Sntesis de bis-arilamidas y sulfonamidas y determinacin de su actividad como

inhibidores del inhibidor del activador del plasmingeno tipo 1(PAI-1)

Qu proponemos hacer?

Esta propuesta de investigacin se centra en la sntesis de 22 compuestos qumicos, cuyo
molde o estructura base son bisarilsulfonamidas y amidas con potencial accin inhibitoria
del inhibidor del activador de plasmingeno tipo 1 (PAI-1).

En un tamizaje de una librera de extractos naturales y fracciones del Instituto Nacional de
Biodiversidad, en el marco de una colaboracin con la Universidad de Michigan, se
obtuvo como resultado que el cido lecarnico y el cido 2-O-metilanziaico, dpsidos
liqunicos, son potentes inhibidores de PAI-1 (resultados no publicados). La actividad
promisoria se ve disminuida por la relativa labilidad de la funcin ster presente. Es por
ello que se propone sustituir la funcin ster por amidas y sulfonamidas produciendo un
grupo de anlagos, los cuales seran ms resistentes a la hidrlisis, a los que se le
determinar su actividad inhibitoria y se les realizar un estudio de relacin de estructura-
actividad (SAR).

Cul es la importancia del inhibidor del activador de plasmingeno tipo 1?

Para explicar la funcin del activador, debemos remitirnos a la hemostasis y la trombosis.
Cuando existe un dao en los vasos sanguneos se activan la hemostasis y la trombosis, las
cuales, en un mecanismo de tres fases, evitan la prdida de sangre. El sistema de
coagulacin es en realidad, un sistema que se encuentra en un delicado equilibrio
dinmico, controlado por una gran variedad de zimgenos, cofactores, fibringeno, una
transglutaminasa y otras protenas y enzimas, que convergen en la formacin del polmero
cruzado de fibrina
1
(ver figura 1).


Figura 1. Esquema representativo parcial de la hemostasis y trombisis, con la concomitante
formacin del polmero cruzado de fibrina y su degradacin posterior. Los nmeros romanos
representan los diferentes factores involucrados en el proceso.

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;9+%8&'#
TF VIIa
IX


2/13


La hemostasis inicialmente activa la vasoconstriccin y la activacin plaquetaria,
mediante la cual se agregan las plaquetas, formando un trombo que detiene el sangrado y
cuyo efecto es temporal
2
. En una segunda etapa, se activa la conversin de la protrombina
en trombina, la cual a su vez es la encargada de convertir el fibringeno en fibrina,
estabilizando de esta manera el cogulo. Una vez que se forma la trombina, su
concentracin debe ser cuidadosamente regulada para prevenir la formacin de ms
fibrina o la activacin plaquetaria
1
(ver figura 1).

De la misma manera que se debe regular la concentracin de trombina para evitar
bloqueos, el polmero cruzado de fibrina debe redisolverse; esto se lleva a cabo en un
proceso que se denomina fibrinlisis. Los cogulos de fibrina son degradados por la
proteasa de serina conocida como plasmina. La accin de activadores sobre el
plasmingeno (PA: plasminogen activators) genera la plasmina; estos activadores
hidrolizan el enlace Arg
560
-Val
561
en la molcula del Glu-plasmingeno generando dos
cadenas, una cadena derivada de la porcin N-terminal que contiene 560 aminocidos y 5
estructuras tipo kringles o donas, y una cadena ligera en la porcin C-terminal, compuesta
por 230 aminocidos
1,3,4
.

La plasmina se enlaza va residuos de lisina a la fibrina, mientras la trada cataltica
compuesta por serina, histidina y cido asprtico van degradando la fibrina. Si la plasmina
se encuentre enlazada a la fibrina, la fibrinlisis procede (ver figura 1). Si se formara
plasmina libre en condiciones fisiolgicas, sta es rpidamente inactivada por la accin de
un inhibidor de plasmina, !2-antiplasmina
1
.

Se conocen dos activadores de plasmingeno, el tisular (t-PA) y la uroquinasa (u-PA).
Estos activadores tienen propiedades funcionales diferentes: el t-PA se libera del endotelio
en condiciones de stress o dao, cuya funcin principal es el proceso de degradacin de la
fibrina en la hemostasis vascular, gracias a la alta afinidad de ste por la fibrina; por otro
lado, la uroquinasa es la responsable de originar plasmina extracelularmente. ltimamente
se ha descubierto que estos activadores tienen otros roles y en algunos casos, sus
funciones se traslapan
3
. De esta manera, la concentracin plasmtica de plasmingeno y
plasmina, est regulada por la !2-antiplasmina, los activadores de plasmingeno t-PA y u-
PA y de los inhibidores de estos activadores. Se han reportado 3 inhibidores principales.
Nuestro inters radica concretamente en el inhibidor del activador de plasmingeno tipo
1 (PAI-1).

El Inhibidor del Activador del Plasmingeno (PAI-1). El inhibidor del activador del
plasmingeno tipo 1 (PAI-1) es el inhibidor ms importante de los activadores del
plasmingeno. El PAI-1 es una glucoprotena de aproximadamente 50 kDa
5
. El PAI-1
pertenece a una superfamilia de protenas llamadas serpinas o inhibidores de las proteasas
de serina. La importancia de las serpinas es su rol en la regulacin de las diferentes
proteasas de serina, las cuales participan en muchos procesos en el organismo y
concretamente de inters para este proyecto, en la regulacin del activador del
plasmingeno.

La PAI-1, as como todas las serpinas, poseen en su estructura un lazo centro reactivo
(RCL) donde se desarrolla la inhibicin. El RCL reacciona con la proteasa escindindola y
quedando enlazada covalentemente a sta. Esta alteracin produce un cambio


3/13


conformacional y una translocacin, los cuales distorsionan el sitio activo de la proteasa
6
.
Debido a que el RCL mimetiza el sustrato ideal de la proteasa, y la escisin del lazo
implica el paso de una estructura estresada a una relajada, se forma un complejo muy
estable
7
. En estas condiciones, por ejemplo, el activador de plasmingeno se encuentra
inhibido, por lo que no se produce la generacin de plasmina (ver figura 2).

Las serpinas estn constituidas por 350-500 aminocidos y su estructura est conformada
por tres hojas !, de 7 a 9 hlices " y el lazo central reactivo (ver figura 3).
5,7
. La PAI-1,
cuando es sintetizada, se encuentra en su forma activa, sin embargo, un tiempo despus de
liberada, se convierte en su forma latente que es inactiva (ver figura 3). La forma latente
implica la insercin del lazo centro reactivo (RCL) en la hoja ! A. Esta caracterstica
complica el estudio de las conformaciones de PAI-1, y del diseo de sus posibles
inhibidores. Por esta razn, en muchas ocasiones se prefiere utilizar una PAI-1
recombinante, de 47 kDa, la cual es mucho ms estable en su forma activa
5,8
.







Figura 2. Mecanismo de accin de las serpinas

Figura 3. Estructura del PAI-1 en su forma activa y
latente. Tomado de
http://www.hhmi.swmed.edu/Labs/bg/projects/pai.htm


Qu patologas estn asociadas a PAI-1?

PAI-1 y los activadores que inhibe, u-PA y t-PA estn asociados a procesos fisiolgicos
normales, como la trombosis, la curacin de heridas y la migracin de clulas
9,9,10
. Sin
embargo, tambin estn asociados a varias enfermedades de importancia, como lo son
infartos del miocardio, cncer, aterosclerosis, obesidad y diabetes tipo 2
1,9-11
.

Los pacientes con sndrome de resistencia a insulina generalmente presentan obesidad, un
incremento en niveles de cidos grasos libres y triglicridos, adems de hipertensin,
hiperinsulinemia e hipofibrinlisis. Se ha demostrado que la insulina/proinsulina, los
triacilgliceroles y los cidos grasos libres estimulan la expresin de PAI-1
4,12,13
.

!"#$% '%()*() +),(-%./0%1%


4/13


La plasmina no solamente acta como reguladora de la coagulacin, sino que es una de las
proteasas de serina encargadas de la remodelacin de la matriz extracelular (red de
componentes proteicos). Esta matriz est sometida a constantes cambios, segn etapas de
desarrollo, requerimientos celulares o tejidos daados, razn por la cual est en constante
renovacin. La angiognesis (generacin de nuevos tejidos) ya sea de origen tumoral o en
procesos normales, tiene relacin con la plasmina, ya que se requiere de la degradacin de
la matriz extracelular para que las clulas tengan movilidad. Tambin se requiere de
inhibicin de esta degradacin para que puedan generarse los nuevos vasos sanguneos.
La hipoxia es uno de los factores que inducen angiognesis y se asocia tambin con el
cncer. En cncer de colon-rectal, se han encontrado concentraciones ms altas de PAI-1
en tejido enfermo que en tejido sano; de igual manera se ha visto en cncer de esfago. En
el cncer de pulmon tambin se han encontrado niveles altos de PAI-1, aunque el
pronstico de sobrevida desfavorable es inverso, excepto en adenocarcinoma y cncer de
pulmn escamoso; en cncer de ovario se asocian los niveles altos de PAI-1 con sobrevida
desfavorable y con recurrencia del tumor
1,12
.
Qu inhibidores hay para PAI-1 y cmo son estructuralmente?

Todas las caractersticas anteriormente mencionadas, hacen de PAI-1 un objetivo
interesante para el desarrollo de molculas con actividad inhibitoria. Aunque el
polimorfismo del PAI-1 complica el estudio de su estructura tridimensional, el inters en
desarrollar inhibidores de PAI-1 es creciente. De hecho, la bsqueda sistemtica de
inhibidores en bibliotecas de compuestos lleva ya dos dcadas
11
. As por ejemplo, se han
reportado pptidos sintticos que poseen la secuencia que interacta con el sitio activo de
PAI-1, de los cules, se han sintetizado pptidos mimticos
14
. Adems de estos pptidos,
la literatura reporta un derivado del cido saliclico HP129 (escogido de un monitoreo de
20,000 compuestos), un derivado del cido antranlico AR-H029953XX, una
dicetopiperazina XR5118 y un derivado de butadieno T-686
15
como componentes
inhibitorios. A excepcin del pentapptido, ninguno de estos derivados ha demostrado
mantener su actividad en pruebas in vivo. El desarrollo ms importante hacia un inhibidor
es el de la tiplaxtinina que discutiremos brevemente.

Tiplaxtinina (PAI-039). Investigadores de la empresa Wyeth Ayerst reportan varios
derivados del cido indoloxoactico evaluados con xito para la elaboracin de
inhibidores sintticos del PAI-1. La presencia y posicin en para del grupo F
3
CO- genera
un compuesto con muy buen perfil de actividad inhibitoria in vitro e in vivo. Este
compuesto se denomin tiplaxitinina
16
, mostrado en la figura 4.


Figura 4. Tiplaxtinina, inhibidor de PAI-1

En pruebas in vivo, este compuesto demostr ser eficiente provocando la prdida de peso
en animales, sin embargo, increment los niveles de LDL
17
. Sin embargo, este


5/13


compuesto presenta muy poca afinidad por PAI-1 y no inhibe PAI-1 en presencia de su
co-factor, vitronectina
10
.

Existen inhibidores de origen natural que sirvan como modelo?

En un tamizaje agresivo realizado por el grupo de investigacin de Daniel Lawrence de la
Universidad de Michigan, en el que se emple una librera de compuestos sintticos y de
origen natural, se encontraron compuestos polifenlicos del tipo galato (taninos
hidrolizables), con potente actividad inhibitoria
10
. Estos resultados coincidieron con
resultados previos, en dnde algunos dpsidos liqunicos haban dado resultados positivos
(resultados no publicados). Estos resultados parecen demostrar el por qu los polifenoles
de origen natural han sido asociados a proteccin cardiovascular
10
.

A partir de estos resultados, el grupo de investigacin de Michigan decidi sintetizar y
obtener comercialmente, un grupo de derivados de steres del cido glico, encontrando
que las 6 estructuras mostradas en la figura 5, presentan actividades en el orden de 10 a
200 nM, lo cual es un incremento de 10 a 1000 veces de mayor actividad, al comparar
estos resultados con los inhbidores previamente reportados. Estos inhibidores adems,
presentan la caracterstica de inhibir PAI-1 en presencia de vitronectina, pero de forma
reversible
10
.
Figura 5. Derivados del cido glico activos contra PAI-1

Otros esfuerzos conexos. En una colaboracin entre Daniel Lawrence y Cory Emal
(Universidad del Este de Michigan), se sintetizaron bis-arilsulfonamidas y
arilsulfonimidas, presentando actividades en el orden micromolar al ser ensayados contra
PAI-1
18
. Aunque las activiades reportadas no son mejores que las de los polifenoles antes
mencionados, se demostr que la extensin de la cadena que une a los dos arilos es crtica:
a mayor longitud, menor actividad. Por otro lado, la presencia de grupos hidroxilo en los
anillos aromticos, tambin aumenta la actividad inhibitoria.


6/13


Los resultados obtenidos por el grupo de Lawrence, nos sirven de base para modelar otros
posibles inhibidores y estudiar su eficacia y selectividad.

Por otro lado, el aislamiento guiado por bioensayo de dos extractos de lquenes de la
coleccin de INBio, demostr que el cido lecarnico y el cido 2-O-metilanziaico
presentan actividad inhibitoria de PAI-1.

El cido lecanrico (ver figura 6, resultados no publicados) es un dpsido frecuente en
varios lquenes, al cual se han asociado diversas actividades biolgicas como por ejemplo
inhibicin tumoral
19
, varias patologas asociadas a la inhibicin de la histamina
descarboxilasa como hemostasis microcirculatoria, secrecin gstrica, inflamacin y
algunas funciones neuronales
20
, antioxidante
21
y antimicrobiana contra la tuberculosis
22
.
La CI
50
exhibida por el cido lecarnico es promisoria pero no compite con las
encontradas en otros polifenoles. Sin embargo, este perfil podra explicar algunas de las
actividades biolgicas antes descritas.






Figura 6. Perfil de actividad inhibitoria del cido lecarnico contra PAI-1. Resultado
cualitativo de pre-seleccin.

Por otro lado, el cido 2-O-metilanziaico tambin result activo en este ensayo, y en
pruebas de selectividad, mostr desplazar al activador y no inhibi a una serpina
relacionada (ver figuras 7 y 8, datos no publicados). De este dpsido no se reportan
actividades biolgicas hasta nuestro conocimiento.



Figura 7. Perfil de actividad inhibitoria del cido 2-O-metilanziaico frente a PAI-1 y
selectividad frente a otras serpinas.


64642 (%of orginal)
0.001 0.01 0.1 1
P
A
I
-
1

A
c
t
i
v
i
t
y

(
%
)
0
20
40
60
80
100
120
64642
3-9-10
Parameter Value Std. Error
IC 50 1.025 0.063
Slope factor 2.630 0.528
O
O
COOH
OH
OH HO
64644 (%of orginal)
0.001 0.01 0.1 1
P
A
I
-
1

A
c
t
i
v
i
t
y

(
%
)
0
20
40
60
80
100
64644
3-9-10
Parameter Value Std. Error
IC 50 0.093 0.017
Slope factor 1.186 0.211
2'-O-Methylanziaic Acid (

M)
0.01 0.1 1 10 100
S
e
r
p
i
n

A
c
t
i
v
i
t
y

(
%
)
0
20
40
60
80
100
120
PAI/uPA (IC50 : 4.44

M)
PAI/tPA (IC50 : 4.62

M)
ATIII/
!IIa


7/13


O
O
OH O H
O
O
OH
Figura 8. Estructura del cido 2-O-metilanziaico.

La diferencia estructural entre ambos dpsidos es la cadena aliftica (pasando de C1 a C5)
y la existencia del grupo metoxi en lugar del hidroxilo en el arilo del cido benzoico. Es
posible que el mecanismo de accin de estos steres sea similar al observado para los
polifenoles reportados por el grupo de Lawrence.

Planteamiento del problema a resolver: Hiptesis

Nuestra hiptesis se centra en los resultados obtenidos para los dpsidos liqunicos y los
observados para las bis-arilsulfonamidas y arilsulfonimidas:
1. La sustitucin de la funcin ster por amidas producir un inhibidor de PAI-1 ms
estable
2. La incorporacin de una sulfonamida en sustitucin de la amida, podra
proporcionar un inhbidor de PAI-1 con mayor perfil de actividad
3. La sustitucin del resto cido benzoico por un cido indolactico, podra combinar
los mecanismos de accin observados para la tiplaxtinina con los de los
polifenoles, que se piensan, son diferentes
4. La diferencia de actividad observada entre los dos dpsidos se origina en la cadena
aliftica. La actividad podra mejorarse si la parte aliftica reside en la unin de
ambos restos aromticos

Con estos postulados en mente, nos proponemos sintetizar 22 compuestos que se
describen a continuacin:



8/13




HO
R
1
OH
O
N
OR
R
1
COOH
R
2
n
Grupo 1: Influencia de la cadena lateral
n=0; R=H
1: R
1
=CH
3
; R
2
=H
2: R
1
=H; R
2
=CH
3
3: R
1
=C
5
H
11
; R
2
=H
4: R
1
=H; R
2
=C
5
H
11
Grupo 2: Influencia del OR
n=0
5: R=R
1
=CH
3
; R
2
=H
6: R=R
2
=CH
3
; R
1
=H
Grupo 3: Aumento de la flexibilidad entre
ambos arilos
n=1; R=H
7: R
1
= C
5
H
11
; R
2
=H
8: R
1
=H; R
2
= C
5
H
11
HO
R
1
OH
S
O
N
OH
R
1
COOH
R
2
n
O
Grupo 4: Comparacin con grupo 1
n=0
9: R
1
=C
5
H
11
; R
2
=H
10: R
1
=H; R
2
=C
5
H
11
Grupo 5: Comparacin con grupo 3
n=1
11: R
1
=CH
3
; R
2
=H
12: R
1
=C
5
H
11
; R
2
=H
13: R
1
=H; R
2
=CH
3
14: R
1
=H; R
2
C
5
H
11
HO
R
1
OH
O
N
R
2
n
N
COOH
H
HO
R
1
OH
S
O
N
R
2
n
N
COOH
H
O
Grupo 6: Cambio de arilo
n=0
15: R
1
=C
5
H
11
; R
2
=H
16: R
1
=H; R
2
=C
5
H
11
n=1
17: R
1
=C
5
H
11
; R
2
=H
18: R
1
=H; R
2
=C
5
H
11
Grupo 7: Cambio de grupo
n=0
19: R
1
=C
5
H
11
; R
2
=H
20: R
1
=H; R
2
=C
5
H
11
n=1
21: R
1
=C
5
H
11
; R
2
=H
22: R
1
=H; R
2
=C
5
H
11


9/13



Referencias
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Cambios Inducidos Por La Alimentacin Sobre Dicha Protena. 1202 (2001).
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Inhibitor-1. Methods in Enzymology 501, 177207 (2011).
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Plasmingeno-Plasmina y el Papel de PAI-1 en Patologas Humanas. Cancerologa
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Chem. 47, 34913494 (2004).
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Santos: 2009).
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Edwards, H. G. M. The analytical characterization of a depside in a living species:


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Spectroscopic and theoretical analysis of lecanoric acid extracted from Parmotrema
tinctorum Del. Ex Nyl. lichen. Journal of Molecular Structure 920, 128133
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21. Luo, H. et al. Lecanoric acid, a secondary lichen substance with antioxidant
properties from Umbilicaria antarctica in maritime Antarctica (King George
Island). Polar Biol 32, 10331040 (2009).
22. Honda, N. K. et al. Antimycobacterial activity of lichen substances. Phytomedicine
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Objetivo General: Evaluar un grupo de compuestos de bis-arilamidas y sulfonamidas
por su actividad inhibitoria en el ensayo de PAI-1

Objetivos Especficos:

1. Sintetizar y caracterizar espectroscpicamente los anlogos de bis-arilamidas y
sulfonamidas de los grupos 1,2,3,4,5 en la medida de lo posible.
2. Sintetizar y caracterizar espectroscpicamente los anlogos indlicos de los grupos
6 y 7, en la medida de lo posible.
3. Determinar las actividades inhibitorias de los componentes sintetizados
anteriormente
4. Analizar los resultados y modelar un posible mecanismo de accin de los
componentes activos
5. Divulgar los resultados

Metodologa sinttica:

La estrategia sinttica se basa en la reaccin de un haluro de acilo o sulfonilo con las
aminas correspondientes:



El acoplamiento se llevara a cabo de manera similar al descrito por El-Ayache et al.
1
para
las sulfonamidas, mientras que para los haluros de cido se usar el mtodo tradicional,
empleando zinc de ser necesario, para favorecer la formacin de la amida
2
. Los haluros de
cido y sulfonilo se sintentizarn empleando SOCl
2
tal y como tradicionalmente se
preparan
3
.

X
O R
OP PO
R
S
OP PO
O
X
O
+
Ar
Ar
RHN
NHR
A + B


11/13


Existen varios retos sintticos:
I. En la porcin A, la introduccin de los grupos alquilo si los cidos 2,4,6-
alquildihidroxibenzoicos no se pudieran adquirir. Sin embargo, de momento, en el
catlogo Aldrich estn disponibles los steres respectivos.
II. En la porcin A, la sulfonacin. Los 1,3,5-alquilhidroxibencenos estn disponibles
en Aldrich, por lo que una sulfonacin y posterior separacin dara los productos
esperados.
III. Las protecciones de los grupos hidroxilo podra realizarse va dihidropirano/PTSA,
tal y como se describe por Greene
4
. Alternativamente, se pueden emplear
protectores ms resistentes, como los grupos bencilo, segn el mtodo reportado
por Li et al
5
.
IV. Los arilos B presentan un mayor reto sinttico. A partir de precursores, se deben
emplear reacciones que permitan la introduccin de grupos alqulicos o
carboxlicos:



V. Finalmente, la porcin indolactica no es trivial. Sin embargo, se pueden partir de
dos sustratos a los que se les agregara la porcin actica posteriormente, tal y
como se describe por Brown & Garrison
6
desde 1955 para el cido 6-
nitroindolactico:


Caracterizacin

La caracterizacin espectroscpica se realizar empleando los instrumentos de la
Universidad de Costa Rica: RMN: el instrumento de 400 MHz Bruker Innova de la
Escuela de Qumica-INBio, el de 600 MHz Bruker Innova de CIPRONA. Espectrometra
de masas: a los compuestos qumicos sintetizados se les determinar su masa exacta hasta
el cuarto decimal. IR: instrumento Paragon PE de la Escuela de Qumica.

Todos los reactivos sern purificados por los mtodos clsicos descritos
3,5
en libros de
texto disponibles. Los disolventes sern destilados y su pureza determinada por IR y
constantes fsicas.


COOH
H
2
N
OH
R
OH
NC
COOH
R
N
H
O
2
N
N
H
NC
1. Me
2
NH/CH
2
O
2. KCN
3. Ni-Ra
N
H
G
HOOC
Se reduce


12/13


Pruebas inhibitorias
7,8


Estos ensayos se realizarn en la Divisin de Medicina Interna de la Escuela de Medicina
de la Universidad de Michigan, Ann Arbor, en colaboracin con el Dr. Daniel Lawrence y
el Dr. David H. Sherman.
Para el ensayo se utiliza PAI-1 humana glicosilada activa (PAI-1
glyc
), PAI-1 recombinante
no glicosilada (PAI-1) o PAI-1 recombinante murina (mPAI-1). El PAI-1 utilizado a una
concentracin de 2 nM se incuba por 15 min a 23 C con concentraciones crecientes del
compuesto a estudiar, en un medio compuesto por: 40 mM de cido 4-(2-hidroxietil)-1-
piperazinaetanosulfnico (HEPES) como buffer a pH 7.8, 100 mM de cloruro de sodio
(NaCl), 0.005% de Tween 20 y 0.1% de dimetilsulfxido ((CH
3
)
2
SO).
Posteriormente se agrega el activador del plasmingeno, ya sea el tisular (tPA) o el tipo
uroquinasa (uPA) a una concentracin de 3 nM, y se incuba por 30 min a 23C. A cada
concentracin de droga se le realiza un control sin el PAI-1.

La actividad enzimtica residual se determina mediante la adicin de un volumen
equivalente de 100 M del pptido Z-Gly-Gly-Arg-AMC (Calbiochem), el cual es un
sustrato fluorognico para el uPA o Pefafluor tPA (Centerchem), el cual es un pptido
tambin fluorognico con estructura: CH3SO2-D-Phe-Gly-Arg-AMC*AcOH. En ambos
casos se mide la liberacin del grupo AMC (7-amino-4-metil Coumarina) a 23 C a 370
nm (excitacin) y 440 nm (emisin).

Sustratos fluorognicos del tPA y el uPA

El porcentaje de cambio en la actividad de PAI-1 se calcula de acuerdo con la siguiente
ecuacin:
! !"#$%$&!& !
!
!
!!
!
!
!
!
!
!!
!
!
!

!!""
donde E
i
es la actividad enzimtica a la concentracin de droga i, P
i
, es la actividad
enzimtica en presencia de PAI-1 a la concentracin de droga i, E
0
es la actividad
enzimtica en ausencia de droga y P
0
es la actividad en presencia de PAI-1 en ausencia de
droga.


13/13


El uPA y el tPA son proteasa, como ha sido mencionado, las cuales, son inactivadas por el
PAI-1, de manera que si inhibimos el PAI-1 eficientemente, la actividad proteoltica no
ser afectada por la presencia del mismo.

Referencias:

1. El-Ayache, N. C., Li, S.-H., Warnock, M., Lawrence, D. A. & Emal, C. D. Novel bis-
arylsulfonamides and aryl sulfonimides as inactivators of plasminogen activator
inhibitor-1 (PAI-1). Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 20, 966970 (2010).
2. Meshram, H., Reddy, G. S., Muralidhar Reddy, M. & Yadav, J. Zinc mediated facile
amide formation: application to alkyl, aryl, heterocycle, carbohydrate and amino
acids. Tetrahedron Lett 39, 41034106 (1998).
3. Furniss, B., Hannaford, A., Rogers, V., Smith, P. & Tatchell, A. Vogels Textbook of
Practical Organic Chemistry. (Longman Group: London, 1989).
4. Greene, T. Greene's Protective Groups in Organic Synthesis - Peter G. M. Wuts,
Theodora W. Greene - Google Books. (2007).
5. Li, J. J., Limberakis, C. & Pflum, D. A. Modern Organic Synthesis in the Laboratory.
198 (Oxford University Press, USA: 2007).
6. Brown, R. K. & Garrison, R. A. Derivatives of Indole, 6-amino-3-indolacetic Acid. J.
Am. Chem. Soc. 77, 38393842 (1955).
7. Cale, J. M. et al. Characterization of a novel class of polyphenolic inhibitors of
plasminogen activator inhibitor-1. Journal of Biological Chemistry 285, 7892 (2010).
8. Li, S.-H. & Lawrence, D. A. Development of Inhibitors of Plasminogen Activator
Inhibitor-1. Methods in Enzymology 501, 177207 (2011).