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Columna

La columna es el elemento fundamental de un


cromatografo de lquidos, puesto que es en ella donde
tiene lugar la separacin. Construidas normalmente con
acero inoxidable.
Columna adecuada= Buenos resultados
Partes de la
columna
Caractersticas de la columna que
influye sobre la capacidad de separacin
Dimetro interno
Longitud
Conexiones (reducciones)
Relleno
Tamao de partcula del relleno
Dimetro interno
La eleccin del dimetro interno de la columna se realiza
en funcin de la cantidad de muestra a separar.
Para las separaciones a escala analtica se suelen usar
columnas de pequeos dimetros (1 a 6 mm) mientras que
en los trabajos a escala preparativa se superan los 10 mm
de dimetro interno
Columnas de dimetro pequeo
Dimetro: entre 2 y 0.5 mm
Longitud: entre 25 y 100 cm .
Para reducir el consumo de disolventes, por lo que
facilitan acoplar esta cromatografa a otras tcnicas
analticas (espectrometra de masas)
Longitud de la columna
Las columnas de cromatografa liquida en ningn caso
pueden tener longitudes muy grandes.
Para tamaos de partcula de 10 a 5 nm deben ser
columnas de una longitud menos a 30 cm.
Para tamaos de partcula de 3 nm la longitud no debe ser
superior a 20 cm.
Conexiones
Unin entre el tubo de la columna con el capilar que
conecta con el resto de los dispositivos del cromatografo.
Estas uniones no deben presentar volumen muerto, deben
permitir el paso de secciones anchas de tubo a capilares
deben ser fcilmente montables y desmontables.
Relleno
Tamao de partcula
Los tamaos de partcula habituales se encuentran
comprendidos entre 10 y 3 nm de dimetro, aunque la
gran mayora de los casos, los anlisis se estn realizando
con rellenos de 10 o 5 nm.
Columna mas utilizada en HPLC
Las columnas mas utilizadas en cromatografa de lquidos
son las de relleno; que consiste en un tubo de acero,
relleno de una fase estacionaria adecuada.
El dimetro interno varia entre 2 y 60 mm dependiendo su
utilizacin, a escala analtica o semipreparativa y su
longitud varia entre 5 y 30 cm.
FASES
FASE DIRECTA
fase estacionaria polar
fase mvil de baja polaridad

FASE REVERSA
fase estacionaria de polaridad baja
fase mvil de polaridad alta

Las fases estacionarias en HPLC, estn constituidas generalmente por
partculas de materiales rgidos o semirrgidos. La ms comn es slice.

Funciones de la slice: Superficie adsorbente, soporte de la fase
estacionaria y substrato micro poroso.
Propiedades de la slice que proporcionan su utilizacin como soporte:
Gran resistencia mecnica, amplia gama de formas, tamaos y
dimetros de poro y gran variedad de slices en cuanto a superficie
especifica.
Slica (90%) y almina (10%) son las fases estacionarias
ms comunes.
Tanto las molculas de solutos como de disolvente son atradas hacia los
lugares activos polares de la fase estacionaria.
Unos solutos sern ms atrados que otros por la fase estacionaria y as se
lograr su migracin diferencial.
Se usan mezclas de disolventes para conseguir el poder de elucin y la
selectividad adecuadas. Normalmente un disolvente apolar (n-hexano) unido
a otro ms activo (acetona, cloruro de metilo, etc.).
Fuentes de informacin
http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/es_ES/investigacion/cromatografi
a/cromatografia_liquida_de_alta_eficacia.pdf
http://www.upct.es/~minaeees/fundamentos_analisis_cromatografico.pdf
http://eprints.uanl.mx/1795/1/1080128425.PDF