Vectores basados en poxvirus

Gabriela Calamante
Instituto de Biotecnologa
CICVyA INTA Castelar
Vectores virales
Son virus genticamente atenuados o incapaces de completar
su ciclo replicativo en el animal a inmunizar, por lo que no
producen enfermedad clnica
Son virus modificados que llevan genes forneos o secuencias
integradas en posiciones que no son esenciales para la
replicacin viral ni para la infectividad.
El virus es el vehculo y el gen forneo es el gen de inters
contra el cual se quiere desarrollar la vacuna.
Ventajas de los vectores virales no replicativos
- Inocuidad
- Expresin de glicoprotenas
- Estabilidad
Diseo de
un vector
viral
1- es necesario estudiar el genoma del vector para
identificar al menos una regin donde insertar el material
gentico forneo
2- los genes de inters deben estar establemente
integrados en el genoma del vector
3- la insercin del gen forneo debe realizarse de tal
manera que se garantice su correcta expresin (cantidad,
plegamiento, destino final, modificaciones post-traduccionales)
El 1
er
reporte
de un vector
viral fue a
principios de
los 80
Se demostr que el virus vaccinia poda ser
ingenierizado para portar y expresar genes forneos
Desde entonces la tecnologa se aplic en diferentes
familias de virus y para una gran diversidad de genes
forneos (incluyendo los que codifican para antgenos
de patgenos)
Poxvirus
Familia Poxviridae
Subfamilias
- Chordopoxvirinae (vertebrados) 8 gneros
Avipoxvirus, Capripoxvirus, Leporipoxvirus, Molluscipoxvirus,
Orthopoxvirus, Parapoxvirus, Suipoxvirus y Yatapoxvirus.
- Entomopoxvirinae (invertebrados)
Caractersticas
Son virus envueltos complejos que replican en el citoplasma de
clulas de vertebrados e invertebrados.
Su genoma est formado por una molcula de ADN de doble
cadena lineal de 130-375 kpb, bajo contenido G+C (30-40%).
La partcula viral contiene enzimas que sintetizan los ARNm
tempranos.
Citoplasma
Clula vecina
Etapa temprana
Etapa
intermedia
Etapa tarda
Ciclo de
replicacin
Usos de los poxvirus recombinantes
- Estudios sobre la biologa molecular de los poxvirus
- Estudios de patogenicidad (ECTV en ratones)
- Produccin y caracterizacin funcional de protenas in vitro
- Produccin de vacunas de nueva generacin
Ventajas de su utilizacin como vacunas de nueva
generacin
- Estabilidad de la vacuna desecada, bajo costo, fcil administracin
- Administracin de la vacuna por diferentes vas
- Induccin de respuestas humorales y celulares contra el antgeno forneo
junto con inmunidad duradera despus de una nica inoculacin
- Creacin de vacunas multivalentes debido a la flexibilidad
de empaquetamiento del genoma
- Diferenciacin entre animales naturalmente infectados y vacunados
- Inmunizacin se consigue en ausencia de replicacin (seguridad)
- No se manipula el agente patgeno en la produccin de las
vacunas
Poxvirus
recombinantes
pE: promotor temprano de poxvirus
X: gen de inters.
t: terminador de transcripcin y traduccin
Diseo de los vectores de transferencia para
obtener poxvirus recombinantes
poxvirus recombinante
poxvirus
pE- X - t
Sitio blanco de insercin
pE- X - t
recombinacin
homloga in vivo
Vector de transferencia
Obtencin de
poxvirus
recombi-
nantes
1- Disear el vector de transferencia
1- Subclonar el gen de inters en el vector de transferencia
Ingeniera
gentica
2- Infeccin de un cultivo celular con el virus salvaje
2- Transfeccin del vector de transferencia a las clulas
infectadas
Cultivo
Virologa
recombinacin
homloga in vivo
(frecuencia 0,4 %)
3- Seleccionar los poxvirus recombinantes
4- Obtener un stock puro
5- Caracterizar gentica y biolgicamente los
recombinantes seleccionados
6- Evaluar su capacidad de inducir respuestas inmunes
especficas en animales (vacunas)
Cultivo
Virologa
Biologa
molecular
Inmunologa
Eleccin del
sitio blanco
de insercin
1- Genes no esenciales para la replicacin en cultivos
celulares
a) de funcin conocida
Virus vaccinia (1 generacin) genes de las enzimas timidina kinasa y
hemoaglutinina
MVA (2 generacin) pueden usarse los mismos genes como blancos de
insercin.
b) de funcin desconocida
Virus canarypox orf C5 (ALVAC comercializados por Merial)
Anlisis bioinformtico de secuencias disponibles y bsquedas bibliogrficas.
c) de funcin conocida evasin de respuesta inmune (3 generacin)
receptores solubles de citoquinas (IL-1, IFNg, IL-18, etc)
2- Delecin de genes esenciales para la replicacin en cultivos
celulares
El virus slo puede crecer si el gen o su producto son provistos en trans
El virus slo replica in vitro en una lnea celular que exprese el producto
del gen delecionado
Eleccin del
sitio blanco
de insercin
(cont.)
A principios de los 90: Blasco y Moss caracterizaron la protena de envoltura p37 de
vaccinia (codificada por el gen F13L)
La delecin de F13L no afecta la formacin de partculas infectivas intracelulares
VAC-F13L no ocurre la adquisicin de la membrana del Golgi ni la fusin a membrana
plasmtica no egresa defectivos en diseminacin y no forma placas de lisis a los 2 dpi, sin
embargo forma placas de lisis diminutas a los 5-7 dpi
VAC- F13L
(receptor, NO FORMA
PLACAS DE LISIS)
Vector de transferencia
VAC-recombinante
F13L+
FORMA PLACAS DE LISIS
3- Virus de replicacin limitada
El virus se puede crecer in vitro en cultivos celulares de una especie
El virus se usa como vector en otra especie en la cual es incapaz de
completar el ciclo replicativo pero es capaz de expresar el gen forneo
Avipoxvirus (CNPV y FWPV)
MVA y NYVAC
Eleccin del
sitio blanco
de insercin
(cont.)
BHK-21 FEP
Expresin gen marcador
GUS clulas BHK-21
infectadas con CN-GUS
Eleccin de
los
promotores
La expresin del gen de inters debe estar
dirigida por regiones regulatorias de poxvirus
a) Promotores
b) Terminadores de transcripcin y traduccin
1) Vector viral replicativo VV en ratones o FWPV en pollos
Se pueden usar indistintamente promotores tempranos o tardos de
poxvirus
pE/L sinttico, p7.5, p11, pATI, pATI-(7.5)3-4
2) Vector viral no replicativo avipox o MVA en mamferos
Slo se pueden usar promotores tempranos de poxvirus
pH6, pE/L sinttico, p7.5
t pEL
SMC
t pEL Gen de inters
La recombinacin homloga ocurre en dos pasos
Vector de
transferencia
VV
salvaje
VV
recombinante
Gen no esencial
5 3
Sustitucin allica por
doble recombinacin
homloga
5 3
Gen no esencial
5 3
5 3 5 5 3 3 5 3
Gen no esencial
5 3
5 3
Insercin del plsmido originada por un
solo evento de recombinacin homloga
en la regin 5 del gen del VV
Insercin del plsmido originada por un
solo evento de recombinacin homloga
en la regin 3 del gen del VV
VV recombinante estable VV recombinante inestable 5
VV recombinante estable VV salvaje
2
do
evento de
recombinacin
intramolecular
2
do
evento de
recombinacin
intramolecular
VV salvaje
VV recombinante inestable 3
Vector de
transferencia
VV
salvaje
VV
recombinante
Gen no esencial
5 3
Sustitucin allica por
doble recombinacin
homloga
5 3
Gen no esencial
5 3
5 3 5 5 3 3 5 3
Gen no esencial
5 3
5 3
Insercin del plsmido originada por un
solo evento de recombinacin homloga
en la regin 5 del gen del VV
Insercin del plsmido originada por un
solo evento de recombinacin homloga
en la regin 3 del gen del VV
VV recombinante estable VV recombinante inestable 5
VV recombinante estable VV salvaje
2
do
evento de
recombinacin
intramolecular
2
do
evento de
recombinacin
intramolecular
VV salvaje
VV recombinante inestable 3
Seleccin de
los
poxvirus
recombi-
nantes
Teniendo en cuenta que:
la eficiencia de transfeccin es del 0.4%
la frecuencia de ocurrencia de doble recombinacin no se
puede cuantificar
el virus salvaje replica normalmente
Es fundamental disponer de un sistema que permita
seleccionar los virus recombinantes con una alta eficiencia
1) Seleccin por resistencia a un compuesto qumico
a) resistencia a antibitico (neo) no aplicable para el rea de vacunas (a menos
que se utilice sistema loxP-cre)
b) resistencia a cido micofenlico seleccin de poxvirus recombinantes que
poseen el gen bacteriano gpt (enzima xanthine-guanine phosphoribosyltransferase)
MPA bloquea la ruta biosinttica de purinas interfiere con la replicacin viral
Expresin de XGPRT en presencia de MHX sustratos alternativos (X /H) y
resistencia a MPA
Slo los virus recombinantes replican y forman placas de lisis
Se seleccionan los eventos de simple y doble recombinacin
c) resistencia a BrdU seleccin de VV recombinantes TK-
En presencia de la enzima TK activa, fosforilacin de BrdU e incorporacin al DNA
viral provoca mutaciones letalidad
Posibilidad de mutacin espontnea a TK- (10
-4
) falsos positivos
Se combina con un mtodo de screening
Se seleccionan los eventos de doble recombinacin (reemplazo allico)
Mtodos de
seleccin de
los
poxvirus
recombi-
nantes
2) Screening por actividad de una enzima marcadora
Actividad de las enzimas -galactosidasa o -glucuronidasa codificada por
los genes bacterianos lac Z o uid A, respectivamente.
Poxvirus
pH6- GUS- t pE/L-XX - t
Gen no esencial
Poxvirus recombinante pH6-GUS- t pE/L -XX - t
recombinacin homloga in vivo
Vector de transferencia
200X
Nmero de
pasaje
% placas de lisis
azules
1
er
0,1%
2
do
30-70%
3
ro
70-90%
4
to
90-100%
5
to
100%
Screening
por
actividad
GUS
3) Seleccin por fenotipo tamao de placa de lisis
Identificacin de genes que codifican para protenas que:
a) no son esenciales para la replicacin en cultivo celular
b) son esenciales en las etapas finales de la morfognesis viral (liberacin del virus)
Mtodos de
seleccin de
los
poxvirus
recombi-
nantes
(cont.)
VAC p37K , 14K, B5R, H3L, entre otras
Caracterizacin molecular de los poxvirus
recombinantes
Aislamiento en FEP de las placas de lisis azules
(stock 100% homogneo)
1) Anlisis mediante PCR sobre ADN total purificado de FEP infectados
o no para determinar:
A) Presencia del gen de inters
B) Pureza del stock recombinante
Caracteri-
zacin de los
poxvirus
recombi-
nantes
2) Anlisis mediante Southern blot (insercin del gen de inters en el genoma viral)
a partir de ADN total purificado de FEP
3) Evaluacin de la expresin del gen de inters en FEP (ARN total o extractos proteicos)
A) RT-PCR
B) Western blot (anticuerpo especfico)
N
I

C
E
F
I
B
D
V
M
W
M
M
V
A
-
V
P
2
M
V
A
VP2
43 kDa
34 kDa
Caracteri-
zacin de los
poxvirus
recombi-
nantes
(cont.)
C) Inmunofluorescencia (anticuerpo especfico)
Caracterizacin biolgica:
Cintica de crecimiento insercin no altere capacidad replicativa
Pasajes ciegos (ms de 10) para demostrar estabilidad gentica
Infecciones de diferentes tipos de cultivos celulares conserva el mismo rango de
hospedadores
Inoculacin en animales susceptibles no modific su virulencia
Inoculacin en animales no susceptibles no produce lesiones
Caracteri-
zacin de los
poxvirus
recombi-
nantes
(cont.)
Single - step
- Estudios sobre la biologa molecular de los poxvirus
- Produccin y caracterizacin funcional de protenas in vitro
- Produccin de vacunas de nueva generacin
- Optimizacin de vectores poxvirales
Uso de
poxvirus
recombi-
nantes
Estudios
virales
bsicos
MORFOGNESIS VIRAL
Todos los estudios que determinaron los pasos que ocurren
durante la morfognesis del virus vaccinia se realizaron
utilizando recombinantes que posean deleciones de
determinados genes
1- se determin si el gen era esencial para la replicacin en cultivo
2- se determin en que paso de la formacin de las partculas virales est
involucrada la protena
3- por ensayos de trans-complementacin se reconstitua el fenotipo salvaje
VAC-WR VAC-B5R VAC-B5R/B5R
Produccin
de protenas
en cultivo
Utilizando la enzima T7 ARN polimerasa
1) Enzima activa posee una subunidad
2) Alta procesividad de transcripcin
3) Especificidad de promotor en citoplasma de clulas de mamferos
Es un sistema de 2 componentes no se requiere hacer el poxvirus
recombinante de cada protena en estudio
FWPV-pEL/T7RNApol Plsmido
Evaluacin de la
protena de inters en
forma transitoria
10-30% del ARNm total
pT7
Si un gen se expresa
Localizacin protenas-tag
Actividad enzimtica (prot secretada)
Rescate de
virus
infeccioso
Estudios de gentica reversa
Copias completas de genomas virales en plsmidos bajo regulacin del
promotor del fago T7
No se hace transcripcin in vitro
El ADN se transfecta en clulas infectadas con FWPV-T7 o MVA-T7
Efecto citoptico de FWPV-T7 << MVA-T7 <<< VAC-T7
Se utilizan todo tipo de cultivos (poxvirus expresa T7 RNA pol en ausencia
de replicacin)
Rescate de virus infeccioso (genoma a ARN: norovirus, FMDV, IBDV, HAV,
CSFV, etc.)
Evaluacin de mutaciones/ intercambios genticos (replicacin, atenuacin,
patogenia, etc.)
Vacuna
contra la
rabia en
zorros
PRUEBA A CAMPO CON VACUNA BASADA EN VIRUS VACCINIA
Objetivo: erradicar la rabia de los zorros salvajes (reservorio no controlado de virus)
VVTGgRAB: virus vaccinia recombinante que porta el gen de la glicoprotena de
rabia insertado en gen TK (atenuado)
Vacuna Vacuna: Sobrenadante de cultivo de clulas BHK infectadas con VVTGgRAB
Cebo Cebo:
50% carne fresca de pescado, 11% de aceite de pescado, 11% de un polmero sinttico hodrofbico
(produce el agregado)
un sachet de polietileno con 1 dosis de vacuna lquida
contiene un biomarcador de la toma del alimento
Se almacena a 4C sin congelar
Posee resistencia mecnica puede lanzarse desde el aire
Campaas de noviembre de 1989, abril y octubre de 1990 en Blgica.
rea de 2200 km
2
en el sur de Blgica
15 cebos/km
2
81% de los zorros eran positivos para el biomarcador
No se detectaron casos de rabia en ganado o zorros
Debido al xito, se continu usando entre 1991 y 1994
1989
1994
Raboral
V-RG
En EEUU cada ao se distribuyen ms de 12 millones de dosis
de RABORAL V-RG para prevenir la dispersin de rabia en
animales silvestres (principalmente mapaches y coyotes).
Existe transmisin pasiva de anticuerpos neutralizantes
Las cras pueden ser vacunadas a partir de los 30 das de edad
Los anticuerpos maternos no interferan con la induccin de proteccin
Vacunas
basadas en
poxvirus no
replicativos
Slo replican en un nmero limitado de tipos celulares
No producen infeccin en el hospedador
Existe expresin temprana de genes inducen respuestas
inmunes especficas
DERIVADOS DE:
Virus vaccinia:
MVA (virus vaccinia Ankara modificado): atenuado por ms de 500 pasajes en FEP
NYVAC: atenuado geneticamente por delecin de 18 genes no esenciales (regulacin rta
inmune y rango hospedadores)
Avipoxvirus:
CNPV (virus canarypox)
FWPV (virus fowlpox)
MVA
NYVAC
Son vectores seguros e inmunognicos para animales y humanos
Utilizando recombinantes que expresan luciferasa se evalu su biodistribucin en
ratones
A diferencia de WRluc, los recombinantes atenuados expresan el gen reportero
transitoriamente (MVA= 24 h, NYVAC= 72 h).
Los niveles de luciferasa en los tejidos infectados con MVAluc alcanzan un pico
antes que los infectados por NYVACluc.
Estos resultados podrian tener relevancia inmunolgica cuando se usen como
vacunas.
MVA
Se obtuvieron virus recombinantes que expresan antgenos de diversos patgenos
(de animales o humanos) y se observ la induccin de respuestas inmunes
protectoras.
En los ltimos aos se los utiliza en esquemas de inmunizacin del tipo prime-boost,
donde el poxvirus se aplica en la 2da dosis (malaria, leishmania, tuberculosis).
2011 en Espaa finaliz la fase 1 de una vacuna contra HIV
MVA-B que expresa gp120 (monomrica) y poliprotena Gag-Pol-Nef (GPN)
3 dosis i.m.
92.3% de respuesta celular T especfica (ALTAMENTE INMUNOGENICO)
respuesta amplia: CD4+ contra Env (aument luego de 3 dosis)
CD8+ similar contra Env, Gag y GPN
Las respuestas se mantuvieron durante 48 semanas (84.6% de los voluntarios)
CNPV
Existen vacunas licenciadas para animales de compaa y caballos en la Unin
Europea y EEUU que utilizan la tecnologa del vector de canarypox ALVAC.
Patgeno blanco Animal blanco Nombre comercial Distribuidor
virus influenza equina caballo
PROTEQ-FLU (UE) y
Recombitek (EEUU) Merial
West Nile Virus caballo
RECOMBITEKEquine
WNV Merial
Rabies virus gatos Purevax Feline Rabies Merial
Feline leukemia virus gatos EURIFEL FeLV Merial
Canine distemper virus perros RECOMBITEK rDistemper Merial
Canine distemper virus Fur animals
PUREVAXFerret
Distemper Merial
No se usan adyuvantes disminuye riesgo reacciones inflamatorias
En algunos casos induce proteccin luego de 1 dosis importante cuando se
requiere respuesta rpida
Si se requiere booster inmunidad anti-canarypox no altera la performance de
los boosters
Sobrepasa los anticuerpos maternos por ej. los anti-CDV en cachorros
Proteccin duradera hasta 1 ao luego de la vacunacin (FeLV, WNV)
Puede incorporarse en formulaciones vacunales combinadas
Se almacena/transporta a 4C
FWPV
Para la industria avcola existen vacunas licenciadas que
utilizan la tecnologa del vector de fowlpox TROVAC.
Patgeno blanco Nombre comercial Distribuidor
Newcastle disease virus Vectormune FP-ND Biomune
Avian influenza virus Trovac AI H5 Merial
El virus recombinante es una vacuna bivalente: viruela + antgeno forneo
Se puede aplicar a pollitos BB de 1 da
Se puede aplicar a pollos sanos antes de ingresarlos en zona de brote:
provee rpida proteccin
Vacuna FWPV(r) - influenza aviar H5N2 (HA): usada para el control de influenza
aviar en Mxico (1.000 millones de dosis) en pollitos de 1 da de edad: proteccin
contra enfermedad y muerte (90-100%), reduccin del nmero de pollos que
excretaron virus de desafo por tractos entricos y respiratorios (50-75%)
Poxvirus como vacunas para humanos
ALVAC (virus canarypox) vacuna contra HIV
2003-2009 ensayo de Fase III en Tailandia (RV144) 105 millones U$S
>16.000 individuos
Rgimen prime-boost
1 inoculacin: CNPV gag-protease (clado B) y gp120 (clado E)
2 inoculacin: vacuna a subunidad gp120 (AIDS/VAX B/E)
Virus canarypox no es inhibido por inmunidad pre-existencia contra virus vaccinia
(vacuna contra viruela en adultos nacidos antes de 1977)
Disminuy la tasa de infeccin de HIV alrededor del 31%
No tuvo efecto sobre la carga viral en infectados despus de vacunacin
PRIMERA VEZ QUE UN CANDIDATO A VACUNA CONTRA EL SIDA MUESTRA
ALGUNA EFICACIA EN PREVENIR LA TRANSMISION DEL VIRUS
eficacia es modesta pero primer resultado alentador en ms de 2 dcadas
Poxvirus
como
vacunas
La inmunidad pre-existente contra el virus vector interfiere con las
dosis refuerzo:
MVA: se aplica estrategia prime-boost (combinando DNA/poxvirus)
CNPV: no, la inmunidad previa no interfiere (intrnseco del vector)
FWPV: en aves puede haber interferencia con anticuerpos maternos anti-viruela
Cantidad de dosis y duracin de la respuesta:
hay muchos y variados ejemplos (depende del antgeno y tipo de respuesta )
diferenciar entre blancos de vacunacin (animales de compaa vs de produccin)
Tipo de respuesta requerida para proteccin
poxvirus inducen principalmente respuestas CD8+
dependiendo de la compartimentalizacin del antgeno CD4+ y Acs
variabilidad cepas patgenas (expresar 1 antgeno o varios?)
Mejorar inmunogenicidad
co-expresin de citoquinas (GM-CSF, IL-1, IL-18)
delecin de genes involucrados en evasin de respuesta inmune
Plataformas para poxvirus recombinantes (CNPV, MVA y FWPV)
CNPV: VP1 de FMDV (citoplasmtica)
E2 de BVDV (membrana)
gDs de BoHV-1 (secretada)
VP2 de IBDV (citoplasmtica) *
gB de MDV (membrana)
RG de RV (membrana) *
MVA: gDs de BoHV-1 (secretada) *
VP2 de IBDV (citoplasmtica)
poliprotena VPx-VP4-VP3 de IBDV
Ag85A de Micobacterium bovis (MVA y MVA optimizado)
optimizados (delecin de IL18bp)
nef de HIV-1 B/F (MVA y MVA optimizado)
env de HIV B/F
FWPV: VP2 de IBDV (en curso)
optimizados (delecin de receptor soluble de IFN, IL18bp)
- Evaluacin de respuesta inmune inducida
- Pruebas de desafo (*)
-Estudio comparativo de los vectores (expresando mismo Ag)
Convenios con empresas o grupos de investigacin poxvirus recombinantes
Proveedor de huevos frtiles SPF (libres de patgenos especficos)
Incubacin por
10-11 das
(en incubadora
en bioterio Inst.
Biotec.)
Se siembran los recipientes de
cultivo utilizando una densidad
celular de 7 x 10
5
1 x 10
6
clulas/ml
Produ-
ccin
de FEP
Screening de recombinantes: clonado de partculas infectivas bajo agar, en
presencia de X-Gluc (enzima GUS) o bluo-gal (enzima beta-gal)
200X
Caracterizacin molecular de los stocks virales homogneos (100% de
placas de lisis azules): PCR, Western blot, etc. determinar presencia y
expresin del gen de inters (antgenos)
NI CNPV CN-RG MPM
- 72 kDa
- 55 kDa
-43 kDa
Obtencin
de poxvirus
recombi-
nantes
Determinar
capacidad
inmunog-
nica
2x10
7
ufp de CN-X o CNPV va
intraperitoneal (2 dosis, cada 21 das)
La presencia de anticuerpos anti-X se detect
por ELISA a los 20 das de la segunda inmunizacin
Anticuerpos totales
Anticuerpos seroneutralizantes
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
0,00001 0,00010 0,00100 0,01000
%

p
l
a
c
a
s

d
e

l
i
s
i
s
CNPV-VP2
D78
pre-inmune
Ttulo del suero CN-VP2: 3,37 (reduccin al 50%)
Ttulo del suero D78: 4,61 (reduccin al 50%)
Respuesta celular: ELISPOT IFNg
ELISPOT
0
5
10
15
20
25
ADN/MVA Nef BF MVA/MVA Nef BF ADNv/HA-
C

l

s
e
c
r
e
t
o
r
a
s

d
e

I
F
N
-
g
/
m
i
l
l
o
n

d
e

c

l
Pool Total
Control *
El esquema prime-boost fue el ms efectivo en
generar respuesta celular
ELISPOT
0
1
2
3
4
5
6
7
8
pool
1
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 RPMI
Evaluacin de la respuesta utilizando diseo de
matrices con los peptidos solapantes
pooles 7, 9 y 10 representa 3 pptidos de mayor
inmunogenicidad: BF4, BF16 y BF22
Grupo UI /ml
VeroRab 4,5
Vacuna comercial (purif y
concentrada) Sanofi-
Pasteur
CNPV-RG 3,5
Vector viral no replicativo
Referencia 1
Determinar capacidad protectiva frente al desafo
Grupo
Poxvirus
Inst.
Biotecnologa
CICVyA-INTA
Grupo de Poxvirus
Dra. Gabriela Calamante (INTA PP)
Dra. Flavia Zanetti (CONICET Inv Asistente)
Dra. M. Paula Del Mdico Zajac (INTA PNP)
Lic. Romina Cardona (becaria PICT 2008)
Lic. Carlos Federico (becario CONICET)
Lic. Dbora Garanzini (becaria MinCyT-ANLIS)
Srta. Marisol Esusy (estudiante ad honorem)
Colaboradores:
Cultivo: Dr. O. Zabal y su equipo
Tcnica: M.J. Mnaco
Bioterio: S. Diaz
Virus aviares: Dres. A. Venzano y M. Delamer
Vectores MVA optimizados: Dra. M.M Gherardi (CNRS-UBA)
Financiacin (en curso)
ANPCyT PICT 2008 N 0400 (2010-2013)
INTA Proyecto Especfico AERG 232141 (2009-2012)