Está en la página 1de 7

1 7

Carrera 48 N 48Sur-75, interior 163


Centro Mltiple Las Vegas
Envigado (Antioquia), Colombia
PBX: (4) 4487935
servicioalcliente@deliverytechnologies.com.co
www.deliverytechnologies.com.co


PROTOCOLO


Validacin de un mtodo analtico por
Cromatogragra en Capa Fina, para la
identificacin de Anetol en extracto de Hinojo.




Patrocinado por: ****************



Protocolo No. ***************



Revisin: v1



2010/Marzo











2 7

Carrera 48 N 48Sur-75, interior 163
Centro Mltiple Las Vegas
Envigado (Antioquia), Colombia
PBX: (4) 4487935
servicioalcliente@deliverytechnologies.com.co
www.deliverytechnologies.com.co
APROBACIN DEL PROTOCOLO


Elaborado por



Bibiana Echavarra Zuluaga
Nombres y apellidos Firma

Directora de Validaciones y Estudios
de Estabilidad

Cargo:






Revisado por



Francisco Javier Olaya Ramrez
Nombres y apellidos Firma

Director Tcnico
Cargo:






Aprobado por



Francisco Javier Olaya Ramrez
Nombres y apellidos Firma Fecha

Director Tcnico
Cargo:














3 7

Carrera 48 N 48Sur-75, interior 163
Centro Mltiple Las Vegas
Envigado (Antioquia), Colombia
PBX: (4) 4487935
servicioalcliente@deliverytechnologies.com.co
www.deliverytechnologies.com.co
TABLA DE CONTENIDO

1. OBJETIVO .................................................................................................................................................4
2. ALCANCE ..................................................................................................................................................4
3. RESPONSABILIDAD ...............................................................................................................................4
4. INFORMACIN GENERAL ...................................................................................................................4
5. INFORMACIN DE LA MUESTRA ......................................................................................................5
6. METODOLOGA ......................................................................................................................................5
6.1 Equipos............................................................................................................................................................ 5
6.2 Insumos ........................................................................................................................................................... 5
6.3 Reactivos ......................................................................................................................................................... 5
6.4 Procedimiento analtico .................................................................................................................................. 5
7 PARMETROS A ESTUDIAR ................................................................................................................6
7.1 Selectividad ..................................................................................................................................................... 6
7.2 Linealidad ........................................................................................................................................................ 6
7.3 Exactitud ......................................................................................................................................................... 7
7.4 Precisin .......................................................................................................................................................... 7
8 CRITERIOS DE ACEPTACIN .............................................................................................................7
8.1 Selectividad ..................................................................................................................................................... 7
8.2 Linealidad ........................................................................................................................................................ 7
8.3 Exactitud ......................................................................................................................................................... 7
8.4 Precisin .......................................................................................................................................................... 7




















4 7

Carrera 48 N 48Sur-75, interior 163
Centro Mltiple Las Vegas
Envigado (Antioquia), Colombia
PBX: (4) 4487935
servicioalcliente@deliverytechnologies.com.co
www.deliverytechnologies.com.co
1. OBJETIVO

Validar un mtodo que permita la identificacin de Anetol en extracto de Hinojo.

2. ALCANCE

Este protocolo aplica para la validacin del mtodo analtico para la identificacin de Anetol en extracto de
Hinojo.

3. RESPONSABILIDAD

La ejecucin de este protocolo es responsabilidad del departamento de validaciones y estudios de estabilidad
de Delivery Technologies, empresa encargada por ******************* de la validacin del mtodo
analtico, para la identificacin de Anetol, en extracto etanlico de Hinojo. Adems, es responsabilidad de los
departamentos de control calidad y direccin tcnica de **********************, la revisin y aprobacin
del protocolo.

4. INFORMACIN GENERAL

Lista Chequeo SI NO N.A.
Materia prima del activo X
Especificaciones de la materia prima X
Certificado analtico del proveedor X
Certificado analtico del cliente X
Especificaciones del producto X
Certificados analticos del producto X
Placebo X
Estndar primario X
Estndar secundario X
Certificado analtico del estndar secundario X
Productos de degradacin X
Reactivos, insumos y equipos para llevar a cabo la validacin X

Fecha de Inicio: 2010/Marzo

Fecha final propuesta de la validacin: 2010/Marzo

Fecha final real: 2010/Marzo






Justificacin del retraso. N.A.














5 7

Carrera 48 N 48Sur-75, interior 163
Centro Mltiple Las Vegas
Envigado (Antioquia), Colombia
PBX: (4) 4487935
servicioalcliente@deliverytechnologies.com.co
www.deliverytechnologies.com.co
5. INFORMACIN DE LA MUESTRA

Descripcin de la matriz de
la muestra
Solucin acuosa de color caf oscuro, con olor y sabor caracterstico
Nombre del Analito trans-Anetol
Concentracin nominal de
trabajo
2.0 ug/mL
Estructura qumica del
analito

Peso molecular del analito: 148.20 g/mol
Solubilidad del analito: Soluble en alcohol, poco soluble en agua

6. METODOLOGA
6.1 Equipos
Equipo de obtencin de agua de osmosis PUREPRO
Ultrasonido marca Ultrasonic LC60H
Balanza Analtica
6.2 Insumos
Balones volumtricos
Pesa sustancias
Micro Pipetas
Placas cromatogrficas de Slica Gel 60 F
254


6.3 Reactivos
Agua grado desionizada
Tolueno grado reactivo
Acetato de etilo grado reactivo
Vainillina
cido Sulfrico concentrado, grado reactivo
6.4 Procedimiento analtico
6.4.1 Preparacin de la fase mvil

Preparar una mezcla de tolueno y acetato de etilo, en una proporcin 93% y 7 % respectivamente.

6.4.2 Preparacin de la solucin reveladora

Solucin I: Preparar una solucin de vainillina al 1% en etanol.
Solucin II: Preparar una solucin de cido sulfrico al 10 % en etanol.








6 7

Carrera 48 N 48Sur-75, interior 163
Centro Mltiple Las Vegas
Envigado (Antioquia), Colombia
PBX: (4) 4487935
servicioalcliente@deliverytechnologies.com.co
www.deliverytechnologies.com.co
6.4.3 Preparacin de la solucin estndar

Tomar 200.0 uL de estandar de Anetol y llevar a volumen en un baln volumtrico de 10.0 mL. De esta
solucin, tomar 1 mL y llevar a volumen en un baln volumtrico de 10.0 mL.

6.4.4 Preparacin de la muestra

Tomar 100.0 mL de la muestra y llevar a un embudo de separacin con tapa. Lavar el extracto con 10.0 mL
de tolueno. Tomar el extracto de tolueno (capa superior).

6.4.5 Condiciones cromatogrficas

Fase mvil: Tolueno/Acetato de Etilo 93:7
Fase estacionaria: Sliga Gel 60 F
254

Solucin reveladora: Vainillina-cido Sulfrico
Lectura: Visible

6.4.6 Procedimiento

Sembrar 20.0 uL de la sustancia a analizar en la placa cromatogrfica. Luego de la siembra, introducir la placa
en una cmara cromatogrfica que selle totalmente, la cual fue saturada previamente con la fase mvil por 30
minutos. Dejar eluir 15 centmetros como mnimo.
Sacar la placa y secar en campana de extraccin. Rociar 10 mL de la solucin I (ver 6.4.2) e inmediatamente,
rociar 10 mL de la solucin II (ver 6.4.2). Calentar a 110 C por 5-10 minutos, hasta que se observe la
coloracin de las bandas, con cuidado de no quemar la placa cromatogrfica. Observar en el visible.
Comparar la banda de la muestra contra de la un patrn de referencia de Anetol.


7 PARMETROS A ESTUDIAR
7.1 Selectividad
Sembrar 20.0 uL de cada una de las siguientes muestras:
1. Placebo
2. Materia Prima (1.0 gramos/25 mL de tolueno)
3. Producto terminado
4. Estandar
5. Solvente
Identificar cada una de las muestas sembradas en la placa cromatogrfica.

7.2 Linealidad
Preparar tres rplicas del estandar de Anetol, a cinco diferentes niveles de concentracin:

Nivel de Concentracin ug/mL de Anetol
1: 50 % 1.0
2: 100 % 2.0
3: 150 % 3.0
4: 200 % 4.0
5: 250 % 5.0






7 7

Carrera 48 N 48Sur-75, interior 163
Centro Mltiple Las Vegas
Envigado (Antioquia), Colombia
PBX: (4) 4487935
servicioalcliente@deliverytechnologies.com.co
www.deliverytechnologies.com.co
7.3 Exactitud
Preparar tres rplicas de una muestra de placebo cargado con estandar de Anetol, a las concentraciones
indicadas en la tabla. Luego, proceder tal y como se indica en el procedimiento analtico.

Nivel de concentracin Concentracin Anetol (ug/mL)
1. 80 % 1.6
2. 100 % 2.0
3. 120 % 2.4
7.4 Precisin
Preparar tres rplicas de una muestra, dos das, con dos analistas diferentes, y hacer una siembra con tres
muestras, en dos placas diferentes.

8 CRITERIOS DE ACEPTACIN
8.1 Selectividad
El placebo o solvente, no deben interferir con la identificacin del Anetol en la muestra.

8.2 Linealidad
La intensidad del color en las bandas debe ser directamente proporcional a la concentracin del analito.
8.3 Exactitud
La intensidad del color en las bandas debe ser directamente proporcional a la concentracin del analito, y a su
vez, no se deben presentar interferencias por el placebo.

8.4 Precisin
La intensidad de las bandas correspondientes a las tres rplicas de muestras, debe ser semejante.