Obtencin de Alfa Amilasa

Eder Durango Ballesteros

Marco terico y estado del arte:

Antecedentes

Mundialmente, la produccin de enzimas est desarrollndose aun ms, bajo el
principio de optimizar procesos y convertirlos en bioprocesos. La aplicacin de
esta industria gira en torno a pases industrializados que tienen la capacidad de
investigar y producir a gran escala estas protenas, lo cual margina a pases
menos desarrollados a causa de carencia de recursos, infraestructura y desarrollo
en el campo biotecnolgico. Sin embargo, esta afirmacin no ha sido un
impedimento para que en diversos lugares del mundo se investigue en el rea de
la enzimologa y el impacto que estas ocasionan en los procesos y reacciones
qumicas.
Enzimas amilasas son las mas estudiantes en este campo debido a su influencia
directa en la degradacin del almidn, uno de los productos alimentarios mas
explotados a nivel mundial.

3.1 Enzima amilasa: Accin y clasificacin

Las amilasas son enzimas las cuales hidrolizan molculas de almidn dando como
productos dextrinas y polmeros compuestos progresivamente por unidades de
glucosa
1
Esta familia de enzimas hidrolticas esta compuesta por a protenas
catalticas: alfa-amilasa, beta-amilasa; glucoamilasa; isoamilasa. Se encuentran
ampliamente distribuidas en tejidos vegetales, donde juegan un rol muy
importante en la degradacin del almidn en la germinacin de las semillas; en

1
ASGHER M.; JAVAID M.; RAHMAN S.U; LEGGE R.L.; A thermostable a-amylase from a moderately
thermophilic Bacillus subtilis strain for starch processing. 29 de marzo de 2006. Journal of Food Enginnering. P
950

tejidos animales, cumpliendo una misin digestiva; y en diversas especies de
microorganismos como hongos y bacterias
2
.

Como bien es conocido las cadenas de almidn estn compuestas por dos
grandes sub-cadenas, amilosa y amilopectina. La alfa-amilasa se caracteriza por
atacar los enlaces 1,4-alfa-glicosdicos en el centro de la cadena de los
polisacridos, por lo que se la conoce como endoamilasa, produciendo glucosa,
maltosa y oligosacridos.

La enzima alfa-amilasa en su accionar degrada la amilosa en maltosa y
pequeos compuestos de glucosa. Sin embargo, esta enzima solo es capaz de
degradar parcialmente la amilopectina y el glucgeno debido a que no es capaz de
desdoblar los enlaces glicosidicos1-6 encontrados en los puntos de ramificacin
de la cadena del polisacrido. Por otro lado, La beta-amilasa, presente en plantas
y bacterias, tambin cumple la funcin de degradar los enlaces 1,4-a-glucosdicos
pero comienza su accin por el extremo libre no reductor del almidn, liberando
maltosa al igual que la enzima alfa-amilasa. La hidrlisis se detiene en los puntos
de ramificacin de la amilopectina y el residuo se conoce como dextrina lmite. La
pululanasa o isoamilasa, tambin perteneciente a la esta familia, hidroliza los
enlaces 1,6-alfa-glicosdicos quitando las ramas de la amilopectina o las dextrinas.
Si existe un acompaamiento general del complejo de las amilasas se puede
lograr efectiva una degradacin total del almidn.
3


En cuanto a la nomenclatura de las enzimas de la familia amilasa, mundialmente
se reconoce a la comisin enzimologica (E.C.) quien es el encargado de identificar
a todas y cada una de las enzimas existentes. Este instituto reconoce la enzima
alfa-Amilasa como E.C. 3.2.1.1. Su nombre sistemtico es alfa-1,4-glucan-4-

2
TRIPATHI Pallavi; LEGGIO, Leila; MANSFELD, Johanna; ULBRICH-HOFMANN, Renate; Kayastha, Arvind.
apha- amylase of mung bean (vigna radiata) correlation of biochemical properties and terciary structureby
homology modelling. 23 de mayo de 2007. Phytochemistry. p. 1623.
3
CARRILLO Leonor. Microbiologa Agrcola. 2003.Universidad Nacional de Salta. ISBN 987-9381-16-5
glucanohidrolasa. Otros nombres comunes en el comercio y el mbito cientfico
son glucogenasa y endoamilasa. Estas se caracterizan en llevar a cabo la reaccin
de endohidrlisis que se sita de los enlaces 1,4-alfa-D-glucosidicos en
polisacridos que contienen 3 o ms enlaces 1,4-alfa-D-glucosidicos. Los grupos
reducidos son liberados en una configuracin alfa. Este termino alfa, esta
relacionado con la configuracin anomrica inicial de los grupos de azucares
liberados
4
.

La -amilasa bacteriana (EC 3.2.1.1). La -amilasa hidroliza el enlace glucosdicos
interno dando lugar a productos de bajo peso molecular, solubles y menos
viscosos, cuya ruptura est limitada por la presencia de los enlaces glucosdicos
a-1-6 en los puntos de ramificacin de la molcula del almidn nativo
(amilopectina). Los productos de hidrlisis tienen configuracin a en la glucosa del
extremo reductor. Se piensa que la enzima acta por la accin combinada de los
grupos carboxilo e histidina del centro activo. Las a-amilasas obtenidas de Bacillus
subtilis var amyioliqtedaciens tienen un ion calcio fuertemente ligado por
molcula, que es necesario para la actividad de! enzima y que lo estabiliza en gran
medida frente a! calentamiento. Se utiliza como enzima soluble en tratamientos de
dos horas a 85 C y pH 5,5-7 como una alternativa a la utilizacin de cido
clorhdrico que produce excesivos compuestos coloreados y la formacin de
productos de reversin. Debido a que los almidones de patata y de cereales
cerosos no pueden tratarse por gelatinizacin, se les somete a un proceso en dos
etapas, en el que se aade una segunda dosis de enzima y se contina et
tratamiento hasta lograr el contenido deseado de glucosa
5
.

La enzima Beta-amilasa es reconocida en la comisin enzimolgica como E.C.
3.2.1.2., su nombre sistemtico corresponde al de 1,4-alfa-D-glucan

4
IUBMB, Enzyme Nomenclature. [en lnea]. <http://www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/EC3/2/1/2.html>.
[consultado el 10 de febrero de 2008]

5
WISEMAN, Alan. Manual de biotecnologa de las enzimas. Editorial Acribia, Zaragoza - Espaa. 1985. p.319

maltohidrolasa. Su funcin es actuar en la reaccin de hidrlisis de los enlaces
alfa-1,4-glucosidicos del almidn con inversin en la configuracin del carbono 1
pasndolo de la configuracin alfa a la beta; as como de remover las unidades de
maltosa continuas presentes en los terminales no-reductores de la cadena
polisacrida. Los grupos sulfihidrilos son esenciales para la actividad, por lo que la
enzima se inactiva por oxidacin, por los metales pesados y sus sales.
6
. Su
producto es beta-maltosa.

Beta-amilasa ha sido descrita como una protena abundante la cual se puede
encontrar en grandes cantidades tanto en tejidos de almacenamiento de almidn y
rganos de plantas
7
. Muchos Cereales contienen tambin la enzima beta-amilasa
y alfa-amilasa aunque esta ultima en concentraciones menores, tan solo ocupa
aproximadamente 30% de contenido total de protenas sintetizadas durante la
germinacin. Estas dos amilasas pueden ser distinguidas una de otra, mediante el
punto de inactivacin que presentan a un pH determinado. La enzima alfa-amilasa
es inactivada a un pH en el rango de 4.8 - 5.0. Mientras que a este mismo rango la
beta-amilasa es estable. La enzima E.C. 3.2.1.2., es inactivada en un pH alrededor
de 6.0-7.0, y en caso reciproco las alfa-amilasa son estables bajo estas
condiciones
8
.

Otra enzima perteneciente a esta peculiar familia es la Glucoamilasa tambin
reconocida como amiloglucosidasa. En la nomenclatura internacional esta
identificada como E.C.3.2.1.3., y su nombre sistemtico es 1,4-alfa-D-glucano
glucohidrolasa. Su funcin es actuar en la reaccin de hidrlisis en cadenas de

6
CARRERA, Jorge; produccin y aplicacin de las enzimas industriales. 28 de febrero de 2003. Revista de
biotecnologa en el sector agropecuario y agroindustrial. p 11.

7 OLIVEIRA Joao R; VIEIRA Adair; ZACZUK B. Priscila; CORDENUNSI Beatriz; MAINARDI Janana A.;
PURGATTO Eduardo; LAJOLO Franco. Beta-amylase expression and starch degradation during banana
ripening. 10 de noviembre de 2005. Posthaverst Biology and Technology. p 41

8
OLUSANJO A. Isaac; NGACHI A. Edith; IHUOMA O. Florence. Comparative studies on a-amylases from
malted maize (Zea mays),millet (Eleusine coracana) and Sorghum (Sorghum. 5 de mayo de 2006.
Carbohyfrates Polymers. P 72.

polisacridos operando en los enlaces 1,4-alfa-D-glucosa que estn de manera
residual despus de haberse expuesto la cadena a la accin de alfa y beta
amilasa
9
. El principal producto final de la accin de la glucoamilasa sobre el
almidn es glucosa, lo que la diferencia claramente de la alfa y beta amilasas. La
enzima tambin produce pequeas cantidades de oligosacridos. La sacarificacin
del almidn puede alcanzar hasta 96% de dextrosa. La accin de la enzima causa
inversin de la configuracin, produciendo beta-glucosa. Las glucoamilasas son
inactivas sobre almidn nativo. Su actividad es mxima entre pH 4 y 5.5, y
temperatura alrededor de 55-65 0C. La rata de reaccin cae rpidamente a
medida que disminuye el tamao de la molcula de sustrato, siendo mxima sobre
almidones previamente sometidos a licuefaccin
10
.

Amiloglucosidasa (EC 3.2.1.3). Las amiloglucosidasas (glucoamilasa, a-amilasa o
a-1-4 glucohidrolasa) catalizan la etapa de hidrlisis de los enlaces -1-4 del
almidn y los oligosacridos, liberando molculas de -glucosa a partir del
extremo no reductor de la cadena. Los enlaces ramificados -1-4 tambin se
hidrolizan, pero mucho mas lentamente, formndose un jarabe de glucosa, un
contenido de glucosa del 95 al 97 % en peso y de un 30 a un 5 % de oligosac-
ridos grandes. El enzima es capaz de hidrolizar tambin, aunque lentamente, los
enlaces a-1-3. La glucosa formada se utiliza como jarabe o se cristaliza para
obtener glucosa pura slida. La amiloglucosidasa se usa a gran escala en la in-
dustria de procesado del almidn en tanques discontinuos a 55-60 C y pH de 4,5
y con perodos de incubacin de 48-92 horas, para transformar las dextrinas
formadas por la a-amilasa en glucosa. El calcio la estabiliza frente a la desna-
turalizacin por el calor o los lcalis, y la hidrlisis puede llevarse a cabo fcil-

9
IUBMB, Enzyme Nomenclature. [en lnea]. <http://www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/EC3/2/1/2.html>.
[consultado el 10 de febrero de 2008]

10
CARRERA, Jorge; produccin y aplicacin de las enzimas industriales. 28 de febrero de 2003. Revista de
biotecnologa en el sector agropecuario y agroindustrial. p 11

mente aadiendo el enzima soluble al almidn una vez que la a-amilasa ha rea-
lizado del 15 al 30 % de la hidrlisis posible
11
.

Una ventaja particular en el uso de enzimas en lugar de HCl para la hidrlisis del
almidn es que puede utilizarse una materia prima menos pura, ya que las
protenas contaminantes no se hidrolizan hasta aminocidos, que podran dar
lugar a reacciones de pardeamiento. Despus de la sacarificacin con
amiloglucosidasa, el jarabe resultante se filtra para eliminar protenas y grasas y
se purifica con columnas de carbn activo seguido de otras con resinas de
intercambio inico.

La glucoamilasa es un enzima extracelular producido por diversas especies de
Aspergillus o Rhizopus. La amilogluosidasa de Rhizopus puede separarse en
isoenzimas con propiedades semejantes a los isoenzimas de A. niger. El enzima
es una glicoprotena que contiene maosa, glucosa, galactosa y cido urnico, y
tiene un pH ptimo de 4,3-4,5. Una de sus desventajas es su relativa falta de
actividad frente a los enlaces -1-6, lo que hace necesario el uso de grandes dosis
o de grandes perodos de incubacin para lograr el grado de hidrlisis deseado.
Por tanto, se ha propuesto el uso combinado de amiloglucosidasa y la enzima
desramificante pululanasa, logrando aumentos del contenido de dextrosa del 1 al 2
%, a pesar de llevar a cabo la reaccin a pH 5,5-6,0, en el que la amiloglucosidasa
es menos activa
12
.

El resto de la cadena del polisacrido es atacado por la enzima isoamilasa o
pululasa, reconocida oficialmente como E.C. 3.2.1.68. Participa en la reaccin de
hidrlisis de polisacridos especficamente en los enlaces 1,6-alfa-D-glucosidicos;
su nombre sistemtico es glucgeno alfa-1,6-glucoanohidrolasa. Su actuar es

11WISEMAN, Alan. Manual de biotecnologa de las enzimas. Editorial Acribia, Zaragoza - Espaa. 1985.
p.320
12
WISEMAN, Alan. Manual de biotecnologa de las enzimas. Editorial Acribia, Zaragoza - Espaa. 1985.
p.320
directamente sobre la amilopectina, glucgeno y dextrinas, pero es incapaz de
hidrolizar el pululano y las alfa-dextrinas limite. Su misin en participar en la
reaccin de hidrlisis de ramificacin que contengan enlaces 1,6-alfa-glucosidicos
por lo que tambin se le conoce como enzimas desramificadora. Su nombre
sistemtico es glucgeno 1,6-alfa-D-glucanohidrolasa
13
. El nico producto de
reaccin es maltosa. La temperatura ptima est alrededor de 45 0C y el pH entre
4 y 5

3.2 Produccin y sustrato

Fuentes de enzimas. Las clulas microbianas son la fuente usual de enzimas
para uso industrial excepto para algunos enzimas provenientes de animales y
plantas utilizados tradicionalmente como las proteasas de la papana, ficina y
bromelaina, que se utilizan para el ablandamiento de la carne, y la quimosina,
empleada en la manufactura del queso. La inmensa mayora de los enzimas
microbianos se producen a partir de aproximadamente 25 organismos, incluyendo
una docena de hongos, pero se ha calculado que slo aproximadamente el 2 ^o
de los microorganismos existentes en el mundo han sido estudiados como fuente
de enzimas
14
.

Tradicionalmente se han obtenido pocas enzimas de origen animal (lipasa
pancretica y tripsina) debido a que stas pueden ser reemplazadas por otras
similares derivadas de microorganismos. Sin embargo, los sustitutos microbianos,
aunque catalticamente eficaces, presentan sutiles diferencias en sus propiedades
que pueden ser cruciales en el proceso de su aplicacin. Los recientes avances en
este campo han permitido la adaptacin de las tcnicas del ADN recombinante
para posibilitar que ciertos genes de mamferos sean clonados en las bacterias o

13
IUBMB, Enzyme Nomenclature. [en lnea]. <http://www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/EC3/2/1/2.html>.
[consultado el 10 de febrero de 2008]

14
WISEMAN, Alan. Manual de biotecnologa de las enzimas. Editorial Acribia, Zaragoza - Espaa. 1985.
p.281
levaduras idneas, facilitando as la produccin de enzimas originariamente de
animales por medio de la tecnologa convencional de la fermentacin.

Las plantas tambin han sido fuente tradicional de un cierto nmero de enzimas. A
partir del ltex producido por la papaya, higuera, pia y, en menor grado, otras
especies se ha aislado sobre todo, cistein-proteinasas. Estas plantas tienen la
ventaja de que su ltex es fcil de obtener, principalmente a partir de los frutos y
utilizando mano de obra no cualificada.

Las enzimas microbianas son ms tiles que los derivados de las plantas o
animales por la gran variedad de actividades catalticas de que disponen, y porque
usualmente pueden obtenerse en cantidades abundantes, baratos, de forma
regular y de calidad uniforme, ocasionalmente mediante cultivo de superficie o
usualmente mediante tcnicas de fermentacin aerbica de cultivos profundos,
tcnica muy utilizada en la produccin de antibiticos. Adems los enzimas
microbianos son en general ms estables que los homlogos de las plantas o
animales, y su proceso de produccin es ms fcil y seguro que el seguido con
plantas y animales. La manipulacin gentica y ambiental para incrementar el
rendimiento, o la actividad enzimtica de las clulas haciendo a ste de inters
constitutivo
15
. Estas tcnicas son especialmente importantes en el caso de la
actividad o estabilidad del enzima que sea la etapa limitante en conversiones
multienzimas, cuando haya que eliminar los controles de regulacin normales en
la sntesis de la enzima deseada, cuando se desea reducir o eliminar la inhibicin
por el substrato o el producto, mecanismo este ltimo para prevenir la
sobreproduccin del producto de una va metablica, o para obtener algunas otras
caractersticas favorables
16
.


15
GACESA, Peter; HUBBLE, John; Tecnologa de las enzimas. Editorial acribia, Zaragoza Espaa. 1990. p.16.
16
WISEMAN, Alan; Manual de biotecnologa de las enzimas. Editorial acribia, Zaragoza Espaa. p.281
Generalmente el objetivo es maximizar la velocidad de formacin del enzima y la
concentracin de enzima en las clulas o en el caldo de fermentacin para
minimizar los costos de produccin de la enzima. El ideal es combinar de forma
ptima la cepa seleccionada de microorganismo, las condiciones de recuperacin
y fermentacin y el equipo ms apropiado en buenas condiciones de trabajo.
Usualmente, las clulas crecen sumergidas, en fermentadores bien agitados y
aireados, aunque un nmero significativo de enzimas importantes industrialmente
se obtienen en fermentadores slidos o semislidos, entre los que se incluyen la
lactasa, la a-amilasa y una proteasa de A. oryzae, la pectinasa, una proteasa de A.
niger, la a-amilasa de Rhizopus, y el cuajo de Mucor pusius
17
.

Las plantas superiores no son generalmente fuentes satisfactorias de enzimas
para usos clnicos e industriales, y acumulan productos de desecho en las
vacuolas. Estos compuestos son frecuentemente inhibidores enzimticos y/o to-
xinas, particularmente cuando se oxidan al contacto con el aire. Estos desechos,
muchos de los cuales son fenoles, se liberan al romperse la clula, contaminando
y frecuentemente inactivando cualquier enzima extrado.

Las hidrolasas son ampliamente utilizadas en los procesos industriales. Dentro de
ellas podemos encontrar las enzimas alfa-amilasa, beta-amilasa como las ms
comunes para las sntesis del almidn produciendo productos de bajo peso
molcula. Estas enzimas son producidas, especialmente alfa-amilasa, por gran
diversidad de microorganismos, Producen amilasas muchos hongos del suelo as
como bacterias de los gneros Bacillus, Pseudomonas, Streptomyces entre otras.

El principal genero que esta siendo tratado para la produccin de dicha enzima es
el bacillus. Las especies registradas como productoras de enzima en este genero
son el Bacillus licheniformis, Bacillus stearothermophilus, y Bacillus

17
WISEMAN, John. Manual de biotecnologia de las enzimas. Editorial acribia, Zaragoza Espaa. 1985. p.282

amyloliquefacien quienes son aplicados en procesos industriales para alimentos,
textiles, fermentacin, papelera entre otros
18
.

Tambin otros gneros han sido reportados en proyectos de investigacin. La
especie Aspergillus produce una amplia variedad de enzimas extracelulares entre
las cuales adems de estar las amilasas se puede identificar las proteasas.
Aspergillus rizhopus esta identificado como un gran productor de enzimas
19
.

La induccin de amilasa tipo alfa requiere un sustrato que contenga enlaces alfa-
1,4 glucosdicos, adems de maltosa, dextrina y almidn. La Glucosa, as como es
el producto final de la hidrolisis, tiene la posibilidad de reprimir la sntesis de
enzima como un mecanismo conocido como represin catabolitica. Sin embargo,
se ha encontrado que algunos microorganismos en distintos sustratos que tienen
como fuente de carbono a los carbohidratos no inducen la produccin de
amilasas
20
. Este hecho contrasta con los registrados en artculos de investigacin
y compaas dedicadas a la produccin de enzimas donde la fuente de produccin
de las protenas son microorganismos.

La produccin industrial ha desarrollado tcnicas de aprovechamiento de recursos
o residuos de produccin de diversas industrias con el objeto de adquirir enzimas
utilizando sustratos de bajo costo, as como los desechos agrcolas. En aos
recientes, se ha presentado un incremento en el esfuerzo y la aplicacin eficiente
del bagazo de caa de azcar como medio de produccin. Este es un subproducto
agroindustrial de extensa cadenas celulsicas. Esta es una importante fuente de

18
ZOE K, Maria. Coproduction of Alfa- amylase and beta-galatosidase by bacillus subtitulis in complex organic
substrates.20 de diciembre de 2005. Bioresource Technology..p 150.

19
SALAS H, Mabel; RODRIGUEZ R, Marilu; PEREZ G., Manuel; PEREZ R, Renato. Amylase production by
Aspergillus niger in submerged cultivation on two wastes from food industries. 05 de marzo de 2005. Journal of
Food Engineering. p 94.

20
NAHAS Ely, WALDEMARIN Mirela M.; Control of amylase production and growth characteristics of
Aspergillus ochraceus . revista latinoamericana de microbiologia. Vol #1. Enero de 2002. p.5

carbono que ha sido empleada en los ltimos aos para la produccin de enzimas
y a su ves la fermentacin de azucares para la elaboracin de etanol. Se ha
identificado que el microorganismo optimo para reproducirse en este medio y
sintetizar alfa-amilasa es el Bacillus subtilis
21
.

Los medios de cultivo han facilitado para los microorganismos el desarrollo de
enzimas con propiedades fsico-qumicas muy deseables. La produccin de alfa-
amilasa puede darse en medio sumergido o en estado solido o por procedimientos
de fermentacin. La concentracin de metabolitos para el crecimiento de los
agentes microbiales es importante. Influye directamente la composicin del medio
as como las fuentes de carbono, de nitrgeno y el contenido de sales
inorgnicas
22
.

En cuanto a trminos de aplicabilidad industrial, es necesario estudiar la
produccin de enzimas y analizar el factor de termoestabilidad, ya que se ha
demostrado que la temperatura esta ligada directamente a la velocidad de
reaccin de la enzima, menor viscosidad en el sustrato y disminucin de la
contaminacin microbiana. Los microorganismos apropiados para la produccin de
enzimas deben tener ciertas propiedades como rapidez de crecimiento,
adaptacin a nutrientes relativamente baratos y sin necesidad de inductores.
Adems, se debe obtener un alto rendimiento de enzima, de forma que sea fcil
aislarlo, purificarlo y concentrarlo sin que se produzca la formacin concomitante
de metabolitos txicos o inmunognicos
23
.


21
RAJAGOPALAN Gobinath, KRISHNAN Chandraraj; a-Amylase production from catabolite derepressed
Bacillus subtilis KCC103 utilizing sugarcane bagasse hydrolysate 01 de junio de 2007. Bioresource
Techonology. p.2

22
DJEKRIF-DAKHMOUCHE S.; GHERIBI-AOULMI Z; MERAIHI Z. BENNAMOUN L..Application of a
statistical design to the optimization of culture medium for a-amylase production by Aspergillus niger ATCC
16404 grown on orange waste power. 11 de marzo de 2005. Journal of Food Engineering. p 191

23
WISEMAN, Alan; Manual de biotecnologa de las enzimas. Editorial Acribia S.A. Zaragoza- Espaa. 1985.
P.271
Tambin puede ser una estrategia til la de seleccionar cepas que hiperproduzcan
enzimas a partir de organismos genticamente modificados OMG que no tengan
necesidad de inductores debido a que sus centros represores estn inactivos, a
que tienen una baja represin por los catabolitos, a que sufren retroinhibicin o a
que tienen enzimas relativamente resistentes a la inhibicin por el producto final.
De hecho, a pesar de los enormes avances obtenidos recientemente en el campo
de la ingeniera gentica, las tcnicas clsicas de seleccin de enzimas son
todava muy productivas, particularmente cuando se estudian ambientes nuevos
y/o exticos, para buscar clulas microbianas que desarrollen enzimas con
propiedades exepcionales. Entre ellos destacan los enzimas clorantes obtenidos a
partir de microorganismos marinos, y un enzima que produce un nuevo azcar, la
isomatulosa, de forma muy productiva a partir de una bacteria patgena del
ruibarbo. Muy recientemente se han hecho descubrimientos ms excepcionales si
cabe, por ejemplo, los microorganismos que crecen a unos 250 C en fuentes
volcnicas en aguas marinas profundas que poseen enzimas extremadamente
estables al calor, o un microorganismo del intestino de un gusano que perfora la
madera, que es capaz de degradar la celulosa y de fijar el nitrgeno
24
.

En resumen, la mayora de los enzimas empleados comnmente en la industria
son de origen microbiano y se producen por fermentacin sumergida aerobia
convencional, que permite un mayor control de las condiciones de crecimiento que
la fermentacin en estado slido. Se sabe mucho acerca de la seleccin de cepas
de organismos y condiciones de cultivo, aunque menos sobre la regulacin de la
sntesis, degradacin y secrecin de la enzima por el organismo productor. Estas
enzimas son con frecuencia extracelulares, lo que facilita su aislamiento y
purificacin.

24
WISEMAN, Alan; Manual de biotecnologa de las enzimas. Editorial Acribia S.A. Zaragoza- Espaa. 1985.
P.272