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PRCTICA N 01

EL RBOL GENEALGICO FAMILIAR, HEREDOGRAMA O


PEDIGRI

PREGUNTAS

1- Qu entiende por individuos afectados e individuos portadores?

Individuos afectados: Son aquellos individuos homocigotos recesivos (herencia
recesiva), homocigotos dominantes y heterocigotos (herencia dominante) y
hemicigotos que manifiestan una enfermedad hereditaria.

Individuos portadores: Son aquellos individuos heterocigotos que no manifiestan la
enfermedad, pero poseen un gen afectado para una enfermedad hereditaria.

2- Qu son caracteres genticos?

Son todas aquellas caractersticas que se encuentran en nuestro organismo, y estn
determinadas por uno o ms genes. En los humanos hay cientos de caracteres
determinados genticamente: el color de los ojos, el color de cabello, de piel, el
nmero de dedos, ciertas enfermedades.

3- Qu son alelos?

Es un par de genes, uno paterno y otro materno, ubicados en un par de cromosomas
homlogos en Locus correspondientes y que codifican el mismo carcter o rasgo
biolgico.

Tambin puede ser, posible variacin que presenta un gen.

4- Explicar y graficar con rboles genealgicos ejemplos de herencia
autosmica dominante, Herencia autosmica recesiva, Herencia
dominante ligada al cromosoma X, Herencia recesiva ligada al
cromosoma X y Herencia ligada al cromosoma Y.

Herencia autosmica dominante


Es autosmico, pues la herencia se transfiere a sus hijos varones y mujeres
indistintamente. Es dominante, pues siendo el padre heterocigoto, se
manifiesta en la descendencia (vertical).

Herencia autosmica recesiva


Es autosmica, pues se trasfiere en varones y mujeres; es recesiva, pues no se
hereda en todas las generaciones.

Herencia dominante ligada al cromosoma X


Es ligada al cromosoma X, pues se presenta en varones o mujeres; y es dominante
pues se manifiesta en la primera generacin.

Herencia recesiva ligada al cromosoma X



Es ligada al cromosoma X, pues se presenta principalmente en varones; y es recesiva
pues se presenta en hemicigotes (varones).
Herencia ligada al cromosoma Y


Es una herencia ligada al cromosoma Y, pues se manifiesta exclusivamente en los
varones.

5- En el ejemplo de arriba, explique porque el propsitos tiene el pelo
ondulado si sus padres tienen pelo lacio. Cul es la probabilidad de que
el hermano o hermana que va a nacer tenga tambin pelo ondulado?

Es que los padres son heterocigotos, es decir poseen el alelo recesivo de pelo
ondulado, de forma que slo se pudo expresar frente a otro alelo recesivo.























PRCTICA N02

CROMOSOMAS HUMANOS: CARIOTIPO
MACROSCOPA

PREGUNTAS

1- Define brevemente y grafica si es posible lo siguiente:

- Quinetochoto o Kinetochoro: El cinetocoro es una estructura proteica situada en
los centrmeros sobre los cromosomas. Sobre esta estructura se anclan los
microtbulos (MTs) del huso mittico durante los procesos de divisin celular (meiosis
y mitosis).

- Cromosoma: Es cada uno de los pequeos cuerpos en forma de bastoncillos en
que se organiza la cromatina del ncleo celular durante las divisiones celulares
(mitosis y meiosis). El ADN siempre se encuentra en forma de cromatina, es decir
asociado a las histonas. Cuando el ncleo celular comienza el proceso de divisin, esa
maraa de hilos inicia un fenmeno de condensacin progresivo que finaliza en la
formacin de entidades discretas e independientes: los cromosomas.

- Satlite: Con frecuencia tienen constricciones secundarias (NOR) en los brazos
cortos, conectando trozos muy pequeos de ADN llamados satlites, que contienen
genes que codifican el RNA ribosmico.

- Cariograma: Es la representacin ordenada de los cromosomas de un individuo en
funcin de su nmero, forma y tamao cuando se tie y se examina bajo un
microscopio.

- Haploida: Es un estado de la clula en el cual su ncleo no tiene dotacin
cromosmica doble, es decir, tiene slo un juego de cromosomas.

- Complemento cromosmico: Es el conjunto de los cromosomas diferentes propio
de un individuo o especie, portador de la informacin gentica bsica de una especie.
Es el conjunto de cromosomas de un gameto, normalmente referido como n.

- Cromosoma acrocntrico: Es aquel cromosoma en el que el centrmero se
encuentra ms cercano a uno de los telmeros, dando como resultado un brazo muy
corto (p) y el otro largo (q).

- Mitosis: proceso que ocurre en el ncleo de las clulas eucariticas y que precede
a la divisin celular, consistente en el reparto equitativo del material hereditario (ADN)
caracterstico. Este tipo de divisin ocurre en las clulas somticas y concluye con la
formacin de dos ncleos separados (cariocinesis), seguido de la particin del
citoplasma (citocinesis), para formar dos clulas hijas.

- Monosoma: Es la eliminacin de un cromosoma de una pareja de homlogos (2n-
1 cromosoma). En la especie humana, la monosoma produce enfermedad ej., el
sndrome de Turner.

- Aneuploida: Hace referencia al cambio en el nmero cromosmico, que pueden
dar lugar a enfermedades genticas.Un aneuploide es un individuo cuyo nmero de
cromosomas difiere del tipo silvestre o euploide en parte de su dotacin cromosmica,
debido a un cromosoma extra o ausente, que siempre se asocia con una deficiencia
en el desarrollo fsico, mental o ambos.

- Cromtide: Es una de las unidades longitudinales de un cromosoma duplicado,
unida a su cromtida hermana por el centrmero, es decir, la cromtida es toda la
parte a la derecha o la izquierda del centrmero del cromosoma.

- Crommera: Es un disco coloreable que, en el cromosoma, contiene un nmero
ms o menos elevado de genes. Los crommeros alternan con zonas que no fijan los
colorantes. Se hacen visibles en un cromosoma durante la profase de la meiosis y la
mitosis.

- Tallo o Talo: Contienen genes que codifican el RNA ribosmico.

- Cariotipo: Es el nmero, forma y tamao de los cromosomas de una determinada
especie. Esto es, al conjunto de los cromosomas de una clula. Los cromosomas de
una clula pueden ser observados al microscopio ptico, fotografiados y sobre estas
fotografas pueden medirse y contarse con facilidad.

- Constriccin secundaria: Es un estrechamiento que aparece al final de las
cromtides. Son constantes en posicin y tamao, resultan tiles para identificar al
final de las cromtidas.

- Genoma: Es la totalidad de la informacin gentica que posee un organismo en
particular y que codifica para l. Por lo general, al hablar de genoma en los seres
eucariticos nos referimos slo al ADN contenido en el ncleo, organizado en
cromosomas.

- Cromosoma telocntrico: Un cromosoma telocntrico como tal no existe. El
centrmero est localizado en un extremo del mismo, pero a regin telocntrica no
permite que molecularmente haya otra estructura finalizando al cromosoma. El
acortamiento del telmero o su ausencia total causa inestabilidad en los cromosomas
y consecuentes translocaciones robertsoniana. Por tanto, el trmino telocntrico es
incorrecto y debe considerarse al trmino subtelocntrico, el cual implica que el
telmero se ubica al final as no sea visible y que el centrmero est despus
invariablemente.

- Tetraploida: Un individuo tetraploide o que tiene tetraploida es un individuo cuyas
clulas han de configuracin 4n es decir, para cada cromosoma son tres rplicas
(haciendo cuatro en total).

- Meiosis: Es una forma de la reproduccin celular. Este proceso se realiza en las
glndulas sexuales para la produccin de gametos. Es un proceso de divisin celular
en la cual una clula diploide (2n) experimenta dos divisiones sucesivas, con la
capacidad de generar cuatro clulas haploides (n). En los organismos con
reproduccin sexual tiene importancia ya que es el mecanismo por el que se producen
vulos y espematozoides. Es importante para la variabilidad gentica.

- Mosaico: Es una alteracin gentica en la que, en un mismo individuo, coexisten
dos o ms poblaciones de clulas con distinto genotipo (dos o ms lneas celulares),
supuestamente originadas a partir de un mismo cigoto.

2- Segn el modelo de CARIOTIPO NORMAL, arme los cariogramas
correspondientes a cada una de las fotocopias de las metafases
sealadas. Diagnostica el complemento o Frmula cromosmica en cada
caso. Menciona los sndromes correspondientes a cada uno de ellos.

Los cariogramas corresponde a:

- Mujer normal (46, XX)
- Varn con Sndrome de Klinefelter (47, XXY)
- Varn con sndrome de Down (47, XY + 21)

3- Realiza el resumen de los caracteres fenotpicos de los sndromes
diagnosticados.

Sndrome de Klinefelter

El sndrome de Klinefelter (abreviado normalmente como SK) es una anomala
cromosmica ya que consta con dos cromosomas X y solo un cromosoma Y, y esto
afecta a los hombres y ocasiona, principalmente, hipogonadismo. Se basa en una
alteracin gentica que se desarrolla por la separacin incorrecta de los cromosomas
homlogos durante las meiosis que dan lugar a los gametos de uno de los
progenitores, aunque tambin puede darse en las primeras divisiones del cigoto.

Fenotpicamente, es un hombre con aspecto afeminado: ginecomastia (mamas
desarrolladas), caderas anchas, muy altos de estatura, esterilidad. Inteligencia normal.

Sndrome de Down

El sndrome de Down (SD) es un trastorno gentico causado por la presencia de una
copia extra del cromosoma 21 (o una parte del mismo), en vez de los dos habituales,
por ello se denomina tambin trisoma del par 21. Se caracteriza por la presencia de
un grado variable de discapacidad cognitiva y unos rasgos fsicos peculiares que le
dan un aspecto reconocible.

Las principales caractersticas son:

Cabeza aplanada en la parte posterior,
Inclinacin de los prpados,
Pliegas pequeas de la piel en el canto interna de los ojos,
Lengua protuberante,
Puente nasal achatada,
Odos levemente ms pequeos,
Boca pequea,
Tono disminuido del msculo,
Ligamentos flojos,
Manos y pies pequeos.

4- Menciona la importancia del uso de los siguientes reactivos en los
cultivos celulares para obtener cromosomas IN VITRO:

Fitohemaglutinina La Fitohemaglutinina es una lectina ampliamente
distribuida entre la legumbres y en algunas oleaginosas incluida la soja Glycine
max. Las lectinas son protenas que reconocen carbohidratos y se caracterizan
por su habilidad para combinarse con receptores de membrana de
carbohidratos. Se emplea en el protocolo de preparacin de las clulas para
hacer un cariotipo den deteccin de posibles anomalas cromosmicas. Las
clulas se incuban con esta lectina que induce su mitosis y proliferacin. Una
vez que se considera que una gran parte del cultivo se encuentra en metafase,
se aade colchicina que es un agente que detiene el ciclo en metafase, estado
necesario para hacer el cariotipo. Una vez que las clulas se encuentran
detenidas en metafase, se produce un choque osmtico para que se hinchen y
poder fijar sus ncleos para el estudio de los cromosomas.

Tripsina Existen muchos tipos de tinciones para observar los cromosomas. La
ms utilizada es la tincin con colorante Giemsa, se conoce como tcnica de
bandas GTG. En este caso se expone la muestra del portaobjetos a tripsina,
con el objetivo de desnaturalizar algunas de las protenas constitutivas de los
cromosomas.

Solucin hipotnica Una solucin hipotnica es aquella que tiene menor
concentracin de soluto en el medio exterior en relacin al medio interior de la
clula, es decir, en el interior de la clula hay una cantidad de sal mayor que de
la que se encuentra en el medio en la que ella habita.

Quinacrina Un anlogo, la mostaza nitrogenada de la quinacrina, es utilizado
principalmente como colorante en los estudios de cromosomas y cromatina.
Fluoresce al reaccionar con los cidos nucleicos en los cromosomas.

Colchicina La colchicina es un frmaco antimittico que detiene o inhibe la
divisin celular en metafase o en anafase. Es un compuesto que evita el
reparto de los cromtidas de un cromosoma durante la mitosis, provocando la
poliploida de la clula filial, ya que aunque no haya separacin, s hay
duplicacin del material gentico. Su efecto se debe a su accin sobre las
protenas citoesquelticas del huso mittico.

Fijador Carnoy El fijador de Carnoy es un fijador que contiene cloroformo.
Penetra en tejidos extremadamente rpido y pude fijar piezas de tejido de
pequeo tamao en minutos en vez de las horas requeridas con otros fijadores.
Los tejidos delicados pueden ser daados cuando se transfieren de soluciones
acuosas a este fijador, debido a la extrema hidrofobicidad del cloroformo y
resultando en una deshidratacin rpida de los tejidos.

Glutamina La glutamina es un aminocido no esencial, que en ciertas
circunstancias puede llegar a ser un nutriente esencial. Estimula la sntesis e
inhibe la degradacin de las protenas, es un importante vehculo para el
transporte de nitrgeno y carbono dentro de los tejidos.

5- Explique el fundamento y para qu se usan los mtodos de marca como:
Bandas C, G, R, Q, NOR, ICH.

Bandas C: Muestra heterocromatina constitutiva sobre todo en centrmeros.
Se hace mediante tratamiento alcalino drstico (NaOH, Ba(OH)2) seguida por
solucin salina caliente y tincin con Giemsa.

Bandas G (Bandas de Giemsa): Los cromosomas son sometidos a digestin
con la enzima tripsina de manera controlada. Los cromosomas se
desnaturalizan mediante calor en solucin salina (esto desnaturalizar DNA
con abundantes A-T) y, a continuacin, se tien con Giemsa que es un
colorante qumico que enlaza DNA. Las bandas oscuras de tincin positiva, son
las bandas G. Las plidas son G negativas, se denominan bandas R. Las
regiones oscuras son las que se replican ms tarde en la fase S y contienen
cromatina ms condensada. Las bandas R suelen replicarse temprano en la
fase S y tienen menos condensada la cromatina. Los genes se concentran
sobre todo en esta banda, mientras que el DNA de las bandas G es menos
activo transcripcionalmente. Las bandas R son Q negativas.

Bandas R (Bandas Reversas): Se incuban las preparaciones cromosmicas
en solucin tampn a temperaturas elevadas o a un pH apropiado y se tien
con Giemsa. En ellas se invierte el patrn normal blanco y negro que se
observa en las bandas Q y G. Este mtodo destaca por su gran utilidad en la
tincin de los extremos distales de los cromosomas.

Bandas Q (Bandas de Quinacrina): Se tien los cromosomas con un
colorante fluorescente (quinacrina, acridina, Hoechst 33258, DAPI,
cromomicina, etc.) que se enlaza preferentemente a DNA abundante en A-T y
se observan mediante fluorescencia UV. Las bandas fluorescentes indican los
mismos segmentos que las bandas G.

Bandas NOR (Regin de Organizadores Nucleolares): Marca los satlites y
tallos de los cromosomas acrocntricos.

Bandas ICH: Estudio de Intercambio de Cromtides Hermanas.



































PRCTICA N 03

CROMOSOMAS HUMANOS: CARIOTIPO
MICROSCOPA

PREGUNTAS

1- Defina los siguientes conceptos:

- Sitios frgiles

Los sitios frgiles comunes se definen como regiones del cromosoma eucariota con
tendencia a sufrir fracturas o quiebres frente a sustancias inductoras adicionadas al
medio de cultivo linfocitario como la 5azacitidina. Actualmente en humanos y animales
domsticos las regiones de fragilidad cromosmica han sido correlacionadas con
heredopatologas diversas (sndrome de retardo mental, paraqueratosis hereditaria,
sndrome de calvicie en terneros, alteraciones de la fertilidad).

- Heteromorfismo cromosmico


Una variante morfolgica normal o una variante en tincin de un cromosoma. Par de
cromosomas homlogos que muestran alguna diferencia en forma o tamao.

- Heterocromatina constitutiva


Muy condensada dentro de las clulas del cuerpo. A esta cromatina pertenece la
mayora de los brazos de los cromosomas acrocentricos y los sectores que poseen
ADN satlite.

- Figuras cuatriradiales


- Fragmento minuto acntrico


Fragmento que resulta de dos roturas en un mismo cromosoma, en el que los
fragmentos terminales se unen y excluyen al segmento separador (delecin
intersticial). El fragmento que se elimina carece de centrmero, por lo que se
denomina acntrico

- Polimorfismo de los satlites


Son estructuras que tienen una propiedad especial, este polimorfismo de satlites se
encuentra en los cromosomas acrocntricos: 13, 14, 15, 21 y 22 se tien mediante
bandeo NOR y Q.

- Polimorfismo del cromosoma Y


Es la porcin no recombinable del cromosoma humano Y. El mantenimiento de
extendidas caractersticas de haplotipos de particulares regiones. Estos revelan trazos
de migraciones de colonizacin de los humanos anatmicamente modernos en el
continente euroasitico.

- Gaps

La replicacin del ADN ocurre durante la interfase. La sntesis tiene lugar durante una
parte limitada, denominada periodo S o sintetico, que a su vez es precedido por dos
espacios (GAPS) o periodos de la interfase (G1 y G2) en los que no hay sntesis de
ADN.

- Endoreduplicacin

Existe una variante de la mitosis que no incluye la divisin celular. El proceso, que se
denomina endomitosis o endoreduplicacin, produce clulas con copias del mismo
cromosoma en el mismo ncleo. Las clulas generadas por la endomitosis se llaman
endoploides.

- Microncleos


2- Mencione la importancia del uso de los siguientes reactivos en los
cultivos celulares para obtener cromosomas in vitro.

- Hidrxido de Bario:

En el bandeo C, con un tratamiento con cido clorhdrico (HCl), Hidrxido de Bario
(Ba(OH)2) y desnaturalizacin al calor se sueltan todas las protenas asociadas al
ADN excepto las ms empaquetadas. Este bandeo es muy til cuando se sospechan
daos en las zonas centromricas como inversiones pericntricas y para la bsqueda
de polimorfismos de heterocromatina de los cromosomas autosmicos 1, 9,16 y la
parte distal del brazo largo del cromosoma Y.

- Mostaza de quinacrina:

En el bandeo Q se usa mostaza de quinacrina (un tinte de acridina que se une al ADN
por intercalacin o por unin inica externa) y estimulando los cromosomas con una
luz ultravioleta, se ponen de manifiesto bandas fluorescentes de idntico patrn al de
las bandas G excepto en las zonas heterocromticas de los cromosomas 1, 9 y 16,en
los satlites de los acrocntricos y en la porcin distal del cromosoma Y, que dan una
tincin variable.

- Solucin Earle:


- Metrotexate:

La exposicin a metrotexato da lugar a una acumulacin de clulas que tienen copias
adicionales del gen DHER. Las copias pueden ser transportadas como ristras
extracromosomicas, en forma de cromosomas diminutos dobles, o pueden integrarse
en el genoma en el sitio de uno de los alelos DHFR.

- Miomicina (MTC)


- Diepoxibutano (DEB)
Ayuda a ver las rupturas cromosmicas en cultivo de linfocitos.

- Bromodeoxiuridina (BrdU)

Ayuda a evidenciar las zonas de replicacin tarda como zonas claras. Para tal fin se
utilizan reactivos afines a la Timina como la Bromodesoxiuridina; la cual es un reactivo
anlogo de la timina que desplaza dicha base en la sntesis del ADN

- Bleomicina

3- Explique cul es el fundamento y para qu se usan las tcnicas y
marcadores moleculares de:

- PCR:

Reaccin en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en ingls
(Polymerase Chain Reaction), es una tcnica de biologa molecular desarrollada en
1986 por Kary Mullis, cuyo objetivo es obtener un gran nmero de copias de un
fragmento de ADN particular, partiendo de un mnimo; en teora basta partir de una
nica copia de ese fragmento original, o molde.

Esta tcnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que, tras la
amplificacin, resulta mucho ms fcil identificar con una muy alta probabilidad virus o
bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadveres) o hacer
investigacin cientfica sobre el ADN amplificado. Estos usos derivados de la
amplificacin han hecho que se convierta en una tcnica muy extendida, con el
consiguiente abaratamiento del equipo necesario para llevarla a cabo.

- RFLP:

En biologa molecular, el trmino polimorfismo de longitud de los fragmentos de
restriccin o RFLP, (comnmente pronunciado "RIF-labios") se refiere a una diferencia
entre dos o ms muestras de homlogos molculas de ADN derivados de las
diferentes ubicaciones de sitios de restriccin, y una tcnica de laboratorio
relacionados por el cual estos segmentos pueden ser distinguidos. In RFLP analysis
the DNA sample is broken into pieces (digested) by restriction enzymes and the
resulting restriction fragments are separated according to their lengths by gel
electrophoresis . En el anlisis de RFLP de la muestra de ADN se rompe en pedazos
(digerida) por las enzimas de restriccin y los fragmentos de restriccin resultantes son
separados en funcin de su longitud por electroforesis en gel. Although now largely
obsolete, RFLP analysis was the first DNA profiling technique inexpensive enough to
see widespread application. Aunque ahora en gran medida obsoleta, el anlisis de
RFLP es el ADN primera perfiles tcnica de bajo costo lo suficiente para ver una
amplia aplicacin. In addition to genetic fingerprinting, RFLP was an important tool in
genome mapping , localization of genes for genetic disorders , determination of risk for
disease, and paternity testing . Adems de la caracterizacin gentica, RFLP es una
herramienta importante en la cartografa del genoma, la localizacin de los genes de
trastornos genticos, la determinacin del riesgo para la enfermedad, y la prueba de
paternidad.

- SSR:

SSR (Short Sequence Repeat) o STR (Short Tandem Repeat) por sus siglas en ingls,
denominados microsatlites en castellano, son secuencias de ADN en las que un
fragmento (cuyo tamao va desde uno hasta seis nucletidos) se repite de manera
consecutiva. La variacin en el nmero de repeticiones crea diferentes alelos los
cuales se distinguen entre s por la longitud total del fragmento.

Generalmente se encuentran en zonas no codificantes del DNA. Son neutros, co-
dominantes y poseen una alta tasa de mutacin, lo que los hace muy polimrficos. A
pesar de esto, la variabilidad que presentan til para su uso como marcadores
moleculares, es respecto al nmero de repeticiones, no de la secuencia repetida. Son
utilizados como marcadores moleculares en una gran variedad de aplicaciones en el
campo de la gentica como parentescos y estudios de poblaciones.

- AFLP:

Tcnica de AFLP, siglas en ingles de Amplified Fragment Length Polymorphism,
consiste en la combinacin de los mtodos de PCR y anlisis de fragmentos de
restriccin, con el fin de detectar polimorfismos debidos a modificaciones en la
secuencia de ADN que comprende los sitios de corte de las enzimas de restriccin.
Este cambio se percibe como un patrn diferente, en nmero y tamao, de bandas
generadas.

- Microarrays:

Un chip de ADN (del ingls DNA microarrays) es una superficie slida a la cual se
unen una serie de fragmentos de ADN. Las superficies empleadas para fijar el ADN
son muy variables y pueden ser vidrio, plstico e incluso chips de silicio. Los arreglos
de ADN son utilizados para averiguar la expresin de genes, monitorizndose los
niveles de miles de ellos de forma simultnea.

La tecnologa del chip de ADN es un desarrollo de una tcnica muy usada en biologa
molecular, el Southern blot. Con esta tecnologa podemos observar de forma casi
instantnea la presencia de todos los genes del genoma de un organismo. De tal
forma que suelen ser utilizados para identificar genes que producen ciertas
enfermedades mediante la comparacin de los niveles de expresin entre clulas
sanas y clulas que estn desarrollando ciertos tipos de enfermedades.

- Souther Bloot:

Southern blot, hibridacin Southern o, simplemente, Southern, es un mtodo de
biologa molecular que permite detectar la presencia de una secuencia de ADN en una
mezcla compleja de este cido nucleico. Para ello, emplea la tcnica de electroforesis
en gel de agarosa con el fin de separar en base a la longitud de los fragmentos de
ADN y, despus, una transferencia a una membrana en la cual se efecta la
hibridacin de la sonda. Su nombre procede del apellido de su inventor, un bilogo
ingls llamado Edwin Southern.

- FISH:

La Hibridizacin in situ con Fluorescencia ( FISH ) es una nueva tecnologa de
Citogentica Molecular que utiliza fragmentos de ADN (llamados sondas) para detectar
o confirmar anomalas gnicas o cromosmicas que generalmente estn ms all del
poder de resolucin de la Citogentica Clsica de rutina, brindando resultados de 3 a 5
das.