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GUARDA-COLUMNA
COLUMNA
DETECTOR
Parmetros de separacin
Seleccin de la fase estacionaria de la columna Longitud y dimetro de la columna Composicin de la fase mvil Temperatura Rata de flujo Tamao de la muestra
Solventes utilizados como fase mvil Solventes orgnicos, agua/solventes miscibles, agua/soluciones reguladoras
Alta pureza
Tratamiento con He Sistema de Desgasificados desgasificacin al vaco Filtracin
Filtracin
Sistemas de bombeo
Bomba dual de pistones paralelos Bomba dual de pistones en serie Bombas de diafragma
fase mvil
Ventajas: pequeo volumen interno, resiste presiones mayores a 10.000 psi, permite elucin con gradiente, caudales constantes e independientes de la contrapresin de la columna y la viscosidad del solvente Desventaja: produce flujo pulsado (amortiguar)
Elucin isocrtica
gradiente
eluyente columna
eluyente columna
Tratamiento de la muestra
Filtracin con filtros microporo Extraccin en fase slida
Pre-columna y Guardacolumna
Guarda-columna
Elimina materia en suspensin y componentes de la muestra que se unen irreversiblemente a la fase estacionaria Se usa para mejorar la vida de la columna. Se reemplaza cuando se contamina.
Columna
Tubos de acero inoxidable. Ocasionalmente de vidrio resistente Rectas (10 - 30 cm de longitud) y 4-10 mm d.i. Tamao partculas de relleno: 510 m Columnas termostatizadas: en general se trabaja a temperatura ambiente. La temperatura constante mejora el cromatograma
Columna
Columna
Rellenos
Relleno pelicular. Esferas de vidrio o polmero no porosas de 30 40 m de dimetro. En la superficie de las esferas se deposita una capa delgada y porosa de slica, almina, polmero.
Relleno de partculas. Micropartculas porosas de slica, almina o polmero de 3 10 m de dimetro. Se recubren con pelculas orgnicas que unen qumicamente o fsicamente a la superficie.
Eficiencia de la columna
Tamao de muestra
Ensanchamiento extracolumna
Detectores
Basados en la medida de una propiedad del eluyente (ndice de refraccin, constante dielctrica, densidad)
Basados en la medida de una propiedad del soluto (absorbancia, fluorescencia, corriente lmite) Requisitos Sensibilidad adecuada Respuesta lineal amplia Respuesta rpida y reproducible Manejo sencillo
Selectividad
Detector de fluorescencia
Detector de fluorescencia
Anlisis cuantitativo en CL y CG
Uso de patrn externo
S
rea S rea Sx
[S]
Sx P
[S]/[P]