Guía Bioquímica II 2014-I

MANUAL DE PRCTICA - BIOQUMICA II FAC.
FARMACIA Y
BIOQUMICA

UNIVERSIDA NACIONAL SAN LUIS GONZAGA
FACULTAD FARMACIA Y BIOQUIMICA

GUIA DE PRATICA
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AUTORAS:
Dra. CHACALTANA RAMOS, Luz
Dra. PARI OLARTE, Bertha
Q.F. CHUMBES HUAMAN, Andrea.
FAC. FARMACIA Y BIOQUMICA GUA DE PRCTICA - BIOQUMICA II
Autores: L.CH.R / B.P.O. / A.CH.H 2

PROLOGO

Es indudable que las relaciones entre el Laboratorio y la Bioqumica prctica
son cada vez ms estrechas y se complementan de una forma ms evidente
cada da, como se pone de manifiesto en esta Gua Prctica de Bioqumica.

En este contexto de continuos avances en la bioqumica y por la patogenia de
las enfermedades; que existe una amplia evidencia de la importancia que
puede jugar la inflamacin en el inicio y progresin de la enfermedad, as como
los datos de recientes publicaciones que sugieren que ciertas infecciones
bacterianas o vricas podran dar lugar al mencionado proceso inflamatorio.
De aqu la importancia de las determinaciones analticas, que el laboratorio
nos puede proporcionar en la deteccin precoz y el estudio y conocimiento de
la misma. Todo esto ha conducido a una nueva terminologa para los avances
de las fases aguadas de las enfermedades hoy en da.

Esta es la novedad que aporta esta gua de prctica, avalada por los trabajos
qumicos y bioqumicos ms recientes de la literatura mdica. Se prosigue a un
protocolo analtico simple y a unas determinaciones bioqumicas sricas
rpidas y precisas. Es por ello, por lo que nosotras podamos disponer de un
laboratorio de bioqumica en continua evolucin y que incorpora en todo
momento los ltimos avances en determinaciones analticas.
Estos hechos benefician a nuestros alumnos siendo este nuestro objetivo desde
siempre.

Las Autoras


OBJETIVO DE LA GUA PRCTICA

OBJETIVO GENERAL

Al final de semestre del curso prctico el estudiante ser capaz de explicar
cmo funcionan los principales procesos metablicos y los mecanismos
moleculares que le subyacen a la funcin fisiolgica de clulas, tejidos, y
rganos del cuerpo humano, bajo distintas condiciones fisiolgicas.

OBJETIVO ESPECIFICOS

- Se busca contribuir al logro de adecuadas condiciones del aprendizaje al
estudiante en el rea de bioqumica II perteneciente a la Facultad de
Farmacia y Bioqumica.
- Que el estudiante entienda los fenmenos fisiolgico desde el punto de
vista bioqumico y que sea capaz de integrar este conocimiento en la
estructura fisiolgica de la clula, del tejido y del organismo.
- Que el estudiante conozca los mecanismos bioqumico del
funcionamiento del organismo humano de una manera dinmica e
integral y, al mismo tiempo, comprenda cmo esos mecanismos se
encuentran alterados en la enfermedad.
- Que el estudiante demuestre, mediante actividades, que ha podido
integrar el conocimiento a nivel bioqumico como una herramienta
fundamental para la comprensin de los procesos fisiolgicos y de la
fisiopatologa y con ello entienda los principios en los que se apoya la
tecnologa empleada en el diagnstico de enfermedades.
- Que el estudiante aplique el mtodo cientfico como una herramienta en
la identificacin, el anlisis y la solucin de problemas mdicos.


NORMAS PARA EL USO Y TRABAJO EN EL LABORATORIO

Las prcticas de Bioqumica son una parte esencial en la formacin de un
alumno en esta materia. Para el buen aprovechamiento de las mismas es
necesario leer con atencin estas notas y en particular, cada prctica antes de
entrar en el laboratorio.

1. Realizar las prcticas de Laboratorio con el debido inters y
responsabilidad.
2. Lea cuidadosamente la Gua de Prctica y tenga en cuenta las
indicaciones de los Profesores sobre el uso del material y equipo de
Laboratorio, as como el orden, limpieza y seguridad que debe
mantenerse.
3. El o la estudiante deber acudir a todas las Prcticas de Laboratorio
provisto de mandil blanco con su respectivo logo de la facultad.
4. Por cada Prctica de Laboratorio, cada mesa de Trabajo presentar un
nico informe, el cual consta de las siguientes partes: Introduccin,
objetivos, resultados, discusin de los resultados, conclusiones,
cuestionario y bibliografa. Debindose presentar a la semana siguiente
en el horario y grupo respectivo que le corresponda; ciertos informes
de prctica puede ser entregados en el mismo da de la prctica
realizada. La presentacin del informe ser con letra clara y legible
desarrollado a mano.
5. El inicio de la prctica es en la hora exacta programada. Se tendr una
tolerancia de 5 minutos, luego de ese lapso de tiempo no se tendr
derecho a Nota de informe de prcticas.
6. Las inasistencias a las Prcticas de Laboratorio NO SON
RECUPERABLES EN NINGUNO DE LOS GRUPOS, por lo tanto dichas
faltas debern de ser justificadas con un mximo de una (01) semana.


7. Cada Alumno ser integrante de una Mesa de Trabajo, a la cual
pertenecer a lo largo del Semestre Acadmico.
8. Por mesa de trabajo, ser nombrado un responsable del material y
equipo recibido.
9. Al iniciarse la prctica, el responsable de mesa canjear su Carnet
Universitario, por el material y reactivos a utilizarse en la prctica.
10. En caso de dao, deterioro o prdida del material y equipo, el
responsable de mesa informar del hecho al Profesor. TODO EL GRUPO
ES RESPONSABLE DEL Dao CAUSADO y deber repararlo en la
brevedad posible, no mximo de una (01) semana despus del incidente,
con la detencin de sus Carnet Universitarios.
11. Al final de la Prctica, se proceder a limpiar el material usado, con el
fin de entregarlo en las mismas condiciones en las que fueron recibidos.
12. Una vez limpio el material, el responsable de mesa lo devolver a la
persona encargada de laboratorio y proceder a recibir su Carnet.
13. El laboratorio deber quedar completamente limpio, las mesas secas y
limpias, debiendo arrojar todos los desechos al tacho de basura.


PRACTICA N 1

DIGESTIN DE CARBOHIDRATOS

El carbohidrato ms importante en la alimentacin es la glucosa, la cual
ingerimos bajo la forma de disacridos (maltosa, sacarosa y lactosa) o de
almidn, polisacridos formados por muchas molculas de glucosa.

El almidn es el constituyente esencial de cereales, leguminoso, tubrculos y
races. La digestin de los carbohidratos se produce gracias a las enzimas
digestivas producidas por la glndula salivares, el pncreas y la pared
intestinal. Estas enzimas son:
o La alfa amilasa salivar
o La alfa amilasa pancretica
o La amilo 1,6 glucosidasa de la pared intestinal

Las alfa amilasas son enzimas que actan a pH neutro y en presencia de iones
cloro. Rompen los enlaces amilo 1,4 dando como resultado oligosacridos y
glucosa. Los carbohidratos se comienzan a digerir en la boca por accin de la
-amilasa de la saliva lquido orgnico segregado de modo reflejo ante la
presencia de la comida. La -amilasa tambin llamada ptialina, cataliza la
hidrlisis de las unidades glucosa a nivel del enlace glucosidico -1,4.
Existen dos formas de evaluar la actividad enzimtica e la amilasa:
o Por desaparicin de sustrato: forma como desaparece el almidn
el que se aprecia por la reaccin del lugol.
o Por formacin de producto: forma como desaparece carbohidratos
reductores (glucosa) en el medio, los que se aprecian por
reduccin del cobre.

En nuestra practica evaluaremos la actividad enzimtica de la amilasa obre el
almidn mediante la reaccin del remanente de almidn frente al yodo a mayor
decoloracin, mayor actividad enzimtica.

OBJETIVO
- Comprender la importancia de la accin de la -amilasa
- Interpreta la accin de la -amilasa
- Comprender la importancia de la digestin de carbohidratos
- Determinar cuantitativamente la actividad amilasa

EQUIPOS
- Bao de agua o bao mara
- Espectrofotmetro

MATERIALES
- Probetas de 100m
- Probetas de 50 ml
- Pipetas de 2 ml
- Pipetas de 1 ml
- Pipetas de 5 ml
- Pipeta de 10 ml
- Fiola 100 ml
- Vaso de precipitado 250 ml
- Gradilla para tubos de ensayo
- Tubos de ensayo
- Propipetas
- Celda para espectrofotmetro
- Vasos descartables
- Materiales de limpieza

REACTIVO
- Almidn
- Buffer fosfato pH 6,6
- HCl
- Suero fisiolgico
- Agua destilada

TCNICA EXPERIMENTAL: Digestin del almidn por la amilasa salivar.
Para la experiencia preparar cuatro tubos de ensayo de acuerdo al
siguiente esquema:

TUBO 1 2 3 4
ml Almidn 1% 2 2 2 2
ml Buffer fosfato pH
6,6 1 1 1 0
ml HCl 0,3 N 0 0 0 3,4
ml Suero Fisiolgico 3 2,4 0 0
ml Agua Destilada 0 0 2,4 0
Colocar en bao mara a 37C por 5 minutos. Luego agregar:
ml solucin de
saliva 0 0,6 0,6 0,6
Colocar en bao mara a 37 C por 20 minutos.

Pasado este tiempo tomar 0,5 ml de cada tubo y preparar cuarto
tubos ms de acuerdo al esquema:

TUBO 1 2 3 4
ml digestin tubo 1 O,5 0 0 0
ml digestin tubo 2 O 0,5 0 0
ml digestin tubo 3 0 0 0,5 0
ml digestin tubo 4 0 0 0 0.5
ml HCl 0,05N 5 5 5 5
ml solucin de
yodada 0,5 0,5 0,5 0,5

Dejar en reposo por 15 minutos, luego leer al fotocolormetro con
filtro rojo (660nm).


INFORME N1
DIGESTIN DE CARBOHIDRATOS

INTRODUCCIN:

OBJETIVO:

RESULTADOS:
- Grafique la curva de calibracin de A490 nm vs [azcar] M.

COMENTARIO:


DISCUSIN DE LOS RESULTADOS:

CONCLUSIN:

CUESTIONARIO:
1. Realizar los clculos para las soluciones utilizadas en prcticas.
o Almidn 1%
o HCl 0,3 N
o HCl 0,05 N
2. Dibujar un esquema sobre la Digestin de los Carbohidratos

BIBLIOGRAFA:


PRACTICA N 2

GLICEMIA ENZIMTICA
DETERMINACIN DE GLUCOSA EN MUESTRA BIOLOGIC

La glucosa es la principal fuente de energa en los seres vivos. Por tal razn
es un metabolito fundamental en los procesos biolgicos.

La determinacin cuantitativa de este compuesto, ha sido objeto de muchos
estudios y la literatura ofrece diversas tcnicas de anlisis que varan de
acuerdo con diferentes factores como la naturaleza de la muestra, los
contenidos de glucosa y la viabilidad experimental.
El Mtodo enzimtico para la determinacin de glucosa en sangre y otros
lquidos biolgicos

Fundamento del mtodo: El esquema de reaccin es el siguiente:


OBJETIVO
- Determinar por espectrofotometra el contenido de la glucosa en
suero y/o en plasma sanguneo humano.
- Comprender la importancia de la glucosa
- Determinar cuantitativamente la determinacin de la glucosa

EQUIPOS
Espectrofotmetro
Centrifugas
Micropipetas
Bao mara
Materiales

MATERIALES
Tubos de ensayos
Tubos de centrifugacin
Pipetas graduadas 5 ml
Pipetas graduadas 2 ml
Gradilla para tubos ensayos
Varilla de vidrio y/o baguete
Propipetas
Jeringa de 5 cc
Aguja de 21
Ligadura
Algodn y alcohol
Materiales de limpieza

REACTIVOS
- Kit de glucosa:
o Estndar: solucin de glucosa 1gr/l
o Enzima: viales conteniendo glucosa oxidasa (GOD), peroxidasa
(POD), 4-aminofenazona (4-AF).
o Buffer: buffer fosfatos pH 7.0 conteniendo hidroxibenzoato.
o Concentraciones finales:
GOD 10 KU/L
POD 1 KU/L
4-AF : 0.5 mM
Fosfatos: 100 mM, pH 7.0
Hidroxibenzoato: 12 mM

TCNICA EXPERIMENTAL:
- RECOLECCIN DE MUESTRA: Se debe obtener suero o plasma de la
manera usual. Tambin es posible realizar la determinacin en lquido
cefalorraqudeo. Adems, cuando no es posible extraer sangre venosa o en
casos de extrema urgencia, la determinacin se puede realizar en sangre
capilar.
o Aditivos: En caso de que la muestra a emplear sea plasma, se
recomienda el uso de anticoagulante G.
o Estabilidad e instrucciones de almacenamientos: los hemates y
leucocitos son los responsables de la destruccin enzimtica de la
glucosa sangunea, siendo mxima a 37C, razn por la debe
centrifugarse la sangre dentro de las dos horas posteriores a la
extraccin, hasta obtener un sobrenadante lmpido y trasferir a otro
tubo para su conservacin. En estas condiciones la glucosa es
estable 4 horas a temperatura ambiente o 24 horas refrigeradas (2-
10 C). En caso de no poder procesarse la muestra de la forma
antes indicada, deber adicionarse un conservador en el momento
de la extraccin para inhibir la glucolisis.
- Luego de obtener la muestra (plasma o suero).
- En tres tubos de ensayos marcados con B (blanco), S (Standard) y D
(desconocido o muestra), colocar segn el siguiente esquema:
B S D
STANDARD - 2oul -
MUESTRA - - 20ul
REACTIVO DE
TRABAJO
2 ml 2ml 2ml

- Incubar minutos en bao de agua a 37C. luego leer en espectrofotmetro
a 505 nm o en fotocolormetro con filtro verde (490 -530 nm) llevando el
aparato a cero con el blanco.


- CONDICIONES DE REACCIN:
o longitud de onda: 505 nm en espectrofotmetro o en fotocolormetro
con filtro verde (490 530 nm).
o Temperatura de reaccin : 37C
o Tiempo de reaccin: 10 minutos
o Volumen de muestra: 20ul
o Volumen de reactivo de trabajo: 2 ml.
o Volumen final de reaccin: 2,02 ml.

- ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCIN FINAL: el color de reaccin
final es estable 1 hora, por lo que la absorbancia debe ser leda dentro de
este lapso.

RESULTADO:
- El Tubo B se emplea para la calibracin.
- El tubo S nos da la lectura del reactivo de trabajo y del factor.
- El tubo D nos da la lectura de las muestras.

Dnde:
D= es la absorbancia de la muestra (desconocido)
f= Concentracin de estndar x 100
Absorbancia del estndar

VALORES NORMALES
- Suero o plasma: 0,70 1,10 g/L
- En los nios pqueos se aceptan valores de 40 a 100 mg/ L.

GLICEMIA = D x f

DIAGNOSTICO POSIBLES EN VALORES ANORMALES DE GLUCEMIA:

- Puede aparecer la glucemia aumentada (hiperglicemia) en:
o Diabetes Mellitus
o Enfermedades Renales
o Feocromocitoma
o Hipertiroidismo
o Gkucagonona
o Pancreatitis aguda
o Sndrome de Cushing
o Tumores pncreas
o Estrs por enfermedades agudas (infarto cerebral, cardiaco,
anestesia general).
o Los tratamiento con sueros en vena, ya que contiene dextrosa
(azcar).
o Embarazo
o Medicamentos (antidepresivos, antihipertensivos, hormonas
femeninas, etc.).

- Pueden aparecer la glucemia disminuida (hipoglucemia) en:
o Dieta excesivas
o Enfermedades hepticas
o Enfermedades de Addison
o Exceso de insulina en diabticos
o Hipotiroidismo
o Hipotituarismo
o Insulinoma
o Alcohol y analgsico puede disminuirla


INFORME N2
GLICEMIA ENZIMTICA

INTRODUCCIN:

OBJETIVO:

RESULTADOS:



CONCLUSIN:

CUESTIONARIO:
1) cules son los valores de referencia de glucosa en la sangre, orina, suero?
2) Como interviene la glucolisis en la muestra problema (sangre). En el suero
y lquidos biolgicos.
3) Que objeto tiene el diagnostico precoz y el control de los pacientes
diabticos.
4) Enumere las 3 categoras principales de diabetes mellitus (DM) y cul es la
ms comn.
5) Realice las caractersticas diferenciales de la DM tipo 1 y la DM tipo 2.
6) Mencionar y explicar la triada diabtica
7) Dibuje un grfico sealando el mecanismo de accin de la glucosa, atreves
de sus hormonas catablicas y anablicas.

BIBLIOGRAFA:


PRACTICA N 3

EXTRACCIN Y AISLAMIENTO DE GLUCGENOS
HEPTICO

Los seres vivos almacenan con frecuencia carbohidratos que aparentemente
sirven de materiales de reserva, se almacenan en forma de polisacridos como el
almidn y la insulina en los vegetales y el glucgeno en los animales las
propiedades fsicas y qumicas de mucho polisacridos neutros difieren lo
bastante de la otras sustancias naturales, para permitir su fcil aislamiento. Al
homogenizar.

Hgado de rata o conejo en ac. Tricloroactico (TCA), precipitan numerosas
sustancias de peso molecular elevado, como las protenas y el cidos nucleicos,
mientras que el polisacrido glucgeno continua disuelto.
El glucgeno puede separarse de los azucares y otros compuestos hidrosolubles
por precipitacin con alcohol, porque los polisacridos son muchos menos
solubles en alcohol acuosos que los azucares. Luego el glucgeno puede
purificarse a partir de soluciones acuosa por precipitacin con alcohol.

OBJETIVOS:
- Recordar la importancia del glucgeno
- Recordar las fuentes de glucgeno
- Es la extraccin del glucgeno heptico
- Ser capaz de realizar la hidrolisis cidas enzimtica

MATERIAL BIOLOGICA
Un pollo bien alimentado durante unas semanas antes

EQUIPO
Centrifuga
Balanza analtica

MATERIALES
Pipetas de 5 ml
Pipetas de 10 ml
Tubos de ensayo
Tubos de centrifuga
Mortero con pitn
Varilla de vidrio
Probeta de 100 ml
Vasos de precipitacin de 250 ml
Luna de reloj
Fiola de 100 ml
Gradilla para tubos de ensayo

REACTIVOS
cido tricloroactico al 5%
cido tricloroacitico al 10%
Etanol
Arena lavada
Cloruro de sodio solido
ter etlico
Hielo
Solucin de lugol

TCNICA EXPERIMENTAL
- Prepare el cido tricloroacetico al 5% y al 10% en la fiola.
- Decapitar un pollo bien alimentado con una dieta alta en carbohidratos
(una semana antes).
- Extraiga el hgado con sumo cuidado.
- Inmediatamente colocar el hgado en una luna de reloj bien helada y pesar
(previamente realizar pesada de la luna de reloj para obtener el peso del
material biolgico por diferencia)
- Cortar el hgado en trozos pequeos y dejarlo caer en un mortero muy frio,
y adicionar 1 ml de TCA al 5 % por cada gramo de hgado.

- Pesar 0,5g de arena lavada y agregarlo al mortero para iniciar la
trituracin (mantener el mortero en hielo) hasta obtener una masa liquida
homognea.
- Trasvasar el preparado a los tubos de ensayo equitativamente hasta las
dos cuartas partes de la capacidad.
- Llevar los tubos a centrifugar durante 5 minutos a 2000 RPM
- Decantar el lquido sobrenadante opalescente en la probeta de 1000ml
- Enjuagar el mortero con un volumen mayor de TCA al 10% con el objetivo
de conseguir una extraccin ms completa del glucgeno heptico.
- Verter el lquido de los lavados en los tubos y llevar a centrifugar durante 5
minutos a 2000 RPM
- Decantar el sobrenadante uniendo al primer extracto TCA en la probeta y
anotar el volumen total.
- Repetir los pasos anteriores para mayor rendimiento
- Aadir con agitacin a los extractos TCA, 2 volmenes de etanol por cada
volumen de extracto.
- Agitar la mezcla y dejar en reposo hasta que el precipitado flocule.
- Una vez observada la floculacin agitar energticamente y trasvasar el
contenido en el nmero mayor posible de tubos de ensayos, para llevar a la
centrifuga por 5 minutos a 2000 RPM
- Eliminar el sobrenadante trasparente
- Aislar en la luna de reloj el glucgeno de cada tubo de ensayo para su
posterior secado.

RECONCIMIENTO DEL GLUCOGENO:
o Tome una pequea cantidad del glucgeno y disulvalo en 2 ml de
agua destilada en un tubo de ensayo, agregue unas gotas de
reactivo de lugol. Observe el color.
o Repita lo anterior pero emplee 2 ml de glucosa en lugar de
glucgeno disuelto en agua destilada.


INFORME N3
EXTRACCIN Y AISLAMIENTO DE GLUCGENOS HEPTICO

INTRODUCCIN:

OBJETIVO:

RESULTADOS:
1. Indique el rendimiento total del glucgeno y calcule el contenido del
glucgeno obtenido en el hgado, expresndolo en gramos del glucgeno
por 100 gr de tejido fresco, compare los resultados obtenidos con los otros
grupos de mesa y vea si el tamao del hgado afecta el contenido de
glucgeno,
2. Informe de los resultados obtenidos en el reconocimiento con lugol.



CONCLUSIN:

CUESTIONARIO:
1. Compare las caractersticas del almidn, glucgeno, celulosa y quitina
2. Que factores pueden influir sobre el porcentaje del glucgeno en el hgado
3. Qu importancia tiene la saliva en la hidrolisis enzimtica
4. Cules son las enzimas claves que participan en el metabolismo de los
carbohidratos.

BIBLIOGRAFA:


PRACTICA N 4

SCHOCK INSULINICO EN COBAYO
EFECTO DE LA INSULINA SOBRE LOS NIVELES DE GLUCOSA SANGUINEA
FENOMENOS DEL SHOCK INSULNICO

El trmino shock insulnico se utiliza para describir la hipoglicemia severa que
produce prdida del conocimiento y otros trastornos. La hipoglicemia se produce
cuando la glucosa del cuerpo se gasta con demasiada rapidez, cuando sta es
liberada en el torrente sanguneo con mayor lentitud que lo requerido por el
cuerpo, o cuando se libera demasiada insulina en el torrente sanguneo.

La insulina es una hormona producida por el pncreas en respuesta a mayores
niveles de glucosa en sangre, cuya funcin es reducir estos altos niveles de
glucosa. La hipoglicemia es relativamente comn en las personas diabticas. Se
presenta por un exceso de insulina oral o de medicamento oral antidiabtico,
cuando no se come lo suficiente, o por un incremento repentino del ejercicio sin
compensarlo con una mayor ingesta de alimentos. La hipoglicemia relativa, es
decir, cuando la glucosa en la sangre de un recin nacido est baja, es bastante
comn. Un beb nacido de una madre diabtica o con diabetes gestacional
(causada por el embarazo) puede presentar hipoglicemia severa. En estos casos el
nio es llamado "beb de madre diabtica". Si durante el embarazo el nivel de
azcar en la sangre de la madre es persistentemente alto, el pncreas del feto
interviene en el control del exceso de azcar produciendo insulina adicional.
Cuando el nio nace, ya no recibe ms glucosa de la madre, pero an produce -
mayor cantidad de insulina, y este exceso hace que el azcar en la sangre del
beb descienda a niveles peligrosos. Esto es una emergencia mdica que de no
tratarsepuede provocar convulsiones y daos al sistema nervioso del beb.

Algunas veces, se desconoce la causa de la hipoglicemia (idioptica). En estos
casos, personas que no son diabticas y que no tienen otras causas conocidas de
hipoglicemia pueden presentar sntomas de este trastorno. La hipoglucemia
puede ocurrir a causa de un tumor secretor de insulina del pncreas, por
enfermedad

OBJETIVOS
- Demostrar lo que pasa cuando se administra glucosa al conejo que se
encuentra en estado de shock.
- Ser capaz de describir los muchos cambios que ocurren como resultado de
la administracin de la insulina.
- Observar los efectos de un exceso de insulina en los conejos
- Recordar los procesos bioqumicos que ocurren durante dicho proceso y
relacionarlo con episodios de la diabetes

EQUIPO
- Balanza analtica

MATERIALES BIOLGICO
- 1 conejos en ayunas durante 24 horas

MATERIALES
Fiola de 100 ml
Tubos de ensayo
Vaso de precipitacin 100 ml
Agitadores de vidrio
Gradillas para tubos de ensayo
Jeringa de tuberculina
Algodn y alcohol
Materiales de limpieza
Jeringa de 10 cc

REACTIVOS
Glucosa anhidra
Insulina de accin rpida
Agua destilada
Adrenalina


TCNICA EXPERIMENTAL
- El conejo es un animal muy sensible a la accin de la insulina, cuya
respuesta a esta hormona es muy diferente de la del perro. Por esta razn,
el conejo es el animal de eleccin en el ensayo biolgico oficial de
estandarizacin de las preparaciones insulnicas. Efectivamente, la
definicin de la unidad estndar de insulina est basada en la respuesta
observada con este animal.
- En base a estas consideraciones, usaremos conejos en este experimento,
uno de los ms dramticos de la Bioqumica. La cantidad de trabajo fsico
requerida en el experimento ser muy pequea. En su lugar, una
observacin muy cuidadosa del animal y de su conducta durante la
primera parte del experimento, ser la principal preocupacin del
estudiante, haciendo ojal una revisin mental de aquellos aspectos del
metabolismo intermedio que pueden sufrir cambios en el animal entero.
Durante este periodo los integrantes del grupo deben tratar de disminuir
cualquier causa de excitacin para el animal. Por qu?
- El conejo deber estar en ayunas 24 horas antes del experimento. Se
inyectan 0.3ml de insulina por va subcutnea al comenzar la sesin de
laboratorio. No deben usarse preparados de insulina de absorcin lenta
(Insulina-Zn, Insulina-Zinc-portaminas).
- Luego de media hora se le inyectan tambin por va subcutnea de 0,2ml
de insulina.
- Mientras usted espera los dramticos efectos de la insulina, prepare una
solucin al 10 % de glucosa que se le administrar al animal y tenga lista
tambin una jeringa de 10 ml. Despus de un tiempo variable, pero
seguramente cerca de una hora despus de la segunda inyeccin de
insulina, el animal entrar en convulsiones. Antes de que esto ocurra el
animal habr pasado por una serie de cambios caractersticos, los cuales
recuerdan los cambios que experimenta un individuo con shock insulnico.
- Si al animal no se le presta atencin posterior, puede ocurrir que no se
observe el perodo de convulsiones sino el periodo en el cual, el conejo en
estado comatoso permanece tranquilo. Algunas veces la muerte sobreviene
durante este primer ciclo de convulsiones. Muy pronto sin embargo, se

establece otro perodo de convulsiones, durante el cual el animal parece
encontrarse al borde de la muerte. El animal puede sobrevivir sin embargo
a esta nueva crisis.
- Una vez que el animal ha superado esta primera crisis y estando, an en
estado comatoso, se le administran 10 ml de la solucin al 10% de glucosa
por va intraperitoneal.
- Como el animal haba sido sobrecargado de insulina, la inyeccin de la
solucin de glucosa slo lo proteger en una forma temporal. En las horas
siguientes es seguro que el animal caer de nuevo en shock ms de una
vez. Usted tendr entonces la responsabilidad de protegerlo de la muerte.
Asegrese de que haya alimento en la jaula del animal. Dos inspecciones
deben hacerse del animal, la primera a las 2 3 horas y la segunda a las 6
horas. En cada una de estas visitas, como medida de proteccin, se
inyectan intraperitonealmente 10 ml de solucin al 10% de glucosa.

SNTOMAS DE HIPOGLICEMIA:


INFORME N4
SHOCK INSULINICO EN COBAYO

INTRODUCCIN:

OBJETIVO:

RESULTADOS:



CONCLUSIN:

CUESTIONARIO:
1. Defina el concepto de : shock, shock hipo glicmico
2. Qu cambios observ usted en la conducta del animal a medida que los
niveles de glucosa se acercaban al nivel del shock?
3. A qu nivel estaba la glucosa sangunea cuando el animal cay en shock?
4. A cierto tipo de pacientes (esquizofrnicos) se les provoca shock insulnico
de un modo similar al que usted ha provocado en el conejo y parece que
estos pacientes son beneficiados por este tratamiento. Cree usted que es
el efecto sobre los msculos y sus correspondientes conclusiones lo que
busca el psiquiatra? Ser acaso el efecto sobre el sistema nervioso lo cual
conduce a cambios en la conducta an de un conejo?
5. Describa qu es lo que pasa cuando usted administra glucosa al animal
que se encuentra en estado de shock.
6. Usted debe ser capaz de describir los muchos cambios que ocurren en un
animal como resultado de la inyeccin de insulina.
7. Para que utilizamos la adrenalina? Cul es su mecanismo de accin?
BIBLIOGRAFA:


PRACTICA N 7

REACCIONES DE XIDO REDUCCIN EN MUESTRAS
BIOLGICAS.
FOSFORILACION OXIDATIVA

Todos los compuestos orgnicos son combustibles, es decir si se calientan
suficientemente en presencia de oxigeno, se produce bixido de carbono, agua y
calor de acuerdo con la siguiente reaccin:

Compuesto orgnico + O2 + Calor CO2 + H2O + Energa

Si el agente oxidante es moderado en su accin se puede observar en forma
gradual los productos de las acciones sucesivas, por ejemplo:
- Si un alcohol primario se oxida, el producto ser un aldehdo
R-CH2OH + O2 R-OH
- Si uno de los aldehdos se oxida ser un acido carboxlico
R-CH + O2 R-COOH
- En cambio un alcohol secundario al oxidarse produce una cetona.
R-CH-OH + O2 R-C=O

Una cetona al oxidarse, no da un acido carboxlico como lo hace el aldehdo. S
utilizamos como agente oxidante un reactivo que cambe de color al reducirse
mediante este cambio podemos comprobar si la reaccin es positiva o no; adems
una prueba organolptica como lo es el olor nos ayuda a comprobar si se lleva la
reaccin o no.

En general estos reactivos son sales que contienen un metal, que al cambiar su
nmero de oxidacin cambia el color tales como: las sales de cobre cprico
(Cu++) que son azules cambian a cobre cuproso (Cu+) que son rojas, otros
ejemplos son el reactivos Fehling (azul) que al oxidarse origina

OBJETIVOS
Al trmino de la prctica, el alumno establecer mediante reacciones qumicas
cual es el producto de oxidacin de:
- Un alcohol primario
- Un alcohol secundario
- Un aldehdo

MATERIALES
Gradilla para tubos de ensayos
Tubos de ensayos
Soporte universal completo
Vaso de precipitado de 100ml
Pinza para tubos de ensayo
Pipetas de 5 ml
Pipetas de 2 ml
Goteros
Matraz de 100ml.

REACTIVOS
Reactivo de Fehling A y B
Solucin de glucosa 1%
Solucin de sacarosa 1%
Solucin de maltosa 1%
Solucin de lactosa al 1 %
Formaldehido
Acetona
Solucin de bicromato de potasio al 3%
Acido sulfrico concentrado

TCNICA EXPERIMENTAL
1. Oxidacin de un aldehdo y una cetona con bicromato de potasio. En dos
tubos de ensayos A Y B:
a. En el tubo A colocar 1 ml de formaldehido y en el B 1 ml de cetona
agregar a ambos tubos 1ml de bicromato de potasio y 2 gotas de
cido sulfrico.
b. Anotar las observaciones hechas y las reacciones que se llevan a
cabo en cada tubo.
c. Cul es el agente oxidante y cul es el reductor?
d. En el tubo B hubo reaccin? por qu?

2. Oxidacin de un aldehdo (glucosa) con el reactivo de Fehling:
a. Marcar cuatro tubos con las letras A, B, C, D respectivamente.
b. En el tubo de ensayo marcado como A, colocar 2ml de solucin de
glucosa.
c. En el tubo marcado como B, colocar 2ml de solucin de sacarosa.
d. En el tubo marcado como C, colocar 2ml de solucin de maltosa.
e. En el tubo marcado como d, colocar 2ml de solucin de lactosa.
f. Agregar a cada tubo 1 ml del reactivo de fehling A y 1ml de Fehling
B
g. Calentar los cuatros tubos a bao mara de 5 a 10 minutos.
h. Hacer observaciones, comparando las reacciones de los cuatro
tubos.
i. Cul es el agente oxidante y reductor en este caso?


INFORME N7
FOSTORILACION OXIDATIVA

INTRODUCCIN:

OBJETIVO:

RESULTADOS:



CONCLUSIN:

CUESTIONARIO:
1. Qu es oxidacin? Y Qu es un agente oxidante?
2. Qu es reduccin? y Qu es un agente reductor?
3. Qu papel juega el reactivo de fehling?
4. Los aldehdos y las cetonas son reductores?
5. Dibuje el ciclo de kress e identifique los intermediarios que intervienen en
la fosforilacion oxidativa.
6. Qu implica las reacciones de xido - reduccin?
7. Las reacciones que siguen segn el grafico, implican oxidacin y reduccin,
complete la tabla:

LAS PAREJAS
REDO QUE
INTERVIENEN
QUE MOLCULAS SE HALLAN EN
ESTADO REDUCIDO Y CUALES
EN ESTADO OXIDADO
LAS MOLCULAS
DE
TRANSFERENCIA
DE GRUPOS QUE
PARTICIPAN
REDUCIDO OXIDADO

8. Completar, Aceptores de electrones en la respiracin anaerbica.
TIPO DE
RESPIRACIN
ACEPTOR DE
ELECTRONES
PRODUCTO
REDUCIDO
Respiracin de azufre
Respiracin de sulfato
Respiracin de
carbonato (bacteria
acetogenicas)

Respiracin de
carbonato (bacteria
metanogenicas)

Respiracin de nitrato
Respiracin de hierro
Compuestos orgnicos

9. Llene los espacios en blancos, complete los enunciados que siguen

a. Los cidos grasos, las hexosas y los_______________ son las
principales molculas que sirven como combustibles para los
hetertrofos.
b. En vegetales y animales, el NADPH se genera catablicamente en la
va ________________.
c. Los tres productos principales que se generan en el catabolismo
completo de la glucosa son _________________, _____________ y
___________________.

10. De las transformaciones bioqumicas que siguen, Cules generan y no
generan NADH, NADPH, ATP?
a. Glucosa piruvato (en la glicolisis)
i. Genera: _________________
ii. No genera: ______________

b. Piruvato dixido de carbono
i. Genera: _________________
ii. No genera: ______________

c. Glucosa-6 fosfato fructuosa-6-fosfato (en la va de las pentosas
fosfato).
i. Genera: _________________
ii. No genera: ______________

d. Glucosa etanol
i. Genera: _________________
ii. No genera: ______________

e. NADHNAD+ (en el transporte de electrones)
i. Genera: _________________
ii. No genera: ______________

f. Electrones del agua ferredoxina.

i. Genera: _________________
ii. No genera: ______________

11. Diga si los enunciados son verdaderos o falsos, si son falsos diga cul es la
respuesta correcta.
a. El NADH es una forma de potencial reductor que se emplea en la
biosntesis reductiva. ( ____________)

b. La fotosntesis es la nica fuente de ATP y NADPH en las plantas
verdes. (____________).

c. El ATP se genera en el catabolismo exclusivamente por fosforilacion
de ADP vinculada a transferencia de electrones (_____________).

d. El metano es una forma altamente reducida de carbono, de modo
que pueda actuar como fuente de electrones del entorno para los
auttrofos. (____________).

e. Todos los auttrofos generan NAPDH durante los transportes de
electrones (____________).

BIBLIOGRAFA:


REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1) Lehninger A, Nelson D. Principios de bioqumica. 4a. ed. Barcelona:
Ediciones Omega; 2010.
2) Holum J. Fundamentos de qumica general, orgnica y bioqumica para
ciencias de la salud. Mxico: Editorial Limusa Wiley; 2009.
3) Devlin T. Bioqumica. Libro de texto con aplicaciones clnicas. 4a. ed.
Barcelona: Editorial Revert; 2010.
4) Laguna J, Pia E. Bioqumica de Laguna. 5a.ed. Mxico: Editorial El
Manual Moderno; 2008.
5) McKee T, McKee R. Bioqumica. 3a. ed. Espaa: McGraw-Hill
Interamericana Editores; 2011.
6) Murray K, Granner D. Bioqumica de Harper. 16a. ed. Mxico:IPN/Editorial
El Manual Moderno; 2010.
7) Stryer L. Bioqumica. 5a. ed. Barcelona:Editorial Revert; 2009.
8) Montgomery R. Bioqumica: casos y texto. 6a. ed.Editorial Harcourt-Brace;
2008: cap.4.
9) Villazn S, Crdenas C, Villazn.

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