CAPTULO 2

MTODOS EN
PATOLOGA
92
2
Introduccin.
Autopsia clnica y mdico-forense.
Patologa quirrgica.
Citopatologa.
Mtodos de coloracin en anatoma
patolgica.
CONTENIDO
3
Microscopa de luz polarizada.
Histoqumica.
Mtodos de microscopa
electrnica.
Mtodos inmunohistoqumicos.
Citometra y citofluorometra.
CONTENIDO
4
AUTOPSIA CLNICA Y
MDICO-FORENSE

Autopsia mdico-legal.
Autopsia clnica.
Autopsia clnica: Tcnicas.

CONTENIDO
5
PATOLOGA QUIRRGICA

Macroscopa de biopsias.
Microscopa de biopsias.
CONTENIDO
6
MTODOS
INMUNOHISTOQUMICOS

Fluorescencia.
Inmunohistoqumica.
CONTENIDO
7
CITOMETRA Y
CITOFLUOROMETRA

Citometra de flujo.
CONTENIDO
8
Material anatomopatolgico Muestras
procedentes de individuos enfermos para el
diagnstico o investigacin etiolgica de la
enfermedad que padecen.

Histotecnologa Estudio de los
fundamentos tcnicos y secuencia
metodolgica para llevarse a cabo el anlisis
anatomopatolgico.
INTRODUCCIN
9
El estudios de los tejidos enfermos puede
realizarse a partir de 3 tipos de material
anatomopatolgicos:

Autopsias.
Biopsias.
Extensiones citolgicas.
INTRODUCCIN
10
Existen 2 modalidades:

Autopsia mdico-legal o forense.

Autopsia clnica.
AUTOPSIA CLNICA Y
MEDICO-FORENSE
11
AUTOPSIA MDICO-LEGAL

Investiga el origen de la muerte en los casos
en que existen implicaciones penales o
civiles referentes a la propia causa del
fallecimiento y lo que respecta a las
circunstancias del mismo.

La realiza el mdico forense por orden
judicial.
AUTOPSIA CLNICA Y
MEDICO-FORENSE
12
AUTOPSIA MDICO-LEGAL

Se la realiza por los siguientes motivos:
Las muertes que ocurren inmediatamente
al ingreso de un paciente en el hospital.
Los fallecidos con grandes heridas o por
muertes violentas.
Fallecimientos de causa desconocida o
sospechosa.
Los suicidios.
AUTOPSIA CLNICA Y
MEDICO-FORENSE
13
AUTOPSIA CLNICA

Pretende conocer la causa de la muerte sin
importar tanto las circunstancias en que
sobrevino.

Hay 3 grupos de necropsias clnicas:
Necropsia perinatal.- Estudia cadveres del
periodo perinatal (fetos o recin nacidos de
peso superior a 500 g. hasta los 7 primeros
das de vida extrauterina).
AUTOPSIA CLNICA Y
MEDICO-FORENSE
14
AUTOPSIA CLNICA
Necropsia peditrica.- Cadveres de
neonatos de ms de 7 das de vida y hasta los
15 aos.

Necropsia de adultos.- El resto de cadveres.
AUTOPSIA CLNICA Y
MEDICO-FORENSE
15
AUTOPSIA CLNICA: TCNICAS
Las variaciones en la tcnica radican en el
orden y la forma de diseccin.

Tcnica de Virchow.
Diseccin de rganos por separado
comenzando por la cavidad craneal, luego
cuello, cavidad torcica y abdomen.
AUTOPSIA CLNICA Y
MEDICO-FORENSE
16
AUTOPSIA CLNICA: TCNICAS
Tcnica de Ghon.
Consiste en extraer los rganos en 3
bloques cuello, trax, abdomen y
retropetitoneo, realizndose la diseccin
separada de cada bloque.

Tcnica de Letulle.
Extraccin de un solo bloque de todas las
vsceras para realizar la diseccin fuera del
cadver.
AUTOPSIA CLNICA Y
MEDICO-FORENSE
17
EJEMPLO DE HISTORIA CLINICA DE UN
PACIENTE QUE SE REALIZA LA AUTOPSIA
HISTORIA CLNICA
Paciente varn de 60 aos de edad, diagnstico de un linfoma cutneo,
tipo micosis fungoides, en 1986.
Las lesiones de la piel eran inicialmente eritematoso-descamativas,
trasnformndose rpidamente en nodulares ulceradas, generalizadas.
Fue tratado con PUVA y quimioterapia (6 ciclos de CHOP). La
enfermedad progres con afectacin de algunos grupos ganglionares. En
febrero de 1988, el paciente fue tratado con quimioterapia. (M-
BACOD/ICAVP) e irradicacin corporal con 32 rad.
AUTOPSIA CLNICA Y
MEDICO-FORENSE
18
EJEMPLO DE HISTORIA CLINICA DE UN
PACIENTE QUE SE REALIZA LA AUTOPSIA
HISTORIA CLNICA (continuacin)
En mayo, durante la administracin del tercer ciclo de quimioterapia, el
paciente presenta una insuficiencia renal aguda con aumento progresivo
de la creatinina y urea en sangre, con problemas en la eliminacin renal
del metotrexato. El paciente desarrollo uina mucositis universal y una
neumona en lbulos basales.
El da 20 de junio, el paciente tena fiebre y estaba estuporoso,
prcticamente no orinaba y presentaba vmitos sanguinolentos, melenas y
hematuria. Las cifras de transaminasa eran de 1.256 U/ml. El paciente
entr en coma y falleci.
AUTOPSIA CLNICA Y
MEDICO-FORENSE
19
DIAGNSTICO DEFINITIVO DE LA AUTOPSIA

Enfermedad fundamental.
- Micosis fungoide, diagnosticada en 1986.
- Situacin postratamiento con quimioterapia y radioterapia.

Alteraciones concomitantes.
- Lesiones residuales de micosis fungoide en ganglios linfticos.

Retroperitoneales.
- lceras necrotizantes en piel, posiblemente residuales de la
involucin de la micosis fungoide.
AUTOPSIA CLNICA Y
MEDICO-FORENSE
20
DIAGNSTICO DEFINITIVO DE LA AUTOPSIA

Retroperitoneales.
- Sepsis por Candida albicans (cultivo +):
- Endocarditis de vlvula tricspide.
- Congestin visceral generalizada.
- Necrosis heptica centrolobulillar.
- Candidiasis en vena cava superior con trombosis parcial
- Candidiasis en riones, tiroides, pulmn, arterias pulmonares.
- Coaglulacin intravascular diseminada (CID):
- Trombosis de capilares glomerulares.
- Hemorragias digestivas diseminadas.
- Hemorragias petequiales en superficies mucosas y serosas.
AUTOPSIA CLNICA Y
MEDICO-FORENSE
21
DIAGNSTICO DEFINITIVO DE LA AUTOPSIA

Retroperitoneales.
- Pancreatitis aguda.
- Microinfartos de miocardio.
- Bronconeumona en fase de carnificacin.
- Absceso renal.
- Degeneracin hidrpica de tbulos proximales renales.
- Pericardidits fibrinosa urmica.
- Infarto subcapsular de bazo.
- Derrame pleural bilateral (1.000 ml en cada lado).
- Necrosis parcial de la mdula sea.

AUTOPSIA CLNICA Y
MEDICO-FORENSE
22
DIAGNSTICO DEFINITIVO DE LA AUTOPSIA

Alteraciones independientes.
- Calcificaciones en ganglios traqueobronquiales.
- Bocio nodular.
- Infiltracin grasa de miocardio.
- Arterioesclerosis grado IIA.

Causa de la muerte.
- Shock sptico.
- CID.
- Insuficiencia respiratoria.
AUTOPSIA CLNICA Y
MEDICO-FORENSE
23
Existen 2 tipos fundamentales de biopsia:

Biopsias de diagnstico.

Piezas quirrgicas.

Biopsia Porcin de tejido obtenida de un
individuo vivo para su estudio
anatomopatolgico.
PATOLOGA QUIRRGICA
24
Se caracterizan por ser de pequeo tamao,
en ocasiones se trata de cilindros obtenidos
por puncin de rganos que no comprenen
la totalidad de una lesin.
Ej: Cilindros de puncin renal y heptica.

Piezas quirrgicas Son de mayor tamao
comprenden rganos enteros e incluyen
la totalidad de la lesin.
PATOLOGA QUIRRGICA
25
Cilindro de biopsia renal
PATOLOGA QUIRRGICA
26
Linfoma en el hilio de un bazo
PATOLOGA QUIRRGICA
27
MACROSCOPA DE BIOPSIAS
Sus objetivos son:

Descubrir el tipo de material remitido para
estudio.

Seleccionar las reas sobre las que se va a
realizar el estudio microscpico
muestreo o tallado del material.
PATOLOGA QUIRRGICA
28
Tuberculosis. Abundante caseum en la cabeza del epiddimo
PATOLOGA QUIRRGICA
29
MICROSCOPA DE BIOPSIAS
Existen 2 tipos de microscopios pticos o
fotnico:

Microscopio simple, estereoscpico o
lupa.

Microscopio compuesto o comn.
PATOLOGA QUIRRGICA
30
MICROSCOPA DE BIOPSIAS

Para que un tejido pueda ser observado al
microscopio se requiere 2 condiciones:

Que el tejido conserve su estructura una
vez separada del organismo de
procedencia.

Que pueda ser seccionada en finas
lminas translcidas.
PATOLOGA QUIRRGICA
31
MICROSCOPA DE BIOPSIAS
En el primer caso es necesario prevenir de
forma inmediata 2 fenmenos degradativos:

Autlisis Proceso por el cual despus de la
muerte se produce la autodigestin
enzimtica celular tras la salida del contenido
lisosomial al citoplasma por la rotura de la
membrana delimitante de estos orgnulos.
PATOLOGA QUIRRGICA
32
MICROSCOPA DE BIOPSIAS
Putrefaccin Efecto que produce la accin
de determinadas toxinas y enzimas
procedentes de microorganismos saprfitos
sobre los tejidos.
Fijacin tisular Consiste en interrumpir los
procesos degradativos que aparecen tras la
muerte celular, tratando de conservar la
arquitectura y composicin tisular lo ms
prxima posible a la normalidad.
PATOLOGA QUIRRGICA
33
MICROSCOPA DE BIOPSIAS
Agentes fijadores Se clasifican en:
Fijadores por mtodos fsicos: Enfriamiento
por congelacin del tejido como mtodos para
detener la autlisis y putrefaccin.
Agentes fijadores qumicos: Actan
insolubilizando las protenas tisulares, lo cual
bloquea la autlisis por inactivacin
enzimtica.
Fijador qumico Formaldehdo al 10 % en
solucin de 9 volmenes de agua en 1
volumen de formalina.
PATOLOGA QUIRRGICA
34
Linfoma difuso de clulas grandes. Fijado con B5
PATOLOGA QUIRRGICA
35
Linfoma difuso de clulas grandes. Fijado con formol
PATOLOGA QUIRRGICA
36
MICROSCOPA DE BIOPSIAS
Preparacin de las muestras:
Inclusin en un medio slido Confiere a los
tejidos una dureza que impide su
fragmentacin durante el corte.
Mantiene las relaciones arquitecturales entre
los distintos elementos.
Asegura la obtencin de cortes muy finas,
regulares y homogneas.
PATOLOGA QUIRRGICA
37
MICROSCOPA DE BIOPSIAS

Agente empleado parafina se encuentra
en estado lquido a 55 60 C y solidifica a
temperatura ambiente.
Las biopsias seas para diagnstico de
enfermedades metablicas se estudian
sobre tejido no decalcificado, incluido en
sustancias plsticas duras como el
metacrilato.
PATOLOGA QUIRRGICA
38
MICROSCOPA DE BIOPSIAS
Obtencin de secreciones tisulares
translcidas se realiza con un instrumento
de precisin micrtomo.

El corte del material incluido en parafina
con microtmo de rotacin o tipo Minot.

Obtencin de cortes sobre tejido congelado
con criostato.
PATOLOGA QUIRRGICA
39
Microtmo de rotacin o de tipo Minot
PATOLOGA QUIRRGICA
40
MICROSCOPA DE BIOPSIAS
Obtencin de secreciones para microscopa
electrnica con el ultramicrotomo.
Los tejidos luego de ser cortados deben ser
desparafinados en xileno y rehidratados
previamente a la tincin.
Criostato Instrumento que permite la
realizacin de cortes de 4 5 micras de
grosor en biopsias en fresco, previa
congelacin.
PATOLOGA QUIRRGICA
41
MICROSCOPA DE BIOPSIAS

Biopsia peroperatoria o intraoperatoria
Es la que enva el cirujano durante la
intervencin quirrgica con el fin de que
se realice o confirme un diagnstico del
que dependen la continuacin de la
intervencin.
PATOLOGA QUIRRGICA
42
Estudia las alteraciones morfolgicas de las
clulas desprendidos libremente de los
epitelios de revestimiento o extrados de
distintas zonas del cuerpo humano.

Hay 2 tipos de preparaciones
citopatolgicas:
Citopatologa exfoliativa.
Citopatologa por puncin aspiracin
con aguja fina (PAAF).
CITOPATOLOGA
43
Citopatologa Exfoliativa

Tiene por objetivo interpretar las clulas del
cuerpo humano desprendidas de la
epidermis, epitelios que revisten estructuras
orgnicas abiertas al exterior y el mesotelio
que tapiza las cavidades corporales cerradas
(pleura, peritoneo, articulaciones, espacio
raqudeo, etc).
CITOPATOLOGA
44
Las clulas pueden obtenerse:
Por exfoliacin forzada mediante frotamiento o
raspado con diversos instrumentos a nivel de
la epidermis y epitelios en continuacin con
ella.
Aprovechando los fluidos que vehiculan de
forma espontnea a los elementos
descamados (esputo, orina, etc).
Por instrumentos de exploracin o puncin
que extraen el componentes lquido con
clulas en suspensin procedente de zonas
orgnicas internas (tracto respiratorio, tubo
gastrointestinal, cavidades serosas, etc).
CITOPATOLOGA
45
Territorios orgnicos ms interpretados en
citopatologa exfoliativa:

Aparato genital femenino.
Vas urinarias.
Arbol respiratorio.
Prstata.
Aparato digestivo.
Piel.
Cavidades orgnicas (peritoneo, pleura,
pericardio, raquis y articulaciones).
CITOPATOLOGA
46
Citopatologa por puncin-aspiracin con
aguja fina (PAAF)

Tiene por objeto el estudio de clulas
separadas de los rganos en que se asientan
mediante extraccin por puncin con aguja
fina de 0,6 0,8 mm., seguida de aspiracin
forzada con una jeringa conectada a un
sistema de vaco o pistla que realiza la
succin.
CITOPATOLOGA
47
Territorios ms explorados:

Mama.
Pulmn.
Tiroides.
Tumores de tejidos blandos.
Hgado.
Prstata.
CITOPATOLOGA
48
La citopatologa como procedimiento
diagnstico permite:

Deteccin de tumores.
Lesiones preneoplsicas.
Diversos tipos de infecciones.
Deteccin precoz del cncer.
CITOPATOLOGA
49
Citopatologa ginecolgica teida con mtodo de Papanicolau
CITOPATOLOGA
50
Se distinguen cuatro grupos de colorantes:

Bsicos.

cidos.

Neutros.

Indiferentes.
MTODOS DE COLORACIN EN
ANATOMA PATOLGICA
51
Colorantes bsicos
Se utilizan para colorear estructuras cidas
contenidas en el interior de los ncleos
celulares en forma de cidos nuclicos.
Ej: Hematoxicilina.

Colorantes cidos
Tien estructuras protenicas bsicas
contenidas en los citoplasmas celulares o las
fibras del intersticio y membranas basales.
Ej.: Eosina, naranja G y fucsina.
MTODOS DE COLORACIN EN
ANATOMA PATOLGICA
52
Colorantes neutros
Forman un precipitado insoluble en agua y
muy estable en disolucin alcholica.
Ej.: Tincin de Giemsa.

Colorantes indiferentes
Colorean los tejidos por un mecanismo de
impregnacin fsica.
Ej.: Hematoxilina eosina.
MTODOS DE COLORACIN EN
ANATOMA PATOLGICA
53
Tincin de hematoxicilina-eosina de hgado
MTODOS DE COLORACIN EN
ANATOMA PATOLGICA
54
Consisten en un microscopio normal de luz
en el que se interpone una cua de cuarzo y
un cristal de Nicol entre la fuente de luz y el
ojo del observador.
Sustancias identificables:
Colgeno.
Slice
Queratina.
Asbesto.
Sustancias amiloides.
Cristales de urato.
MICROSCOPA DE LUZ
POLARIZADA
55
Amiloidosis de vesculas seminales teida con rojo Congo
MICROSCOPA DE LUZ
POLARIZADA
56
Cristales de oxalato en rion vistos en microscopio de luz polarizada
MICROSCOPA DE LUZ
POLARIZADA
57
Ciencia que combina histologa y
bioqumica y se utiliza para identificar
sustancias qumicas y determinar su
significacin en los tejidos y en las clulas.

Pueden observarse oxidorreductasas,
transferasas, diversas hidrolasas, liasas,
isomerasas y sintetasas.
HISTOQUMICA
58
La activacin enzimtica de un tejido
todava conserva vigencia en:

Biopsia de msculo esqueltico.

Identificacin de clulas del sistema
hematopoytico.

Realizacin de estudios
neurohistolgicos complejos.
HISTOQUMICA
59
Alfa-naftil-acetato esterasa en monocitos y sus precursores a nivel
de una extensin de mdula sea
HISTOQUMICA
60
Dos tipos de microscopios electrnicos
tiles en morfopatologa:

De transmisin para observar estructuras
subcelulares.

De barrido o de scanning informa de la
morfologa externa y composicin molecular
de las estrucutras analizadas.
MTODOS DE MICROSCOPA
ELECTRNICA
61
Microscopa electrnica de tumor de Warthin de la glndula salivar
MTODOS DE MICROSCOPA
ELECTRNICA
62
La microscopa electrnica sirve para:

El estudio de algunas enfermedades
crnicas de depsito.

Localizacin de depsitos inmunes en las
glomerulonefritis.

Determinacin de la histognesis de
algunos tumores.
MTODOS DE MICROSCOPA
ELECTRNICA
63
Imagen ultraestructural de un hepatocito
MTODOS DE MICROSCOPA
ELECTRNICA
64
Imagen tridimensional mediante microscopa electrnica de barrido
de una clula tumoral de enfermedad de Hodgkin en cultivo contnuo
MTODOS DE MICROSCOPA
ELECTRNICA
65
Todas aquellas tcnicas que sirven para
detectar antgenos celulares o tisulares,
basndose en reacciones antgeno
anticuerpo.
MTODOS
INMUNOHISTOQUMICOS
66
FLUORESCENCIA
Forma de luminiscencia que se produce a
partir de una fuente de energa no trmica.

La fluorescencia primaria o auto
fluorescencia.- Es la que presentan ciertas
sustancias como: la lmina elstica de las
arterias, colgena, lpidos, lipofuscina y
tetraciclinas.
MTODOS
INMUNOHISTOQUMICOS
67
Autofluorescencia amarilla de las fibras elsticas reduplicadas
MTODOS
INMUNOHISTOQUMICOS
68
FLUORESCENCIA
Fluorescencia secundaria.- Tincin
histoqumica con molculas fluorescentes
fluorocromos o uniendo fluorocromos a
anticuerpos dirigidos frente a antgenos
tisulares.

Tcnica de inmunofluorescencia.- Consiste
en poner de manifiesto antgenos en los
tejidos por medio de anticuerpos marcados
con fluorescena o ficoeritrina.
MTODOS
INMUNOHISTOQUMICOS
69
Inmunofluorescencia positiva que demuestra depsitos capilares en
agregados de Ig G en una glomerulonefritis membranoproliferativa
MTODOS
INMUNOHISTOQUMICOS
70
INMUNOHISTOQUMICA
Trata de unir qumicamente un anticuerpo a
una enzima que acta como trazador de
marcaje.
Los anticuerpos primarios indispensables
son:
Anticuerpos policlonales.- Inmunizando un
animal husped con una molcula especfica
purificada (inmungeno) en la que se
encuentra el antgeno frente al cual pretende
obtener anticuerpos.
MTODOS
INMUNOHISTOQUMICOS
71
Inmunotincin para cromogranina en un islote de Langerhans
pancretico mediante el mtodo de estreptavidina peroxidasa y
revelada con diaminobencidina
MTODOS
INMUNOHISTOQUMICOS
72
Inmunotincin de los melanocitos neoplsicos empleando el
anticuerpo especfico HBM45 y el mtodo de estreptavidina
fosfatasa alcalina revelada con la sal de diazonio Fast Red
MTODOS
INMUNOHISTOQUMICOS
73
INMUNOHISTOQUMICA
Anticuerpos monoclonales.- Estudia el
mecanismo de regulacin de los genes que
codifican las inmunoglobulinas.
Mieloma Tumor constituido por clulas
plasmticas.
Mielomas secretantes Los que son
capaces de producir inmunoglobulinas.
Hibridoma Capaces de producir
inmunoglobulinas que reconocen a los
antgenos empleados en la inmunizacin.
MTODOS
INMUNOHISTOQUMICOS
74
INMUNOHISTOQUMICA
El hibridoma tiene 2 propiedades
fundamentales:

Capacidad de crecimiento ilimitada, propia de
las clulas tumorales.

Capacidad de sntesis y secrecin de
inmunoglobulinas.
MTODOS
INMUNOHISTOQUMICOS
75
INMUNOHISTOQUMICA
Procedimiento de inmunotincin 3
reactivos inmunes diferentes:
Anticuerpo primario mono (de ratn) o
policlonal (de conejo) frente al antgeno
problema.
Anticuerpo puente o secundario, que unir el
anticuerpo primario al complejo PAP.
Complejo PAP, que contiene la enzima que
actuar como trazador de la reaccin inmune.
MTODOS
INMUNOHISTOQUMICOS
76
Esquema de la reaccin de inmunohistoqumica por el mtodo de la
peroxidasa antiperoxidasa y avidina - biotina
MTODOS
INMUNOHISTOQUMICOS
77
La citometra puede ser separada en:

Citometra esttica o microscopa digital.- Su
objeto es el anlisis de las imgenes.

Microfluorimetra de flujo (citometra de
flujo).- La imagen obtenida es secundaria y
su procesamiento se caracteriza por su
rapidez.
CITOMETRA Y
CITOFLUOROMETRA
78
Equipamiento bsico de un analizador digital de imgenes
CITOMETRA Y
CITOFLUOROMETRA
79
La citometra esttica analiza las estructuras
en 4 planos:

Morfometra.- Descipcin cuantitativa de las
caractersticas geomtricas de las
estructuras existentes.

Planimetra.- Medida de las caractersticas
geomtricas de estructuras en 2
dimensiones.
CITOMETRA Y
CITOFLUOROMETRA
80
Estereologa.- Conjunto de mtodos
matemticos que calculan los parmetros
tridimensionales de un cuerpo a partir de la
extrapolacin de las medidas obtenidas en 1 o 2
dimensiones.

Densitometra.- Analiza la cantidad de materia
existente en una estructura a partir de la
informacin proporcionada por la mayor o
menor concentracin de un colorante que
deforma estequiomtrica se deposita sobre la
misma.
CITOMETRA Y
CITOFLUOROMETRA
81
La segmentacin de una imagen hace
referencia a la seleccin del componente de
la misma que va a ser objeto de anlisis.

Consiste en aplicar a la imagen un umbral
de discriminacin por el cual todos los
pxeles situados dentro de dicho umbral son
considerados como parte del objeto y el
resto son tratados como ruido.
CITOMETRA Y
CITOFLUOROMETRA
82
Imagen digitalizada en blanco y negro de los ncleos de un
glomrulo renal teidos con hematoxilina de Mayer
CITOMETRA Y
CITOFLUOROMETRA
83
Imagen umbralizada, obtenida de la anterior y a partir de la cual es
posible realizar recuento automtico de las partculas seleccionadas
CITOMETRA Y
CITOFLUOROMETRA
84
CITOMETRA DE FLUJ O
Consiste en el anlisis rpido de clulas y
por extensin, de partculas biolgicas
individualizadas en suspencin dentro de un
sistema de flujo laminar sobre el que incide
un haz de luz que proporciona informacin
acerca de sus caractersticas fsico
qumicas.
CITOMETRA Y
CITOFLUOROMETRA
85
CITOMETRA DE FLUJ O
Citometro de flujo consta de:

Sistema de inyeccin y manejo de la muestra
(cmara de flujo).

Detector fsico y ptico de los parmetros
citolgicos a medir.

Sistema digitalizado para el proceso de los
datos.
CITOMETRA Y
CITOFLUOROMETRA
86
Esquema de canal de flujo en donde circulan clulas en citmetro de flujo
CITOMETRA Y
CITOFLUOROMETRA
87
CITOMETRA DE FLUJ O
Tincin con:

Fluorocromos:
Capaces de unirse a otras sustancias para
hacerlas fluorescentes.
Capaces de unirse directamente a
componentes celulares.
CITOMETRA Y
CITOFLUOROMETRA
88
CITOMETRA DE FLUJ O
Fluorocromos que se unen directamente a
estructuras celulares:

Fluorocromos para cidos nuclicos.
Fluorocromos para medir el potencial de
membrana como la rodamina.
Fluorocromos sensibles al calcio como el
flo-3.
CITOMETRA Y
CITOFLUOROMETRA
89
CITOMETRA DE FLUJ O
Las aplicaciones de la citometra de flujo en
patologa son:

1. Anlisis fenotpico de clulas sanguneas para la
determinacin del origen inmunolgico y
fenotipo de las leucemias y linfomas.

2. Identificacin de antgenos intracelulares entre
los que se encuentran antgenos virales,
marcadores tumorales.
CITOMETRA Y
CITOFLUOROMETRA
90
CITOMETRA DE FLUJ O
3. Cuantificacin de DNA y determinacin del ciclo
celular, sobre todo aplicada al diagnstico y
pronstico de displasias y tumores.

Citometra de flujo Permite valorar el
contenido total de DNA de una poblacin celular
y a partir del mismo conocer su ploida.

Ploida de poblacin celular Proporcin entre
el contenido de DNA de una poblacin tumoral y
el de una poblacin celular normal.
CITOMETRA Y
CITOFLUOROMETRA
91
Representacin grfica del ciclo celular mediante citometra de flujo.
R1 = fase G0-G1; R2 = fase se sntesis; R3 =fase G2-mitosis
CITOMETRA Y
CITOFLUOROMETRA
92
CITOMETRA DE FLUJ O
4. Determinacin de la viabilidad y del grado de
activacin de clulas en cultivo.
5. Anlisis de reticulocitos circulantes en sangre.
6. Deteccin de autoanticuerpos en sangre.
7. Cuantificacin del potencial de membrana.
8. Medida de ca
++
intracelular.
9. Determinacin del pH intracelular.
CITOMETRA Y
CITOFLUOROMETRA