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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS



ESCUELA DE OBSTETRICIA

Bioqumica
Subgrupo #6

GRUPO: 4/1s AULA: 1

2014

Seminario

Amortiguadores o tampn

MECANISMO DE ACTUACIN DE LAS SOLUCIONES
TAMPN.
CLCULO DEL PH DE DISOLUCIONES TAMPN.
SISTEMAS TAMPN FISIOLGICOS.
SISTEMAS TAMPN DEL ORGANISMO:
Inorgnicos:
TAMPN BICARBONATO.
TAMPN FOSFATO.
Orgnicos:
TAMPN HEMOGLOBINA.
TAMPN AMINOCIDOS Y PROTENAS.
APLICACIONES INDUSTRIALES DE LAS SOLUCIONES
TAMPN.
EXPERIENCIAS CON SOLUCIONES TAMPN.



INTEGRANTES:
ARMIJO BAO CYNTHIA.
URRUTIA BALLADARES EVELYN.
ZAMBRANO VERA JESSENIA.
Amortiguadores o tampn
Un tampn, buffer, solucin amortiguadora o solucin reguladora
es la mezcla en concentraciones relativamente elevadas de un
cido dbil y su base conjugada, es decir, sales hidrolticamente
activas. Tienen la propiedad de mantener estable el pH de
una disolucin frente a la adicin de cantidades relativamente
pequeas de cidos o bases fuertes. Este hecho es de vital
importancia, ya que con un leve cambio en la concentracin de
hidrogeniones en la clula se puede producir un paro en la
actividad de las enzimas.
Se puede entender esta propiedad como consecuencia del efecto ion
comn y las diferentes constantes de acidez o basicidad: una
pequea cantidad de cido o base desplaza levemente el equilibrio
cido-base dbil, lo cual tiene una consecuencia menor sobre el pH.
Cada sistema buffer tiene su propio rango efectivo de pH, el cual
depender de la constante de equilibrio del cido o base empleado.
Son importantes en el laboratorio y en la industria, y tambin en
la qumica de la vida. Tampones tpicos son el par amonaco-
catin amonio, cido actico-anin acetato, anin carbonato-anin
bicarbonato, cido ctrico-anin citrato o alguno de los pares en la
disociacin del cido fosfrico.





Mecanismo de actuacin de las soluciones
tampn
Para poder entender con claridad el mecanismo que utiliza el
organismo para evitar cambios significativos de pH, pondremos
un ejemplo de actuacin del tampn de ms importancia en el
organismo, el equilibrio de cido carbnico (H2CO3) y
bicarbonato (HCO3-), presente en el lquido intracelular y en la
sangre. Como producto del metabolismo se produce CO
2
que al
reaccionar con las molculas de agua produce cido carbnico, un
compuesto inestable que se disocia parcialmente y pasa a
ser bicarbonato segn el siguiente equilibrio:
CO
2
+ H
2
O H
2
CO
3
HCO
3
- + H+
Entonces, el bicarbonato resultante se combina con los cationes
libres presentes en la clula, como el sodio, formando
as bicarbonato sdico (NaHCO
3
), que actuar como tampn cido.
Supongamos que entra en la clula un cido fuerte, por
ejemplo, cido clorhdrico (HCl):
HCl + NaHCO
3
NaCl + CO
2
+ H
2
O
Como se puede ver en la anterior reaccin el efecto cido
clorhdrico queda neutralizado por el bicarbonato de sodio y
resultan como productos sustancias que no provocan cambios en
el pH celular y lo mantienen en su valor normal, que es 7,4.





CLCULO DEL PH DE DISOLUCIONES TAMPN
Frecuentemente se utiliza la ecuacin de Henderson-
Hasselbalch para el clculo del pH en soluciones reguladoras. Sin
embargo, debe aclararse que esta ecuacin no es aplicable en todos
los casos, ya que para su deduccin se realiza una serie de
suposiciones. Esta ecuacin suele proporcionar resultados
incorrectos cuando las concentraciones del cido y su base
conjugada (o de la base y su cido conjugado) son bajas. Para el
clculo del pH, se debe saber el pKa del cido y la relacin entre la
concentracin de sal y cido, como se observa a continuacin

Recordemos que pKa de un cido dbil se obtiene a partir de
su constante de acidez (K
a
) y es especfico para cada cido.
Supongamos que disponemos de una determinada cantidad de
un cido dbil, por ejemplo, cido lctico de concentracin 10 mM.
Sabemos, que la concentracin de su sal conjugada, el lactato, es
de 2 mM y que el pKa cido del cido lctico es 3,86. Por tanto,
podemos calcular el pH del cido lctico en una solucin acuosa
sin ningn tipo de sistema tamponador con la ecuacin de
Henderson-Hasselbalch:
CH
3
-CHOH-COOH CH
3
-CHOH-COO- + H+
pH = 3,86 + log (2 mM/ 10mM) = 3,86 - 0,7 = 3,16
Por tanto, el pH de una solucin acuosa de cido lctico de
concentracin 10 mM, sin la intervencin de ningn tampn es
3,16. Es decir que si esto se produjese en el lquido intracelular y
no existieran las soluciones amortiguadoras su pH estndar de
7,4 bajara bruscamente hasta 3,16. Sin embargo, esto no ocurre
en nuestro organismo gracias a los tampones qumicos.
Si reflexionamos sobre la ecuacin de Henderson-Hasselbalch se
deduce que el pH del sistema amortiguador depende de la
proporcin relativa entre sal y cido, y no de sus concentraciones
absolutas. Es decir que si vamos aadiendo agua al sistema
variarn las concentraciones absolutas de cada sustancia, pero no
su cociente de concentraciones. No obstante, si la dilucin es muy
grande, el equilibrio del cido y su sal conjugada se desplaza
hacia los productos y, por tanto, aumenta la sal y disminuye el
cido, entonces el cociente sal/cido aumenta muy
significativamente.
Supongamos ahora que aadimos una solucin amortiguadora
de bicarbonato de potasio (KHCO
3
) y una cantidad grande de
agua a la anterior solucin de cido lctico anterior de 10 mM,
suficiente para que se rompa el equilibrio de concentraciones del
cido y su sal conjugada. En consecuencia, la concentracin
de cido lctico disminuye a 0,1 mM y la concentracin de
lactato de potasio aumenta a 200 mM. Calculemos el pH de la
nueva solucin:
CH
3
-CHOH-COOH + KHCO
3
CH
3
-CHOH-COOK +
CO
2
+ H
2
O
pH = 3,86 + log (200 mM/ 0,1 mM) = 3,86 + 3,3 = 7,16
Es decir que partiendo de una solucin de cido lctico inicial de
concentracin 10 mM y pH 3,16 cido - sta ha acabado
transformndose en una solucin de cido lctico de
concentracin 0,1 mM y pH 7,16 neutro - gracias a la
intervencin de un tampn qumico, en este caso, el bicarbonato de
potasio. As es como el organismo consigue mantener su pH
alrededor de 7,4, a pesar de que entren sustancias cidas o
bsicas en el cuerpo.



Sistemas tampn fisiolgicos
Niveles de pH en el cuerpo humano.
Muchas biomolculas no actan a un determinado valor de pH y
solo toleran fluctuaciones mnimas en el pH. Dado el bajo grado de
ionizacin del agua (H2O), cuando aadimos en sta una
pequea cantidad de cido o de base, el pH vara en mucha
cantidad, llegando a niveles de pH en los cuales las biomolculas
no podran cumplir sus funciones. Por esta razn los lquidos
fisiolgicos contienen tampones que, a diferencia del agua,
mantienen el pH constante. Los tampones mantienen la cantidad
de cidos y de bases en equilibrio en un determinado pH en el cual
la actividad biolgica de las protenas, hormonas, enzimas,
bombas de iones sea ptima. En humanos, los valores compatibles
con el mantenimiento de funciones vitales son de pH entre 6,8 y
7,8; siendo el intervalo de 7,35 a 7,45 el de normalidad. En
concreto, podemos decir que cada lquido fisiolgico tiene un nivel
caracterstico normal de pH: - Sangre arterial: pH= 7,4 - Sangre
venosa: pH= 7,35 - Lquido intersticial: pH= 7,35 - Lquido
intracelular: pH= 6 - 7,4 - Orina: pH= 4,5 - 8 - HCl gstrico:
pH= 0,8
Los tampones son los primeros responsables de mantener estos
niveles de pH constantes aunque en el organismo se produzcan
altas cantidades de cidos debido al metabolismo. As, los
tampones son el primer nivel de defensa contra los cambios de pH.
Tambin contribuyen al equilibrio la regulacin respiratoria
(segunda lnea de defensa) y la regulacin renal (tercera lnea de
defensa). Cuando hay alteraciones debidas a enfermedades de los
riones, pulmones o por diabetes mellitus, el pH se ve alterado y se
padece acidosis (pH<7,37) o alcalosis (pH>7,43). Las causas
principales de acidosis son: insuficiencia renal, acidosis
tubulorrenal, cetoacidosis diabtica, acidosis lctica, sustancias
txicas (etilenglicol, salicilato (en sobredosis), metanol,
paraldehido, acetazolamida o cloruro de amonio. Las causas
principales de alcalosis son: uso de diurticos (tiacidas,
furosemida, cido etacrnico), prdida de cido causada por
vmitos o aspiracin del contenido del estmago, glndulas
suprarrenales hiperactivas (sndrome de Cushing o utilizacin de
corticosteroides). Estas alteraciones pueden rendir su efecto en la
primera, la segunda o la tercera lnea de defensa; impidiendo as
el funcionamiento de todos los mecanismos complexos que
mantienen los niveles de pH a niveles adecuados.

Sistemas tampn en el organismo
Existen tampones de gran importancia en el organismo:
Inorgnicos:
Tampn bicarbonato:
CO
2
+ H
2
O H
2
CO
3
HCO
3
- + H+
Tampn fosftico:
H
2
PO
4
- HPO
4
2-
+ H+
Orgnicos:
Tampn hemoglobina:
HHbO
2
HbO
2
-
/ HbH Hb
-
+ H+
Aminocidos y protenas





Tampn bicarbonato
Tal y como se ha comentado anteriormente, el tampn bicarbonato
est compuesto por cido carbnico (H2CO3) y bicarbonato
(HCO3-) y el valor de su pKa es de 6,1. Es el tampn ms
importante de la sangre (pH=7,4), representa el 75% de la
capacidad buffer total de la sangre. Tambin est presente en el
lquido intersticial. Es un tampn muy eficaz porque la relacin
HCO3-/ H2CO3 es muy alta, lo que supone una alta capacidad
para amortiguar los cidos. Supone una ventaja el hecho que se
trata de un sistema abierto ya que el CO
2
puede ser eliminado en
la respiracin muy rpidamente, los H+ se pueden eliminar por
va renal y el HCO3- puede reemplazarse en la orina. En realidad,
este tampn est compuesto por dos equilibrios, pues el cido
carbnico forma CO
2
, generando una molcula de H
2
O.


Cuando el pH disminuye, el bicarbonato toma los protones libres.
As, el equilibrio se desplaza hacia el H2CO3, que a su vez,
mediante la reaccin catalizada por la anhidrasa carbnica
(glbulos rojos), cede una molcula de H2O y se convierte en CO
2
,
el cual se elimina a travs de los pulmones. Por el contrario, si el
pH de la sangre aumenta, se forma HCO3- a partir de H2CO3, lo
que conduce a mayor captacin de CO
2
. Las concentraciones de
HCO3- y de H+ tambin se pueden controlar por mecanismos
fisiolgicos a nivel renal. El rin puede eliminar protones
unindolos a amonacos o fosfatos y mantiene la concentracin
de bicarbonato mediante reabsorcin o regeneracin del mismo. La
suma de las formas sal y cido se llama reserva alcalina. En
condiciones normales, esta suma tiene el valor 25,2 mEq de
CO
2
por litro. Como a pH sanguneo (pH=7,4), la proporcin entre
la forma sal y cido es de 20, resulta que [HCO
3
-
] es 24 mEq/L y
[CO
2
] es 1,2 mEq/L. As, es importante tener en cuenta que el
cuerpo necesita ms bicarbonato que no cido carbnico porque el
metabolismo produce ms cidos que bases.

TAMPN FOSFATO
El tampn fosfato est compuesto por el hidrgeno fosfato (HPO
4
-2
)
y el dihidrgeno fosfato (H2PO
4
-
). Acta en el plasma y el
lquido intersticial. Este tampn tiene un pKa de 6,8, el cual est
mucho ms cerca del pH plasmtico. Esto significara que este
tampn tendra que ser ms til que el anterior, pero no es as ya
que se encuentra en concentraciones menores en sangre y la
eliminacin del fosfato es mucho ms lenta, por va renal.



A pH fisiolgico de 7,4, la relacin HPO
4
-2
/ H2PO
4
-
es igual a 4.
As, se trata de un sistema eficaz para amortiguar cidos. Como
hemos dicho, a nivel sanguneo, el tampn bicarbonato resulta
ms til que el tampn fosfato ya que este ltimo se encuentra en
concentraciones bajas. Ahora bien, a nivel intracelular, el tampn
fosfato tiene concentraciones elevadas y es ms eficiente.

TAMPN HEMOGLOBINA
La hemoglobina es una protena globular multimrica que
dispone de cuatro puntos de unin cuyas propiedades estn
reguladas alostricamente. La funcin principal de la
hemoglobina es el transporte de oxgeno por la sangre. Referente a
su estructura, se trata de un heterotetrmero y consta de dos pares
de cadenas polipeptdicas diferentes. Cada una de las cadenas
lleva un hemo como grupo prosttico, donde se unen las molculas
de O
2
, por lo que una hemoglobina puede unir como mximo
cuatro molculas de O
2
. La captacin de O
2
se ve afectada, entre
otros factores, por los H+ y el CO
2
. Algunos factores favorecen el
estado T, en el cual la protena no tiene O
2
unidos, y otros
favorecen el estado R, en el cual la hemoglobina tiene unidas
molculas de O
2
. Este fenmeno se denomina efecto Bohr. Es muy
positivo para remarcar la diferencia entre las distintas afinidades
para el O
2
; la cual es esencial para que cumpla su funcin de
transporte.
Cuando el CO
2
forma cido carbnico y protones, los protones
estabilizan el estado T, de descarga de O
2
. As, en los capilares
perifricos, dnde encontramos CO
2
, la hemoglobina cede las
molculas de O
2
. En los capilares de los alvolos pulmonares se
invierte este efecto. As, cuando se unen H+ a la hemoglobina, se
produce un efecto en el equilibrio del tampn bicarbonato ya que
se induce a la formacin de bicarbonato. Es un tampn fisiolgico
muy eficiente gracias al cambio de su pK cuando pasa de la
forma oxidada (pK=7,16) a la reducida (pK= 7,71) y a la gran
cantidad que hay en la sangre.

AMINOCIDOS Y PROTENAS
Los aminocidos tienen carcter anftero, es decir, pueden ceder
protones y tambin captarlos. Esto es as gracias a dos de los
radicales comunes en todos los aminocidos: el grupo NH2 y el
grupo COOH. Estos radicales, al estar en contacto con el agua, se
presentan ionizados o protonados; actuando los dos como
donantes o aceptores de protones.
En pH cidos:
- El NH2 capta un protn: NH3+ (el pKa para este radical es 9)
En pH bsicos:
- El COOH pierde un protn: COO- (el pKa para este radical es 2)
En el punto de pKa del grupo amino existe el 50% de radicales
amino protonados (NH3+) y el otro 50% de radicales amino
desprotonados (NH2). En este punto, la variacin de pH, si
adicionamos NaOH a la solucin, es mnima. Por lo tanto, en este
punto la capacidad amortiguadora es mxima.
En el punto de pKa para el grupo carboxil existe el 50% de
radicales carboxil protonados (COOH) y el otro 50% de radicales
carboxil desprotonados (COO-). En este nivel de pH el aminocido
tambin es buen amortiguador.
En el punto isoelctrico de los aminocidos sin cadena radical
cida o bsica se encuentra a medio camino entre el pKa del grupo
amino y el pKa del grupo carboxil. Y encontramos el aminocido
en su forma zwitterin, con ambos grupos funcionales ionizados:
NH3+ y COO-.
El punto isoelctrico de los aminocidos con cadenas protonables
es diferente ya que existe un tercer pKa, que corresponde al valor
de pH en el cual el protn de la cadena lateral se disocia.
As, vemos como esta capacidad para captar y ceder protones
convierte a las protenas y aminocidos en amortiguadores del pH,
actuando como cidos si estn protonados, o como bases, si no lo
estn.
Muchas protenas tienen grupos protonables en la cadena radical
variable, as cada protena o aminocido tiene su punto isoelctrico
y sus pKa caractersticos para cada grupo protonable del radical
variable.
Los pKa pueden verse afectados por radicales prximos y as, puede
variar calidad amortiguadora de los aminocidos segn radicales
de su entorno. Por ejemplo, la histidina, prxima al grupo hemo en
la hemoglobina, tiene pK muy diferentes segn si est unida al
oxgeno o no.
Cuando los aminocidos se unen formando pptidos mediante
enlaces entre el grupo COOH de un aminocido y el grupo NH2 de
otro, desaparecen sus propiedades amortiguadoras. Ahora bien,
siempre existen los grupos terminales y tambin los grupos
ionizables de las cadenas laterales de los aminocidos: cido
asprtico y glutmico, arginina, lisina, histidina, etc. As, para
determinar su capacidad amortiguadora, solamente observaremos
los pK de los terminales y de los laterales ionizables.




APLICACIONES INDUSTRIALES DE LAS SOLUCIONES
TAMPN
Como hemos visto las soluciones tampn son muy tiles para el
mantenimiento del pH en sistemas biolgicos, como por ejemplo el
cuerpo humano, pero sus propiedades van mucho ms lejos y son
ampliamente usadas en las industrias actuales.
En la Industria agrcola, las soluciones tampn se usan para
la fertirrigacin y la agricultura hidropnica (cultivar
plantas usando soluciones minerales y no suelo agrcola).
Todas las plantas tienen un intervalo de pH en que las
races absorben nutrientes de forma idnea. Una variacin
del pH puede afectar al proceso de absorcin de las races:
disminuyendo la captacin de minerales y aumentando la
permeabilidad a sustancias txicas como el aluminio. A su
vez, una variacin en el pH afecta la solubilidad de la
mayora de minerales. Existe un pH idneo para cada planta
dependiendo de su fisiologa i de los minerales que requiere,
pero, como norma general, podemos decir que precisan un pH
ligeramente cido (5.5-7) salvo excepciones como las habas
con pH un tanto bsico (7.4-8.1)
En la Industria alimentaria tambin son de gran
importancia los parmetros del pH ya que, por ejemplo, nos
indica si la carne es apta para el consumo humano. Si la
carne est entre 5.4 i 7.0 de pH, es apta para el consumo,
pero a lo largo del tiempo el pH disminuye, hecho que indica
que su consumo no es pertinente. En la industria vincola,
se deben de tener muy en cuenta las variaciones de pH en la
elaboracin del vino, este debe oscilar entre 2.8 i 3.5, puesto
que a pH superior a 3.5 determinadas bacterias pueden
atacar el vino y producir variaciones en el sabor.
Es sin duda alguna en la Industria farmacutica en la que
se debe tener un control y conocimiento ms exhaustivo del
pH, por distintas razones:
1. Primeramente, para el diseo de los medicamentos es
necesario saber el pH de la zona del cuerpo en que trabajar el
frmaco, pues si bajo ese pH las protenas que queremos usar
se desnaturalizan el medicamento no tendr efecto alguno.
2. En el proceso de formulacin de los frmacos se usan las
propiedades fisicoqumicas del pKa y el pH para elegir la
frmula ptima del medicamento.
3. En los ensayos previos a la comercializacin de los
medicamentos se requiere un control del pH para garantizar
que los resultados obtenidos sean reales y ciertos, pues un pH
errneo podra dar resultados falsos.

EXPERIENCIAS CON SOLUCIONES TAMPN
En bioqumica, como ya hemos expuesto, es necesario controlar el
pH de los medios en los que trabajamos, especialmente si queremos
estudiar el comportamiento de cualquier sustancia con base
proteica como, por ejemplo, enzimas o la separacin de
biomolculas con capacidad de ionizacin. Por eso, es necesario
saber preparar un tampn y poder predecir cual ser su
comportamiento durante la experiencia.
Las soluciones tampn como ya sabemos son mezclas de cidos y
bases dbiles y sus propiedades dependen directamente del pKa. El
pH del punto de equilibrio (punto de inflexin de la grfica que
dibujaremos) corresponde al pKa. Este punto es importante porque
es el punto en que la capacidad tampn del sistema es mayor. Es
decir que dependiendo de qu nos interesa estudiar prepararemos
un determinado tampn.
Pondremos ahora un ejemplo para poder entender el proceso con
claridad. Supongamos que deseamos preparar un tampn de
100mL A-/Ah de pKa 7.1 a pH 7.4 y una concentracin 0.1M:
Usamos la ecuacin de Henderson-Hasselblach para el cociente
entre concentracin A-/AH. (A- representa a la sal, AH al acido)
pH = pKa+log([A-]/[AH])
7.4 = 7.1+log ([A-]/ [AH])
Log ([A-]/[AH]) = 7.4-7.1 = 0.3
[A-]/ [AH] = 10^0.3=1.995.
Queremos 100mL de tampn a 0.1M: 0.1M*0.1l = 0.01
Con esta informacin, podemos plantear un sistema de ecuaciones
como el siguiente:
1) [A]/ [AH] = y/x
2) x+y = 0.01 (reordenando) y = 0.01-x
[A]/[AH] = (0.01-x)/x = 1.995
x = 0.0034 moles AH
y = 0.01-x
y = 0.01-0.0034 = 0.0066 moles A-
De esta forma, sabemos los moles de cido y sal que necesitamos
para preparar la solucin tampn de 100mL a 0.1 M. A partir de
los resultados, obtendremos grficos parecidos al de la imagen de
la izquierda. Sin embargo, en nuestro caso el punto de
equivalencia estara en un pH de 7.1.