Supuesto prctico n1

DETERMINACIN DE DIOXINAS EN CARNE DE VACUNO

1. Introduccin.
1.1.! Antecedentes " est#do #ctu#$ de$ te%#.
Las dioxinas, contaminantes organoclorados persistentes ampliamente
dispersos en el medio ambiente, se encuentran acumuladas en alimentos
grasos.
Aunque tambin son consecuencia de procesos naturales, como
erupciones volcnicas o incendios forestales, el origen antropognico de las
dioxinas se debe principalmente a procesos de combustin, por reaccin de
sus precursores (hidrocarburos aromticos y compuestos clorados en
presencia de oxgeno!, procesos qumicos e industriales, o procedentes de
productos de desecho como lodos de depuradora o lixiviados de vertederos.
"l trmino #dioxinas$ abarca un grupo de %& policlorodiben'o(p(dioxinas
()*++! y ,-& policlorodiben'ofuranos ()*+.s! congneres, de los cuales ,%
son considerados de riesgo toxicolgico. "l congnere ms txico es la
tetraclorodiben'o(p(dioxina (/,-,%,0(1*++!, clasificado por el *entro
2nternacional de 2nvestigaciones sobre el *ncer y otras organi'aciones de
reconocido prestigio como cancergeno humano. "l estudio de las dioxinas es
muy importante por los diferentes efectos txicos que producen en los seres
humanos. "stos efectos dependen del grado de exposicin, y pueden
manifestarse como3 cloracn, cambios metablicos y hormonales, alteraciones
a nivel del sistema reproductor masculino y femenino, efectos en el sistema
cardiovascular, da4o en el sistema nervioso, da4os hepticos, alteraciones del
sistema inmunitario, teratogenicidad y carcinogenidad.
5u estructura bsica la constituyen dos anillos aromticos unidos por
uno o dos tomos de oxgeno, (furanos y dioxinas respectivamente! con
distintos grados de sustitucin por tomos de cloro. "l grado de cloracin de los
anillos y de la posicin de estos tomos de cloro es lo que confiere la toxicidad
a cada molcula. As, de los /,6 ismeros que constituyen la familia de las
dioxinas, solo ,% presentan una configuracin con carcter txico.
1
+e todos los ismeros, el ms txico es el /,-,%,0(1etraclorodiben'o(
para(dioxin (/,-,%,0(1*++!, considerada por la 2nternational Agency for
7esearch on *ancer como sustancia carcinognica de *lase ,, es decir, de
toxicidad demostrada para el hombre. "st identificada como el compuesto
ms txico de los generados por el ser humano. 8arios estudios han
determinado la capacidad de estos compuestos para producir adems de
cncer, mutaciones y malformaciones en fetos de distintas especies animales.
+istintos accidentes de contaminacin, como el de 5eveso, en 2talia
(,9%%! de:aron constancia, a;n hoy, de los efectos sobre la salud producidos
por las dioxinas.
+ebido a la diferente toxicidad de los distintos ismeros, se ha definido
el concepto de .actor de "quivalencia 1xica (1"<!, que consiste en asignar
para cada ismero una toxicidad relativa en trminos de la cantidad equivalente
de la dioxina /,-,%,0(1*++. La utilidad del trmino 1"< es que se puede
expresar el resultado de un anlisis de dioxinas con un valor numrico que
representa la toxicidad de una me'cla comple:a de dioxinas. "l factor
equivalente que se ha de asignar a cada ismero aparece recogido en la
siguiente tabla3
2
Las personas se ven expuestas, principalmente a travs de los alimentos
(=96>!, siendo los alimentos de origen animal los que contribuyen
mayoritariamente (carne, pescado y leche!. Las dioxinas presentes en los
alimentos de origen animal se derivan de la alimentacin recibida por los
animales, producida a su ve' como resultado de la contaminacin ambiental.
?na ve' en el organismo, las dioxinas son acumuladas preferentemente en el
hgado y el te:ido adiposo, siendo la metaboli'acin y la excrecin muy lenta, lo
cual permite su bioacumulacin.
1.&.! Co%p#r#cin de %'todos de #n$isis de dio(in#s. E(posicin "
)usti*ic#cin de$ %'todo se$eccion#do p#r# su des#rro$$o
@asta ahora, la tcnica de referencia utili'ada para la determinacin de
dioxinas en el anlisis de alimentos ha sido la cromatografa de
gasesA"spectrometra de masas de alta resolucin (@7B*A@7C5! debido a su
gran sensibilidad y selectividad.
+ebido a la comple:idad de esta tcnica y a su elevado coste, tanto por
la elevada inversin en instrumentacin como en personal especiali'ado, solo
se puede llevar a cabo en *entros de 2nvestigacin de cierta envergadura. )or
ello, existe desde hace tiempo una fuerte demanda de mtodos y tecnologas
alternativas ms econmicas que permitan la determinacin de dioxinas en
laboratorios de control de calidad de forma rutinaria.
"l 7eglamento (*"! DE ,00-A/66F de la *omisin "uropea de ,9 de
diciembre de /66F, por el que se establecen mtodos de muestreo y de anlisis
para el control oficial de los niveles de dioxinas y )*G similares a las dioxinas
en determinados productos alimenticios, clasifica los mtodos analticos
existentes en funcin de que sirvan3
a! *omo mtodo de cribado
+ebido a los distintos accidentes de contaminacin de carnes de
consumo humano producidos desde finales de los a4os 96 a la actualidad
(crisis de las dioxinas en Glgica, dioxinas en AlemaniaH! es necesario contar
con una metodologa de cribado para la deteccin rpida y de ba:o costo,
previo al anlisis qumico confirmatorio.
Los mtodos de cribado son los que se utili'an para detectar la
presencia de dioxinas y )*Gs similares a las dioxinas con el nivel considerado.
"stos mtodos debern ser capaces de anali'ar un elevado n;mero de
3
muestras en poco tiempo, con el fin de detectar posibles positivos. "starn
especficamente dise4ados para evitar falsos negativos.
"ntre estos mtodos se incluyen los ensayos bioanalticos (que se
pueden agrupar en inmunoensayos y bioensayos! y la cromatografa de gases
con espectroscopa de masas de ba:a resolucin (B*AC5!
La principal venta:a de los ensayos bioanalticos es que se ven
acompa4ados de mtodos de extraccin rpida y purificaciones sencillas. Los
bioensayos se basan en el mecanismo de toxicidad de dioxinas, furanos y
compuestos similares (como )*Gs coplanares!. +e los diferentes bioensayos,
destaca el denominado *AL?I (chemical(activated luciferease expresin!.
*omo inconveniente mencionaremos que los ensayos bioanalticos no
permiten detectar los congneres por separado, sino que miden la suma de las
dioxinas txicas en la muestra.
Adems, al ser un mtodo patentado, no elimina en su totalidad el
problema del coste, pues debe ser renovada la licencia anualmente. Adems,
cuando un resultado da positivo, se debe confirmar de igual manera con
B*AC5 de alta resolucin.
)or otro lado, la B*AC5 de ba:a resolucin genera un proceso de
elevada selectividad, permitiendo la obtencin de espectros de masas
caractersticos de la molcula de inters, y la prctica eliminacin de
interferencias presentes en la muestra. La determinacin es especialmente
apropiada si se hace con arreglo al mtodo ")A ,F,-, revisin G #1etra(
through octa(chlorinated dioxins and furans by isotope dilution @7B*A@7C5$,
requisito obligado en laboratorios acreditados de la ?".
"s adems ,6 veces ms barata que la misma tcnica de elevada
resolucin.
La principal diferencia entre la alta o ba:a resolucin es que la @7C5
tiene un poder separador mucho mayor, que permite la separacin de iones
procedentes de dioxinas de otros iones interferentes. )or ello, @7C5 es capa'
de detectar dioxinas a muy ba:os niveles sin interferencias de otros
compuestos.
)or eso, una muestra positiva detectada con B*AC5 de ba:a resolucin
tambin debe confirmarse con la @7B*A@7C5.
4
"s por todos estos argumentos que hemos elegido el mtodo de B*AC5
de ba:a resolucin para la determinacin de dioxinas en carne de vacuno.
b! *omo mtodo de confirmacin
Los mtodos de confirmacin son los que proporcionan una informacin
completa o complementaria que permite la identificacin y cuantificacin
inequvoca de las dioxinas y los )*Gs similares a las dioxinas con el nivel
considerado.
5olo son mtodos de confirmacin la cromatografa de gases de alta
resolucinAespectrometra de masas de alta resolucin (@7B*A@7C5!
1.+.! O,)eti-os # conse.uir con e$ #n$isis re/uerido
Duestra tcnica de B*AC5 ha de cumplir los requisitos bsicos de
aceptacin impuestos por el reglamento de la ?"3
(5ensibilidad elevada y lmites de deteccin ba:os.
"n el caso de las )*++ y los )*+., los umbrales de deteccin debern
situarse en el intervalo de los pg "<1, habida cuenta de la extrema toxicidad
de algunos de estos compuestos.
(5electividad elevada (especificidad!. 5er necesario establecer una
distincin entre las )*++, los )*+. y los )*G similares a las dioxinas y una
multitud de otros compuestos extrados simultneamente de la muestra, que
posiblemente interfieran y que estn presentes en mayor concentracin que los
analitos considerados. )or lo que respecta a B*AC5, ser necesario distinguir
entre varios congneres, en particular entre los txicos y los otros congneres.
("xactitud elevada (veracidad y precisin!. La determinacin deber
proporcionar una estimacin vlida de la concentracin real en una muestra. A
fin de evitar que el resultado del anlisis de una muestra sea recha'ado debido
a la escasa fiabilidad de la estimacin de "<1, ser necesario lograr un alto
grado de exactitud (grado de concordancia entre el resultado de la medicin y
el valor real!.
1.0.! I%port#nci# de est# deter%in#cin #n#$1tic#
"s importante determinar la concentracin de dioxinas en los alimentos
debido a las consecuencias que produce en el organismo la ingesta de este
tipo de sustancias, ya comentadas anteriormente.
5
)or ello, el reglamento ,00,A/66F de la *omisin "uropea establece los
lmites mximos para dioxinas y )*Gs similares a dioxinas en cada tipo de
alimento. "n la siguiente tabla recogemos los valores mximos para la carne de
vacuno3
Lo que se pretende al fin y al cabo es disminuir los casos de
contaminacin animal y por ende, humana, de este tipo de sustancias
carcingenas.
Las medidas basadas solamente en el establecimiento de niveles
mximos no seran suficientemente efectivas para disminuir el nivel de
contaminacin, salvo que se aplicaran lmites tan estrictos que se declarara no
aptos para consumo la mayora de alimentos y piensos. )or ello, como
estrategia para reducir la presencia de )*Gs y dioxinas en alimentos y piensos,
se adoptar en un futuro una 7ecomendacin de la *omisin sobre niveles de
actuacin y niveles ob:etivo en piensos y alimentos.
"sta estrategia se basa en un planteamiento integrado para reducir la
incidencia de estos contaminantes a lo largo de toda la cadena alimentaria.
Adems de las medidas de limitacin de las emisiones de dioxinas al
medioambiente, est previsto que se apliquen otras medidas para reba:ar la
cantidad de dioxinas y )*Gs en alimentos y piensos, como son3 el
establecimiento de niveles de actuacin, que servirn como instrumento de
alerta rpida, y el establecimiento de niveles ob:etivo, que son los que deben
conseguirse en alimentos y piensos de manera que se pueda considerar que la
gran mayora de la poblacin europea est dentro de la ingesta semanal
tolerable de dioxinas y )*Gs similares a dioxinas.
6
&. 2und#%ento terico de$ %'todo de #n$isis propuesto3 descrito
concis#%ente.
+ebido a las caractersticas de las dioxinas (carcter lipoflico, alto grado
de interferencia, concentraciones a niveles tra'a, de polaridad ba:aH! los
mtodos desarrollados para anali'ar )*++A. deben caracteri'arse por una alta
sensibilidad, selectividad, especificidad y exactitud. )ara cumplir con estas
caractersticas, en el presente traba:o se ha tomado como modelo el mtodo
")A ,F,- (?5")A, ,99Jb!, y viendo si se obtienen resultados dentro de sus
valores de referencia al utili'ar un espectrmetro de masas de ba:a resolucin,
mucho ms asequible econmicamente que el de alta resolucin, para ver si es
posible el desarrollo, validacin y aplicacin de un mtodo analtico econmico
y fiable para la determinacin y cuantificacin de dioxinas en carnes de vacuno.
)or tanto, las etapas fundamentales de la metodologa elegida son3
,! 1oma de muestra
/! "xtraccin
-! )urificacin y fraccionamiento
J! 5eparacin y deteccin por B*AL7C5
Extraccin3 +ebido al carcter lipoflico de las dioxinas, fue necesario
determinar primero el contenido graso de las matrices estudiadas. La
extraccin de la grasa de la carne se reali' por el mtodo 5oxhlet, con una
me'cla , 3, de tolueno(ciclohexano.
Purificacin (limpieza)3 La grasa extrada fue transferida con hexano a un
embudo de separacin, y la extraccin de dioxina se reali' con cido sulf;rico,
hasta obtener una fase acuosa de color pardo. "ste extracto se someti al
proceso de limpie'a, a fin de eliminar impure'as.
"l proceso de limpie'a se basa en el uso secuencial de columnas de
slica multicapa, florisil y por ;ltimo, al;mina bsica, que es donde quedan
retenidas las dioxinas. "n la siguiente tabla se especifica qu compuestos
quedan retenidos en cada columna3
7
Separacin y deteccin: "l extracto obtenido se anali' con un
cromatgrafo de gases acoplado a un detector selectivo de masas, con fuente
de ioni'acin de impacto de electrones y anali'ador cuadrupolo.
La separacin cromatogrfica se llev a cabo en columna capilar
empleando helio como gas portador.
"n este caso, una columna capilar de cromatografa B* es conectada
directamente a la fuente C5 a travs de una lnea capilar de transferencia
calentada. La lnea de transferencia se mantiene lo suficientemente caliente
como para evitar la condensacin del componente voltil que efluye de la
columna B*, en su camino hacia el interior de la fuente de iones del
espectrmetro C5, mantenida a ba:a presin. "n este caso, la ioni'acin de las
molculas se consigue con el bombardeo de electrones.
?na ve' generados, los iones son introducidos en el anali'ador, en este
caso de tipo cuadrupolo, uno de los ms usados debido a su gran robuste'
para anlisis de rutina y su relativo ba:o costo comparado con otros como la
trampa de iones o los anali'adores de tiempo de vuelo.
"n la siguiente figura podemos ver un esquema de un cuadrupolo. 5e
compone de J barras alargadas conectadas elctricamente entre s en pares
opuestos a los que se le aplica un volta:e variable y, para un volta:e dado, solo
los iones con una determinada relacin masaAcarga (mA'! presentarn una
trayectoria estable y podrn ser detectados (iones resonantes!, mientras que el
resto son expulsados del cuadrupolo y no llegan al detector (iones no
resonantes!
8
+. M#teri#$es " re#cti-os # uti$i4#r.
+.1.! Muestr#s ,io$.ic#s
+ie' muestras de carne de vaca, de diferentes cortes y de diferentes
animales.
+.&.! E/uipo
(*romatgrafo de gases (B*! F096D con automuestreador AgKent %F0-
y +etector 5electivo de masas (C5+! &9%- 2D"71 AgKent 1echnologies con
fuente de ioni'acin de impacto de electrones y anali'ador de cuadrupolo.
(*abina de seguridad biolgica clase 22 tipo G/ "5*L.
(Liofili'adora Labconco .ree'e +ry systemAfree'one J.&.
("xtractor 5oxhlet de /66 mL, &6 mm 2+.
(Galan'a analtica AD+ B7(/6/
(Ga4o de ultrasonido ?L17A5LD2M.
(Gomba de vaco BA51.
(*ongelador CN1AB.
("stufa bacteriolgica 5he( Lab.
(Cini(evaporadores 5upelco.
(7otaevaporador NACA1L.
(8ortex B"D2" / 5cientific 2ndustries.
9
+.+.! M#teri#$
(*olumna capilar @)(&ms, F6 m x 6,/& mm 2+ x 6,/& Om (&> fenil, 9&>
dimetilpolisiloxano! de AgKent.
(8iales de vidrio de ,/ x -/ mm de ,.& mL con tapn de rosca
transparente y septum de )1."Asilicn *hromacol.
(Agitadores de vidrio.
(Aros para soporte.
(*olumnas de vidrio de distintos dimetros, de / dm de longitud.
( +edal de vidrio de fondo poroso.
(+esecador.
("mbudos de decantacin de varios vol;menes.
("sptulas.
(Peringas de vidrio para cromatografa de gases de ,6 OL.
(Catraces baln de diferentes vol;menes.
(Catraces erlenmeyer de distintos vol;menes.
(Catra' aforado de ,66 mL
()in'as para soporte.
()ipeta volumtrica de / mL.
()ipetas pasteur.
()robetas de distintos vol;menes.
(5oportes universales.
(1ermmetro de (/6 E* a ,,6 E*.
(8asos de precipitados de distintos vol;menes.
(8asos para liofili'adora de 966 mL.
+.0.! Re#cti-os
("stndares ")A(,F,-*5 (+isoluciones de calibracin y verificacin!,
son me'clas de los ,% congneres nativos y los correspondientes marcados
isotpicamente con *(,- en concentraciones que van desde 6.& a /66 ngAmL.
("stndar ")A(,F,-L*5 (+isolucin 5tocQ de *ompuestos Carcados
2sotpicamente con *(,-!, contiene los ,% congneres marcados
isotpicamente en concentraciones de ,66 a /66 ngAmL.
("stndar ")A(,F,-255 (+isolucin "stndar 2nterno!, contiene los
congneres ,,/,-,J(1*++ y ,,/,-,%,0,9( @x*++ marcados isotpicamente con
*(,-, en concentraciones de /66 ngAmL.
10
("stndar ")A( ,F,- )A7 (+isolucin 5tocQ de 7ecuperacin y
)recisin!, contiene la me'cla de los ,% congneres nativos en
concentraciones de J6 a J66 ngAmL.
(Al;mina bsica s;per 2 para anlisis de dioxinas.
(.lorisil para cromatografa de gases.
(5lica gel F6 tama4o de partcula 6.6F-(6./ mm.
(+istintos reactivos de grado A*53 hidrxido de sodio, sulfato de sodio
anhidro, nitrato de plata, oxalato de sodio.
(Rcido sulf;rico 9&(9%> grado pro anlisis.
(Agua bidestilada.
(+istintos disolventes orgnicos3 acetona, ciclohexano, diclorometano,
ter etlico, metanol, hexano, nonano, tolueno.
0.! 5rocedi%iento
*omo se ha explicado anteriormente, el procedimiento sigui cuatro
etapas3
,!2nicialmente, las muestras de carne fueron sometidas a un
pretratamiento, que consisti en congelar las muestras y posteriormente
liofili'arlas durante una semana, para la eliminacin completa del agua.
/! A continuacin, se procedi a la extraccin de la grasa por el mtodo
5oxhlet, para lo cual se pes una cantidad de muestra con un contenido en
grasa en torno al &(,6> de grasa. A esta muestra pesada se le adicion el
estndar ")A ,F,-L*5 marcado isotpicamente con *(,-, para poder
cuantificar las dioxinas por el mtodo de dilucin isotpica.
La extraccin se reali' con J66 mL de la me'cla ,3, de tolueno(
ciclohexano durante /J h. +espus se de: en la estufa durante ,/ h, para
concentrar la grasa a sequedad.
/b! )ara la extraccin de dioxinas, la muestra de grasa se transfiri a un
embudo de decantacin de , L, con ayuda de hexano, hasta obtener un
volumen final de ,66 mL. )osteriormente, se agregaron &6 mL de cido
sulf;rico concentrado, agitndose y de:ndose reposar /J h hasta la
separacin de las fases, obtenindose una fase acuosa de color pardo claro. "l
extracto orgnico se traslad a un matra' baln de &66 mL, y se le agreg
sulfato de sodio anhidro para eliminar el agua. +espus se evapor el solvente
mediante evaporacin a ba:a presin, obtenindose un volumen final de -mL.
11
-! )ara la purificacin y fraccionamiento de las dioxinas, se utili'aron
tres columnas de adsorbentes de diversa naturale'a3 slica gel, florisil y
al;mina.
?na ve' preparadas y acondicionadas las columnas, se eluye el extracto
obtenido con /&6 mL de hexano a travs de la columna de slica en tndem
con la de florisil.
5e descarta esta primera fraccin eluida con hexano y se retira la
columna de slica gel. +espus se eluy con una me'cla 963,6 de tolueno(ter
etlico, en la cual se recuperan las dioxinas, siendo necesario volver a
reconcentrar la fraccin eliminando el tolueno por evaporacin.
A continuacin, se hace pasar este extracto a travs de la columna de
al;mina, eluyndose con /& mL de hexano, efectundose despus una
segunda elucin con /6 mL de una me'cla 903/ de hexano(diclorometano,
descartndose estas dos fracciones. ?na tercera elucin de &6 mL de hexano(
diclorometano al &6 > permiti recuperar los )*++sA)*+.s.
"sta fraccin se reconcentr mediante evaporacin a ba:a presin hasta
sequedad total, transfirindose luego a un vial con ayuda de J porciones de ,
mL de diclorometano, evaporndose a sequedad con nitrgeno cada ve' que
se agregaba diclorometano.
"l extracto seco se reconstituy con & OL de nonano y se adicionaron &
OL del estndar ")A ,F,-255 para reali'ar la cuantificacin.
J! )ara la separacin y deteccin, se reali' el anlisis de los extractos
por cromatografa de gases con un detector de espectrometra de masas de
ba:a resolucin. *ada ve' que se inyectaban muestras se inyectaba tambin un
12
,. *olumna de slica modificada /. *olumna de florisil -. *olumna de al;mina
estndar de referencia para controlar los tiempos de retencin y as poder
identificar los analitos presentes.
&! *omo di:imos al principio, el ;nico mtodo que se puede emplear
seg;n la normativa europea actual como mtodo de confirmacin es el
@7B*A@7C5. )or ello, fue necesario validar este mtodo analtico como
adecuado para la determinacin de dioxinas en carne de vacuno.
)ara ello, se evaluaron los siguientes parmetros3
("xactitud como porcenta:e de recuperacin (> 7!
()recisin como desviacin estndar relativa (>75+!.
)ara ello fue necesario emplear la misma metodologa analtica, con la
salvedad de que adems de agregar el estndar ")A,F,-L*5 durante la
extraccin de la grasa tambin se a4adi el estndar ")A,F,-)A7.
?na ve' validado el mtodo, se aplic a las ,6 muestras de carne de
vacuno.
6.! Conc$usiones
a! 5e pudo validar el mtodo, a la vista de la tabla 2
)ara la validacin del mtodo,
se han considerado solo la
/,-,%,0( 1*++ y la /,-,%,0(
1*+., debido a que estos
congneres se encuentran en
menor concentracin.
"stos resultados cumplieron
con los criterios de aceptacin
establecidos por la ?5")A ,F,-, que dice que el valle de ismeros especficos
debe ser inferior al /& >. *omo se puede ver, el resto de criterios de validacin
tambin se encuentra dentro de lo estableciodo por el mtodo ?5")A ,F,-.
b!*on el mtodo
validado, se anali'aron las
die' muestras de carne,
expresndose los resultados
en pgAg grasa, como se
puede ver en el siguiente
grfico3
13
c! 5in embargo, como ya di:imos, los grados de toxicidad de los
)*++A)*+. se expresan a nivel mundial en pg de .actor de 1oxicidad
"quivalenteAg grasa, seg;n la LC5 (S@L(1"<!. )ara ello, a cada congnere
se le aplica un factor de toxicidad, que aparecen recogidos en la tabla del
apartado ,.,. Aplicando a cada ismero su factor de toxicidad, se obtuvieron
los siguientes resultados3
*omo se puede observar, cuatro muestras de carne de las die'
anali'adas (*,, */, *0 y *,6! presentaron concentraciones de pg S@L(1"<A
g grasa superiores a los - pgAg grasa permitidos por la regulacin de la ?". )or
tanto, las cuatro muestras se identificaron como contaminadas.
d! As pues, se desarroll un mtodo analtico econmico y fiable para la
determinacin de dioxinas en carne de vacuno empleando B*AL7C5.
7.! 8i,$io.r#*1# uti$i4#d#
1.! L. Daccha et al. /6,6. *uantificacin de dioxinas por B*AL7C5 en carnes y
leches consumidos en Duevo Len.
14
&. Daccha et al. *uantificacin de dioxinas por B*AL7C5 en carnes y leches
consumidos en Duevo Len. *iencia ?ADL /6,, -9%3J6&.
+. Dielsen, 5. 5. Anlisis de los alimentos. "d. Acribia. Tarago'a (/66-!
0. *ommission 7egulation ("?! DE ,/&9A/6,, of / +ecember /6,,, amending
7egulation ,00,A/66F as regards maximun levels for dioxins, dioxin(liQe )*Gs
and non dioxin(liQe )*Gs in foodstuffs.
6. 7eglamento *" ,00-A/66F de la *omisin de ,9 de diciembre de /66F, por
el que se establecen mtodos de muestreo y anlisis para el control oficial de
los niveles de dioxinas y )*Gs similares a dioxinas en determinados productos
alimenticios.
7. *digo de prcticas para prevenir y reducir la contaminacin de los
alimentos y piensos con dioxinas y )*Gs anlogos a las dioxinas (*A*A7*)
F/(/66F!
9. Antn, A. y Li'aso, P. )*Gs y dioxinas. .undacin 2brica para la seguridad
alimentaria.
:. Cethods of analysis for the determination of dioxins and )*Gs. *odex
*ommittee on methods of analysis and samplings. (@ungary, Cay /66F!
;. +iscussion paper on methods of analysis for dioxins and dioxin(liQe )*Gs.
*odex *ommittee on methods of analysis and samplings. (@ungary, Carch
/669!
1<. 7omero Ble', .de'. Coreno et al. ?.de Almera. "mpleo de la
"spectrometra de masas como herramienta para la determinacin de txicos
en alimentos3 hacia la seguridad alimentaria. (Cundo alimentario,
"neroA.ebrero /6,6!.
Laura Bon'le' 8ila
<umica de los alimentos
15