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EL MICROSCOPIO

Se puede definir a la palabra microscopio como un elemento o instrumento que nos


facilita la tarea de observar objetos que tienen como caracterstica principal ser
demasiado pequeos para ser vistos por nuestros ojos. Existen distintos tipos de
microscopios, por ende cada uno de ellos posee una funcin y caracterstica diferente.

El microscopio ms comn y el primero en ser inventado es el de tipo ptico; ste es un
instrumento que posee una o varias lentes que nos permiten tener una imagen
aumentada de la sustancia u objeto que estamos observando, su funcionamiento es por
refraccin. La palabra Microscopio se relaciona con la palabra microscopa, ste es la
ciencia de estudiar los pequeos objetos mediante el uso de dicho instrumento.

Historia del microscopio

La historia de los microscopios se remontan al ao 1610 en el que hay constancia de su
uso por primera vez por parte de Galileo, segn referencia de los registros que hay
italianos, pero si contrastamos estos registros con otros que hay holandeses, le
adjudican este merito Zacharias Jansen ms o menos de la misma poca. Sin embargo
la Accademia Nazionale dei Lincei (Academia Nacional de los Linces), que es la ms
antigua e importante de Italia y probablemente de Europa a la cual perteneca Galileo,
publico un trabajo sobre la observacin microscpica del aspecto de una abeja.

Posteriormente se publicaron otros trabajos muy importantes sobre el campo de la
microscopa, como por ejemplo Malpighi que apareci sobre el ao 1660 - 1665, el cual
constaba de la observacin de la circulacin sangunea a travs de los microscopios, lo
que probo la teora de Harvey (que fue un mdico al que se le atribuyo de ser la
primera persona en describir la circulacin de sangre, pero el espaol Miguel Servet hizo
una descripcin de la circulacin sangunea pulmonar un cuarto de siglo antes de que
naciera Harvey, pero en aquella poca fue considerado como una hereja, por lo que
fueron destruidos el libro que escribi, aunque afortunadamente tiempo despus fueron
encontradas tres copias).
En aos posteriores fueron apareciendo nuevas investigaciones como Robert Hooke
(que fue un cientfico ingls uno de los ms importantes de la historia, en su trayectoria
abarco varios campos desde la biologa, medicina, fsica, microscopia, hasta la
arquitectura, entre otros). Sobre mediados del siglo XVII un comerciante holands
Anton Van Leeuwenhoek realizo una investigacin con microscopios de fabricacin
casera en la cual visualizo por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y
glbulos rojos.

A lo largo del siglo XVIII los microscopios tuvieron varios adelantos mecnicos que
aumentaron su estabilidad y facilidad de uso. Una de las mejoras ms importantes que
tuvieron los microscopios sobre el ao 1877, fue sobre la ptica de los microscopios, ya
que Carl Zeiss (que fue un ptico alemn y las primeras lentes fueron empleadas como
piezas en la construccin de microscopios) mejoro la microscopa de inmersin
sustituyendo el agua por aceite de cedro consiguiendo as hasta 2000 aumentos.

Posteriormente a principios de los aos 30 se haba alcanzado el mximo desarrollo para
los microscopios pticos, pero un deseo cientfico que se siguiera investigando hasta
que los microscopios electrnicos se empezaron a desarrollar sobre el ao 1931 los
microscopios electrnicos de transmisin (TEM) y posteriormente en 1942 los
microscopios electrnicos de barrido (SEM). En ambos casos, estos microscopios han
permitido obtener imgenes de gran resolucin en materiales ptreos, metlicos y
orgnicos.

De todas formas las primeras publicaciones importantes dentro del campo de la
microscopa se realizaron entre 1660 y 1665 cuando se prueba la teora Harvey sobre la
circulacin sangunea al observar en el microscopio los capilares sanguneos.

En 1665, Robert Hooke hizo una observacin con el microscopio de un delgado corte de
corcho y pudo notar la porosidad del material; dichos poros, en conjunto, formaban
cavidades que eran poco profundas a modo de cajas, a las mismas las llam clulas. Lo
que haba observado Hooke era clulas muertas. Un tiempo ms tarde, Marcelo
Malpighi, un reconocido anatomista y bilogo italiano, pudo observar clulas vivas y fue
el primer encargado de estudiar tejidos vivos en el microscopio.
Limites tcnicos de los microscopios pticos

A principios de 1930 se haba alcanzado el lmite tcnico en cuanto a microscopios
pticos se refiere, no consiguiendo aumentos superiores a 500% o 1000%, de todas
formas, se tena el deseo cientfico de observar los detalles de las estructuras celulares.

Histricamente el microscopio fue un invento que contribuy mucho a una rama que es
fundamental para la vida del ser humano, la medicina, a travs de ellos se pudieron
observar las primeras clulas cancergenas, por ejemplo, permitiendo de esta forma
estudiar una compleja enfermedad y desarrollar mtodos para contrarrestarla. Tambin
influy mucho en ramas como la biologa y la paleontologa, dndonos la posibilidad de
saber de dnde venimos y conocer con qu tipo de naturaleza estamos conviviendo.

Partes esenciales de los microscopios

Los microscopios modernos pueden estar compuestos de diferentes componentes. En la
imagen contigua se enumeran las partes ms importantes de los microscopios. Los
microscopios estn formados por varias partes: una ptica y otra mecnica. A
continuacin haremos una breve descripcin de estas partes:


1. Ocular: Son las lentes que estas situadas ms cerca del observador de los
microscopios.
2. Brazo / soporte del tubo: Estn ubicados de forma perpendicular al pie y
pueden tener una forma arqueada o de manera vertical, para as unirlos al pie.
3. Platina: Es la parte que soporta el portaobjetos, va provista de dos pinzas y de
un orificio por el cual penetra la luz para observar la muestra.
4. Ajuste macromtrico: Es un tornillo que es para enfocar y desplazar de
manera rpida las lentes.
5. Ajuste micromtrico: Es un tornillo que es para enfocar y realizar
desplazamientos de las lentes de manera lenta.
6. Ajuste de altura de platina: Es un tornillo mediante el cual se ajusta la platina.
7. Pie: Es la parte que sostiene al microscopio.
8. Fuente de luz: Se utiliza para iluminar las muestras u objetos a observar, y se
encuentra instalada en el pie.
9. Condensador: Es el conjunto de lentes que se encuentran situadas debajo de la
platina y su funcin es la de concentrar la luz sobre la muestra u objeto.
10. Pinzas: Son dos pinzas que estn situadas sobre la platina y se utilizan para la
sujecin de las muestras.
11. Objetivo: Es la lente que esta situada ms prxima a la muestra, lo que la hace
ampliar la imagen de sta.
12. Revolver: Es la parte que sostiene el sistema de objetivos, y le permite girar
para cambiar los objetivos.
13. Tubo: Es la parte donde esta ubicado el ocular, que tiene el revolver con los
objetivos en la parte inferior y los oculares en la parte superior.

Los microscopios contienen los siguientes componentes

El pie es la base de los microscopios, sobre las que se estructuran los dems
componentes. El soporte del tubo es una columna, sobre la que se sujetan la ptica y la
platina. El tubo est casi siempre situado de forma oblicua, rara vez de forma vertical,
en la parte superior de los microscopios. El soporte para trabajar, que tiene una
perforacin en el centro se denomina platina. Para el ajuste de la nitidez normalmente
dispone de dos ruedas, la rueda de ajuste macromtrico y la de ajuste micromtrico.
Todos los dems componentes de los microscopios que se utilizan para la iluminacin y
el aumento sobre la muestra, forman parte de la ptica. Se mira a travs del ocular que
se encuentra en el tubo. Sobre la muestra se encuentran los objetivos sujetos al
revolver para cambiarlos de forma instantnea. Por debajo de la platina de los
microscopios se encuentra un sistema de lentes llamado condensador. Para iluminar las
muestras se usa la fuente de luz o un espejo.

Tambin se debe de tener en cuenta, a la hora de utilizar los microscopios, son las
diferentes caractersticas de los objetivos de los microscopios ya que de ellos depende
de que tengamos una mejor imagen de las muestras que se pretenden observar o
estudiar. A continuacin haremos una breve relacin de dichas caractersticas como:

- La escala de reproduccin que es la relacin lineal que existe entre el tamao del
objeto y su imagen, como por ejemplo 4:1, 40:1.
- El poder definidor que se refiere a la capacidad de los objetivos de formar imgenes
con los contornos bien definidos.
- El lmite de resolucin que es la distancia ms pequea que debe de haber entre los
dos objetos para que puedan visualizarse por separado.
- El poder de penetracin que es la nos permite la observacin simultanea de varios
planos de la muestra, que es inversamente proporcional a la escala de reproduccin
o aumento.
- La distancia frontal que es la distancia que hay de la lente frontal hasta la muestra
colocada en la platina, cuando est enfocada, disminuyendo cuando va aumentado
la escala de reproduccin del objetivo.
- El aumento total el que debemos de tener en cuenta que el ocular tambin tiene un
aumento, por lo que el aumento total de la imagen que estamos observando es el
producto entre el aumento del objetivo y el del ocular.



Pasos a seguir para realizar una observacin a travs de los microscopios

Para realizar una observacin a travs de los microscopios debe de seguir unos pasos
para que as tenga un resultado ptimo. Lo primero que debera tener en cuenta es que
el objeto o muestra a observar por los microscopios sea sometido a un proceso para
destacar algunas de las partes que le interese observar especialmente. Se debe de
conservar la muestra u objeto para realizar observaciones posteriores. Las dos fases de
este proceso son: la de fijacin y la tincin. La fijacin consiste en que la muestra que
deseamos observar no se mueva y para ello se utilizan diferentes sustancias lquidas o
temperaturas elevadas para que la muestra se deshidrate, y posteriormente debe
lavarse en un medio apropiado para poder realizar la observacin. En cuanto a la tincin
se trata de colorear la muestra que deseamos observar a travs de los microscopios,
para as destacar las partes que nos interesan. Para realizar esta tincin la gama de
colores es muy amplia, y cada uno de ellos destaca una parte diferente de la muestra,
por ejemplo si la muestra que tenemos para observar a travs de los microscopios es
una clula, la tincin que deberamos de utilizar para la observacin del ncleo de la
clula sera la fucsina bsica, el verde metilo. Si queremos observar el citoplasma de la
misma se utilizara la fucsina cida, el verde luz o la eosina, etc.

Una vez que ya tiene preparada las muestras para observarlas a travs de los
microscopios, debera de colocarlas en un vidrio transparente (portaobjetos) y la
cubrimos con otro vidrio transparente ms fino (cubreobjetos). Las muestras se
pondran en los microscopios para realizar la observacin. Para obtener una imagen
aumentada de las muestras en los microscopios debe de tener en cuenta que para
obtener el aumento deseado debe de combinar los objetivos con el ocular.
Posteriormente para enfocar las muestras debe realizarse con el tornillo macromtrico y
despus con el tornillo micromtrico para afinar el enfoque y as obtendremos una visin
perfecta de las muestras. Cuando las muestras ya estn perfectamente enfocadas se
van cambiando los objetivos hasta encontrar el aumento que necesitamos. Y ya para
tener una observacin perfecta la fuente de luz que tienen los microscopios, la pueden
regular con el diafragma hasta tener la iluminacin adecuada para la observacin.

Los microscopios son instrumentos que permiten observar objetos que son demasiado
pequeos para ser vistos a simple vista. El ms comn de ellos es el microscopio ptico,
que esta basado en lentes pticas.
Diferentes tipos de microscopios

Microscopio simple: Solamente utiliza una lente de aumento (como por ejemplo una
lupa).

Microscopio compuesto: Se compone de un conjunto de lentes, dispuestas de tal
manera que puedan aumentar la imagen que se est observando a travs de ellas
(microscopios pticos).

Microscopio de luz ultravioleta: La imagen en este tipo de microscopio depende de
la absorcin de la luz por las molculas de la muestra. Su funcionamiento no es muy
diferente del funcionamiento en un espectrofotmetro pero sus resultados son
registrados en fotografas. Adems un punto muy importante es que no se puede
observa directamente a travs del ocular porque la luz ultravioleta puede daar la
retina.

Microscopio electrnico: Utiliza electrones en lugar de luz visible (fotones) para
formar imgenes de objetos pequeos. Estos tipos de microscopios aumentan la
velocidad de los electrones para obtener una longitud de onda ms corta y conseguir
una resolucin mayor (los electrones poseen una longitud de onda bastante inferior que
la luz visible, y por tanto pueden disgregar estructuras muy pequeas) consiguiendo con
ello una capacidad de aumente de hasta 500.000 aumentos en comparacin con otros
tipos de microscopios ptico. Las imgenes originales obtenidas son en blanco y negro
pues se usan electrones en vez de luz. El haz electrnico se produce mediante un
ctodo de Wolframio.

Microscopio electrnico de transmisin: Emite un haz de electrones hacia la
muestra que se quiere aumentar, en la que hay parte de estos electrones que rebotan o
son absorbidos por la muestran y otros que la atraviesan formando la imagen
aumentada, por lo que el tipo de muestras tienen que ser capas muy finas para que as
se pueda aumentar perfectamente. Este tipo de microscopios pueden aumentar la
muestra hasta un milln de veces su tamao real.
Microscopio electrnico de barrido: La muestra se cubre con una capa fina de
metal y se realiza un barrido de electrones, en el que un detector mide la cantidad de
los electrones que emite la intensidad de la muestra, por que es posible de mostrar
figuras en tres dimensiones con una gran resolucin, pudiendo proyectar la imagen de
la muestra en un televisor (materiales metlicos u orgnicos).

Microscopio de sonda de barrido: Este tipo de microscopios va provisto de un
transmisor en la parte exequimal de la lente, adems utiliza una sonda que recorre la
superficie de la muestra que se quiere estudiar.

Microscopio de luz reflejada: Estos microscopios se usan principalmente para
observar preparados transparentes y lquidos. El mbito de uso es por ejemplo el
anlisis de sangre, clulas, pruebas en plantas. Los microscopios clsicos de luz
reflejada tienen una distancia de trabajo muy nfima, por debajo de 4 mm. Por ello, esta
clase de microscopios son aptos para preparados muy finos. Los preparados se ponen
encima del porta muestras y se tapan con el cubre muestras. Los microscopios de luz
reflejada se ofrecen normalmente con muchos aumentos (de 40 hasta ms de 1000
aumentos). En trabajos con 1000 aumentos es necesario poner una gota de aceite de
inmersin para cerrar el espacio de aire entre el porta muestras y el cubre muestra.
Imgenes hasta 400 aumentos se pueden ver con cualquier aparato sin necesidad de
alguna tcnica en especial. Con el cambio de los oculares se puede incrementar los
aumentos de los microscopios de luz reflejada.

Microscopio de fluorescencia: Se utilizan para revelar molculas fluorescente
naturales, como por ejemplo la vitamina A que fluorece y emite luz de longitud de onda
que se encuentra dentro del espectro visible cuando es expuesta a la luz ultravioleta, o
para revelar una fluorescencia agregada, como en la deteccin de anticuerpos. El color
verde de las hojas de las plantas (clorofila) con la excitacin de forma natural con luz de
onda corta fluorece en luz intensiva roja. Para la observacin de esta fluorescencia
primaria con los microscopios no es necesaria ninguna preparacin. En una
fluorescencia secundaria se marcan los objetos que no fluorecen con un colorante
fluorescente. Un colorante fluorescente conocido es por ejemplo Acridinorange, que con
la excitacin del ncleo de la clula con luz azul, muestra una fluorescencia verde.
Debido a que la fluorescencia se produce slo con la preparacin del colorante
fluorescente, se habla tambin de fluorescencia inducida. En la fluorescencia inmune se
acopla un colorante fluorescente (casi siempre FITC = Fluorescein-iso-thio-cyanat) con
un anticuerpo. Estos anticuerpos se pueden producir de forma muy especfica para
determinadas estructuras biolgicas. La unin del colorante se transmite prcticamente
a travs del anticuerpo. Estas coloraciones son extremadamente selectivas, sin
embargo, no tan intensivas como en la fluorescencia secundaria tradicional.

Microscopio estreo de luz reflejada y luz transmitida: Estos microscopios se
usan principalmente para visualizar objetos mayores. El mbito de uso es por ejemplo el
anlisis de insectos, plantas, monedas o la comprobacin de materiales. La mayora de
los microscopios de luz reflejada tienen una distancia de trabajo de ms de 40 mm. Por
ello, estos microscopios son ideales para trabajar con objetos grandes o para la
comprobacin de materiales. Normalmente se ofertan estos microscopios como modelos
binoculares.

Microscopio digital: La microscopa digital es la pareja de la microscopa
convencional. Las pruebas no se analizan directamente a travs del ocular de los
microscopios, sino que se presentan como imagen completa virtual, que despus de
escanear completamente la prueba se muestra en pantalla con la resolucin deseada.
Un auto foco integrado garantiza que la imagen est situada siempre en el foco, y por
tanto sea ntida. Las imgenes producidas mediante el escaneo se solapan de forma
automtica para producir finalmente una imagen completa. La imagen final virtual se
puede grabar en una base de datos.

Microscopio de fuerza atmica: Estos modelos de microscopios tienen las
caractersticas similares a los microscopios de efecto tnel y tambin en cuanto a la
resolucin pero sirven para materiales que no sean conductores, en los que la aguja
esta en contacto con la muestra a estudiar y detecta los efectos de las fuerzas atmicas.

Microscopio petrogrfico: Se utiliza para identificar y estimar cuantitativamente los
componentes minerales tanto de rocas gneas como las rocas metamrficas, el cual
tienen un dispositivo para polarizar la luz que pasa a travs de la muestra examinada.

Microscopio de efecto tnel: Estos microscopios tienen una aguja tan afilada que en
su extremo solo hay un tomo. En la punta de la aguja se ubica sobre el material y se
aproxima hasta una distancia de 1 nanmetro, y una corriente elctrica dbil genera
una diferencia de potencial de 1 voltio. Al recorrer la superficie de la muestra, la aguja
reproduce la topografa atmica de la muestra.

Microscopio en campo oscuro: En el objetivo de este tipo de microscopios se recibe
la luz dispersa o refractada por las estructuras de la muestra, por lo que est equipado
con un condensador especial que ilumina la muestra con una luz muy fuerte indirecta.

Microscopio de contraste de fase: Es muy til para la observacin de clulas vivas y
para observas clulas sin coloreas.

Microscopio de luz polarizada: Es una modificacin de los microscopios pticos el
cual contienen un filtro polarizante llamado polarizador entre la fuente de luz y la
muestra, y se ubica un segundo polarizador, denominado analizador entre el objetivo y
el observador.

Microscopio con focal: Se utiliza una iluminacin mediante un rayo lser, el cual va
haciendo un barrido de la muestra por todo el volumen de esta, creando as muchas
imgenes bidimensionales que un PC. Este mtodo tiene la ventaja de que se pueden
tomar imgenes de la muestra en cortes muy finos.

Microscopio virtual: Es un proyecto que ha sido creado para realizar estudios sobre el
comportamiento de organismos microscpicos, en investigaciones forenses, etc.

Microscopio de antimateria: Estos microscopios estn basados en una antipartcula
de los electrones, se denominan positrones, que estos pueden dar imgenes de alta
calidad de los defectos en las superficies de semiconductores.

Microscopios monoculares, binoculares y trinoculares: Los microscopios
monoculares son los ms econmicos para introducirse en el mundo de la microscopa.
No pierde visibilidad por usar un slo objetivo. Para una visualizacin prolongada y ms
relajada conviene trabajar con los microscopios binoculares. Al usar ambos ojos, la vista
est ms relajada durante un espacio de tiempo prolongado. Los microscopios
binoculares tienen, adems de elementos normalizados, una disposicin de prismas ms
compleja y una iluminacin ms potente.

Para aplicaciones que requieren guardar imgenes existen microscopios
trinoculares. Se trata de microscopios binoculares con un tubo adicional. Este le
permite situar una cmara USB que registra las imgenes. Las imgenes registradas las
puede transmitir a continuacin a un PC o porttil. Tambin tiene la posibilidad de
conectar un micro ocular a los microscopios binoculares. Este micro ocular se coloca
simplemente en uno de los oculares de los microscopios. El micro ocular le ofrece la
posibilidad de transformar de forma econmica los microscopios en videos microscopios.

Cambio en microscopios a objetivos mayores

Site las clulas de la muestra que desea observar con ms aumentos en el centro de la
imagen, para que cuando cambie el objetivo la encuentre nuevamente. Cambie el
objetivo del microscopio moviendo el revolver. Casi siempre sucede que la nueva
imagen es ntida. El ajuste de la nitidez lo consigue mediante el ajuste micromtrico.
Siga el mismo procedimiento para poner un objetivo con ms aumentos an.

A tener en cuenta al trabajar con grandes aumentos

Al trabajar con grandes aumentos el diafragma de los microscopios no deben de estar
demasiado cerrado, pues esto puede producir que se vean lneas dobles y la imagen no
sea ntida. En ese caso debe abrir ms el diafragma. En caso que el diafragma estuviera
abierto del todo, la imagen puede aparecer de forma dbil, hasta el punto que no se
pueda reconocer casi nada. En ese caso deber cerrar un poco el diafragma. Si despus
de efectuar un ajuste correcto sigue teniendo una imagen dbil, probablemente el
problema sea que el ocular o el objetivo de los microscopios est sucio. En ese caso
deber limpiar los lentes correspondientes.

Exigencias a los microscopios

Dependiendo del uso que le vaya a dar, pondr ms o menos exigencias al
equipamiento. Microscopios normales con 400 o 600 aumentos suelen tener una
iluminacin suficiente. La iluminacin especial como un contraste de fase, de campo
oscuro e iluminacin potente halgena permiten un reconocimiento de detalles de
objetos sin contraste, sin la necesidad de tintar el preparado.