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Captulo 24. Replicacin, Transcripcin y Traduccin


El dogma central de la Biologa involucra esencialmente la duplicacin del ADN, la
transcripcin de la informacin contenida en el ADN en forma de ARN y la traduccin de esta
informacin del ARN a la protena. Este principio se puede resumir de la siguiente manera:


Figura 1. La informacin fluye en una nica direccin del ADN a las protenas, pero hay excepciones,
como es el caso de la transcripcin de ADN a partir de ARN.

Transmisin de la informacin gentica
Implcito en la estructura de doble hlice del ADN esta el mecanismo por el cual este puede
replicarse (duplicarse), es decir hacer copias exactas de s mismo. La replicacin del ADN es
un proceso que ocurre slo una vez en cada generacin celular, por lo tanto, las dos clulas
hijas provenientes de la divisin celular contienen una copia idntica del ADN de la clula
madre que le dio origen.
Watson y Crick propusieron un mecanismo de replicacin semiconservativa en base al
modelo estructural del ADN planteado, segn el cual la doble hlice del ADN se abre por el
medio y las bases apareadas se separan a nivel de los puentes de hidrgeno. A medida que se
separan, las dos cadenas actan como moldes o guas, cada una dirigiendo la sntesis de una
nueva cadena complementaria a lo largo de toda su extensin.
Como vimos en el captulo 23, la complementariedad de las bases slo permite dos tipos de
apareamientos T-A y G-C; las bases se van agregando una a una y la seleccin de cul base
entra en un sitio especfico de la cadena en formacin, queda determinada por la base presente
en la cadena molde con la que se va a aparear. De esta manera, cada cadena molde forma una
copia de su cadena complementaria original y se producen dos replicas exactas de la molcula.
Este modelo brind una respuesta de cmo la informacin hereditaria se duplica y pasa de
generacin en generacin.
Este mecanismo se denomina replicacin semiconservativa porque la doble hlice progenitora
se replica dando lugar a dos dobles hlices hijas, cada una de las cuales est formada por una
cadena progenitora (cadena vieja) y una cadena hija (sintetizada de novo). La unidad que se
mantiene de una generacin a la siguiente, es una de las dos hebras individuales que formaba
parte de la doble hlice progenitora, es por ello que este proceso recibe el nombre de
replicacin semiconservativa.


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Figura 2. Mecanismo de replicacin, transcripcin y traduccin.

Replicacin del ADN
Luego del descubrimiento de la estructura del ADN, en 1957 dos bilogos americanos,
Matthew Meselson y Franklin Stahl utilizando cultivos bacterianos de Escherichia coli,
demostraron que el ADN celular se replica por el mecanismo semiconservativo propuesto por
Watson y Crick. En el experimento, aprovecharon la disponibilidad de un istopo pesado del
nitrgeno (
15
N) y un mtodo extremadamente sensible para separar macromolculas a base de
su densidad.
Estos investigadores utilizando el elemento N presente en la molcula de ADN, como el
14
N y
el la incorporacin del
15
N radiactivo, pudieron demostrar que cuando el ADN se replica, una
de sus cadenas pasa a las clulas hijas sin cambiar (
14
N) y es la que acta como de molde o
patrn, para as formar una segunda hebra complementaria (
15
N y completar las dos cadenas
del ADN.
El inicio de la replicacin, tanto en procariotas como en eucariotas, se produce cuando la
doble hlice de ADN es desenrollada y abierta en una secuencia especfica de nucletidos
denominada origen de replicacin. En los procariotas existe un nico origen de replicacin,
localizado dentro de una secuencia especfica de nucletidos cuya longitud es de
aproximadamente 300 pares de bases; en los eucariotas, en cambio, hay mltiples orgenes de
replicacin.
Si se observa la figura 2, la zona de sntesis donde se comienzan a separar las cadenas
progenitoras, la molecla de ADN parece formar una estructura en forma de Y, denominada
horquilla de replicacin. Dentro de esta horquilla, la ADN polimerasa, sintetiza las nuevas
cadenas complementarias. La replicacin es bidireccional, por lo tanto existen dos horquillas de
replicacin que se mueven en direcciones opuestas desde el origen de replicacin.

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Para la sntesis de una nueva cadena complementaria de ADN se necesita no solo la presencia
de la cadena progenitora (vieja) que sirva de molde, sino tambin de una secuencia de inicio
para la nueva cadena que permita que la ADN polimerasa prolongue la cadena. Esta secuencia
de inicio, conocida habitualmente como cebador (primer, en ingls) est formada por
nucletidos de ARN. Los nucletidos de ARN pueden formar puentes de hidrgeno con los
nucletidos de la cadena de ADN, siguiendo un principio similar de complementariedad (la G
se aparea con la C, la A del ARN con la T del ADN y el U del ARN con la A del ADN). La
sntesis del cebador es llevada a cabo por una enzima denominada ARN primasa.
Con los cebadores de ARN colocados en el lugar correcto, la ADN polimerasa agrega
nucletidos al extremo 3 de las cadenas en crecimiento y a continuacin cataliza la formacin
del enlace fosfodister para ligar este residuo a la nueva cadena que crece. El complejo
polimersico, no formar la unin fosfodister, a menos que la base que est entrando a la
cadena en formacin, sea complementaria a la base existente en la cadena patrn. La frecuencia
con la que se inserta una base equivocada es menor a 1 en 100 millones, debido a la capacidad
de la ADN polimerasa de corregir errores (eliminacin de nucletidos mal incorporados).
Se comprob que las primeras polimerasas descubiertas sintetizaban nuevas cadenas
solamente en la direccin 5- 3. Dada la estructura antipararela de la doble hlice de ADN, la
replicacin de las dos nuevas cadenas de ADN sobre los dos brazos de la horquilla de
replicacin pareca requerir la sntesis en la direccin 5- 3, sino tambin en la direccin 3- 5.
Durante varios aos los investigadores trataron de identificar otra ADN polimerasa que pudiera
funcionar en la direccin 3-5, pero no la encontraron. Un cientfico japons, Reiji Okazaki
encontr que, aunque la cadena 5-3 se sintetiza continuamente como una sola unidad, la
cadena 3-5 se sintetiza de manera discontinua, como una serie de fragmentos, cada uno de los
cuales es sintetizado en la direccin 5-3.
La cadena que crece de manera continua se conoce como cadena adelantada y la cadena que
se sintetiza por fragmentos se conoce como cadena retrasada. La sntesis de la cadena
adelantada requiere un nico cebador en un nico sitio, pero la sntesis de los fragmentos que
conforman la cadena rezagada, los fragmentos de Okazaki, requieren mltiples cebadores.
Una vez que la ADN polimerasa alarga estos cebadores, todos los fragmentos de ARN de la
hebra retrasada son degradados y reemplazados por ADN. Luego de que el cebador es
degradado, una enzima especfica es la encargada de unir todos los fragmentos sintetizados.
Sntesis de protenas
Los procesos que se llevan a cabo para la sntesis de protenas constan de dos pasos
fundamentales, la transcripcin (1) y la traduccin (2), a travs de los cuales la informacin
contenida en el ADN se convierte en protenas (Figura 1). En la transcripcin se sintetiza
ARN a partir de un molde de ADN y en la traduccin, la secuencia de bases del ARNm
especifica la secuencia de aminocidos que se ensamblarn para formar las protenas.
No solamente una, sino las tres clases de ARN, desempean funciones como intermediarios en
los pasos que llevan del ADN a la protena. Cabe destacar que la transcripcin de genes, aparte
de dar lugar a la formacin de ARNm, tambin sintetiza el ARNr (que forma parte de los
ribosomas, complejo compuesto por protenas y ARNr, donde se realiza el proceso de
traduccin) y el ARNt (molculas que funcionan como adaptadores en dicho proceso de
traduccin).

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1) Transcripcin
En una clula eucariota, el ARNm, es sintetizado en el ncleo y trasladado a los ribosomas en
el citoplasma. El ARNm lleva la informacin que dicta qu aminocidos formarn la protena
que se va a sintetizar.
Las molculas de ARNm son copias (transcriptos) de secuencias de ADN, pero a diferencia de
las molculas de ADN, las molculas de ARN son de cadena nica (monocatenaria). En cada
evento de transcripcin, se transcribe solo una de las dos cadenas del ADN y segn el gen en
cuestin, se transcribe una cadena o la otra, nunca las dos.
Como ocurre en la sntesis de ADN, los ribonucletidos presentes en la clula como
trifosfatos son aadidos por una enzima ARN polimerasa, que se desplaza por la cadena patrn
de ADN y va insertando nucletidos de ARN siguiendo la complementariedad de bases. Por
ejemplo: si la secuencia de ADN es: 3'... TACGCT...5', la correspondiente secuencia de
ARNm mediada por la ARN polimerasa ser: 5'... AUGCGA...3'. Es decir, esta enzima
cataliza la adicin de ribonucletidos, uno a uno, al extremo 3de la cadena de ARN en
crecimiento. Es importante sealar que el ARNm, tiene una secuencia complementaria a la
cadena molde de ADN, que es igual a la otra cadena del ADN, salvo el remplazo de timina (T)
por uracilo (U). Pero, a diferencia de la ADN polimerasa, la ARN polimerasa no necesita un
cebador para comenzar la sntesis de ARN e inicia una nueva cadena simplemente uniendo dos
ribonucletidos.



ARN Polimerasa


Figura 3. La ARN polimerasa reconoce el promotor, una secuencia especfica de nucletidos,
que define el sitio de inicio de la transcripcin.

En una primera etapa, la enzima ARN polimerasa se asocia a secuencias especficas de
nucletidos del ADN, que se conoce como promotoras, las cuales dirigen la transcripcin de
segmentos adyacentes de ADN (genes) (Figura 3 y 4). Esta secuencia define adems el punto
exacto de inicio de la transcripcin y la direccin hacia la cual avanzar la ARN polimerasa.
Una vez unida la ARN polimerasa, abre y desenrolla la doble hlice de manera que queden
expuestos algunos nucletidos. sta va aadiendo ribonucletidos, movindose a lo largo de la
de la hebra de ADN que se utiliza como patrn, desenrollando la hlice y exponiendo as
nuevas regiones para transcribir, hasta que se encuentra con otras secuencias especficas del
ADN, llamadas terminadoras, que sealan la detencin de la sntesis de ARN.


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Cuando se ha copiado toda la hebra al final del proceso, las instrucciones genticas copiadas o
transcriptas al ARNm estn listas para salir al citoplasma. La cadena de ARN queda libre y el
ADN se cierra de nuevo, por apareamiento de sus cadenas complementarias (Figura 4). Esta
etapa, se denomina terminacin de la transcripcin.


Secuencia de inicio
(Promotor)

Secuencia de
terminacin

ARN m inmaduro

ADN


Figura 4. Inicio y terminacin de la transcripcin.


La transcripcin en las clulas eucariotas es igual, en principio a la de las clulas procariotas;
comienza con la unin de la enzima, una ARN polimerasa, a una secuencia determinada, el
promotor, en una cadena de la doble hlice. Esta cadena funciona luego como molde para el
ensamble de ribonucletidos. Las molculas de ARN transcriptas (ARNr, ARNt y ARNm)
desempean luego sus distintos papeles en la traduccin a protena de la informacin gentica
codificada.A pesar de esa similitud bsica, hay algunas diferencias significativas de
transcripcin, en los procariotas y en los eucariotas. Una diferencia es que los genes
eucariticos no estn agrupados en operones (en el cromosoma bacteriano, un segmento de
ADN que consiste de un promotor, un operador y un grupo de genes estructurales adyacentes,
se le denomina operon) en los cuales dos o ms genes estructurales se transcriben a una sola
molcula de ARN, como ocurre frecuentemente en procariotas. En los eucariotas cada gen
estructural se transcribe por separado.
Tambin hay diferencias en las enzimas implicadas en la trascripcin, siendo la ms notable
que en los procariotas una sola ARN polimerasa cataliza la biosntesis de los tres tipos de ARN.
En los eucariotas hay tres polimerasas diferentes: una transcribe los genes que se traducirn a
protenas, una segunda transcribe los genes de los ARN ribosmicos grandes, y una tercera
transcribe para una variedad de ARN pequeos, incluyendo los ARNt y los ARN pequeos del
ribosoma.


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Fenmenos postranscripcionales
Si bien los pasos bsicos son los mismos para la mayora de los organismos, hay diferencias
entre los distintos dominios (Bacteria, Arquea y Eucaria) tanto en la replicacin, como en la
transcripcin y en la traduccin. En los procariontes (organismos que carecen de ncleo y
orgnulos limitados por membranas), los ribosomas se unen a molculas de ARNm, sin sufre
ninguna modificacin y de esta manera su traduccin a protena comienza an antes de que se
haya completado la transcripcin. En los eucariontes, sin embargo, la traduccin y
transcripcin ocurren en forma separada tanto en tiempo como en espacio. La transcripcin
ocurre en el ncleo y la traduccin, en el citoplasma, puede ocurrir en minutos, horas o incluso
das ms tarde.
Una molcula de ARN recin sintetizada recibe el nombre de transcripto primario. La
modificacin ms extensiva de los transcriptos primarios tal vez tenga ms a lugar en los
ARNm que en los ARNt. Por ejemplo, antes de salir del ncleo para ser traducido, el ARNm
sufre varias modificaciones. Es decir que, an antes de haberse completado la transcripcin,
cuando la cadena de ARNm tiene aproximadamente 25 pares de bases de largo, al extremo 5
del ARNm se le une un nucletido inusual, la 7-metil guanina (caperuza). Esta caperuza es
necesaria para la unin del ARNm al ribosoma. Completada la transcripcin el ARNm se
separa de la cadena molde de ADN, y enzimas especficas agregan al extremo 3 una cadena
de nucletidos de adenina (que se puede denominar poliadenina, cola o poliA) (Figura 5). La
longitud de esta cadena puede ser de hasta 200 nucletidos.


CAPERUZA !!!!!!!!! #$ Exn Intrn Exn 2 Exn 3 Intrn
3 5

Figura 5. ARNm con caperuza y poliadenina


El transcripto primario de un ARNm eucaritico contienen las secuencias que corresponden a
un gen, aunque las secuencias que codifican un polipptido pueden no ser contiguas. Los
fragmentos que interrumpen la regin codificante del transcripto se denominan intrones y los
segmentos codificantes se denominan exones. Antes que las molculas de ARNm portando la
caperuza y la cola poliA, dejen el ncleo, se produce el procesamiento por corte y empalme
(splicing, en ingls), en el cual se eliminan las secuencias no codificantes del transcripto
primario (intrones) y los exones son unidos para formar una secuencia continua que especifica
un polipptido funcional (Figura 6). Luego de todas estas modificaciones, se obtiene un ARN
maduro o trascripto maduro.
Varios transcriptos idnticos de ARNm maduro pueden ser procesados de ms de una forma.
Este empalme alternativo resulta en la formacin de ms de un polipptido funcional a partir de
molculas de ARN que originalmente eran idnticas.
Los ARNm son finalmente transportados al citoplasma asociados a protenas
(ribonucleoprotenas), que ayudan a transportar las molculas de ARNm a travs de los poros
nucleares y adems ayudan a unir estos ARNm a los ribosomas.



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Exn Intrn Exn 2 Exn 3
Intrn
5 3
!!!!!!!!! #$
CAPERUZA
CAPERUZA !!!!!!!!! #$ Exn Intrn Exn 2 Exn 3 Intrn
3 5
NCLEO
CITOSOL
ARNm
inmaduro
ARNm
inmaduro
ARNm
maduro
!!!!!!!!! #$ Exn Exn 2 Exn 3 CAPERUZA
Splicing

Figura 6. Procesamiento del ARNm inmaduro por corte y empalme, dando lugar a un ARNm maduro
que es transportado al citoplasma.

2) Traduccin
Como se mencion anteriormente, las instrucciones para la sntesis de protenas estn
codificadas en secuencias de nucletidos en la molcula de ADN. La replicacin
semiconservativa del ADN transmite estas instrucciones de la clula madre a la clula hija y de
generacin en generacin. De esta manera cada nueva clula y cada nuevo organismo, hereda la
informacin necesaria para sintetizar las protenas especficas que determinan su estructura y
funciones particulares.
La sntesis de protenas requiere adems del ARNm, de los otros dos tipos de ARN: el ARNr y
el ARNt. Estas molculas difieren del ARNm estructuralmente y sobretodo funcionalmente. En
la mayora de las clulas el ARNr es el tipo ms abundante. Los ribosomas consisten de dos
subunidades (una pequea y otra ms grande) estando formadas aproximadamente por 2/3 de
ARN y 1/3 de protenas. Estas subunidades son diferentes en procariotas y eucariotas, en
cuanto al tipo de ARNr y las protenas que las conforman.
La subunidad pequea del ARNr, contiene un sitio de unin para el ARNm. Por lo cual,
cuando el ARNm se encuentra en el citoplasma, es reconocido mediante secuencias especficas
(en bacterias) y por la caperuza (en eucariotas), que estn presentes en el extremo 5de la
molcula de ARNm. La subunidad ms grande tiene dos tipos de unin para el ARNt. En este
momento cobra importancia el ARNt, que funciona como adaptador entre ARNm y los
aminocidos; es decir, es el diccionario por medio del cual se traduce el lenguaje de los cidos
nucleicos al lenguaje de las protenas. Existen ms de 20 tipos diferentes en cada clula, por lo
menos uno para casa uno de los tipos de aminocidos que se encuentran en las protenas. Los
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ARNt, tienen dos sitios de unin importantes, uno de ellos se conoce como anticodn, que se
acopla al codn (tres nucletidos continuos en el ARNm que forman el cdigo para un
aminocido especfico) de la molcula de ARNm (Figura 7). El otro sitio, en el extremo 3del
ARNt, se acopla a un aminocido en particular. Este extremo, siempre termina en una
secuencia que posee el triplete CCA, donde cada aminocido se une. La secuencia de los otros
nucletidos, vara de acuerdo con el tipo particular de ARNt.



Figura 7. Acoplamiento entre el ARNm y el ARNt, mediado por los ribosomas.

El aminocido correcto es unido a su ARNt por una enzima especfica llamada aminoacil-
ARNt sintetasa, con gasto de una molcula de ATP por cada aminocido que se une a la
enzima. Al haber 20 aminocidos, tambin hay 20 aminoacil-ARNt sintetasa. Todos los ARNt
con el mismo aminocido son activados por la misma enzima.
Primero, se escinde una molcula de ATP desprendindose dos fosfatos (PP) y se forma un
complejo entre el aminocido, una molcula de AMP y la enzima. Este complejo permanece
intacto hasta que se encuentra con el ARNt apropiado. Cuando esto sucede, la molcula de
AMP se desprende de la enzima y se forma un enlace entre el aminocido y el extremo 3del
ARN y luego, tambin se desprende el complejo aminoacil-ARNt. Este proceso se llama
aminoacilacin o "carga" (Figura 8).
Cuando la molcula de ARNt se ha unido mediante puentes de hidrgeno al ARNm, anticodn
con codn, coloca de esta manera el aminocido especfico en su lugar. Luego, se rompe el
enlace entre el ARNt y el aminocido, cuando se ha formado un nuevo enlace, un enlace
petdico. As este ARNt queda libre para unirse a otro aminocido y repetir este proceso de
carga.



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Figura 8. Complejo de activacin de los ARNt.


La etapa de elongacin de la cadena polipeptdica, se inicia cuando un segundo codn del
ARNm se coloca en la posicin opuesta al sitio A (aminoacil) de la subunidad mayor. Un
aminoacil-ARNt complementario al segundo codn del ARNm, se posiciona en el sitio A del
ribosoma (Figuras 10). Cuando los dos sitios P y A estn ocupados, una enzima que contiene la
subunidad mayor (peptidil transferasa) forja un enlace peptdico entre los dos aminocidos. El
ribosoma se mueve un codn a lo largo de la cadena de ARNm. Y se vuelve a repetir el mismo
proceso.
Ms de un ribosoma puede traducir un ARNm al mismo tiempo, haciendo posible con esto
producir varios polipptidos simultneamente a partir de un solo ARNm. Este conjunto de
ribosomas, se denominan polisomas.
La sntesis del polipptido se lleva a cabo hasta alcanzar el codn de finalizacin (alto o stop,
Figura 11).
El codn de finalizacin puede ser de tres tipos AUG, UAA y UGA; estos tres codones que
no son reconocidos por ningn ARNt (es decir, que no codifican para ningn aminocido)
funcionan como seales de terminacin. De esta manera, cuando aparece uno de estos
tripletes UAA, UAG, UGA; la protena recin formada se libera del ribosoma, gracias a que
un factor de libramiento lee el triplete y la sntesis del polipptido termina. De esta manera,
la cadena polipeptdica se desprende y las dos subunidades ribosomales se separan.








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Figura 9. lniciacion de Ia sfntesis proteica
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Figura 10 . Etapa de elongacin de la cadena polipeptdica.
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Figura 11. Terminaci6n de Ia traducci6n.



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Procesos de postraduccin

Una vez traducidas, las protenas deben adoptar una estructura tridimensional adecuada.
La cadena polipeptdica naciente se pliega y es modificada para adquirir su forma
biolgicamente activa. En algunos casos, el plegamiento se consigue gracias a la ayuda
de otras protenas denominadas chaperonas moleculares. Adems pueden ser
modificadas mediante la unin de distintas molculas como azcares, nuclesidos, o
fosfatos y dirigidas a lugares especficos de la clula, como por ejemplo, la membrana
celular, el ncleo, etc., de acuerdo con su funcin. Cuando una protena cumpli su
funcin o cuando no se pleg correctamente, es degradada. Las protenas que van a ser
degradadas son marcadas por la unin de una protena llamada ubiquitina. Una vez
marcadas, un complejo multiproteico denominado proteosoma, degrada las protenas en
aminocidos por ruptura de los enlaces peptdicos.

Aminocidos

Como vimos en el Captulo 12, las protenas contienen 20 aminocidos diferentes, pero el
ADN y el ARN contienen solo 4 nucletidos diferentes. De las 64 combinaciones
posibles de codones, 61 combinaciones especifican aminocidos particulares y 3 son
codones de terminacin (Tabla 1). Dado que 61 combinaciones codifican 20
aminocidos, esto denota que existe ms de un codn para la mayora de los
aminocidos, es por ello que se dice que el cdigo gentico es degenerado.

Tabla 1. El cdigo gentico, consiste de 64 combinaciones de tripletes (codones)
que determinarn cada uno de los aminocidos.


AMINOCIDO
CDIGO

DE 3 LETRAS

CDIGO

DE 1 LETRA


CODONES
Alanina Ala A GCC - GCU - GCG - GCA
Arginina Arg R CGC - CGG - CGU - CGA - AGA - AGC
Asparagina Asn N AAU - AAC
cido Asprtico Asp D GAU - GAC
Cistena Cys C UGU - UGC
Acido Glutmico Glu E GAA - GAG
Glutamina Gln Q CAA - GAC
Glicina Gly G GCU - GGC - CGA - GGG
Histidina His H CAU - CAC
Isoleucina Ile I AUU - AUC - AUA
Leucina Leu L UUA - UUG - CUA - CUG - CUU - CUC
Lisina Lys K AAA - AAG
Metionina Met M AUG -
Fenilalanina Phe F UUC - UUU
Prolina Pro P CCU - CCC - CCA - CCG
Serina Ser S UCU - UCC - UCA - UCG - AGU - AGC
Treonina Thr T ACU - ACC - ACA - ACG
Tirosina Tyr Y UAU - UAC
Triptofano Trp W UGC
Valina Val V GUU - GUC - GUA - GUG