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keocc|on en codeno de |o

po||meroso [!"#$%&'()& +,(-.
/&(01-"., FCk}







Ape|||dos, nombre Férez ce Cc:Irc, /nc Mcr|c
Deportomento 8icIecnc|cg|c
Centro EISl/MN



1 kesumen
Lc recccicn en cccenc ce |c pc|imerc:c c FCF {:ig|c: ce :u ncmLre en ing|é:
!"#$%&'()& +,(-. /&(01-".) permiIe genercr unc grcn ccnIiccc ce ccpic: ce un
frcgmenIc ce DN/ {ccicc ce:cxirriLcnu|ceicc). E| re¢ui:iIc funccmenIc| pcrc
pccer ||evcr c ccLc |c recccicn e: ci:pcner ce frcgmenIc: ccrIc: ce DN/ ce
cccenc :enci||c ccmp|emenIcric: c |c: exIremc: ce| frcgmenIc c cmp|ificcr. E:Ic:
frcgmenIc: :ervircn ccmc ceLcccre: pcrc ¢ue unc enzimc pc|imerc:c :ec ccpcz
ce inccrpcrcr nuc|ecIicc: ccmp|emenIcric: c |c cccenc mc|ce. Unc vez
ccmp|eIccc |c recccicn |c ccnIiccc frcgmenIc cmp|ificccc :e puece vi:uc|izcr
mecicnIe Iécnicc: :enci||c: ce :epcrccicn ce frcgmenIc: ce DN/.
2 Introducc|on
Irc: |c exIrcccicn ce| DN/ c pcrIir ce un Iejicc :e cLIiene e| DN/ IcIc| ccnIenicc
en e| ccnjunIc ce cé|u|c: ce| Iejicc uIi|izccc. E:Ie DN/ :e puece cL:ervcr ccmc un
precipiIccc, ¢ue e: pc:iL|e re:u:pencer en cguc c en un Icmpcn cprcpiccc. Si :e
:epcrc mecicnIe e|ecIrcfcre:i: en ge| ce cgcrc:c :e cL:ervc ccmc unc únicc
Lcncc ce e|evccc pe:c mc|ecu|cr {figurc 1).

2-34'( 56 7-)4(#-8(0-9. %&:-(.1& &#&01'";"'&)-) &. 3&# :& (3('")( :&# <=> 1"1(#
&?1'(@:" :& A#(.1() :& 1"%(1&6 B. (%C") &?1'&%") :&# 3&# )& %4&)1'( 4. A(1'9.
:& A&)") %"#&04#('&) D<=> E(%C:( :-3&'-:" 0". F-.:lll, ce FermenIc: |1]).
FrecuenIemenIe e| cLjeIivc ce un experimenIc e: cnc|izcr un frcgmenIc ccncreIc,
¢ue puece :er c nc ccnccicc, ce| DN/ exIrc|cc. ¿Ccmc pccemc: ci:|cr|c c pcrIir
ce e:e DN/ IcIc|° Unc ce |c: pc:iLi|iccce: e: cLIener unc grcn ccnIiccc ce
ccpic: ce| frcgmenIc ce inIeré: mecicnIe |c Iécnicc ce reocc|on en codeno de |o
po||meroso c FCk {!"#$%&'()& +,(-. /&(01-".). E:Ic Iécnicc re:u|Ic funccmenIc|
pcrc muchc: ce |c: cp|icccicne: ce |c Lic|cg|c mc|ecu|cr.
3 Objet|vos
E| pre:enIe crI|cu|c cccenIe Iiene ccmc cLjeIivc prcpcrcicncr c| c|umnc |c : Lc:e:
pcrc ¢ue :ec ccpcz ce:
De:criLir e| prcce:c ce |c recccicn en cccenc ce |c pc|imerc:c c FCF.
DeIc||cr |c: ccmpcnenIe: nece:cric: pcrc ||evcr c ccLc unc FCF.
Frececir ccmc cfecIc c| re:u|Iccc ce |c FCF |c mccificccicn ce fccIcre:
ccmc |c IempercIurc c |c ccncenIrccicn ce c|gunc ce |c: ccmpcnenIe:
ce |c recccicn.
Frepcrcr unc FCF.



4 Desorro||o
Lc recccicn en cccenc ce |c pc|imerc:c fue ce:crrc||ccc en 1º83 pcr e| DccIcr
Kcry Mu||i:. E| Dr. Mu||i: reciLic en 1ºº3 e| Fremic NcLe| ce Cu|micc pcr e:Ie
ce:cuLrimienIc. Fe:u|Ic muy inIere:cnIe |eer e| ci:cur:c prcnunciccc pcr e:Ie
inve:Iigcccr ccn mcIivc ce |c recepcicn ce| premic |2]. Se perciLe |c impre:icn ce
¢ue, ccmc en muchc: cIrc: cc:c:, fuercn pccc: |c: ¢ue inicic|menIe perciLiercn |c
impcrIcncic ce |c ¢ue e| Dr. Mu||i: hcL|c ce:cuLierIc. Sin emLcrgc, Lien pcr e|
Iiempc Irc:curricc enIre e| ce:cuLrimienIc y e| ci:cur:c, Lien pcr e| Iiempc
cecicccc c pen:cr en e||c, K. Mu||i: :| ¢ue Irc:miIe un enIu:ic:mc cccrce c |c
impcrIcncic ce :u invencicn y c| ccmLic ¢ue :upu:c en e| ccmpc ce |c Lic|cg|c
mc|ecu|cr. En pc|cLrc: :uyc:: ¨/nIe: ce| |c FCF, e| DN/ erc |crgc y fiLrc:c, en
cL:c|uIc mc|ecu|cr. Yc hcL|c re:ue|Ic unc ce |c: principc|e: prcL|emc: ce |c
¢u|micc ce| DN/ en un :c|c pc:c: cLunccncic y ci:Iincicn" |2].
Ccmc en e| cc:c ce muchc: invencicne:, e| ce:cuLrimienIc ce |c FCF Iuvc |ugcr
Lu:ccncc |c :c|ucicn c cIrc prcL|emc. De hechc, cnIe: ce |c FCF exi:I|cn méIccc:
pcrc ci:|cr frcgmenIc: ce DN/ Lc:ccc: en |c c|cnccicn, perc e:Ic: méIccc:
re:u|IcLcn muchc mc: cc:Ic:c: en Iiempc y en cinerc.
Yc pccemc: inIuir, cun :in ccnccer |c: ceIc||e:, |c impcrIcncic ce| ce:cuLrimienIc
ce |c FCF: mecicnIe e:Ic Iécnicc e: pc:iL|e genercr muchc: ccpic: ce un
frcgmenIc ce DN/ y ci:Iinguir|c ce| re:Ic ce| DN/ IcIc| exIrc|cc. / ccnIinuccicn :e
ceIc||crcn |c: ccmpcnenIe:, nece:cric: pcrc ccmp|eIcr |c recccicn, c:| ccmc |c
Lc:e Iecricc ce |c mi:mc. En e:Ie punIc :e prcpcrcicncrc infcrmccicn ccercc ce
fuenIe: e|ecIrcnicc: úIi|e: pcrc |c vi:uc|izccicn ce :imu|ccicne: ce| prcce:c. Fcr
ú|Iimc, :e exp|iccrc ccmc :e prepcrc unc FCF c nive| prccIicc.
4.1 Componentes de |o FCk
ScLemc: ¢ue e| cLjeIivc ce |c recccicn en cccenc ce |c pc|imerc:c e: cLIener
muchc: ccpic: ce un frcgmenIc ce DN/, pcrc ce:pué: pccer vi:uc|izcr e:Ie
frcgmenIc y uIi|izcr|c en cIrc: cp|icccicne: :i e: nece:cric. Fcrc c|ccnzcr e:Ie
re:u|Iccc, ¿¢ué e: nece:cric cnccir c |c recccicn°
E| DN/ c pcrIir ce| cuc| ¢ueremc: cLIener unc ccpic ce un frcgmenIc, e:
cecir, e| DN/ ¢ue ¢ueremc: cmp|ificcr. E:Ie DN/ :e ccncce ccmc DNA
mo|de.
Unc enzimc ccpcz ce genercr unc ccpic ce DN/ c pcrIir ce| DN/ mc|ce:
unc DNA po||meroso. Lc recccicn :e ||evc c ccLc en un Icmpcn cprcpiccc
pcrc e| funcicncmienIc ce |c enzimc pc|imerc:c. /cemc:, ccmc
ccfccIcre: ce |c pc|imerc:c :e cnccen ccIicne: civc|enIe:, generc|menIe
en fcrmc ce c|crurc ce mcgne:ic {MgC|2).
lnicicccre: ce |c recccicn: Lc: enzimc: DN/ pc|imerc:c: úniccmenIe :cn
ccpcce: ce cnccir nuc|ecIicc: c| exIremc 3´ |iLre ce unc ccL|e cccenc ce
DN/. Scn nece:cric: pcr IcnIc mc|écu|c: ccrIc: {enIre 10 y 30 Lc:e:) ce
DN/ ce cccenc :enci||c. E:Ic: mc|écu|c: :cn |c: cebodores o pr|mers ce |c
recccicn. Ccmc :e exp|iccrc mc: cce|cnIe {cpcrIccc 4.2) :cn |c:
ceLcccre: |c: ¢ue vcn c ce|imiIcr e| frcgmenIc c cmp|ificcr.
Nuc|ecIicc: |iLre:: |c: enzimc: DN/ pc|imerc:c: vcn c crecr unc cccenc
ccmp|emenIcric c |c cccenc mc|ce mecicnIe |c inccrpcrccicn ce
nuc|eot|dos c| exIremc 3´ |iLre ce| ceLcccr ¢ue :e hc unicc c |c cccenc



mc|ce. Lc: nuc|ecIicc: :e cnccen en fcrmc ce ce:cxirriLcnuc|ec:icc:
Irifc:fcIc {cNIF:).
E:Ic: cucIrc ccmpcnenIe: :cn |c: e|emenIc: Lc:icc: ¢ue e: nece:cric inccrpcrcr c
|c recccicn pcrc ¢ue :e ccmp|eIe unc FCF.
4.2 8ose teor|co de |o FCk
E| prcce:c ¢ue Iiene |ugcr curcnIe |c FCF :e puece re:umir ce |c :iguienIe fcrmc:
pcrIiencc ce un DN/ mc|ce, unc enzimc pc|imerc:c inccrpcrc nuc|ecIicc:
ccmp|emenIcric: c pcrIir ce |c zcnc ce ccL|e cccenc criginccc pcr |c unicn ce
|c: ceLcccre: c| mc|ce. /hcrc Lien, ¿ccmc Iiene |ugcr e:Ic recccicn° Ccmc
veremc: c ccnIinuccicn |c: ccmLic: ce IempercIurc ccn:IiIuyen |c Lc:e pcrc ¢ue
:e ccmp|eIen |c: pc:c: nece:cric:. E| prcce:c :e ||evc c ccLc en Ire: fc:e::
ce:ncIurc|izccicn, hiLricccicn y e|cngccicn {figurc 2).
En primer |ugcr e: nece:cric ¢ue e| DN/ :e ce:ncIurc|ice, e: cecir, ¢ue |c: cc:
cccenc: ce DN/ :e :epcren. E:Ic primerc fc:e :e ccncce ccmc desnoturo||zoc|on
y :e ||evc c ccLc e|evcncc |c IempercIurc c c|receccr ce º4ºC.
E| :iguienIe pc:c ccn:i:Ie en un ce:cen:c ce |c IempercIurc pcrc permiIir ¢ue |c:
ceLcccre: :e uncn pcr ccmp|emenIcrieccc c| DN/ mc|ce. E:Ic :eguncc fc:e :e
ccncce ccmc h|br|doc|on. IempercIurc: hcLiIuc|e: en e:Ic fc:e c:ci|cn enIre 35 y
ó0ºC {ver cuccrc 1).
Fcr ú|Iimc, en |c fc:e ce e|ongoc|on o extens|on, |c enzimc pc|imerc:c inccrpcrc
nuc|ecIicc: ccmp|emenIcric: c pcrIir ce| exIremc 3´ |iLre ce |c regicn en ¢ue hcn
hiLricccc |c: ceLcccre:. Lc IempercIurc c |c ¢ue :e ||evc c ccLc e:Ic fc:e
cepence ce |c enzimc pc|imerc:c emp|eccc: :i :e uIi|izc G(H pc|imerc:c |c
IempercIurc ce e|cngccicn :ue|e :er ce 72ºC.
E:Ic: Ire: fc:e: ccn:IiIuyen un cic|c ce |c FCF. ¿Cué :e hc cLIenicc Irc: un cic|c ce
FCF° UniccmenIe unc ccpic ce un pe¢uenc frcgmenIc ce| DN/ mc|ce. En e:Ie
primer cic|c, |c: frcgmenIc: generccc: nc Iienen e| mi:mc Icmcnc: |c ccpic ce
cccc unc ce |c: cccenc: :e inicic, c pcrIir ce| exIremc 3´, en e| punIc en e| ¢ue e|
ceLcccr hiLricc ccn e| DN/ mc|ce y Ierminc en e| mcmenIc en e| ¢ue |c enzimc
pc|imerc:c nc e: ccpcz ce cnccir mc: nuc|ecIicc: {e: cecir, ¢ue |c nuevc cccenc
fcrmccc nc Iiene un Icmcnc cefinicc).

Lc e:pecificiccc ce |c FCF cepence, funccmenIc|menIe, ce |c IempercIurc
emp|eccc en |c fc:e ce hiLricccicn y ce |c ccnIiccc ce icne: civc|enIe: ¢ue :e
inccrpcrcn c |c recccicn {ccemc: ce cepencer ce |c :ecuencic ce |c:
ceLcccre:). Fcr unc pcrIe, cucnIc mcycr :ec |c IempercIurc uIi|izccc en |c fc:e ce
hiLricccicn, mc: e:pec|ficc e: |c recccicn. E:Ic :e ceLe c ¢ue c mcycr
IempercIurc mc: cificu|Iccc :e ve |c unicn enIre e| ceLcccr y |c cccenc mc|ce: en
ccncicicne: ce IempercIurc: ce hiLricccicn e|evccc: e| ceLcccr :c|c :e unirc c |c
cccenc mc|ce :i :cn ccmp|emenIcric: en Iccc: :u: nuc|ecIicc:. Fcr cIrc pcrIe, en
un ceIerminccc rcngc, incremenIc: en |c ccncenIrccicn ce MgC|2 hccen ci:minuir
|c e:pecificiccc ce |c recccicn: |c: icne: fcci|iIcn |c unicn ce| ceLcccr c |c cccenc
mc|ce y permiIen |c inccrpcrccicn ce |c: nuc|ecIicc: c |c cccenc crecienIe.
Cuodro 1. Espec|||c|dod de |o reocc|on de FCk.



5' 3'
5'
3'
3'
5'
3'
3'
3' 5'
3' 5'
DN/ mc|ce
DN/ pc|imerc:c
CeLcccre:
G
/
C
I
G
/
C
I
C
I
/
G C I
C
cNIF:
Componentes
3' 5'
1. De:ncIurc|izccicn
A
Foses 8
2. HiLricccicn
3. E|cngccicn
kesu|todo tros e| pr|mer c|c|o C
Unicn ce| ceLcccr
Unicn ce| ceLcccr
Unicn ce| ceLcccr
Unicn ce| ceLcccr

2-34'( I6 /&A'&)&.1(0-9. &)H4&%J1-0( :&K >6 +"%A".&.1&) CJ)-0") A('( ##&L(' (
0(C" 4.( !+/6 M6 2()&) :& #( !+/6 +6 /&)4#1(:" "C1&.-:" 1'() &# A'-%&' 0-0#" :&
(%A#-;-0(0-9. D#( 0(:&.( '&0-N. ;"'%(:( )& '&A'&)&.1( :& 0"#"' %J) 0#('"O6



EnIcnce:, ¿ccmc :e |imiIc e| Icmcnc ce |c: frcgmenIc: generccc:° Lc FCF :e
ccmp|eIc repiIiencc enIre 25 y 35 vece: |c: Ire: fc:e: ce:criIc: previcmenIe, e:
cecir, rec|izcncc enIre 25 y 35 cic|c:. Si :e cnc|izc |c ¢ue :ucece c pcrIir ce| primer
cic|c :e ccmprueLc ¢ue Irc: vcric: cic|c: :e fcrmcn frcgmenIc: cuyc Icmcnc e:Ic
|imiIccc pcr |c: punIc: en |c: ¢ue hcycn hiLricccc |c: ceLcccre: {figurc 3). De
hechc, Ircn:curricc: vcric: cic|c: mc:, |c: frcgmenIc: mcycriIcric: :ercn c¢ue||c:
|imiIccc: en :u: exIremc: pcr |c: ceLcccre:.
Unicn ce| ceLcccr
CICLO 2
Unicn ce| ceLcccr
CICLO 3
3´ 5´
5´ 3´
3´ 5´
5´ 3´
3´ 5´
5´ 3´


5´ 3´
Unicn ce| ceLcccr
Unicn ce| ceLcccr
Unicn ce| ceLcccr
Unicn ce| ceLcccr
Unicn ce| ceLcccr
Unicn ce| ceLcccr
Unicn ce| ceLcccr
Unicn ce| ceLcccr
Unicn ce| ceLcccr
Unicn ce| ceLcccr

2-34'( P6 /&A'&)&.1(0-9. &)H4&%J1-0( :& #") A'":401") :& (%A#-;-0(0-9.
"C1&.-:") &. &# )&34.:" $ 1&'0&' 0-0#" :& 4.( '&(00-9. &. 0(:&.( :& #(
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#() 3&.&'(:() &. &# 0-0#" P6 S& -.:-0(. #") &?1'&%") PT $ UT :& (#34.() :& #()
"'-3-.(#&)6 B.%('0(:() &. '"R" )& A'&)&.1(. #") ;'(3%&.1") A('( #") H4& (%C")
&?1'&%") &)1J. #-%-1(:") A"' #") 0&C(:"'&)6



¿CucnIc: frcgmenIc: :e genercn curcnIe |c recccicn ce FCF° Si nc Ienemc: en
cuenIc e| hechc ce ¢ue hccen fc|Ic c|gunc: cic|c: pcrc ¢ue |c mcycr pcrIe ce |c:
frcgmenIc: e:Ién |imiIccc: pcr |c: ceLcccre:, pccemc: ccn:icercr ¢ue pcr cccc
cic|c ¢ue :e ccmp|eIc :e cup|icc |c ccnIiccc ce frcgmenIc c cmp|ificcr. E: cecir,
¢ue c| finc| ce| prcce:c :e cLIiene cprcximcccmenIe unc ccnIiccc ce frcgmenIc
iguc| c| prccucIc ce |c ccnIiccc inicic| ce DN/ mc|ce pcr 2
.
, :iencc . e| númerc
ce cic|c:. Ccmc ccIc pcrc cprecicr |c ccnIiccc ce ccpic: ¢ue :e genercn, en e|
cic|c 20 :e hc mu|Iip|icccc pcr mc: ce un mi||cn |c ccnIiccc inicic| ce DN/ mc|ce.
Exi:Ien ci:pcniL|e: en lnIerneI grcn ccnIiccc ce cnimccicne: ce |c recccicn ce
FCF ¢ue permiIen vi:uc|izcr ce fcrmc muy grcficc e| prcce:c. Se prcpcrcicncn |c:
en|cce: pcrc c|gunc: ce e||c:: unc :enci||c |3], cIrc en |c ¢ue :e hcce énfc:i: en |c
ccnIiccc ce ccpic: ¢ue :e genercn |4] y cIrc: en |c ¢ue :e ju:Iificc e| Icmcnc finc|
ce |c: ccpic: generccc: |5].
4.3 Como preporor uno FCk
Se hcn ceIc||ccc previcmenIe |c: ccmpcnenIe: Lc:icc: ¢ue e: nece:cric
inccrpcrcr c |c recccicn pcrc ccmp|eIcr unc FCF {cpcrIccc 4.1.). E| e¢uipc en e|
¢ue :e ||evc c ccLc |c recccicn e: e| Iermccic|cccr {figurc 4). ¿Cué cIrc:
mcIeric|e: nece:iIcmc: c nive| prccIicc pcrc prepcrcr |c recccicn° Fue:
nece:iIcremc: uIi|izcr micrcIuLc:, p|ccc: ce FCF, un juegc ce micrcpipeIc: y
punIc: pcrc |c: micrcpipeIc: {figurc 4), ccemc: ce hie|c pcrc mcnIener |c:
reccIivc: c Lcjc IempercIurc.

2-34'( V6 BH4-A" $ %(1&'-(#&) A('( ##&L(' ( 0(C" 4.( !+/K >6 G&'%"0-0#(:"'6 M6
!4.1()Q A#(0( :& !+/Q %-0'"14C") $ R4&3" :& %-0'"A-A&1()6
E: frecuenIe ¢ue unc FCF :e prepcre pcrc cLIener prccucIc ce cmp|ificccicn c
pcrIir ce mc: ce unc mue:Irc, e: cecir, ¢ue :e prepcre mc: ce unc recccicn.
¿Ccmc :e :ue|e IrcLcjcr en e:Ie cc:c° Lc fcrmc hcLiIuc| ce IrcLcjcr ccn:i:Ie en
prepcrcr |c mezc|c ce recccicn {en ccnIiccc :uficienIe pcrc Iccc: |c: mue:Irc:)
¢ue ccnIengc Iccc: |c: ccmpcnenIe: ce |c FCF, c excepcicn ce| DN/ mc|ce. E:Ic
mezc|c :e ci:IriLuye en |c: micrcIuLc: c en |c p|ccc ce FCF y c ccnIinuccicn :e
cncce c cccc recccicn e| DN/ mc|ce.
A
8



Se ceIc||c un ejemp|c ce prepcrccicn ce FCF: |c: vc|úmene: y ccncenIrccicne:
:cn crienIcIivc:, :iencc vc|cre: frecuenIemenIe emp|eccc: en |c prccIicc.
Supcngcmc: ¢ue |c: reccIivc: ce |c FCF :e ccn:ervcn c |c: ccncenIrccicne: ¢ue
:e inciccn en |c IcL|c 1. Supcngcmc: IcmLién ¢ue |c mezc|c ce recccicn ceLe
ccnIener cccc unc ce |c: ccmpcnenIe: c |c: ccncenIrccicne: ¢ue :e reccgen en
|c mi:mc IcL|c. ¿Ccmc ceIermincmc: e| vc|umen c cnccir c |c recccicn ce cccc
unc ce |c: ccmpcnenIe:° Se IrcIc :imp|emenIe ce :cLer ¢ue :e ceLe cump|ir |c
:iguienIe iguc|ccc {ecuccicn 1):
7-.-0-(# X +-.-0-(# W 7;-.(# X +;-.(#
B04(0-9. 56 7 '&A'&)&.1( &# L"#4%&. $ + #( 0".0&.1'(0-9.6

Ccmc ejemp|c, :i |c: ceLcccre: :e ccn:ervcn c unc ccncenIrccicn
{ccncenIrccicn inicic|) ce 10 µM y |c: ¢ueremc: c unc ccncenIrccicn 0,4µM
{ccncenIrccicn finc|), :cLiencc ¢ue e| vc|umen IcIc| ce |c recccicn ce 25 µ|
{vc|umen finc|), pccremc: cp|iccr |c ecuccicn 1 pcrc ceIermincr e| vc|umen ¢ue
e: nece:cric Icmcr ce| IuLc criginc| {vc|umen inicic|). IrcLcjcncc ce e:Ic fcrmc :e
cc|cu|cn |c: vc|úmene: c cnccir ce cccc unc ce |c: ccmpcnenIe: {IcL|c 1).
G(C#( 56 +".0&.1'(0-".&) :& (#%(0&.(%-&.1"Q 0".0&.1'(0-".&) &%A#&(:() &. #(
'&(00-9. $ L"#4%&. ( (X(:-' :& #") A'-.0-A(#&) 0"%A".&.1&) :& 4.( !+/
0".)-:&'(.:" 4. L"#4%&. 1"1(# :& IU µ|6
Componente
Concentroc|on o |o que
se conservo
Concentroc|on ||no| en
|o reocc|on
Vo|umen o
oñod|r [µ µµ µ|}
Icmpcn 10X 1X 2,5
MgC|2 25 mM 1 mM 1
CeLcccr 10 µM 0,4µM 1
cNIFS 10 mM 0,4 mM 1
G(H 5 uniccce:/µ| 1 uniccc/25 µ| 0,2
Hc:Ic ccmp|eIcr e| vc|umen finc| ce 25 µ| fc|Ic ccn:icercr |c ccnIiccc ce DN/ c
cnccir. EnIre 40 y 100 ng ce DN/ {cucncc :e IrcIc ce DN/ IcIc| ce p|cnIc) :cn
vc|cre: hcLiIuc|e:. E: frecuenIe prepcrcr e| DN/ ce fcrmc ¢ue :e inccrpcre Iccc e|
DN/ nece:cric cncciencc 1 µ| c |c recccicn. E| re:Ic hc:Ic e| vc|umen IcIc| :e
ccmp|eIcr|c ccn cguc ce:Ii|ccc.
En cuc|¢uier cc:c, ccmc :e hc cichc previcmenIe, :e prepcrc en primer |ugcr |c
mezc|c, :in e| DN/, en ccnIiccc :uficienIe pcrc Iccc: |c: mue:Irc: c inc|uir en e|
cnc|i:i:. Fcr IcnIc, :e mu|Iip|iccr|cn |c: vc|cre: cLIenicc: en |c IcL|c 1 pcrc cccc
ccmpcnenIe {ccemc: ce| cguc ce:Ii|ccc) pcr e| númerc IcIc| ce mue:Irc: c
cnc|izcr {inc|uyencc e| ccnIrc| negcIivc, ver cuccrc 2). Un vez prepcrccc e:Ic
mezc|c, :e ci:IriLuye en micrcIuLc: c en p|ccc ce FCF: :i ce DN/ :e vc c cnccir 1
µ| pcr recccicn, :e ci:IriLuircn 24 µ| ce mezc|c pcr recccicn. / ccnIinuccicn :e
cncce e| DN/ c cccc mue:Irc, y e| mi:mc vc|umen ce cguc en e| ccnIrc|
negcIivc. Lc: ccmpcnenIe: y |c mezc|c ce recccicn :e mcnIencrcn en hie|c
curcnIe e| prcce:c, ccn e| fin ce eviIcr :u cegrccccicn.




Unc vez prepcrccc: |c: IuLc: ce recccicn :e inIrccucen en e| Iermccic|cccr.
Ccmc yc :cLemc:, |c FCF :e ccmp|eIc grccic: c |c repeIicicn ce 25-35 cic|c: en
|c: ¢ue :e :ucecen |c: Ire: fc:e: en ¢ue :e mccificc |c IempercIurc. FrevicmenIe c
|c: cic|c: ce |c FCF :e ||evc c ccLc unc ce:ncIurc|izccicn inicic| ce c|receccr ce
cincc minuIc:: ccemc:, |c recccicn :e ccmp|eIc ccn unc e|cngccicn finc| ce
cprcximcccmenIe 10 minuIc: {figurc 5).

2-34'( U6 !&';-# 1N'%-0" 1@A-0" :& 4.( !+/6 E") 1-&%A") :& 0(:( ;()& )".
"'-&.1(1-L")6 E( 1&%A&'(14'( :& ,-C'-:(0-9. A4&:& L('-(' &. ;4.0-9. :& #(
&)A&0-;-0-:(: :& #( '&(00-9.6
¿En ¢ué ccn:i:Ie e| ccnIrc| negcIivc en unc FCF° Se IrcIc ce unc mue:Irc en |c
¢ue :e inc|uyen Iccc: |c: ccmpcnenIe: ce |c recccicn, excepIc e| DN/.
¿Cué uIi|iccc Iiene e| ccnIrc| negcIivc en unc FCF° Lc: ccmpcnenIe: ce |c FCF :e
c|mccencn c -20ºC c unc ccncenIrccicn :upericr c |c ¢ue |uegc :e uIi|izcn en |c
recccicn. De| prccucIc c|mccenccc :e uIi|izc unc ccnIiccc ceIerminccc cccc vez
¢ue :e prepcrc unc FCF, ce mcnerc ¢ue :i un ccmpcnenIe nc :e cgcIc, e|
remcnenIe :e uIi|izc pcrc cIrc recccicn. En ccn:ecuencic, e: pc:iL|e ¢ue c| Icmcr
unc c||cucIc ce| criginc| :e prccuzccn ccnIcminccicne: ccn DN/ prccecenIe ce
c|gunc mue:Irc. IcmLién e: pc:iL|e ¢ue curcnIe e| prcce:c ce prepcrccicn ce |c
recccicn, pcr un errcr ce mcnejc, :e prccuzcc ccnIcminccicn cruzccc enIre
mue:Irc:. E| ccnIrc| negcIivc :e uIi|izc pcrc ccmprcLcr ¢ue ningunc ce |c:
ccmpcnenIe: ce |c recccicn e:Ic ccnIcminccc ccn DN/ ce cIrc prccecencic y
¢ue nc :e hcn prccucicc errcre: ce mcnejc ¢ue hcycn prcvccccc |c
ccnIcminccicn cruzccc enIre mue:Irc:.
¿Se ceIecIcrc |c ccnIcminccicn cun¢ue hcyc :icc prccucicc pcr pccc DN/° En
principic, ccn pccc ccnIiccc ce DN/ mc|ce :e cLIencrc prccucIc ce
cmp|ificccicn, yc ¢ue |c FCF e: muy :en:iL|e: cccc ¢ue en cccc cic|c :e cup|icc |c
ccnIiccc ce DN/ ccrre:pcncienIe c| frcgmenIc c cmp|ificcr, cun¢ue exi:Ic pccc
mc|ce inicic| :e genercrc |c ccnIiccc :uficienIe pcrc :er vi:uc|izccc.
Cuodro 2. E| contro| negot|vo de uno FCk.
Desnoturo||zoc|on
|n|c|o|
E|ongoc|on
||no|
25 c|c|os
H|br|doc|on
E|ongoc|on
Conservoc|on
100ºC
º0ºC
80ºC
70ºC
ó0ºC
50ºC
40ºC
30ºC
20ºC
10ºC
30''
30''
1'
Desnoturo||zoc|on



5 C|erre
Lc recccicn en cccenc ce |c pc|imerc:c c FCF e: unc Iécnicc funccmenIc| pcrc
|c mcycr pcrIe ce |c: cp|icccicne: ce |c Lic|cg|c mc|ecu|cr. Se hc pre:enIccc |c
Lc:e Iecricc y prccIicc ce |c FCF. Exi:Ien muchc: vcricnIe: ce |c FCF
ccnvencicnc|, ccmc :cn |c FCF en Iiempc rec| c FCF cucnIiIcIivc |ó] {¢ue permiIe
cucnIificcr |c ccnIiccc ce prccucIc cmp|ificccc) c |c FCF pcr Ircn:cripcicn inver:c
|7] {mecicnIe |c cuc| :e cLIiene unc ccpic ce DN/ ccmp|emenIcric, DN/c,
uIi|izcncc ccmc mc|ce ccicc riLcnuc|eicc, FN/). Exi:Ie grcn ccnIiccc ce
infcrmccicn refericc IcnIc c |c FCF ccnvencicnc| ccmc c :u: vcricnIe: |8,º].
ó 8|b||ogro|ío
|1] FermenIc:. CcIc|cgc ce mcrccccre: ce pe:c: mc|ecu|cre: pcrc e|ecIrcfcre:i:
ce DN/: LcmLcc DN/ mcrker:. Di:pcniL|e en:
hIIp://www.fermenIc:.ccm/en/prccucI:/c||/cnc-e|ecIrcphcre:i:/|cmLcc-cnc-
mcrker:/:m010-|cmLcc-cnc-hinciii
|2] Mu||i:, K.8. 1ºº3. Ccnferencic ccn mcIivc ce |c recepcicn ce| Fremic NcLe|.
Di:pcniL|e en: hIIp://ncLe|prize.crg/ncLe|_prize:/chemi:Iry/|curecIe:/1ºº3/mu||i:-
|ecIure.hIm|
|3] McGrcw Hi||. /nimccicn ce| prcce:c ce FCF. Di:pcniL|e en:
hIIp://higherec.mcgrcw-hi||.ccm/c|c/c|/120078/micrc15.:wf
|4] Sccne|i:. /nimccicn ce| prcce:c ce FCF. Di:pcniL|e en:
hIIp://www.:ccne|i:.ccm/weLpcge:.c:px°rlD=ó7º
|5] Ihe Hec|Ih New:. /nimccicn ce| prcce:c ce FCF. Di:pcniL|e en:
hIIp://www.Ihehec|Ihnew:.crg/new:/0ó/08/02/pcr.hIm|
|ó] Higuchi, F.: Fcck|er, C.: Dc||inger, G.: WcI:cn, F. 1ºº3. KineIic FCF cnc|y:i:: rec|-
Iime mcniIcring cf DN/ cmp|ificcIicn reccIicn:. 8ic/Iechnc|cgy 11: 102ó-1030.
|7] Simp:cn, C.G.: SiniLc|ci, F.: 8rcwn, J.W.S. 1ºº2. Fcpic cnc|y:i: cf p|cnI gene
expre::icn Ly c ncve| rever:e Ircn:cripIc:e-FCF meIhcc. F|cnI Jcurnc| 2: 835-83ó.
|8] Ihe FCF Encyc|cpecic. Di:pcniL|e en: hIIp://www.pcr-encyc|cpecic.ccm/

|º] McFher:cn, M.J.: Cuirke, F.: Icy|cr G.F. 1ºº1. FCF: / prccIicc| cpprccch. Cxfcrc
Univer:iIy Fre::, E:Iccc: Unicc:.