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5’
3’
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5’
Resumo ~ Critérios para Primer
Design
1. Uniqueness: assegurar o pareamento correto dos primers;
2. Comprimento: 17-28 bases. Esta faixa é variável;
3. Composição de bases: a quantidade de (G+C) deve estar em torno de
50-60%; se possível devem ser evitadas longas regiões ricas em
(A+T) e (G+C);
4. Otimizando o pareamento de bases: é crítico que a estabilidade da
extremidade 5’ seja maior que a da 3’ para minimizar erros no
pareamento.
5. Tm entre 55-80 °C é desejável;
6. Esteja certo que os primers a serem usados em uma mesma reação de
PCR tenham temperaturas de anelamento com uma diferença entre
elas que não seja superior a 2 – 3 °C.
7. Minimizar estruturas secundárias internas: grampos e dímeros não
são desejáveis.
Computer-Aided Primer Design
Primer design is an art when done by human beings, and a
far better done by machines.
machines