Qumica Analtica

Cuaderno de prcticas y ejercicios

Educacin Superior Abierta y a Distancia Ciencias de la Salud, Biolgicas y Ambientales 1




Tercer Cuatrimestre
Divisin: Ciencias de la Salud,
Biolgicas y Ambientales


Unidad 4. Mtodos
espectrofotomtricos.

Actividad 5. Prctica 1: Cuantificacin de
glucosa en mermeladas.















Juan Carlos Gmez Pacheco.


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Marco terico.

Algunas reacciones entre azcares y otros reactivos qumicos generan productos
con color. La intensidad del color est relacionada con la concentracin inicial
de azcares. La absorbancia de soluciones de muestras se puede medir y
comparar con la absorbancia de soluciones patrn de concentracin de azcar
conocida. En el caso de polisacridos slo se conoce un nmero limitado de
reacciones que implican cambios de color, y la mayora de ellas implican
azcares sencillos, normalmente azcares reductores.
Uno de los mtodo para la determinacin de la concentracin de azcar en
mermelada implica la hidrlisis de muchos de los azcares no reductores (en
mermelada principalmente sacarosa) en glucosa, utilizando cido sulfrico
(H2SO4) y subsiguiente neutralizacin con hidrxido de sodio (NaOH). Los
azcares reductores (por ejemplo glucosa y fructosa) generan un producto rojo-
marrn cuando son calentados en presencia de cido 3,5 - dinitrosaliclico (DNSA,
tambin conocido como cido 2-hidroxi-3 ,5-dinitrobenzoico).
La concentracin del complejo coloreado se puede determinar con el
espectrofotmetro usando el LED azul (430 nm). La concentracin inicial de
azcar en las muestras de mermelada se puede obtener de la curva de
calibracin creada a partir de concentraciones de glucosa conocida.
(scienceinschool. 2013)

Objetivos

Conocer la concentracin de azucares en las muestras y el cambio que sufren
estos en los espectros de luz.

Desarrollo (materiales, reactivos y procedimiento)

Materiales.
- Mechero.
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- Vaso de precipitados.
- Matraz Erlenmeyer
- Matraz aforado
- Tubos de ensayo
- Balanza

Reactivos.
- DNSA (cido 3,5-dinitrosaliclico)
- NaOH
- tratrato de sodio y potasio
- Agua destilada
- H2SO4 2M
- Mermelada

Procedimiento.

Preparen el reactivo DNSA (cido 3,5-dinitrosaliclico): disuelvan 10 g de DNSA en
200 ml de NaOH 2.0M.
Calienten la disolucin y mezclen perfectamente.
Disuelvan 300 g de tratrato de sodio y potasio en 500 ml de agua (estabilizante
de color).
Mezclen ambas disoluciones, agiten y enrasen a 1.0 l con agua destilada.
Cuantificacin de azcares totales
Pesen 1.0 g de mermelada en un matraz Erlenmeyer y aadan 10 ml de H2SO4
2M.
Calienten en bao de agua hirviendo durante 20 minutos
Dejen enfriar y aadan con mucho cuidado 12 ml de NaOH al 10% p/v
Agiten y filtren a un matraz aforado de 100 ml y enrasen con agua destilada.
Transfieraan 10 ml de la disolucin de la mermelada a otro matraz aforado de 100
ml y enrasar con agua destilada.
Cuantificacin de azcares reductores
Pesen 3.0 g de mermelada en un matraz Erlenmeyer y aadan 50 ml de agua
destilada.
Calienten y agiten durante 10 minutos
Filtren a un matraz aforado de 100 ml y enrasen con agua destilada.
Transfieran 10 ml de la a otro matraz aforado de 100 ml y enrasar con agua
destilada.
Obtencin de la curva de calibracin
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Preparen la solucin estndar de glucosa (15 mg/ml): pesen 1.5 g de glucosa en
un matraz aforado de 100 ml y enrasen con agua destilada.
Etiqueten 5 matraces aforados de 100 ml con las letras A, B, C, D y E.
En cada matraz transfieran los volmenes de solucin estndar de glucosa y agua
destilada de acuerdo a la siguiente tabla:
Matraz A B C D E
Volumen de solucin estndar de
glucosa (ml)
2 3 6 8 10
Volumen de agua destilada (ml) 98 97 94 92 90
Concentracin de glucosa (mg/ml) 0.3 0.45 0.9 1.2 1.5
Etiqueten y llenen seis tubos de muestra tal y como se muestra en la siguiente
tabla:
Nmero de la muestra Blanco 1 2 3 4 5
Solucin estndar de glucosa
(matraz)
N/A A B C D E
Volumen de solucin estndar de
glucosa (ml)
0 1 1 1 1 1
Volumen de reactivo DNSA (ml) 1 1 1 1 1 1
Volumen de agua destilada (ml) 3 2 2 2 2 2
Calienten los tubos en agua hirviendo durante 5 minutos.
Dejen enfriar los tubos y aadan 6 ml de agua destilada a cada tubo.
Midan la transmitancia de cada uno de los tubos a 430 nm en el
espectrofotmetro.
Concentracin de
glucosa (mg/ml)
Transmitancia
(lectura del
Spektra, T%)
Absorbancia
(A)
Absorbancia
especfica de la
glucosa (A
Ablanco)
0 (Blanco) 27.54 0.56 0
0.30 23.44 0.63 0.07
0.45 20.04 0.69 0.13
0.90 18.21 0.74 0.18
1.20 15.13 0.82 0.26
1.50 14.45 0.84 0.28
Grafiquen los valores de absorbancia vs. Concentracn, para obtener la curva de
calibracin.
Medidas de las muestras de mermelada
Coloquen 1 ml de la disolucin de mermelada, 1 ml del reactivo de DNSA y 2 ml
de agua destilada en un tubo de ensayo.
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Calienten los tubos en agua hirviendo, durante 5 minutos.
Dejen enfriar los tubos y aadan 6 ml de agua destilada a cada tubo .
Determinen la transmitancia de cada tobo en el espectrofotmetro a 430 nm.
Los valores obtenidos para las muestras fueron los siguientes:

Muestra
Transmitancia
(lectura del
Spektra, T%)
Absorbancia
(A)
Absorbancia
especfica de la
glucosa
(A Ablanco)
1 18.6 0.73 0.17
2 21.3 0.67 0.11

Resultados

Grafiquen los valores de absorbancia vs. Concentracin, para obtener la curva
de calibracin.



Utilizando la ecuacin de la grfica despejando x

Sustituimos la absorbancia para cada muestra y obtenemos valores de
concentracin para las muestras, resultados en la siguiente tabla:
y = 0,05x + 0,019
R = 0,93
0.0000
0.0500
0.1000
0.1500
0.2000
0.2500
0.3000
0.3500
0.3 0.45 0.9 1.2 1.5
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a

Concentracin de Glucosa (mg/mL)
Curva de Calibracin de Glucosa
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Concentracin de glucosa (mg/ml)
0.79
0.44
frmula:

Donde:
C = Concentracin de la muestra expresado en
mg/mL
Pm = Peso de la muestra expresado en mg
Fd = Factor de dilucin de la muestra (mL)
El factor de dilucin de la muestra de mermelada de acuerdo a la preparacin
para la cuantificacin de azcares totales es:
Peso de la muestra: 1 g
Volumen de primer aforo: 100 mL
Volumen de alcuota: 10 mL
Volumen final de aforo: 100 mL

a) Despejando Pm y sustituyendo para cada muestra:

La concentracin de glucosa por gramo para la muestra 1 es de 0.79 g y para la
muestra 2 es de 0.44 g.

Conclusiones.

Se comprendi el uso del espectrofotmetro concentracin de azcares en una
sustancia.

Referencias.

1. scienceinschool. 2013. Espectrometra en las escuelas: experimentos
prcticos. Recuperado de:
http://www.scienceinschool.org/2010/issue14/spectrometer/spani
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sh.
2.