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Universidad Autnoma de Chiriqu

Facultad de Ciencias Naturales y Exactas


Escuela de Qumica

Informe N 7

Bioqumica I

Aislamiento de Glucgeno

Presentado por:

Isamar Aguilar 4-764-606
Sherlynn Petit 4-765-2209


Prof. Albertina Montenegro


Fecha de entrega: 27/04/2014







Resumen
El glucgeno es la forma de almacenamiento de la glucosa en los tejidos animales. Se
encuentra principalmente en el hgado y en el msculo representando hasta un 10% y
un 1-2% de su peso hmedo, respectivamente. (Bohinski, 2001)
Las propiedades fsicas y qumicas de muchos polisacridos neutros difieren lo
bastante de las de otras biomoleculas, para permitir su fcil aislamiento.
Esta experiencia tiene como propsito aislar el glucgeno de la muestra de hgado por
calentamiento con una base fuerte (KOH), hasta la destruccin total del tejido.
Al aadir cido tricloroactico al homogeneizado anterior, precipitaron numerosas
sustancias de peso molecular elevado, como las protenas y los cidos nucleicos, en
tanto que el glucgeno contina disuelto. El glucgeno puede separarse de los
monosacridos y otros compuestos hidrosolubles por precipitacin con alcohol, porque
los polisacridos son mucho menos solubles en alcohol acuoso que los
monosacridos.
La determinacin del glucgeno se dio mediante la prueba de molish la cual dio
positivo para carbohidratos (glucosa).
Objetivos
Extraer el glucgeno presente en una muestra de hgado de pollo.
Caracterizar mediante pruebas qumicas el glucgeno extrado.
Marco terico
El glucgeno es un polisacrido de la clula animal, que se encuentra en el hgado
(10%) y msculos (2%). La estructura del glucgeno y los polisacridos similares se
puede describir como una ramificacin en forma de abanico de molculas de
gucopiranosa, por medio de enlaces 1-6 en los puntos de ramificacin.
Presenta ramificaciones cada 8-12 glucosas con una cadena muy larga (hasta 300.000
glucosas). Se requiere dos enzimas para su hidrlisis (Glucogenofosforilasa) y alfa (1-
6) glucosidasas, dando lugar a unidades de glucosa. Dado que los seres vivos
requieren una parte constante de energa, una parte importante de metabolismo de los
azucares est relacionado con los procesos de formacin de almidn y glucgeno y su
posterior degradacin, Bohinski, 1991.
La importancia de que el glucgeno sea una molcula tan ramificada es debido a que:
La ramificacin aumenta su solubilidad.
La ramificacin permite la abundancia de residuos de glucosa no reductores
que van a ser los lugares de unin de las enzimas glucgeno fosforilasa y
glucgenosintetasa, es decir, las ramificaciones facilitan tanto la velocidad de
sntesis como la de degradacin del glucgeno.

El glucgeno por medio de distintos procesos se convierte en ATP que es la forma de
energa ms bsica. Si el proceso requiere de gran cantidad de energa se realizara
por la gluclisis y parte se convertir en cido lctico, para este proceso no hace falta
oxgeno. Por el contrario si el proceso es menos intenso el glucgeno o glucosa
pasara por el ciclo Krebs y ser necesaria la utilizacin del oxgeno, esto es lo
denominado ejercicio aerbico, Mathews, 2002.
Gracias a la capacidad de almacenamiento de glucgeno, se reducen al mximo los
cambios de presin osmtica que la glucosa libre podra ocasionar tanto en el interior
de la clula como en el medio extracelular.
Materiales y Reactivos
Bao trmico, bao de hielo, centrifuga, balanza, policial, tubos de ensayo, tubos de
centrifuga cnicos plsticos con tapn, guantes de ltex, hgado de pollo, solucin de
KOH, Solucin de tricloroactico, solucin de sulfato de sodio, etanol.
Nombre Descripcin Toxicidad

Solucin de KOH
Apariencia: Slido en
fragmentos, terrones, barras,
lentejas o escamas con fractura
cristalina o rombohedral, sin
olor, de color blanco - amarillo
claro, delicuescente.
Punto de Ebullicin (C): 1370
Punto de Fusin (C): 360
pH: 13.5 (Solucin 0.1 M).
Solubilidad: Apreciable en agua
(>10%). Soluble en alcohol y
glicerina, insoluble en amonio y
ter.
Tener precaucin en dosis
elevadas
Tricloroactico
ATC
C
2
HCl
3
O
2
/ CCl
3
COOH
Masa molecular: 163.4
Tener precaucin en dosis
elevadas Tras contacto con
la piel: irritaciones de
aparicin local.
Tras ingestin: trastornos
gstricos e intestinales.
Informacin adicional:
Posible sensibilizacin en
personas predispuestas.
Sulfato de sodio
Sinnimos : Sulfato disodio, sal
disodio, Sulfato sdico
Formula Qumica : (Na
2
SO
4
)
Peso Molecular : 142.04 g/mol
Uso: Utilizado como desecante
en el laboratorio o la industria
qumica. Se utiliza en la
fabricacin de la celulosa y
como aditivo en la fabricacin
del vidrio.
Contacto con la piel: Puede
causar irritacin de la piel.
Causa irritacin a los ojos.
Inhalacin: La sustancia es
irritante para las
membranas mucosas y el
tracto respiratorio superior.
Ingestin. La ingestin de
grandes cantidades puede
irritar el estmago con
nausea y vmito.
Etanol
El etanol es un lquido incoloro,
voltil, con un olor
caracterstico y sabor picante.
Tambin se conoce como
alcohol etlico. Sus vapores son
ms pesados que el aire.
Se obtiene, principalmente, al
tratar etileno con cido sulfrico
Contacto con ojos: Se
presenta irritacin.
Contacto con la piel: El
lquido puede afectar la piel,
produciendo dermatitis
caracterizada por
resequedad y
agrietamiento.
concentrado y posterior
Hidrlisis.

Procedimiento
Aislamiento de glucgeno del hgado de Pollo
1. Pesamos 4g de hgado de pollo en pequeos trozos en un vaso qumico.
2. Agregamos 3mL de la solucin de KOH al 30%.
3. Calentamos a bao mara, agitando constantemente durante 20 minutos.
4. Dejamos enfriar la muestra.
5. Una vez que comprobamos que estaba fra, aadimos 4 gotas de Na
2
SO
4
mezclamos fuertemente y dejamos reposar durante 5 minutos.
6. Se precipito el glucgeno que est en solucin con 7mL de etanol al 95%,
agitamos y dejamos enfriar en un bao con hielo durante 5 minutos.
7. Pasamos la solucin a los tubos de la centrifuga y se centrifuga a la mxima
velocidad 5000 r/m, durante 5 minutos. Desechamos el sobrenadante y colocamos
el tubo invertido en papel toalla para eliminar restos.
8. Aadimos 5mL de solucin TCA al 10% y disolvemos totalmente el precipitado.
9. Centrifugamos de nuevo a 5000 r/m durante 5 minutos.
10. Agregamos el sobrenadante a otro tubo de centrifuga ms 10mL de etanol al 95%,
desechando el sedimento de la centrifugacin anterior.
11. Centrifugamos nuevamente durante 5 minutos a 5000 r/m.
12. Una vez que centrifugamos desechamos el sobrenadante. El precipitado es lo que
representa el glucgeno exento de las sustancias contaminantes.
13. Hicimos prueba de molish para identificar la glucosa de la cadena de glucgeno.

Resultados y discusin
Aislamiento de glucgeno del hgado de Pollo
Se extrajo el glucgeno de la muestra de hgado de pollo y procedimos a realizar la
prueba de molish general para carbohidratos.
Muestra Prueba de molish
Glucgeno +
Observacin: (+) formacin de un anillo violeta en la interfase.

Fig. 1 Formacin de furfurales. Los monosacridos (en este caso la glucosa) en caliente y medio muy
cido, sufren una deshidratacin que conduce a la formacin de un anillo pentagonal de furfural ace o
hidroximetilfurfural, segn se parta de pentosas o hexosas. Los oligo- y polisacridos tambin sufren
estas reacciones, ya que el medio cido favorece la hidrlisis previa del enlglicosdico. Los furfurales
formados se combinan fcilmente con diversos fenoles y aminas, dando reacciones coloreadas.
La prueba de Molish nos permite identificar la presencia de hidratos de carbono,
mediante la formacin de un anillo violeta (furfural o hidroximetilfurfural) en la interfase
de la solucin. (Armstrong, 1982).
El glucgeno es un polisacrido de reserva energtica cuyo monmero es la glucosa.
El glucgeno da positivo a la prueba de molish debido a que al estar en presencia de
cido sulfrico concentrado este hidroliza y deshidrata los azcares, obtenindose
furfural o hidroximetilfurfural como producto final. Luego de esa reaccin se mezcla
con el -naftol, el cual ataca la zona del doble enlace del grupo carbonilo formando un
complejo de sustituyentes cidos y fenlicos que toma una coloracin rojiza violeta en
un anillo del tubo de ensayo.
En la Fig. 1. Se observa que la glucosa tiene hexosas dentro de su estructura, el
cido sulfrico depositado en el fondo del recipiente acta sobre las hexosas
arrancndole una molcula de agua, generando el hidroximetilfurfural que da la
coloracin violeta resultante.
Conclusiones
Se verifico que:
El glucgeno es un polisacrido de reserva energtica cuyo monmero es la
glucosa.
La prueba de molish es general para carbohidratos.
El glucgeno da positivo a la prueba de molish debido a que al estar en
presencia de cido sulfrico concentrado este hidroliza y deshidrata los
azcares, obtenindose furfural o hidroximetilfurfural como producto final.

Bibliografa

Armstrong, F. (1982) Bioqumica. Barcelona. Editorial Reverte.
BOHINSKI. 1991 Bioqumica. Mxico. Pearson
Brown. (2009) Qumica La Ciencia Central. Mxico. Editorial Prentice Hall
Mathews, K. E (2002).Bioqumica. Mxico. Editorial Pearson.
Mora, G.A (2007).Principios de Bioqumica. Espaa. Editorial Reverte
Wade, L.G.2005.Qumica Orgnica. Madrid. Editorial Pearson.