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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE MEDICINA
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS MÉDICAS
SECCION – BIOQUÍMICA

FACULTAD DE ENFERMERIA- UNT
AÑO ACADEMICO 2012
TRUJILLO – PERU
2012

DATOS INFORMATIVOS REFERENCIALES

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DATOS GENERALES
EXPERIENCIA CURRICULAR
FACULTAD
DEPARTAMENTO
JEFA DEL DEPARTAMENTO
SECCION
COORDINADOR DEL CURSO
AÑO DE ESTUDIO
SEMESTRE
EXTENSIÓN HORARIA
CREDITOS:
AÑO ACADEMICO

: BIOQUÍMICA
: ENFERMERÍA
: CIENCIAS BASICAS MEDICAS
: Dra. MARIA SOLEDAD AYALA RAVELLO
: BIOQUÍMICA
: Msc.. WALTER OBESO TERRONES
: 1 er AÑO
: SEGUNDO SEMESTRE
: INICIO: 2º de Agosto de 2012
TERMINO: 15 de Diciembre de 20123
HORAS TEORICAS: 02
HORAS DE PRACTICAS: 02
: 2012

PERSONAL DOCENTE QUE DESARROLLA LA ASIGNATURA
Msc. WALTER OBESO TERRONES
Dr. . CARLOS ARANCIBIA ARROYO
Dr. JORGE HUAMAN SAAVEDRA
Msc.. ALFREDO LARIOS CANTO
Dr JORGE PLASENCIA ALVAREZ
Dra. MARIA E. REYES BELTRAN
Dr HÉCTOR RODRÍGUEZ BARBOZA
Dr. .JUAN VALLADOLID ALZAMORA

: Prof. Asociado Tiempo Completo
: Prof. Auxiliar Tiempo Completo
: Prof. Principal Tiempo Parcial
: Prof. Auxiliar Tiempo Parcial
: Prof. Auxiliar Tiempo Completo
: Prof. Principal Dedicación Exclusiva
: Prof. Auxiliar Tiempo Parcial
: Prof. Principal Tiempo Parcial

PERSONAL ADMINISTRATIVO DE LA SECCION
Sr. FREDDY VENTURA NOMBERTO
Sra. DALILA SOTO FLORES
Sr. ADRIAN VALVERDE CONTRERAS

: Químico Farmacéutico
: Secretaria del Departamento
: Técnico de Laboratorio

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I FINALIDAD DE LAS PRACTICAS
 Las reuniones de Laboratorio tienen por finalidad realizar experimentos que demuestren
los aspectos teóricos abordados en los diálogos, dando al estudiante la oportunidad de
comprobar directamente los fenómenos y procesos que estudia.
 Las reuniones de Laboratorio son trabajos de experimentación de corta duración 2 a 3
horas como máximo. Cada grupo de práctica contará con las asesorías del Profesor
instructor para resolver y aclarar dificultades en el trabajo, induciendo al estudiante a
buscar explicaciones a los resultados y a su estudio.
 Cada alumno debe disponer de una guía de procedimientos y métodos para la práctica
programada, la misma que será analizada previamente para tener una idea clara de los
procedimientos y objetivos que se persigue.
 Las prácticas programadas serán desarrolladas integramente por los alumnos en sub
grupos de dos o tres, quienes en conjunto son responsables de los resultados del trabajo
experimental fijando previamente el problema y objetivos a alcanzar.
 Al finalizar la práctica, los estudiantes compararán sus resultados, harán la interpretación
de los mismos y establecerán las conclusiones respectivas.

II RECOMENDACIONES PARA LA CONDUCCION
DE LAS PRACTICAS
 La asistencia a las reuniones de laboratorio es obligatoria, a la hora exacta, el día
correspondiente y a la mesa de trabajo asignada. El tiempo de tolerancia para tener
derecho de ingresar a la sala de práctica es de 10 minutos como máximo.
 El uso del mandil o guardapolvo es obligatorio durante su permanencia en el laboratorio,
no se permitirá el ingreso del estudiante que no porte este medio de protección.
 Cada alumno debe llevar consigo la guía o manual de práctica a cada reunión de
laboratorio.
 El alumno debe saber los aspectos teóricos de la práctica a realizarse, para entender los
resultados obtenidos al término de ésta..
 Constatar el número, tipo y estado de conservación del material que utilizará en la
práctica, al inicio y al término de la misma.

 Al término de la reunión del laboratorio cada alumno deberá presentar un informe de los resultados y conclusiones de la práctica.  Debe usar una pipeta para cada reactivo. Queda totalmente prohibido el intercambio de material de trabajo con otras mesas. para su evaluación respectiva.  Identificar el tipo de pipeta a utilizar y tener mucho cuidado en agregar en forma precisa las cantidades de reactivos indicados. por lo que recomienda manipular con el debido cuidado los materiales y reactivos para evitar accidentes. quien se responsabilizará del cuidado del material entregado para la conducción de la práctica. por ningún motivo utilizará la misma pipeta para dos o más reactivos. malogre o rompa durante la práctica el estudiante está obligado a reponerlo a la brevedad posible.  Cada mesa de trabajo tendrá el material y reactivos necesarios para realizar la práctica programada. dirigirse al profesor asesor de la misma para dar solución al problema.) para la normal conducción de la práctica. orina.  Cada mesa de trabajo elegirá un representante. .4  ADVERTENCIA: Algunos reactivos son tóxicos o pueden provocar quemadura.  Observar estrictamente el orden y secuencia de los reactivos utilizados en la ejecución de cada sistema en concordancia con las instrucciones dadas en su guía de práctica.  Con la debida anticipación se solicitarán los requerimientos de algún material en particular de necesidad para la práctica.  En caso de faltar material o reactivos o antes cualquier otra dificultad que pueda presentarse en el transcurso de la práctica. la pipeta usada deberá ser lavada previamente con abundante agua corriente y luego enjuagada con agua destilada y secada antes de ser nuevamente utilizada. la asistencia de los alumnos a una hora determinada para dar muestras (sangre.  Todo material que se pierda. Si no hubiese suficiente número de pipetas. etc.

Estos factores se investigan teniendo en cuenta la velocidad de la reacción enzimática sobre un sustrato adecuado y en determinadas condiciones. concentración de enzima. concentración de enzima. La finalidad de este experimento es observar el efecto de iones activadores. La determinación de la actividad catalítica de una enzima en un medio biológico involucra dos aspectos. de acuerdo a las especificaciones del instructivo.5 PRACTICA N° 01 FACTORES FÍSICOS QUÍMICOS QUE MODIFICAN LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES ENZIMÁTICAS. Verificando el sustrato no transformado (sustrato residual) después de un tiempo determinado de incubación en condiciones específicas de pH y temperatura. retardando o impidiendo su actividad. Verificando los productos liberados después de una tiempo determinado de incubación en condiciones específicas de pH y temperatura. Tomando una determinada enzima como patrón es posible tener una idea más o menos clara de la influencia de los factores (tiempo. b. PRIMERA UNIDAD: 1. de tal manera que la investigación del factor variable no se ve afectada por la variación que pudieran sufrir los otros. concentración de sustrato. PH. presentan características comunes en cuanto a los factores que intervienen. como se comprenderá. OBJETIVOS Armado el sistema amilasa salival + almidón. 2. independientemente del tipo de reacción que catalizan. varía en forma característica para cada enzima en particular.) sobre la serie infinita de enzimas que se conoce. Esto permite que las reacciones químicas dentro de las células ocurran rápidamente a través de vías bien definidas. uno cualitativo y otro cuantitativo. etc. Este patrón general. iones. tomando como ejemplo la hidrólisis enzimática del almidón y evaluando las variaciones del sustrato transformado y de los productos de la reacción enzimática. Para estudiar cada uno de estos factores es necesario que los otros permanezcan constantes. pH. temperatura. concentración de sustrato. tiempo y temperatura sobre la velocidad de reacción enzimática. CONCENTRACIONES DE ENZIMAS Y DE SUSTRATO. En general todas las enzimas. INTRODUCCION Las enzimas pueden ser descritas como catalizadores complejos de origen biológico que tienen un alto grado de especificidad y eficiencia. TEMPERATURA E IONES. pH. los participantes serán capaces de demostrar la actividad enzimática y las modificaciones de las reacciones enzimáticas por acción de diversos agentes físicos químicos a través de la determinación del sustrato residual (solución yodada) y de los . En general la actividad de cualquier sistema enzimático puede ser demostrado de dos maneras: a.

6 Buffer borato 0.0 Buffer acetato 0.6 0. y tomar el tiempo. (Tubos del I al VIII al baño agua a 37°C y el tubo VIII al baño agua helada a 0°C – 4°C. de incubación. de incubación.6 ____________________________________________________________________________________ Computar el tiempo desde el momento en que el preparado enzimático fue agregado a cada tubo. por 20 minutos Los controles de la actividad enzimática:  Por el sustrato residual.. cuyos cambios de color serán valorados de acuerdo a un tubo patrón. Armar el siguiente sistema: ______________________________________________________________________ COMPONENTES (ml)/TUBOS I II III IV V VI VII VIII ______________________________________________________________________ Soluc.05 N  Solución yodada (yoduro de potasio + yodato de k)  Solución cúprica alcalina  Solución fosfomolibdica ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES.0 Solución de cloruro de sodio al 0.2 0.6 0.  Por los productos formados.2. REACTIVOS A UTILIZAR Solución de almidón al 1% Buffer fosfato 0. AGREGAR (ml) / TUBO I II II IV V VI VII VIII ____________________________________________________________________________________ Preparado enzimático 0 0. Mezclar y continuar la incubación.4 1 2 2 2 2. para el equilibrio de la temperatura.6 Buffer acetato 0. a los 20 min.4 1.6 0.. se realizará en toda la serie de tubos.6 3.6 0.1 M 5 Buffer fosfato 0.1.4 1. se realizará solamente en los tubos III y V.0 Buffer borato 0. 3. De acuerdo a los sistemas que a continuación se presentan: 4. Agregar el preparado enzimático a los tubos del II al VIII.2% 1.1 M pH 4.6 productos (solución cúprica alcalina y solución fosfomolibdica).1 M pH 9.4 2.4 1. El tubo VIII mantenerlo en agua helada entre 0°C y 4°C desde el inicio hasta el final.1 M pH 6. de Almidón 1% 1 1 2 1 1 1 1 1. del I al VIII.4 Agua destilada 2.4 1.25%  Acido clorhídrico 0. Procedimiento 4. de la siguiente manera: .1 M 5 5 5 5 5 5.  Amilasa salival dializada al 0.0 _____________________________________________________________________      4. a los 20 min.1 M 5 Solución C1 Na al 0.4 1. según se indica en el cuadro inferior sin sacarlo de la incubación.4 1.2% Mezclar y colocar los tubos del I al VII al baño de agua a 37°C por 5 min. CONTROL DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA POR EL SUSTRATO RESIDUAL El control del sustrato no transformado se realiza por la reacción del yodo.6 0.

5 ml. sacar los tubos del baño maría y luego armar una serie paralela de tubos marcados del I al VIII.5 0.5 0.5 0. de incubación.3.5 0.4.5 0.0 Solución cúprica alcalina 1.5 0. Esta determinación se hará en los tubos III y V del incubado de los 20 min. azul claro.0 1. del incubado de su correspondiente tubo de la siguiente manera: TUBOS PARA CONTROL COMPONENTES (ml) I II III IV V VI VII VIII ___________________________________________________________________ Incubado correspondiente anterior 5.0 5. valorando los cambios de coloración (azul oscuro. 0. sin color) en cuadro final. CUADRO PARA LA VALORACION FINAL DE LA VELOCIDAD DE LA REACCION ENZIMATICA POR EL SUSTRATO RESIDUAL (cambio de color) a los 20 min.5 0. agregando a cada tubo marcado. I II III IV V VI VII VII .0 5.5 0.5 0.0 __________________________________________________________________ Mezclar y poner al baño maría hirviendo por 8 min.0 5.0 5.0 5.0 5.5 0. Cumplido los 8 min. ___________________________________________________________________ COMPONENTES (ml) /TUBOS III V ___________________________________________________________________ Solución fosfomolibdica 1. maltosa).5 ___________________________________________________________________ Observar y anotar los resultados de las reacciones de cada uno de los tubos.5 0. 4. CONTROL DE ACTIVIDAD ENZIMATICA POR LOS PRODUCTOS FORMADOS El control de los productos formados se hará en base a la actividad reductora de estos (glucosa.5 0.0 ___________________________________________________________________ Observar y anotar los resultados de las reacciones de cada uno de los tubos. sacar los tubos y enfriar con agua corriente y agregar.7 Cumplido los 20 min.0 1.5 0.0 1.0 Agua destilada 5. claro.0 5. Armar el siguiente esquema: ___________________________________________________________________ COMPONENTES (ml) /TUBOS III V ___________________________________________________________________ Incubado correspondiente anterior 5. valorando los cambios de coloración (azul oscuro.5 HCL 0.0 5.05 N 5.0 Solución yodada 0.1 III y V para nuevo III y V 1. sin color) en el cuadro final. 4.5 0.1 (sistema) Para cada tubo 0.

Explique los resultados obtenidos del cuadro 4. encontrándosele de modo fundamental en una subestructura celular en donde la energía derivada de las oxidaciones es “capturada” en la forma del intermediario macroérgico ATP.8 4. INTRODUCCION Las enzimas del óxido reducción tienen una distribución característica intracelularmente. III V 5. . 6. La finalidad del presente trabajo es objetivizar la distribución intracelular de las enzimas de óxido – reducción usando los indicadores redox 2. EVALUACION 5. 2.4.1. el participante o grupo de participantes serán capaces de determinar la distribución de las enzimas de óxido reducción.3. 4.1. identifique en cada uno de los tubos el factor físico químico que interviene modificando la velocidad enzimática. ¿Cómo demostró usted si se ha producido o no reacción enzimática en el experimento realizado? 2. Diga ¿Cuáles son los componentes estructurales del almidón?.5.6 diclorofenolindofenol y p-fenilendiamina y los componentes celulares de un homogeneizado de hígado de rata obtenidos por configuración diferencial mediante el método de Scheinder y Col.5. A los 20 min. OBJETIVOS 2. 5. PRIMERA UNIDAD: 1.2 y de la solución cúprica alcalina + solución fosfomolibdica en el sistema 4. Explique que finalidad tiene la utilización de la solución yodada en el sistema 4. ¿Cómo objetivó usted los productos de la reacción enzimática en el experimento realizado? 3. CUESTIONARIO 1. En relación al sistema 4. Explique los resultados del cuadro 4. 8. 7. Diga ¿A que se llama amilasa salival dializada y cuál es su acción sobre el almidón?. CUADRO PARA LA VALORACION FINAL DE LA VELOCIDAD DE LA REACCION EZIMATICA POR PRODUCTOS FORMADOS (CAMBIO DE COLOR). DEMOSTRACIÓN DE LA DISTRIBUCIÓN INTRACELULAR DE LAS ENMZIMAS DE ÓXIDO – REDUCCIÓN BIOLÓGICA.1 Dadas varias fracciones celulares de un homogenizado de hígado de rata en un sistema bufferado y siguiendo las indicaciones del instructivo.

 Fracción Microsomal soluble del homogeneizado.2 0.0 p.5 Homogeneizado total 0. Al identificar los cambios de coloración del indicador redox pfenilendiamina.0 1.5 2-6 diclorofenolindofenol 1.0 1.5 .5 Fracción microsomal soluble 0. Dejar en reposo a temperatura ambiente.154M)  Fracción nuclear del homogeneizado.5 0.0 1.1 M pH 7.5 1.5 0.  Fracción mitrocondrial del homogeneizado.4 1. Armar el siguiente sistema usando 2 – 6 diclorofenolindofenol: __________________________________________________________________ COMPONENTES (ml) /TUBOS 1 2 3 4 5 ___________________________________________________________________ Buffer fosfato 0.0 1.2 Después de logrado el objetivo 3.02%  Succinato de sodio 0.5 Fracción mitocondrial 0.Fenilendiamina 1% 0.fenilendiamina 1%  Homogeneizado total del hígado de rata en sucrosa 0.1.6 diclorofenolindofenol en los siguientes tubos.2.1.1 M.1 2. 3. Armar el siguiente sistema usando p – fenilendiamina. en los diferentes tubos.5 0.5 0.25 M (y/o KCI 0. 2.5 Fracción nuclear 0.0 1. .2 Al identificar los cambios de coloración del indicador redox 2.5 Fracción microsomal soluble 0.2 Fracción nuclear 0.9 2.0 0.1.1 M 0. Observar constantemente y anotar los cambios de color del indicador para interpretar los resultados. Fracción mitocondrial 0. REACTIVOS A UTILIZAR  Buffer fosfato de sodio 0.5 0.5 _________________________________________________________________ Mezclar.2 0.1 M pH 7.5 0.0 Succinato de sodio 0.0 1.1. 4.  P.5 __________________________________________________________________ Mezclar.5 0.1 M pH 7.4  2 – 6 diclorofenoindofenol 0. 4. 2 6 diclorofenolindofenol y p – fenilendiamina.0 1. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES: Procedimiento 4.2 0.2 0.4 1. ___________________________________________________________________ COMPONENTES (ml) /TUBOS 1 2 3 4 5 ________________________________________________________________________________ Buffer fosfato 0. Dejar en reposo a temperatura ambiente. el participante será capaz de graficar en una cadena de oxido reducción biológica el lugar y acción de los indicadores redox.5 Homogeneizado total 0.

2. La finalidad de la práctica es cuantificar la glicemia por el método de Glucosa Oxidasa en personas normales . 2. CUESTIONARIO 1. ¿Cómo interpreta usted los pasos del estado incoloro a coloreado del indicador redox p – fenilendiamina en el sistema bufferado 5. sino porque las variaciones de ella son expresiones de diversos estados patológicos que se deben investigar y diagnóstica para su tratamiento. podemos señalar que la concentración de glucosa en sangre depende del balance entre el aporte y el gasto de glucosa en el organismo. En general.6 diclorofenolindofenol y p – fenilendiamina. El conocimiento de la glicemia es importante no sólo porque nos permite tener una idea integral del mecanismo de homeostasis metabólica existente.1?. INTRODUCCION DETERMINACION DE GLUCOSA EN SANGRE (GLICEMIA) Los valores normales de glucosa en sangre son variables de acuerdo al método utilizado. EVALUACION 5. 3. por ciento.2.1 Teniendo como material biológico muestra de sangre total extraída por venipuntura de la flexura del codo de adultos normales. señale las fracciones celulares que contienen las enzimas de óxido en los sistemas 5. producción endógena de glucosa así como la utilización y excreción de la misma. Así tenemos que. con el método de la glucosa oxidasa la concentración varía 60 – 110 mg. por ciento.1 y 5. varía entre los 80 – 120 mg. OBJETIVOS 2. El aporte depende de la producción o ingreso y el gasto depende de la utilización y excreción de la misma. contribuyen a mantener constante la concentración de glucosa en sangre. el participante o grupo . Diversos factores que inciden sobre la absorción.1.10 Observar constantemente y anotar los cambios de color del indicador para interpretar los resultados. ¿Cómo interpreta usted los cambios de coloración del indicador redox 2-6 diclorofenolindofenol en el sistema bufferado 5. 5. De acuerdo al experimento realizado.2 ?. según el método de Follin-Wu. Grafique en una cadena de óxido reducción biológica la acción de los indicadores redox 2. PRACTICA N° 02 SEGUNDA UNIDAD: CUANTIFICACIÓN DE GLUCOSA EN SANGRE (GLICEMIA) 1.

O. dado que la glicemia varía con la alimentación. Cálculo de la concentración de glucosa en sangre: FR x D. 4. 3. de glucosa % Glucosa (mg/dl)= Factor x(Absorbancia desconocido – Blanco) . el participante o grupo de participantes podrán clasificar los resultados obtenidos. para corregir las lecturas de los problemas).2 Como los valores de glicemia obtenidos..0 1. REACTIVOS A UTILIZAR Reactivo enzimático y Reactivo Standard (1mg de glucosa /dl) 4.2 Se centrifugará la muestra de sangre para obtener el suero 4.3 Armar el siguiente sistema: ______________________________________________________ COMPONENTES (ml) Blanco Standard Desconocido ______________________________________________________ Muestra (ml) --------0.0 1. restar la lectura del tubo I o blanco (en todo caso de valoración cuantitativa se emplea el denominado blanco. El color resultante es estable por a lo menos treinta minutos.0 ______________________________________________________ Mezclar e incubar 10 minutos a 37oc o 20 minutos a temperatura ambiente (20 a 25o c). Cálculo del Factor (F) 100 F = Densidad Optica Estándar(Absorbancia Standard) 3.1 Obtención de la muestra de sangre: se extraen 5ml. de sangre de la flexura del codo.. leer las absorbancias llevando a cero el espectrofotómetro con el blanco de reactivo. Solución standard. 4.01 Standard (ml) ---0. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES 4. De cada una de las lecturas de los tubos Standard y Desconocido. de los problemas = mg.4 Cálculos: 1. con Jeringa de 10 ml.11 de participantes serán capaces de cuantificar la glicemia por el método de Glucosa Oxidasa de acuerdo a las especificaciones dadas.01 ----Reactivo 1. 2. 2. y aguja hipodérmica N° 20.Es aquella que tiene una concentración conocida de una determinada sustancia y que sirve de referencia para encontrar los valores de esa misma sustancia en una muestra problema en la que no se conoce su concentración y se requiere cuantificarla. El sujeto debe estar en ayuno de por lo menos 8 horas. informando verbalmente o por escrito aquellos casos considerados normales .

3. según los métodos de FollinWu y la glucosa oxidasa?. Se explica así que la falta de insulina determina una hiperglicemia que es el signo fundamental del cuadro denominado diabetes. como especímenes biológicos de experimentación. el . La insulina ejerce profundos efectos sobre el metabolismo de la glucosa y otros nutrientes. Como explicaría usted este fenómeno. La secreción de insulina parece estar condicionada en forma importante por el nivel de glicemia. EVALUACION 5. ¿Por qué son diferentes los valores de glicemia.12 5.de manera que cada vez que se eleva la glicemia. cuya sensibilidad está regida en medida importante por el balance entre la insulina por un lado y las hormonas suprarrenales y de adenohipófisis por el otro. de modo que el mantenimiento de la glicemia en niveles normales depende del equilibrio entre la producción y la utilización de la glucosa sanguínea. OBJETIVOS 2. una excesiva excreción de glucosa por la orina (glucosuria) y un reducido nivel de glucógeno en el hígado. ¿Cómo esperaría encontrar los valores de la glicemia deseada en la sangre venosa y en la sangre arterial?. Los mecanismos reguladores son nerviosos y endocrinos y es muy posible que los primeros actúan en realidad mediante modificaciones en la entrega de hormonas por las glándulas de secreción interna. 2. se produce más insulina que tiende a aminorarla. REGULACIÓN HORMONAL DE LA GLUCOSA SANGUÍNEA: EFECTO DE LA INSULINA 1. La administración de insulina va seguida de descenso de la glicemia (hipoglicemia) cuya magnitud depende de la dosis administrada: el efecto se debe fundamentalmente a que la hormona favorece la formación de glucógeno en el hígado y en el músculo. El efecto más importante de una deficiencia insulínica es el de un nivel sanguíneo de glucosa extremadamente elevado (hiperglicemia). a la vez que acelera la oxidación de glucosa en diferentes tejidos.1 CUESTIONARIO 1. La insulina también favorece la conversión de los hidratos de carbono en ácidos grasos y por otro lado inhibe la gluconeogénesis a partir de los aminoácidos. Esta hormona es producida por las células beta de los islotes de Langerhans del páncreas y es secretado en respuesta directa al incremento de glucosa en la sangre. INTRODUCCION Para poder afrontar con eficiencia las variaciones más o menos bruscas que pueden afectar a la glucosa sanguínea.1 Utilizando conejos. 2. 4. el organismo dispone de mecanismos reguladores que de diferentes maneras aceleran o retardan la entrega o el retiro de glucosa desde o hacia los tejidos. La finalidad de este experimento es dosar la glucosa en sangre para determinar la variación de glicemia como consecuencia de administración de insulina. ¿Qué variaciones fisiológicas de la glicemia puede usted señalar?. ¿Cuál fue el rango o el promedio de glicemia considerada normal en su mesa?.

01 -Muestra a los 60 min. el participante o grupo de participantes estarán en capacidad de establecer comparaciones entre las curvas de glicemia. después de la administración de insulina y la curva de glicemia después de la administración de adrenalina. PROCEDIMIENTO EFECTO DE LA INSULINA SOBRE LA GLICEMIA 4.01 ---Muestra a los 15 min. 4. Inyectar por vía subcutánea la cantidad calculada de insulina. que facilita la medida de la dosis. 3. 4. con insulina -0. 2. Con cada una de las citadas muestras realizar la determinación de glucosa según el método enzimático de Glucosa Oxidasa. con insulina ---0. de peso corporal bien alimentados  Solución de insulina cristalizada (LILLY): I . El color resultante es estable por a lo menos treinta minutos.13 participante o grupo de participantes serán capaces de graficar las curvas de glicemia. Extraer una primera muestra de sangre por punción cardíaca y transferirla a un frasquito con oxalato.4 DETERMINACION DE GLUCOSA EN SANGRE DE LOS ANIMALES TRATADOS CON INSULINA. Luego extraer muestra de sangre a los 15¨.2 Después de desarrollar el instructivo. .01 --Muestra a los 30 min. 1. Servirá para establecer los valores basales de glicemia.2 Dosis de la solución de insulina cristalina lilly (I Unidad por ml) inyectar I unidad por kilogramo de peso corporal. 3.5 cc ó 5.1 Determinar con exactitud el peso de los conejos sometidos a ayuno con la finalidad de calcular la cantidad de insulina a inyectar. REACTIVOS A UTILIZAR  Conejos adultos de más de 2kg. lo que hace un total de tres muestras en una hora. leer las absorbancias llevando a cero el espectrofotómetro con el blanco de reactivo. con insulina --0.0 cc. Utilizar una jeringa hipodérmica de 2.01 Reactivo 1 1 1 1 1 ____________________________________________________________________ Mezclar e incubar 10 minutos a 37oc o 20 minutos a temperatura ambiente (20 a 25o c). Armar el siguiente sistema: ____________________________________________________________________ COMPONENTES (ml.  Jeringas hipodérmicas de 2. después de la administración parenteral de insulina de acuerdo a las especificaciones dadas en el instructivo.Unidad por ml.3 EXTRACCION DE LAS MUESTRAS DE SANGRE Y ADMINISTRACION DE INSULINA: 1. 2. 4. 4.  Reactivo enzimático  Reactivo Standard (1mg de glucosa /dl) 4. 30´y 60´ minutos después de inyectada la insulina.5 ml ó 5 ml.) /TUBOS B I II III IV ____________________________________________________________________ Sangre Total (plasma o suero) Muestra basal 0.

Los mecanismos reguladores son nerviosos y endocrinos y es muy posible que los primeros actúen en realidad mediante modificaciones en la entrega de hormonas por las glándulas de secreción interna. como resultado. Utilizando papel milimetrado. Si obtuvo efectos extremos por la acción de la droga utilizada. Anotar los resultados en relación al tiempo. De cada una de las lecturas de los tubos I. construye una gráfica sobre el efecto obtenido por la insulina sobre la glicemia. 3. Las lecturas se llevan a cabo en el Espectrofotómetricas Spectromic 20 a 420 nm. con especial referencia al metabolismo de los carbohidratos.1. 3. REGULACIÓN HORMONAL DE LA GLUCOSA SANGUÍNEA: EFECTO DE LA ADRENALINA. de una explicación sucinta de ellos. CUESTIONARIO 1. 1. Cálculos. 4.O) de cada una de las soluciones coloreadas obtenidas. III y IV restar la lectura del tubo blanco (en todo caso de dosajes se utiliza el denominado Blanco. de modo que el mantenimiento de la glicemia en niveles normales depende del equilibrio entre la producción y la utilización de la glucosa sanguínea. INTRODUCCION Para poder afrontar con eficiencia las variaciones mas o menos bruscas que puedan afectar a la glucosa sanguínea. FR X (DO de los problemas – Blanco): mgs de glucosa por 100ml. II. 5. Dichas lecturas se anotarán en el cuaderno de notas y servirán para realizar los cálculos subsiguientes. Las lecturas representan la densidad óptica (D. se realizan de menor a mayor intensidad de color utilizando tubos especiales. EVALUACION 5. Cálculo de la concentración de glucosa en 100ml de sangre. . el organismo dispone de mecanismo reguladores que de diferentes maneras aceleran o retardan la entrega o el retiro de glucosa desde o hacia los tejidos. en las cuales se trasvasa el contenido de cada uno de los tubos de reacción anteriormente indicados.14 2. ¿Cuál es el efecto metabólico de la insulina sobre el hígado y sobre los músculos y que efecto produce sobre la glicemia?. en el espécimen de experimentación. Explique usted brevemente la regulación de la glicemia. 2. en términos generales. Explique de manera sucinta el efecto de la insulina sobre la glicemia. cuya sensibilidad está regida en medida importante por el balance entre la insulina por un lado y las hormonas suprarrenales y de la adenohipófisis por el otro. para corregir las lecturas de los problemas). de la tasa de llegada e índice de salida de la glucosa de la sangre. 5. Lecturas (espectrofotométricas).

15 La adrenalina hormona secretada por la médula suprarrenal. 2. serán capaces de gráficar una curva de glicemia. La secreción de adrenalina parece estar condicionada en forma importante por el nivel de glicemia. MATERIAL BIOLOGICO Y REACTIVOS A UTILIZAR  Conejos adultos de más de 2 kg. después de la administración de adrenalina y la curva de glicemia después de la administración de insulina.  Jeringas hipodérmicas de tuberculina  Reactivo enzimático  Reactivo Standard (1mg de glucosa /dl) 4.025mg por cada kilogramo de peso corporal que corresponde a 0. además de actuar en el músculo. 3. por la ausencia en este de la glucosa 6 .2 Dosis: de la solución de adrenalina (0. el Participante o grupo de participantes. OBJETIVOS 2.1 Determinar con exactitud el peso de los conejos sometidos a ayuno con la finalidad de calcular la cantidad de adrenalina a inyectar.25ml de la solución a utilizar por kg de peso. después de la administración parenteral de adrenalina de acuerdo a las especificaciones dadas en el instructivo. Utilizar una jeringa hipodérmica de tuberculina que facilita la medida de la dosis. Extraer una primera muestra de sangre. El efecto glucogenolítico de la adrenalina es debido a que activa a la fosforilasa. como especímenes biológicos de experimentación .1 mg/ml) inyectar 0. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES: Procedimiento 4. tiene acción hiperglicemiante. sometidos ayuno de 8 a 12 horas  Solución de adrenalina 0.1 Utilizando conejos. 2. 4.fosfatasa. la glucogenólisis se realiza con la formación de lactato el que va a contribuir directamente a la formación de glucosa y glucógeno en la célula hepática por los mecanismos gluconeogenéticos. 3ml por punción cardiaca y transferirla a un frasquito con oxalato de potasio. si aparece hipoglicemia se segrega más adrenalina y glucagón que aceleran la regulación que espontáneamente debe realizar el hígado.1 mg por ml. de peso corporal. Servirá para establecer los valores basales de glicemia. ello se debe a que favorece la conversión del glucógeno en glucosa (glucogenólisis) en el hígado. 4. el participante o grupo de participantes estarán en capacidad de establecer comparaciones entre las curvas de glicemia. 1. La finalidad de este experimento es dosar la glucosa en sangre para determinar la variación de la glicemia como consecuencia de la administración de adrenalina.3 EXTRACCION DE LAS MUESTRAS DE SANGRE Y ADMINISTRACION DE ADRENALINA. .2 Después de desarrollar el Instructivo.

30´y 60´minutos después de inyectada la adrenalina. 5.16 2. leer las absorbancias llevando a cero el espectrofotómetro con el blanco de reactivo. CUESTIONARIO 1. Luego extraer muestras de sangre a los 15´. DETERMINACION DE GLUCOSA EN SANGRE DE LOS ANIMALES TRATADOS CON ADRENALINA 1. se realizan de menor a mayor intensidad de color utilizando tubos especiales. como resultado. 4. 4. Anotar los resultados en relación al tiempo. Inyectar por vía subcutánea la cantidad calculada de adrenalina según el peso del animal. Las lecturas se llevan a cabo en el Espectrofotómetricas Spectromic 20 a 420 nm. 2. Las lecturas representan la densidad óptica (D.01 -Muestra a los 60 min. Con cada una de las citadas muestras realizar los dosajes de glucosa según el método de Folin-Wu. Con los resultados así obtenidos. III y IV restar la lectura del tubo blanco (en todo caso de dosajes se utiliza el denominado Blanco. Explique usted brevemente la regulación de la glicemia.) /TUBOS B I II III IV ____________________________________________________________________ Sangre Total (plasma o suero) Muestra basal 0. con insulina -0.1.01 --Muestra a los 30 min. con insulina ---0. Armar el siguiente sistema: ____________________________________________________________________ COMPONENTES (ml. II. 3. El color resultante es estable por a lo menos treinta minutos. 3. tomando las variaciones en relación al tiempo. construir un gráfico.01 Reactivo 1 1 1 1 1 ____________________________________________________________________ Mezclar e incubar 10 minutos a 37oc o 20 minutos a temperatura ambiente (20 a 25o c). con insulina --0. en las cuales se trasvasa el contenido de cada uno de los tubos de reacción anteriormente indicados.01 ---Muestra a los 15 min. Cálculo de la concentración de glucosa en 100ml de sangre. para corregir las lecturas de los problemas). 5. de la tasa de llegada e índice de salida de la glucosa de la . FR X (DO de los problemas – Blanco): mgs de glucosa por 100ml. lo que hace un total de tres muestras en una hora.4. Dichas lecturas se anotarán en el cuaderno de notas y servirán para realizar los cálculos subsiguientes. en términos generales. Lecturas (espectrofotométricas). EVALUACION 5.O) de cada una de las soluciones coloreadas obtenidas. De cada una de las lecturas de los tubos I. Cálculos.

En esta forma se incluyen fosfolípidos y esteres de colesterilo. El hígado transforma al colesterol en ácidos biliares y promueve su reacción con bases nitrogenadas como glicina y taurina. Las sales biliares. vierten en el torrente circulatorio por el conducto torácico. susceptibles a la rotura enzimática por las lipasas. La acción combinada de las lipasa pancreática. para su absorción. Una gran proporción de las sales biliares es reabsorbida con los lípidos y ácidos grasos y retornan al hígado por la circulación entero hepática. El hígado. Si obtuvo efectos extremos por la acción de la droga utilizada. Utilizando papel milimetrado. Los triglicéridos absorbidos del lumen intestinal penetran en forma de quilomicrones.monoacilglicerol (monoglicéridos) y glicerol. respectivamente. 4. 3. desempeña también una función excretoria y es responsable de la formación de bilis que vierte al intestino delgado por medio del conducto colédoco.17 sangre. Las secreciones pancreáticas se mezclan con la bilis. . ACCIÓN DE LA LIPASA PANCREÁTICA SOBRE LOS TRIGLICÉRIDOS Y EFECTO DE LAS SALES BILIARES. con especial referencia al metabolismo de los carbohidratos. La quiluria y el quilotórax son anomalías debidas a la conexión anormal entre las vías urinarias. INTRODUCCION Los lípidos ingeridos con los alimentos sufren modificaciones ligeras en la boca por la lipasa lingual y en el estómago por acción de una lipasa gástrica. El páncreas también sintetiza lipasa.monoacilglicerol. una vez llegadas al intestino se emplean como agentes emulsionantes para preparar. 5. de una explicación suscinta de ello. 1. puesto que son vertidas en un conducto común antes de su entrada al duodeno. en el espécimen de experimentación. además de la inmensa importancia en el metabolismo intermediario. Son ejemplo los ácidos taurocólico y glicocólico. gran vaso linfático que drena el intestino. Enzimas rompedoras de grasa en el duodeno son activadas solamente en presencia de las sales biliares que solubilizan las grasas y las hacen por ello. a los ácidos grasos y a los acilglicéridos. TERCERA UNIDAD: PRACTICA N° 03 DEMOSTRACIÓN DE LA DIGESTIÓN DE LAS GRASAS IN VITRO: ACCIÓN EMULSIFICANTE DE LAS SALES BILIARES SOBRE LAS GRASAS. una isomerasa y la lipasa intestinal dan como productos ácidos grasos libres 2 . ¿Cuál es el efecto metabólico de la adrenalina sobre el hígado y sobre el tejido muscular y que efecto produce sobre la glicemia?. formando las correspondientes sales biliares. Explique de manera suscinta el efecto de la adrenalina sobre la glicemia. construye una gráfica sobre el efecto obtenido por la adrenalina sobre la glicemia. 2. La finalidad de la presente práctica es demostrar la acción emulsificante de las sales biliares sobre las grasas y así mismo demostrar la acción emulsificante pancreática sobre . la cavidad pleural y el sistema de drenaje linfático.

1N 4. mediante una titulación final.18 los triglicéridos y el efecto de las sales biliares en la reacción enzimática. Armado un sistema de tubos de ensayo que contiene aceite y sales biliares.2.2 Acción de la lipasa pancreática sobre los triglicéridos y efecto de las sales biliares sobre la reacción enzimática. 2. los participantes serán capaces de determinar la acción lipolítica de la enzima y el efecto de las sales biliares sobre la acción enzimática.1% Hidróxido de sodio (Na0H) 0.1. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES: Procedimiento 4.0 Emulsificación de aceite vegetal de oliva Solución de extracto pancreático 1% Solución de fenolftaleína (Solución alcohólica) al 0. de oliva Solución de sales biliares al 1% (en H2 0) Buffer fosfato 0. OBJETIVOS 2. Dejar en reposo y anotar los resultados para interpretarlos. 4. sales biliares y extracto pancreático. REACTIVOS A UTILIZAR        Aceite vegetal. Acción emulsificante de las sales biliares sobre las grasas.1. 3. Armar el siguiente sistema: ____________________________________________________________________ COMPONENTES (ml) /TUBOS I II III IV ____________________________________________________________________ Emulsificación de aceite vegetal -3 3 3 . los participantes serán capaces de determinar la acción emulsificante producida en dicho sistema. Armado un sistema que contiene aceite vegetal. Armar el siguiente sistema: ___________________________________________________________________ COMPONENTES /TUBOS I II ___________________________________________________________________ Aceite vegetal de oliva (gotas) (3) (3) Agua destilada (ml) 5 3 Solución de sales biliares (ml) 2 ___________________________________________________________________ Agitar enérgicamente los tubos I y II. 2.1M pH 8. según las especificaciones del instructivo. según las especificaciones del Instructivo.

Sale del hígado transportado inicialmente en las VLDL. Anotar la cantidad de hidróxido de sodio 0. es captada por el hígado o los tejidos. agitando de vez en cuando. HDLColesterol y Triglicéridos 2. desde el punto de vista biológico. libre es anfipático. 3. 2. TITULACION: Utilizando una pipeta graduada de 1 ml. INTRODUCCIÓN El colesterol es un alcohol derivado del núcleo ciclopentanoperhidrofenantreno. 5.1N gastados. ¿Cuál es su composición y como funciona la bilis? 4. es decir con una región polar y otra no polar. especialmente la yema de huevo. se hace totalmente hidrofóbico. ¿Qué importancia.1M pH 8. CUESTIONARIO 1.1. tiene el conocimiento del fenómeno de la emulsificación?. Después de su absorción es transportado por los quilomicrones. En el hígado el colesterol de la dieta puede inhibir su propia síntesis. cuáles son y dónde ejercen su actividad?. principalmente con el ácido linoleico. Esta lipoproteína es la principal transportadora del colesterol. ¿Qué son sustancias hipsótonas y batótonas?. Explique usted el mecanismo por el cual actúan las sales biliares. dejar caer gota a gota NaOH 0. DETERMINACIÓN DEL PERFIL LIPÍDICO 1. gracias a su apoproteina B100. 5.0 2 2 2 2 Solución de sales biliares 1% 2 2 -2 Solución de extracto pancreático 1% 2 -2 2 Agua destilada 3 2 2 -____________________________________________________________________ Mezclar los 4 tubos y llevar al baño maría a 370°C. Ésta se convierte por acción de la lipasa lipoproteica en IDL. las vísceras. la que finalmente se convierte en parte en LDL.1 Nombre de la Unidad de Trabajo: Metabolismo de los Lípidos 1. En la dieta.19 Buffer fosfato 0. ¿Qué alteraciones metabólicas originaría las extirpación de la vesícula biliar?. Mezclar bien y luego realizar la titulación. se encuentra sólo en los alimentos animales. A partir de él se forman los ácidos biliares y las hormonas esteroideas. y captado por el hígado de los remanentes de los quilomicrones. Anotar los resultados para su interpretación. Dé ejemplos.1N en el fondo de cada tubo del sistema mezclando hasta la aparición de un color rosado tenue permanente. a través de un receptor . ¿Cómo actúan las sustancias tensioactivas. EVALUACION 5. 6. Al esterificarse.2 Contenido: Determinación de Colesterol Total. Al finalizar el tiempo de incubación retirar los tubos y agregar a cada uno 3 gotas de fenolftaleina. a través de un receptor especial. Es componente importante de las biomembranas. por 30 min. IDENTIFICACIÓN: 1. regulando su fluidez.

Hipertrigliceridemia moderada de 200 a 499 La hipercolesterolemia puede deberse a causas primarias o secundarias. 4. casi óptimo 100-129. el alcoholismo. El aumento de los triglicéridos puede deberse a causas primarias o familiares. que es aterogénica. etc. 5 niveles: Óptimo < 100 mg/dl. el hipotiroidismo. previa precipitación de las otras lipoproteínas. Reactivo enzimático pára la determinación de triglicéridos . normal 40 a 59. Entre las secundarias: La diabetes. Los triglicéridos en ayunas corresponden en condiciones normales a los de orígen endógeno. ictericia obstructiva. El III Panel de expertos ha establecido los valores de referencia para el colesterol. El LDL colesterol. 3 niveles: Bajo o de riesgo < 40. la HDL se considera antiaterogénico. alto o protector mayor o igual a 60. por el método enzimático y la determinación de HDL. Sufre la acción de la lipasa lipoproteica en los tejidos extrahepáticos liberando ácidos grasos que son utilizados como fuente de energía. la hipercolesterolemia poligénica. el síndrome nefrótico. la hiperlipidemia familiar combinada la hiperkilomicronemia. obesidad central. 3. señala sus alteraciones y su relación con el riesgo coronario. la hipertrigliceridemia familiar.20 específico. se realizará la determinación de colesterol sanguíneo. el HDL. en el denominado síndrome metabólico. o secundarias a otras enfermedades. resistencia a la insulina. El HDL colesterol. especialmente el ligado a la LDL. limítrofe alto 200-239 y alto > 240. Los primeros son transportados por los quilomicrones. limítrofe de 150 a 199. En la presente práctica. y muy alto >190. COMPETENCIAS El participante determina el perfil lipídico . Son hipertrigliceridemias primarias. Los triglicéridos sanguíneos pueden ser de origen exógeno (dieta) o endógeno (síntesis). la hiperlipidemia familiar combinada. hipertensión. siendo esterificado y transportado en forma reversa hacia el hígado. y el LDL. la disbetalipoproteinemia. por transferencia a las lipoproteínas. y normalmente no existen en ayunas. El aumento del colesterol sanguíneo es considerado un factor de riesgo coronario. el uso de anticonceptivos orales. Reactivo precipitante de HDL. limítrofe alto 130-159. De los tejidos es captado por la HDL. las VLDL o LDI y LDL. REACTIVOS: Reactivo enzimático para la determinación de colesterol. Los segundos son transportados por la lipoproteína de muy baja densidad (VLDL) que se forma en el hígado. cirrosis biliar. para los triglicéridos se considera: normal menos de 150mg/dl. En cambio. Son causas secundarias: la diabetes. En el colesterol se considera 3 niveles: Deseable < 200 mg/dl. la gota. La hipertrigliceridemia se asocia a disminución de HDL. el lipoteroidismo. alto 160-189. Entre las hipercolesterolemias primarias se señalan: La hipercolesterolemia familiar.

PROCEDIMIENTO 5. CALCULOS: 76. Restar el blanco tanto a los tubos problema como al estandar. Mezclar y esperar 15 minutos a temperatura ambiente. en fotocolorímetro. Centrifugar 15 minutos a 3000 rpm. Retirar del baño y enfriar.1 DETERMINACIÓN DE COLESTEROL SANGUÍNEO Armar el siguiente sistema: utilizando tubos de 15 x 125 mm.2 DETERMINACIÓN DE HDL-COLESTEROL En un tubo de prueba medir 0.25 ml de reactivo precipitante y agregar 0.21 5.1 ml de muestra de suero. Luego calcular el Factor (F): 200 mg/dl F = -----------------------------Absorbancia del standar Problema (mg/dl) = F (Absorbancia de la muestra problema) 5. Componente Suero Estándar 200 mg/dl Reactivo enzimático Blanco 1 ml Problema 10 ul 1 ml Estándar 10 ul 1 ml Incubar a 37º por 10 min. Leer las absorbancias a 505 nm.5 F = -------------------------------Absorbancia del Standard HDL Colesterol (mg/dl) = Absorbancia Desconocido x F . Usar el sobrenadante límpido como muestra de la siguiente forma: Sobrenadante Reactivo de trabajo 100 ul 1 ml Mezclar e incubar 10 minutos a 37°C. Leer en espectrofotómetro a 505 nm.

Causas de hipertrigliceridemia. Haga un esquema de la estructura de los triglicéridos. 8. 6. 5. Señale la importancia del colesterol.4 DETERMINACIÓN DEL LDL Aplicar la fórmula de Friedwald: LDL = Colesterol Total – ( HDL + TG/5 ) 6. en fotocolorímetro.22 5. Señale los valores de referencia del Colesterol. 3. EVALUACION FINAL CUESTIONARIO 1. Importancia del HDL como antiaterogénico. Leer las absorbancias a 505 nm. Causas de hipercolesterolemia. Explique por qué la hipertrigliceridemia es un factor de riesgo coronario . Restar el blanco tanto a los tubos problema como al estandar. Luego calcular el Factor (F): 200 mg/dl F = -------------------------------Absorbancia del standard Problema (mg/dl) = F x Absorbancia de la muestra problema 5. Importancia de la LDL como aterogénico. 4. 2. 7. HDL-Colesterol y LDLColesterol.3 DETERMINACION DE TRIGLICERIDOS Armar el siguiente sistema: Componentes Suero Estándar Reactivo enzimático blanco problema 10ul 1ml 1ml Estándar 10ul 1ml Incubar a 37º por 5 min.

5. Clínicamente las proteínas plasmáticas totales pueden disminuir en los siguientes casos: por pérdida excesiva como: a) albuminuria grave (por ejemplo en nefrosis). Ellas constituyen la mayor parte de los sólidos del suero. transporte y almacenamiento (hemoglobina. esprue.23 PRACTICA N° 4 IV UNIDAD: DETERMINACIÓN DE LAS PROTEÍNAS SÉRICAS TOTALES. Las dos primeras son combinación de un carbohidrato (hexosamina) con globulinas y se encuentran principalmente en las fracciones alfa 1 y alfa 2 de las globulinas. transferrina. ferritina). generación y transmisión de los impulsos nerviosos (receptores proteicos como rodopsina.5 a 7. regeneración y crecimiento de tejidos. En la hemoconcentración debida a deshidratación (vómitos. albúminas: 4. La relación albúmina/globulina varía. coagulación sanguínea. acetil colina en las sinapsis). kwashiorkor. La relación albúmina/globulina es de 1. etc. La concentración sérica de las proteínas totales es de 6. diarreas) la albúmina y globulinas se encrimentan en la misma proporción y la relación A/G permanece normal . c) desnutrición de larga duración (inanición. control del crecimiento y la diferenciación (información genética controlada). como en la cirrosis hepática. 1. Enfermedades que afectan la síntesis de proteínas. Las cifras de proteínas plasmáticas totales pueden aumentar en la hemoconcentración o en el caso de existir proteínas anormales (paraproteínas) habitualmente globulinas como en el mieloma de células plasmáticas (mieloma múltiple) y en algunas enfermedades parasitarias como el kal -azar. y globulinas: 1. función osmótica.5 a 3 gr/100 ml. movimiento coordinado (contracción muscular y movimiento de los cromosomas). b) quemaduras extensas (en este caso la hipoproteinemia puede quedar enmascarada por la hemoconcentración ).5 gr/100 ml de las cuales. Las proteínas plasmáticas son importantes para el organismo porque intervienen en una diversidad de actividades entre las que se destacan catálisis enzimática (enzimas). d) Lesiones del tubo digestivo que producen perdidas de proteínas. según el método de fraccionamiento de albúminas y globulinas. protección inmune (anticuerpos). INTRODUCCION Las proteínas plasmáticas de hecho son una mezcla muy compleja no solo de proteínas simples sino también de proteínas mixtas o conjugadas. tales como las glucoproteínas y mucoproteínas y diversos tipos de lipoproteínas. acción amortiguadora. soporte mecánico (colágeno).). 5 a 5 gr/100ml.2 1. etc. Se define a las mucoproteínas (mucoides) como aquellos compuestos que contienen más del 4% de hexosamina y se considera glucoproteínas a los compuestos que contiene menos de esta cantidad.

en el plasma se encuentra otra fracción que es el fibrinógeno. Agammaglobulinemia es un cuadro relativamente raro. beta y gamma. . como consecuencia. de manera que la relación A/G es baja. los participantes serán capaces de cuantificar las proteínas séricas totales y fraccionadas. alfa 2. 3. 2.Longitud de onda: 540nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetro con filtro verde (520-560nm).Volumen de Reactivo Biuret: 1. . . pero las globulinas están compuestas de distintas fracciones proteicas y para su separación y determinación se usa comúnmente la electroforesis en acetato de celulosa. la relación A/G cae marcadamente. condición frecuentemente debido a defecto metabólico genético en la cual las gammaglobulinas están muy disminuidas o totalmente ausentes. que puede ser determinado separadamente en el plasma. La disminución de proteínas totales son generalmente asociadas con bajos niveles de albúminas que a su vez están acompañadas por pequeños cambios en las globulinas.Tiempo de reacción:15 minutos. . En algunas enfermedades infecciosas crónicas se incrementan las gamma globulinas mientras que en enfermedades febriles agudas se incrementan las globulinas alfa. en personas normales y/o con procesos patológicos.Temperatura de reacción: 37°C. es causa de edema. si se desea la electroforesis usualmente se lleva a cabo en suero para evitar la interferencia que el fibrinógeno pudiera causar en la cuantificación de las otras fracciones proteicas. REACTIVOS A UTILIZAR: Kit para determinar proteínas totales 4. Disminución de la formación en el hígado. glubulinas que son las principales fracciones encontradas en el suero. La albúmina es una especie molecular relativamente simple.24 (no cambia). Los bajos niveles de albúminas pueden ser debidos: Incrementadas pérdidas de albúmina en la orina.0ml. En otros casos de incremento de las proteínas totales la albúmina no cambia o disminuye ligeramente mientras que las globulinas aumentan. Incremento de las globulinas son encontradas en lesiones hepáticas severas. . ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES: Procedimiento 4. Las globulinas son separadas en alfa 1. En severa hemorragia. Si los niveles de albúmina continúan bajos por largo tiempo.Volumen de muestra: 10 ul. Insuficiente ingestión de proteínas. . OBJETIVOS: Después de haber obtenido una muestra problema de sangre. Este es el único caso en que la albúmina se incrementa.1 Determinación de Proteínas Totales CONDICIONES DE REACCIÓN .

colocar: Suero Patrón Muestra Reactivo BCG B 1ml. .0 ml. S (Standard) y D (Desconocido).Temperatura de reacción: 15-28°C. 4. Leer en espectrofotómetro a 540 nm. 1 ml.1 ml. Mezclar e incubar 10 minutos a 37°C. (g/dl) .0 ml.B) x F Albúmina: (g/dl) Globulina: = (D .B) x F = Prot.Longitud de onda: 540 nm. S (Standard) y D (Desconocido).Tiempo de reacción: 5 minutos.Volumen de Reactivo BCG: 1 ml. En Espectrofotómetro .2 Determinación de Albúmina. PT (g/dl) – Alb. D 10 ul. Totales – Albúmina Relación A/G = Albúmina (g/dl) . S 10 ul 1 ml. D 10 ul. CONDICIONES DE REACCIÓN: .Volumen final de reacción: 1.25 - Volumen final de reacción: 1. . 1. S 10 ul 1. . colocar: B Suero Patrón Muestra Reactivo Biuret 1. PROCEDIMIENTO: En tres tubos de fotocolorímetro marcados B(Blanco). En fotocolorimetro con filtro verde (520-560 nm) llevando a cero con el Blanco de Reactivo. Leer en espectrofotómetro a 540 nm llevando a cero con el Blanco de Reactivo. . mantener los tubos entre 15 y 28°C durante 5 minutos.0 ml. PROCEDIMIENTO: En tres tubos de fotocolorímetro marcados B (Blanco). CALCULOS DE LOS RESULTADOS: Proteínas Totales (g/dl) = (D .Volumen de muestra: 10 ul. Mezclar.1 ml.

19 mg/100ml dependiendo en gran proporción de la ingesta de proteínas. ¿Qué importancia clínica tiene la determinación de las proteínas séricas totales y las fracciones albúmina y globulinas. Concentraciones incrementadas de nitrógeno ureico ocurre en numerosas condiciones patológicas cuya causa puede ser: 1) Producción incrementada en el curso de un catabolismo acelerado de las proteínas.1. EVALUACION: 5. es excretado casi enteramente por los riñones. 4. 2) Eliminación disminuida como resultado de una mala función renal. ¿Qué importancia tiene determinar la relación albúmina/globulinas. ¿Qué importancia clínica tiene el diverso origen de las proteínas séricas?. La edad y el sexo tienen poca influencia sobre la concentración de nitrógeno ureico. La capacidad del hígado para formar úrea es una de las últimas funciones que se pierde cuando ocurre extenso daño hepatocelular. la capacidad del organismo para utilizar proteínasexógena para síntesis y almacenamiento es limitada. 5. lo que se evidencia por el incremento de la úrea en sangre y en la excreción urinaria de úrea y amonio. La importancia clínica de la úrea viene del hecho de una elevada concentración sanguínea puede estar asociada con una mala función renal. Cuando la dieta es adecuada en calorías y en proteínas. ¿En que se basa la determinación de las proteínas totales y fraccionadas en nuestro experimento?. Los valores normales de úrea en suero (como nitrógeno ureico) es de 9 . en clínica? 3. En estas condiciones la proteína ingerida en exceso es catabolizada. 3) Por combinación de estos dos procesos. es extremadamente difusible y consecuentemente se distribuye igual en el agua de todos los tejidos con la posible excepción de una suave acción diurética. 2. CUANTIFICACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE ÚREA EN LA SANGRE 1. la úrea normalmente no tiene función útil en el organismo. Las principales condiciones en las cuales puede estar incrementada la concentración de . INTRODUCCION: La úrea es el principal producto final del catabolismo de las proteínas.26 5. ¿Qué presunciones diagnósticas de laboratorio plantearía usted en base a sus resultados obtenidos?. La concentración de la úrea en la corriente sanguínea es el resultado del balance entre el grado de degradación de las proteínas y el grado de eliminación por los riñones. mientras que es comunmente aceptado para sangre total de 9 a 17 mg/100ml (20 a 40 mg de urea/100ml). En ausencia de procesos patológicos la principal determinante es la cantidad de proteína ingerida y catabolizada. CUESTIONARIO 1. La úrea en el plasma es filtrada por los glomérulos renales pero en condiciones normales aproximadamente el 40% de este filtrado regresa por difusión a la sangre.

OBJETIVOS: Dada una muestra problema de sangre. 2) Infarto del miocardio. Los resultados se pueden reportar como: Nitrógeno ureico x 2. de acuerdo a las especificaciones del instructivo. muy similares. c) En el estado pre morten de 1a atrofia amarilla aguda. 3) Ulcera péptica muy sangrante. REACTIVOS A UTILIZAR: Kit para determinar Urea 4. d) Ciclo de la úrea deficiente. mientras que los aminoácidos se elevan. 5) Supuración. La finalidad de la presente práctica es cuantificar las concentraciones sanguíneas de úrea por el método de la ureasa y con la adición del reactivo de Nessler. Siendo las concentraciones de úrea en sangre total. En el último estaddío de esta enfermedad la concentración de úrea cae. 2) Nefroesclerosis avanzada.27 úrea en sangre son: excreción inadecuada y generalmente debido a enfermedad renal u obstrucción urinaria. 6) Neoplasias y 7) Gota crónica. 4) Necroisi cortical renal. 2. S (standard) y D (Desconocido) colocar una o dos gotas de agua y agregar: . 3. en personas normales y/o con procesos patológicos. Se presenta algunas condiciones como: a) Mal nutrición proteica. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES: Procedimiento PROCEDIMIENTO TECNICA EN SUERO O PLASMA En tres tubos de fotocolorímetro marcados B (Blanco). 3) Tuberculosis renal. Además una evaluación moderada sin compromiso renal puede ocurrir sin gran cantidad de proteínas son degradadas como sucede en 1)Stress. Están incrementados los niveles de nitrógeno ureico en sangre en: nefritis aguda y pueden variar de 25 a 160 mg/100ml. los participantes serán capaces de determinar la concentración de úrea por el método de la ureasa y el reactivo de Nessler. no tiene significado clínico especial el hecho que la determinación se haga en sangre total o en suero. etc. Ocurre retención de urea con destrucción parenquimatosa extensa del tejido renal en 1) Pielonefritis.14 = UREA Urea x 0. Aunque ambas determinaciones son muy frecuentes en suero los resultados son convencionalmente reportados como nitrógeno ureico en sangre. suero o plasma. La concentración disminuida de úrea en sangre es causada por producción disminuida.4665 = Nitrógeno ureico. b) En los últimos meses de gestación.

Luego agregar: Agua destilada 10 ml. EVALUACION: . ¿En relación a las concentraciones séricas de úrea y NH4+. ¿Qué alteraciones en las concentraciones séricas de úrea y NH4+ podrían encontrarse en el coma hepático?. En los riñones la porción amidina de la arginina se combina con glicina para formar ácido . 5. Blanco 5.60 g/l F = --------------------------------------Abs. ¿Cuál es la importancia metabólica de la existencia del ciclo de la ornitina en el hígado de los seres humanos?. Standard . Ureasa 1 gota 1 gota 1 gota Mezclar por agitación suave e incubar 5 minutos a 37°C. 3. Blanco) x F Donde: 0. 6. llevando a cero con el Blanco.28 COMPONENTES B S D Standard 20 ul Suero o Plasma 20 ul. Señale las características comunes que se encuentran en los defectos enzimáticos hereditarios del ciclo de la úrea. conocer las concentraciones séricas de úrea?. Desconocido . Mezclar por inversión y retirar del baño. La creatina precursora de la creatinina aumenta en el cuerpo humano fundamentalmente por síntesis aunque una pequeña cantidad preformada es ingerida con los alimentos. CALCULOS: Urea (g/l) = (Abs. 2. ¿Qué importancia clínica tiene para usted. INTRODUCCIÓN. ¿Qué influencia tiene la ingesta proteica sobre concentración sérica de úrea?. ¿Cuál es la importancia metabólica que en el hígado humano exista una relación entre el ciclo de los ácidos tricarboxílicos y el ciclo de la ornitina? DETERMINACIÓN DE CREATININA SÉRICA 1. 10 ml. 4. Después de 10 minutos leer en fotocolorímetro con filtro verde (510-550nm) o en espectrofotómetro a 540 nm. Luego agregar: Reactivo 1 1 ml 1 ml 1 ml Reactivo 2 1 ml 1 ml 1 ml Mezclar por agitación suave e incubar 5 minutos a 37°C.Abs. 10 ml.Abs. CUESTIONARIO 1.

2 mg/100 ml. esta última determinación se prefiere por la siguientes razones: 1)La determinación de creatinina proporciona más ayuda e información relacionada con el estado de la función renal porque los niveles de creatinina sérica depende del grado de excreción ya que la producción endógena es constante. La concentración normal en suero varía de 0. esta presente a niveles ligeramente más altos en el plasma de mujeres y niños. Elevadas concentraciones se producen solamente cuando la función renal está muy alterada por factores intrínsecos o extrínsecos y aunque el mismo tipo de información acerca del diagnóstico y pronóstico se obtiene por la determinación de nitrógeno ureico o creatinina. La creatinina es fácilmente difusible y es igualmente distribuida en el agua corporal. pero esta fuente exógena no tiene efecto perceptible sobre los niveles séricos. catabolismo de proteínas. El grupo metil lábil es proporcionado por metionina. El grado de insuficiencia depende entonces del número de nefronas comprometidas y del grado de lesión involucrado.29 guanino acético el cual es luego metilado en el hígado para formar creatina. sexo o ejercicios. Es excretada fundamentalmente por el riñón el cual clarifica el plasma de creatinina. hay aun más variaciones en el grado de catabolismo proteica y formación de urea. La actividad excretoria representa la suma de la acción individual de las nefronas. En cambio la úrea es depurada aproximadamente en 60% de grado de filtración glomerular a causa de su difusión retrógada en los tubulis. sólo pequeñas cantidades son eliminadas por las heces. La creatina aparece en el plasma de adultos masculinos en pequeñas concentraciones. 2) El suero es depurado de creatinina en el riñón por el grado de filtración glomerular proporcionando una buena base para el test de clearance. condiciones clínicas caracterizadas por azoemia causada por excesiva degradación de proteínas muestra poco incremento en la cretinina en los niveles de creatinina sérica (o úrea) no necesariamente indican un proceso de enfermedad renal. La creatina así formada es transportada principalmente a las células musculares donde es fosforilada en creatina fosfato (fosfocreatina) un compuesto de gran importancia en el mecanismo de la contracción y sirve como fuente de energía. Una concentración de creatinina sérica por encima de 1. edad. la cantidad total depende de la masa muscular.6 a 1. factores extrínsecos al riñón pueden ser responsables para tal elevación. .5 mg/100 ml definitivamente indica deformación o excreción de orina. La insuficiencia renal puede ser producida por pérdida parcial de la función de un gran número de nefronas o por pérdida completa de la función de un pequeño número de nefronas. Factores extrarrenales que interfieren la formación y eliminación de orina son referidos como azoemia pre-renal y azoemia post-renal. Las concentraciones de creatinina en suero no es afectada por la dieta. La causa que incrementan los niveles de creatinina son de origen renal y extrarrenal. colina u otros donadores de metilo. Aunque hay evidencia que se produce alguna depresión en el grado de formación de creatinina cuando los niveles séricos se elevan a concentraciones por encima de 6 mg/100 ml. Una pequeña cantidad de creatinina preformada es ingerida con los alimentos. En la sangre total las concentraciones son mayores y varían de 1 a 2 mg/100 ml. Aproximadamente 2% de la creatina fosfato muscular es convertida en creatinina diariamente.

Standard: Solución de creatinina 20 mg/l. 2.30 I. debe efectuarse una desproteinización de la siguiente manera: a 0.0 ml de Reactivo 1. REACTIVOS A UTILIZAR. Standard 0. Fundamentos del Método: La creatinina reacciona con el picrato alcalino en medio tamponado. La creatinina en medio alcalino reacciona con el ácido pícrico para dar un tautómero de picrato de creatinina de color anaranjado (reacción de Jaffe).4. Diabetes mellitus no controlada. 4. Depleción de agua y sodio (deshidratación) causada por vómito y diarreas. tienen como causas: a. c. 3. . Mezclar por inversión.25ml Agua destilada 0. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES: Procedimiento PROCEDIMIENTO En caso de que la muestra a utilizar sea en suero. llevando a cero el aparato con agua destilada. Reactivo 1 1 ml 1 ml Reactivo 2 0.25 ml 0. disminución de la presión sanguínea intraglomerular. además de disminuir el flujo sanguíneo intraglomerular interfiere con la filtración glomerular.4 mmol/l Reactivo 2: Buffer glicina/NaOH 1 mol/l. b.25 ml 0. pH final 12. Luego leer en espectrofotómetro a 510 nm o en fotocolorimetro con filtro verde (500-540 nm). Incubar 20 minutos a temperatura ambiente.25 ml Mezclar por inversión.25 ml. Azoemia pre-renal con reducción de filtración glomerular y del flujo sanguíneo renal es la bases del incremento de los niveles de creatinina y otras anormalidades. La disminución de la creatinina no tiene significación clínica. Insuficiencia cardíaca congestiva. 4) anormalidades conjuntas. CAPACIDAD Los participantes cuantifican las concentraciones de creatinina sérica por medio de la reacción de Jaffe (reacción del ácido pícrico en medio alcalino). obteniéndose un cromóforo que se mide a 540 nm. Reactivo 1: Acido pícrico 41. Azoemia post renal: Obstrucción del tracto urinario que impide la eliminación de orina produce azoemia e incremento de creatinina por ejemplo: 1) hipertrofia prostática.4 ml de suero agregar 2.5 ml.m. Diabetes insípida. previa desproteinización con ácido pícrico. fístula gastrointestinal excesiva sudoración con deficiente ingestión de sal. Shock. COMPONENTES B S DS Desproteinizado 1.p. 2) neoplasias que comprimen ambos uréteres. II. enfermedad de Adisson. 3) litiasis obstructiva bilateral. durante 5 minutos como mínimo. Dejar reposar 10 minutos y centrifugar a 3000 r.5 ml 0.

El color de la reacción es estable durante 10 minutos por lo que la absorbancia debe ser leída dentro de ese lapso. EVALUACIÓN FINAL (Informe escrito) 1. 3. Donde: 0. CALCULO DE LOS RESULTADOS.31 ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL. Corregir las lecturas S y D restándoles el Blanco (B). El Blanco y el Standard pueden leerse hasta los 60 minutos. Creatinina en suero (mg/l) = DS x F 20 mg/l F = -------------------S .020 g/l = concentración del Standard 5. ¿Por qué se prefiere suero y no sangre total para la determinación de creatinina? Metabólicamente ¿Qué expresa una concentración sérica de creatinina? En qué casos aumenta la cifra de creatinina sérica? Qué importancia tiene. determinar el clearence de creatinina? . ¿Qué información o presunción obtiene al dosar la creatinina sérica? 2. 4. 5.