Livro - Metabolismo de Carbono Na Agricultura Tropical

METABOLISMO DE CARBONO NA AGRICULTURA TROPICAL
P ROF. C ARLOS P IMENTEL

UFRRJ
C ARLOS P IMENTEL
Eng. Agr.; D.E.A. e Dr. Sc.; Prof. Titular
Depto. de Fitotecnia - Instituto de Agronomia Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Seropdica - RJ - 23.851-970 - Brasil e-mail: greenman@amcham.com.br
FICHA TCNICA
Carlos Pimentel,1998 Direitos desta edio reservados EDUR - Editora Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Km 47 Antiga Rodovia Rio-So Paulo Seropdica - RJ - CEP: 23.851-970 Tel: (021) 682-1210 R. 325 - Fax: (021) 682-1201 e-mail: edur@ufrrj.br ISBN: 85-85720-16-6 Editorao, produo e capa: Foto da capa: Dr. Alberto M. T. Magalhes Prof. D. Laffray Estmato de Brassica campestris Regina Lcia Barreto Neves
Reviso de texto:
A reproduo desta obra, no todo ou em parte, por qualquer meio, ser permitida somente com a autorizao, por escrito, dos editores.
FICHA
CATALOGRFICA, ELABORADA PELA BIBLIOTECA CENTRAL DA UFRRJ
581.133 P644m
Pimentel, Carlos, 1955 Metabolismo de carbono na agricultura tropical / Carlos Pimentel. Seropdica: Edur, 1998. [9],150p.:il.
Bibliografia: p.141-159.
1. Carbono-Metabolismo. 2. Fisiologia vegetal. 3. Agricultura-trpicos. I. Ttulo CDD - 581.133
Verde que te quiero verde. Verde viento. Verdes ramas. El barco sobre la mar Y el caballo en la montaa. Versos de Federico Garcia Lorca, no poema Romance sonmbulo, sempre lembrados por meu pai.
Dedico: aos meus pais, Prof. Paulo Cezar de Almeida Pimentel e Aniela Maria Niedenthal Pimentel, pela minha formao; a minha esposa, Sandra Greenman, e as minhas filhas, Aniela e Joana, sobretudo pela pacincia durante a elaborao deste livro. Agradeo: aos amigos Dr. Alberto M. T. Magalhes, pela editorao do livro, Dr. Manlio Silvestre Fernandes, Dr. Eduardo Caruso Machado e Dra. Norma Gouveia Rumjanek, pela reviso do contedo; aos Prof. P. Louguet e Prof. D. Laffray, pela gentileza em ceder as fotos; e Virgnia Tenrio Carvalho, pelo auxlio na digitao.
PREFCIO
A fisiologia vegetal uma rea recente da cincia, nascida da botnica, com alguns poucos trabalhos realizados nos sculos 17 e 18, tendo, porm, um maior desenvolvimento neste sculo, sobretudo a partir das dcadas de 50 e 60. At hoje, grande parte do conhecimento usado em fisiologia vegetal oriundo da fisiologia humana, mais antiga e com maiores recursos para a pesquisa. No Brasil, essa cincia mais recente ainda, com maior formao de fisiologistas no exterior na dcada de 70, e conseqente consolidao dos cursos de ps-graduao em fisiologia vegetal, na dcada de 80. Essa cincia se desenvolveu na Europa e depois nos Estados Unidos, tendo uma preocupao evidente com o comportamento vegetal nas condies ambientais daquelas regies de clima temperado, bem distintas das nossas condies tropicais. Em clima temperado, os maiores problemas ambientais so as baixas intensidades luminosas durante a maior parte do ano, o frio, e agora a poluio ambiental. Nessas regies no existem grandes problemas com deficincia de nutrientes, uma vez que, atualmente, um de seus maiores problemas ambientais a contaminao do lenol fretico com excesso de NO3-, pesticidas e herbicidas, alm da poluio do ar, com a chuva cida. Para ns, em clima tropical, a radiao luminosa no limitante (s por excesso, causando fotoinibio), as temperaturas so altas, a poluio do ar ainda no um fator muito srio e lidamos freqentemente com deficincia de nutrientes, ao invs de excesso. Os estresses ambientais ocorridos aqui so bastante diferentes daqueles de pases temperados, portanto, a fisiologia vegetal para a produo agrcola em clima tropical tem outras preocupaes. Por isso, importante termos uma bibliografia especfica para as condies tropicais de pases onde a fisiologia vegetal e sua formao so ainda bastante novas possuindo, assim, poucos textos especializados. O livro texto brasileiro mais utilizado para as disciplinas de fisiologia vegetal so os 2 volumes coordenados pelo prof. M. G. FERRI, editado pela primeira vez em 1979 e de grande importncia para a lecionao da fisiologia vegetal. Contudo, a fisiologia vegetal voltada para o ambiente tropical fez grandes avanos at o momento (agora mais ainda com a biologia molecular), sofrendo modificaes de muitos de seus conceitos das dcadas de 70 e 80. Atualmente faz-se necessria a publicao de textos com referncias mais recentes para as diferentes disciplinas que lidam com a fisiologia vegetal, no Brasil. Para a graduao em Engenharia Agronmica na Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, o Departamento de Fitotecnia do Instituto de Agronomia, achando importante o aprendizado de fisiologia vegetal aplicada para a formao de nosso profissional, criou, alm da disciplina de fisiologia vegetal (que a fisiologia bsica), uma segunda disciplina chamada fisiologia
da produo, mais aplicada agricultura. Na ps-graduao, a formao em fisiologia aplicada produo vegetal ministrada nas disciplinas fisiologia da produo e crescimento das culturas, ecofisiologia das plantas cultivadas e nutrio mineral de plantas. Essa reviso uma atualizao do contedo de parte do programa da disciplina de fisiologia da produo e crescimento das culturas, para 1998, servindo de referncia para as outras disciplinas de graduao e ps-graduao, na rea de ecofisiologia de plantas cultivadas (nova sub-rea de pesquisa do CNPq, dentro da rea de agronomia). O trabalho se concentra no metabolismo de carbono voltado para a agricultura tropical. Alm dessas disciplinas, outras disciplinas como as de fitotecnia, podero se beneficiar dessa bibliografia, que no pretende ser completa sobre o assunto, mas contribuir com o ensino da fisiologia vegetal no Brasil, sobretudo para o profissional que lida com a agricultura.
SUMRIO
INTRODUO Captulo 1. 1.A. 1.B. 1.B.1. 1.B.2. 1.B.2.1. 1.B.3. 1.B.3.1. 1.B.3.2. 1.B.3.3. 1.B.3.4. 1.B.3.5. 1.C. 1.C.1. ASSIMILAO DE CARBONO As reaes luminosas As reaes escuras O ciclo de Benson-Calvin de reduo do carbono (via fotossinttica C3) Metabolismo C2 do glicolato-glicerato (fotorrespirao) Possveis funes da fotorrespirao A via fotossinttica C4 (Via de Kortschack, HatchSlack) Plantas C4 Os trs subgrupos de plantas C4 - bioqumica, fotoqumica e taxonomia Caractersticas de plantas C4 Plantas intermedirias C3-C4 Plantas com o metabolismo cido das crassulceas (CAM) Ecofisiologia de plantas C3, C4 e CAM Caractersticas das enzimas ribulose,1-5, bifosfato carboxilase/oxigenase (rubisco) e fosfoenolpiruvato carboxilase (PEP-case) Respostas das plantas C3, C4 e CAM aos fatores ambientais Adaptao de plantas C3, C4 e CAM aos ambientes tropicais RELAES FONTE/DRENO Partio de carbono na planta (aspectos agronmicos) Caractersticas morfo-fisiolgicas da fonte Velocidade de desenvolvimento da rea foliar (especfica) do dossel ou da rea foliar fotossinteticamente efetiva (tamanho da fonte) Idade da folha, durao da rea foliar (durao da fonte) e a senescncia
13 15 16 23 24 26 28 29 30 33 34 36 36 38
40 42 47 51 54 55
1.C.2. 1.C.3.
Captulo 2. 2.A. 2.A.1. 2.A.1.1.
55 56
2.A.1.2.
2.A.2. 2.A.2.1. 2.A.2.2. 2.A.3. 2.A.4. 2.A.4.1. 2.A.4.2. 2.A.4.3 2.B. 2.B.1. 2.B.2. 2.B.3. 2.B.4. 2.B.5. 2.B.6. Captulo 3. 3.A. 3.A.1. 3.A.2. 3.A.3. 3.B. 3.B.1. 3.B.2. 3.C. 3.C.1. 3.C.1.1. 3.C.1.2. 3.C.1.3.
Caractersticas morfo-fisiolgicas do dreno Tamanho e nmero de drenos Transporte de carbono (intensidade do dreno) e perodo de enchimento do dreno (durao do dreno) Relaes fonte/dreno nos estdios de desenvolvimento Comunicao e interao entre a fonte e o dreno Movimento e possveis aes de fitormnios na fonte e no dreno Resposta intracelular mensagem externa Uso de plantas transgnicas para a eficincia do balano de carbono Alocao de carbono na planta (aspectos bioqumicos) Metabolismo de carboidratos no cloroplasto e transporte para o citoplasma Sntese de sacarose no citoplasma Carregamento de sacarose no floema Transporte de carboidratos no floema Descarregamento de sacarose do floema para o dreno Metabolismo de carboidratos no dreno BALANO DE CARBONO E OS FATORES AMBIENTAIS Falta de gua e o metabolismo de carbono Eficincia no uso de gua Adaptao seca e zoneamento agrcola Uso de irrigao e salinizao do solo Temperaturas altas e o metabolismo de carbono Efeitos de temperaturas altas no balano de carbono Efeitos da temperatura no desenvolvimento vegetal Eficincia no uso de nutrientes e o metabolismo de carbono Interao entre o metabolismo de N e de C NO3- como fonte de N NH4+ como fonte de N Fixao biolgica de N2, em leguminosas REFERNCIAS
60 60 62 64 66 68 75 90 94 94 95 96 97 97 99
103 106 110 114 116 120 122 126 127 132 133 136 137 141
INTRODUO A agricultura em zona tropical, principalmente a de baixa tecnologia (sem irrigao e pouco adubada), tem de melhorar seus rendimentos, pois a populao mundial prevista para o ano 2025 de 8 bilhes, e mais de 90% deste crescimento ocorre em pases do terceiro mundo, nos trpicos. Todos os modelos sugeridos prevm uma sria falta de alimentos, especialmente em pases tropicais. Essa falta de alimentos ser exacerbada em pases tropicais do 3 mundo devido reduzida produtividade das culturas, aquecimento global, e degradao de solos, resultante da remoo da vegetao tropical. A necessidade premente de aumento da produtividade agrcola de culturas tropicais (mais vale alimentar do que remediar), deve basear-se na compreenso das interaes no ambiente da cultura, isto , da interao entre o sistema de cultivo, em que entram o componente da cultura, a atmosfera, o solo, e fatores biticos (pragas e doenas) (NORMAN et al., 1995). Nesse contexto, o Brasil representa um potencial para a produo de alimentos no mundo, ainda pouco explorado. Os cerrados brasileiros, que ocupam cerca de 22% do territrio nacional, com 183 milhes de hectares, ainda so pouco utilizados para a produo agrcola. Em zona tropical, com rea relativamente plana, permitindo a mecanizao, com perodo seco e de chuvas bem determinado, o cerrado permitir uma grande produo de alimentos (LUCCHESI, 1987). Segundo GOEDERT et al. (1980), a regio dos cerrados permite duplicar a produo brasileira de alimentos, produzindo alimentos para mais de 200 milhes de pessoas. Portanto, a compreenso dos aspectos fisiolgicos da produo de matria seca pela cultura, associada ao efeito do meio ambiente no qual a cultura est sendo realizada, permitir avanos e ganhos em produtividade agrcola. Nas duas ltimas dcadas, um significativo aumento do rendimento de culturas como o milho, arroz e trigo, foi conseguido atravs da manipulao gentica da arquitetura da planta (FAGERIA, 1992). A produtividade de um dossel de plantas com ndice de rea foliar, IAF, prximo do timo (IAF uma expresso da densidade populacional, dado pela rea foliar existente em relao superfcie de solo ocupada [MAGALHES, 1979]) dependente de: 1) para a fonte: taxa fotossinttica por unidade de rea; rea foliar especfica, fotossinteticamente efetiva (tamanho da fonte); e manuteno da rea fotossinttica durante o ciclo da planta (durao da fonte).
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2) para o dreno: nmero e tamanho de drenos para os fotoassimilados (fora do dreno); translocao de fotoassimilados (intensidade do dreno); e tempo de enchimento do dreno (durao do dreno). 3) sensibilidade aos fatores ambientais tropicais: tolerncia seca e s altas temperaturas; eficincia de uso de nutrientes disponveis no solo; etc... Essa reviso pretende discorrer sobre estes 3 tpicos, relacionando-os com a produtividade agrcola em ambiente tropical.
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Assimilao de carbono
Captulo 1 ASSIMILAO DE CARBONO

O processo fotossinttico, que ocorre somente em vegetais (autotrficos), essencial para a sobrevivncia dos animais considerados heterotrficos, pois no sintetisam estes compostos energticos (all flesh is grass). A vida, tal qual se conhece, depende deste processo primrio, que pode ser dividido em duas fases ou reaes: 1) reaes luminosas, para a captao de energia luminosa e transformao dessa em energia qumica (ATP), para as reaes endergnicas de formao de acares; e em poder redutor (NADPH), para a reduo do CO2 atmosfrico a carboidrato, mas tambm para outras reaes, que consomem ATP e NADPH; e 2) reaes ditas escuras, que so as reaes enzimticas de incorporao do CO2 atmosfrico em compostos orgnicos, utilizando o ATP e o NADPH produzidos nas reaes luminosas. Essas reaes escuras que so distintas para as vias de assimilao C3 e C4. As reaes luminosas ocorrem dentro dos cloroplastos, em vesculas chamadas grana, formadas pelas membranas dos tilacides, onde esto os componentes dos fotossistemas. Existem tambm cloroplastos com tilacides agranares, portanto sem os fotossistemas, que no fazem a converso de energia luminosa em qumica. Este tipo de cloroplasto agranar ocorre nas clulas da bainha perivascular de um dos tipos de plantas C4. Nesse caso, o ATP e o NADPH necessrios para a reduo do CO2 a carboidrato, nas clulas da bainha perivascular dessas plantas, so oriundos da interconverso de trioses-P e de cidos orgnicos produzidos nas clulas do mesfilo e que migram, via plasmodesmata, para essas clulas (Fig. 1). Certas plantas C4 da subfamlia Panicoideae , como cana de acar, milho, sorgo e outras, exibem os dois tipos de cloroplastos (Fotos 1A e B), segundo EDWARD & HUBER (1981) e HALL & RAO (1994). Apesar dos processos ocorrerem nas clulas do mesfilo, para o metabolismo de N e nas clulas da bainha perivascular para o metabolismo de C, ambos os processos necessitam de ATP e NADPH que, nessas plantas C4 do tipo NADP-ME (que o tipo de todas as plantas C4 cultivadas), so produzidos somente nas clulas do mesfilo, competindo, os dois processos, pela energia qumica produzida no mesfilo. Essas reaes luminosas ocorrem independentemente das ditas escuras. Por exemplo, quando a disponibilidade de gua na planta decresce, h o fechamento dos estmatos para evitar perdas de gua, mas isso diminui tambm a penetrao do CO2 atmosfrico para as reaes escuras. Contudo, a
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folha continua a ser iluminada e os fotossistemas produzindo ATP e NADPH que ficaro em excesso, e, associado ao efeito oxidativo do O2, em maior concentrao que o CO2, iro causar danos a estes fotossistemas. Tal efeito chamado fotoinibio (HALL & RAO, 1994). Todas as outras reaes de reduo, que ocorrem em tecidos fotossinteticamente ativos, como as de NO3- a NH4+, iro competir com a reduo do CO2 atmosfrico a carboidrato, pelo ATP e NADPH produzidos nos cloroplastos. Para as reaes escuras, devemos salientar que a nica via metablica de sntese de acares a via C3, mesmo em plantas C4. A via C4 , como ser visto, serve para aumentar a eficincia da via C3 (HATCH, 1976; LAWLOR, 1993). 1.A. AS REAES LUMINOSAS Os pigmentos fotossintticos absorvem radiao luminosa que promove, em tomos destes pigmentos, a passagem de um eltron de um orbital basal (o ltimo dos orbitais do tomo, preenchido com eltrons) para um orbital mais afastado do ncleo e portanto mais energtico, dito orbital de excitao (acima do orbital basal e sem eltrons). Esse fenmeno de excitao de eltrons nos tomos dos pigmentos de curta durao, sendo que a quantidade de energia absorvida tem de equivaler diferena de energia entre os orbitais basal e excitado. Os comprimentos de onda capazes de excitar estes eltrons variam dentro do espectro de luz visvel, segundo os pigmentos: a clorofila a absorve radiao luminosa a 420 e 660nm; a clorofila b a 435 e 625nm; a clorofila c a 445 e 625nm; a clorofila d a 450 e 690nm; os carotenides de 420 at 480nm, e as ficobilinas de 490 a 650nm. A luz azul, com menor comprimento de onda e maior energia, porm menos eficiente fotossinteticamente. Isto porque essa energia absorvida leva o eltron para um segundo orbital excitado, ainda mais externo, mas que retorna depois ao primeiro orbital excitado, liberando somente calor, e portanto, sem aproveitamento de toda energia fornecida pelo fluxo de ftons neste comprimento de onda. J a luz vermelha, com maior comprimento de onda, e portanto, menos energtica, leva o eltron somente ao primeiro orbital excitado (RICHTER, 1993). Esse orbital excitado instvel, pois o eltron mantido nele pela energia absorvida. Quando o tomo volta ao equilbrio, este letron retorna ao seu orbital basal (que determinado pelo nmero de eltrons daquele tomo). Com essa de-excitao, para que o eltron volte a posio de equilbrio no orbital basal, h a liberao daquela diferena de energia entre os orbitais. Essa
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As reaes luminosas
Cloroplasto DHAP G3P NADP NADPH2 ADP ATP PGA DPGA
Citoplasma DHAP G3P
NAD NADH
nitrito nitrato
DPGA PGA
ADP ATP
sntese de sacarose
DHAP G3P
DHAP
NADP NADPH2 ADP ATP
G3P DPGA PGA NAD NADH PGA

nitrito nitrato
malato NAD NADH oxaloacetato
malato NAD oxaloacetato NADH

nitrito nitrato
FIGURA 1. Transporte e interconverso de trioses e cidos orgnicos entre o cloroplasto e o citoplasma. A interconverso destes compostos, dentro do cloroplasto, consome ATP e NADPH (ou NADH). As trioses-P so transportadas para o citoplasma, em um transporte associado entrada de Pi para o cloroplasto. No citoplasma,a interconverso destes compostos, em sentido inverso, serve para gerar ATP e NAPH (ou NADH) neste compartimento. Tal processo importante como mecanismo para prover o citoplasma de energia e poder redutor, pois ATP e NADPH (ou NADH) no atravessam a membrana cloroplstica. DHAP: dihidroxi-acetona-fosfato; G3P: gliceraldedo-3-fosfato; DPGA: cido difosfo-glicrico; PGA: cido fosfo-glicrico.
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FOTO 1. Quatro estdios de desenvolvimento (aos 4, 5, 6 e 11 dias) para os 2 tipos de cloroplastos existentes em milho, uma planta C4 do tipo NADP-ME: Foto 1A. cloroplasto granar das clulas do mesfilo; e ...
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As reaes luminosas
Foto 1B. cloroplasto agranar das clulas da bainha perivascular. No 4 dia, os cloroplastos dos 2 tipos so idnticos, com prolamelas em feixes. A diferenciao dos grana ocorre a partir do 5 dia, no cloroplasto granar. Fotos cedidas por cortesia do Prof. P. Louguet, da Universidade de Paris 12.
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energia liberada sob a forma de fluorescncia , fosforescncia, calor e energia qumica para excitar outros pigmentos, ou nos centros de reao dos fotossistemas, para promover a troca de eltrons entre molculas, com potencial redox definido, componentes da cadeia de transporte de eltrons (Fig. 2). A fluorescncia emitida durante tal processo, serve para avaliar a atividade dos fotossistemas (GOVINDJEE & FORK, 1986; NOBEL, 1991). Para iniciar o processo de oxi-reduo na cadeia de transporte de eltrons, que vai gerar o ATP e NADPH, um quantum de luz absorvido por um conjunto de 250 a 300 clorofilas, chamadas de antena, transferido entre os pigmentos pelo mesmo processo inicial de absoro de energia, passando ou cedendo essa energia de molcula para molcula, com absoro de energia em diferentes (mas prximos) comprimentos de onda. A transferncia de energia de um pigmento a outro se faz quando ocorre a de-excitao e retorno do eltron ao seu orbital de equilbrio basal, no primeiro pigmento, promovendo a excitao do eltron mais externo do segundo pigmento. Assim, essa energia absorvida ser transferida de um pigmento a outro, com absoro em comprimento de onda prximo. Essa transferncia de energia entre os pigmentos se d at um par especial de clorofilas a, que so os chamados centros de reao dos fotossistemas (o P680 e o P 700, na Fig. 2). Ao promover o evento da transferncia de um eltron neste centro de reao, a clorofila especial atingir um potencial redox mais negativo, e o seu eltron excitado, quando se de-excitar, transferir a energia para o primeiro composto da cadeia de transporte de eltrons, daquele fotossistema que teve seu centro de reao excitado. Os compostos da cadeia de transporte de eltrons situamse lado a lado, na lamela dos tilacides, que vo formar os grana, dentro dos cloroplastos. Os fotossistemas s sero funcionais naqueles cloroplastos que formarem as invaginaes de lamelas tilacoidais, chamados grana. O lmen do granum tem uma importncia capital no transporte de H+ do estroma para o seu interior, promovendo a formao do ATP, pela ATPase intratilacoidal; posteriormente h extruso daquele H+ (RITCHER, 1993). Existem dois fotossistemas, com dois centros de reao: o fotossistema II (PS II) com absoro mxima a 680 nm e o fotossistema I com absoro mxima a 700 nm (PS I). Os dois fotossistemas atuam em conjunto no chamado esquema Z, como apresentado na Fig. 2 (AVRON, 1981; NOBEL 1991). A necessidade de funcionamento em conjunto se d porque o fotossistema I absorve e libera energia, porm no promove a fotlise da gua para a retirada dos eltrons, que sero transferidos entre os compostos da
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Fotossistema II
NO CCLICA
Fotossistema I
-0.8
-0.8
CCLICA
eeFerredoxina (-0.42V) eNADPH2
e-0.4
-0.4 e3H+ e-
Intermedirios
0.0 eADP+Pi ATP 3 H+ eePlastocianina
Plastoquinona A
NADP+ + H+
0.0
Potencial redox (V)
Potencial redox (V)
e-
As reaes luminosas
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P700
1/4 O2+ H+ 1/2 H2O
0.4
Ciclo Q Citocromo b6 + Citocromo f
e-
0.4
0.8 (0.82V)
1/2 H2O
0.8
PSEUDOCCLICA
P680
e-
1/4O2 +
H+
FIGURA 2. Esquema Z dos fotossistemas I (transporte de eltros cclico) e II (transporte de eltrons no cclico). O transporte de eltrons pseudocclico, ou reao de Mehler, usa os eltrons para a formao de H2O. Adaptado de Nobel (1991). P 680: centro de reao do fotossistema II, que uma clorofila absorvendo energia luminosa a 680 nm; P 700: centro de reao do fotossistema I, que uma clorofila absorvendo a 700 nm; ciclo Q: complexo entre os citocromos b6 e f, associado com a ATPase do tilacide, que promove o transporte de H+ para o lmem do granum.
cadeia de transporte de eltrons, comum aos 2 fotossistemas. A fotlise da gua est associada ao centro de reao do fotossistema II, o P680, transferindo os eltrons para a cadeia de transporte e liberando o O2 fotossinttico (LAWLOR, 1993). A liberao de O2 (que tambm serve para estimar-se a fotossntese, pois para a assimilao de 1 mol de CO2 h a liberao de 1 mol de O2), a partir da fotlise da gua, ocorre no lmen dos grana, e a gerao de NADPH est associada ao transporte no cclico de eltrons, no PSII: 2H2O = O2 + 4H++ 4e+ 2NADP + 2ADP + 2Pi + 4e- = 2NADPH + 2ATP O NADP+ o aceptor final de eltrons no PS II. Se o eltron, aps a excitao do P700, ao invs de ser transferido para o NADP+, retornar para o complexo citocromo b/f (ciclo Q), haver ento somente gerao de ATP, com o transporte cclico de letrons, no chamado PS I (RITCHER, 1993). Sob certas condies fisiolgicas de estresse, por salinidade, falta de gua e deficincia de nutrientes, possvel que a ferredoxina transfira o seu e- para o O2 molecular, formando H2O2, que dever ser reduzido pela catalase, gerando mais ATP sem NADPH , na chamada reao de Mehler, que o transporte pseudo-cclico de eltrons. Esse processo tem tambm a funo de produzir ATP adicional e consumir O2 molecular, em condies de fotoinibio. O O2 tem dois efeitos antagonistas sobre a fotossntese, um de proteo, pela utilizao de NADPH e ATP quando produzidos em excesso sob fotoinibio, pela fotorrespirao e pela reao de Mehler, e o outro destrutivo, pela ao das espcies ativas de oxignio, como a H2O2. Essas espcies ativas de oxignio desestabilizam as membranas, como por exemplo, os tilacides (VCHA, 1995). A interao e o controle dos sistemas de transporte de eltrons so essenciais para o balano de ATP e NADPH, necessrios ao metabolismo vegetal (LTTGE et al, 1996). Aproximadamente 8 quanta de luz so necessrios para a reduo de 1 mol de CO2 e liberao de 1 mol de O2, porm segundo FURBANK et al (1990), essa eficincia quntica pode ser alterada via ciclo Q, no complexo citocromo b 6/f, entre os dois fotossistemas. Este um mecanismo que pode aumentar o fluxo de H+ para o estroma, por eltron transportado a partir da plastoquinona. Como 2 a 3 moles de H+ so requeridos por mol de ATP formado pela ATPase transmembranar , a alterao no fluxo de H+ pode aumentar a produo de ATP para o ciclo C4, que consome mais ATP do que o ciclo C3 (KRMER, 1995).
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As reaes escuras
1.B. AS REAES ESCURAS Existem duas vias metablicas de assimilao do CO2 atmosfrico, que so as vias fotossintticas C3 e C4, porm a via C3 ou ciclo de Benson-Calvin a nica via metablica para produo de carboidratos, tanto para as plantas C3, quanto para as plantas C4. O metabolismo cido das crassulceas, em plantas ditas CAM, uma variante da via C4, com separao temporal entre os eventos de assimilao, pela via C4, noite e pela via C3, ao dia. Nessas plantas CAM, a assimilao do CO2 externo pela via C4, que no depende de energia, ocorre noite, e a via C3, dependente de energia, ocorre durante o dia, assim como a regenerao do substrato fosfoenolpiruvato (PEP) para iniciar o ciclo C4. A via fotossinttica C3, inicia-se pela assimilao do CO2: 1CO2 + 1ribulose-1,5-bifosfato (RuBP, com 5C) = 2cido fosfoglicrico (PGA, com 3C) Essa via tem como primeiro produto estvel um cido orgnico com 3 carbonos, por isso o nome de via C3. A reao inicial catalizada pela enzima ribulose-1,5-bifosfato carboxilase/oxigenase (rubisco). A via C3 tambm existe em plantas C4, s que todas as enzimas do ciclo de Benson-Calvin localizamse nicamente nas clulas da bainha perivascular, na chamada anatomia Kranz das plantas C4 (Foto 2). J a via fotossinttica C4 tem um cido orgnico de 4 carbonos como primeiro composto produzido pela reao catalizada pela fosfoenolpiruvato carboxilase (PEP-case), nas clulas do mesfilo: 1 fosfoenolpiruvato (3C) + 1CO2 = 1 oxaloacetato (4C). O oxaloacetato transformado em malato ou aspartato, migrando em seguida para a bainha perivascular, onde descarboxilado, liberando CO2 e um cido orgnico de 3 carbonos, que retorna ao mesfilo para regenerao do substrato da carboxilao primria. A via C4 fundalmentamente um mecanismo de concentrao de CO2 na bainha perivascular, promovendo o aumento da concentrao deste substrato para a enzima rubisco, favorecendo a via C3. A rubisco, que uma enzima bifuncional, apresenta uma interao competitiva entre os substratos CO2, para a funo carboxilase (fotossntese, pelo ciclo de Benson-Calvin) e o O2, para a funo oxigenase (fotorrespirao, pelo ciclo do glicolato-glicerato). Essas duas funes so indissociveis para o funcionamento dessa enzima (OGREN, 1984; BRYCE & THORNTON, 1996).
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1.B.1. O ciclo de Benson-Calvin de reduo do carbono (via fotossinttica C3)
As enzimas e reaes do ciclo de Benson-Calvin, que ocorrem no estroma dos cloroplastos, foram inicialmente estudadas e elucidadas pela equipe de Benson e Calvin, nos anos 50 (BENSON & BENSON-CALVIN,1950), e podem ser vistas segundo as fases do ciclo. a) Fase de carboxilao: a fixao do CO2 (Fig. 3) inicia-se pela reao do CO2 com uma molcula de ribulose-1,5- bifosfato (RuBP, 5C), catalizada pela ao carboxilase da rubisco, formando duas molculas de cido fosfoglicrico (PGA), que um cido orgnico de 3C. b) Fase de reduo: o PGA em seguida reduzido a uma triose-P, o gliceraldedo- 3P (G-3P), com o consumo de dois NADPH e dois ATP, pois foram formados dois cidos fosfoglicrico (PGA). Essa reduo em duas etapas envolve, primeiramente, a fosforilao do PGA ao cido 1,3difosfoglicrico (1,3-DPGA), com consumo de um ATP, seguida da reduo deste 1,3-DPGA a gliceraldedo-3P, com consumo de um NADPH (LAWLOR, 1995). Uma parte dessas trioses-P pode ser exportada para o citoplasma ou utilizada para a sntese de amido, ainda no cloroplasto. Porm, grande parte dessas trioses-P produzidas servir para a regenerao do substrato inicial da carboxilao, a RuBP. c) Fase de regenerao: de cada 3 moles de CO2 fixados, com consumo de 3 ribulose-1,5-bifosfato, seis triose-P so produzidas, sendo que cinco serviro regenerao do substrato RuBP para a carboxilao, com consumo de outro ATP, e uma ser desviada para a sntese de hexoses, na fase de sntese de produtos da fotossntese. A RuBP regenerada por uma srie complexa de reaes envolvendo acares-fosfatados com 3-, 4-, 5-, 6- e 7- carbonos. d) Fase de sntese dos produtos: os produtos finais da fotossntese so primariamente os acares (dentre estes, primeiro so formadas as trioses-P) mas tambm sero produzidos lipdeos, aminocidos e cidos carboxlicos em funo das condies de intensidade luminosa, CO2 e O2. Alta luminosidade com alta concentrao de O2 e baixa de CO2, causam aumento da produo de cido gliclico e glicina na fotorrespirao, enquanto baixa luminosidade induz formao dos cidos glutmico e asprtico. Da mesma forma, outros estresses ambientais podem induzir formao de glicerol e lipdeos (HALL & RAO, 1994). A reduo de uma molcula de CO2 a CH2O necessita de 3 ATP e 2 NADPH (5,2x104 joules). (LAWLOR, 1993).
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As reaes escuras
FOTO 2. Bainha perivascular de Atriplex nummularia, uma planta C4, evidenciando o acmulo de amido somente nos cloroplastos da bainha perivascular.
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As trioses-P formadas, que so consideradas o primeiro produto do ciclo de Benson-Calvin (LEEGOOD, 1996), podero ser utilizadas para a respirao celular, para a sntese de sacarose e transporte para outras clulas, ou para a sntese de amido no prprio cloroplasto, como reserva da clula fotossintetizante. Essas trioses-P so importantes tambm, pois a interconverso entre elas produz NADPH e ATP, servindo para transport-los. Por exemplo, a reao do G-3P a 1,3- DPGA e deste a PGA, produz NADPH e depois ATP, assim como a reao de dihidroxiacetona-fosfato (DHAP) a G-3P produz tambm NADPH e ATP (Fig. 1). A interconverso de cidos orgnicos tambm pode ter a mesma finalidade, como a reao do cido mlico a cido oxaloactico, produzindo NADPH. Esses produtos da fotossntese, passando do cloroplasto para o citoplasma e vice-versa, serviro para o transporte de poder redutor (NADPH) e energia (ATP) produzidos nos fotossistemas para o citoplasma e, posteriormente, para outras clulas (LTTGE et al, 1996).
1.B.2. Metabolismo C2 do glicolato-glicerato (fotorrespirao)
O O2 pode causar trs tipos de inibio fotossinttica: a primeira, atravs da inibio direta da atividade da enzima rubisco, oxidando essa enzima e diminuindo a sua capacidade de fixao do CO2. A segunda, pela oxidao de clorofilas, lipdios membranares e compostos intermedirios dos fotossistemas, na fotoinibio. A terceira inibio ocorre pela funo oxigenase da enzima rubisco, onde o substrato RuBP reage com o O2 ao invs de reagir com o CO2 (HALL & RAO, 1994). Essa funo oxigenase, como a carboxilao, s ocorre em presena da luz e tem, por isto, o nome de fotorrespirao; possui, como primeiro produto, um composto com 3C, o cido fosfoglicrico (PGA), que vai para o ciclo de Benson-Calvin, e um composto com 2C, o cido fosfogliclico (P-GLIC). A princpio, o cido fosfogliclico no tem funo no metabolismo celular (Fig. 3). As duas funes da rubisco agem competitivamente, e a taxa fotorrespiratria varia de 15 a 45% da fotossntese bruta (ZELITCH, 1971; LAWLOR, 1993). A taxa de liberao de CO2 fotorrespiratrio, que de 3 a 8 vezes a taxa de respirao, aumentada pela luz, temperatura e teores de O2 (RITCHER, 1993). Portanto, em condies de alta luminosidade e altas temperaturas, a fotorrespirao de plantas C3 aumentada, e a taxa fotossinttica e a produo de biomassa, diminuidas.(MARSCHNER, 1995).
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CICLO DE CALVIN (VIA EM C3) Cloroplasto Peroxissoma GLIC (1)ATP RuBP 2NH3 O2 OXOG. GLU RuBisCO NH3 CO2 NH3 (2)PGA (1)ATP GLIR NADH(?) OXOG. NH3 SER(3C) Mitocndria OH-PIR GLIA(2C)[+GLIA(2C)] NADH(?) CO2 P-GLIC + PGA GLU GLX(2C)[+GLX(2C)]
FOTORRESPIRAO (CICLO EM C2)
RuP
-4,-5,-6,-7 OSES
TRIOSE-P
As reaes escuras
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(2)ATP (2)NADPH2
Carboidratos
FIGURA 3. Via fotossinttica C3, pelo ciclo de Benson-Calvin, e o ciclo C2, que a fotorrespirao. Adaptados de Lorimer et al (1977) e Leegood (1996). PGA: cido fosfo-glicrico; 4-, 5-, 6-, 7- oses: carboidratos com 4, 5, 6 e 7 tomos de carbonos; RuP: ribulose-fosfato; RuBP: ribulose-bifosfato; P-GLIC: fosfo-glicolato; GLIC: glicolato; GLX: glioxilato; GLIA: glicina; SER: serina; OH-PIR: hidroxi-piruvato; GLIR: glicerato; OXOG: oxoglutarato; GLU: glutamato.
O cido fosfogliclico, produzido na fotorrespirao, desfosforilado a cido gliclico (GLIC, Fig. 3) e exportado do cloroplasto para o peroxissoma, onde oxidado a cido glioxlico (GLX). A reao da glicolato oxidase, formando o cido glioxlico, produz tambm H2O2, que reduzido pela ao da catalase. Em seguida, o cido glioxlico aminado gerando a glicina (GLIA). A formao da glicina acoplada ao sistema glutamato sintase/glutamina sintetase (GS/GOGAT) do cloroplasto, e o cido glutmico formado exportado para o peroxissoma, onde ocorre a transaminao, cedendo o grupamento amino (-NH2) para a formao de uma glicina. O segundo grupamento amino para a segunda glicina, oriundo da desaminao da serina (SER) a hidroxi-piruvato (OH-PIR) no prprio peroxissoma (BRYCE & THORNTON, 1996). A glicina formada transportada para a mitocondria, onde duas glicinas (2C cada) so transformadas em uma serina (3C), liberando o CO2 fotorrespiratrio e o primeiro grupamento amino para a formao de uma glicina. A serina formada volta ao peroxissoma, onde desaminada a cido hidroxipirvico, liberando o segundo grupamento amino para a formao da segunda glicina, havendo ento um equilbrio no fluxo de N (ZELITCH, 1973). Nessa organela, o cido hidroxipirvico reduzido a cido glicrico (GLIR) e este migra para o cloroplasto, onde fosforilado a cido fosfoglicrico (PGA) para entrar no ciclo de Benson-Calvin, consumindo pelo menos um ATP (OGREN, 1984). Portanto, de cada quatro carbonos (duas glicinas) que entram na fotorrespirao, trs carbonos so recuperados na forma do cido fosfoglicrico e um perdido na forma de CO2 (HALL & RAO, 1994). Nessa via, alm do consumo de ATP para a formao do cido fosfoglicrico, h consumo de um NADPH na reduo do cido hidroxipirvico a cido glicrico (LORIMER & BADGER, 1981) no peroxissoma. Porm, OGREN (1984) afirma que este NADPH consumido produzido na mitocndria, durante a descarboxilao de uma glicina e liberao do CO2 fotorrespiratrio.
1.B.2.1. Possveis funes da fotorrespirao
a) O cido P-gliclico gerado pela funo oxigenase da rubisco, no tem funo especfica no metabolismo vegetal, e seria uma perda de carbono se no houvesse o ciclo do glicolato-glicerato. Neste ciclo da fotorrespirao, h a recuperao de 3/4 do C, com 1 PGA (3C) gerado e 1 CO2 liberado (ZELITCH, 1973; LAWLOR, 1993).
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As reaes escuras
b) A fotorrespirao pode servir para a sntese de aminocidos a partir da transaminao de glicina e serina, produzidas na fotorrespirao. O fluxo de nitrognio na fotorrespirao dez vezes superior ao fluxo na assimilao primria de N, segundo LORIMER & ANDREWS, (1981). O ciclo de nitrognio fotorrespiratrio representa a maior parte da incorporao de NH3 em folhas, na maioria das plantas C3, em presena de luz (MARSCHNER, 1995). c) A evoluo da enzima rubisco se deu, a princpio, em uma atmosfera rica em CO2 e pobre em O2, quando surgiram os primeiros vegetais na terra (STRYER, 1995). Com a proliferao da vida no planeta, a atmosfera se enriqueceu em O2 produzido pela fotossntese destes primeiros vegetais, e a ao oxigenase, inerente enzima rubisco, comeou a tomar vulto. O surgimento de plantas mutantes com o ciclo glicolato-glicerato da fotorrespirao, onde h recuperao de parte do C, tornou-as mais eficientes do que aquelas que no o possuiam, e durante a evoluo dos vegetais, somente aqueles com o ciclo da fotorrespirao sobreviveram (TOLBERT, 1981). d) A fotorrespirao um processo que utiliza energia luminosa, podendo ento servir para evitar a fotoinibio, principalmente em plantas C3 ( HALL & RAO, 1994). A fotoinibio devida exposio da folha a altas intensidades luminosas, associado ao fechamento estomtico, quando h uma menor disponibilidade de gua, em um dia de alta insolao, por exemplo. Nessas condies onde h pouca reduo fotossinttica de CO2, pela baixa disponibilidade deste substrato com o fechamento estomtico, o excesso de energia gerada pela alta luminosidade, associado s oxidaes devido alta relao de O2/CO2, causariam danos irreversveis integridade das membranas dos tilacides e aos centros de reao, principalmente ao fotossistema II (WU et al, 1991). A fotorrespirao nessas condies pode servir para dissipao do excesso de ATP e NADPH; para a gerao de CO2 interno, mantendo uma atividade da rubisco; e para o consumo de oxidantes fortes como a H2O2, pela ao da catalase (LORIMER & ANDREWS, 1981; LTTGE et al, 1996).
1.B.3. A via fotossinttica C4 (Via de Kortschack, Hatch-Slack)
A via fotossinttica C4 utilizada para a assimilao fotossinttica em plantas C4, mas tambm em plantas CAM. As reaes enzimticas so as mesmas nos dois tipos de plantas, porm existem caractersticas distintas para cada uma delas.
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1.B.3.1. Plantas C4
Nos anos 60, KORTSCHACK et al. (1965) apresentaram resultados com cana-de-acar, onde os primeiros compostos estveis na fotossntese eram cidos orgnicos com 4C, os quais eram requeridos para posterior sntese do PGA. Persuadidos por KORTSCHACK, HATCH & SLACK (1966) identificaram algumas enzimas da via C 4 , assim como apresentaram evidncias da localizao e distribuio de certas enzimas entre o mesfilo e a bainha perivascular da anatomia Kranz, essencial para as plantas C4 (Fig. 4). A anatomia Kranz(coroa ou grinalda em alemo) j era conhecida por HABERLANDT (1884), sem que se soubesse o seu significado fisiolgico. As plantas C4 possuem a anatomia do tipo Kranz, com clulas distintas no mesfilo e na bainha perivascular. Algumas plantas chamadas intermedirias C3-C4, podem apresentar maior atividade da fosfoenolpiruvato carboxilase, sem ter a anatomia Kranz, no sendo, portanto, consideradas plantas C 4 (EDWARD & WALKER, 1983). Nas plantas C4, a parede celular, entre as clulas externas da bainha perivascular e as clulas mais internas do mesfilo, possui um nmero de plasmosdemos muito superior s outras paredes celulares, permitindo assim o trnsito dos cidos orgnicos para o metabolismo C4, e tambm o trnsito de trioses-P, que transportaro energia e poder redutor (Fig. 1) para o ciclo C3, na bainha perivascular (LTTGE et al, 1996). Na via C4, o CO2 atmosfrico fixado em um cido orgnico com 3C, o fosfoenolpiruvato (PEP) nas clulas do mesfilo, produzindo cidos orgnicos de 4C. Tais cidos orgnicos de 4C migram para a bainha perivascular, onde so descarboxilados, liberando CO2, e um cido orgnico de 3C, que retorna ao mesfilo para regenerao do substrato de 3C, visando a carboxilao primria. Portanto, na via C4 no ocorre produo de carboidratos, e ela servir somente para aumentar a concentrao do CO 2 na bainha perivascular, favorecendo a ao carboxilase da rubisco (PEISKER & HENDERSON, 1992). Essa via C4 inicia-se, ento, pela fixao do CO2 no PEP (3C), formando o cido oxaloactico (OXA) com 4C (STRYER, 1995), pela ao de fosfoenolpiruvato carboxilase (PEP-case) que se encontra no citoplasma (OLEARY, 1982), conforme a Fig. 4. O cido oxaloactico produzido pode, ento, ser transformado em cido mlico (MAL), com gasto de 1 NADPH, ou em cido asprtico (ASP). As duas reaes
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HCO3-
PEP-case
OXA ADP
NADP+
PEP ATP
NADPH
PGA PIR ASP MAL
DHAP
ALA
Mesfilo
ALA ASP ALA ASP
------------------------------------------------------------------------------------
PIR
MAL
Bainhas Perivasculares
PIR PGA CO2 CO2
PEP
OXA
PIR
MAL
OXA
CO2
As reaes escuras
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CICLO DE CALVIN CICLO DE CALVIN
DHAP
NADP+ ADP
NADPH ATP
CICLO DE CALVIN
CH20 CH20
CH20
TIPO NADP-ME
TIPO PCK
TIPO NAD-ME
FIGURA 4. Via fotossinttica C4, com os trs subgrupos, segundo a enzima de descarboxilao na bainha perivascular: NADP-ME: enzima mlica NADP dependente; PCK: enzima fosfoenolpiruvato carboxicinase; e NAD-ME: enzima mlica NAD dependente. Baseado em Hatch (1976) e Lawlor (1993). OXA: oxaloacetato; MAL: malato; ASP: aspartato; ALA: alanina; PIR: piruvato; PEP: fosfoenolpiruvato; PGA: cido fosfo-glicrico; DHAP: dihidroxi-acetonafosfato; CH2O: carboidratos.
ocorrem na natureza, porm maior atividade de uma das reaes sempre existe, levando j a uma pr-classificao das plantas C4 como sendo plantas a malato ou a aspartato (HATCH, 1976). Estes cidos orgnicos com 4C, o mlico ou o asprtico, migram ento para a bainha perivascular, onde sero descarboxilados por uma das trs enzimas de descarboxilao, liberando CO2 para ser incorporado RuBP, no ciclo de Benson-Calvin. Segundo a enzima de descarboxilao do cido com 4C, as plantas sero classificadas em trs tipos (Fig. 4). Os cidos com 3C resultantes da descarboxilao, o cido pirvico (PIR) ou a alanina (ALA), retornam ao mesfilo consumindo 2 a 3ATP para regenerar o substrato da carboxilao primria C4, o cido fosfoenolpirvico (RICHTER, 1993). Portanto, a via C4 serve para transportar e concentrar o CO2 na bainha perivascular, onde se dar a sua reduo a acares pela via C3, que a nica via metablica de sntese de carboidratos. Essa concentrao de CO2 na bainha perivascular aumentar a eficincia de sntese de acares, pois com alto teor de CO2 haver maior atividade carboxilase da rubisco, em detrimento da atividade oxigenase. H um gasto em torno de 5 ATP e 2 NADPH na via C4, porm o aumento do fluxo de H+ via ciclo Q nas plantas C4, produzir ATP complementar (FURBANK et al, 1990). A regulao dos eventos C4 no mesfilo j est bem caracterizada, porm a regulao da descarboxilao e o transporte de metablitos na bainha perivascular so menos esclarecidos, sobretudo pela dificuldade de se conseguir grandes quantidades de tecido dessa bainha. Os estudos sobre o controle da fotossntese C4 esto ainda no comeo, mas os trabalhos que esto sendo feitos com mutantes de Amaranthus edulis , sem algumas enzimas C4, e plantas transgnicas de Faveria bidensis , no CSIROAustrlia, podero impulsionar o conhecimento dos mecanismos de controle da fotossntese C4 (LEEGOOD, 1996). Como visto, h um separao espacial dos eventos C4 e C3 nessas plantas, o primeiro ocorrendo no mesfilo e o segundo na bainha perivascular (APEL, 1994). A sndrome C 4 particularmente proeminente nas famlias Gramneas, Ciperceas e Chenopodiceas. Nessa ltima, o gnero Atriplex possui espcies C3 e C4, o que permite uma comparao mais prxima entre as duas vias fotossintticas para estudos sobre o comportamento de plantas C4 (BJRKMAN et al., 1971; PIMENTEL, 1985). importante ressaltar tambm que oito entre as dez ervas invasoras mais importantes na agricultura usam a via C4 (NOBEL, 1991).
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As reaes escuras
1.B.3.2. Os trs subgrupos de plantas C4 - bioqumica, fotoqumica e taxonomia
As plantas C4 so classificadas em trs subgrupos, segundo a descarboxilao do cido C4 na bainha perivascular (Fig. 4): A) plantas a aspartato do tipo NAD-ME (enzima mlica-dependente de NAD+): o cido asprtico vindo do mesfilo desaminado, transformando-se em cido oxaloactico pela aspartato aminotransferase. Em seguida, este reduzido a cido mlico pela enzima malato desidrogenase-dependente de NADH, e ento descarboxilado a cido pirvico (PIR) pela enzima mlicadependente de NAD+, com liberao do CO2 e produo de NADH, consumido na reao anterior. O cido pirvico aminado pela alanina aminotransferase transformando-se em alanina (ALA), que retornar ao mesfilo para regenerar o substrato fosfoenolpiruvato. Os cloroplastos da bainha perivascular das plantas C4 do tipo NAD-ME (Fig. 4) so granares e com posio centrpeta nas clulas da bainha, produzindo assim ATP e NADPH, requeridos para o ciclo de Benson-Calvin (EDWARDS & HUBER, 1981). So exemplos de plantas C4 do tipo NAD-ME, as espcies do gnero Amaranthus , Atriplex e Panicum , excesso de algumas como o Panicum maximum , que do tipo PCK (fosfoenolpiruvato carboxicinase). B) plantas a aspartato do tipo PCK (fosfoenolpiruvato carboxicinase): onde o cido asprtico vindo do mesfilo desaminado, transformando-se em cido oxaloactico pela aspartato aminotransferase. Em seguida, este descarboxilado pela fosfoenolpiruvato carboxicinase em presena de ATP, formando o cido fosfoenolpirvico. Esse ltimo desfosforilado a cido pirvico formando o ATP consumido anteriormente, para ento ser aminado e transformado em alanina pela alanina aminotransferase que retornar ao mesfilo para completar o ciclo. Os cloroplastos da bainha perivascular das plantas do tipo PCK so granares e com posio centrfuga nas clulas da bainha, produzindo ATP e NADPH requeridos no ciclo de Benson-Calvin (EDWARDS & HUBER, 1981; LEEGOOD, 1996). Neste tipo existem o gnero Brachiaria e a espcie Panicum maximum. C) plantas a malato do tipo NADP-ME (enzima mlica dependente de NADP+): nessas, o cido mlico vindo do mesfilo descarboxilado diretamente a cido pirvico pela enzima mlica-dependente do NADP+, liberando CO2 e NADPH para o ciclo de Benson-Calvin. O cido pirvico retorna ao mesfilo, visando a regenerao do substrato para a carboxilao primria. Neste tipo de plantas, os cloroplastos da bainha perivascular so
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localizados centrifugamente, prximos da parede limite com o mesfilo, e so agranares (Foto 1B), com baixo contedo de clorofilas e deficientes no PS II (HALL & RAO, 1994). Por isso, um dos dois NADPH necessrios para o ciclo de Benson-Calvin fornecido na descarboxilao do cido mlico, na bainha perivascular (Fig. 4) e o outro, assim como o ATP necessrio, oriundo da interconverso de cido fosfoglicrico em outras trioses-P, que transitam entre o mesfilo e a bainha. Portanto, em plantas C4 do tipo NADP-ME, a reduo do CO2 na bainha perivascular dependente da gerao de NADPH e ATP nos cloroplastos do mesfilo (EDWARDS & HUBER, 1981). So classificadas como plantas C4 deste tipo, as espcies dos gneros Andropogon, Saccharum, Sorghum, Zea e Paspalum, que so entre outras as principais plantas C4 cultivadas.
1.B.3.3. Caractersticas de plantas C4
A sndrome C4 no pode funcionar sem que a planta possua o conjunto de caractersticas abaixo relacionadas. Inclusive para a classificao de uma espcie como sendo C4, a avaliao deste conjunto de caractersticas necessrio. Como ser visto adiante existem vegetais que possuem somente algumas destas caractersticas e portanto no podem ser consideradas plantas C4, sendo classificadas como intermedirias C3-C4 (LTTGE et al, 1996). a) Ponto de compensao de CO2 prximo ou igual a zero: o ponto de compensao de CO2 traduz a concentrao de CO2 (na atmosfera de uma cmara com uma planta iluminada, em um circuito fechado) atingida quando ocorre o equilbrio entre as reaes de carboxilao, atravs da fotossntese e de descarboxilao, devidas essencialmente fotorrespirao. A fotorrespirao equivale a 70 a 80% das descarboxilaes na presena de luz, enquanto a respirao obscura equivale somente a 10 a 15% dessas. Contudo, a respirao obscura importante durante o perodo noturno, podendo representar um gasto total de 50% do carbono assimilado durante o dia (BRYCE & THORNTON, 1996). Nas plantas C3, devido liberao de CO2 fotorrespiratrio, o ponto de compensao de CO2 varia entre 30 e 80 mol.mol-1. J na via C4, onde no existe o efeito inibidor do O2 sobre a fotossntese e sobre a enzima de carboxilao, mesmo havendo alguma atividade fotorrespiratria na bainha perivascular, o CO2 liberado ser recapturado pela PEP-case, que tem uma grande afinidade pelo CO2 (Tab. 2) (OGREN, 1984). Porm outros autores como BROWN & BYRD (1993), afirmam que a no liberao de
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As reaes escuras
fotorrespiratrio nas plantas C4 devido baixa condutividade para o CO2, nas clulas da bainha perivascular. Por estes motivos, o ponto de compensao em CO2 de plantas em C4 se aproxima de zero, pois no h liberao de CO2 para a atmosfera. b) anatomia Kranz: essa caracterstica essencial para as plantas C4, pois ela imprescindvel para a separao espacial dos eventos C4 e C3. Algumas plantas, classificadas como intermedirias C3-C4, possuem as enzimas da via C4 sem apresentarem a anatomia Kranz. Existem tambm plantas C3 que apresentam essa anatomia Kranz (BJRKMAN et al., 1971) e por isso, este tipo de anatomia por si s no pode ser usado para classificar uma planta como sendo C4. Essa caracterstica foi considerada por muito tempo como essencial para o funcionamento da via C4, porm existem espcies, como Suaeda monoica, que funcionam com a via C4 sem possuirem a anatomia Kranz (CHAMPIGNY & MOYSE, 1983). Portanto, as plantas C4 possuem dois tipos distintos de clulas e no caso do tipo NADP-ME, dois tipos de cloroplastos (granar e agranar), diferenciando-as das plantas C3 com sua anatomia dorsi-ventral e um nico tipo de cloroplasto. As plantas C4 possuem tambm um conjunto adicional de genes e um mecanismo regulador da expresso especfica para cada tipo de clula, nestes genes (FURBANK & TAYLOR, 1995) . Essas clulas so as do mesfilo com maiores espaos livres entre elas, onde ocorrem os eventos C4, e as clulas da bainha perivascular, envolvendo os vasos condutores, com abundncia de mitocndrias e peroxissomas e com pouco ou nenhum espao intercelular (Foto 2). Nessas clulas da bainha perivascular ocorrem os eventos C3 e a sntese de carboidratos (FURBANK & TAYLOR, 1995) (Fig. 4). Tal disposio mesfilo, bainha e vasos conseqentemente bastante favorvel s trocas e migraes de metablitos entre estes tecidos (EDWARDS & WALKER, 1983; LEEGOOD, 1996). c) discriminao isotpica do 13C: o fracionamento isotpico 13C/ 12C (dois istopos existentes no ar), indica uma relao entre a assimilao do 13C e do 12C. A fixao primria do CO2 pela PEP-case nas plantas C4, est associada a uma baixa discriminao isotpica do 13C sobre o 12C, variando entre -5,7 e -15%. Enquanto a fixao do CO2 pela rubisco est associada a maior discriminao, variando de -20 a -35% (PEISKER & HENDERSON, 1992). A discriminao isotpica tambm pode ser usada para analisar-se os efeitos de um estresse ambiental, que afete a disponibilidade do CO2, como a falta de gua por exemplo (FARQUHAR et al, 1989). A menor discriminao isotpica est associada manuteno de um status hdrico elevado, devido ao
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controle estomtico ou ao sistema radicular desenvolvido e conseqentemente, a maior eficincia no uso de gua (KELLY & WOODWARD, 1995), como por exemplo, para as plantas C4 quando comparadas s C3 (HALL & RAO, 1994).
1.B.3.4. Plantas intermedirias C3-C4
Existem algumas espcies que no podem ser classificadas pelos critrios padres nem como C3 nem como C4, por terem caractersticas de ambos os grupos. A descoberta destes vegetais estimulou a hiptese de que as plantas C4 sejam uma evoluo recente a partir de plantas C3 (APEL, 1994). Este comportamento intermedirio foi primeiramente notado por BJRKMAN et al. (1971) que obteve hbridos entre espcies de Atriplex C3 e C4, cujos F1 e F2 resultaram em plantas com uma gama de atividades da PEP-case e vrios graus de desenvolvimento da anatomia Kranz. No gnero Mollugo, que possui espcies C3 e C4, a espcie Mollugo verticillata considerada intermediria C3-C4, apresentando cidos C3 e C4 como primeiros produtos da fotossntese, nvel intermedirio de fotorrespirao e bainha perivascular contendo cloroplastos. Outros exemplos so no gnero Panicum, a espcie Panicum milioides, e no gnero Moricandia, a espcie Moricandia arvensis, tambm consideradas plantas intermedirias C3-C4 com anatomia Kranz, sem efeito inibidor do O2 e atividade da PEPcase superior das plantas C3 (EDWARDS & WALKER, 1983).
1.B.3.5. Plantas com o metabolismo cido das crassulceas (CAM)
A nomenclatura, metabolismo cido das crassulceas, deve-se ao fato desse comportamento CAM ter sido identificado, primeiramente, em plantas da famlia das crassulceas. O termo cido foi utilizado porque essa via se caracteriza por um acmulo de cidos orgnicos C4 durante a noite, e consumo destes, durante o dia (Fig. 5). Muitas plantas suculentas so CAM como, por exemplo, nas famlias Agavaceae, Bromeliaceae, Cactaceae, Crassulaceae, Euphorbiaceae e Orchidaceae . As plantas CAM utilizam a via C4, porm de uma forma distinta das plantas C4. As plantas C4 fazem uma separao espacial dos eventos, enquanto as plantas CAM fazem uma separao temporal. As plantas CAM no possuem a anatomia Kranz; so em geral plantas suculentas, com parnquima e vacolos grandes, estocando gua. Algumas so CAM
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NOITE
DIA
Citoplasma
FEP
Citoplasma
HCO3CICLO DE CALVIN ALA CO2 CH2O ASP MAL PIR
FEP OXA
ASP
MAL
As reaes escuras
FIGURA 5. Metabolismo cido das Crassulceas (plantas CAM). Baseado em Hall & Rao, (1994). PEP: fosfoenolpiruvato; OXA: oxaloacetato; ASP: aspartato; MAL: malato; ALA: alanina; PIR: piruvato; e CH2O: carboidratos.
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MAL
ASP
ASP
MAL
Vacolo
Vacolo
obrigatrias, funcionando sempre com este mecanismo, enquanto outras como Ananas comosus, Agave sisalana, Opuntia ficusindica e espcies das famlias Bromeliaceae e Orchidaceae desenvolvem-se com a via C3, porm sob estmulo de falta de gua, salinidade, fotoperodo ou termoperodo, passam a apresentar o comportamento CAM (LTTGE et al, 1996). O comportamento CAM no permite uma grande acumulao de matria seca, porm economiza gua, podendo ento ser considerado como a nica via fotossinttica que confere adaptao seca (OSMOND & HOLTUM, 1981). Algumas plantas CAM facultativas podem atingir alta produtividade, quando funcionando como C3, porm quando essas plantas apresentam o comportamento CAM, devido um estresse ambiental, a acumulao de matria seca reduzida. No metabolismo CAM as plantas fecham os estmatos durante o dia, prevenindo assim a perda de gua. Durante a noite, com pouca transpirao devido ao baixo dficit de presso de vapor, elas abrem os estmatos, e o CO2 fixado ao cido fosfoenolpirvico (PEP, Fig. 5) pela ao da PEP-case, pois essa reao no depende de ATP ou NADPH. Assim, o carbono assimilado na forma de cidos orgnicos, asprtico (ASP) e mlico (MAL), acumulados nos vacolos. Durante o dia, economizam gua com os estmatos fechados, pois j assimilaram o CO2, e ento descarboxilam estes cidos orgnicos pelas mesmas vias de descarboxilao C4, fornecendo o CO2 para o ciclo de Benson-Calvin que, este sim, depende da energia luminosa (HALL & RAO, 1994). Essas plantas podem permanecer longos perodos, de 100 a 200 dias sem abrir os estmatos durante o dia, economizando gua, porm com baixo acmulo de matria seca (OSMOND & HOLTUM, 1981; NOBEL, 1991). Para a economia de gua, alm dessa vantagem, as plantas CAM tm uma freqncia estomtica (em torno de 2.500 estmatos.cm-2) dez vezes menor que plantas C3 (em torno de 20.000 estmatos.cm-2) (OSMOND et al., 1982). 1.C. ECOFISIOLOGIA
DE PLANTAS
C3, C4
CAM
A adaptao das plantas com diferentes vias fotossintticas ao ambiente tropical, depender, em grande parte, das caractersticas das duas enzimas primrias de carboxilao, a rubisco e a PEP-case (Tab. 1). Em funo da capacidade de assimilao de CO2 e consumo de nitrognio para a sntese de uma ou outra enzima, as plantas com as diferentes vias de assimilao de CO2 apresentaro caractersticas diferentes, principalmente no ambiente tropical.
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Ecofisiologia de plantas C3, C4 e CAM
TABELA 1. Caractersticas das enzimas ribulose, 1-5, bisfosfato carboxilase/oxigenase (rubisco) e fosfoenolpiruvato carboxilase (PEPcase). A rubisco um hetermero, consistindo de 8 grandes subunidades de 50-55 kDa e 8 pequenas subunidades de 12-15 KDa, com um peso molecular de aproximadamente 536 KDa. As grandes subunidades tem seu genoma no DNA cloroplstico e as pequenas subunidades no DNA nuclear (Raines et al, 1991). J a PEP-case um tetrmero com monmeros de 100 KDa (OLeary, 1982).
CARACTERSTICAS
PEP-case
rubisco
Localizao Substrato Km * Consumo de N, para a sntese.
citoplasma HCO3p/HCO3- 100 a 160mM Em plantas C4 10% Em plantas C3 Insignificante
cloroplasto CO2 p/CO2 20mM 10-25% >50%
* para uma concentrao atmosfrica de 250 L.L-1 de CO2, o que est abaixo da concentrao atual, com pH de 8,0 e temperatura de 30C no citoplasma, a concentrao de CO2 de 7,4 mM e de HCO3- de 331mM, o que baixo para a rubisco e suficiente para a PEP-case (OLeary, 1982).
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Neste ambiente, os vegetais precisam economizar gua e nitrognio, que so em geral limitantes (NORMAN et al, 1995). Para isto, as plantas C4 e CAM so mais eficientes no uso de gua e de nitrognio devido ao seu maior controle estomtico, em funo da alta afinidade da PEP-case pelo substrato, e menor uso de nitrognio para a sntese das enzimas de carboxilao (RICHTER, 1993).
1.C.1. Caractersticas das enzimas ribulose,1-5, bifosfato carboxilase/oxigenase (rubisco) e fosfoenolpiruvato carboxilase (PEPcase)
A rubisco um hetermero, consistindo de 8 grandes subunidades de 5055 kDa, e 8 pequenas subunidades de 12-15 kDa, com um peso molecular de aproximadamente 536 kDa. As grandes subunidades tm seu genoma no DNA cloroplstico (rbcL), e as pequenas subunidades no DNA nucleolar (rbcS) (FURBANK & TAYLOR, 1995). Essas subunidades s so funcionais quando associadas dentro do cloroplasto, depois da ao de proteinases, para a maturao da enzima, e assim passar forma ativa (LEVY & ADAM, 1995). As pequenas subunidades so sintetizadas nos polissomas citoplasmticos e so importadas e processadas pelos cloroplastos para associao com as grandes subunidades sintetizadas nestes (GUTTERIDGE & GATENBY, 1995). A ativao da rubisco parece ser regulada por uma enzima cloroplstica, a rubisco ativase (PORTIS, 1992), sendo essa controlada indiretamente pela intensidade luminosa, pois a luz estabelece um gradiente de H+ e Mg2+ favorvel, e permite a sntese de ATP, necessria ao da rubisco ativase (CAMPBELL & OGREN, 1995). J a PEP-case um tetrmero com monmeros de 100 kDa, ativada em preseno de luz em plantas C4 e, ao contrrio, desativada pela luz em plantas CAM. Nestas ltimas, a enzima sintetizada de novo no incio da noite. Provavelmente a enzima em plantas C4 e em plantas CAM, seja isoenzimas, diferindo em sua cintica. Para a sua ativao so necessrios os substratos fosfoenolpiruvato e bicarbonato, o Mg2+ e o pH entre 7,5 e 9,5 (OLEARY, 1982). Os genes que codificam as pequenas subunidades da rubisco esto entre os primeiros genes vegetais a serem isolados e seqenciados no tomateiro. J temos tambm evidncias de que possvel interferir na relao carboxilase/oxigenase, substituindo resduos na grande subunidade que no so essenciais para a catlise (RAINES et al, 1991).
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a) Localizao: a enzima rubisco se localiza nos cloroplastos, enquanto a PEP-case se localiza no citoplasma (Tab. 1) (LTTGE et al, 1996). Com isto, as plantas C4 j apresentam uma vantagem pois o substrato s precisa vencer uma barreira celular, a plasmalema, enquanto nas C3, ele deve atravessar tambm a membrana cloroplstica. b) Substrato, afinidade (Km) e eficincia de carboxilao: a rubisco tem uma forte afinidade pelo CO2, enquanto a PEP-case tem pelo HCO3-, o que uma vantagem para as C4, pois em solues prximas da neutralidade, como o caso do citoplasma, o HCO3- representa em torno de 2/3 do C, enquanto o CO2 representa 1/3 aproximadamente. A atividade da rubisco, alm de depender da rubisco ativase, depende tambm da ao da anidrase carbnica, com uma atividade muito superior em plantas C3 (PORTIS, 1992). Ainda sobre a afinidade pelo substrato, a rubisco apresenta um Km (CO2) em torno de 20 mM (LORIMER et al, 1977) e a PEP-case tem um Km (HCO3-) alto entre 100 e 160 mM, porm para uma concentrao atmosfrica de 250L.L-1 de CO2, o que est abaixo da concentrao atual, com pH de 8,0 e temperatura de 30C no citoplasma, a concentrao de CO2 de 7,4 mM e de HCO3- de 331mM, o que baixo para a rubisco e suficiente para a PEP-case (OLEARY, 1982; LAWLOR, 1993). A maior eficincia de carboxilao da PEP-case, em plantas C4, est principalmente associada ausncia da atividade oxigenase, portanto nas plantas C4 no h competio entre o CO2 e O2. J a atividade da rubisco dependente do teor de CO2 e de O2 atmosfrico, sendo a fotossntese C3, sob intensidades luminosas saturantes, inibida de 20 a 40% pelo O2 (BROWN & BYRD, 1993). A limitao da assimilao de CO2 na via C3 devida tambm taxa de regenerao de RuBP, dependente do transporte de eltrons nos fotossistemas, ou regenerao de Pi (MAKINO, 1994), e da taxa de utilizao das trioses-P pelo vegetal, o que causa as diferenas nas taxas de assimilao de CO2, nas diversas plantas C3. Essa taxa superior em plantas herbceas quando comparadas s lenhosas perenes (WULLSCHLEGER, 1993). c) Consumo de nitrognio para a sntese das enzimas de carboxilao: em folhas C3 a rubisco equivale a mais de 50% das protenas solveis (GUNASEKERA & BERKOWITZ, 1993), enquanto em folhas C4 essa corresponde a 10-25%. J a PEP-case, em folhas C4, corresponde somente a 10% das protenas solveis. Existe, portanto, um gasto de no mximo 35% do N foliar para sntese das enzimas de carboxilao em plantas C4, enquanto em plantas C3 este gasto est em cerca de 50% do N foliar (SINCLAIR & HORIE, 1989).
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1.C.2. Respostas das plantas C3, C4 e CAM aos fatores ambientais
O pensamento cientficio sobre a fotossntese C4 durante a evoluo das angiospermas, foi muito influenciado pela descoberta das plantas intermedirias C3-C4. O fato de existirem plantas com um comportamento intermedirio entre C3 e C4, que estariam evoluindo da via C3 para a via C4, leva a crer que as plantas C4 sejam uma evoluo a partir de plantas C3 quando do enriquecimento da atmosfera em O2, inibidor da fotossntese C3. Tal evoluo se daria pela seleo de gentipos possuidores do mecanismo de concentrao de CO2 (suprimindo o efeito inibitrio do O2 em baixas concentraes atmosfricas de CO2), permitindo maior adaptao aos fatores ambientais adversos, principalmente em clima tropical, como a deficincia de gua e de nitrognio, salinidade e temperaturas altas (Tab. 2). A evoluo de plantas C4 provavelmente iniciou-se durante o Paleoceno, quando houve um perodo de baixa concentrao atmosfrica de CO2 (APEL, 1994). A maioria das plantas C4 tem seu centro de origem em zona tropical, e algumas caractersticas fisiolgicas dessas plantas C4 lhes conferem maior potencial produtivo em zona tropical: Eficincia quntica e atividade fotossinttica - As plantas C4 no apresentam saturao luminosa para a assimilao fotossinttica, mesmo com intensidades luminosas mximas do meio dia no vero acima de 2000 mmol quanta.m-2.s-1 , enquanto as C3 se saturam a intensidades em torno de 600 a 800 mmol quanta.m-2.s-1 (HALL & RAO, 1994), que representa 1/3 da intensidade luminosa mxima de um dia de vero (Tab. 2). Essa resposta das plantas C4 permite um maior aproveitamento da energia luminosa disponvel em zona tropical, onde existem altas intensidades luminosas durante quase todo o ano. Contudo, sob baixas intensidades luminosas, na sombra, as plantas C3 apresentam uma taxa fotossinttica mais alta do que as C4 (EDWARDS & WALKER, 1983; HALL & RAO, 1994). Furbank et al (1990), mostram que plantas C3 a 30C necessitam de 18,9 mol quanta/mol de CO2 fixado, enquanto temperatura de 20C necessitam de 15,4. A diminuio da eficincia quntica das plantas C3 em temperaturas elevadas devida principalmente ao aumento da fotorrespirao (NOBEL, 1991). Tambm a diminuio da fotossntese causada pela temperatura atribuda destruio da ultra-estrutura cloroplstica, podendo este efeito ser controlado por reguladores de crescimento (STARCK et al, 1993). As gramneas C4 desenvolvendo-se a 20 ou 30C necessitam em mdia de 15,9 mol quanta/mol de CO2 fixado, e as dicotiledneas C4 em mdia 17,5.
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Tabela 2. Respostas de plantas C3, C4 e CAM aos fatores ambientais tropicais. PARMETRO: Eficincia quntica: via C3 apresentam saturao luminosa via C4 no apresentam saturao luminosa plantas CAM
assimilao do CO2 noturna --------------------------- mol quanta/mol CO2 -------------------------A 30C: 18,9 A 20 ou 30C: gramneas: 15,9 A 20C: 15,4 dicotiledneas: 17,5 ---------------------------- mol CO2. m-2. s-1 -------------------------12 a 25 25 a 40 2,5 a 7,6 Atriplex hortensis: 16,7 Atriplex nummularia: 53,0
Atividade fotossinttica:
E.U.A.*: Temp. tima:
---------------------------- g CO2 . kg H2O-1 ---------------------------1a3 2a5 10 a 40
20 a 35C
30 a 45C no h aumento Rubisco: 25% PEP-case: 10% tropical e rida
30 a 45C no h aumento Rubisco: 25% PEP-case: 10% rida
Efeito de aumento da altas temp. fotorrespirao E.U.N.*: (% do N foliar) Rubisco: > 50%
Regio:
temperada
Segundo Nobel (1991), Hall & Rao (1994), Norman et al. (1995) e Passioura (1996). * E.U.A.-Eficincia no uso de gua; E.U.N.-Eficincia no uso de nitrognio.
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Essa independncia em relao temperatura e a maior eficincia quntica das plantas C4 sob altas temperaturas, so devidas partio de prtons no ciclo Q do complexo citocromo b/f entre o PS II e o PSI, gerando o ATP necessrio ao funcionamento do ciclo C4. Sem essa opo do ciclo Q no teria sido possvel a evoluo da sndrome C4 (FURBANK et al, 1990). A maior eficincia quntica de plantas C4 em temperaturas mais altas medidas em plantas em pote, diminui bastante ao analisar-se o dossel de plantas no campo (SINCLAIR & HORIE, 1989). A atividade fotossinttica mxima medida em Atriplex nummularia foi de 53 molCO2. m-2. s-1 (PHAM THI et al, 1982), e em Atriplex halimus foi de 34,7 (PIMENTEL, 1985), ambas plantas C4. J para as plantas C3, em Atriplex hortensis, foi de 16,7 (PIMENTEL, 1985) e em Phaseolus vulgaris , no incio da florao, foi de 13,3. Essa taxa mxima no feijoeiro mantida somente neste perodo e por pouco tempo. Nos estdio vegetativo, de florao plena e de enchimento de gros, o valor da atividade fotossinttica menos da metade deste valor (Tab. 3) (PIMENTEL et al, 1995). Os vegetais CAM apresentam uma assimilao mxima de 7,6 molCO2.m-2. s-1, porm normalmente a taxa de 2,5 (BLACK, 1973; NOBEL, 1991). Essas taxas fotossintticas baixas fazem com que o vegetal funcionando como CAM, tenha um crescimento muito lento. Porm, certas plantas CAM facultativas podem ter uma alta produtividade com acumulao de matria seca pela via C3. Quanto fotorrespirao, as plantas C3 apresentam liberao de CO2 fotorrespiratrio, mas as C4 e CAM no apresentam (RITCHER, 1993). As plantas C4 e CAM possuem todo o sistema enzimtico do ciclo glicolatoglicerato, porm a atividade das enzimas deste ciclo muito inferior a das plantas C3. A no liberao de CO2 fotorrespiratrio em plantas C4 devida alta concentrao de CO2 na bainha perivascular, diminuindo a atividade oxigenase da rubisco, mas tambm alta eficincia da PEP-case no mesfilo, que recupera o CO2 a ser liberado na bainha perivascular (FURBANK & TAYLOR, 1995). Plantas C4, em condies de estresse hdrico, com diminuio da fixao fotossinttica de CO2 e de sua concentrao na bainha perivascular, podem apresentar liberao de CO2 fotorrespiratrio (PIMENTEL, 1985; DAI et al., 1993). Eficincia no uso de gua (E.U.A.) - As plantas C3 tm uma E.U.A. variando de 1 a 3 g de CO2 fixado. kg-1 de H2O transpirada; nas C4 essa varia de 2 a 5 e nas CAM de 10 a 40 (NOBEL, 1991). Isso porque as plantas
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Tabela 3. Taxa fotossinttica (A) e condutncia estomtica (gs) em Phaseolus vulgaris L., gentipo carioca, com 20 (estdio vegetativo), 39 (estdio de pr-florao), 48 (estdio de florao) and 60 (estdio de enchimento do gro) dias aps o plantio (DAP), no primeiro (mais velho) trifololo (1), no terceiro (3) e no quinto (5). Estdio folha A
(mol.m-2.s-1)
gs
( mol.m-2.s-1)
Vegetativo (20 DAP)
1 3 5 1 3 5 1 3 5 1 3 5
0,18a 4,44b 6,59c 5,27a 13,29c 11,99b 1,13a 5,65b 5,01b 0,59a 2,57b 2,96b
0,041a 0,066ab 0,131b 0,019a 0,150c 0,095b 0,03a 0,07b 0,056b 0,019a 0,050b 0,049b
Pr-florao (39 DAP)
Florao ( 46 DAP )
Enchimento do gro ( 60 DAP )
Na coluna, para folha em cada idade, letras diferentes so significativas a 0.01%.
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C4 apresentam uma condutncia mesoflica superior a das C3 devido a maior taxa de carboxilao, maior afinidade pelo substrato e ausncia de fotorrespirao (Tab. 2) (LUDLOW, 1976; FURBANK & TAYLOR, 1995). Com essa maior condutncia mesoflica, as plantas C4 podem ter menor condutncia estomtica, economizando gua. J as plantas CAM, mantendo os estmatos abertos noite quando a transpirao mnima, e fechados durante o dia, quando a transpirao mxima, tero maior economia de gua (NOBEL, 1991). A tolerncia salinidade tambm uma caracterstica comum entre as plantas C4, o que leva essas plantas a sobreviverem em ambientes mais secos e salinos (HALL & RAO, 1994). Entretanto, estudos comparativos em campo com trigo (C3) e milho (C4), mostraram que a eficincia no uso de gua na cultura dessas plantas semelhante, pois entram em jogo outros fatores fisiolgicos, como o maior controle estomtico ou o ajustamento osmtico, mecanismos de adaptao seca, mais desenvolvidos no trigo. Na cultura do milho, a assimilao fotossinttica menor, assim como o seu rendimento quntico, pois o seu dossel de plantas mais esparso absorve menos radiao fotossintticamente ativa do que o dossel mais fechado do trigo (BALDOCCHI, 1994). Adaptao a temperaturas altas - As plantas C4 e CAM desenvolvem-se melhor e apresentam mxima atividade fotossinttica com temperaturas de 30 a 45C. J em plantas C3, a fotossntese e o crescimento mximos ocorrem entre 20 e 35C (LTTGE et al, 1996). Tal resposta pode ser devida atividade oxigenase da rubisco, pois a liberao de CO2 fotorrespiratrio baixa em plantas C4 e, nas plantas C3 torna-se proporcionalmente maior com o aumento da temperatura, reduzindo ento a assimilao de CO2 nessas ltimas (NOBEL, 1991). Essa caracterstica das plantas C4 e CAM confere-lhes a capacidade de desenvolverem-se melhor em ambientes de temperaturas altas, apesar de haverem plantas C3 com mecanismos de adaptao s altas temperatura independentemente da via fotossinttica, como ser visto adiante. Eficincia fotossinttica no uso de nitrognio - As plantas C4 e principalmente as CAM utilizam menos nitrognio para a sntese de suas enzimas de carboxilao do que as C3 e so, por isso, menos dependentes de alta disponibilidade deste elemento para produzir matria seca (MARSCHNER, 1995). No mximo 35% do N que chegam a folha gasto para a sntese dessas enzimas nas plantas utilizando a via C4, enquanto mais de 50% deste N gasto para a sntese da rubisco em plantas C3 (Tab.2) (SINCLAIR & HORIE, 1989). Sendo assim h maior disponibilidade de N
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para o crescimento em outros rgos nas plantas C4. Nas plantas C3, a enzima rubisco funciona como um pool de reserva de nitrognio, e uma diminuio da atividade da protena no altera a taxa fotossinttica, pois a perda de protena compensada pelo aumento da ativao da enzima (LEEGOOD, 1996). As plantas C4, assim como as CAM, instalam-se mais facilmente em terrenos com baixa disponibilidade de nitrognio (queimados por exemplo), pois podem manter uma atividade fotossinttica neste ambiente pobre em nitrognio, sendo ento consideradas plantas pioneiras. SAXENA & RAMAKRISHNAM (1983) mostram que a instalao da vegetao sobre um terreno queimado se faz, nos primeiros anos por plantas C4, e somente 4 a 6 anos aps, com o aumento de matria orgnica adicionada ao solo pelas espcies anteriores, as C3 dominam.
1.C.3. Adaptao de plantas C3, C4 e CAM aos ambientes tropicais
Apesar de serem plantas pioneiras, no se pode dizer que as plantas C4 sejam mais tolerantes seca do que plantas C3. Somente o metabolismo CAM pode ser considerado como uma adaptao seca (HATCH, 1976; LAWLOR, 1993). Os mecanismos fisiolgicos que conferem adaptao seca, salinidade, assim como a aclimatao s altas temperaturas no esto relacionados com a via fotossinttica de assimilao de CO2. Citamos os exemplos da beterraba, do trigo e da algaroba, como plantas C3, que so mais adaptadas seca do que o milho, que uma C4 (PIMENTEL & ROSSIELO, 1995). Portanto, podemos classificar genericamente, pois existem excees, os vegetais de clima tropical em: Plantas C4 - com alta taxa fotossinttica por unidade de rea e de crescimento da cultura, podendo exceder 0,5 ton.ha-1.dia-1 para os cereais C4; sem saturao luminosa da fotossntese, acima de 2000 mmol.m-2.s-1, tampouco apresentando liberao de CO2 fotorrespiratrio; com temperatura tima para a fotossntese de 30 a 45C; com alta eficincia no uso de gua e nitrognio; e cujas sementes no germinam em temperaturas abaixo de 12C, como o caso do milho, sorgo e milheto (NORMAN et al., 1995). Devemos salientar contudo que a maior eficincia no uso de gua das plantas C4 nem sempre assegura uma maior produtividade. As plantas C4 so capazes de produzir mais, durante os meses secos, embora essa superioridade
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possa ser contrabalanada pela maior produo anual de certas C3 antes do perodo quente e seco. A maior rea foliar de plantas C3 tambm compensa, s vezes, sua menor taxa fotossinttica (FISHER & TURNER, 1978). Alm disso, a maior economia de gua das plantas C4 no permite afirmar que essas plantas sejam mais tolerantes aos baixos potenciais hdrico de folha (LUDLOW, 1976). Plantas CAM - com baixa taxa fotossinttica por unidade de rea e de crescimento quando funcionando como CAM. Mas, no caso daquelas CAM facultativas, como Ananas comosus,Opuntia ficusindica e Agave sisalana, podem atingir produtividade acima de 45 ton.ha-1.ano-1 quando assimilando carbono durante o dia, na via C3. Essa mdia de produo est acima dos valores de 30 a 40 ton.ha-1.ano-1, obtidos em culturas como o trigo (PUGNAIRE et al, 1993). As plantas CAM obrigatrias tm alto contedo hdrico, baixa razo superfcie/volume e baixa freqncia estomtica (OSMOND et al., 1982), desenvolvem-se em regies ridas, principalmente devido alta eficincia no uso de gua (HALL & RAO, 1994). Plantas C3 - com baixa taxa fotossinttica por unidade de rea e de crescimento da cultura, podendo atingir 0,2 a 0,4 ton.ha-1.dia-1, durante perodos curtos, para as leguminosas, que so plantas C3; com saturao luminosa da fotossntese com 600 a 800 mmol.m-2.s-1; apresentando liberao de CO2 fotorrespiratrio, aumentado pela temperatura; com temperatura tima para a fotossntese entre 20 e 35C, como o caso de arroz e soja, e com baixa eficincia no uso de gua e nitrognio (NORMAN et al., 1995). Os efeitos dos fatores climticos no crescimento e no desenvolvimento, assim como a partio de carbono entre os rgos, so importantes para explicar diferenas nas taxas de crescimento da cultura (Tab. 4). Por exemplo, a taxa de crescimento da cultura da cana-de-acar seis vezes superior taxa do capim napier, ambas plantas C4, com estrutura do dossel semelhantes entre si (NORMAN et al., 1995). A taxa de assimilao fotossinttica por unidade de rea superior nas plantas C4 (LAWLOR, 1995), porm deve-se ressaltar que uma planta C3 com maior rea foliar, ter uma alta produo de fotoassimilados. Isto visto no estudo de SLATYER (1970), com Atriplex spongiosa, planta C4, e Atriplex hastata, planta C3, onde a planta C4 com maior taxa de assimilao fotossinttica no incio de seu desenvolvimento, aloca mais C em estruturas no fotossintetizantes, e a planta C3 que aloca em rea foliar tem, ento, maior produo de fotoassimilados depois de 3 semanas de desenvolvimento.
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TABELA 4. Valores mximos de taxa de crescimento de culturas (TCC) e de produtividade de algumas plantas em C3, C4 e CAM. Valores mximos da taxa de crescimento de algumas culturas (TCC)* (em g. m-2 solo. dia-1): Helianthus annus (C3): 68 Pennisetum purpureum (C4): 60 Agrostemma githago (C3): 57 Orysa sativa (C3): 55 Zea mays (C4): 52 Sorghum vulgare (C4): 51 Saccharum officinarum (C4): 38 Solanum tuberosum (C3): 37 Glycine max (C3): 17 Produtividades mximas de algumas culturas (em kg. ha-1. n de dias-1):
- Saccharum officinarum (C4): 250.000/360 dias - Solanum tuberosum (C3): 95.000/90dias - Beta vulgaris (C3): 130.000/180 dias - Pennisetum purpureum (C4): 85.000/365 dias - Manihot esculenta (C3): 41.000/365 dias - Sorghum vulgare (C4): 16.000/120 dias - Zea mays (C4): 16.000/130dias - Orysa sativa (C3): 8.000/140 dias - Pennisetum glaucum (C4): 4.000/100 dias - Phaseolus vulgaris (C3): 5.000/110 dias Dados de Osmond et al. (1982) e Norman et al (1995).
* valores mantidos por curto tempo. Dados de Evans (1975).
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Alm dessa ressalva, devemos lembrar que certas plantas C3 podem apresentar tambm uma atividade fotossinttica equivalente a das plantas C4, como o caso Camissonia claviformis, com uma assimilao de 59 mmolCO2. m-2. s-1, desenvolvendo-se em temperaturas acima de 40C, e tampouco se saturando com as intensidades luminosas do Vale da Morte, na Califrnia (RICHARD & TEERI, 1984). A espcie Medicago sativa, tambm C3, atinge uma taxa fotossinttica de 54 molCO2. m-2. s-1 (HATCH, 1976). Portanto, a explorao agrcola de uma planta com a via fotossinttica C4, no leva necessariamente, a uma alta produtividade por rea e por tempo, comparando-se a algumas plantas C3. Por exemplo, o sorgo ou espcies de Pennisetum , com altas taxas de crescimento de cultura (TCC), no produzem mais energia para a alimentao do que a batata ou a mandioca na mesma rea, durante um ano agrcola (Tab. 4). A cana-de-acar (planta C4) pode produzir at 250 ton. de colmos. ha-1, porm em pelo menos um ano agrcola, enquanto a batata (planta C3) produz at 95 ton.ha-1 em 3 meses, e a beterraba aucareira (planta C3) at 135 ton.ha-1, no mesmo tempo (NORMAN et al, 1995). Nem mesmo os valores mximos de taxa de crescimento de cultura, em gramas de matria seca. m-2 de solo.dia-1, podem ser atribudos exclusivamente s plantas C4, pois EVANS (1975) mostra que Helianthus annus (C3) pode atingir valores de 68, Pennisetum purpureum (C4) de 60, Orysa sativa (C3) de 55, Zea mays (C4) de 52, Saccharum officinarum (C4) de 38, Ananas comosus , CAM facultativa funcionando na via C3, de 28 e Glycine max (C3) de 17. As leguminosas tm baixa atividade fotossinttica e baixa taxa de crescimento de cultura devido baixa condutncia mesoflica, segundo VON CAEMMERER e EVANS (1991). Os valores mximos de taxa de crescimento de cultura citados so mantidos durante alguns dias, decrescendo posteriormente. Deve-se considerar, finalmente, que a concentrao de CO2, na atmosfera, aumentou de 270 para 355 L.L-1 em apenas um sculo, e est aumentando atualmente 1,8 L.L-1 por ano (HALL & RAO, 1994). Este enriquecimento em CO2 da atmosfera dever beneficiar a fotossntese de plantas C3, diminuindo a importncia da fotorrespirao (SAGE et al, 1990), assim como o seu uso de gua e de nutrientes, sem contudo afetar a atividade fotossinttica das C4. Porm, a fotossntese em plantas C3 sob alta concentrao CO2 limitada pelo transporte de electrons e regenerao de Pi e da RuBP (MAKINO, 1994). O aumento no teor de gases na atmosfera aumentar tambm o efeito estufa, aquecendo a atmosfera; e no podemos prever como este aumento de temperatura do ar vai afetar a distribuio de chuvas e, conseqentemente, a produtividade agrcola, principalmente na zona tropical.
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Relaes fonte/dreno
Captulo 2 RELAES FONTE/DRENO

Em uma alga verde unicelular, cada clula capaz de fixar carbono em presena de luz, pela fotossntese, absorver nutrientes, promover crescimento em tamanho e reproduzir. Com a evoluo de vegetais superiores terrestres, em alguns casos com mais de 100 metros de altura, foi necessria uma diviso de funes entre diferentes clulas, tecidos e rgos, alm do desenvolvimento de um sistema de controle e transporte entre os tecidos para a interconexo e coordenao dos trabalhos realizados em diferentes tecidos. A clorofila espacialmente separada do sistema de absoro de nutrientes e dos rgos reprodutivos, porm cada clula ou tecido faz parte do sistema integrado do vegetal, visando reproduo da espcie (WARDLAW, 1990). O acmulo de matria seca no rgo de interesse econmico controlado pela troca de metablitos entre os tecidos fornecedores de fotoassimilados (a fonte) e o rgo colhido (o dreno colhido). Portanto, so considerados fontes os rgos ou tecidos que exportam assimilados, sintetizando-os (tecidos verdes), ou estocando-os anteriormente (como dreno reversvel), e cedendo-os posteriormente. J os drenos so os rgos ou tecidos que utilizam (drenos em crescimento), ou armazenam fotoassimilados (drenos de reserva). Esses drenos podem ser irreversveis ou permanentes, como os meristemas vegetativos de parte area ou raz; e reversveis, como o meristema intercalar de folhas, de flores e de inflorescncias, os entrens de cana-de-acar, o tronco de rvores, os tecidos de reserva de frutos, de sementes, de tubrculos, de bulbos e de bulbilhos. No Brasil, desde as dcadas de 50 e 60, estudos sobre a ecofisiologia do crescimento e da florao no cafeeiro, j eram desenvolvidos por ALVIM (1958), FRANCO (1965) e MAESTRI & BARROS (1977), assim como estudos sobre a translocao e partio de fotoassimilados em Cyperus, no perodo reprodutivo, foram realizados por MAGALHES et al. (1968). importante lembrar que o vegetal acumula matria seca, principalmente sob a forma de carboidratos, mas tambm como protenas e lipdeos, para assegurar o suprimento de esqueletos de carbono e energia qumica para o seu crescimento ou manuteno (quando no h produo de fotoassimilatos, por exemplo noite, ou em condies de estresse ambiental). Os precursores de macromolculas, que so o cido pirvico da gliclise, os compostos do desvio das pentoses, o acetilCoA e os cidos orgnicos do ciclo de Krebs (Fig. 6) so usados para a sntese de outros compostos necessrios nos processos de
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Relaes fonte/dreno
crescimento e na manuteno dos tecidos. A energia qumica para estes processos endergnicos, fornecida pela hidrlise do ATP e o poder redutor (eltrons), necessrio nas reaes de oxireduo, fornecido pelo NADPH (doador de 2 eltrons, para o anabolismo) ou NADH (principal doador de eltrons do catabolismo) (STRYER, 1995). O processo metablico da respirao (gliclise, desvio das pentoses, ciclo de Krebs e cadeia respiratria mitocondrial (Fig. 6) mantido constantemente em um organismo vivo. Toda clula respira continuamente, noite (consumindo as reservas produzidas durante o dia) e dia. O consumo de carbono pela respirao pode corresponder a mais de 70% do ganho dirio de carbono pela fotossntese em tecidos jovens em crescimento vegetativo (VAN DER WERF, 1996). Para facilitar a compreenso da alocao do carbono, para produo de novos compostos no crescimento celular, ou para manter os tecidos vivos, portanto gastando energia, classificamos a respirao dita obscura em respirao de crescimento (produo de compostos para a sntese) ou de manuteno (energia para manter os processos fisiolgicos), porm as vias bioqumicas so sempre as mesmas. A respirao, consumindo carboidratos ([CH2O]n = CO2 +H2O+ ATP + NADPH), pode ter carbono desviado para os outros processos de sntese, ou ter todo o seu carbono oxidado para produzir o mximo de energia contida nos carboidratos assim queimados (BRYCE & THORNTON, 1996). Nos drenos, os fotoassimilados produzidos em outros tecidos, so importados para a respirao de manuteno e crescimento deste rgo. A taxa respiratria dependente do requerimento de ATP e NADH pela clula e, na mitocndria, a exemplo do que ocorre em cloroplastos, o fluxo de eltrons pode ser desviado da cadeia respiratria mitocondrial para uma via alternativa, sendo estes cedidos para uma flavoproteina que vai promover a reduo de 1/2O2 a H2O, com menor produo de ATP (Fig. 6). Tal via alternativa vai consumir O2 e NADH, o que desejvel para dissipao de excesso de energia sob altas temperaturas e intensidades luminosas, e pode variar de 14 a 80% da respirao (RITCHER, 1993). O transporte de acares pelo floema pode ocorrer entre rgos distantes, mas normalmente um dreno suprido de fotoassimilados pelas fontes prximas e, as relaes fonte/dreno da planta, so continuamente modificadas com o desenvolvimento do vegetal. Com o desenvolvimento de novas folhas jovens, a atividade fotossinttica das velhas decresce, entrando em senescncia para retranslocar principalmente nitrognio para as mais novas. As folhas mais apicais suprem as gemas apicais vegetativas; as folhas centrais, os ramos, o pice e razes; e as basais, suprem principalmente as razes (WARDLAW, 1990).
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Fotossntese glicose glicose + frutose Gliclise, desvio das pentoses aminocidos piruvato CO2 acetil-CoA citrato isocitrato NADH CO2 oxoglutarato aminocidos CO2 succinil-CoA 2 ATP citocromos H2 O 1/2 O2 Cadeia respiratria mitocondrial flavoprotena (via alternativa) NADH (H+ e eltrons) Ciclo de Krebs NADH cidos graxos c. orgnicos oxaloacetato malato aminocidos celulose + frutose sacarose Transporte
CO2 + H2O + ftons
Carboidratos de reserva e estruturais amido, sacarose, etc...
rubisco
protenas
aminocidos
Relaes fonte/dreno
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fumarato succinato
NH4
ATP + NADH
NO3
Assimilao de N
FIGURA 6. Vias metablicas de anabolismo e catabolismo de carboidratos e sua interao com o metabolismo de protenas e de lipdeos. Adaptado de Leegood (1996) e Marschner (1995).
Relaes fonte/dreno
Para o estudo das relaes fonte/dreno, para efeito didtico, considerar-se a partio do carbono, a distribuio destes compostos em matria seca nos diferentes tecidos e rgos. A alocao do carbono ser considerada como sendo a descrio das vias metablicas dos compostos de carbono, nos diferentes tecidos (BRYCE & THORNTON,1996). 2.A. PARTIO
DE CARBONO NA PLANTA (ASPECTOS AGRONMICOS)
A produtividade afetada por caractersticas morfolgicas e fisiolgicas da fonte e do dreno. Toda produo de fitomassa depende da atividade fotossinttica da fonte, porm a assimilao do CO2 apenas um dos muitos fatores que influenciam o crescimento e desenvolvimento vegetal (FOYER & GALTIER, 1996). Existe uma regulao dos produtos finais e do tamanho do dreno sobre a atividade da fonte. Se a capacidade de acumulao de carboidratos no dreno pequena, ocorrer acumulao dos carboidratos de transporte na fonte, reduzindo a atividade fotossinttica dessa. No caso inverso, com aumento do tamanho do dreno, aumenta a atividade fotossinttica da fonte. Contudo, o aumento exagerado do tamanho do dreno pode causar colapso na fonte por inibio dos fotossistemas e inibio da sntese dos componentes fotossintticos. O transporte de carboidratos, via floema, s limitante em condies extremas de estresse ambiental (LAWLOR, 1993). Em termos de balano de carbono, o caminho para aumento de produtividade pode ser a eficincia da produo de carboidratos na fonte, ou a eficncia de acumulao destes no dreno, preferencialmente na associao dos dois processos. Cultivares de alta produtividade so aquelas que tm sucesso na maximizao da interceptao e converso da energia solar pelas folhas, sem um excessivo investimento em matria seca vegetativa no colhida, associado ao acmulo de carboidratos nos rgos colhidos (SCHRADER, 1985). O ndice de colheita (matria seca no rgo colhido/ matria seca total da planta) uma maneira clssica de estabelecer-se a partio de carbono nos rgos colhidos, e j proporcionou avanos em termos de produtividade (LAWLOR, 1993). Segundo as propostas de MOCK & PEARCE (1975) e PATERNIANI (1990), o ideotipo do milho para mxima produtividade seria: a) folhas acima da espiga, firmes e orientadas verticalmente. Abaixo da espiga, podem ser horizontais; b) mxima eficincia fotossinttica; c) eficiente converso de fotoassimilados em peso de gro; d) curto intervalo entre a
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Partio de carbono na planta
florao masculina (liberao do plen) e feminina (emergncia dos estigmas); e) prolificidade de espigas por colmo; f ) pendo masculino pequeno; g) insensibilidade ao fotoperodo; h) tolerncia ao frio na germinao e fase de plntula, que poderia ser substitudo para clima tropical por tolerncia ao calor e, acrescentando, tolerncia ao excesso e falta de gua; i) maior perodo possvel de enchimento do gro; e j) lenta senescncia de folhas. Alm dessas caractersticas, segundo DUNCAN & BALIGAR (1991), um vegetal, sobretudo em clima tropical, deveria ter tambm alta eficincia no uso de nutrientes. E para tanto, um sistema radicular eficiente na aquisio destes e na aquisio de gua, seria imprescindvel. Em clima tropical, o vegetal deve investir no sistema radicular (rgo no colhido para a maioria) para ter essa eficincia.
2.A.1. Caractersticas morfo-fisiolgicas da fonte
As folhas de maior importncia para a produo dos drenos colhidos so aquelas prximos a estes. Em uma frutfera como a macieira, so necessrias cerca de 15 folhas prximas ao fruto para o enchimento deste. No milho, a principal fonte de fornecimento de fotoassimilados para a espiga a folha onde essa espiga se apia. Nessa planta, as partes verdes da espiga tambm contribuem para o seu enchimento (WARDLAW, 1990). Para a vagem de uma leguminosa, que tambm contribui para o seu enchimento, o trifololo que se desenvolve junto a ela ter a maior participao para o seu enchimento (DAVIES, 1995). Em trigo e arroz, a chamada folha bandeira tem uma importncia enorme para o fornecimento de fotoassimilados para a pancula (FAGERIA, 1992). No trigo de barba, a arista desenvolvida faz tambm fotossntese. Essas caractersticas da fonte que afetam a produtividade da cultura, levaram HSIAO (1990) a ressaltar as seguintes caractersticas importantes para a fonte:
2.A.1.1. Velocidade de desenvolvimento da rea foliar (especfica) do dossel e da rea foliar fotossintticamente efetiva (tamanho da fonte)
Uma grande rea foliar para uma planta de clima tropical, alm de permitir alta interceptao de energia luminosa, vai significar tambm uma grande superfcie de transpirao, o que indesejvel. O melhoramento vegetal tradicional sempre selecionou plantas com alta rea foliar, pois em clima
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Relaes fonte/dreno
temperado a luminosidade um fator limitante. Isto dificilmente ocorrer em clima tropical, principalmente para plantas C3, que se saturam a baixas intensidades luminosas, como visto no 1 captulo. Energia luminosa no fator limitante para a agricultura tropical, portanto, segundo SINCLAIR & HORIE (1989), devemos selecionar plantas com maior rea especfica de folha, isto , plantas com maior peso de folha por unidade de rea. A atividade fotossinttica funo do nmero de cloroplastos, sejam eles dispostos horizontalmente (maior rea foliar), sejam dispostos verticalmente (maior espessura e rea especfica). Uma folha mais espessa e menos larga vai manter alta atividade fotossinttica por unidade de rea (intensidade da fonte), com menor superfcie de transpirao, o que desejvel em clima tropical. Em arroz, a seleo de plantas com folhas mais curtas, eretas e espessas levou ao aumento da densidade de plantas e conseqente aumento de produo (FAGERIA, 1984). A rea foliar fotossintticamente efetiva extremamente importante. Folhas que no sejam iluminadas adequadamente, por serem sombreadas pelas folhas superiores, sero mais um dreno ao invs de fonte. Em gramneas, como o arroz, a seleo de plantas com folhas eretas (seleo para lgula e aurcula bem desenvolvidas), permitindo maior penetrao de luz no dossel, trouxe aumento de produtividade, o que ainda no se conseguiu com o trigo, cevada e o milho, que tm baixo ndice de rea foliar (WARDLAW, 1990).
2.A.1.2. Idade da folha, durao da rea foliar (durao da fonte) e a senescncia
A folha, em seus estdios iniciais de desenvolvimento, considerada um tecido heterotrfico. Na prpria folha, a zona de crescimento, em geral na base dessa, funciona como dreno para as outras partes j desenvolvidas e somente o excedente exportado para outros rgos (WARDLAW, 1990). Em manga, enquanto a folha tem colorao marron, com alto teor de antocianina, o teor de rubisco e a atividade fotossinttica so baixos. Quando a planta atinge a maturao, o teor de antocianina decresce e os teores de clorofila e amido aumentam (a folha fica verde) com o aumento do teor de rubisco e da taxa fotossinttica (NII et al., 1995). Em folhas de dicotiledneas, somente ao atingir de 30 a 60% de sua rea foliar mxima, ela passa a ser autotrfica e exportadora de fotoassimilados. Em gramneas, como a cana-de-acar, a importao de carboidratos pelo
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floema se mantm at a folha atingir 90% de sua rea foliar mxima. A transio na folha, de dreno para fonte, em plantas cujo principal carboidrato de transporte a sacarose, est associada a um aumento da atividade da sacarose-P sintase, enzima para a sntese de sacarose, e decrscimo da atividade da invertase cida e sacarose sintase, enzimas de hidrlise da sacarose que chega pelo floema (MARSCHNER, 1995). Em ma, o lcool sorbitol a forma dominante de transporte, e a maturao da folha est associada a um aumento da enzima de sntese de sorbitol, a aldolase-6-P redutase. Na folha, aps atingir o tamanho mximo, inicia-se o processo de senescncia, com diminuio da fotossntese e exportao de compostos principalmente nitrogenados. Enzimas hidrolticas, seqestradas no vacolo, so liberadas para o citoplasma, iniciando a hidrlise proteica, comeando ento, o processo de perda da funcionalidade membranar e degenerao da integridade celular, em maior ou menor intensidade, dependendo do vegetal (VIERSTRA, 1996). O declnio do teor de clorofila, causando clorose, um sintoma visvel da senescncia. A composio do floema muda, com diminuio de acares e aumento de compostos nitrogenados de baixo peso molecular e de nutrientes minerais mveis (PELL & DANN, 1990). Em plantas de milho, trigo e feijo, a maior durao de rea foliar desejvel no melhoramento vegetal para aumento de produtividade (MARSCHNER, 1995). A durao do perodo autotrfico da folha primordial para obteno de mxima produtividade, pois se no momento do desenvolvimento dos rgos de interesse a fonte estiver em processo de senescncia, o enchimento desses rgos ficar comprometido. Porm, o controle gentico e hormonal de tal processo pouco conhecido (BUCHANAN-WOLLASTON, 1997). A habilidade da folha em exportar fotoassimilados, no entanto, regida pelo balano entre a produo e o consumo de carbono nesta e nos drenos existentes. Se o consumo de carbono for baixo, h um diminuio da atividade fotossinttica na fonte. A acumulao de amido no gro e conseqente produtividade de trigo so tambm dependentes do nmero de clulas e de plastdeos na folha e no endosperma do gro, assim como em milho e soja (MILBURN & KALLARACKAL, 1989). Normalmente o potencial fotossinttico de uma folha no totalmente utilizado, e a remoo de algumas folhas-fonte aumenta a fotossntese nas restantes. O declnio, entretanto, da taxa fotossinttica no perodo da tarde, a expresso de uma limitao do dreno devido acumulao de acares, assim como do fechamento estomtico. Em condies de alta luminosidade
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Relaes fonte/dreno
pode ocorrer fotoinibio, a menos que hajam drenos temporrios, como as bainhas e ramos de cereais. Quando a demanda por fotoassimilados alta, h uma diminuio de cido abscsico nas folhas, levando mxima abertura estomtica (como ser visto adiante). Com a grande abertura estomtica, aumenta a transpirao e a sntese de citocininas nas razes, que transportada para as folhas, impedindo a senescncia foliar (tambm ser visto adiante). Logo, os fitormnios tambm esto envolvidos no controle da senescncia (PELL & DANN, 1990). O processo de senescncia se inicia nos cloroplastos, com degradao dos tilacides (Fig. 7), e no retculo endoplasmtico. Neste processo, h tambm hidrlise de macromolculas, dentre estas as clorofilas e as protenas foliares, formadas em grande parte pela rubisco, para retranslocar aminocidos para outros rgos em desenvolvimento, em uma estratgia de economia de nutrientes. Na senescncia, a hidrlise de protenas pode ser devida sntese de novo de enzimas proteolticas ou ativao de enzimas j existentes devido diminuio do efeito de inibidores (VIERSTRA, 1996), e pela expresso de genes associados senescncia (BUCHANAN-WOLLASTON, 1997). A perda da integridade das membranas intracelulares, como os tilacides, se d pela ao de enzimas de degradao de lipdeos, como a fosfolipase D, a fosfatidase fosfatase e a acil hidrolase, nas formas citosslicas e membranares, produzindo cidos graxos, que so o substrato das lipoxigenases, e produzindo hidroperxido de cido graxo. As espcies ativas de oxignio, como superxido, perxido e oxidrilo, causam danos ao metabolismo, aumentando a degradao de membranas e de macromolculas, como cidos nucleicos, polissacardeos e protenas. Em condies normais, enzimas desentoxicadoras de oxidao pelo oxignio, como a superxido dismutase, a catalase, as peroxidases e a glutatona redutase, eliminariam estes radicais livres, evitando a oxidao, porm durante a senescncia, a atividade dessas enzimas diminui. A manuteno da atividade protetora dessas enzimas desentoxicadoras pela regulao de genes que controlam as sua atividades, principalmente em cloroplastos, poder retardar a senescncia e os efeitos dos fatores ambientais sobre as membramas citoplasmticas (PEARRUBIA & MORENO, 1994). Porm, a senescncia um processo importante para a remobilizao de N, P e de outros minerais, de folhas velhas para as folhas mais jovens e finalmente para o gro ou outro dreno de reserva e propagao (BUCHANANWOLLASTON, 1997). A eficincia de tal remobilizao ser vital para os vegetais em condies de baixa disponibilidade de nutrientes, fato comum na agricultura tropical.
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Citocininas ( - ) Lipases (+) Lipoxigenases (+)
Poliaminas ( - )
Sistemas de desentoxicao de radicais livres de oxignio (peroxidades, etc...) ( - ) Peroxidao de lipdeos (+) Radicais livres Protelise(+) Alteraes nas membranas (+) Exportao de N-amino (+) Rubisco ( - )
Etileno (+)
(O2-, H2O2, etc...) (+)
Oxidao de clorofilas (+)
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Fosforilaes e transporte de eltrons ( - )
Fotossntese ( - )
Importao de C para a respirao (+)
FIGURA 7. Processos de senescncia, segundo Pell & Dann (1990): (+) atividade aumenta e (-) atividade diminui; ocorre diminuio dos teores de citocininas e poliaminas; aumento na produo de etileno; diminuio da atividade de enzimas desentoxicadoras, como peroxidases; aumento da produo de espcies ativas de oxignio, que causaro a peroxidao de lipdeos, oxidao de clorofilas e alteraes nas membranas; aumento da atividade de enzimas hidrolticas como as lipases, as lipoxigenases e as proteases; hidrlise proteca; e diminuio da fotossntese. Com a hidrlise de macromolculas, se iniciar a exportao de aminocidos, compostos fosfatados e algum C.
Relaes fonte/dreno
2.A.2. Caractersticas morfo-fisiolgicas do dreno
Quando se inicia o desenvolvimento do fruto e de sementes, h uma dominncia do crescimento destes rgos sobre os rgos vegetativos (parte area e raz), enquanto as flores ainda so pobres competidores. Alguns tecidos de reserva subterrneos tambm so dominantes. Logo, em plantas perenes de produo anual, como o caso do caf e de frutferas, uma frutificao pesada em um ano vai reduzir o crescimento vegetativo (novas folhas) para o ano seguinte, e resultar em baixa frutificao (WARDLAW, 1990). O bom plantador de caf fica atento produo de novas folhas e procura no danific-las durante a colheita. Em rvores, alguns estudos j so feitos com a aplicao de retardadores de crescimento (herbicidas) em anos de alta produo de folhagem, o que reduz as reservas no tronco, diminuindo a frutificao. Com menor frutificao, a rvore produz jovens folhas que garantiro uma produtividade boa, sem excessos, no ano seguinte (BORY, G., comunicao pessoal). Algumas prticas de manejo de certas culturas so uma interferncia direta nas relaes fonte/dreno. Por exemplo, com frutferas, o raleio dos primeiros frutos vai permitir ainda um desenvolvimento vegetativo, e os frutos produzidos, depois, em menor nmero, sero de maior tamanho, caracterstica desejvel para a comercializao. A capao no tomateiro, que a eliminao da gema vegetativa terminal, vai diminuir o tamanho da planta e o nmero de frutos, que sero maiores (WARDLAW, 1990). Para as caractersticas do dreno, HSIAO (1990) sugere as seguintes caractersticas:
2.A.2.1. Tamanho e nmero de drenos
Um dreno a ser priorizado em clima tropical o sistema radicular, pois gua e nutrientes so fatores limitantes e podem afetar drsticamente o comportamento da fonte e do dreno a ser colhido, fato menos evidente em clima temperado, pois a evapotranspirao em geral menor. Por isto, o melhoramento vegetal tradicional, durante a revoluo verde nos anos 50 e 60, no buscou plantas com o sistema radicular muito desenvolvido, pois nem gua nem nutrientes eram, na maioria dos cultivos, limitantes. Hoje em dia tal pensamento j se modificou mesmo em relao ao clima temperado (SCHRADER, 1985), buscando-se plantas mais eficientes no uso de nutrientes (DUNCAN & BALIGAR, 1991).
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Em clima tropical, no entanto, grande parte da agricultura para a produo de alimentos feita com baixa tecnologia, em regies de alta evapotranspirao, sem irrigao e, visto o alto custo da aplicao de fertilizantes, conduzida com baixa disponibilidade de nutrientes (NORMAN et al., 1995). Portanto, a seleo de plantas com sistema radicular bem desenvolvido, para profundidade e rea radicular, apesar de no ser um rgo colhido para a maioria das culturas, permitir aumentos de produtividade (PUGNAIRE et al., 1994). HENDRIX (1994) prope que 44% do carbono fixado pela fotossntese vo para a raz, com 1/4 desse valor utilizado no crescimento, e o restante na respirao de manuteno. O mesmo autor afirma que para plantas em simbiose com o Rhizobium, pelo menos 12% dos fotossintatos produzidos pela planta so gastos na respirao e crescimento dos ndulos, assim como em plantas micorrizadas, 5 a 10% destes fotossintatos so usados pelo fungo. Estes gastos com a raiz, assim como na simbiose, so vantajosos para a planta de clima tropical devido carncia de nitrognio, que ser assimilado pelo sistema radicular mais eficiente e/ou pela simbiose com o Rhizobium. Da mesma forma, a associao com fungos micorrzicos trar benefcios ao aumento do volume radicular e conseqente absoro de gua e fsforo, ambos limitantes em solos tropicais. Portanto, este gasto de energia em um rgo no colhido trar vantagens para a eficincia no uso de gua, nitrognio e fsforo, que so limitantes na agricultura tropical (DUNCAN & BALIGAR, 1990). Tendo em vista a maior probabilidade de ocorrncia de temperaturas altas e falta de gua em clima tropical, um vegetal que possua uma florao e frutificao mais longas, indeterminadas, ter mais chances de produzir um maior nmero de drenos reprodutivos, como a prolificidade do milho, com mais de uma espiga aproveitvel por colmo, ou a soja, que comparada ao feijo, apresenta um perodo de florao e produo de vagens mais longo. Havendo um estresse ambiental durante uma parte do perodo de florao e de frutificao, ainda existem chances de que esse estresse termine antes do final da produo dos drenos (WARDLAW, 1990). Alm dessa vantagem, o milho prolfero mais eficiente no uso de N do que o milho no prolfero (CLARK, 1991). Plantas com o ideotipo proposto por MOCK & PEARCE (1975) e PATERNIANI (1990), em geral tero menor potencial de produo do que o ideotipo tradicional, com grande porte de parte area e espiga. O primeiro teria uma caracterstica de estabilidade de produo, produzindo menos que outros em condies favorveis, porm mantendo uma certa produo
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Relaes fonte/dreno
quando em condies desfavorveis. O ideotipo com estabilidade de produo, deve gerar variedades recomendadas para a agricultura de baixa tecnologia, sem irrigao e com baixa disponibilidade de fertilizantes. Aquele segundo ideotipo tradicional seria recomendado para uma agricultura de alta tecnologia, sob irrigao e fertilizao pesada (ARNON, 1975).
2.A.2.2. Transporte de carbono (intensidade do dreno) e perodo de enchimento do dreno (durao do dreno)
O transporte de carbono entre a fonte e os diferentes drenos inicia-se pelo carregamento do floema, via clulas companheiras (o mesmo ocorre para aminocidos), e vai depender do gradiente osmtico gerado entre a fonte e o dreno, assim como do descarregamento e consumo no dreno, segundo a teoria de MNCH (1930). Tal gradiente no gerado passivamente, h o bombeamento de sacarose para o floema, para os vegetais com transporte apoplstico, mas sobretudo, um transporte de K+ que considerado osmticamente mais importante, do que a sacarose para o carregamento e descarregamento do floema (MILBURN & KALLARACKAL, 1989). O principal acar de transporte a sacarose. Algumas plantas possuem um transporte simplstico de acares para o floema (MADORE, 1994), porm, na maioria, o carregamento no floema feito via apoplasto mesoflico e , portanto, considerado ativo, via transportador (para o transporte simplstico h gasto de energia no no carregamento da sacarose, mas na gerao do gradiente de K+). Este processo sensvel anoxia, baixas temperaturas (as temperaturas ideais so entre 20 e 30C) e a inibidores da ATPase (BRENNER & CHEIKH, 1995). Este transporte est associado a uma ATPase, com consumo de ATP, que importa K+ do mesfilo para o floema (a concentrao de K+ no floema alta: 1%), e exportando H+ do floema para a folha. Este sistema transportador controlado pela disponibilidade destes ons e de ATP (HENDRIX, 1994). O transporte de carbono dependente da idade fisiolgica dos tubos crivados. Com o envelhecimento destes, os poros das discutveis placas porosas (h ou no uma plasmalema entre elas?) comeam a ser bloqueados por P-protenas e calose. Para a maioria das plantas, exceo de monocotiledneas que no sintetizam P-protenas, esses dois compostos que regem a permeabilidade das placas porosas (MILBURN & KALLARACKAL, 1989). O K+ exportado da folha para o floema junto com a sacarose, ter grande importncia na gerao do gradiente osmtico entre a fonte e o dreno para
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que ocorra o fluxo de sacarose para este ltimo, principalmente em um dreno de acmulo de acares solveis como a cana-de-acar. No descarregamento do floema contra gradiente, este se dar atravs da bomba H+e cotransporte H+-sacarose, podendo o K+ tambm estar implicado neste descarregamento, aumentando o metabolismo de sntese no dreno, e conseqentemente, o uso de carboidratos que chegam. O descarregamento de sacarose no dreno (no apoplasto ou no citoplasma diretamente), ser dependente da atividade das invertases cida no apoplasto e neutra no citoplasma. Todos esses processos so dependentes de energia e esto sob controle ambiental e hormonal (SIVAK et al, 1989). A manuteno do gradiente osmtico entre a fonte e o dreno, para que ocorra o transporte, feita: a) pela converso qumica da sacarose em hexose ou amido, pois a hexose no recarregada no floema e o amido reduz a concentrao osmtica; b) pela compartimentalizao da sacarose no vacolo do dreno; c) pela utilizao da sacarose para crescimento pela biossntese de outros compostos ou na manuteno da clula (1 mol de sacarose = CO2 + H2O + 76 ATP); e d) pelo acmulo de K+ na fonte. Em um dreno de utilizao, como meristemas apicais em razes de cevada, 40 a 50% da sacarose so consumidas na respirao de crescimento (sntese de celulose, lipdeos e protenas); somente 1% da sacarose usado para a sntese de amido. No incio do desenvolvimento do dreno, a respirao de crescimento alta e a demanda por esqueletos de carbono grande, enquanto a demanda por ATP baixa. Assim, uma grande proporo dos carboidratos importados so respirados para produo de cidos orgnicos, com menor produo de ATP (Fig. 6). Em cenoura e batata, quando o dreno comea a acumular carboidratos, a via do citocromo na cadeia respiratria mitocondrial mais utilizada, e mesmo com o declnio da fotossntese e exportao nas fontes, a acumulao de matria seca nos drenos pouco reduzida, pois com a respirao via citocromo h maior produo de ATP (MILBURN & KALLARACKAL, 1989). Portanto, todo o processo de partio de carbono para o dreno afetado por fatores ambientais que influenciaro o balano de carbono, via nveis energticos, e balano hormonal, causando a resposta na cultura. Em clima tropical, os estresses ambientais, como altas temperaturas e falta de gua so bastantes comuns, e por isso quanto maior for o perodo de enchimento do dreno, maiores as possibilidades de manter o crescimento de pelo menos alguns drenos, e conseqentemente, a produo. A durao do dreno tambm funo da durao da fonte, pois no adianta ter um dreno a ser
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Relaes fonte/dreno
enchido sem uma fonte de fotoassimilados. Quase todo o carbono que vai para o dreno proveniente da atividade fotossinttica durante o perodo de enchimento deste dreno, sendo que pouco carbono retranslocado, ao contrrio do nitrognio (NORMAN et al, 1995). O carbono acumulado anteriormente est na forma de celulose, que a palha, pouco degradada pelo vegetal. A melhor correlao entre a atividade fotossinttica e a produo ocorre no perodo de florao e frutificao (PENG et al, 1991; HENDRIX, 1994). Ainda falando do ideotipo proposto por MOCK & PEARCE (1975) e PATERNIANI, (1990), o chamado intervalo entre a florao masculina e a feminina (IFMF), assim como a precocidade de florao, so consideradas caractersticas desejveis para a adaptao falta de gua (BOLAOS & EDMEADES, 1995). Mas o IFMF pode ser considerado uma caracterstica para condies tropicais de uma maneira geral, com altas temperaturas, falta de gua ou baixa umidade relativa, pois todos estes fatores influenciaro o processo de polinizao e fecundao, segundo KRAMER & BOYER (1995). Com esse intervalo mais curto, maiores as chances de um gro de plen vivel atingir o estigma, em qualquer um dos tipos de estresse ambiental.
2.A.3. Relaes fonte/dreno nos estdios de desenvolvimento
Um dos objetivos do melhoramento vegetal, que tem resultado em aumento da produtividade, o aumento do ndice de colheita. No campo, o aumento da produo por mudanas na partio de fotoassimilados e nutrientes, pela diminuio do crescimento de rgos no colhveis (sem esquecer, no entanto, que um rgo no colhvel na maioria das culturas o sistema radicular, de importncia primordial na assimilao de nutrientes e gua, sem os quais no h produo de fotoassimilados, segundo DUNCAN & BALIGAR, 1990), atravs do melhoramento vegetal, tem proporcionado aumentos de produtividade maiores do que os obtidos por otimizao das condies de crescimento, ou, pelo menos ainda, com o uso de plantas transgnicas. O potencial de rendimento regulado pela eficincia fotossinttica do dossel, pela partio de matria seca na planta, e pelas relaes fonte/dreno (HSIAO, 1990). A competio entre os drenos importante para a produtividade e qualidade do produto colhido. Em tomateiro, o primrdio da inflorescncia pode abortar se o fornecimento de assimilados for suficiente somente para os
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meristemas vegetativos da parte area e raz. Posteriormente, quando a taxa de crescimento do fruto for mxima, a dos meristemas vegetativos ser mnima. A prioridade de dreno na florao do tomateiro direcionado para as folhas jovens em relao s inflorescncias, e durante a frutificao a prioridade para o fruto em relao s folhas jovens, a qual prioridade em relao s flores, que por sua vez o sobre as razes. A competio entre os drenos controlada por reguladores de crescimento e pelo tamanho e atividade do dreno, que so sensveis a fatores ambientais como temperatura e falta de gua (HO et al., 1989). Portanto, segundo os estdios de desenvolvimento, mudam as prioridades de dreno: a) na fase de plntula, a fonte so o endosperma do gro ou os cotildones, a estaca, o tubrculo ou o bulbo, dependendo da forma de propagao; e o dreno so os meristemas apicais de parte area e raiz; b) as folhas, aps atingirem 2/3 do tamanho mximo, passam a ser uma fonte ao invs de dreno, havendo mudanas no desenvolvimento anatmico das vias de importao e exportao (WARDLAW, 1990). Os drenos principais continuam a ser as folhas jovens e razes, que competem proporcionalmente pelos assimilados; e c) no incio do desenvolvimento reprodutivo, as flores so pobres competidores, portanto ainda h crescimento vegetativo, e as folhas que atingirem seu tamanho mximo no incio do desenvolvimento dos frutos, principalmente as folhas prximas ao fruto, tero uma grande importncia no enchimento deste. Com o desenvolvimento do fruto, este promove uma dominncia, causando paralizao do desenvolvimento de outros rgos (TAMAS, 1995). No perodo de florao h um aumento de atividade fotossinttica das folhas (Tab. 3). Porm, nesse estdio no h grande acumulao de matria seca como no estdio de enchimento do fruto. Acredita-se que este aumento da atividade fotossinttica seja induzido pela necessidade de atingir um nvel crtico de carboidratos nas folhas prximas ao dreno para que ocorra a polinizao e o desenvolvimento do embrio (WARDLAW, 1990, MARSCHNER, 1995). Como pouco carbono retranslocado na planta, pois est alocado na forma de celulose nas folhas e razes, que no degradada pela planta (somente alguns fungos patognicos sintetizam celulases), a atividade da fonte no perodo de florao e frutificao assegura os fotoassimilados. Por isso, qualquer fator ambiental que afete a atividade fotossinttica neste estdio, como temperaturas altas e estresse hdrico, afetar o desenvolvimento do embrio no fruto e, conseqentemente, reduzir drsticamente a produtividade (KRAMER & BOYER, 1995).
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Relaes fonte/dreno
2.A.4. Comunicao e interao entre a fonte e o dreno
O metabolismo de carbono na fonte e no dreno, assim como o transporte entre esses tecidos, regulado por um controle de feedback pelos nveis dos metablitos intermedirios e finais, como foi visto em alguns casos no tem 2.A. O controle por feedback feito diretamente pelo metablito a nvel de transcrio de enzimas especficas do seu metabolismo, ou mediado por fitormnios, os quais controlam essas enzimas. No havendo uso desses metablitos ocorre uma diminuio de sua formao (FOYER & GALTIER, 1996). O sucesso para a existncia de todos os organismos dependente de sua habilidade para coordenar mudanas complexas de desenvolvimento, perceber e responder s flutuaes das condies ambientais. Respostas ao estmulo de desenvolvimento e do ambiente ocorrem pelo acoplamento da seqncia estmulo/resposta, que depende da percepo do estmulo pela clula, gerando e transmitindo um mensageiro intracelular (transduo do sinal), que ir promover uma mudana bioqumica; ou induzindo e reprimindo genes, que causaro a resposta da clula (Fig. 8). Tal processo necessita do reconhecimento do estmulo dado por um mensageiro primrio (fitormnio) com um receptor na plasmalema, ou diretamente por um receptor (o fitocromo por exemplo), e subseqente uso de um mensageiro secundrio e/ou protenas efetveis para transmitir o sinal dentro da clula e produzir a resposta desejada (BOWLER & CHUA, 1994). O movimento de fotoassimilados do local de sntese, na fonte, para o local de uso ou acumulao, no dreno, pode ser regulado em diversos pontos. O gradiente de concentrao entre a fonte e o dreno geralmente aceito como principal determinante da taxa de transporte e partio entre rgos. Tais processos tambm so controlados, em parte, por fitormnios que atuam como mensageiros entre clulas, tecidos e rgos, promovendo a ativao de genes especficos ou processos metablicos (FOYER & GALTIER, 1996). Porm, para se avaliar o controle hormonal das relaes fonte/dreno, importante entender primeiro onde atuam estes fitormnios, e se possvel, seu local de origem, que se encontra, em geral, nos prprios drenos (HO et al., 1989). Os gros tm uma concentrao de fitormnios maior que outras partes da planta. Os nveis de auxinas, citocininas, giberelinas e cido abscsico (ABA) variam distintamente durante o desenvolvimento do fruto e do gro. excesso de citocininas, a mxima concentrao dos outros fitormnios
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Estmulo: genoma, ambiente (comprimento do dia, gua, CO2, UR%, nutrientes, etc...) e estmulos fsicos.
Degradao (transporte) Receptores de fitohormonios Receptores de sinais externos na clula (fitocromo f, etc...)
Fitohormnio na forma ativa (livre)
Fitohormnio na forma inativa
Mensageiros intracelulares: IP3, protenas G, Ca-CAM, polarizao de membranas, etc.
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Gene Fosfocinases Expresso gentica (RNAm) Ativao enzimtica Sntese proteica
Ligaes qumicas: esterificao, fosforilao, etc...
Compartimentalizao: vacolo, cloroplasto, etc...
Inibio e antagonismo.
Resposta Fisiolgica
Local da ao fisiolgica
Local da sntese de fitohormnios
FIGURA 8. Participao de fitormnios na transduo de sinais externos. O fitormnio pode estar presente em um tecido, porm em uma forma inativa, sem causar efeitos.
Relaes fonte/dreno
geralmente ocorre durante o perodo de mxima acumulao de matria seca no dreno. Por exemplo, o ABA encontrado em altas concentraes no eixo embrionrio de soja, ou no embrio do milho, isto , ABA encontrado em mximas concentraes no local de descarregamento do floema no dreno, durante o perodo de rpido enchimento do gro. A ocorrncia de auxinas em sementes em desenvolvimento similar ao ABA, pois a mxima concentrao somente observada alguns dias antes do mximo de ABA. Da mesma forma, giberelinas em altas concentraes so encontradas no endosperma de ervilha, no momento de mxima elongao da vagem; assim como as citocininas, atingem os maiores teores no endosperma de gros de cereais em desenvolvimento. Em trigo, h um aumento da concentrao de citocininas 4 a 5 dias ps-antese (BRENNER & CHEIKH, 1995). Os fitormnios regulam as relaes fonte/dreno, provavelmente em uma ao conjunta, onde um fitormnio funciona como promotor de um evento e outro fitormnio como inibidor deste evento. Assim, o vegetal tem como controlar passo a passo todo o processo de assimilao, transporte e utilizao de carboidratos, fazendo uma sintonia fina, em funo de variaes ambientais instantneas, como teores de CO2 ou de H2O, para maximizar o processo de produo vegetal. Provavelmente, nenhum desses processos controlado por um nico fitormnio, mas sim pelo balano destes, como j foi bem visto para o controle da abertura estomtica (MANSFIELD & MCAINSH, 1995). O estmulo floral, por exemplo, acredita-se ser simultaneamente produzido em folhas diferentes, via fitocromos, enviado e amplificado em reaes de cascata em dois nveis, com a cooperao entre microfunes intracelulares e macrofunes intercelulares; isto em conexo com a produo e distribuio de energia e ativao gentica, associado a modificaes no balano de fitormnios. Tal resposta dependente tambm das mudanas ocorridas nas estruturas existentes, e da atividade enzimtica que manteve o crescimento vegetativo (JAEGHER & BOYER, 1990).
2.A.4.1. Movimento e possveis aes de fitormnios na fonte e no dreno
O vegetal controla o movimento de fitormnios entre diferentes tecidos, os quais regulam a absoro de gua e nutrientes e o trnsito de assimilados entre a fonte e o dreno, atuando ao nvel da plasmalema e causando modificaes qumico-estruturais em substncias celulares. Esses fitormnios tambm atuam no processo de florao. Atualmente, sugere-se que para
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ocorrer a florao, um balano complexo de auxinas, giberelinas e citocininas deva ser atingido, assim como j se sabe que a atividade de peroxidases est correlacionada a esse processo e, dependendo do estdio de crescimento da planta, controla o nvel endgeno de auxinas livre e a sntese de parede celular (JAEGHER & BOYER, 1990). Apesar de j termos conhecimento da ao hormonal sobre a fonte e o dreno, devemos acautelar-nos na afirmao de que as relaes fonte/dreno so controladas exclusivamente pelos fitormnios. Estes esto envolvidos no controle dos processos responsveis pelo crescimento e desenvolvimento vegetal, mas provavelmente agindo em conjunto com outros metablitos, com a expresso gnica de enzimas e estmulos exgenos e endgenos, que em conjunto, produziro a resposta do vegetal. Existe uma baixa correlao entre os nveis celulares de fitormnios e os seus efeitos, pois somente uma frao do seu contedo est em uma forma ativa e grande parte est inativado por ligaes qumicas ou por compartimentalizao, dependentes de pH e polarizao de membranas (Fig. 8). Alm disso, necessita-se de receptores celulares no stio de ao do fitormnio, que perdem a sensibilidade com a idade do rgo e fatores ambientais, como disponibilidade de gua e nutrientes, temperatura e fotoperodo (MARSCHNER, 1995). A seguir sero citados os principais efeitos dos fitormnios conhecidos, sobre as relaes fonte/dreno (Tab. 5):
A) Auxinas
O processo chamado crescimento cido para a elongao celular induzido por auxinas, que ao serem transportadas para dentro da clula (transporte polar de auxinas por um transportador especfico) so ionizadas liberando H+ no citoplasma. Tal processo ativar a bomba de prtons associada ATPase (H+-ATPase) membranar, promovendo a extruso de prtons, que vai acidificar a parede celular, rompendo as ligaes entre as fibrilas de celulose, ou ativando enzimas de degradao de celulose, permitindo o aumento de volume na clula (KASAMO & SAKAKIBARA, 1995). Portanto, as auxinas ou a toxina fngica fusicosina, estimulam a extruso de prtons e, conseqentemente, a expanso celular (MORRIS, 1996). As auxinas afetam a fotossntese induzindo a abertura estomtica, em uma sintonia fina, associada ao efeito do ABA para resposta rpida s variaes ambientais de luz, CO2 e UR%. O efeito comea com a acidificao do apoplasto em torno das clulas guardas, que junto com o efluxo de Ca2+, vai
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Relaes fonte/dreno
ativar os canais de influxo K+ na clula guarda (MANSFIELD & MCAINSH, 1995). Provavelmente tambm as auxinas ou a toxina fngica (fusicosina) estimulam o carregamento e descarregamento do floema pelo controle da atividade da ATPase membranar, funcionando como um regulador da concentrao de K+ no floema (JAEGHER & BOYER, 1990). As auxinas se movem do gro de soja para as folhas prximas, em maiores concentraes do meio para o fim do perodo de enchimento do gro. A remoo dos frutos reduz o exudado de auxinas no pecolo, indicando que o fruto a maior fonte dessas. Na fase vegetativa, as auxinas so exportadas do apex de caule, inibindo o crescimento de gemas laterais, demonstrado nos primeiros trabalhos de dominncia apical (THIMANN & SKOOG, 1934). Na fase de frutificao de feijo, o crescimento de gemas vegetativas inibido e, provavelmente, a fonte dessa inibio sejam os gros dos frutos dominantes. Quando as sementes de frutos mais velhos so retiradas, as gemas axilares retomam o crescimento. Frutos maiores exportam mais auxinas do que frutos menores, mostrando sua maior habilidade para exercer a dominncia sobre outros rgos (BRENNER & CHEIKH, 1995).
B) Citocininas
O crescimento de tecidos meristemticos estimulado por citocininas em ma, macadamia, ervilha e soja, sendo que a zeatina parece ser a mais ativa das citocininas naturais para este processo. Talvez os rgos dominantes reprimam o crescimento de gemas laterais, agindo como um dreno, ativado pelas auxinas, para acumular a citocinina oriunda de razes, impedindo o transporte dessas citocininas para as estruturas subordinadas. Estudos recentes mostram que o nvel e a distribuio de citocininas so controlados pelo apex vegetativo, que controla, inclusive, a sntese da forma ativa das citocininas (TAMAS, 1995). Citocininas produzidas nas razes so transportadas via xilema para a parte area, retardando a senescncia, parecendo induzir o incio do desenvolvimento reprodutivo, redirecionando o fluxo de assimilados do apex para as gemas reprodutivas (HO et al., 1989). Sob deficincia de nitrognio, menos citocininas so sintetizadas no apex radicular, e o que produzido, pouco exportado para a parte area, havendo ento induo do crescimento radicular em detrimento da parte area (VAN DER WERF, 1996). A aplicao de citocininas em folhas promove a atividade fotossinttica, pelo aumento do contedo foliar de clorofilas, acelerando o desenvolvimento de cloroplastos ou modulando a atividade de enzimas fotossintticas,
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Tabela 5. Algumas caractersticas e maiores efeitos dos fitormnios. PRECURSORES LOCAL DE SNTESE PRINCIPAIS EFEITOS
I- Citocininas (CIT): derivados de meristema radicular purina (pouco por (adenina). meristemas de parte area e sementes). II- Giberelinas (GA): estruturas desde o folhas em expanso cido mevalnico e apex vegetativo, at a do esqueleto mas tambm frutos de carbono gibano e sementes e (>80 giberelinas). talvez razes. III- Auxinas (AUX): derivados indlicos meristemas da parte do triptofano, sendo area, e em dicotileo mais conhecido, -dneas, na gema o cido indolapical e folhas jovens. -actico (AIA). IV- cido abscsico (ABA): carotenides: meristema radicular violoxantina e e tecidos j diferenneoxantina. -ciados da parte area.
diviso e expanso celular; sntese de RNA e protenas; induo enzimtica; dominncia apical; e retardador da senescncia; expanso celular; quebra de dormncia de gemas e sementes; induo de florao; e sntese de enzimas (hidrolases). dominncia apical; diviso e expanso celular cambial; induo e ativao de enzimas (H+-ATPase).
inibio da expanso celular da parte area; fechamento estomtico; favorece a absciso; induz dormncia de gemas e sementes; inibe a sntese de DNA; ativa ribonucleases e aumenta a permeabilidade membranar. estmulo da germinao; direcionamento do crescimento de raz; epinastia de folhas; induo da florao, maturao e amadurecimento.
V- Etileno (ET): Metionina e cido vrias partes da aminociclopropano- planta e de rgos. -1- carboxlico (ACC).
Baseado em Marschner (1995).
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Relaes fonte/dreno
retardando assim a senescncia (MARSCHNER, 1995). No dreno, as citocininas estimulam a formao de amiloplastos para acmulo de amido, reduzindo o aborto de gros (BRENNER & CHEIKH, 1995).
C) Giberelinas
Um dos processos sob controle hormonal mais bem estudados o da germinao, onde giberelinas produzidas pelo embrio de trigo ou cevada so exportada para a camada de aleurona do gro, estimulando a sntese da alfaamilase e outras hidrolases para a hidrlise do amido, liberando hexoses para o crescimento do embrio. Outro efeito conhecido das giberelinas a induo de florao, mesmo sob condies no indutivas. A aplicao de giberelina exgena em primrdios florais promove o desenvolvimento desses rgos reprodutivos (JAEGHER & BOYER, 1990). A retirada de frutos de videira causa diminuio dos teores de giberelinas nas folhas, sugerindo que frutos em desenvolvimento tambm exportam giberelinas para as folhas prximas. A remoo de tais frutos diminui a atividade fotossinttica da folha fonte, provavelmente pela diminuio do contedo de giberelinas nessa folha. Giberelinas aumentam a atividade da sacarose-fosfato sintetase, estimulando a exportao de sacarose da folha, sendo consideradas indutoras de desenvolvimento reprodutivo (BRENNER & CHEIKH, 1995). Em ervilha, a giberelina estimula o efeito inibidor de auxinas quando as duas so aplicadas juntas no apex vegetativo, provavelmente estimulando a exportao da auxina no pice dominante. Da mesma forma, h uma interao entre giberelinas e auxinas estimulando a atividade da invertase cida de drenos em desenvolvimento, e a expanso dos entrens de cana-de-acar. As giberelinas tambm esto envolvidas na dormncia e iniciao do desenvolvimento de tubrculos de batata, associado aos nveis de inibidores, de carboidratos disponveis e dos fatores ambientais como luz, temperatura e fotoperodo (TAMAS, 1995).
D) cido abscsico
O cido abscsico (ABA) regula, entre outros processos, a maturao do embrio, a dormncia de sementes e a atividade mittica em meristema radicular (BOWLER & CHUA, 1994). O movimento do ABA entre fonte e dreno parece ser dinmico. ABA move-se rapidamente de razes e folhas maduras para todos os outros rgos vegetativos, acumulando-se, geralmente, em tecidos de dreno. Quando aplicado em folhas fonte de plantas em frutificao, o ABA exportado para os gros em desenvolvimento, enquanto
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ao ser aplicado sobre o gro em desenvolvimento, fica imvel. Um dos efeitos mais conhecido do ABA sobre o controle estomtico em folhas. O ABA produzido na raiz e em folhas maduras exportado para outras folhas, causando fechamento estomtico e diminuindo a atividade fotossinttica em pouco tempo, talvez diminuindo tambm a atividade carboxilase e aumentando a atividade oxigenase da rubisco. O ABA afeta o grau de abertura estomtica, controlando o influxo e efluxo de K+ nas clulas guardas, assim como os de Cl- e cidos orgnicos na plasmalema e tonoplasto dessas clulas, para o balano inico. Este processo controlar a entrada ou sada de gua nas clulas guardas e conseqente movimento estomtico (MANSFIELD & McAINSH, 1995). O ABA funciona como um mensageiro (sinal) entre a raiz e a parte area, em condies de dessecamento do solo, para induzir o fechamento estomtico e economizar gua, antes mesmo de haver variaes no potencial hdrico de folha (DAVIES et al., 1990). Outros estresses como excesso de gua e salinidade tambm induzem formao de ABA, como mensageiro entre a raz e a parte area (BRENNER & CHEIKH, 1995). A elongao celular na zona de crescimento de razes mantida em condies de falta de gua pela produo de ABA, que estimula a atividade da enzima xiloglucano-endotransglicosidade, quebrando as molculas de xiloglucanos, que so estabilizadoras das microfibrilas de celulose (WU et al., 1994). Este fitormnio tambm est envolvido na adaptao anatmica e morfolgica de razes em solos compactados (HARTUNG et al., 1994). Os drenos, principalmente os gros, podem regular a atividade da fonte, retirando este ABA, que se move para o dreno, estimulando o descarregamento do floema e aumentando a atividade das invertases. ABA move-se das folhas para as vagens em desenvolvimento (na soja) e tambm transportado, via floema, para as razes, sendo reciclado de volta para a parte area, via xilema. Durante um estresse por altas temperaturas ou falta de gua, na fecundao de flores e formao de frutos, h um aumento do teor de ABA nestes rgos, diminuindo a porcentagem de fertilizao. Tal porcentagem de fertilizao tambm dependente da atividade fotossinttica nas fontes (MARSCHNER, 1995).
E) Etileno
O modo de ao do etileno ainda no est bem compreendido, apesar de se saber que o etileno afeta algumas respostas fisiolgicas e induz mudanas especficas na expresso gentica. Este fitormnio afeta a quebra de dormncia em frutferas de clima temperado e em algumas sementes, afeta tambm o
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direcionamento do crescimento meristemtico em epictilo e razes, a resposta ao estmulo fsico, a absciso de rgos, a induo floral (em abacaxi) e a maturao de frutos climatricos, associado diminuio de um inibidor como as auxinas ou a senescncia (REID, 1994). O processo de senescncia de folhas, flores e frutos vai afetar drasticamente a produtividade. Neste processo, o etileno foi considerado o agente primrio, porm estudos com mutantes de Arabdopsis demonstraram que a senescncia pode ocorrer na ausncia do etileno em forma ativa. Portanto, o etileno deve estar envolvido na acelerao da senescncia causada por estresse ambiental e menos na senescncia natural (REID, 1994). O etileno inibe a fotossntese, provavelmente pela induo do fechamento estomtico e aumento do teor de ABA. O aumento de sua produo na folha acompanhado por um aumento da respirao, como um pico climatrico (BRENNER & CHEIKH, 1995).
F) Outros compostos com ao hormonal ou de transduo
Algumas substncias como as poliaminas e os jasmonatos, exercem um controle sobre o metabolismo de carbono. A sua ao se d muitas vezes em tecidos distintos daquele onde foi sintetizado, sendo considerados, portanto, portadores de uma ao hormonal. Outras substncias em estudos como mensageiros intracelulares, mas que podem ter uma ao hormonal, so o cido saliclico, espcies ativas de oxignio (EAO) e brassinoesterides. Estes ltimos so lipoflicos, causando efeitos sobre a extruso de prtons e no potencial de membranas, provavelmente modificando a estrutura e funes das membranas, com efeitos benficos em culturas hortcolas (MARSCHNER, 1995). As poliaminas, principalmente a diamina putrescina e a triamina espermidina, so encontradas em plantas superiores, e mutantes que no sintetizam essas poliaminas so incapazes de desenvolverem-se normalmente. Alguns autores as consideram mensageiras intracelular. O declnio no teor de poliaminas celulares causa diminuio ou paralizao do crescimento da clula. Acredita-se que as poliaminas afetem a sntese e a atividade de macromolculas, a permeabilidade de membranas e processos como a mitose e meiose. Nas membranas, as poliaminas as estabilizam, protegendo-as contra a lise, estabilizando protenas membranares e mediando mudanas na estrutura fina dessas membranas, afetando o transporte transmembranar. Essas poliaminas estabilizam o DNA e protege-o contra a desnaturao por calor. Elas controlam tambm a fosforilao de certas protenas nucleolares e a sntese de protenas, podendo servir para tamponar o pH citoplasmtico, pelos
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seus grupamentos amino. As poliaminas esto envolvidas tambm nos processos de florao, impedimento da senescncia, e na adaptao seca, salinidade e temperaturas altas, e sua sntese afetada por auxinas e giberelinas (GALSTON & KAUR-SAWHNEY, 1995). J os jasmonatos so cidos graxos que regulam tambm o crescimento celular, e sua biossntese envolve a ao de lipoxigenases, oxidando o cido linoleico. Tais compostos so considerados fitormnios do estresse, similarmente ao ABA, e sua sntese aumentada sob falta de gua, induzindo sntese de protenas benficas sob condies de estresse, como a osmotina e chaperonas. Estes compostos so bastante mveis no floema, sendo mais efetivos do que o ABA na induo de senescncia. Vrios genes ou produtos da aco gnica, principalmente ligados ao crescimento celular mas tambm defesa do vegetal, so controlados pelos jasmonatos. O estmulo externo induz ao da lipoxigenase e de outras enzimas, produzindo os jasmonatos, que afetam o crescimento ou impedem a ao de produtos txicos de insetos e fungos. A estrutura qumica, propriedades fsicas e atividade dos jasmonatos so prximas as do ABA, provavelmente existindo um sinergismo entre estes (STASWICK, 1995). Tais compostos podem inibir o crescimento celular, inibir a germinao de sementes e plen, e promover, a partir de frutos e sementes, a senescncia de folhas e a tuberizao de batata (MARSCHNER, 1995).
2.A.4.2. Resposta intracelular mensagem externa
A percepo de um sinal externo pode ocorrer diretamente sem a ao hormonal, pela luz azul ou vermelha, umidade e teor de CO2 do ar; pelo dessecamento do solo, para o controle do movimento de estmatos; pela radiao vermelho distante, no efeito fotoperidico; ou pela diferena de potencial membranar, na absoro mineral e movimentos de estmatos e de tecidos, como sinais externos; ou pode ocorrer via um fitormnio comeando por um receptor na plasmalema, na maioria das respostas desconhecido (Fig. 9), onde o fitormnio se acopla a este receptor, iniciando-se uma srie de reaes metablicas e ativao de canais inicos nas diferentes vias de transduo de sinais. Essas vias alteraro a concentrao de mensageiros intracelulares, tambm chamados mensageiros secundrios, que por sua vez induziro o processo fisiolgico de resposta, principalmente atravs da fosforilao de enzimas pela ao de cinases, tornando-as ativas, ou atravs da induo gnica (MANSFIELD & MCAINSH, 1995).
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Relaes fonte/dreno
A) Os mensageiros intracelulares
As principais vias de transduo de sinais (Fig. 9), j bem conhecidas em animais, so: os nveis de Ca2+ no citosol e sua associao com a calmodulina (Ca-CAM); a ao de cinases e transportadores membranares; a via do inositol-1,4,5-fosfato (IP3), que controla tambm os nveis de Ca2+ no citosol; a via de protenas G, afetando tambm a ativao de cinases e produo do inositol-1,4,5-fosfato; e alteraes no pH citoslico e potencial transmembranar. Estes estudos esto se iniciando em vegetais (BETHKE et al., 1995). Aps a percepo do sinal, o processo celular de resposta iniciado em geral pela fosforilao de enzimas, por cinases e/ou pela induo gnica (STRYER, 1995). Um mensageiro intracelular conhecido em animais a via do AMP cclico, porm a presena de AMP cclico em plantas ainda motivo de controvrsia (VERHEY & LOMAX, 1993). Via do Ca2+ - O Ca2+ considerado um transdutor intracelular; e inmeros processos fisiolgicos vegetais so afetados pelos nveis intracelulares de Ca2+, ou atravs de ligaes com protenas como a calmodulina (CaM). O efeito fisiolgico se d pela ao de enzimas dependentes de Ca2+/CaM (Fig.9), principalmente as cinases (que vo fosforilar outras enzimas tornandoas ativas, permitindo a reao bioqumica dependente dessas enzimas, na forma fosforilada), assim como ativando bombas inicas (Fig. 10) (BETHKE et al., 1995). O Ca2+ parece estar envolvido tambm na resposta ao fotoperodo, como mensageiro secundrio na clula, aps a percepo de radiao vermelho distante pela formao do fitocromo que absorve este tipo de radiao. Nesse processo, o Ca2+ estimula principalmente o desenvolvimento de cloroplastos e do complexo fotossinttico (BOWLER & CHUA, 1994). A concentrao de Ca2+ no citosol em estado basal de 100 a 200 nM para no formar fosfato de clcio insolvel na clula. Essa concentrao intracelular vrias vezes menor do que a concentrao no apoplasto. Porm, a abertura de canais de Ca2+ em membranas externas e internas (bombas de Ca2+, na plasmalema, vacolo e no retculo endoplasmtico, como na Fig. 9) pode aumentar rapidamente a concentrao de Ca2+ no citosol e depois promover sua sada e retorno concentrao basal. Para a transduo do sinal de um mensageiro primrio (fitormnios, por exemplo) para dentro da clula, h necessidade de um receptor na plasmalema, que estimula a atividade dos transportadores membranares. Com altas concentraes de Ca2+ externo clula, estocado na parede celular, este ser bombeado para dentro, iniciando o processo fisiolgico. As bombas de Ca2+ so de 2 tipos: transporte de Ca2+
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Luz, gua, CO2, UR%, estmulos fsicos ? Ca+2 R? Plasmalema ? ? Parede Celular
Fitohormnios
Ca+2
canal inico
bomba inica (com gasto de ATP) Protena G IP3 Ca+2 Lipdios membr. Ca+2-CaM ACC etileno Ac. graxos livres Resp. fisiol. ARNm? Fosfocinases ARNm? ? Ca+2 Ca+2 CaM
Ca+2 Citoplasma
Lipases
Peroxidases
Retculo Ca+2 Endoplasm.
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Vacolo
FIGURA 9. Mensageiros intracelulares para a transduo de sinais. Os mecanismos de transduo esto representados em conjunto, pois h uma interao entre as diferentes vias de sinais: do Ca+2, da associao CaCAM, do IP3 e de protenas G. Estas vias ativam outros processos, como a ao de cinases e sntese de ARNm, que por sua vez induziro a resposta fisiolgica. R?: receptor membranar desconhecido; IP3: inositol-1,4,5trifosfato; CAM: calmodulina; ACC: cido 1-aminociclopropano-1-carboxlico.
Relaes fonte/dreno
associado hidrlise de ATP e transporte de H+/Ca2+ (BETHKE et al., 1995). O Ca2+ tambm controla os outros canais inicos, de K+ e de nions, como o de Cl- e o de malato, modelo bem conhecido para o controle da abertura estomtica (Fig. 11 e Fotos 3, 4, 5 e 6). O aumento do nvel de Ca2+ no citosol das clulas guardas, causa o fechamento estomtico (COUSSON et al., 1995). O Ca2+ parece controlar tambm o transporte de clula a clula via plasmodesmata , abrindo ou fechando o plasmodesmo em um sistema do tipo gap junctions, como conhecido em animais (LEW, 1995). Variaes de pH - A concentrao de H+ no citosol funciona como outro mensageiro intracelular, afetando o potencial membranar e os canais de Ca2+, K+ e de Cl- . O efeito do ABA causando o fechamento estomtico, por exemplo, dependente do pH da clula guarda (WARD et al. 1995), assim como o gradiente de pH na rizosfera responsvel pela distribuio de ABA na planta. A acidificao da rizosfera de pH 6 para 4 aumenta a concentrao de ABA no xilema em 70% (DAETER et al., 1993). O controle do pH citoplasmtico mediado por um tipo de protena integral de membranas, as ATPases-H+ da plasmalema (PMHA), tambm existente no tonoplasto. Essas so as protenas integrais de membranas mais bem estudadas, controladas por uma famlia de genes, e no caso da plasmalema, com 5% da superfcie exposta para o apoplasto, e 70% para o citoplasma. Essa protena consome energia qumica do ATP para transferir prtons para fora do citoplasma. Ela chamada tambm de bomba de H+, e tambm requer uma interao com os fosfolipdeos membranares para a sua ativao. Portanto, o transporte de prtons dependente destes fosfolipdeos membranares, que modulam a atividade da ATPase-H+ (KASAMO & SAKAKIBARA, 1995). A extruso de prtons, via ATPase, vai alterar a concentrao de H+ em determinados locais da plasmalema e do apoplasto (Fig, 10) afetando assim o potencial transmembranar local (STOECKEL & TAKEDA, 1990). Tal processo vai regular a polarizao da plasmalema e a atividade dessa bomba de H+ aumentada pela presena de luz, causando a hiperpolarizao nas clulas guardas e conseqente influxo de K+, na abertura estomtica, por exemplo (Fig. 11). A despolarizao da membrana, no escuro, vai causar o fechamento estomtico pelo processo inverso (COUSSON et al., 1995). O transporte de muitos solutos (ons, metablitos, etc...) para dentro e fora da clula mediado por transportadores secundrios, cuja habilidade para o funcionamento dependente da fora prton-motiva, criada pela ATPase-H+ (MICHELET & BOUTRY, 1995). Para a sntese de 1 mol de ATP so requeridos de 2 a 3 moles de H+ (KRMER, 1995).
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A) Via do Ca+2 e polarizao de membranas: Apoplasto Plasmalema Ca+2 estmulo K+ Despolarizao K+ Ca+2
Citoplasma CaM
+
ClCa+2-CaM
ClClHiperpolarizao + H+
Cl-
_
H+
resposta fisiolgica
B) Via do IP3: Apoplasto Plasmalema PI cinases PIP R? PIP2 IP3 DG Ca+2 FqC Ca+2 Ca+2 cinases resposta fisiolgica canal inico bomba inica, com gasto de ATP fosfolipase C
Ret. end.
Citoplasma
estmulo
Ca+2
FIGURA 10. Mecanismo de ao de 2 dos principais mensageiros intracelulares: a) Via do Ca+2, Ca-CaM e canais inicos; e b) Via do IP3. CaM: calmodulina; PI: inositol-fosfato; PIP2: fosfatidil-inositol-4,5bisfosfato; DG: diacilglicerol; FqC: fosfocinase C; IP3: inositol-1,4,5trifosfato.
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Relaes fonte/dreno
Os canais inicos e o potencial eletroqumico transmembranar - O estudo de canais inicos foi revolucionado pela tcnica de grampeamento setorial (patch-clamp) na dcada de 70, a qual, trabalhando com uma clula inteira ou um pedao da plasmalema, permite a medio da corrente eltrica gerada, enquanto uma voltagem conhecida aplicada. Os estudos do controle de canais inicos pelo potencial transmembranar foi bem desenvolvido para a compreenso do estmulo nervoso em neurnios de animais (STRYER, 1995). Somente h pouco tempo estes estudos comearam a ser desenvolvidos em clulas vegetais e, portanto, o conhecimento deste processo em plantas ainda est se iniciando. A diferena entre um canal inico e uma bomba de ons que, no canal existe sempre uma passagem entre o meio externo e interno, que pode estar fechada; e no caso das bombas, o transporte se d por mudana conformacional do transportador transmembranar, com gasto direto de energia neste processo, sem que haja ligao direta entre o espao externo e interno (STOECKEL & TAKEDA, 1990). O transporte de metablitos pode ser energizado por um gradiente de potencial eletroqumico entre os dois lados da membrana, promovido pela bomba de H+, ATP dependente e facilitado por canais e bombas inicas para o apoplasto e para o vacolo. Os valores do potencial eletroqumico (EM) so bastante variveis, de -40mV a -220mV. Um aumento na diferena de potencial eletroqumico, ou hiperpolarizao, sinnimo de uma diminuio de EM (para valores mais negativos), e uma diminuio da diferena de potencial eletroqumico, ou despolarizao, sinnimo de um aumento de EM (JACOBY, 1994). Os canais inicos nas membranas celulares so sensveis voltagem e/ou so Ca2+-dependentes. Existem canais catinicos e aninicos na plasmalema e no tonoplasto que regulam a concentrao de ons no citoplasma. Estes canais podem ser rpidos (R-tipo), promovendo o transporte em menos de 50 milisegundos, ou lentos (S-tipo), promovendo o transporte em tempo mais longo (CERANA et al., 1995). A clula pode variar o seu potencial membranar atravs dos canais e das bombas de extruso de prtons, controlando assim os canais de Ca2+, K+ e Cl-, que so os canais inicos mais bem conhecidos em vegetais. Os nveis de Ca2+ no citosol so mantidos tambm atravs do controle dos canais de Ca2+, de K+, de malato e de Cl-, que por sua vez so controlados pela diferena de potencial eltrico transmembranar, pelo potencial de Nernst para aquele on, e pelas ATPases, Ca2+ dependentes, movidas pela hidrlise do ATP (JAEGHER & BOYER, 1990).
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A) Fechamento estomtico: Ca+2 Retculo endoplasmtico
Ca+2 ABA Receptor? Luz, CO2, UR%,AIA, CIT Cl- e malato K+ H2 O Plasmalema B) Abertura estomtica:
Ca+2
Ca+2 IP3 malato Ca+2 ClClmalato
Cl- e malato K+ H2 O
Tonoplasto
Ca+2
Retculo endoplasmtico
Ca+2 ABA Receptor? Luz,CO2, UR%, AIA, CIT
Ca+2
Ca+2
malato Ca + 2 H+ ClK+ H2 O
H+ K+ H2 O Plasmalema
Tonoplasto
canal inico bomba inica, com gasto de ATP
FIGURA 11. Mecanismos de controle estomtico, segundo Mansfield & McAinsh (1995): A) Fechamento estomtico; e B) Abertura estomtica. IP3: inositol-1,4,5-trifosfato; ABA: cido abscsico; AIA: auxinas; CIT: citocininas.O ABA promove um efeito de longo prazo (durante a falta de gua, por exemplo), enquanto que a luz, o CO2, a UR%, AIA e CIT, modulam esta resposta instantaneamente, mesmo sob a ao de ABA. Para o fechamento dos estmatos, primeiro so ativados os canais aninicos de resposta rpida, de Cl- e malato, para depois serem ativados os canais de efluxo de K+e de gua. Na abertura. os canais aninicos so bloqueados e a bomba de H+ ativada, promovendo o influxo de K+ e de gua (Schroeder, 1995).
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Relaes fonte/dreno
FOTO 3. Trs estdios da abertura estomtica de colza (Brassica campestris). Fotos feitas em microscpio eletrnico (X 4000), e cedidas por cortesia do Prof.D. Laffray, da Universidade de Paris 12.
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FOTO 4. Anatomia foliar de colza (Brassica campestris), obtidas por crioscopia. Fotos feitas em microscpio eletrnico (X 500), e cedidas por cortesia do Prof.D. Laffray, da Universidade de Paris 12.
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Relaes fonte/dreno
FOTO 5. Superfcie foliar de milheto (Pennisetum glaucum), mostrando a base de um tricoma, estmatos e clulas dispostas paralelamente. Fotos feitas em microscpio eletrnico (X 500), e cedidas por cortesia do Prof.D. Laffray, da Universidade de Paris 12.
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FOTO 6. Superfcie de folha de Arabdopsis thaliana. Fotos feitas em microscpio eletrnico (X 300), e cedidas por cortesia do Prof.D. Laffray, da Universidade de Paris 12.
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Relaes fonte/dreno
O controle dos canais inicos e conseqentemente a resposta ao estmulo externo envolve a polaridade da membrana plasmtica e vacuolar. Em plantas, vrios mecanismos podem causar a despolarizao da membrana (potencial eletroqumico transmembranar menos negativo, passando de -140 a -200 mV, para -50 a -90 mV), atravs de receptores na membrana, causando a ativao de canais nionicos lentos (S-tipo) e rpidos (R-tipo) (de malato no tonoplasto e principalmente de Cl-, na plasmalema para o apoplasto), considerados como mecanismo chave para a transduo do sinal em estmatos (Fig. 11) (SCHROEDER, 1995). Este acmulo de nions no citoplasma causa inibio da bomba de H+. A chamada hiperpolarizao de membranas (potencial eletroqumico transmembranar mais negativo, atingindo os valores de -140 a -200 mV), ocorre pelo processo inverso despolarizao, com inibio de canais nionicos, que provocaro a ativao da bomba de H+ (WARD et al., 1995). A hiperpolarizao da membrana ativar os canais de influxo de K+ e/ou efluxo de Cl- e a despolarizao da membrana, por sua vez, modular os canais de efluxo de K+ e/ou influxo de Cl-, assim como os de malato no tonoplasto (CERANA et al., 1995). Estes, por sua vez, controlaro fenmenos como a abertura ou fechamento estomtico e movimento de folhas (COT, 1995). importante salientar que mesmo com a despolarizao pode haver efluxo de Cl-, se por exemplo, o potencial eletroqumico de Nernst para o Clfor maior no interior do que no exterior da clula (JACOBY, 1994). Essas variaes no potencial transmembranar vo afetar e controlar o transporte de metablitos entre a clula e o exterior. A despolarizao ou hiperpolarizao da membrana vai regular tambm o fluxo de Ca2+ entre a clula e o apoplasto e, conseqentemente, a resposta celular (STOECKEL & TAKEDA, 1990). Via do inositol(1,4,5)-fosfato - A ao do Ca2+ est associada tambm ao de outro mensageiro intracelular, o inositol 1,4,5-trifosfato (IP3) (Fig.10). A enzima fosfolipase C na plasmalema, ativada pelo receptor membranar do estmulo, por cinases ou pela interveno de protenas G, hidrolisa o fosfatidil inositol 4,5-bifosfato (PIP2), um lipdeo da membrana, produzindo o IP3 e diacilglicerol (DG) (COT, 1995). O DG, que um outro mensageiro intracelular, mantm-se um componente membranar e favorecer a fosforilao de protenas na membrana, como a protena cinase C, dependente de Ca2+ e de fosfolipdeos. O IP3, por sua vez, estimula a liberao de Ca2+ estocado no lmen do retculo endoplasmtico para o citosol, e estimula os canais de Ca2+ da plasmalema, para entrada deste on. Adicionalmente ao mecanismo de sntese do IP3, a fosfolipase A2, tambm
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constituinte da plasmalema, estimulada pela associao Ca2+/CaM, ativando lipoxigenases, que formaro hidroxiperxido de cidos graxos. Tais compostos funcionaro como ionforos para a entrada de Ca2+ na clula. Pela regulao dos nveis de Ca2+ no citosol, o IP3 participa junto com outros mensageiros secundrios no controle de diversos processos fisiolgicos, entre eles a resposta a luz azul e vermelha e o controle de fluxo de K+, para o movimento de estmatos (COT, 1995). Durante a resposta ao estmulo externo, as concentraes de IP3 so menores que 0.2 atomoles (10-8 mol) (VERHEY & LOMAX, 1993), e aps a induo do processo, o IP3 rapidamente catabolizado (JAEGHER & BOYER, 1990). Via das protenas G - A resposta fisiolgica pode tambm se dar pela ao de protenas G (assim chamadas devido ao fato de estar associada ao balano de GDP/GTP, um nucleotdeo com guanina ao invs da adenosina do ATP, durante o seu ciclo de funcionamento). As pequenas protenas G (uma nica cadeia polipeptdica) atuam sobre as funes intracelulares, e as heterotrimricas (com 3 subunidades, alfa, beta e gama) atuam na transduo de sinais transmembranar (VERHEY & LOMAX, 1993). Certas cinases para se tornarem ativas so dependentes da associao Ca2+/CaM e/ou da ao de protenas G. Atravs dessas cinases, outras enzimas do processo fisiolgico de resposta so fosforiladas nos resduos de serina ou treonina, passando a ser funcionais (MANSFIELD & McAINSH, 1995). As protenas G parecem estar tambm envolvidas, junto com o Ca2+, na resposta ao estmulo fotoperidico (BOWLER & CHUA, 1994), assim como para a ativao da fosfolipase C, na via do inositol-fosfato, sob estmulo produzido pela luz azul e pela luz vermelha, por exemplo (COT, 1995). As protenas G regulam os canais de K+ em clulas guardas e esto envolvidas tambm na resposta intracelular auxina (VERHEY & LOMAX, 1993).
B) Outros sistemas intracelulares para a resposta fisiolgica.
Alm da ao dos mensageiros intracelulares citados acima, ou mesmo sob o efeito destes, o processo fisiolgico de resposta a um estmulo externo pode ocorrer por induo gnica ou por outros sistemas enzimticos intracelulares ainda pouco estudados, tais como: A ao das peroxidases em membranas e a produo de espcies ativas de oxignio (EAO) - Certas enzimas so desentoxicadoras da ao oxidativa txica de espcies ativas do oxignio, EAOs (como por exemplo, o anionte superxido [O2-], o radical oxidrilo [OH] e o perxido de hidrognio [H2O2]), produzidos pelo metabolismo, como o H2O2 produzido na
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Relaes fonte/dreno
fotorespirao. No cloroplasto, a superxido dismutase consome O2- e produz H2O2, que reduzido a H2O por peroxidases no ciclo da ascorbato peroxidade-glutatona redutase (MARSCHNER, 1995). A mesma funo tem a catalase no peroxissoma, removendo o perxido de hidrognio formado durante a reao das enzimas acil-CoA oxidase, glicolato oxidase e urato oxidase (WILLEKENS et al., 1995). Da mesma forma, a ao da glutatona redutase, das vitaminas C e E e de carotenides, eliminariam essas espcies ativas de oxignio na clula. Estes radicais livres tm um efeito deletrio sobre os lipdios insaturados das membranas celulares, como o cido linoleico e linolnico, afetando a integridade membranar. A manuteno da atividade protetora dessas enzimas desentoxicadoras se d pela regulao de genes que controlam suas atividades. Principalmente em cloroplastos, a ao dessas enzimas desentoxificadoras poder retardar a senescncia e os efeitos dos fatores ambientais sobre as membranas cloroplsticas (PEARRUBIA & MORENO, 1994). As peroxidases catalizam tambm a polimerizao de fenis, com consumo de H2O2, para a formao de lignina e suberina e, podem tambm estar associadas resposta fotoperidica, causando modificaes nas membranas e controlando os nveis de fitocromos e Ca2+ na clula (JAEGHER & BOYER, 1990). A ao do balano antagnico de ABA e citocinina na morfognese, se d pelo controle da expresso gentica de peroxidases, envolvidas tambm na resposta falta de gua, salinidade e trauma fsico. Altos nveis de peroxidases esto relacionados com diminuio da elongao celular, minimizando a extensibilidade da parede celular (CHALOUPKOV & SMART, 1994). Alm desses efeitos, as espcies ativas de oxignio e o cido saliclico participam na interao patgeno-hospedeiro e nos mecanismos de tolerncia especfica quele patgeno. Atualmente se usa para descrever a tolerncia a alguns patgenos o termo resistncia sistmica adquirida (RSA), que um conjunto de respostas fisiolgicas na planta (produo de lignina, morte do tecido atacado e outros) e sobre o patgeno (o ataque ao patgeno, pela ao de H2O2) promovido por certos genes de defesa, ativados a partir de sistemas de sinais (HAMMOND-KOSACK & JONES, 1996). O objetivo deste conjunto de respostas seria localizar a invaso, impedindo sua disseminao na planta. Em tal sistema de defesa da planta, o RSA, a produo de H2O2 e do cido saliclico est ligada a transduo de sinais dentro e entre clulas, iniciando uma resposta conjunta do tecido, para evitar a disseminao do patgeno (FERNANDES et al., 1997).
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A ao das cinases e das fosfatases sobre as fosfo-protenas - A resposta bioqumica ao estmulo externo ser, em grande parte, induzida por uma cascata de fosforilaes de algumas enzimas chaves para este processo bioqumico, atravs das cinases. Algumas dessas cinases so solveis no citoplasma e outras esto associadas plasmalema, dependentes de Ca2+ ou da associao Ca2+-calmodulina, para a sua ao (VERHEY & LOMAX, 1993). Nos cloroplastos existem mais de 30 fosfoprotenas nos tilacides, estroma e membrana cloroplstica, que so ativadas pela sua fosforilao; entre elas, as protenas da cadeia de transporte de eltrons, controlando o fluxo de eltrons para a fotofosforilao cclica ou no cclica, assim como algumas enzimas do ciclo de Benson-Calvin (BENNETT, 1991). Outras enzimas, as fosfatases, se encarregam da desfosforilao daquelas enzimas chaves, tornando-as inativas novamente. A represso da ao das fosfatases pode tambm induzir o processo. Portanto, a fosforilao ou desfosforilao de uma enzima chave de um processo bioqumico, controla a intensidade do processo bioqumico de resposta ao estmulo externo (BOWLER & CHUA, 1994). A degradao de protenas - A atividade de uma enzima, responsvel pela resposta celular por exemplo, depende tanto da taxa de sntese como da taxa de degradao. Por isso a regulao diferenciada da estabilidade enzimtica representa um mecanismo para modulao da expresso gnica e da resposta fisiolgica. Atualmente, aumentam as evidncias de que a degradao seletiva de enzimas funciona como um mecanismo de regulao enzimtica (CALLIS, 1995). A atividade de proteinases, que so enzimas proteolticas, vai controlar a atividade da enzima degradada (VIERSTRA, 1996). A perda da sensibilidade ao sinal externo pode estar associada, portanto, degradao seletiva de protenas (por exemplo, os receptores membranares de sinais) que, comparada com a fosforilao de protenas e outras modificaes reversveis, uma forma drstica de inativar uma protena. Mas este processo pode ter uma grande importncia para o controle de protenas que so requeridas, seja por perodo limitado, seja em condies especficas de desenvolvimento ou do metabolismo, mas que podem ser deletrias em condies normais. Por exemplo, a ciclina atua estimulando a diviso celular, mas sua degradao um mecanismo regulatrio essencial para que a clula passe para a prxima fase no ciclo celular. A degradao de protenas de reserva estimula a germinao de uma semente ou o crescimento em outros tecidos. Na senescncia de tecidos ocorre a degradao de protenas e exportao de aminocidos para tecidos em formao. Estes so alguns exemplos do controle de relaes fonte/dreno, atravs da protelise, devido ao de proteinases (BOWLER & CHUA, 1994).
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Relao fonte/dreno
2.A.4.3. Uso de plantas transgnicas para a eficincia do balano de carbono
Desde 1980, o uso de plantas transgnicas tem se tornado uma ferramenta poderosa para a fisiologia vegetal. Plantas transgnicas tm sido usadas para estudos do controle metablico por fitormnios e outros compostos; manipulao das relaes fonte/dreno; adaptao ambiental; conservao de alimentos e tolerncia a doenas, insetos e herbicidas. Os estudos com plantas transgnicas sobre a ao hormonal tem permitido progressos na compreenso destes fenmenos. O mais espetacular resultado nessa rea foi o adiamento do amadurecimento e senescncia de tomate, pela inibio da sntese de etileno ou inibio da percepo do seu sinal. Esses resultados podero ser aplicados em outros frutos climatricos ou para a floricultura. Outrossim, padres de balano de auxinas e de citocininas podero ser modificados para alterar as relaes fonte/dreno, alterando assim a produtividade agrcola (KLEE & LANAHAN, 1995). O modelo vegetal mais utilizado para os estudos de biologia molecular, a exemplo das drosfilas para a gentica animal, uma pequena crucfera, Arabidopsis thaliana, que apresenta vrias vantagens como modelo vegetal. Por ser um vegetal de pequeno porte, ela pode ser cultivada em grande quantidade, at em tubos de ensaio, podendo produzir milhares de descendentes em oito a dez semanas. Ela tem tambm a grande vantagem de possuir o menor genoma vegetal conhecido (7 x 107 pares de nucleotdeos). Atravs da cultura de tecidos e de transformaes celulares, foram obtidos diversos mutantes e, hoje em dia, uma coleo completa e organizada de clones de ADN genmico est disponvel (ALBERTS et al., 1994). Avanos j foram conseguidos em algumas reas, com plantas transgnicas j sendo cultivadas, apresentando tolerncia a herbicidas e tolerncia a insetos (como o algodo, tomate e tabaco, com a toxina Bt, oriunda do Bacillus thuringiensis, ou o gene pea lectin em batata) e conservao de alimentos, como o tomate FLAVR- -SAVR. Na proteo de culturas, contudo, o uso de plantas transgnicas com a toxina Bt, j demonstrou problemas como nos tratamentos qumicos, pois certos artropodas tm mostrado tolerncia toxina Bt. O mesmo poder ocorrer com a tolerncia a herbicidas, com o surgimento de ervas daninhas tambm tolerantes a estes herbicidas. Ao contrrio da tolerncia a fatores biticos (pragas e doenas), que so caractersticas em geral monognicas, a tolerncia ao estresse ambiental multignica, dificultando bastante o avano nessa rea, porm alguns
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resultados j foram conseguidos, como: tolerncia ao frio em Arabidopsis thaliana, tabaco e alfafa, e tolerncia a metais pesados em tabaco e Brassica napus (ROGERS & PARKERS, 1995). Outra grande dificuldade no progresso, na rea de adaptao ambiental, o fenmeno da redundncia gentica, onde a expresso fenotpica controlada por funes de mltiplos genes que funcionam em rede, com comunicao e feedback loops entre eles. Nesse processo, se um membro da rede perdido por mutaes, a expresso fenotpica mantida pelos outros genes restantes. Isto faz com que um gene retirado ou adicionado a uma planta transgnica, possa no causar variao fenotpica de comportamento no campo, por exemplo (PICKETT & MEEKS-WAGNER, 1995). Por enquanto ainda no foram conseguidos progressos na produtividade agrcola via plantas transgnicas, e necessitamos de um conhecimento mais aprofundado sobre o controle gentico em rede para uma expresso fenotpica desejada. Outro problema com a biologia molecular que devemos ter muito cuidado com a disperso dessas caractersticas introduzidas em uma planta para outras, por exemplo via poln das transgnicas, cruzados com plantas silvestres ou ervas daninhas compatveis, formando hbridos e perdendo-se o controle dessa caracterstica. A erradicao dessas plantas silvestres e/ou invasoras modificadas torna-se extremamente difcil; o que j est acontecendo em algumas regies onde se trabalha com a biologia molecular (RAYBOULD & GRAY, 1994). A manipulao gentica, via plantas transgnicas, tem sido de grande auxlio, principalmente na compreenso do processo de partio e alocao de assimilados na planta e seus efeitos na produtividade agrcola, para a identificao das etapas chaves que controlam a taxa fotossinttica e a conseqente habilidade da fonte em produzir fotoassimilados. Para tanto, mutantes com nveis alterados de enzimas chaves do metabolismo de carbono j foram desenvolvidos. A anlise de mutantes de tabaco com um decrscimo de 60% dos nveis da rubisco, mostra que s h uma inibio de 6% da atividade fotossinttica. Essa reduo do nvel de rubisco em 60% compensada por um aumento de 60 a 100% do processo de ativao da enzima, pela rubisco ativase. Uma posterior reduo da atividade restante (50% da atividade restante), da rubisco, vai ento causar uma diminuio drstica da atividade fotossinttica (SONNEWALD et al., 1994). Portanto a rubisco (mais de 50% das protenas foliares) pode funcionar como uma protena de reserva de N, diminuindo sua atividade sem alterar a assimilao de CO2, quando houver deficincia de N.
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Relao fonte/dreno
Outra enzima chave no metabolismo de sntese de carboidratos a frutose-1,6-bifosfatase ([2], Fig. 12). O produto da ao dessa enzima, a frutose-6-fosfato, o metablito que canalisa os assimilatos recmformados, para a sntese de sacarose no citoplasma. Estudos com folhas de batata modificada genticamente, com somente 10% da atividade da frutose-1,6-bifosfatase, tiveram seu crescimento retardado, com reduo de 42% no teor de clorofilas, mantendo uma atividade fotossinttica de 5 a 10%, e somente 25% da produo de tubrculos, quando comparadas com plantas no transformadas. Plantas modificadas com 40% da atividade da frutose-1,6-bifosfatase, tiveram sua atividade fotossinttica reduzida para 80%, mas no diferiram das no transformadas, na produo de tubrculos. O que indica que a atividade fotossinttica no to limitante para a quantidade de carboidratos acumulados no tubrculo. Uma reduo de 20 a 30% da atividade do transportador de fosfato ([1], Fig. 12) na membrana cloroplstica (responsvel pela exportao de trioses-P) de plantas de batata transformadas, no reduziu a atividade fotossinttica, mas diminuiu os teores de trioses-P e de glicose-6-P nessas folhas, com concomitante aumento dos teores de amido no cloroplasto. Isto, com apenas somente uma modificao da alocao de carbono na folha (KOMANN et al., 1996). Outras manipulaes feitas para aumento de duas a trs vezes da atividade da sacarose-fosfato sintase ([3], Fig. 12) (responsvel pela sntese de sacarose) em espinafre, no causaram aumento do teor de sacarose na folha, e o excedente da enzima foi desativado. Em tomate, o aumento da atividade da sacarose-fosfato sintase no causou aumento na alocao de carbono para o fruto, mas estimulou o crescimento da parte area, aumentando a relao parte area/raz (FOYER & GALTIER, 1996). Manipulaes da atividade da frutose-6-P fosfotransferase em batata (responsvel pela interconverso de frutose-2,6-bifosfato e frutose-6-fosfato, regulando a sntese de amido ou sacarose), pela remoo do pirofosfato, atravs do aumento da atividade de uma pirofosfatase, desloca o equilbrio da reao para a formao de frutose-6-fosfato, estimulando a sntese de sacarose. Tais plantas apresentam um aumento de duas a quatro vezes na relao de acares solveis para acares insolveis, devido a uma diminuio dos teores de amido com um pequeno aumento no teor de sacarose. Quando o equilbrio deslocado no sentido inverso, para a acumulao de frutose-1,6-bifosfato provocada por feedback, h reduo dos processos de sua sntese, desde as trioses-P no cloroplasto, que so ento desviadas para a sntese de amido.
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Clula guarda
Folha (fonte)
CO2 atm
Clula guarda
CO2 Clula mesoflica Cloroplasto ciclo de Calvin amido triose-P Pi Apoplasto da fonte Cl. companheira do floema Apoplasto do dreno TF
HCO3- + c. C3
c. C4
c. C3 CO2 CO2 F-1, 6-BF 2 F-6-F G-6-P K+ ATPase K+ H+ H+ ATPase H+ H+ F-2, 6-BF SFS, SF UDF-G sacarose 3 *apopl. H+ sacarose TS 4 H+ sacarose H+ sacarose TS H+ sacarose sacarose 6 IN glic. + frut. glic. Citoplasma Resp. de crescimento Parnquima do dreno IA 5 c. C4
Vacolo c. C4 glic. + frut. sacarose *simpl.
triose-P Pi
glic. + frut.
Mitocondria CO2 + H2O + ATP + NADH Resp. de manuteno Amiloplasto amido reservas
glic.
Vacolo (reservas) sacarose 7
IAV
glic. + frut.
Dreno de crescimento ou de reservas
FIGURA 12. Alocao de C na fonte e no dreno: metablitos participantes da sntese, transporte, acumulao e utilizao de carbohidratos em organelas celulares nos 2 tipos de tecido. Adaptado de Davies (1995). Etapas de contrle do fluxo de C: (1) Transportador de fosfato, responsvel pela troca de trioses-P por fosfato inorgnico (Pi), no envelope cloroplstico; (2) enzima frutose-1,6-bisfosfatase, que controla as concentraes de frutose-1,6-bisfosfato (F-1,6-F) e frutose 6fosfato (F-6-F), e consequentemente, a alocao de C em amido ou sacarose; (3) enzimas sacarose-fosfato sintase (SFS) e sacarose fosfatase (SF), para a sntese de sacarose; (4) transportador de sacarose (TS) (em plantas com transporte apoplstico), que regula a passagem de sacarose para o floema da fonte, e do floema para o citoplasma do dreno; (5) enzima invertase cida (IA), que hidroliza sacarose no apoplasto do dreno; (6) enzima invertase neutra (IN), que hidroliza a sacarose no citoplasma; e (7) enzima invertase cida vacuolar (IAV), que hidroliza a sacarose no vacolo do dreno. F-2,6-BF: frutose-2,6bisfostato, que controla a atividade de (2) e de outras 7 enzimas do metabolismo de C; G-6-F: glicose-6-fosfato; e UDF-G: uridinadifosfoglicose.
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Relao fonte/dreno
Ainda em batata (na qual, o transporte de sacarose para o floema apoplstico), manipulaes genticas para inibio do transportador de sacarose para as clulas companheiras na folha diminuiu a fotossntese, aumentando os teores de hexoses, sacarose e amido da folha, e reduzindo o crescimento de razes e tubrculos, diminuindo assim a produtividade. Da mesma forma, manipulaes genticas para aumento da atividade das invertases cida ([5], Fig. 12) e neutra ([6], Fig. 12) levaram a um aumento de 30% no peso fresco dos tubrculos, com diminuio do nmero de tubrculos. Tais experimentos demonstram a possibilidade de manipular-se a alocao e partio de carbono na planta (SONNEWALD et al., 1994). 2.B. ALOCAO
DE CARBONO NA PLANTA (ASPECTOS BIOQUMICOS)
Os primeiros carboidratos produzidos pela assimilao de carbono, dentro do cloroplasto so a trioses-P (Fig. 12), que so o dihidroxi-acetonafosfato (DHAP), o gliceraldedo-fosfato (G3P), o cido difosfoglicrico (DPGA) e o cido fosfoglicrico (PGA). A interconverso dessas trioses-P consome ou produz ATP e NADPH (estes ltimos no atravessam o envelope cloroplstico; Fig. 1). Essas trioses produzidas no cloroplasto so exportadas para o citoplasma ou usadas para a sntese de amido no cloroplasto, como reserva da folha. No citoplasma, essas trioses so consumidas pela clula ou aportam ATP e NADPH para o citoplasma; ou servem ainda, para a sntese de sacarose, para reserva no vacolo ou para serem exportadas para outros tecidos (Fig. 12) (VAN DER WERF, 1996).
2.B.1. Metabolismo de carboidratos no cloroplasto e transporte para o citoplasma
As trioses-P produzidas no cloroplasto podem, portanto, ser exportadas para o citoplasma ou convertidas em amido para reserva no prprio cloroplasto. Quando a concentrao de trioses-P no cloroplasto alta, as trioses-P do cloroplasto no so exportadas, e so desviadas para a sntese de amido. Havendo necessidade, durante o perodo noturno, por exemplo, o amido hidrolisado para que triose-P seja exportada. Quando a demanda de trioses-P para o citoplasma alta, no h sntese de amido no cloroplasto (SIVAK et al., 1989). A sntese, ou degradao do amido, controlada pelo metabolismo da sacarose no citoplasma (BECK & ZIEGLER, 1989).
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Alocao de carbono na planta
A sada dessas trioses-P dos cloroplastos, interconvertendo-se entre elas no citoplasma e depois retornando ao cloroplasto, funciona como sistema de fornecimento de ATP e NADPH para o seu consumo no citoplasma da prpria clula (Fig. 1), ou para outras clulas, como o caso do transporte dessas trioses-P entre as clulas do mesfilo e da bainha perivascular em plantas C4 do tipo NADP-ME (Fig. 4) (EDWARD & WALKER, 1983; HALL & RAO, 1994). A passagem dessas trioses-P, atravs do envelope cloroplstico, regulada pelo transportador de fosfato (Fig. 12) em um processo de transporte associado entrada de fsforo inorgnico (Pi) (RAO et al., 1990). Portanto, o nvel de Pi no citoplasma controla a sada de trioses-P do cloroplasto, podendo limit-la e, conseqentemente, reduzir a assimilao de CO2, pelo excesso de trioses-P no cloroplasto (BRENNER & CHEIKH, 1995).
2.B.2. Sntese de sacarose no citoplasma
No citoplasma, as trioses-P so convertidas em frutose-1,6-bifosfato, que sob ao de uma enzima chave no controle do fluxo de carbono na clula, a frutose-1,6-bifosfatase ([2], Fig. 12), transformada em frutose-6-fosfato, liberando Pi. A frutose-6-fosfato pode ser utilizada para a sntese de sacarose, ou ser fosforilada por uma cinase, produzindo frutose-2,6-bifosfato, que pode retornar forma de frutose-6-fosfato pela ao da mesma cinase ou pela ao da frutose-2,6-bifosfatase. O destino da frutose-6-fosfato para a sntese de frutose-2,6-bifosfato ou para a sntese de sacarose controlado pelos nveis de trioses-P e sacarose, no citoplasma. Quando o teor de trioses-P alto, h inibio da sntese de frutose-2,6-bifosfato e induo da formao de sacarose. Quando o teor de sacarose alto no citoplasma, h inibio de sua sntese e induo da formao de frutose-2,6-bifosfato. A frutose-2,6-bifosfato, funciona como uma reserva citoplasmtica de carboidratos e, quando h uma demanda de sacarose para exportao para outros tecidos por exemplo, o carbono na forma de frutose-2,6-bifosfato convertido prontamente em sacarose para a exportao, enquanto o cloroplasto no comea a produzir as trioses-P (HAWKER et al., 1991). A atividade dessas enzimas afetada pela concentrao de outros metablitos, tais como Pi e frutose-6-fosfato. A enzima frutose-1,6-bifosfatase controlada pelos nveis de frutose-2,6-bifosfato, considerada um metablito que alm de controlar a produo de carboidratos, pela fotossntese, controla a degradao de hexoses-fosfato na gliclise e desvio das pentoses. Pelo menos sete outras enzimas, na gliclise e na sntese e degradao de sacarose e amido,
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Relao fonte/dreno
so reguladas pelos nveis de frutose-2,6-bifosfato. Este metablito est envolvido tambm no controle da alocao de carbono para a formao de amido no cloroplasto (e em outras organelas tambm), ou de sacarose no citoplasma, como em uma soluo tamponada (HUBER, 1986). A regulao da atividade da enzima frutose-1,6-bifosfatase o passo irreversvel para sntese de sacarose, e a atividade dessa enzima tambm modulada pela disponibilidade do substrato para manter uma taxa fotossinttica tima, de forma que somente uma triose-P em cada seis produzidas, deixe o ciclo de Benson-Calvin para ser exportada (MADORE, 1994). Ainda no citoplasma, a frutose-6-bifosfato pode ser transformada em glicose-6-fosfato, e depois em glicose-1-fosfato, que por sua vez convertida em um nucleotdeo, uridina-difosfoglicose (UDP-G, Fig. 12). O resduo glicose deste nucleotdeo ento associado frutose-6-P, na reao catalizada pela sacarose-fosfato sintase (SFS; [3], Fig. 12), produzindo sacarose-fosfato , que transformada em sacarose pela enzima sacarose fosfatase (SF), liberando Pi no citoplasma (HAWKER et al., 1991). O Pi liberado na sntese da sacarose vai estimular a exportao de trioses-P do cloroplasto (MADORE, 1994). Essa sacarose produzida no citoplasma pode ser transportada para outras clulas, via simplasto, exportada para o apoplasto ou acumuladas, para posterior utilizao, no vacolo. A exportao de sacarose priorittia sobre o armazenamento de sacarose no vacolo ou sobre a sntese de amido (WARDLAW, 1990).
2.B.3. Carregamento de sacarose no floema
A sacarose o principal carboidrato de transporte entre as fontes e os diferentes drenos, que feito via floema. Acredita-se que a principal forma de transporte de sacarose na folha at os vasos condutores seja via apoplasto, visto que h poucas conexes plasmodesmticas entre as clulas companheiras do floema e clulas do mesfilo, na maioria dos vegetais. Devido alta concentrao de sacarose no floema, o carregamento de sacarose neste feito contra o gradiente de difuso, sendo um processo dependente de energia. Porm, em algumas espcies como oliveira, coleus, pepino e milho, existem numerosos plasmodesmos entre as clulas companheiras e as do mesfilo adjacente e, portanto, nessas espcies, o transporte de sacarose para o floema simplstico, sem maiores gastos de energia para o carregamento do floema (MADORE, 1994). No milho, uma planta C4, o PGA formado pelo ciclo de Benson-Calvin transferido da bainha perivascular para o mesfilo, para ser
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reduzido a outras trioses-P que voltam para a bainha perivascular, sendo a acumuladas nos cloroplastos como amido ou transferidas como sacarose, via simplasto, para o floema, no transporte para outros tecidos (WARDLAW, 1990). Portanto, em vegetais com poucos pasmodesmos entre as clulas companheiras e as do mesfilo, como o tabaco e o tomate, o transporte essencialmente apoplstico (exclusivamente?) e, em outros vegetais com grande nmero de plasmodesmos, como rvores tropicais e espcies dos gneros Cucurbita e Coleus, o transporte principalmente simplstico (HENDRIX, 1994). No carregamento, a sacarose importada para a clula companheira do floema por um transportador de sacarose (TS; [4], Fig. 12), em cotransporte com um H+. Este cotransporte est acoplado a um transporte, via uma ATPase, onde um K+ passa do mesfilo para o floema e um H+ volta do floema para o mesfilo, havendo gasto de energia metablica neste processo (BRENNER & CHEIKH, 1995).
2.B.4. Transporte de carboidratos no floema
O transporte da sacarose atravs do floema sempre foi considerado passivo, por gradiente de concentrao de acares, maior na fonte e menor no dreno, segundo a teoria de MNCH (1930). Porm, hoje j sabemos que o K+ bombeado para dentro do floema (Fig. 12), em um transporte via ATPase, associado ao transportador de sacarose. Este acmulo de K+ no floema da fonte vai ter grande importncia para a gerao de um gradiente osmtico entre a fonte e o dreno, principalmente quando o dreno tem uma concentrao de acares maior do que a fonte, como acontece na acumulao de acares no final da maturao da cana-de-acar ou de fruteiras. Neste caso, o transporte ocorre por gradiente de concentrao (teoria de MNCH, 1930), mas a gerao deste gradiente pelo K+ acumulado no floema da fonte, demanda energia (BRENNER & CHEICK, 1995). Por isso, o transporte de carboidratos maior durante o dia do que noite, e afetado por inibidores da respirao, sendo que seu fluxo pode ser mais limitante para a produo do que o tamanho do dreno (WARDLAW, 1990).
2.B.5. Descarregamento de sacarose do floema para o dreno
A sacarose que chega ao dreno pelo floema pode ter 4 destinos, segundo HENDRIX (1994):
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Relao fonte/dreno
1) a sacarose do floema descarregada diretamente nas clulas do dreno, via plasmodesmata, sendo hidrolisada a glicose e frutose no citoplasma, pela invertase neutra (IN; [6], Fig. 12), ou acumulada no vacolo, podendo posteriormente ser hidrolisada a hexoses pela invertase cida vacuolar (IAV; [7], Fig. 12). Este mecanismo de descarregamento do floema ocorre em folhas de beterraba aucareira, meristema radicular de milho e endocarpo de feijo. 2) A sacarose descarregada dos tubos crivados para o apoplasto do dreno, onde hidrolisada a hexoses, via invertase cida (IA; [5], Fig. 12), e as hexoses so transportadas atravs da plasmalema para o citoplasma das clulas do dreno. No citoplasma, a sacarose resintetizada e pode ser acumulada no vacolo. Tal mecanismo permite uma rpida acumulao de sacarose no vacolo, pois as hexoses so transportadas mais rapidamente pela plasmalema. Este o mecanismo de descarregamento em interndios imaturos de cana-deacar, em sementes de milho e sorgo, e absoro de alguns parasitas. 3) A sacarose descarregada do floema para o apoplasto no dreno, sendo transportada diretamente para o citoplasma do dreno, onde hidrolisada a hexoses, pela invertase neutra, podendo ser consumida na respirao da clula. Quando existe excesso dessas hexoses formadas, h a sntese de sacarose no citoplasma, e essa transferida para o vacolo. Caso o vegetal necessite dessa sacarose acumulada no vacolo, ela pode ser novamente hidrolisada a hexoses, via a IAV (MACHADO, 1987). Isto ocorre na propagao de cana-de-acar ou quando essa queimada ou cortada, sem ser imediatamente industrializada. Este mecanismo existe tambm em razes de beterraba aucareira, sementes de leguminosas e gros de trigo. 4) A sacarose descarregada no dreno segue um destes 3 mecanismos de entrada no citoplasma e ento, as hexoses so incorporadas em amido, como reservas de gros, razes e tubrculos, ou na forma de frutanos, em bainha de folhas de gramneas de clima temperado. De uma forma geral, a via simplstica de desgarregamento a mais comum em tecidos imaturos, e a via apoplstica mais comum em tecidos maturos j com o crescimento paralizado. Este processo de descarregamento vai afetar o gradiente osmtico no floema, e, conseqentemente, o transporte de carboidratos. Pode-se comprovar tal fato na correlao do crescimento vegetativo da cana-de-acar com a atividade da invertase cida, no apoplasto dos colmos (WARDLAW, 1990). Porm, para obteno de gentipos com maior acumulao de sacarose nos colmos, MARSCHNER (1995) prope a seleo pela atividade da sacarose-fosfato sintase citoplasmtica, ao invs da invertase cida apoplstica.
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2.B.6. Metabolismo de carboidratos no dreno
O transporte de carboidratos no dreno tambm pode ser apoplstico ou simplstico. O transporte apoplstico deve ocorrer em alguns gros e frutos devido inexistncia de vasos condutores entre o tecido maternal e a semente. Por outro lado, o transporte simplstico ocorre no endosperma de trigo (HENDRIX, 1994). Os carboidratos que chegam ao dreno podem ser utilizados, segundo HAWKER et al. (1991), para: 1) a respirao de manuteno, produzindo energia qumica e poder redutor para o metabolismo. Neste caso, a oxidao de glicose tende a ser completa, formando CO2 e H2O, produzindo a mxima quantidade de ATP e NADH para todos os processos endergnicos ou de oxi-reduo, necessrios manuteno da clula, tais como: o transporte de metablitos, as reaes enzimticas e a manuteno dos teores proteicos (turnover de protenas), que pode consumir mais de 50% da energia para manuteno, segundo BRYCE & THORNTON[1996]), etc... 2) a respirao de crescimento, onde a glicose queimada parcialmente, fornecendo energia e poder redutor para a sntese de aminocidos, lipdios, nucleotdeos e outros compostos secundrios, a partir dos esqueletos de carbono produzidos na gliclise, desvio das pentoses e ciclo de Krebs (Fig. 6) (MARSCHNER, 1995). 3) serem estocados como reserva a ser utilizada posteriormente. A estocagem de carboidratos pode se dar na forma de sacarose, como na canade-acar e razes de beterraba aucareira, na forma de acares redutores para alguns frutos, na forma de amido (amilase e amilopectina) para gros de cereais, mandioca e batata, ou ainda na forma de frutanos em algumas gramneas. Em gros de oleaginosas, como a soja, h uma correlao entre os teores de amido e leos (que tambm so uma forma de reserva de carbono); no incio do desenvolvimento do gro, os teores de amido so baixos (1% do peso seco), aumentando at metade do seu desenvolvimento (10% do peso seco) e diminuindo drsticamente durante a maturao do gro, enquanto os teores de leos aumenta. Os teores de amido voltam a aumentar na germinao (e os teores de leos decrescem), durante os 5 dias de embebio da semente, decrescendo aps este perodo (BOYER, 1996). Os carboidratos acumulados como reserva podem ser hidrolisados para uso na respirao de manuteno e de crescimento, quando no h produo de fotoassimilados na fonte durante a noite, com a perda de folhas, para o desenvolvimento de gemas vegetativas, na germinao de sementes, etc...
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Relao fonte/dreno
A sacarose no dreno metabolizada pela ao das invertases ou da sacarose sintase, sendo formada a partir dessas reaes, a glicose-1-fostato. Essa pode, sob a ao da UDP-G pirofosforilase, transformar-se em UDPglicose, usada na sntese de calose, celulose ou frutanos. Outro produto dessas reaes endergnicas a frutose-1,6-bifosfato. Essa pode ser convertida a frutose-6-fosfato e vice-versa, sob a ao de pirofosfatases, como na folha, controladas pelos nveis de frutose-2,6-bifosfato. A partir da frutose-1,6-bifosfato comeam as reaes da gliclise para a respirao, e a partir da frutose-6-fosfato, as reaes da glicognese, nos amiloplastos (Fig. 12) (HAWKER et al., 1991). Para a glicognese, a frutose-6-fosfato transformada em glicose-1fosfato, o outro produto da ao das invertases. A glicose-1-fosfato transportada para o amiloplasto e convertida em ADP-glicose pela ADPglicose sintetase, para ser ento usada na formao dos diferentes tipos de amido (a amilase, com ligaes alfa-1,4 somente e a amilopectina, com essas ligaes, assim como ligaes alfa-1,6, que fazem as ramificaes), por ao das amido sintases. A posterior degradao deste amido feita por hidrolases, dentre elas as alfa e beta amilases, e fosforilases. Essas ltimas mediam tanto a sntese como a degradao do amido. Em tubrculos de batata, inhame e batata doce, assim como em razes tuberosas de mandioca, o contedo de amido varia de 65% a 90% do peso seco, com 70% de amilopectina, e 30% de amilose (BECK & ZIEGLER, 1989). Segundo SIVAK et al. (1989), a acumulao de carbono (na fonte e no dreno) pode ser feita tambm em frutanos, principalmente em gramneas em clima temperado, e a sua sntese mediada por duas enzimas. A primeira, sacarose-sacarosilfrutose transferase (SST), a partir de duas molculas de sacarose, formando uma isoquestose (um trissacardeo, sucrosil-frutose), a partir da qual o polmero de frutanos sintetizado pela ao da beta-(1,2) ou beta- (2,6) -frutano 1-frutosil transferase (FFT), com at 35 resduos de frutose. Provavelmente, grande parte do metabolismo de frutanos ocorre no vacolo, onde estes so acumulados. A sua degradao se d pela ao de frutano hidrolases. A acumulao de carbono em alguns vegetais, como ma, pssego e abric, pode tambm se dar em polihidroxialcools ou poliis, como o manitol, sorbitol e dulcitol, formados a partir de glicose, frutose e galactose respectivamente, tanto na folha como no dreno. Oligossacardeos da famlia da rafinose tambm podem ser acumulados ou podem servir de carboidrato de transporte. Estes poliis e oligossacardeos esto
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relacionados com a tolerncia seca e salinidade, nestes vegetais (MADORE, 1994). A respirao da fonte e do dreno, que comea com a gliclise, o consumo de carboidratos e outros compostos para produzir energia, poder redutor e substratos de carbono para os processos de sntese celular (Fig. 6). Este processo consome O2, produzindo CO2 e H2O. Amido e acares so degradados a piruvato pela gliclise, gerando ATP e NADH. Associado gliclise existe a via das pentoses, que a oxidao de glicose 6-fosfato a ribose 5-fosfato, gerando tambm NADH para as reaes de sntese de macromolculas. As pentoses formadas so precursoras de biomolculas importantes como ATP, CoA, NAD+, RNA e DNA. Em geral, h uma maior demanda de NADH do que de pentoses, e neste caso, a ribose 5fosfato pode ser transformada em gliceraldedo 3-fosfato por uma transcetolase, ou em frutose 6-fosfato por uma transaldolase, criando um retorno para a gliclise e produzindo NADH (STRYER, 1995). O piruvato, produto da gliclise, convertido a acetil-CoA pela piruvato desidrogenase, na mitocndria. Nessa organela, o acetil-CoA entra no ciclo do cido tricarboxlico (tambm chamado ciclo de Krebs ou ciclo do cido ctrico), e metabolizada em cidos orgnicos, liberando CO2 e formando NADH. O NADH e o FADH so oxidados pelo transporte de eltrons mitocondrial, tendo o O2 como aceptor de eltrons, formando H2O. O transporte de eltrons acoplado fosforilao do ADP, produzindo ATP. O NADH produzido na respirao vai ser usado para as reaes de oxireduo que ocorrem na clula, e o ATP para as reaes endergnicas, de transporte associado s ATPases e a outros processos, para a respirao de crescimento e de manuteno. J os compostos intermedirios da gliclise, desvio das pentoses e do ciclo de Krebs, podem ser desviados para a sntese dos outros principais componentes celulares (protenas, nucleotdeos e lipdeos), na respirao de crescimento. A degradao de protenas e lipdeos tambm vai gerar os mesmos cidos orgnicos, que podem ser respirados ento (LAWLOR, 1993). Em um dreno de reserva de sacarose, como na beterraba e cana-deacar, esta acumulada nos vacolos do dreno, a favor do gradiente no princpio, e contra gradiente no final da maturao, via H+-sacarose/K+ antiporte, associado ATPase, do tonoplasto. J o amido a principal forma de reserva em cereais, batata e mandioca. Nestes, a sacarose transportada pelo floema pode ser convertida diretamente em amido, como
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Relao fonte/dreno
no gro de trigo, ou ser hidrolisada a hexose antes da sntese do amido, como no gro do milho. Em laranja, uva e abbora, acares so acumulados no dreno de reserva sob a forma de hexoses, sendo precedidos pela ao das invertases. Frutanos com varivel grau de polimerizao, so acumulados em folhas de cebola, colmos de gramneas e tubrculos de alcachofra (MILBURN & KALLARACKAL, 1989).
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Balano de carbono e os fatores ambientais
Captulo 3 BALANO DE CARBONO E OS FATORES AMBIENTAIS

Os fatores ambientais que afetam o metabolismo de carbono e, conseqentemente, a produtividade agrcola em clima tropical so distintos daqueles que ocorrem em clima temperado. Em clima temperado, os estresses ambientais so causados mais freqentemente por baixas intensidades luminosas e temperaturas baixas que por deficincia hdrica ou de nutrientes (agricultura de alta tecnologia, com insumos), ou por altas temperaturas. J em nossas condies tropicais, os principais estresses so causados pelos efeitos da seca, da falta de nutrientes e altas temperaturas. O estresse por falta de energia radiante dificilmente ocorre a cu aberto, principalmente para plantas C3, que se saturam a baixas intensidades luminosas (600 a 800 mmoles quanta.m-2.s-1), enquanto intensidades luminosas acima de 2000 mmoles quanta.m-2.s-1, ocorrem com freqncia em clima tropical. Contudo, devese ressaltar que na zona tropical h uma reduo na radiao solar, quando essa atravessa a atmosfera, principalmente devido UR % e impurezas slidas que provocam reflexo da luz. Em regies midas como no Rio de Janeiro h uma reduo de at 42% da radiao luminosa, enquanto em Braslia, na poca seca do ano, essa reduo de apenas 30%. Portanto, em clima temperado, com menor UR %, as intensidades luminosas podem ser maiores, pois a reduo ao atravessar a atmosfera menor (RIZZINI, 1997). A vantagem da explorao agrcola nos trpicos reside principalmente em faz-la durante todo o ano, com 3 a 4 cultivos, enquanto em clima temperado isso no ocorre. Portanto, o maior potencial produtivo no mundo est na regio tropical (ALVIM, 1962). Por isso, o ideotipo de planta para uma ou outra regio bastante diferente e o melhoramento vegetal para a agricultura de clima temperado ou de clima tropical no pode ter os mesmos objetivos. O melhoramento vegetal durante a revoluo verde dos anos 50 e 60, desenvolvido principalmente em clima temperado, tinha por ideotipo de planta um vegetal com alta rea foliar para interceptao de luz, poucos e grandes dreno a serem colhidos, sem grande preocupao sobre o desenvolvimento do sistema radicular. Alm disto, buscava-se plantas que fossem responsivas aplicao de fertilizantes, isto , mesmo com altas doses de fertilizantes ainda havia algum aumento de produo. Naquele tempo, achava-se que o petrleo era uma fonte inesgotvel de energia e os fertilizantes nitrogenados no faltariam. Hoje ns sabemos que
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este tipo de planta poder alcanar as maiores produtividades sim, mas em um tipo de agricultura de alta tecnologia, com irrigao e muitos insumos, conseqentemente, de grande investimento. Para a agricultura tropical, a produo agrcola sobretudo para a alimentao da populao destes pases em desenvolvimento feita em grande parte por uma agricultura de baixa tecnologia, sem irrigao e com poucos insumos (DUNCAN & BALIGAR, 1990). Em tais condies, aquele ideotipo dos anos 60 tem uma reduo brutal de produtividade, pois alta rea foliar nos trpicos significa alta superfcie de transpirao, no sendo necessrio uma grande superfcie de captao de energia radiante. Portanto, plantas cultivadas de grande porte e com alta rea foliar iro ter uma alta transpirao, e sem a irrigao sofrero reduo na produo, por falta de gua. Para a agricultura tropical de baixa tecnologia devemos tambm buscar plantas com um sistema radicular bem desenvolvido e eficientes no uso (absoro, assimilao e distribuio) de nutrientes (Tab. 6), que se adaptaro mais facilmente aos ambientes encontrados nessa regio. O sistema radicular , para um grande nmero de culturas, um dreno no colhido e, portanto, consumindo carbono para o seu crescimento sem que seja utilizado pelo homem. Contudo, os benefcios da absoro de gua e nutrientes em plantas com um sistema radicular bem desenvolvido, valem o investimento de carbono neste rgo. O melhoramento vegetal para a agricultura tropical de baixa tecnologia deve buscar um ideotipo com menor porte, mas com maior rea foliar especfica (rea.peso-1 de folha), com maior nmero de drenos com idades diferentes (com menores perdas sob condies de estresse, podendo, contudo, dificultar a colheita mecanizada), com um sistema radicular desenvolvido, eficiente no uso de nutrientes e adaptada falta de gua e altas temperaturas (DUNCAN & BALIGAR, 1991). Para algumas culturas, os melhoristas esto fazendo cruzamentos com espcies silvestres do mesmo gnero, para recuperar e ampliar o genoma perdido na seleo para alta produtividade dos anos 50 e 60. Os estudos para eficincia no uso de nutrientes, principalmente encontrado em espcies nativas nas regies tropicais, assim como para adaptao seca e altas temperaturas, tornam-se imprescindveis para o aumento da produtividade nessas regies. Estes objetivos podem ser alcanados, seja pelas tcnicas tradicionais de melhoramento, onde temos conseguido alguns avanos, seja pelas tcnicas de biologia molecular com transformao de plantas, onde os resultados para aumento de produtividade, em clima tropical, ainda no foram conseguidos. Isto porque a adaptao
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Introduo
Tabela 6. Componentes de variao genotpica para eficincia no uso de nutrientes.
I- Aquisio de nutrientes: A- Morfologia de raz (eficincia do sistema radicular): A.1- Alta relao raz/parte area em condies de deficincia. A.2- Maior distribuio lateral e vertical de razes. A.3- Alta densidade radicular ou rea de absoro, mais pelos radiculares, especialmente sob estresse. B- Eficincia fisiolgica de absoro de nutrientes. C- Gerao de redutores e quelantes. D- Extenso do sistema radicular por associaes com micorrizas. E- Associao com organismos fixadores de N2 atmosfrico. F- Longevidade de razes. H- Habilidade de razes em modificar a rizosfera para evitar toxidez ou deficincia de nutrientes. I- Eficincia no transporte radial e no xilema. II- Distribuio e uso de nutrientes: A- Capacidade de retranslocao e reutilizao de nutrientes, quando em deficincia. B- Acmulo de ons no vacolo e liberao quando sob deficincia. C- Capacidade quelante de ons no xilema. D- Taxa de absciso, de senescncia e de hidrlise de fsforoorgnico. E- Capacidade de rpida acumulao quando o nutriente est disponvel, para posterior uso. F- Regulao da absoro, distribuio e uso de nutrientes na planta. G- Capacidade de funcionamento normal sob baixas concentraes de nutrientes no tecido (vegetais nativos de reas de baixa fertilidade). H- Troca de nutrientes entre a parte area e a raz, quando sob deficincia. Adaptado de Duncan & Baligar (1991).
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ambiental em geral uma caracterstica multignica e essa rea de estudos ainda muito recente. Mas no futuro, poderemos ter melhores resultados. A disponibilidade hdrica e a temperatura so os fatores climticos de maior efeito sobre a produtividade agrcola, sendo que estes fatores regem a distribuio das espcies nas diferentes zonas climticas do globo (TURNER & JONES, 1980). Na zona tropical (Amrica do Sul, Africa e Asia), as freqncias de baixos ndices de precipitao e altas temperaturas muito maior do que em zona temperada. Tendo em vista que praticamente todos os aspectos do crescimento vegetal so afetados pela temperatura e pela falta de gua (HSIAO, 1973, 1990; KRAMER & BOYER, 1995), reduzindo o acmulo de matria seca, o efeito destes estresses ambientais sobre a produtividade agrcola em clima tropical enorme. Sabe-se porm que existe uma variabilidade de adaptaes falta de gua e s altas temperaturas entre espcies; e dentro de uma espcie, entre variedades (LUDLOW, 1976). Portanto, deve-se avaliar a adaptao ambiental das variedades de uma espcie, para sua recomendao no zoneamento agrcola. Associado a estes fatores climticos, a disponibilidade de nutrientes, principalmente nitrognio e fsforo, afeta drasticamente a produtividade e quase sempre limitante em grande parte da agricultura de zona tropical. Enquanto em zona temperada, a agricultura est causando problemas por excesso de nitrato no lenol fretico, na zona tropical, o nitrognio um importante fator limitante para a sua agricultura. Portanto, a produtividade agrcola afetada por um destes ou a associao destes fatores ambientais, pois em qualquer processo, como a produo agrcola final, que requeira um nmero de fatores independentes agindo simultaneamente, a intensidade e a velocidade deste processo sero controladas pelo fator que estiver limitante (lei de Blackman). 3.A. FALTA
DE GUA E O METABOLISMO DE CARBONO
A habilidade de sobrevivncia do vegetal, durante perodos de falta de gua, determinante para a produtividade das plantas cultivadas (FISHER & TURNER, 1978). A suplementao de gua cultura pela irrigao uma prtica que apesar de onerosa, pode proporcionar um aumento significativo de produtividade. Nos vegetais superiores, uma ligeira falta de gua que ocorre at mesmo em plantas irrigadas ao meio-dia, vai causar distrbios no metabolismo. PFEFFER (1900) j afirmava que uma ligeira diminuio de turgescncia
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Falta de gua e o metabolismo de carbono
celular, suficiente para causar o fechamento dos estmatos, vai tornar a absoro de dixido de carbono extremamente difcil, diminuindo sensvelmente a atividade de assimilao de carbono. Por isto, os vegetais vivem o eterno dilema de abrir os estmatos para a entrada do CO2 mas de fech-los para evitar a perda de gua, porm a tendncia favorecer a assimilao fotossinttica (BOYER, 1976). A absoro de gua pelas razes tambm pode ser afetada por fatores ambientais como baixa disponibilidade de O2, salinidade, metais pesados e falta de gua. Isto porque sabe-se que o transporte de gua atravs da plasmalema no livre e se d atravs de canais de gua, que so protenas de 30 kDa chamadas aquaporinas. Estes canais so seletivos para a gua, tendo um dimetro reduzido (0,3 a 0,4 nm), suficientes para a passagem de uma molcula de gua (0,28 nm), podem ser fechados por estmulos externos e so dependentes da energia da respirao (STEUDLE & HENZLER, 1995). Hoje j sabemos que um ligeiro dessecamento do solo, mesmo que ainda no afete as relaes hdricas da parte area, causar um aumento na concentrao de ABA no xilema, provavelmente produzido no meristema sob a coifa das razes, induzindo na folha o fechamento estomtico e a diminuio da expanso foliar (DAVIES et al , 1990). A expanso foliar e a abertura estomtica so os processos mais sensveis falta de gua. Mesmo antes de haver variao no potencial hdrico foliar (h da folha), a abertura estomtica e expanso celular j so afetados pelo balano de fitormnios, produzidos na raiz (KRAMER & BOYER, 1995). Atravs do controle de estmatos, a planta diminui as suas perdas de gua, porm diminui a sua assimilao fotossinttica, tendo assim de fazer uso das suas reservas acumuladas anteriormente. Alm do efeito da baixa disponibilidade do substrato (CO2), pelo fechamento dos estmatos, o aparelho fotossinttico ser afetado por um estresse mais severo (KENNEDY, 1976) (Fig. 13). Devido ao efeito da fotoinibio, que ocorre a nvel dos tilacides, h inibio do PS II, principalmente da fotofosforilao (LUDLOW & POWLES, 1988). A falta de gua que tambm causa uma diminuio na atividade enzimtica de regenerao da rubisco, pode ser uma das causas da reduo da fotossntese sob baixo potencial hdrico foliar, e no o suprimento de ATP, segundo GUNASEKERA & BERKOWITZ (1993). O dficit hdrico, mesmo leve, vai afetar a atividade fotossinttica pela diminuio da disponibilidade de CO2, com o fechamento estomtico (HSIAO, 1973). Porm, sobre a superfcie de uma folha, formam-se aurolas, um fenmeno chamado patchyness, onde algumas reas mantm os
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estmatos mais abertos (HALL & RAO, 1994), ocorrendo ainda assimilao de CO2 nessas reas. Com a restrio da absoro de gua, o potencial de turgescncia da folha diminui, causando a paralizao do crescimento e da biossntese proteica. Conseqentemente, h diminuio da atividade de certas enzimas como a redutase do nitrato, que por isto usada como parmetro indicador do efeito de estresses ambientais (MAGALHES, 1979). O amido de reserva comea a ser hidrolisado por aumento da atividade das amilases, havendo assim, maior acmulo de carboidratos solveis, aminocidos e cidos orgnicos, que no estaro sendo utilizados na respirao de crescimento e sntese de novos tecidos (HSIAO, 1973). Posteriormente, as protenas e fosfolipdeos membranares comeam a ser hidrolisados pela ao de proteinases, lipases, ribonucleases e outras enzimas hidrolticas, que so ativadas pelo estresse hdrico. Quando a atividade dessas enzimas alta, comea a haver ruptura de membranas, ocorrendo a descompartimentalizao dos eventos fisiolgicos, sem possibilidade de recuperao do vegetal (VIEIRA DA SILVA, 1976; KRAMER & BOYER, 1995). O dficit hdrico severo causar a desestabilizao membranar devido ao desacoplamento de protenas membranares, sob a ao de proteinases, assim como dos lipdeos membranares, sob a ao de lipases ou pela sua oxidao (HALL & RAO, 1994). A nutrio mineral das plantas tambm vai ser importante para a resposta do vegetal imposio da falta de gua. Por exemplo, o potssio est envolvido no movimento de estmatos e, junto com os acares solveis, o maior contribuinte para o ajustamento osmtico. Alm disto, o nmero de cloroplastos por clula, o comprimento celular, e a estabilidade de membranas so maiores em plantas bem supridas em potssio. Maiores suprimentos de potssio em milho podem garantir maior produo durante perodos de falta de gua (PREMACHANDRA et al, 1991). Quanto associao de um estresse ambiental e nutricional, POWER (1990) mostra que a diminuio em crescimento, resultante de um estresse hdrico e de nitrognio, so aditivos. Quando um destes fatores limitante, a adio de um sem o outro traz benefcios limitados produo. Em plantas de milho bem nutridas em N, a zona de elongao (em parte area e raiz) tem uma atividade superior de sacarose sintase e invertase neutra, e as folhas na sua expanso mxima possuem nveis mais elevados de PEP-case e rubisco e, conseqentemente, com maior e mais duradoura capacidade para fotossntese e translocao (HUBER et al, 1989), aumentando a disponibilidade de assimilados e a tolerncia seca. A irrigao e a aplicao de N aumentam a
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50 Fotossntese (A: mg CO2 . dm-2 . h-1)
40
30
20
10
0 -5 -4 -3 -2 -1 0 Potencial hdrico de folha (MPa)
FIGURA 13. Efeito da falta de gua e salinizao na atividade fotossinttica de Atriplex halimus, uma planta C4 halfita, com adio ( ) ou sem adio de NaCl ( ), na soluo nutritiva; e de Atriplex hortensis, uma planta C3 glicfita, com adio ( ) ou sem adio de NaCl ( ). Pimentel (1985).
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produtividade de gros, porm diminuem a qualidade proteica destes, em milho normal e Opaco-2 (KNIEP & MASON, 1991). A absoro do fsforo inibida pelo estresse (DOVE, 1969) e na maioria dos solos a maior frao de P existe em formas inorgnicas, que so dependentes de sua solubilizao pela gua. Plantas de sorgo micorrizadas (VAM), exploram um maior volume de solo, absorvem mais fsforo, e so mais tolerantes seca (POWER, 1990). Outro ponto a ser destacado o efeito da falta de gua nos diferentes estdios de desenvolvimento. O vegetal na forma de semente apresenta sua maior adaptao seca, podendo ter uma umidade de apenas 10% e, com a hidratao, continuar seu ciclo. O efeito da falta dgua importante nas fases de instalao da plntula por no ter ainda seu sistema radicular desenvolvido, mas sobretudo, por causar grande efeito na produtividade quando ocorre no perodo reprodutivo, principalmente na antese (WESTGATE & GRANT, 1989). A maior parte da produo agrcola de rgos reprodutivos (78% nos USA), com gros, frutas e olercolas, tendo portanto sua produo afetada pela falta de gua neste perodo. Os estdios de pr-florao e incio da florao so os mais sensveis, no pelo efeito do estresse na fecundao, mas devido reduo da atividade fotossinttica das folhas neste perodo, causando paralizao no desenvolvimento do embrio na semente (KRAMER & BOYER, 1995). A planta necessita acumular um nvel mnimo crtico de fotoassimilados na folha para iniciar o processo de desenvolvimento dos rgos reprodutivos (WARDLAW, 1990). Por isso, no feijoeiro por exemplo, as vagens produzidas so oriundas das primeiras flores formadas (SILVEIRA et al. 1980). As ltimas flores formadas abortam pela falta de fotoassimilados oriundos das folhas para garantir o crescimento e enchimento das vagens. Qualquer fator ambiental estressante, como falta de gua ou altas temperaturas, aumentaro o aborto de flores.
3.A.1. Eficincia no uso de gua
Com a abertura estomtica para a aquisio de CO2, H2O inevitavelmente perdida. As plantas CAM e C4, como j visto, de uma forma geral em condies de suprimento de gua adequado, apresentam maior eficincia no uso de gua (E.U.A.) do que as C3, pois podem ter os estmatos mais fechados, mantendo sua assimilao de CO2 e perdendo menos gua (MAGALHES, 1979). Porm, deve-se ressaltar que existem
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muitas plantas C3 de regies de clima rido, com grande controle estomtico e conseqente alta E.U.A. Alm de existir uma variabilidade de E.U.A. entre espcies isto ocorre tambm dentro da espcie, e pode ser um parmetro fisiolgico associado a outros, como o desenvolvimento do sistema radicular, a ser usado no melhoramento vegetal tropical. A maior E.U.A. das plantas no garante por si s maior adaptao seca, como j visto anteriormente (OSMOND et al, 1982). O contedo hdrico da planta resultado do balano das taxas de absoro e de perda de gua (transpirao). O primeiro fator est fora de controle instantneo, sendo dependente do sistema radicular da planta e de caractersticas fsicas e suprimento hdrico do solo. O segundo fator, controle da transpirao, pode ser feito em um tempo de 102 a 104 segundos e em maior ou menor escala, dependendo do vegetal (PUGNAIRE et al., 1994.). A transpirao proporcional ao dficit de presso de vapor de gua na atmosfera. O controle da transpirao feito pelo fechamento estomtico, que o nico processo no continuum solo-planta-atmosfera que possui essa resposta instantnea. Porm, como tal controle est diretamente associado ao suprimento de CO2 folha, a condutncia estomtica deve variar ao longo do tempo, de forma a haver um mnimo de perdas de gua para uma mxima assimilao de CO2 (KRAMER & BOYER, 1995). Assim o dilema dos vegetais, que devem fechar os estmatos para evitar as perdas de gua e abri-los para a assimilao de CO2. WHITE et al. (1990), demonstram que existe uma estreita correlao entre a variao na taxa de assimilao de CO2 e a densidade do sistema radicular do feijoeiro, na resposta falta de gua. OSMOND et al. (1980) propem que a seleo de plantas tolerantes seca, principalmente em plantas C3 sensveis falta de gua, deve buscar plantas que mantenham a atividade fotossinttica alta, com baixa condutncia estomtica, para reduzir as perdas de gua por transpirao (eficincia intrnseca no uso de gua: E.I.U.A = atividade fotossinttica/condutncia estomtica) (Fig. 14). A absoro contnua de gua essencial ao crescimento e desenvolvimento vegetal, pois a maioria das plantas em clima tropical chega a perder mais do que seu prprio peso em gua, por dia, em certas condies. Somente algumas plantas xeromrficas, como os cactus, com baixa transpirao e alta capacidade de estocagem de gua, podem sobreviver sem imediata reposio da gua perdida (OSMOND et al., 1982). Portanto, a absoro e uso de gua tm uma importncia capital em clima tropical.
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Por isto, as avaliaes do sistema radicular e de sua eficincia na absoro devem ser feitas e podero trazer ganhos de produtividade. A eficincia do sistema radicular em absorver gua e nutrientes depende de sua profundidade, volume, densidade, profuso de pelos radiculares, longevidade (Tab. 6), e outros atributos como a condutividade hidrulica da planta. Por exemplo, o arroz de sequeiro tem um sistema radicular maior que o arroz irrigado e o crescimento radicular em detrimento da parte area desejvel, sob cultivo de sequeiro. Alm destes atributos morfolgicos, a eficincia dos sistemas de absoro, de assimilao e de distribuio dos nutrientes pela planta deve ser buscada pelo melhoramento. A capacidade do vegetal em redistribuir estes nutrientes, por hidrlise de macromolculas em tecidos mais velhos, para suprir as necessidades de rgos jovens e sobretudo do rgo a ser colhido determinante tambm para a agricultura de baixa tecnologia em clima tropical (DUNCAN & BALIGAR, 1991). Alm dos fatores ambientais discutidos aqui, deve-se salientar que o desenvolvimento do sistema radicular extremamente plstico, dependendo das caractersticas do solo onde a planta se desenvolve, como a resistncia penetrao, aerao, pH baixo e excesso de elementos txicos como o Al3+, assim como de substncias txicas produzidas por plantas competidoras (alelopatia, produzindo cidos cumrico e ferlico) (KRAMER & BOYER, 1995). A eficincia no uso de gua de grande importncia para a sobrevivncia em condies de baixa disponibilidade hdrica e, segundo PASSIOURA (1986), o rendimento de uma cultura proporcional ao volume de gua transpirada, durante o ciclo, multiplicado pela eficincia no uso de gua e pelo ndice de colheita. Portanto este um parmetro indicador para adaptao falta de gua. Em funo da evapotranspirao local da cultura, por uma equao de 1 grau, podemos calcular a produtividade daquela cultura, o que j feito h muito tempo em Israel (ARNON, 1975). Por exemplo para o milho, segundo HARGROVE (1988): no deserto de Negev, Israel, o rendimento = (4,1x ET) - 7179; no Texas, USA, o rendimento = (24,1 x ET) - 8332; e na Flrida, USA, o rendimento = (66,1 x ET) - 22900; onde ET a evapotranspirao real da cultura, durante o ciclo da planta. Portanto, a determinao da evapotranspirao e do balano hdrico para as regies produtoras primordial para que se faa o zoneamento agrcola e a previso da produtividade para a cultura em cada regio, como j foi feito para o estado de So Paulo (CAMARGO, 1962).
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Fotossntese (A: mol . m-2 . s-1)
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10
0 0 0,1 0,2 0,3 0,4 Condutncia estomtica (gs: mol . m-2 . s-1)
FIGURA 14. Eficincia intrnseca no uso de gua (E.I.U.A.), que a relao entre a taxa de assimilao de CO2 (A) e a condutncia estomtica (gs), na folha mais jovem com mxima expanso foliar, em quatro gentipos de feijo, sob falta de gua com 39 DAP: ( ) SC9029883; r2: 0,99, ( ) carioca; r2: 0,89, ( ) ouro negro; r2: 0,99, and ( ) A320; r2: 0,99. Pimentel et al. (1995).
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3.A.2. Adaptao seca e zoneamento agrcola
Existe uma grande variao da sensibilidade fotossinttica seca entre as espcies. Por exemplo,Vigna unguiculata tem sua fotossntese anulada a um h em torno de -2,5 MPa, enquanto em Phaseolus vulgaris, essa se anula com valores de -1,2 a -1,5 MPa de h. O primeiro, o feijo caupi (de corda, macassar, etc...), mais cultivado na regio semi-rida do nordeste brasileiro e o feijo comum, o segundo, na regio tropical mida. Inclusive, o hbito alimentar da populao de cada regio varia em funo da adaptao das culturas, e que, consequentemente, podem produzir satisfatriamente no local. O milho, Zea mays, tem sua taxa de assimilao de CO2 anulada a valores de h em torno de -2,5 MPa, enquanto Sorghum bicolor ou Pennisetum glaucum, tem a fotossntese anulado valores abaixo de -3,0 MPa de h. Portanto em regies ridas, estes dois ltimos so mais indicados que o milho. O Pennisetum glaucum, conhecido como milheto, tem como principal mecanismo de adaptao seca o de escape, instalando-se rpidamente no terreno e encurtando seu ciclo, no havendo mais chuvas. Na regio do Sahel africano, essa espcie muito cultivada para a alimentao humana com os gros, e para o gado, com o restante da parte area. Outros vegetais como Beta vulgaris, Acacia harpophyla e Atriplex nummularia tm sua assimilao fotossinttica anulada somente com um h menor que -6,0 MPa (BOYER, 1976; PIMENTEL, 1985). A variao na sensibilidade dos vegetais ao dficit hdrico ocorre devido a diferentes mecanismos de adaptao seca, e em diferentes intensidades. De uma forma geral a adaptao a um estresse ambiental tem um custo energtico para a planta, em detrimento da produtividade (HSIAO, 1973; 1990). Muitas vezes as plantas mais tolerantes tm menor produtividade do que uma sensvel (PIMENTEL et al., 1990). Os mecanismos de adaptao seca so classificados em 3 tipos, segundo SUBBARAO et al. (1995): 1) os de escape, como encurtamento do ciclo, perda de folhas, mudanas no ngulo de folhas, enrolamento de folhas e xeromorfismo; 2) os de evitamento, como controle da abertura estomtica, enraizamento profundo e o metabolismo CAM; e 3) os de tolerncia, prpriamente dita, como ajustamento osmtico e tolerncia membranar (devido sua composio, principalmente do tipo de fosfolipdeos, essa pode ser menos sensvel ao ataque de enzimas induzidas pelo estresse). Alguns vegetais cultivados, principalmente as gramneas, fazem um ajustamento osmtico, abaixando o seu potencial hdrico para retirar gua do solo (MORGAN, 1984). Entre elas, o sorgo mais eficiente no ajustamento osmtico do que o milho ou o milheto, por exemplo. As leguminosas
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cultivadas, de uma maneira geral, no fazem ajustamento osmtico e a manuteno do seu status hdrico se faz principalmente pelo controle da abertura estomtica e eficincia de absoro de gua pelo seu sistema radicular. O amendoim e o feijo guand fazem ajuste osmtico, e portanto, so mais adaptadas seca que outras leguminosas anuais. Com o ajustamento osmtico, a planta extrai mais gua do solo e perde menos gua para a atmosfera, podendo manter seus estmatos um pouco mais abertos, para realizar a assimilao de CO2. Contudo, a velocidade de imposio do estresse importante, assim como a sua durao, pois se o abaixamento do potencial hdrico for superior a - 1,0 MPa por dia, a planta no consegue se ajustar osmoticamente (HANSON & HITZ, 1982). O fenmeno do ajustamento osmtico varivel entre espcies e entre variedades de uma espcie (MORGAN, 1984). Porm, importante ressaltar que o grau de ajuste osmtico varia em funo do ajuste da extensibilidade de parede, e deve-se avaliar a relao entre o h e o contedo hidrico relativo para estudar-se o fenmeno. Os solutos acumulados durante o ajustamento osmtico sob falta de gua, funcionam como: osmoticum, proteo dos sistemas enzimas/membranas, acumulao de N no txico, e o carbono e o nitrognio assim utilizados podero ser reaproveitados prontamente, aps reidratao, para a produo de biomassa (McCree et al., 1984). Os solutos responsveis por este ajustamento compreendem: ons inorgnicos (K+, NO3-, Cl-, SO4=, etc...), cidos orgnicos (malato, aspartato, etc...), carboidratos solveis (sacarose, frutose e glicose), e os aminocidos livres (prolina, glutamina, etc...) (HANSON & HITZ, 1982). Em qualquer programa de melhoramento para adaptao seca, alm dos mecanismos citados acima, importante a avaliao da capacidade do vegetal em promover crescimento do sistema radicular em detrimento da parte area. Isto dar mais chances ao vegetal de sobreviver sob deficincia hdrica (com maior superfcie de absoro de gua e menor superfcie de transpirao) do que o vegetal que, sob falta de gua, continue a investir no crescimento da parte area, com maior consumo do suprimento de gua (PASSIOURA, 1986). Devemos ressaltar que a adaptao seca uma caracterstica multignica, isto , o vegetal tem um conjunto de respostas fisiolgicas que lhe conferem a adaptao, controlados por genes distintos e que interagem. Isto dificulta a manipulao gentica para obteno de plantas transgnicas tolerantes (BRAY, 1993). Em um programa de melhoramento vegetal, devese, portanto, avaliar diversos parmetros fisiolgicos para se conseguir avanos na seleo de plantas tolerantes.
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No Brasil, estudos sobre as relaes hdricas j vm sendo desenvolvidos desde as dcadas de 50 e 60, sendo que FERRI (1944) j havia realizado um estudo sobre a transpirao de plantas do cerrado. ALVIM & ARAJO (1952) associaram a caracterstica de xeromorfismo dessas plantas de cerrado, com o tipo de clima e solo da regio e FERRI (1955) correlaciona a restrio a perda de gua no perodo de maior dficit de saturao de gua, ao controle estomtico. OLIVEIRA & LABOURIAU (1961) estudaram o comportamento de espcies da caatinga brasileira, cultivadas no Rio de Janeiro com alta UR%. Em tais condies, a espcie de folhas decduas no teve a queda dessas folhas, e algumas espcies s apresentaram fechamento estomtico entre 11 e 13 h, perodo de maior dficit de saturao de gua. Os mecanismos de adaptao seca no se expressaram nas condies de boa hidratao. Posteriormente, FRANCO & MAGALHES (1963) fizeram uma crtica ao mtodo de pesagens para avaliar a transpirao. Mais recentemente, RENA & MASCIOTTI (1976) utilizaram a dosagem de prolina como indicador de tolerncia seca, em cultivares de feijo. CASTRO & MALAVOLTA (1977) verificaram que a aplicao de giberelina causou aumento da transpirao, com reduo do h foliar, em tomate. J OLIVA et al. (1984) avaliaram a adaptao falta de gua, em espcies de Eucalyptus, com o uso da termometria infravermelha. Atualmente, um grande nmero de laboratrios se dedicam aos estudos sobre a adaptao seca, no Brasil. Em 1963 iniciou-se um programa de melhoramento para tolerncia seca, MIRANDA (1972) introduziu o carter latente, atravs de cruzamentos, em linhagens de milho IAC Maya e IAC-1. Este carter latente confere adaptao seca e geada, atravs de uma reduo drstica do crescimento sob condies de estresse, e quando sob condies adequadas, restabelecem o crescimento. O autor sugere que a tolerncia seca e geada poderiam ser expresses fenotpicas do mesmo complexo gentico. Este carter latente confere tambm eficiente controle estomtico, segundo PATERNIANI (1990). Segundo este autor, a planta de milho com tolerncia seca deve apresentar, alm das caractersticas propostas por MOCK & PEARCE (1975), este carter latente, pendo masculino pequeno, intervalo entre a florao masculina e feminina curto, e prolificidade.
3.A.3. Uso da irrigao e salinizao do solo
O uso da irrigao no mundo expandiu-se enormemente a partir dos anos 50, com 95 milhes de ha, at a dcada de 80, com mais de 250 milhes de
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ha atualmente. Hoje, as terras irrigadas representam em torno de 18% das terras cultivadas, mas so responsveis pela produo de mais de um tero dos alimentos no mundo. A expanso do uso da irrigao no mundo diminuiu devido ao custo da energia para o sistema, e da diminuio dos preos dos produtos. Contudo, em pases em desenvolvimento, a expanso de reas irrigadas continua aumentando a taxa de 2%.ano-1, sobretudo devido s inovaes tecnolgicas, como: a aplicao de gua e nutrientes sob alta freqncia e baixo volume; determinao da necessidade da cultura em funo dos estdios de desenvolvimento da planta e fatores ambientais locais, utilizao de sistemas permanentes de distribuio de gua mais baratos e durveis, diminuindo o desperdcio de gua e as necessidades de drenagem. Isto porque a gua constitui a maior limitao para aumento de produtividade em nosso mundo faminto, no podendo haver desperdcios (HILLEL, 1990). A primeira anlise compreensiva da relao entre a transpirao e a produtividade foi feita por de WIT(1958), que props a frmula: R = m(Ta/Eo), onde R a produtividade, m o coeficiente de proporcionalidade, Ta a transpirao atual e, Eo a evapotranspirao potencial. Essa formulao foi aprimorada por DOORENBOS & KASSAM (1979), levando-se em conta a evapotranspirao : 1- (R/Rmx) = f[1 - (Ea/Eo]), onde R o rendimento atual, R mx o rendimento mximo, quando no h falta de gua, f um fator de resposta de produtividade, Ea a evapotranspirao atual e Eo a evapotranspirao potencial. Essa equao mostra a importncia da disponibilidade e do movimento de gua no sistema solo-planta-atmosfera para a caracterizao da produtividade em funo das condies ambientais. Os modernos sistemas de irrigao devem levar em conta o chamado continuum solo-planta-atmosfera, analisando as caractersticas e monitorando o status hdrico de cada uma dessas partes, utilizando instalaes permanentes por sulcos ou com aspersores de baixa intensidade, gotejadores, tubulaes porosas, etc... Este monitoramento fica mais fcil com a aplicao de gua com maior freqncia e menor volume, diminuindo o desperdcio de gua drenada, a eroso, a salinizao e a propagao de doenas (nas folhas molhadas), levando ao aumento de produtividade. Em contraste, os sistemas tradicionais, caros, de baixa freqncia e alto volume tm uma distribuio de gua mais eficiente e uniforme, mas podem provocar os diversos problemas citados acima, causando diminuio da produtividade, se no forem bem manejados (KRUSE et al, 1990).
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Provavelmente, a maior causa de diminuio da produtividade sob irrigao a salinizao em regies ridas e semiridas, ou em perodos do ano com alta evapotranspirao, em outras regies. Nessas condies, os problemas com a drenagem de guas salinizadas so grandes, como ocorreu na Califrnia, j no incio do uso da irrigao em 1870. Em 1900, reas extensas nessa regio haviam sido abandonadas devido problemas de salinizao do solo (HILLEL, 1990). Cerca de 10% da superfcie arvel da terra composta por solos salinos, e a porcentagem de terras irrigadas afetadas pela salinidade j chega a 50%, perfazendo um total de 325 milhes de ha salinizados. Historicamente a salinizao do solo contribuiu para a decadncia de vrias civilizaes antigas. Mesmo com tecnologias avanadas de manejo de irrigao, a salinizao de solos nos USA continua a diminuir a produtividade agrcola. A salinidade afeta a cultura de diversas maneiras: pelo abaixamento do potencial osmtico do solo, que diminui a disponibilidade de gua para a planta; pela deteriorizao da estrutura fsica do solo, com a substituio do Ca+2 pelo Na+; pela toxidez causada pelo on, e pela inibio dos processos biolgicos de mineralizao e nitrificao no solo. A salinizao do solo ocorre em geral pela falta de avaliao da qualidade da gua de irrigao. Em regies de alta evaporao, h um acmulo de sais nos mananciais de gua e conseqente concentrao destes, fazendo com que essa gua tenha uma alta condutividade eltrica (ver tabelas de qualidade da gua, determinadas pela FAODOORENBOS & PRUIT, 1977), sendo considerada, com frequncia, imprpria para a irrigao (POLJAKOFF-MAYBER & LERNER, 1994). Em solos salinizados pela irrigao com gua imprpria, algumas medidas agronmicas so recomendadas (com resultados a longo prazo), segundo FRANCOIS & MAAS (1994): 1) Em solos sdicos, a aplicao de gesso agrcola (CaSO4) ou cido sulfrico e outros cidos (aplicados na gua de irrigao, para reagir com o CaCO3 do solo, liberando Ca+2), para deslocar o Na+ e melhorar as condies fsicas do solo; 2) apesar da salinizao causar deficincia de nutrientes, no devem ser aplicadas altas doses de fertilizantes, que podem agravar a inibio do crescimento vegetal, pelos sais; 3) para o manejo da irrigao, deve-se fazer drenagem correta do solo e no deve ser aplicada gua continuamente e em excesso, pois com a baixa aerao e estruturao do solo, haver problemas de encharcamento, assim como a lixiviao de nutrientes. Em um primeiro tempo, a gua pode ser aplicada em excesso para promover a mxima lixiviao dos sais, mas durante o cultivo no. A gua aplicada deve ser a menos salina possvel, e o ideal aumentar a
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eficincia da irrigao durante o cultivo, para reduzir a quantidade de gua infiltrada que passa pelo sistema radicular, em percolao profunda, mantendo a disponibilidade de gua na zona radicular; 4) os sistemas de irrigao por aspersores, utilizando gua salina, provocam queimaduras de folha. Os sistemas por gotejamento, aplicando gua localizada sobre o sistema radicular, promovem a lixiviao destes sais na zona radicular, criando uma zona menos salina em torno das raizes. A freqncia de irrigao deve ser a mais alta para aquele solo; 5) o plantio deve ser feito em sulcos rasos (os sais vo se acumular na parte alta, do lado da linha de plantas), ou em camalees, plantando-se lateralmente (os sais vo se acumular no topo). A aplicao de cobertura morta diminui a evaporao de gua do solo; e 6) explorar culturas de vegetais mais tolerantes salinidade (Tab. 7). A paralizao do crescimento vegetal devido ao estresse salino ou por falta de gua so similares, pois ambos causam queda no potencial hdrico do solo, diminuindo o crescimento da planta. No estresse salino, alm do efeito sobre o status hdrico da planta, h um efeito txico devido aos altos nveis de Na+1 (os principais sais encontrados so NaCl e Na2SO4), causando distrbios no metabolismo do Ca+2, na integridade membranar e nos processos de fosforilao. Da mesma forma, os mecanismos de adaptao das plantas ao estresse salino so semelhantes aos da falta de gua (que ocorre no estresse salino, mesmo no solo com contedo hdrico alto), sendo o principal deles o ajustamento osmtico que permitir a extrao de gua do solo (este mecanismo obrigatrio para vegetais marinhos). Alm do ajustamento osmtico, existem outros mecanismos de tolerncia salinidade, como a habilidade em acumular, excluir e compartimentalizar ons seletivamente no vacolo e na base de tricomas excretores de sais nas folhas; o controle da absoro destes ons pelas razes e do transporte para a parte area; e o uso dos ons acumulados para o ajustamento osmtico, com a acumulao de solutos compatveis com estes ons (cidos orgnicos do ciclo de Krebs) (PASSIOURA, 1986). Essas caractersticas, que conferem tolerncia salinidade esto, em geral, associadas a caractersticas morfolgicas, que poderiam ser chamadas de mecanismos de evitamento. A pubescncia de folha, por exemplo, diminuindo as perdas de gua e, no caso de tricomas excretores, eliminando sais sobre a superfcie das folhas e criando uma camada que causa a reflexo de luz e reteno de gua, como no caso de Atriplex nummularia e de Atriplex halimus, ambas halfitas (PIMENTEL, 1985). O enrolamento e a suculncia de folhas, assim como o metabolismo CAM, tambm evitam os efeitos da salinidade.
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Plantas halfitas so aquelas que necessitam da presena de sais para expressar o seu mximo crescimento e produtividade. Sem estes, a sua atividade fotossinttica e crescimento so reduzidos, enquanto plantas glicfitas, que no precisam de sais, podem ser tolerantes salinidade, porm s expressaro seu mximo crescimento e produtividade na ausncia de sais. Algumas halfitas facultativas ou transitrias podem se desenvolver em condies no salinas, mas outras necessitam da presena de sais (acima de 1,5% de NaCl) para germinar, como em Salicornia spp (POLJAKOFFMAYBER & LERNER, 1994). Na Fig. 13, Atriplex halimus, uma halfita verdadeira apresenta maior taxa fotossinttica com a adio de NaCl, mantendo-a durante o abaixamento do potencial hdrico de folha, causado por um estresse hdrico, at um valor inferior ao das plantas sem NaCl. Os vegetais que so sensveis salinidade so chamados glicfitas, como na Fig.13, Atriplex hortensis, que tem a fotossntese reduzida e se torna mais sensvel falta de gua, com a adio de NaCl. Existe uma variabilidade na tolerncia salinidade (Tab. 7) e certas plantas, que so apenas moderadamente tolerantes, como o caso de Cocos nucifera L. (POLJAKOFFMAYBER & LERNER, 1994), so muitas vezes consideradas, erroneamente, halfitas. Nessas espcies a adio de NaCl causa reduo na sua produtividade. O coqueiro tem alta demanda por Cl-, que deve ser adicionado na forma de KCl. Em funo dessa variabilidade de tolerncia a salinidade, em regies com alta evapotranspirao, com mananciais de gua pouco prpria para a irrigao, assim como na explorao agrcola de reas salinizadas pelo homem, esta deve ser feita com espcies que sejam mais tolerantes salinidade.
3.B. Temperaturas altas e o metabolismo de carbono
Na regio tropical com perodos seco e chuvoso determinados, as temperaturas mdias atingem 33C no final do perodo chuvoso, e as mximas chegam a 45C. A maioria das culturas tropicais tem uma temperatura tima entre 25 e 35C, o que permite obter-se boa produtividade em clima tropical. Variaes maiores de temperatura so obtidas em altitude, com um abaixamento de 0,65C.100 m-1 na temperatura mnima, o que reduz sensvelmente a temperatura mdia, retardando o desenvolvimento vegetal. Porm, nessas condies de altitude, a temperatura mdia noturna mais baixa pode ter um efeito positivo no metabolismo vegetal, se estiver na faixa adequada para o crecimento da cultura. Este efeito ocorre pelo aumento da eficincia da respirao noturna para o crescimento, quando comparada a
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Temperaturas altas e o metabolismo de carbono
Tabela 7. Tolerncia a salinidade em culturas (glicfitas). CE limite (dS. m-1)
ESPCIE Grandes culturas: Hordeum vulgare L. Gossypium hirsutum L. Glycine max L. Vigna unguiculata L. Arachis hypogea L. Saccharum officinarum L. Zea mays L. Phaseolus vulgaris L. II - Olericultura: Beta vulgaris L. Spinacia oleracea L. Cucurbita pepo L. Lycopersicon lycopersicum L. Allium cepa L. Solanum melongena L. Daucus carota L. III - Fruticultura: Phoenix dactylifera L. Cocus nucifera L. Vitis vinfera L. Citrus sinensis L. I-
8,0 7,7 6,8 4,9 3,2 1,7 1,7 1,0 7,0 5,7 3,2 2,5 1,2 1,1 1,0 4,0 _ 1,5 1,3
(T)* (T) (MT) (MS) (MS) (MS) (MS) (S) (T) (T) (MT) (MS) (S) (S) (S) (T) (MT) (MS) (S)
Dados de Francois & Maas (1994). * (T): tolerante; (MT): moderadamente tolerante; (MS): moderadamente sensvel; e (S): sensvel.
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ambientes com temperaturas noturnas muito altas, onde a eficincia do processo menor (NORMAN et al., 1995). O processo de oxidao de glicose produzindo energia estocada sob a forma de ATP, tem uma eficincia cerca de 42%. O restante da energia produzida nessa oxidao perdida sob a forma de calor. Este rendimento pode ser menor sob altas temperaturas (LTTGE, 1996). As baixas temperaturas parecem afetar o metabolismo das razes e a produo de citocininas, giberelinas e ABA, que em milho tem suas exportaes mximas a 28C para os dois primeiros, e a 18C para o terceiro. A reduo da exportao destes fitormnios vai diminuir o crescimento da parte area (POLJAKOFF-MAYBER & LERNER, 1994). Se a temperatura mdia do dia estiver na faixa tima para a cultura, sero obtidas as maiores produtividades nessas condies de altitude. Por exemplo, para o milho as maiores produtividades so obtidas em altitudes de 1500 a 2000 m, com temperaturas diurnas de 30 a 33C e com temperaturas noturnas abaixo de 25C. Contudo, a taxa de desenvolvimento de qualquer cultura ( a progresso ao longo do ciclo da planta) positivamente relacionada com a temperatura e o desenvolvimento mais lento em altitude, devido s temperaturas mais baixas. Com o ciclo estendido em altitude, sob temperaturas mdias adequadas, obtm-se maiores rendimentos do que em baixas altitudes, porm podem ser feitos menos cultivos no ano agrcola. Em Java por exemplo, o arroz leva 90 a 100 dias do transplante a maturao e 3 cultivos so possveis por ano ao nvel do mar, enquanto em altitude de 1600m, a mesma cultivar tem um ciclo de 220 dias e somente um cultivo por ano possvel (NORMAN et al., 1995). A temperatura do dossel e do solo afeta as relaes fonte/dreno da planta, principalmente nos drenos reprodutivos. A matria seca total da planta pouco afetada, mas a sua distribuio nos diferentes drenos modificada. Em algodo, o regime termal de 30/20C permite uma acumulao de matria seca no capulho pelo menos 3 vezes maior do que nos regimes 25/15C ou 35/25C (MARSCHNER, 1995).
3.B.1. Efeitos de temperaturas altas no balano de carbono
O termo estresse por altas temperaturas nos leva a pensar em seres termoflicos que habitam certas fontes termais ou nos vegetais de deserto, que sobrevivem a temperaturas acima de 50C. Porm, plantas em clima tropical so comumente submetidas a estresses trmicos por algum tempo, em geral, sob temperaturas acima de 40C, tendo o seu crescimento reduzido. Isto
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mol CO2 . m-2 . s-1
Fotossntese
Respirao
C Temperatura tima para a cultura
FIGURA 15. Efeito do aumento da temperatura sobre a atividade fotossinttica e a atividade respiratria. Adaptado de White (1985).
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porque processos biolgicos bsicos como a fotossntese e a respirao so diretamente afetados pela temperatura, porm de forma distinta (Fig.15) (WHITE, 1985; RITCHER, 1993). Para a fotossntese, com o aumento a partir de baixas temperaturas, h tambm um aumento da atividade fotossinttica at temperatura tima da cultura (plantas C3, entre 20 e 30C e plantas C4, de 30 a 35C), decrescendo rapidamente aps. J a respirao aumenta com a temperatura, at o ponto em que as altas temperaturas causem injrias ao protoplasma e o aumento da respirao no produz mais um aumento no crescimento. As altas temperaturas vo causar inativao de enzimas e das membranas celulares. A cessao da atividade fotossinttica pelas altas temperaturas ocorre antes que outros sintomas surjam, levando a crer que o efeito seja maior sobre a atividade das enzimas do aparatus fotossinttico (BJRKMAN et al., 1980), sendo os fotossistemas menos sensveis (RITCHER, 1993). A abertura estomtica, ao contrrio do efeito da falta de gua, pouco afetada pelas altas temperaturas, o efeito maior sobre a ultraestrutura cloroplstica, ativando a senescncia e a ao de enzimas proteolticas e lipolticas (STARCK et al., 1993). O estresse trmico por altas temperaturas (por exemplo, 40C por 4 horas) resulta em inibio da fotossntese e inativao de enzimas como a catalase, por exemplo, alm de causar a inibio da sntese proteica de uma maneira geral, diminuindo assim a atividade de enzimas, como a PEP-case e a rubisco (GHOSH et al., 1989). A atividade fotorrespiratria aumentada por altas temperaturas, e como as catalases so desativadas nessas temperaturas, h um acmulo de perxido de hidrognio, causando efeitos deletrios em substncias vitais para o metabolismo, como nas clorofilas e nas vias de transduo de sinais. Plantas de tabaco com maior atividade de catalases so mais tolerantes ao estresse trmico (WILLEKENS et al., 1995). Sobre a respirao, a temperatura tem tambm um efeito significativo pois um processo com Q10 em torno de 2,0, sendo aumentada linearmente com a temperatura (Fig. 15) (BRYCE & THORNTON, 1996). Alm destes efeitos no metabolismo, durante o incio da fase reprodutiva em milho, as altas temperaturas causam a paralizao do crescimento e do desenvolvimento do gro, provavelmente pela supresso de fotoassimilados, mas tambm devido a um desbalano hormonal, com reduo dos teores de citocininas do gro. A manuteno de altos nveis de citocininas no gro conferem termotolerncia (CHEIKH & JONES, 1994). As altas temperaturas tambm causam reduo na diviso celular e esse efeito pode estar ligado a sua ao sobre as poliaminas, que so indutoras da diviso
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celular. Sob altas temperaturas ocorreria reduo na concentrao dessas poliaminas, afetando a diviso celular, mas a adio de poliaminas exgenas pode mant-la (POLJAKOFF-MAYBER & LERNER, 1994). Em resposta ao estresse trmico, pode haver ou no a sntese de um determinado grupo de protenas de baixo peso molecular (Ubiquitina, HSPs de 110 kDa, 90 kDa, 70 kDa, 60 kDa, etc... - chamadas protenas de choque trmico). Essas protenas, em geral, so produzidas no ncleo, sendo sua sntese promovida por mensageiros intracelulares, como o sistema CaCaM, conferindo a termotolerncia. Essa adaptao se d pela preservao das membranas do meio oxi-redutivo, do nvel de ons, e impedindo a desnaturao de outras protenas, mantendo sua atividade. A sntese dessas protenas de choque trmico um mecanismo de adaptao s altas temperaturas e varivel entre espcies, e dentro da espcie, entre variedades (BRODL, 1990). Essas protenas de choque trmico esto associadas especificamente com determinadas organelas, como o ncleo, ribossomas, cloroplastos, mitocndrias e plasmalema. Os homlogos HSP70 do cloroplasto parecem se associar ATPase estimulando a produo de ATP, enquanto outros homlogos no citoplasma facilitam o transporte de protenas atravs do retculo endoplasmtico. O homlogo HSP60 associado ao cloroplasto est envolvido na montagem das subunidades da rubisco para ativ-la. Porm, ainda conhecemos pouco sobre os mecanismos de sntese e ao da maioria dessas enzimas de choque trmico. Com o conhecimento do controle gentico dessas enzimas, estes genes podero ser transferidos para outras plantas mais sensveis (VIERLING, 1991). O nmero dessas protenas de choque trmico varivel segundo a espcie. Gossypium hirsutum L. sintetiza pelo menos 8 tipos de protenas de choque trmico, enquanto Vigna unguiculata L. sintetiza apenas 2 tipos, ambos desenvolvendo-se em temperaturas em torno de 40C (DUBEY, 1994). Em milho, uma variedade termotolerante difere de outra variedade termosensvel pela sntese de apenas uma protena de choque trmico de 45 kDa (RISTIC et al., 1991). A adaptao s altas temperaturas se faz tambm pela maior estabilidade estrutural das membranas celulares e principalmente cloroplsticas, onde ocorrem os fotossistemas. Essa maior estabilidade membranar conferida, alm de sua estabilizao por protenas de choque trmico, tambm pela composio de glicerolipdeos na membrana, dada pelo grau de insaturao de seu cidos graxos, segundo GOMBOS et al. (1994) ou ao contrrio, pela saturao destes cidos graxos, segundo BRODL (1990).
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Existem tambm mecanismos de evitamento do estresse causado por altas temperaturas, como a pubescncia e ou produo de ceras em folhas, aumentando a reflexo da energia luminosa, ou ainda folhas com clulas com grandes vacolos e alto contedo hdrico relativo, como as plantas CAM obrigatrias. Devido ao grande volume de gua, o aumento da temperatura da folha menor (BJRKMAN et al., 1980), pois a gua absorve grande quantidade de energia para o aumento de sua temperatura, causando menor variao de temperatura no sistema (KRAMER & BOYER, 1995).
3.B.2. Efeitos da temperatura no desenvolvimento vegetal
Em uma cultura anual de gro, os eventos de seu desenvolvimento so a germinao, a emergncia, o crescimento vegetativo, a iniciao floral, a florao, a formao e maturao do gro. Pode-se utilizar um ndice de desenvolvimento (ID), para cada um destes estdios onde a germinao tem valor 0 e a maturidade do gro, um valor 1. Por exemplo, a mxima rea foliar obtida em geral com um ID de 0,5 a 0,6 e o mximo peso seco da planta atingido com ID de 0,8 a 0,9. Para cada um dos estdios de desenvolvimento, a temperatura tima diferente. No arroz, as temperaturas timas so de 18 a 40C para a germinao, de 20 a 30C para a emergncia, de 30C para a elongao de folhas, entre 20 e 30C para a iniciao floral, de 30 a 33C para a antese e entre 20 e 29C para a maturao. A velocidade de desenvolvimento aumenta mais ou menos linearmente, desde uma temperatura mnima chamada de temperatura basal, na qual no h acumulao de matria seca, at temperatura tima, acima da qual o crescimento reduzido. A temperatura basal de leguminosas usualmente de 8 a 10C, a de gramneas de 8 a 13C, e a temperatura tima varia de 25 a 35C e 33 a 40C, respectivamente (NORMAN et al., 1995). Em milho, quando o desenvolvimento se d a uma temperatura mdia de 27C, uma nova folha se expande a cada 2,4 dias, enquanto a 15C, leva 5,9 dias. Um gentipo precoce de clima temperado, o Gasp Flint por exemplo, semeado nos trpicos ter um total de 7 folhas somente (o n mnimo de folhas 5, pois o n j existente na forma embriognica), tendo essa variedade 22 folhas em sua regio de cultivo (a inflorescncia masculina iniciase com 8 folhas expandidas). Aumentando a temperatura mdia, reduz-se o ciclo da planta. O n final de folhas da planta determinado pela iniciao floral e, a durao do perodo de iniciao floral at florao, funo do desenvolvimento do primrdio, controlado principalmente pela temperatura.
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Eficincia no uso de nutrientes e metabolismo de carbono
O tempo para chegar-se ao estdio de iniciao floral controlado pelas temperaturas mdias do ambiente e caracterstico para a espcie, e dentro da espcie, para as cultivares, sendo determinante para a caracterizao da durao do ciclo da cultura (WALDREN, 1983). Em feijo, o ciclo da variedade Porrillo Sinttico pode passar de 120 dias, em temperaturas mdias de 15C, para 75 dias, em temperaturas mdias de 25C (WHITE, 1985). Este fato levou a desenvolver-se ndices chamados de unidades trmicas (UTs) ou graus.dias-1, baseados ou na temperatura mdia diria, ou nas temperaturas mxima e mnima. A unidade trmica para a cultura obtida pelo somatrio das diferenas entre a temperatura mdia diria e a temperatura basal para a cultura. Essa temperatura basal de 9C para o milho (porm certas variedades adaptadas s baixas temperaturas podem ter uma temperatura basal de 6C), 10C para o milheto e feijo, e para o algodo e cana-de-acar de 15C. UTs = (temp. mdia diria - temp. basal, emC), por dia. Por exemplo, para o milho nos trpicos, limitando as temperaturas entre 10 e 34C, o desenvolvimento de uma folha necessita de 40 UTs, ento para uma planta florescer com 22 folhas, ela necessita de 928 UTs. O milheto, que tem um ID de 0,3 para a iniciao floral, e de 0,6 a 0,7 para a antese, precisa de 200 UTs para iniciar o perfilhamento, 460 da iniciao floral at antese, e 290 para o enchimento do gro (NORMAN et al., 1995). Por isso, a avaliao do desenvolvimento de uma cultura em um determinado ambiente deve ser feita levando-se em conta as temperaturas mdias locais para previso da durao do ciclo da planta, e para podermos comparar resultados em ambientes distintos, atravs no nmero de UTs para cada estdio. A produtividade de uma cultura em locais diferentes, recebendo o mesmo manejo, ser bastante distinta em funo da durao do ciclo, que controlado pelas temperaturas-ambiente. O acompanhamento das UTs permite tambm a previso da data de colheita, com uma certa antecedncia, facilitando o seu planejamento.
3.C. Eficincia no uso de nutrientes e o metabolismo de carbono
Devido ao aumento da populao mundial, a agricultura tem se expandido para regies marginais com baixa disponibilidade de nutrientes. Com o melhoramento da eficincia na utilizao de nutrientes j houve ganhos na capacidade de retranslocao de nitrognio (N) e de fsforo (P) dos rgos vegetativos para os reprodutivos, que deve estar associada manuteno do
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ndice de colheita e de um maior nmero de gros por unidade de N ou de P absorvidos. Em geral, o material selecionado para alto rendimento sob baixa disponibilidade de N, no so responsivos s altas doses. Como j foi dito, hoje em dia buscamos plantas que sejam eficientes no uso de nutrientes, pois estes elementos so esgotveis e representam alta parcela no custo de produo agrcola. Portanto, o estudo sobre a eficincia de absoro, de assimilao e de utilizao dos nutrientes, permitir avanos na produtividade agrcola, principalmente na agricultura tropical, onde os nutrientes esto pouco disponveis. Devemos estudar as plantas nativas de ambientes naturais de baixa disponibilidade de nutrientes para conhecermos os mecanismos de eficincia no seu uso e selecionarmos, entre as cultivadas, aquelas que atinjam maiores produes com baixas doses de fertilizantes (POWER, 1990), o que diferente de uma seleo para plantas responsivas, durante a revoluo verde. Dentre os elementos requeridos pela clula, depois do C, O e H, obtidos pela fotossntese e absoro de gua, o N aquele requerido em maior quantidade, representando de 1,35 a 6,0% do peso seco do vegetal (MARSCHNER, 1995). O N est pouco disponvel no solo, principalmente nos tropicais, pois lixiviado, volatilizado e utilizado por microrganismos, em maior velocidade do que em clima temperado. A atividade biolgica maior nos trpicos do que em clima temperado devido s altas temperaturas e precipitao. Alm disto, h interrupo de tais processos durante o inverno em clima temperado. Na planta existe uma estreita correlao entre o metabolismo de N e de C (Fig. 6), ocorrendo um declnio da atividade fotossinttica com a diminuio da disponibilidade de N (OSMOND et al., 1982). Este declnio mais acentuado em plantas C3 do que em plantas C4, que so mais eficientes no uso fotossinttico de N. A assimilao de C pela fotossntese dependente da atividade da rubisco, que equivale a mais de 50% do N foliar em plantas C3. Alm da formao da rubisco, o N imprescindvel para a formao das membranas dos tilacides e pigmentos do cloroplasto. Com o aumento da disponibilidade de N, h uma aumento proporcional da atividade da rubisco e da assimilao de C at atingir a saturao. Durante a ontogenia da folha, h um aumento gradual no contedo de N e da atividade fotossinttica, at que o contedo mximo de N seja atingido. Em seguida, h um declnio do contedo de N, devido sua exportao para folhas e rgos mais jovens, com conseqente declnio da fotossntese. Segundo LEEGOOD (1996), a enzima rubisco, responsvel pela assimilao de C, funciona como um pool de
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reserva de N. Portanto, a assimilao de CO2 diretamente proporcional ao contedo de N foliar, pois com o aumento, e depois a diminuio dos teores de N durante a ontogenia da folha, ocorre a mesma variao na atividade da enzima rubisco, principal composto nitrogenado na folha, responsvel pela assimilao do CO2 (DALLING, 1985). Por outro lado, a assimilao de N depende dos cidos orgnicos e do ATP e NADH, produzidos no catabolismo de carboidratos para formar os aminocidos (Fig. 6). O metabolismo de C depende do metabolismo de N para a sntese da enzima de carboxilao, e o metabolismo de N depende do fornecimento de cidos orgnicos, ATP e NADH, oriundos do metabolismo de C, para a assimilao do N (RITCHER, 1993). A eficincia de utilizao de N, que a produtividade alcanada por unidade de fertilizante aplicado, determinada por algumas variveis: absoro de nitrato ou amnia, atividade da redutase do nitrato, tamanho do pool de estoque de nitrato, habilidade de mobilizar e translocar N para os rgos colhveis, e adaptao baixa disponibilidade de N no meio (DUNCAN & BALIGAR, 1990). Alm da baixa disponibilidade de N em zona tropical, o P fator limitante em grande parte dos solos tropicais e a adubao fosfatada traz grandes respostas na produtividade. Os fatores ambientais como a disponibilidade de gua, alteram a absoro de P das plantas. As cultivares de arroz no Brasil so separadas em 4 grupos em funo da resposta da produo ao fsforo e da eficincia no uso de P (FAGERIA, 1984). Como para o N, existe tambm uma variabilidade na eficincia de uso de P entre espcies e esta est correlacionada com a superfcie radicular, em variedades de tomateiro (SILVA & MAGALHES, 1989). Contudo, devemos salientar que no somente as caractersticas morfolgicas da planta, como o sistema radicular, influenciam a eficincia no uso de P. Caractersticas fisiolgicas de absoro, assimilao e distribuio de P na planta, assim como associaes com micorrizas ou capacidade da planta em modificar a rizosfera, afetam o uso de P da planta (Tab. 6). Do ponto de vista prtico, existem ao menos quatro diferenas entre cultivares, quanto nutrio mineral: a produtividade, a absoro de nutrientes, o requerimento distinto para um elemento especfico e a tolerncia toxidez. O local de absoro na raiz de grande importncia e alguns elementos so absorvidos principalmente pela zona de crescimento, prxima da coifa, como o clcio, magnsio, mangans e ferro, enquanto outros tambm so absorvidos pelas regies mais suberizadas, como o potssio, a
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amnia, e fosfatos. A importncia da densidade radicular varivel tambm segundo o elemento. Por exemplo, para a absoro de N, uma densidade de 0,1cm de raiz por cm3 de solo necessria, enquanto para o P, uma densidade de 1 a 10 cm de raiz por cm3 de solo requerida. Porm, um sistema radicular menor pode ter sucesso na absoro de P se a capacidade do vegetal em metabolizar este nutriente for alta. Isto foi visto em algumas cultivares de feijo em que houve uma correlao negativa entre a assimilao de P e a densidade do sistema radicular, provavelmente devido maior eficincia de assimilao deste nutriente, mesmo com um pequeno sistema radicular. Diferenas no uso de P tambm foram detectadas em milho, tomate e soja. A eficincia no uso de P em termos de produo varia de 380 a 671 mg de peso seco produzido por mg-1 de P disponvel (VOSE, 1990). De uma forma geral, os vegetais com alto suprimento de N diminuem o crescimento radicular, favorecendo o crescimento da parte area. Este aumento da rea foliar poder aumentar a transpirao e, em condies de falta de gua, reduzir a produo (KRAMER & BOYER, 1995). A disponibilidade de nutrientes afeta o contedo de fitormnios e crescimento dos tecidos. O nitrognio tem o efeito mais proeminente sobre o crescimento de razes e produo e exportao de citocininas para a parte area. Em batata, o teor de citocinina no xilema aumenta com a idade da planta, mas se o suprimento de N interrompido, as razes respondem com um decrscimo drstico de citocinina exportada. Quando o suprimento restaurado, a exportao de citocinina estimulada. A sntese e exportao de citocininas tambm so afetadas pelo fsforo e potssio, mas no de maneira to expressiva quanto com o N. A relao entre nmero de primrdios radiculares e rea foliar, em tomate, provavelmente ditada pela produo de citocininas, dependente da disponibilidade de nutrientes. Em Plantago major, diminuindo a disponibilidade de nutrientes, diminui o contedo de citocininas e o crescimento. Em plantas com suprimento adequado de nutrientes, dois dias depois da transferncia para condies de baixo suprimento de nutrientes, o contedo em citocininas e o crescimento da parte area so drasticamente reduzidos. Outro fitormnio afetado pela disponibilidade de N o ABA, que a exemplo do que ocorre com a falta de gua no solo, com baixo N h um aumento da produo de ABA na raiz e na parte area, sendo acumulado nas folhas, causando paralizao da elongao celular. O teor de giberelinas, na parte area de batata, diminui com a falta de N e restaurado quando a planta transferida para condies de alto suprimento de N. Plantas sob baixa disponibilidade de N respondem mais
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rapidamente falta de gua no solo, com rpido fechamento estomtico, devido ao alto suprimento de ABA e baixo de citocinina j existente sob deficincia de N. Em algodo, a deficincia em P causa aumento do teor de ABA nas folhas, e a resposta ao estresse hdrico mais rpida (MARSCHNER, 1995). Para o crescimento vegetativo, a baixa disponibilidade de N e de P causam reduo no ndice de rea foliar pelo declnio da atividade fotossinttica, e do nmero e elongao das clulas epidrmicas. Em gramneas, a zona de elongao se situa na base da folha, protegida pelas folhas superiores e por isto, o crescimento da folha, sob deficincia de N, tende a ser menos afetado do que a fotossntese. As plantas deficientes em P tm a colorao verde escuro devido paralizao da elongao celular, ficando com um maior nmero de clulas por unidade de rea. Alm disso a baixa disponibilidade em P afeta a exportao de trioses-P do cloroplasto, que depende da entrada de P inorgnico nessa organela (VOSE, 1990). Em ma e em citrus, uma aplicao de N-amoniacal na pr-florao tem um efeito maior no desenvolvimento que o suprimento contnuo de Nntrico, aumentando a iniciao floral, provavelmente pela sntese de compostos nitrogenados, como as poliaminas que ativam a iniciao floral. O dficit hdrico tem o mesmo efeito como indutor de florao em algumas culturas como citrus devido acumulao de amnio nas folhas de plantas estressadas. A aplicao foliar de uria tambm aumenta a florao e frutificao em citrus e ma, e repetida por 3 anos no causou diminuio de frutificao (RABE, 1994). Em arroz, a aplicao foliar de N na florao causou aumento no teor de protenas no gro (SOUZA et al. 1993). O suprimento adequado de P e K afeta tambm a formao de flores em ma e tomate, aumentando os teores de citocininas. A deficincia de N e de P durante a fase crtica de formao de flores causa aborto dessas. O suprimento adequado de N neste perodo crtico aumenta os teores de citocininas e abaixa os de ABA, diminuindo o aborto floral. Em batata, um contnuo e alto fornecimento de N atrasa ou impede a tuberizao devido diminuio da sntese de giberelinas na parte area. Um baixo suprimento de N, contudo, pode diminuir o IAF e a durao da rea foliar devido senescncia de folhas, diminuindo assim a produo. Em frutas ou tubrculos, o contedo de K nestes rgos grande e a deficincia deste elemento nas fontes pode limitar a produo e exportao de fotoassimilados. Em contraste, os cereais tm mais de 80% do N e P no gro, contra somente 20% do K. Portanto, em cereais a deficincia de N e P limita a produo de fotoassimilados da fonte, enquanto a deficincia de K no to importante.
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Ainda em cereais, a folha bandeira fornece de 59 a 89% do P encontrado no gro de trigo. Em tais plantas a deficincia de P vai acelerar a senescncia da folha bandeira, anulando a fotossntese, podendo levar a uma reduo de 40% do potencial produtivo (MARSCHNER, 1995). Apesar da importncia de todos os macro e microelementos afetando a fotossntese, e o crescimento e desenvolvimento vegetal, a discusso se concentrar no metabolismo de N, que depois do C, O e H o elemento requerido em maiores quantidades pelas plantas, com efeito direto sobre a fotossntese e o metabolismo de carbono. Porm, deve-se ressaltar que em solos tropicais antigos, alm do N, observa-se tambm deficincia em P, e a adubao fosfatada, apesar de ser feita em menores quantidades do que a nitrogenada, tem grande efeito na produtividade vegetal (VOSE, 1990).
3.C.1. Interao entre o metabolismo de N e de C
Na dcada de 50, grandes aumentos de produtividade foram obtidos com a melhoria do manejo, utilizao de cultivares melhoradas e aumento da aplicao de fertilizantes, especialmente de N. Pouca pesquisa foi feita para aumento da eficincia no uso de nutrientes, pois os fertilizantes nitrogenados e o petrleo eram bastante disponveis e baratos. Naquela poca, o conceito de modificar o solo para as necessidades do vegetal prevalecia. Com a crise do petrleo na dcada de 70, causando uma instabilidade na economia mundial, aumentou o interesse em aproveitar a variabilidade gentica de plantas, visando melhorar a eficincia no uso dos nutrientes. Atualmente, mais de 65 milhes de toneladas de fertilizantes nitrogenados so aplicadas por ano (MARSCHNER, 1995), devendo quadruplicar depois do ano 2000, o que mostra que o potencial de produtividade das culturas estar intimamente ligado disponibilidade de N (CLARK, 1991). O nitrognio (N) um elemento de grande requerimento pelas plantas e em baixa disponibilidade nos solos, principalmente nos tropicais. Apesar do N molecular (N2) compor mais de 78% da atmosfera, este no reage qumicamente em condies normais e s utilizado por microrganismos fixadores de N2. Dentre estes microrganismos, aqueles que fazem associao com os vegetais fornecem N-orgnico a estes, ou participam na absoro de P pelas plantas, no caso das micorrizas (NEVES & HUNGRIA, 1987; SIQUEIRA & FRANCO, 1988; ARAJO & HUNGRIA, 1994). Sistemas complexos de absoro, assimilao e mobilizao evitam o desperdcio de energia e resultaram de uma adaptao progressiva das plantas aos ambientes de baixo suprimento de N (FERNANDES & ROSSIELLO, 1995).
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O conhecimento sobre o comportamento vegetal quanto ao uso de nutrientes nos permite manusear ou modificar o sistema para melhorar a eficincia no uso de N. Por exemplo: alguns gentipos tm melhor capacidade de absoro de N-NO3- e outros, de N-NH4+; alguns gentipos produzem mais matria seca por unidade de N aplicada; outros gentipos tm maior capacidade de mobilizao de N de folhas e outros rgos, para o gro; e alguns gentipos so mais adaptados a alto suprimento de N, enquanto outros so adaptados a baixo suprimento (VOSE, 1991). Nitrato (NO3-) e amnio (NH4+) so as maiores fontes de nitrognio inorgnico absorvidas pelas plantas (Fig. 16). A maior parte do NH4+ na planta deve ser incorporado em N-orgnico j na raiz, pois no pode ficar livre na clula e tecidos, uma vez que a amnia (NH3), resultante da reao do NH4+ com a OH-, da gua, txica mesmo em baixas concentraes, causando desacoplamento dos processos de fosforilao, sendo bastante permevel nas membranas mitocondrial e cloroplstica. J o NO3- pode circular na planta e ser acumulado no vacolo, sem causar danos planta, podendo ento ser estocado para posterior utilizao (RICHTER, 1993). FERNANDES & ROSSIELLO (1995) ressaltam que em solos tropicais, com alternadas estaes secas e chuvosas, h aumento sbito (flush) na disponibilidade de NO3- no incio da estao chuvosa durante 3 a 5 semanas. Isto devido rpida degradao de matria orgnica, com o aumento da populao de microrganismos nos solos, principalmente fungos, e tambm devido migrao do NO3- para a superfcie do solo, durante a estao seca, de alta evaporao (NORMAN et al., 1995). Uma estratgia de adaptao em plantas seria a rpida absoro e acmulo do NO3- para posterior utilizao durante o seu desenvolvimento, quando a sua disponibilidade diminui com a lixiviao pelas chuvas e uso pela crescente micro fauna e flora do solo.
3.C.1.1. NO3- como fonte de N
A absoro de NO3- ativa contra o potencial eletroqumico em um simport, associado entrada de H+. Neste processo, a fora motiva o gradiente de prtons criado pela clula, com aumento do pH externo para promover a entrada do NO3- . O NO3- absorvido pode ser acumulado no vacolo para posterior utilizao, mas para sua assimilao e utilizao, precisa ser reduzido a NH3, e ento incorporado em compostos orgnicos. Este processo necessita de 2 eltrons, para sua reduo a NO2-, na reao catalizada pela nitrato redutase, e 6 eltrons, para a reduo do NO2- a NH3, na reao
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catalizada pela nitrito redutase (Fig. 16). Em plantas superiores, essa reduo do NO3- ocorre principalmente nas clulas verdes, onde a nitrato redutase se localiza no citoplasma e a nitrito redutase no cloroplasto. Tal reduo ocorre tambm em razes e outros tecidos no fotossintetizantes, como em tremoo, onde a ferredoxina funciona como doadora de eltrons. Essa reduo de NO3a NH3, ocorre, preferencialmente, em tecidos fotossintetizantes devido grande demanda de eltrons, que so ento fornecidos pelos fotossistemas, na presena de luz. Assim a assimilao de N-NO3- depende da fotossntese para fornecimentro de eltrons, pelo fotossistema I, para a reduo do NO3-, competindo com o CO2 pelo poder redutor (CLARK, 1991). A nitrato redutase em plantas superiores uma enzima complexa e extremamente sensvel s variaes ambientais, ao substrato e ao produto final. Ela constituda de duas subunidades idnticas, onde cada subunidade pode funcionar independentemente, contendo 3 grupamentos prostticos com os fatores: flavina adenina dinucleotdeo (FAD), citocromo 557 e molibdnio (MoCo). J a nitrito redutase monomrica com um nico grupamento prosttico siroheme (Fig. 16) (MARSCHNER, 1995). Este sistema nitrato redutase/nitrito redutase funciona em coordenao, sendo um sistema enzimtico bastante complexo e sensvel, protegendo o metabolismo de N de variaes ambientais. A atividade dessas enzimas aumentada rapidamente pela presena do substrato inicial, o NO3-, pelo aumento da luz e temperatura, sendo diminuda pelo acmulo do produto final, o NH3, pelo estresse hdrico ou trmico e pela obscuridade (KRAMER & BOYER, 1995). O aumento da atividade do sistema devido sntese de novo das enzimas e a diminuio pela sua degradao, sendo que sua atividade mxima quando a expanso foliar tambm o , assim como para a atividade fotossinttica, decrescendo aps, com a diminuio da atividade fotossinttica (GUPTA & BEEVERS, 1985). Portanto, este sistema enzimtico de assimilao de NO3- modulado pelas condies ambientais, sendo que ao contrrio do NH3, o NO3- pode ser acumulado em folhas, bainhas e colmos, para ser utilizado quando as condies forem adequadas e houver demanda de N para o crescimento. A atividade dessas enzimas uma caracterstica herdvel e a seleo de plantas para aumento da atividade de reduo do NO3- , assim como a manuteno de alta atividade no perodo de florao e frutificao, est associada com o aumento do rendimento vegetal (CLARK, 1991). Aps a reduo do NO3- a NH3, a assimilao do NH3 se d sob a ao de outras enzimas, como ser visto a seguir.
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Assimilao de N-NO3-: NO3-+ 8H++ 8e-
NH3+ 2H2O+ OHFotossistema I eferredoxina reduzida e6eSiroheme nitrito redutase
NAD(P)H + H+ 2eFAD+ FADH2 NAD(P)+ nitrato redutase

2e-
NO3H2O
2e2e-
citocromo 557
MoCo
NO2-
H 2O + OH-
NH3
Assimilao de NH3 + 2e- + ATP + NAD(P)H + glutamato (ou oxoglutarato) N-NH3: ADP + NAD(P)+ + glutamina (ou glutamato) protenas, cidos nucleicos, outros compostos nitrogenados.
alta [NH3] ATP glutamina glutamina sintetase (GS)
ciclo de Krebs
oxoglutarato glutamato sintase (GOGAT) glutamato baixa [NH3]
ferredoxina, 2e-, NAD(P)H.
NH3 glutamato absoro de NH4 reduo de NO3-, fixao de N2 e fotorrespirao.

+,
protenas, cidos nucleicos, outros compostos nitrogenados.
NH3
oxoglutarato glutamato desidrogenase (GDH) glutamato
NADH + H+
NAD+
muito alta [NH3] protenas, cidos nucleicos, outros compostos nitrogenados.
FIGURA 16. Assimilao de nitrognio, na forma ntrica (NO3-) e/ou na forma amoniacal (NH4+). A nitrato redutase composta por 2 subunidades idnticas, com 3 grupamentos prostticos: FAD, citocromo 557 e molibdnio associado ao cobalto (MoCo). J a nitrito redutase monomrica, com 1 grupamento prosttico: siroheme. Adaptado de Marschner (1995).
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3.C.1.2. NH4+ como fonte de N
Enquanto o NO3- pode ser acumulado nos vacolos para posterior assimilao, o NH4+ absorvido ou NH3 oriunda da reduo do NO3devem ser assimilados prontamente, pois a NH3 txica mesmo em baixas concentraes. Amnio e amnia se interconvertem e difcil quantificar uma forma ou outra. A assimilao do NH3 absorvido, ocorre na raiz devido toxicidade deste composto, e requer uma grande quantidade de esqueletos de carbono, principalmente o oxoglutarato, oriundo do ciclo de Krebs, na respirao (Fig. 16) (FERNANDES & ROSSIELLO, 1995). As duas enzimas chaves neste processo so a glutamina sintetase (GS) e a glutamato sintase (GOGAT), encontradas em raizes, cloroplastos e em microrganismos fixadores de N2, assimilando toda a NH3 oriunda da absoro de NH4+, da fixao do N2, da reduo do NO3- e da fotorrespirao. Neste sistema GS/GOGAT, o glutamato o aceptor inicial para a NH3 e a amida glutamina formada com consumo de ATP pela ao da glutamina sintetase, que tem baixo Km para o substrato. Em seguida, a segunda enzima, a glutamato sintase, cataliza a transferncia do grupamento amino (-NH2) para um segundo oxoglutarato, proveniente do ciclo de Krebs, consumindo poder redutor (ferredoxina reduzida ou NAD[P]H) e formando duas molculas de glutamato. Uma dessas molculas de glutamato requerida para manuteno da assimilao de NH3, enquanto a outra molcula poder ser exportada. Quando o suprimento de NH3 alto, as duas molculas de glutamato servem como aceptores da NH3 e uma molcula de glutamina deixa o sistema (MARSCHNER, 1995). Uma terceira enzima, a glutamato desidrogenase (GDH), que tem uma baixa afinidade pelo substrato, s tem importncia na assimilao de NH3 em altssimas concentraes na raiz (MAGALHES & HUBER, 1989). Aps a assimilao do N em compostos orgnicos, o grupamento amino do glutamato ou da glutamina pode ser transferido para outras amidas, como a asparagina, para uredos, como a ornitina, e para a formao de outros aminocidos, utilizando os compostos intermedirios da fotossntese, gliclise ou ciclo de Krebs. O 3-fosfoglicerato do ciclo de Benson-Calvin d origem serina, que por sua vez forma a glicina e a cistena; o piruvato da gliclise forma triptofano, fenilalanina, tirosina, alanina, valina e leucina; o oxaloacetato, do ciclo de Krebs, forma o aspartato que pode formar a asparagina, a metionina, a isoleucina e a lisina; e finalmente, o oxoglutarato, tambm do ciclo de Krebs, forma a glutamina, a ornitina, e desta se formam
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a arginina e a prolina, que por sua vez forma a hidroxiprolina. A partir destes aminocidos essenciais todas as protenas necessrias ao metabolismo vegetal so sintetizadas (STRYER, 1995). Portanto, para a assimilao de NH3 , o metabolismo de N requer ATP, NAD(P)H e cidos orgnicos oriundos do metabolismo de C e, conseqentemente, qualquer fator ambiental que afete o metabolismo de C, interferir na assimilao de N.
3.C.1.3. Fixao biolgica de N2, em leguminosas
Estima-se que a fixao biolgica do nitrognio (FBN) fornece entre 139 e 170 milhes de toneladas de N por ano para a biosfera, o que muito superior aos 65 milhes aplicados como fertilizantes. Visto o custo atual da energia fssil e a demanda de fertilizantes nitrogenados para a produo de alimentos, grande o interesse na FBN e no melhoramento de sua eficincia. A eficincia se baseia em 3 fatores: 1) o suprimento de fotoassimilados para os bacterides no ndulo; 2) a manuteno de baixas concentraes de O2 no interior do ndulo, para proteo da nitrogenase; e 3) a rpida exportao do nitrognio fixado (RICHTER, 1993). Neste sistema (Fig. 17), a sacarose fornecida ao ndulo atravs do floema, e no ndulo os metabolismos de C e de N esto adaptados ao ambiente com baixo O2. A baixa concentrao de O2 no ndulo mantida por: 1) gerao de uma barreira difuso do O2 no crtex do ndulo, pela membrana peribacteride, por camadas de clulas com poucos espaos intercelulares, e camadas de gua, impedindo a sua difuso; 2) direcionamento da gliclise para a formao de malato, com a subseqente formao redutiva do succinato quando o teor de O2 alto; utilizao de cidos C4 pelo bacteride, ao invs de consumir mono ou dissacardeos; 3) formao de ATP no bacteride, que associada a uma oxidase com alta afinidade pelo O2; 4) sntese da leghemoglobina que se liga ao O2 e controla a sua disponibilidade para o bacteride (VANCE & HEICHEL, 1991). Portanto, a quantidade de O2 disponvel para a respirao do bacteride regulada pela leghemoglobina, e a sua atividade est associada, mas no linearmente, capacidade de FBN do ndulo. O custo em C para a FBN estimado em 6 a 12g de C. g-1N fixado, se os custos do crescimento e manuteno dos ndulos forem includos (cerca de 30% dos fotoassimilados da planta so gastos nos ndulos, segundo NEVES & HUNGRIA, [1987]), o que alto comparado, por exemplo, ao custo da
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reduo de NO3- em folhas. Por isto, leguminosas em um ambiente com alta disponibilidade de N-mineral tem sua nodulao diminuda pois iro assimilar preferencialmente o N-mineral. O processo de infeco do Rhizobium especfico para aquele hospedeiro, ocorrendo pela ao de fatores de nodulao secretados pela bactria, na maioria cidos graxos, reconhecidos na membrana celular da planta, que produz outras substncias (flavonides e lectina) capazes de induzir a expresso de genes de nodulao (nod) na bactria e que por sua vez produziro compostos promotores de modificaes na estrutura dos pelos radiculares e clulas corticais, permitindo a infeco (GEURTS & FRANSEN, 1996). A reduo biolgica do N2 um processo altamente endergnico. A enzima chave neste processo a nitrogenase (Fig. 17) que constituda de 2 Fe-protenas sensveis ao O2 (por isto a FBN proporcional aos nveis de leghemoglobina, que controla a entrada de O2 no bacteride). A menor Feprotena tem 2 subunidades, e a maior, uma MoFe-protena, tem 4 subunidades. A nitrogenase catalisa a reduo de diversos substratos, incluindo o H+, N2 e C2H2. A reao de reduo de um mole de N2, consome 8 H+, 8 eltrons e pelo menos 16 Mg, produzindo 2 moles de NH3, 1 de H2, 16 de ADP e 16 de Pi (STRYER, 1995). O H2 produzido representa um inibidor competitivo da fixao de N2 e uma perda de energia, mas pode ser reprocessado em parte pela hidrogenase, uma enzima que quebra a molcula de H2, produzindo 2H+ e 2 eltrons que so reciclados na FBN. A seleo de leguminosas com alta atividade da hidrogenase pode ser considerada benfica para aumento da eficincia da FBN (PATE, 1996). O nitrognio fixado no bacteride exportado como NH3 para o citosol do ndulo, considerado um tecido do hospedeiro. No citosol, o NH3 assimilado pelo sistema GS/GOGAT, produzindo glutamina, que transaminada a uredos em caupi, soja e feijo (alantona e cido alantico, com a vantagem de ter uma relao C/N de 1) ou asparagina, em tremoo (com relao C/N de 2 a 2,5), para exportao via xilema. Altas concentraes de NH3 ou dos produtos de sua assimilao reprimem a atividade da nitrogenase, o que explica a diminuio da FBN, com a aplicao de fertilizantes (MARSCHNER, 1995). Visto a dependncia do suprimento de fotoassimilados para a FBN, a taxa de fixao proporcional taxa fotossinttica do vegetal, sendo que o pico de FBN durante o ciclo da planta ocorre no incio da florao, quando h a maior taxa fotossinttica da planta. Nas fases subseqentes, h uma diminuio da
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floema
xilema
O2
leghemoglobina
Citosol do ndulo Membrana
malato, fumarato e succinato
malato, fumarato e succinato
O2 e-
Bacteride CO2 CO2
cadeia de transporte de eltrons fosfoenolpiruvato carboxilase
sacarose glicose
Mg.ATP Fe-protena
Mg.ADP+Pi N2 Mo-Fe-protena N2
NITROGENASE NH3 c. C4 2e 2H+ H2 2H+
hidrogenase H2 oxoglutarato, ATP e NAD(P)H aminocidos, amidas; e uredos H2 NH3 + oxoglutarato

GS / GOGAT
NH3 + c. C4
+fep
glutamina
+fep
FIGURA 17. Fixao biolgica de N2 (FBN), em leguminosas. A nitrogenase constituda de 2 Fe-protenas: a menor Fe-protena tem 2 subunidades e a maior, uma MoFe-protena, tem 4 subunidades. O H2 produzido no processo inibidor da FBN e reprocessado pela ao da hidrogenase, que quebra a molcula, produzindo 2 H+. Adaptado de Marschner (1995).
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fotossntese, e a competio por carboidratos para os rgos reprodutivos aumenta, diminuindo a FBN. Essa diminuio mais ou menos acentuada segundo a leguminosa e, portanto, a aplicao tardia de fertilizantes nitrogenados pode ser benfica ou no, dependendo do gentipo (PATE, 1996). A FBN dependente do efeito de fatores ambientais sobre a planta. Por exemplo, a falta de gua pode causar inicialmente um aumento na FBN devido a maior disponibilidade de gases no solo. Porm, com a desidratao mais severa da planta, h uma reduo drstica da fotossntese e conseqentemente da FBN. Alm da baixa disponibilidade de fotoassimilados, com a falta de gua no solo h um aumento de sua temperatura, que tambm vai afetar a FBN (PIMENTEL et al, 1990). Qualquer efeito sobre a produo de fotoassimilados da planta vai reduzir a FBN devido a menor disponibilidade de esqueletos de C e ATP (KRAMER & BOYER, 1995). Avanos na FBN devem ser conseguidos com o melhoramento para a simbiose, tanto das bactrias como dos hospedeiros. O aumento da eficincia de FBN pode ser alcanado com a manipulao gentica, tornando assim as bactrias endofticas, como as da cana-de-acar, mais eficientes, ou ainda pela manipulao de bactrias para fixao biolgica de N2, em associao com culturas como milho, trigo ou arroz. Atualmente, a nica cultura para a produo de alimentos que no necessita de fertilizantes nitrogenados quando inoculada, a soja. Portanto, os estudos sobre o metabolismo de C na planta hospedeira, associado com a atividade metablica para a assimilao de N na bactria em simbiose, podero trazer maior economia no uso de fertilizantes nitrogenados (SIQUEIRA & FRANCO, 1988; ARAJO & HUNGRIA, 1994). Para as leguminosas que necessitam de uma complementao de N mineral, o aumento da capacidade fotossinttica da planta, pelo enriquecimento de CO2 atmosfrico por exemplo, causa aumento da atividade da nitrogenase (VANCE & HEICHEL, 1991). Por isso, a seleo de cultivares mais eficientes na produo e transporte de fotoassimilados poder implementar a FBN nessas plantas.
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METABOLISMO DE CARBONO NA AGRICULTURA TROPICAL

P ROF. C ARLOS P IMENTEL

METABOLISMO DE CARBONO NA AGRICULTURA TROPICAL

METABOLISMO DE CARBONO NA AGRICULTURA TROPICAL

CATALOGRFICA, ELABORADA PELA BIBLIOTECA CENTRAL DA UFRRJ

1. Carbono-Metabolismo. 2. Fisiologia vegetal. 3. Agricultura-trpicos. I. Ttulo CDD - 581.133

Captulo 2. 2.A. 2.A.1. 2.A.1.1.

Captulo 1 ASSIMILAO DE CARBONO

Cloroplasto DHAP G3P NADP NADPH2 ADP ATP PGA DPGA

Citoplasma DHAP G3P

NADP NADPH2 ADP ATP

G3P DPGA PGA NAD NADH PGA

malato NAD NADH oxaloacetato

malato NAD oxaloacetato NADH

eeFerredoxina (-0.42V) eNADPH2

0.0 eADP+Pi ATP 3 H+ eePlastocianina

Potencial redox (V)

Potencial redox (V)

Ciclo Q Citocromo b6 + Citocromo f

1.B.1. O ciclo de Benson-Calvin de reduo do carbono (via fotossinttica C3)

FOTORRESPIRAO (CICLO EM C2)

PGA PIR ASP MAL

PIR PGA CO2 CO2

1.B.3.2. Os trs subgrupos de plantas C4 - bioqumica, fotoqumica e taxonomia

HCO3CICLO DE CALVIN ALA CO2 CH2O ASP MAL PIR

Ecofisiologia de plantas C3, C4 e CAM

Localizao Substrato Km * Consumo de N, para a sntese.

citoplasma HCO3p/HCO3- 100 a 160mM Em plantas C4 10% Em plantas C3 Insignificante

cloroplasto CO2 p/CO2 20mM 10-25% >50%

Ecofisiologia de plantas C3, C4 e CAM

1.C.2. Respostas das plantas C3, C4 e CAM aos fatores ambientais

Ecofisiologia de plantas C3, C4 e CAM

E.U.A.*: Temp. tima:

---------------------------- g CO2 . kg H2O-1 ---------------------------1a3 2a5 10 a 40

30 a 45C no h aumento Rubisco: 25% PEP-case: 10% tropical e rida

30 a 45C no h aumento Rubisco: 25% PEP-case: 10% rida

Ecofisiologia de plantas C3, C4 e CAM

Vegetativo (20 DAP)

Pr-florao (39 DAP)

Enchimento do gro ( 60 DAP )

Na coluna, para folha em cada idade, letras diferentes so significativas a 0.01%.

Ecofisiologia de plantas C3, C4 e CAM

Ecofisiologia de plantas C3, C4 e CAM

* valores mantidos por curto tempo. Dados de Evans (1975).

Captulo 2 RELAES FONTE/DRENO

CO2 + H2O + ftons

Carboidratos de reserva e estruturais amido, sacarose, etc...

Partio de carbono na planta

Partio de carbono na planta

Citocininas ( - ) Lipases (+) Lipoxigenases (+)

(O2-, H2O2, etc...) (+)

Oxidao de clorofilas (+)

Partio de carbono na planta

Importao de C para a respirao (+)

2.A.2. Caractersticas morfo-fisiolgicas do dreno

Partio de carbono na planta

Partio de carbono na planta

Partio de carbono na planta

2.A.4. Comunicao e interao entre a fonte e o dreno

Fitohormnio na forma ativa (livre)

Fitohormnio na forma inativa

Mensageiros intracelulares: IP3, protenas G, Ca-CAM, polarizao de membranas, etc.

Partio de carbono na planta

Ligaes qumicas: esterificao, fosforilao, etc...