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Manual de la OIE sobre animales terrestres 2008 1

C A P T U L O 2 . 8 . 2 .
RI NI TI S ATRFI CA PORCI NA
RESUMEN
Definicin de la enfermedad: La rinitis atrfica es una enfermedad infecciosa porcina que se
caracteriza por la secrecin nasal serosa o mucopurulenta, el acortamiento o deformacin de la
jeta, la atrofia de los cornetes (concha nasal) y la reduccin de la productividad. Dependiendo de
diversos factores, incluida la inmunidad de la piara, la enfermedad puede aparecer de forma
enzotica o ms espordicamente. La forma progresiva de la misma, que es ms grave, est
causada por la infeccin con cepas toxignicas de Pasteurella multocida sola, o en combinacin
con Bordetella bronchiseptica. Las infecciones por B. bronchiseptica sola pueden causar una forma
de la enfermedad, que vara de leve a moderada, con una atrofia no progresiva de los cornetes. La
atrofia de los cornetes puede ser solo evidente al sacrificar el animal, o en el animal vivo mediante
radiografa o tomografa. Factores medioambientales y de manejo pueden contribuir a la gravedad
y a la incidencia de esta enfermedad. Una gran proporcin de las piaras porcinas, aparentemente
normales, pueden estar infectados por B. bronchiseptica, o por P. multocida no toxignica, y
presentan un ligero grado de prevalencia de la atrofia de los cornetes.
Identificacin de los agentes: El diagnstico de la rinitis atrfica depende de las observaciones
clnicas y post mrtem de cerdos afectados, junto con el aislamiento y la caracterizacin de
P. multocida y B. bronchiseptica. Con frecuencia, el aislamiento de ambos microorganismos es
complicado, debido al crecimiento ms abundante de otros. Los ndices de aislamiento han
mejorado debido a la conservacin de los hisopos tonsilares y nasales a 48C en un medio de
transporte no nutritivo, y a la utilizacin de un medio de cultivo selectivo.
Pasteurella multocida y B. bronchiseptica se pueden identificar mediante las pruebas bioqumicas
tradicionales. Los aislamientos de Pasteurella multocida pueden caracterizarse posteriormente por
sus antgenos capsulares y somticos. El tipo capsular D es el ms frecuente en muchas partes
del mundo, pero en algunas regiones predomina el tipo A. Los antgenos capsulares pueden
distinguirse serolgicamente mediante la hemoaglutinacin indirecta o la inmunofluorescencia, y
qumicamente por la precipitacin con acriflavina, o por la sensibilidad a la hialuronidasa. Los tipos
de antgeno somtico se pueden diferenciar mediante una prueba de precipitacin por difusin en
gel, y el tipo 3 se encuentra con mayor frecuencia en los cerdos. La toxigenicidad de los
aislamientos de P. multocida puede demostrarse mediante el ensayo de la citotoxicidad en cultivos
celulares. Para diferenciar los aislamientos toxignicos de los que no lo son, en algunas partes del
mundo se utiliza actualmente un enzimoinmunoensayo (ELISA) disponible comercialmente.
Adems, es apropiado para detectar la produccin de toxina a partir de placas de cultivos
primarios, sin necesidad del aislamiento e identificacin previos de las colonias individuales.
Recientemente, el desarrollo de sondas de ADN y de las tcnicas de reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR) ha proporcionado la deteccin rpida, sensible y muy especfica de
B. bronchiseptica y de P. multocida toxignica y no toxignica para aquellos laboratorios con
capacidad para realizarlos. Tambin se ha descrito una PCR multiplex para la tipificacin capsular
de P. multocida.
Pruebas serolgicas: La deteccin de anticuerpos contra P. multocida y B. bronchiseptica tiene
escaso valor, ya que las cepas de P. multocida no toxignicas comparten antgenos que presentan
reaccin una cruzada con las cepas toxignicas, y B. bronchiseptica puede aislarse en muchas
piaras porcinas. Se dispone de una prueba comercial basada en la deteccin de anticuerpos contra
la toxina de P. multocida, pero su utilidad es limitada, ya que no todos los cerdos infectados
desarrollan dichos anticuerpos. La vacunacin generalizada con el toxoide de P. multocida induce
la aparicin de anticuerpos de origen vacunal, complicando la interpretacin de los resultados.
Chapter 2.8.2. Rinitis atrfica porcina
2 Manual de la OIE sobre animales terrestres 2008
Requisitos para las vacunas y el material de diagnstico: Hay varias vacunas disponibles en el
mercado que contienen bacterinas de B. bronchiseptica y una mezcla de cepas de P. multocida
toxignicas y no toxignicas, o un toxoide derivado de P. multocida o de una cepa de Escherichia
coli recombinante.
A. INTRODUCCIN
La rinitis atrfica es una enfermedad infecciosa porcina. Los primeros sntomas clnicos son los estornudos, el
resuello y las secreciones oculares que dan lugar a manchas causadas por lgrimas de color oscuro seguidas
por secreciones nasales serosas y mucopurulentas; en algunos casos, los cerdos pueden mostrar epistaxis. La
atrofia de los cornetes (hueso conchal) y la desviacin septal pueden dar lugar al acortamiento o deformacin de
la jeta y, en los casos graves, en dificultad para comer. Se han reconocido dos formas de la enfermedad (9):
a) Una forma progresiva grave, causada por cepas toxignicas de Pasteurella multocida, ms frecuentemente
de los tipos capsulares D o A, solas o en combinacin con Bordetella bronchiseptica.
b) Una forma menos grave, con atrofia de los cornetes, que vara de leve a moderada, y a menudo sin
cambios significativos en la jeta, que es la causada por B. bronchiseptica.
El aumento de la gravedad se asocia con el hacinamiento, el manejo inadecuado y las condiciones de
alojamiento y medioambientales. La productividad reducida se relaciona generalmente con la rinitis atrfica, que
vara de moderada a grave, aunque no se ha aclarado del todo la relacin precisa entre la infeccin por estas
bacterias y el escaso aumento de peso. Bordetella bronchiseptica y P. multocida toxignica se encuentran
frecuentemente en muchas especies de animales domsticos y salvajes, que potencialmente podran transmitir
las bacterias a las de las explotaciones porcinas.
B. bronchiseptica o P. multocida toxignica pueden estar presentes en una piara sin signos clnicos de la
enfermedad, especialmente, cuando estn ausentes otros patgenos respiratorios y las condiciones
medioambientales y de manejo son ptimas. Dichas piaras portadoras representan un riesgo para la transmisin
de estos agentes a otros piaras, en los que puede producirse la evolucin hacia a una enfermedad grave.
El diagnstico de la rinitis atrfica depende de las investigaciones clnicas, patolgicas y microbiolgicas, siendo
las ltimas particularmente importantes en las explotaciones con una infeccin subclnica. Generalmente se
acepta que una piara en el que est presente P. multocida toxignica se considere como afectada por rinitis
atrfica progresiva, tanto si los sntomas son evidentes como si no (26). Por lo tanto, en muchos pases, el
control se ha centrado en la deteccin de la infeccin, incluso en animales asintomticos considerados
potenciales portadores.
La atrofia de los cornetes solo puede verse en el sacrificio, cuando se examinan secciones de la jeta entre el
primer y el segundo premolar. A menudo, para el seguimiento de las piaras, es conveniente y til la valoracin
subjetiva de la atrofia de los cornetes. (9), pero las medidas objetivas son la mejor opcin en los estudios que
requieren un anlisis de datos (16). La radiografa (12) y la tomografa (24) permiten realizar observaciones
objetivas de los animales vivos; la tomografa no solo revela las lesiones graves sino tambin las pequeas
alteraciones que no se detectan mediante radiografa. No obstante, estas tcnicas tienen un alcance limitado a
causa del equipo y del conocimiento experto necesarios. El diagnstico se apoya en la deteccin de los rasgos
histopatolgicos tpicos, como son la sustitucin fibrosa de las placas seas de las conchas ventrales, con una
variacin en el grado de los cambios inflamatorios y reparadores.
B. TCNICAS DE DIAGNSTICO
1. Identificacin de los agentes
a) Cultivo
Los hisopos tonsilares o las biopsias proporcionarn los ndices de aislamiento ms elevados, ya que
P. multocida coloniza preferentemente las amgdalas (1). Para el aislamiento de B. bronchiseptica, se
recomiendan los hisopos nasales. Cuando no es posible el muestreo de las amgdalas, los hisopos nasales
son suficientes para el aislamiento de ambos microorganismos. Se deben utilizar hisopos con mangos
flexibles; la recogida de muestras en los cerdos jvenes ser ms fcil con hisopos de puntas diminutas. Se
utiliza un nico hisopo para muestrear ambos lados de la cavidad nasal, a continuacin se coloca en un
medio de transporte no nutritivo (por ejemplo, tampn fosfato salino), y se conserva a 48C durante el

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transporte, para impedir el crecimiento en exceso de otras bacterias que crecen ms rpidamente. El
tiempo del transporte no exceder de las 24 horas.
Aunque P. multocida y B. bronchiseptica crecen fcilmente en agar sangre, se prefiere un medio selectivo,
ya que el crecimiento en exceso de otras bacterias, que estn presentes en mayor cantidad, interfiere, a
menudo, con su deteccin. Una dificultad aadida relacionada con B. bronchiseptica es que este
microorganismo crece ms lentamente que la mayora de las otras bacterias presentes en las muestras
clnicas. Se han utilizado diferentes formulaciones de los medios que contienen antibiticos para el
aislamiento de P. multocida, pero la comparacin de los resultados de diferentes estudios reflejados en la
bibliografa indica que los ndices de aislamiento ms altos se obtienen con medio de Knight modificado
(agar sangre bovina que contiene 5 g/ml de clindamicina, 0,75 g/ml de gentamicina) (22) o KPMD (agar
sangre bovina que contenga 3,75 U/ml de bacitracina, 5 g/ml de clindamicina, 0,75 g/ml de gentamicina y
2,25 g/ml de anfotericina B) (1). Para el crecimiento selectivo de B. bronchiseptica, a partir de hisopos
nasales, muchos laboratorios utilizan agar de MacConkey con glucosa al 1% y 20 g/ml de furaltadona, sin
embargo un medio de SmithBaskerville modificado (una formulacin de agar peptona que contiene
20 g/ml de penicilina, 20 g/ml de furaltadona y 0,5 g/ml de gentamicina) parece mejor, especialmente,
cuando la cantidad presente de B. bronchiseptica es baja (22,35). Se ha descrito una mejora adicional en el
ndice de aislamiento empleando agar sangre conteniendo 40 g/ml de cefalexina (22). Se ha descrito
tambin un medio selectivo de agar sangre para el aislamiento simultneo de P. multocida y
B. bronchiseptica, que contiene 5 mg/litro de clindamicina-HCl, 0,75 mg/litro de gentamicina sulfato,
2,5 mg/litro de telurito potsico, 5 mg/litro de anfotericina-B y 15 mg/litro de bacitracina (10). Sin embargo,
se ha observado que el telurito potsico inhibe a veces el crecimiento del tipo D de P. multocida (22).
b) Caractersticas bioqumicas
P. multocida es un bacilo Gram negativo pleomrfico, bipolar, que forma colonias grisceas no hemolticas
en agar sangre, de un caracterstico olor dulzn (29). No crece en agar MacConkey, da reacciones
positivas de oxidasa y catalasa, y produce indol.
B. bronchiseptica tambin es un bacilo Gram-negativo, que forma colonias convexas de 12 mm de
dimetro, generalmente hemolticas, en agar sangre o en medio BordetGengou, despus de 48 horas de
cultivo (30). No es fermentativa, es positiva para oxidasa, catalasa, citrato y urea, y crece en NaCl al 6,5%.
Se han descrito pruebas de aglutinacin en las que se emplean antisueros especficos para confirmar la
identidad de presuntos aislamientos de B. bronchiseptica, pero con frecuencia los antisueros idneos no se
encuentran disponibles para su uso.
Tipificacin capsular de P. multocida
La tipificacin capsular de P. multocida es til con fines epidemiolgicos. Tradicionalmente se ha utilizado la
serotipificacin por hemoaglutinacin indirecta (3), pero solo unos pocos laboratorios en todo el mundo
producen y mantienen los antisueros que se requieren. Sin embargo, la mayora de las cepas porcinas
pueden distinguirse normalmente por mtodos qumicos ms sencillos. Los que producen la cpsula del tipo
D forman un floculado abundante en solucin acuosa de acriflavina 1/1.000 (5), mientras que las cepas
capsulares del tipo A se pueden identificar por inhibicin del crecimiento en presencia de hialuronidasa (4).
Una pequea proporcin de las cepas porcinas no tiene cpsula.
Procedimiento del ensayo con acriflavina para el tipo capsular D de Pasteurella multocida
i) Para cada aislamiento de P. multocida que se ensaya, se inocula un tubo que contiene 3ml de caldo
cerebro corazn, utilizando un cultivo fresco en agar sangre bovina. Como controles positivo y
negativo se incluyen cepas conocidas de los tipos D y A.
ii) Los tubos inoculados se incuban a 37C durante 1824 horas.
iii) Las bacterias se sedimentan por centrifugacin y se toman 2,5 ml del sobrenadante.
iv) Se aaden 0,5 ml de una solucin acuosa 1/1.000 de acriflavina neutra. La solucin de acriflavina
debe prepararse cada semana y conservarse a 4C, protegida de la luz.
v) Se mezcla para resuspender el sedimento bacteriano y se incuba el tubo a temperatura ambiente, sin
agitacin.
vi) Al cabo de 5 minutos se observa para detectar la presencia de un precipitado floculante abundante.
Procedimiento del ensayo con hialurodinasa para el tipo capsular A de P. multocida
i) Se preparan cultivos frescos de los aislamientos que se ensayan en agar sangre bovina. Como
controles positivo y negativo se incluyen cepas conocidas de los tipos D y A.
Chapter 2.8.2. Rinitis atrfica porcina
4 Manual de la OIE sobre animales terrestres 2008
ii) Cada cepa que se ha de examinar se siembra, por separado, en una placa de agar sangre tripticasa
de soja con sangre bovina al 6%, haciendo varias estras paralelas, con una separacin de 35 mm
aproximadamente, a travs del dimetro de la placa. Para la mxima produccin de cido hialurnico,
es importante que las placas sean recientes y no estn deshidratadas.
iii) Se siembra en estras con abundancia de una cepa de Staphylococcus aureus productora de
hialuronidasa en ngulos rectos con respecto a las lneas de crecimiento de P. Multocida.
iv) Se incuban las placas a 37C, en una atmsfera hmeda, y se observan durante 24 horas. Las cepas
del tipo A exhibirn una marcada inhibicin del crecimiento en la regin contigua a las lneas de
crecimiento de S. aureus.
Tipificacin de los antgenos somticos de P. multocida
Las diferencias de los polisacridos de las paredes celulares entre las cepas de P. multocida constituyen la
base para la clasificacin de los antgenos somticos. Pueden distinguirse diecisis tipos mediante la
prueba de la precipitacin por difusin en gel de agar (18), y el tipo 3 se encuentra con mayor frecuencia en
los cerdos. Aunque no es fcil disponer de los antisueros necesarios, muchos laboratorios de referencia y
algunos laboratorios de diagnstico ofrecen el servicio de tipificacin de antgenos somticos.
Deteccin de la toxina de P. multocida
El diagnstico de la rinitis atrfica progresiva depende de la caracterizacin como toxignicos de los
aislamientos de P. multocida. La toxina termolbil de P. multocida produce una dermonecrosis en cobayas,
y es letal en ratones ECP la inyeccin intraperitoneal. La toxigenicidad se puede demostrar tambin in vitro,
ensayando los efectos citopticos sobre monocapas de clulas de pulmn de embriones bovinos (EBL)
(34), o en clulas de rin de mono verde africano (clulas Vero) (28) o en clulas de cornetes bovinos (13).
Las bacterias se cultivan en caldo infusin de cerebro y corazn a 37C, durante 24 horas, y se sedimentan
mediante centrifugacin. El sobrenadante se esteriliza por filtracin, y se titula en cultivos monocapa
preparados en placas de microtitulacin. Despus de la incubacin a 37C, durante 23 das, se tien las
monocapas con cristal violeta y se examinan al microscopio para detectar el efecto citoptico. Una prueba
rpida de cultivo celular, en la que las colonias sospechosas se cultivan sobre una capa de agar de clulas
EBL (6), permite el anlisis ms eficaz de grandes cantidades de aislamientos.
La toxina se puede detectar en mezclas de bacterias recuperadas a partir de medios de aislamiento
primarios mediante un enzimoinmunoensayo (ELISA), utilizando anticuerpos monoclonales (14). Esto
constituye una ventaja importante, ya que los cerdos pueden ser colonizados simultneamente por una
mezcla de cepas toxignicas y no toxignicas (1, 9). Los mtodos de cultivo celular exigiran que se
ensayaran todas las colonias de P. multocida de la muestra lo que claramente es inviable para
alcanzaran el mismo nivel de sensibilidad que el ELISA.
Este ELISA est comercialmente disponible en toda Europa y en unas pocas regiones del mundo
1
(aunque
no lo est en los Estados Unidos de Amrica) y ha sido ampliamente adoptado en muchos sitios como el
mtodo preferido para la identificacin de portadores, y para el control de la rinitis atrfica progresiva.
Aunque sea muy especfico, un resultado positivo, sin historia previa de la enfermedad o sin signos
sospechosos, deber investigarse a fondo para recuperar los aislamientos de toxignicos en los animales
muestreados.
c) Mtodos de reconocimiento de cidos nucleicos
El anlisis bioqumico y de la morfologa de las colonias siguen siendo la base para la identificacin de
P. multocida toxignica y de B. bronchiseptica en muchos laboratorios. Sin embargo, varios mtodos para la
deteccin de P. multocida o B. bronchiseptica en cerdos, descritos recientemente, que se basan en el uso
de sondas de ADN (20, 32), o de la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) (19, 23, 25, 31), son
prometedores como herramientas para el diagnstico ms rpido, ms especfico y ms sensible. Dado que
cada vez existe una mayor disponibilidad de equipos y de especialistas, los laboratorios de diagnstico
utilizan cada vez ms la PCR para la identificacin de estos agentes. Es esencial la validacin interna
mediante la utilizacin de controles bien conocidos y medidas de control de calidad muy estandarizadas
(vase el captulo 1.1.5 de este Manual de animales terrestres).
Recientemente se ha descrito una tcnica de PCR mltiple para la tipificacin capsular de P. multocida, que
parece proporcionar resultados ms fiables que los mtodos fenotpicos (37), y puede resultar de utilidad en
los laboratorios que estn convenientemente equipados para llevar a cabo ensayos de PCR.

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Con el fin de diferenciar los aislamientos de P. multocida, numerosos grupos han evaluado varias tcnicas
de identificacin de ADN, incluido el anlisis de la endonucleasa de restriccin (AER), la ribotipificacin, la
electroforesis en gel de campos pulsados, y los procedimientos basados en la PCR. Se han realizado pocas
comparaciones entre mtodos utilizando las cepas procedentes de cerdos con rinitis atrfica, pero el AER
parece ser el mtodo preferido en la actualidad para las investigaciones epidemiolgicas, ya que
proporciona un alto nivel de discriminacin sin necesidad de utilizar un equipo especializado o reactivos (11,
15, 17).
2. Pruebas serolgicas
Actualmente no hay pruebas serolgicas satisfactorias en las que se pueda confiar para detectar aquellos
animales infectados por P. multocida toxignica, y que puedan desarrollar o propagar la enfermedad. La
deteccin de anticuerpos contra P. multocida no es til, ya que las cepas no toxignicas comparten muchos
antgenos que dan reacciones cruzadas con cepas toxignicas. Se ha descrito un ELISA para la deteccin de
anticuerpos contra la toxina de P. multocida (14), que est comercialmente disponible en Europa y otras pocas
zonas del mundo (vase la nota a pie de pgina 1). Sin embargo, muchos animales infectados no producen
anticuerpos contra la toxina, y el uso generalizado de vacunas que contienen toxoides limita el valor diagnstico
de este ELISA a las piaras sin historial de vacunacin, o a la deteccin de una respuesta vacunal en las piaras
vacunadas.
La infeccin por B. bronchiseptica puede detectarse serolgicamente mediante el ensayo de la aglutinacin con
bacterias tratadas con formalina, o con un ELISA ms sensible (38). Si no se controla el estado de una piara
negativa, la serologa de B. bronchiseptica puede resultar de escaso valor, ya que el microorganismo est
presente en muchas piaras porcinas aparentemente normales.
C. REQUISITOS PARA LAS VACUNAS Y EL MATERIAL DE DIAGNSTICO
Hay varias vacunas disponibles comercialmente que contienen bacterinas de clulas completas de
B. bronchiseptica y una mezcla de P. multocida toxignica y no toxignica, o un toxoide de P. multocida. Tambin
estn disponibles las vacunas vivas atenuadas de B. bronchiseptica. Las vacunas que contienen
B. bronchiseptica sola no son adecuadas para el control de la rinitis atrfica progresiva, pero pueden resultar
beneficiosas en piaras que sufran la forma no progresiva. Las vacunas de Pasteurella multocida y
B. bronchiseptica parecen reducir el nivel de colonizacin por estas bacterias, pero no las eliminan ni impiden la
infeccin.
La toxina de P. multocida es el antgeno protector ms importante relacionado con la rinitis atrfica progresiva.
Las vacunas basadas en un toxoide de P. multocida ofrecen una proteccin especfica contra la accin de la
toxina, que por s misma puede ocasionar los principales sntomas (para una revisin, vase la referencia (14). El
nivel de la toxina producida por P. multocida es relativamente bajo, y la respuesta de anticuerpos especficos
contra la toxina, inducida por las vacunas que solo tienen bacterinas, puede que no sea la ptima. La dificultad y
el gasto que conlleva la purificacin a gran escala impiden la incorporacin de toxoides purificados a las vacunas.
Los estudios de campo han demostrado que un derivado recombinante de la toxina de P. multocida, al que le
falta un segmento de la porcin aminoterminal de la protena, no es txico, pero s inmunognico, y tiene una
eficacia superior en el cerdo (2, 27). Ms recientemente, se hall que era muy eficaz un toxoide completo
elaborado de forma que contuviera dos sustituciones de cido amino para eliminar la toxigenicidad (36). Se
demostr que una vacuna de ADN que codifica un toxoide completo pero enzimticamente inactivo era muy
inmunognica en cerdos pero an no se ha establecido su eficacia frente a la vacuna de recuerdo (33).
B. bronchiseptica produce diversas toxinas y adhesinas que son factores potenciales de virulencia en el cerdo.
Se ha demostrado que solo una protena, la pertactina de la membrana externa, protege contra la enfermedad en
los cerdos (21). A pesar de este hecho, tradicionalmente se ha considerado una toxina dermonecrtica producida
por B. bronchiseptica, no comparable con la toxina producida por P. multocida, como el principal factor de
virulencia e inmungeno protector para el ganado porcino (9). Varios estudios implican a la toxina como un factor
de virulencia, e indudablemente aquella juega un papel en la patognesis y quizs, en la proteccin. Sin
embargo, el papel de la pertactina y de varios factores de virulencia adicionales en la inmunidad protectora es
muy probablemente idntico e incluso superior al de la toxina.
B. bronchiseptica est sometida a una variacin fenotpica bajo determinadas condiciones de crecimiento (por
ejemplo, a temperaturas por debajo de 37C, o en presencia de moduladores qumicos como el MgSO
4
o el cido
nicotnico), en las que la produccin de la mayora de los factores de la virulencia est inactivada de forma
reversible. Los mutantes espontneos, permanentemente incapaces de producir la mayora de los factores de
virulencia, aparecen tambin con una baja frecuencia durante el cultivo. Para mantener los cultivos en fase I
(conocida tambin como Bvg
+
), o virulenta, es imprescindible prestar una cuidadosa atencin a la morfologa de
la colonia en una zona de la placa donde las colonias estn bien separadas. Las colonias de la fase I son
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pequeas (12 mm de dimetro), abombadas, y hemolticas en agar sangre. La prdida de la capacidad
hemoltica y la aparicin de colonias ms grandes y planas indican la conversin a la forma no virulenta. En la
medida de lo posible, los cultivos se propagarn utilizando colonias hemolticas individuales para minimizar la
lenta acumulacin de clones no virulentos en el cultivo.
No se dispone de los detalles precisos de los estndares para la produccin de vacunas comerciales eficaces,
pero se sabe que contienen 10
10
clulas de B. bronchiseptica muertas con formalina y 10 g de toxoide de
P. multocida por dosis. Tambin est claro que el toxoide purificado (inactivado con formaldehdo) es ms
inmunognico que el toxoide puro, y que la inmunogenicidad de la forma inactivada no se ve afectada por la
mezcla con una bacterina de B. bronchiseptica. El derivado recombinante y truncado de la toxina de P. multocida
ha sido inactivado mediante la deleccin de una porcin del gen que no parece comprometer la inmunogenicidad
protectora. Todas las vacunas comercialmente disponibles contienen un adyuvante oleoso o gel de hidrxido de
aluminio.
Para la produccin de la vacuna se emplear un cultivo virulento de fase I de Bordetella bronchiseptica, y los
aislamientos de P. multocida utilizados debern ser toxignicos. Deben conservarse por los medios
convencionales alcuotas de los inculos de B. bronchiseptica y de P. multocida toxignica, con una identidad e
historial de pases establecidos. Para realizar el cultivo de produccin, se utilizar un nmero de pases definido.
Bordetella bronchiseptica debe inactivarse con formaldehdo. Puesto que la toxina de P. multocida tiene una
localizacin intracelular y se libera en la lisis celular durante la fase estacionaria, el sobrenadante del cultivo debe
recogerse en torno a 48 horas despus de finalizar la fase exponencial de crecimiento.
1. Control del inculo
a) Caractersticas del inculo
Se emplear el sistema de lotes de inculo para las cepas bacterianas utilizadas para preparar bacterinas
de clulas completas, as como para las cepas a partir de las que se obtienen los antgenos purificados.
En el caso de las bacterinas de clulas completas, se describir el origen y el historial de las cepas de
P. multocida y de B. bronchiseptica, y se establecer la caracterizacin completa de los inculos originales
en un protocolo del lote de inculo original.
Los inculos de trabajo utilizados para la produccin de la vacuna derivarn del inculo original, y se
controlarn teniendo en cuenta todas las propiedades pertinentes, como se describe en el protocolo del lote
de inculo original.
b) Mtodo de cultivo
Todas las cepas bacterianas se cultivarn en medios apropiados que faciliten el crecimiento de forma eficaz
y la expresin de los antgenos ms relevantes.
c) Validacin como vacuna
i) Pureza
El inculo original y el inculo de trabajo deben ser cultivos puros y deben estar libres de
contaminacin por bacterias, hongos, micoplasmas y virus.
Debe confirmarse la identidad de la especie bacteriana y la produccin de los antgenos relevantes.
ii) Inocuidad
Aunque la inactivacin de los cultivos bacterianos por un mtodo validado es un procedimiento
estndar, las dos cepas bacterianas producen toxinas dermonecrticas; la destoxificacin de estas
toxinas se confirmar cuando los toxoides se utilicen como componentes de las vacunas. Se
realizarn pruebas estndares de inocuidad para las vacunas inactivadas (7, 8).
iii) Eficacia
La eficacia de la vacuna de ensayo deber medirse mediante la vacunacin de grupos de cerdas
gestantes. Su progenie se ensayar con cultivos virulentos de B. bronchiseptica y de P. multocida
productora de toxina. Deber obtenerse una proteccin significativa contra los sntomas de la forma
progresiva de la rinitis atrfica, es decir, la atrofia de los cornetes. Los sntomas inducidos en los
controles y en los vacunados pueden compararse segn el sistema de puntuacin de Done (12).

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2. Mtodos de produccin
Los cultivos de B. bronchiseptica y de P. multocida se propagarn en medios que faciliten el crecimiento eficaz, y
permitan la expresin ptima de los antgenos que son relevantes para la produccin de anticuerpos protectores.
Deber confirmarse que Bordetella bronchiseptica es un cultivo de fase I, y, en el caso de P. multocida, que el
cultivo contiene niveles suficientes de toxina.
Las clulas de Bordetella bronchiseptica y las clulas de P. multocida y/o la toxina, se inactivan, se destoxifican y
se formulan con un adyuvante. Los adyuvantes comnmente utilizados son las sales de aluminio y las
emulsiones de aceite.
3. Control durante el proceso
Durante el proceso de produccin se llevan a cabo los siguientes controles.
a) Pureza e identidad de los cultivos del inculo
Los cultivos se inoculan en placas de agar sangre y se incuban. En estas placas no debern crecer colonias
no especficas.
b) Pureza e identidad de los cultivos de produccin
Los cultivos se inoculan en placas de agar sangre y se incuban. En estas placas no debern crecer colonias
no especficas.
c) Inactivacin de los cultivos antes de procesamientos posteriores
Los cultivos se inactivan con formaldehdo. Se realizan pruebas para comprobar la eficacia del proceso de
inactivacin y para detectar la presencia de formaldehdo residual.
d) Cuantificacin de los antgenos
La cuantificacin se lleva a cabo mediante la realizacin de un recuento total de clulas, utilizando una
cmara de recuento de bacterias para contar clulas completas, o mediante la determinacin de la masa
antignica para antgenos concretos, por ejemplo, la toxina de P. multocida, mediante enzimoinmunoensayo
cuantitativo.
4. Control de lotes
a) Esterilidad
Cada lote de vacuna se probar en relacin a su esterilidad segn los mtodos estndar (vase el captulo
1.1.9.) descritos en la Farmacopea Europea o en el Cdigo Federal de Normas de los Estados Unidos.
b) Inocuidad
Cada lote de vacuna se deber probar en relacin a su inocuidad en el animal diana, administrndole una
dosis doble por la va recomendada de vacunacin, y una segunda dosis nica dos semanas ms tarde. No
deben producirse reacciones locales o sistmicas anmalas.
c) Potencia
Cada lote de vacuna se probar en relacin a su potencia empleando una prueba serolgica validada que
se correlaciona con la proteccin obtenida en el experimentos de eficacia, segn se describe en la seccin
C.1.c.iii. La prueba de potencia no se lleva a cabo necesariamente en el animal diana se pueden utilizar
ratones o conejos. En estos casos la correlacin, se tiene que demostrar con los niveles de anticuerpos
protectores en el animal diana.
d) Duracin de la inmunidad
La vacuna se aplica normalmente durante la ltima etapa de la gestacin, de forma que la progenie quedar
protegida mediante la presencia de los anticuerpos en el calostro.
En el caso de que la vacuna pueda aplicarse con independencia de la etapa de gestacin, la duracin de la
inmunidad deber ser, al menos, de 6 meses, de forma que las vacunaciones de recuerdo dos veces al ao
mantengan niveles eficaces de anticuerpos.
Chapter 2.8.2. Rinitis atrfica porcina
8 Manual de la OIE sobre animales terrestres 2008
e) Estabilidad
Cada lote de vacuna debe someterse a una prueba acelerada del perodo de validez, que se ha
correlacionado con pruebas del perodo de validez a tiempo real.
f) Conservantes
Cuando se utilice un conservante, debe calcularse su concentracin para cada lote. Esta no debe exceder
del nivel mximo permitido.
g) Precauciones
La inyeccin accidental del operador, cuando se utiliza una emulsin de aceite como adyuvante, puede
producir una reaccin local grave. Debe solicitarse la atencin mdica inmediata, tratando la herida como la
producida por una pistola de engrase.
5. Pruebas sobre el producto final
a) Inocuidad
Para la inocuidad de cada lote de vacuna se debe tener en cuenta lo descrito en la seccin C.4.b.
b) Potencia
Para la potencia de cada lote de vacuna se debe tener en cuenta lo descrito en la seccin C.4.c.
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