.113. Eliminacin del desfase entre las componentes del doblete del P
13
PC

Puede programarse entonces una secuencia para la intensificacin de las seales de P
13
PC
por transferencia de polarizacin desde los protones directamente acoplados:
1.-Aplicar pulsos selectivos de 180P
0
P a uno de los componentes de cada doblete protnico
(caso de grupos CH).
2.- Aplicar pulso no selectivo de P
13
PC (transferencia de polarizacin).
3.- Eliminar el desfase de los componentes del doblete de P
13
PC mediante la evolucin del
acoplamiento heteronuclear durante un intervalo tB
d
B= (2J)P
-1
P.
182
Resonancia Magntica Nuclear
4.- Se adquiere entonces el FID con desacoplamiento protnico. Las seales de P
13
PC
muestran una intensidad 4 veces mayor que la original debido a la transferencia de
polarizacin de los protones.
Las limitaciones fundamentales de esta secuencia se relacionan con la irradiacin
selectiva de uno de los componentes del doblete del protn. Si hay ms de una seal se
crearn errores de fase por evolucin del desplazamiento qumico durante el intervalo tB
d
B.
Transferencia de polarizacin selectiva utilizando pulsos duros.
La transferencia de polarizacin o poblacin sera ms efectiva si lograra invertir la
poblacin de una de las transiciones de cada uno de los protones unidos a los P
13
PC. sto
puede lograrse utilizando pulsos duros mediante las secuencias del tipo: 90P
0
P- tB
d
B=(2J)P
-1
P-
90P
0
P como se muestra en la Figura 5.114. En la secuencia superior la aplicacin de un
pulso duro de 90P
0
P a la frecuencia de uno de los componentes del doblete del protn
seguida de una evolucin del acoplamiento heteronuclear durante un periodo tB
d
B = (2J)P
-1
P
pone en antifase en y a dichos componentes. Un pulso final de 90P
0
PB

B por x invierte las
poblaciones y permite la transferencia de polarizacin.
En la secuencia inferior la aplicacin del pulso duro inicial a la frecuencia del
desplazamiento qumico, seguida de la evolucin del acoplamiento y pulso duro final de
90P
0
P por y produce los mismos resultados que la secuencia superior.

Figura 5.114 Transferencia de polarizacin con pulsos duros.

Estas secuencias tienen gran potencial para invertir la poblacin en forma no selectiva,
pues utilizan pulsos duros, pero siguen siendo selectivas pues dependen del
desplazamiento qumico para alinear los vectores. Se necesita eliminar los efectos del
desplazamiento qumico durante la evolucin lo que puede lograrse mediante una
183
Resonancia Magntica Nuclear
secuencia espn-eco. Esta es la base del experimento INEPT que describiremos a
continuacin.

5.8.1.5 Tcnica INEPT (Insensitive Nuclei Enhanced by Polarization Transfer)
La tcnica INEPT (Morris, Freeman, 1979) permite una transferencia de polarizacin no
selectiva utilizando pulsos duros. La idea central consiste en convertir el intervalo de
evolucin entre los pulsos de 90P
0
P de las secuencias anteriores en un perodo de espn eco
donde evolucione el acoplamiento heteronuclear, pero no el desplazamiento qumico
protnico. Se logra entonces la inversin en cada doblete protnico en forma no selectiva.
La secuencia INEPT se muestra en la Figura 5.115.

Figura 5.115 Secuencia INEPT. El periodo tB
d
B se ajusta a (4J)P
-1
P. De 2 a 7 se representan
magnetizaciones protnicas. En 8 la magnetizacin de P
13
PC despus de la transferencia de
polarizacin.

La aplicacin inicial de un pulso de 90P
0
P genera coherencia protnica. En 2 se han
representado los dos vectores que representan al doblete protnico (sistema H-P
13
PC).
Como se tiene un perodo de evolucin tipo espn-eco con pulso de 180P
0
P efectivo sobre
ambos ncleos, slo hay que tener en cuenta el acoplamiento heteronuclear (dada la
duracin del periodo de evolucin, el acoplamiento interprotnico no es efectivo). En 3
184
Resonancia Magntica Nuclear
despus de un tiempo (4J)P
-1
P los vectores del doblete protnico se encuentran formando
un ngulo de 90P
0
P. El doble pulso de 180P
0
Ppuede considerarse secuencial: en 4 se muestra
el efecto del pulso protnico y en 5 la accin del pulso de P
13
PC. La evolucin a travs del
nuevo perodo (4J)P
-1
P lleva a los vectores a formar un ngulo de 180P
0
P (antifase). Ahora
todas las coherencias protnicas estn en antifase, pues el proceso no depende de los
desplazamientos qumicos (espn-eco). La aplicacin simultnea de los pulsos de 90P
0
P
produce la transferencia de polarizacin. De nuevo puede representarse el proceso como
secuencial. En 7 vemos la accin del pulso protnico que convierte la coherencia en
antifase en poblaciones protnicas invertidas. Si ahora determinamos la magnetizacin
del P
13
PC con el pulso de 90P
0
P, tendremos a los dos componentes del doblete como se
representa en 8 (por primera vez se representa la magnetizacin de P
13
PC). Para evitar la
asimetra del doblete del P
13
PC se puede alternar la fase del pulso final protnico entre
+y y y lo que crea componentes con intensidades +4 y 4. La adquisicin del FID en
este momento no reporta ventajas respecto a la tcnica tradicional en cuanto a la
intensidad de las seales de los carbonos. Se requiere llevar a los componentes del
doblete a estar en fase.
Tcnica INEPT reenfocada.
El reenfoque de los componentes del doblete en antifase al final de la secuencia INEPT
puede lograrse mediante un perodo adicional de espn eco de duracin total 2, en medio
del cual se aplican simultneamente pulsos de 180P
0
P de protones y P
13
PC. Evoluciona en este
perodo slo el acoplamiento heteronuclear sobre la coherencia de carbono,
producindose el reenfoque.
En la Figura 5.116 se muestra la evolucin de los componentes del doblete de un grupo
CH en funcin de la duracin del periodo de espn-eco.
185
Resonancia Magntica Nuclear

Figura 5.116 Secuencia de pulsos del INEPT Reenfocado y reenfoque de los vectores en un
doblete CH en funcin del intervalo 2.

Al igual que en la tcnica APT, el reenfoque de los vectores depende del nmero de
protones unidos directamente al carbono. En la Figura 5.117 se muestra el reenfoque para
los grupos CHB
3
B, CHB
2
B y CH. Es usual el registro del INEPT reenfocado para un intervalo
2 = (3/4J) donde grupos CHB
3
B y CH aparecen como singletes positivos, los grupos CHB
2
B
como singletes negativos y los C cuaternarios estn ausentes del espectro. Cuando sea
necesario discernir entre grupos CHB
3
B y CH se acude al experimento con 2 = (1/2J), que
slo muestra las seales de los grupos CH.
La limitacin principal de la tcnica INEPT radica en su sensibilidad al ajuste del
intervalo 2. En sistemas con apreciable variacin de P
1
PJB
CH
B , por ejemplo en presencia de
carbonos con diferente hibridacin, pueden presentarse problemas con la intensidad y aun
con el signo de las seales.

Figura 5.117 Intensidades de las seales de los grupos CHB
3
B, CHB
2
B
y CH como funcin de la duracin del intervalo de espn eco 2.

5.8.1.6 Tcnica DEPT (Distortionless Enhancement by Polarization Transfer)
El experimento DEPT (Bendall, Doddrell, Pegg 1981) es la tcnica de edicin espectral
actualmente ms utilizada. Presenta una menor sensibilidad a las variaciones de P
1
PJB
CH
B que
la tcnica INEPT. La interpretacin de la secuencia de pulsos del DEPT resulta
186
Resonancia Magntica Nuclear
complicada pues incluye la creacin de coherencia a mltiple cuanto (MQC Multiple
Quantum Coherence), que no es representable en el modelo vectorial clsico de la
magnetizacin. Interpretaremos la secuencia DEPT slo en forma cualitativa, pues una
descripcin adecuada requiere aplicar el formalismo del operador producto.
Hemos hablado anteriormente del concepto de coherencia entre 2 estados. sta se
presenta cuando los espines involucrados tienen relaciones de fase definidas (la
magnetizacin transversal asociada con una transicin es detectada hasta que desaparece
producto de la prdida de la coherencia de fase por la accin de la relajacin). Una
transicin implica crear coherencia que se mantiene despus del pulso y es detectada por
la corriente que induce (FID). En un sistema de un espn podemos hablar slo de
coherencia a simple cuanto (SQC-Simple Quantum Coherence) asociada con la transicin
entre los 2 estados posibles: (m = 1).
En un sistema de 2 espines A X se definen 4 estados: , , y . Es posible aqu
hablar de 4 coherencias a simple cuanto (SQC):
, (transiciones de X)
, (transiciones de A) con m = 1, detectables en RMN.
Adicionalmente se pueden presentar coherencias que no observables directamente:
con m= 2, coherencia a doble cuanto (DQC-Double Quantum Coherence)
con m= 0, coherencia a cero cuanto (ZQC-Zero Quantum Coherence)
Estos ltimos tipos de coherencia, no detectables directamente, pueden influir en el
desarrollo de la magnetizacin durante un experimento multipulsos. La creacin de
coherencias a mltiple cuanto no se logra a partir de un sistema en equilibrio, dado que
se generan cuando en un sistema hay coherencia a simple cuanto y se aplica un pulso
adicional. Asimismo, su deteccin es indirecta. Una posibilidad de inducir y detectar
indirectamente coherencia a multiple cuanto es:
Sistema en equilibrio > pulso > SQC > pulso > MQC > pulso > SQC > deteccin
La seal detectada puede estar modulada por la evolucin de la magnetizacin como
MQC.
En la Figura 5.118 se muestra la secuencia de pulsos del experimento DEPT.
187
Resonancia Magntica Nuclear

Figura 5.118 Secuencia de pulsos de la tcnica DEPT

El pulso inicial de 90P
0
P genera magnetizacin transversal protnica (coherencia a simple
cuanto, SQC). Los pulsos de 180P
0
P generan 2 etapas de eco de espines: una protnica entre
el pulso inicial de 90P
0
P y el pulso y otra de P
13
PC entre el pulso inicial de 90P
0
P de P
13
PC y el
comienzo de la deteccin lo que impide la evolucin de los desplazamientos qumicos y
slo se debe tener en cuenta la evolucin del acoplamiento heteronuclear. Este
acoplamiento heteronuclear crea la magnetizacin en antifase protnica al final del
primer intervalo = 1/2J. Esta magnetizacin en antifase es convertida en magnetizacin
o coherencia a doble cuanto (DQC) por el primer pulso de 90P
0
P de P
13
PC. En la coherencia a
doble cuanto no evoluciona el acoplamiento heteronuclear entre los 2 ncleos
involucrados (grupo CH). Finalmente el ltimo pulso protnico devuelve la coherencia a
doble cuanto a coherencia a simple cuanto o magnetizacin en antifase, pero ahora de
P
13
PC. Inmediatamente antes de la deteccin y despus del ltimo intervalo = 1/2J la
magnetizacin transversal o coherencia de P
13
PC se encuentra en fase (grupo CH). La
deteccin con simultneo desacoplamiento protnico nos suministra un espectro de P
13
PC
compuesto por singletes. Seales indeseadas creadas por el pulso de 90P
0
P de P
13
PC son
eliminadas por la programacin de fases.
Las intensidades de las seales en el espectro estarn moduladas por el nmero de
hidrgenos unidos a cada carbono y la duracin del pulso de transferencia , tal como se
muestra en la Figura 5.119
188
Resonancia Magntica Nuclear

Figura 5.119 Dependencia de las intensidades en el espectro DEPT
en funcin del pulso y el tipo de carbono.

La evolucin de la coherencia a doble cuanto es ms compleja para grupos CHB
2
B y CHB
3
B
que para el grupo CH. En los primeros los protones no pertenecientes al par CH
desarrollan acoplamiento con el carbono durante esta etapa. En la tcnica DEPT la
duracin del pulso juega el mismo papel discriminante que la duracin del intervalo 2
en el INEPT. Un espectro DEPT con = 135P
0
P muestra a los grupos CHB
3
B y CH como
seales positivas y a los CHB
2
B como seales negativas. Cuando sea necesario diferenciar
grupos CHB
3
B de grupos CH se puede repetir el experimento con = 90P
0
P que slo muestra
los grupos CH. El experimento con = 45P
0
P muestra a todos los carbonos hidrogenados
como seales positivas. Los diferentes espectros DEPT para un compuesto sencillo se
muestran en la Figura 5.120.
Es prctica comn editar los espectros DEPT mediante combinaciones de los resultados
obtenidos para los tres ngulos para obtener subespectros que contengan slo carbonos
de una multiplicidad, as se obtienen espectros exclusivos para los CHB
3
B, CHB
2
B y CH.
189
Resonancia Magntica Nuclear

Figura 5.120 Espectros DEPT para diferentes valores del pulso .

El ajuste de los intervalos no es tan crtico en el experimento DEPT como en el INEPT
y, como se ha sealado, esta es una de sus ventajas fundamentales. Si se realiza el
experimento DEPT sin desacoplamiento protnico durante la deteccin, se obtienen
multipletes no distorsionados (CH: 1:1, CHB
2
B: 1:2:1, CHB
3
B: 1:3:3:1) a diferencia de la
secuencia INEPT, de ah el nombre de la tcnica.
Finalmente debe sealarse que la secuencia INEPT es ms rpida que la DEPT pues en
sta el intervalo con DQC es tiempo perdido para la transferencia. Esta diferencia puede
ser importante al disear un experimento complejo: la transferencia de polarizacin
heteronuclear debe ser lo ms rpida posible para evitar la desaparicin de las seales por
la accin de la relajacin transversal.





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