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Ciencia UANL

Universidad Autnoma de Nuevo Len


rciencia@mail.uanl.mx
ISSN (Versin impresa): 1405-9177
MXICO




2002
Jorge Guillermo Gmez Gutirrez / Luis G. Bermdez Humarn / Reyes Tamez
Guerra / Juan Manuel Adame Rodrguez / Roberto Montes de Oca Luna
PRODUCCIN Y PURIFICACIN DE LA TAQ DNA POLIMERASA A PARTIR DE E.
COLI RECOMBINANTE
Ciencia UANL, julio-septiembre, ao/vol. V, nmero 003
Universidad Autnoma de Nuevo Len
Monterrey, Mxico
pp. 316-321





||||^ |^|| / \O| \, |o `, !|||O||'||`||| .00. `c
Produccin y puriIicacin
de la Taq 0NA polimerasa
a partir de - ?E recombinante
!o .||o o !., |. |J |, |y ' ,

! `|
^J |oJ|, |o|!o `o! J O. |
L
o DN/ polimoroso do Thonus ouo||cus (To
DN/ polimoroso} os lo orzimo Jsodo or ol
procodimioro dol PCP (rooccir or codoro
do lo polimoroso}. Eso os Jr moodo oxroor-
dirorio poro lo sirosis do cido dosoxirriLorJcloico
(DN/} |o ||o. El PCP pJodo ompliicor Jr por o Jr
ropmoro ospociico do DN/ or vorios milloros do
vocos or moros do dos loros. SJs vosos oplicocio-
ros dioror lJpor o Jr ovorco voricol or ol roo do
los ciorcios Liolpicos. Dorro do olpJros do los
oplicocioros dol PCP so orcJorror ol dioprsico
molocJlor do orormododos poroicos lJmoros, do
iroccioros virolos y Locorioros, or osJdios do ovo-
lJcir molocJlor, clorocir y oxprosir do poros,
idoriicocir do irdividJos, oc.
El PCP os Jro rooccir do vorios ciclos or codo-
ro, dordo codo ciclo so comporo do ros oopos
Jo sor. (o} dosroJrolizocir dol DN/, (L} liLrido-
cir do oliporJcloidos y (c} sirosis do DN/. Er ol
primor poso so soporor los codoros do DN/ o om-
poroJros do oproximodomoro 4
o
C, oso pormio
Jo or ol sopJrdo poso so liLridor los oliporJclo-
idos o lo ropir do DN/ Jo so dosoo ompliicor y,
irolmoro, or ol orcor poso lo orzimo To DN/
polimoroso llovo o coLo lo sirosis do DN/ o Jro
omporoJro do 72
o
C. Esos ros posos so ropior or
Jr promodio do 3C vocos. Es docir, Jo dJroro codo
ciclo los compororos do lo rooccir posor por om-
poroJros mJy olovodos o los cJolos so irocivor lo
moyorio do los orzimos. Cripirolmoro ol procodi-
mioro dol PCP so osoLloci Jsordo lo DN/ poli-
moroso l do Escho|ch|o co||.
1
Eso orzimo ro os
rosisoro o los omporoJros Jsodos or lo
dosroJrolizocir dol DN/ y por ordo so odicioro-
Lo rJovo orzimo dospJos dol primor poso or codo
ciclo do rooccir. Eso proLlomo so rosolvi ol sJsi-
Jir lo DN/ polimoroso l do Escho|ch|o co|| por Jro
orzimo ormoosoLlo Jo ro pordio sJ ocividod o
diclos omporoJros. Eso orzimo os lo To DN/
polimoroso prodJcido por lo Locorio ormilo
Thonus ouo||cus.
2
Lo To DN/ polimoroso sim-
pliic or pror modido lo rooccir do PCP ol pros-
cirdir do odicioror orzimo or codo Jro do los 3C
ciclos Jo so ropio lo rooccir.
Lo impororcio Jo coLr oso orzimo doormi-
r Jo so osoLlocioror procodimioros poro ocili-
or sJ pJriicocir, o porir do lo Locorio prodJco-
ro do oso orzimo, Thonus ouo||cus. Posoriormor-
o, cor ol Jso do lo ocrolopio dol DN/ rocomLi-
*LoLoroorio do lrmJrolopio y \irolopio.
**LoLoroorio do Micolopio Modico, FocJlod do Ciorcios Eiolpi-
cos, U/NL, |odomo_ccr.dsi.Jorl.mx
Poprosorocir ridimorsiorol do lo To DN/ polimoroso.
||||^ |^|| / \O|\, |o `, !|||O||'||`||| .00. `
roro ol por do lo To DN/ polimoroso so clor o
porir do T. ouo||cus y so oxpros or Escho|ch|o
co||.
3
Lo oxprosir do oso por or E. co|| ocili sJ
prodJccir y pJriicocir.
4
Er ol prosoro roLo|o so doscriLo lo odopocir
do Jr procodimioro poro lo prodJccir y pJriico-
cir do oso orzimo To DN/ polimoroso, o porir
do Jro copo rocomLiroro do E. co||.
MetodoIogo
Cepo recombinonte de -?E
y plsmido pTkC-Toq
So irrodJ|o por olocroporocir or Jro copo DH5
do E.co|| (Srooporo} ol plsmido pTPC-To (ipJ-
ro1}, ol cJol poro ol por do lo To DN/ polimoroso
Lo|o lo ropJlocir dol promoor |oc. Poro domos-
ror lo prosorcio dol por do lo To DN/ polimoroso
so oisl ol DN/ plosmidico, sopr lo ocrico doscri-
o por EirrLoim ord Doly (17},
5
so dipiri cor lo
orzimo do rosriccir \hol por 2l o 37`C y so oro-
liz or Jr pol do oporoso ol C.8, orido cor Lro-
mJro do oidio.
Froduccin de lo Toq en medio L8 LAHIKI T8
El modio TE os Jr modio ms orriJocido y so olcor-
zor dorsidodos colJloros do Locorios moyoros Jo
los Jo so oLioror cor LE. Por ol moivo docidimos
proLor si or ol modio TE so oLorio Jr moyor prodJc-
cir do To DN/ polimoroso Jo or ol modio LE.
Poro oso propsio so propor Jr proircJlo do
5 ml do lo Locorio rocomLiroro y so Jsoror 2.5
ml, poro irocJlor 25 ml do omLos ipos do modio.
LE (poporo do cosoiro 1, NoCl 1, y oxroco do
lovodJro C.5} y TE (poporo do cosoiro 1.2, ox-
roco do lovodJro 2.4 y plicorol C.1ml}. So ircJ-
Loror los Locorios loso Jro dorsidod pico, DC
55C
~ C.25C y so orodioror 2Cmp/ml do lPTC (lsopropyl
E D liopolocopyrorosido}, poro irdJcir lo oxpro-
sir dol por To DN/ polimoroso y so ircJL odo
lo roclo o 37C cor opiocir. Posoriormoro, los
cJlivos so corriJporor y lo posillo so rosJspordi
or EJor / (Tris 5CmM pH 7., plJcoso 5CmM y
EDT/ 1mM } y so lisoror los colJlos por soricocir.
NJovomoro so corriJporor los colJlos y so rocJ-
por ol soLrorodoro dol cJol so propororor dilJ-
cioros (1.2, 1.4, 1.8, 1.1}. Lo ocividod do To
DN/ polimoroso so doormir por PCP, ompliicor-
do ol rorspor p53 lJmoro, o porir do poromo
mJriro. Lo ororior so lizo poro los colJlos provo-
rioros do codo modio, LE y TE.
nduccin de lo expresin del gen Toq
Poro doormiror ol iompo pimo do prodJccir do
To DN/ polimoroso, Lsicomoro so lizo lo mis-
mo Jo or ol procodimioro ororiormoro doscrio,
cor lo diororcio Jo solomoro so crocioror los Loc-
orios or ol modio LE, yo Jo como so vor ms
odoloro (rosJlodos} or oso so oLJvo moyor oci-
vidod orzimico Jo or ol modio TE. So omoror
mJosros do 1ml dol cJlivo colJlor codo dos loros
dJroro 18l, o porir do lo irdJccir cor lPTC. So
propororor oxrocos colJloros, modioro soricocir,
y so los doormir lo ocividod do To DN/ polimo-
roso, do ocJordo o lo doscrio or ol pJro ororior.
Furificocin de Toq DNA polimeroso
Uro voz Jo so domosr Jo ol modio LE propor-
cioroLo moyor ocividod orzimico y Jo o los dioz
loros do ircJLocir so oLorio lo moyor prodJc-
cir do To (vor rosJlodos}. So irocJl 1 liro do
LE//mp (4Cmp/ml} y so irdJ|o lo oxprosir do lo
To cor lPTC, como so doscriLi ororiormoro. So
cosocloror los Locorios por corriJpocir y so lo-
voror cor EJor /, posoriormoro los Locorios so
rosJspordioror rJovomoro or EJor /, cororior-
do lisozimo o 4 mp/ml, so ircJL o omporoJro
omLioro por 15 mirJos (mir} y so lo odicior Jr
volJmor do EJor E (1CmM Tris pH 7., 1mM EDT/,
1mM PMSF, C.5 Twoor2C, C.5 lCEP/L}. El lisodo
colJlor so corriJp o 25,CCC rpm por 45 mir or
Jr roor S\ 28. /l soLrorodoro oLorido so lo o|Js-
lo corcorrocir do KCl o 2CC mM, so pos por
Jro colJmro do DE52 (8|C-P^D}, proviomoro pro-
porodo y oJiliLrodo cor LJor E. So colocoror
roccioros do 5 ml y so comLiroror oJollos Jo or
orsoyos do PCP prosororor ocividod do To. Los
roccioros so diolizoror odo lo roclo corro ros
volmoros do EJor C (HEPES 2CmM, pH 7., EDT/
1mM, PMSF C.5mM, Twor2C C.5 o lCEP/L C.5}.
El diolizodo so pos por Jro colJmro do rosiro Eio
Pox 7C (8|C-P^D}, oJiliLrodo cor EJor C, y lo
To DN/ polimoroso so olJy cor ol mismo LJor,
cororiordo KCl o 2CC mM. So colocoror roccio-
ros do 1ml y so los doormir lo ocividod do lo or-
zimo modioro Jr orsoyo do PCP.
Medicin de lo octividod de Toq purificodo
Lo ocividod do lo To pJriicodo so doormir mo-
dioro lo ompliicocir dol rorspor lJmoro 53 o
1CPCE CUlLLEPMC CCMEZ C., LUlS C. EEPMDEZ H., PEYES T/MEZ C., 1U/N M/NUEL /D/ME P., PCEEPTC MCNTES DE C.
||||^ |^|| / \O| \, |o `, !|||O||'||`||| .00. `S
PPCDUCClCN Y PUPlFlC/ClCN DE L/ T/C DN/ PCLlMEP/S/ / P/PTlP DE E. CCL| PECCMElN/NTE
porir do Jr poromo mJriro. Los rooccioros do PCP
so roolizoror or volmoros do 25 l, cororiordo
1CC rp do codo oliporJcloido, dosoxiriLorJclo-
idos do riosoo o Jro corcorrocir irol do 25C
mM, 1CC rp do DN/ pormico y 1 l, yo soo do
oxrocos colJloros o roccioros do los colJmros. Los
cordicioros dol PCP Joror (C/mir}. Jr ciclo iri-
ciol do 4/4, 3C ciclos do 4/1, 5/1, 72/3 y Jr
ciclo irol o 72/7. Poro modir lo ocividod do lo or-
zimo pJriicodo, osi como sJ colidod, so roolizoror
diororos ipos do ompliicocioros (sorcillos y mli-
plos} y so Jsoror diororos ipos do omplodos do
diororos ospocios. Cororolmoro so Jsoror 1CC
rp do DN/ pormico.
Almocenomiento de lo Toq DNA polimeroso
PJoso Jo so oLJvo Jro orzimo To DN/ polimo-
roso cor ocividod Liolpico, os rocomordoLlo
olmocororlo y morororlo osoLlo por Jr poriodo
lorpo. Por lo oro, docidimos proLor dos diororos
EJors do olmocoromioro y morioroor o rovos
dol iompo sJ ocividod Liolpico. Lo orzimo pJrii-
codo so olmocor or dos diororos ipos do LJor.
Eso so llov o coLo cor lo dilisis do lo orzimo pJ-
riicodo corro 1CC volmoros do EJor l (HEPES
2CmM, KCl 1CCmM, EDT/ C.1mM, PMSF C.5mM,
DTT 1 mM y Clicorol ol 5C} o EJor ll (Tris 1M pH
8, DTT 1mM, EDT/ C.1mM, KCl 1CCmM, Twoor
2C ol C.5, lCEP/L ol C.5 y Clicorol 5C}. Lo
orzimo diolizodo so olmocor o -2C`C y so lo do-
ormir sJ ocividod do To DN/ polimoroso, o ro-
vos dol iompo, o irorvolos do ros mosos.
ketuItodot
Aislomiento y corocterizocin
del gen de lo Toq DNA polimeroso
Poro corroLoror Jo rJosro copo rocomLiroro do
E.co|| poro ol plsmido pTPC-To so rooliz Jr ois-
lomioro do DN/ plosmidico por lo ocrico do miri-
prop (vor moodolopio} y so dipiri cor lo orzimo do
rosriccir \hol. Yo Jo ol por To posoo ros siios
\hol or los posicioros 41 ,154C y 2487 pL, lo
diposir dol plsmido cor oso orzimo doLo do
pororor lo liLorocir do dos ropmoros do 1C7 y
47pL (ipJros 1 y 2 }.
Froduccin de Toq DNA polimeroso en dos di-
ferentes medios de cultivo
Lo Locorio rocomLiroro so croci or los dos mo-
Fip.1. Mopo dol plsmido pTPC-To.
M 1 2
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107 pb
47 pb
dios do cJlivo, LE y TE (moodolopio}, so irdJ|o lo
oxprosir dol por cor lPTC y so compor lo ocivi-
dod do lo orzimo prodJcido or oxrocos colJloros
proporodos por soricocir. So proLoror dilJcioros
do los oxrocos colJloros (1.2, 1.4, 1.8, 1.1}. Los
rosJlodos so mJosror or lo ipJro 3, dordo so oL-
sorvo Jo los prodJcos dol orsoyo do PCP sor ms
irorsos or los oxrocos colJloros do los Locorios
crocidos or LE (corrilos 1 ol 4}, or comporocir cor
los oxrocos oLoridos dol crocimioro or TE (corri-
los 5 ol 8}. Eso rosJlodo ros irdico Jo oxiso Jro
moyor coridod do ocividod orzimico do To DN/
polimoroso or los Locorios crocidos or LE.
Cintico del tiempo ptimo de produccin de
Toq
DoLido o Jo or lo Locorio rocomLiroro ol por
do lo To DN/ polimoroso os Lo|o lo ropJlocir
dol promoor |oc, ol cJol os irdJciLlo cor lPTC, oro
rocosorio doirir ol iompo pimo poro cosoclor
los Locorios, dospJos do lo irdJccir cor diclo ir-
Fip. 2. Corocorizocir dol plsmido Jo poro ol por do lo
To DN/ polimoroso. El plsmido so oisl do lo Locorio
rocomLiroro y so dipiri cor lo orzimo /lol. Corril 1
plsmido sir diporir, corril 2 plsmido diporido, y M os ol
morcodor do poso molocJlor 1 KL.
||||^ |^|| / \O|\, |o `, !|||O||'||`||| .00. `

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Tg p53
M 1 2 3 4 5 6 7 8
LB TB
Fip. 3. Doormirocir do lo prodJcividod do To DN/ poli-
moroso or dos modios do cJlivo. LE y TE. So ompliic ol
rorspor p53 lJmoro (Tpp53}. Los corrilos dol 1 ol 4 corros-
pordor o dilJcioros (1.2,1.4,1.8,1.1} dol oxroco colJlor
oLorido dol modio LE, los corrilos dol 5 ol 8 sor los dilJcio-
ros (1.2,1.4,1.8,1.1} dol oxroco colJlor oLorido dol mo-
dio TE.
dJcor. DospJos do doormiror lo ocividod do To
oLorido do mJosros do cJlivo omodos codo 2 l,
o porir do lo irdJccir loso Jr mximo do 18 l,
orcorromos Jo lo ocividod do To comiorzo o
doocorso o los 4 l, ircromorrdoso proprosivo-
moro loso los 1C l do crocimioro y dismirJyor-
do o porir do los 12 l (ipJro 4}. Esos rosJlodos
irdicor Jo o los 1C l so oLsorvo moyor ocividod
do To DN/ polimoroso.

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Tg p53
Hrs de crecimiento
Post-induccin
M 2 4 6 8 10 12 14 16 18
Fip. 4. Doormirocir dol iompo pimo do irdJccir do
To DN/ polimoroso. /cividod do lo orzimo or oxrocos
colJloros oLoridos o los iompos irdicodos (2 o 18 lrs} pos-
orior o lo irdJccir cor lPTC. Lo ocividod so doormir
modioro lo ompliicocir dol rorspor Tp p53. M os ol mor-
codor do poso molocJlor 1 kL.
Comporocin de lo Toq DNA polimeroso purifi-
codo y uno Toq comerciol
Lo ipJro 5 so mJosro lo comporocir do lo ocivi-
dod orzimico do lo To DN/ polimoroso pJriico-
do or comporocir cor Jro orzimo comorciol
(EioSoloc}. Poro oso propsio so rooliz Jr orsoyo
do PCP poro ompliicor Jr por p53 mJriro or oso-
do loorocipoo y Jsordo ros dilJcioros diororos
(1.2, 1.4 y 1.8} do omLos orzimos. Los prodJcos
do PCP, dol ololo silvosro y dol ololo mJodo, irdi-
cor Jo lo To DN/ polimoroso pJriicodo (corrilos
1, 4 y 7} prosor moyor ocividod Jo lo orzimo
comorciol (corrilos 2, 5 y 8}. /doms, ol olmocoro-
mioro do lo orzimo or Jr LJor diororo ol l (EJ-
or ll, moodolopio} ro mo|or lo osoLilidod do lo
To DN/ polimoroso pJriicodo (corrilos 3, y },
oso, doLido o Jo rJosro orzimo pJriicodo mos-
r oror ipJol o moyor ocividod Jo lo comorciol
(5 U/l}.

AM
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P C BII P C BII P C BII
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Fip. 5. Comporocir do lo ocividod do lo To pJriicodo (P}
y do Jro orzimo comorciol (C}. So ompliic por PCP ol por
p53 mJriro, or osodo loorocipoo. /M, ololo mJoro, /S,
ololo silvosro. Corrilos 1, 4 y 7 orzimo pJriicodo, corrilos 2,
5 y 8 orzimo comorciol, y corrilos 3, y corrospordor o lo
orzimo pJriicodo olmocorodo or EJor ll (Ell}. M os ol mor-
codor do poso molocJlor 1KL.
Funcionolidod de lo Toq DNA polimeroso
/ lo orzimo pJriicodo so lo proL sJ loLilidod do
ompliicor DN/, o porir do poromos do diororos
orporismos y cordicioros do rooccir. Primoro so
doormir lo Jrciorolidod do rJosro orzimo poro
lo ompliicocir simJlroo do vorios ropioros dol
poromo lJmoro (PCP mliplo, ipJro }.

400 pb
100 pb
50 pb
M 1 2 3 4
Fip. . PCP mliplo dol Lrozo lorpo dol cromosomo Y Jsor-
do lo To DN/ polimoroso pJriicodo. M morcodor do poso
molocJlor 5C pL, corrilos 1 ol 4 prodJcos do PCP osporo-
dos do ocJordo ol osJclo comorciol.
AS
1CPCE CUlLLEPMC CCMEZ C., LUlS C. EEPMDEZ H., PEYES T/MEZ C., 1U/N M/NUEL /D/ME P., PCEEPTC MCNTES DE C.
||||^ |^|| / \O| \, |o `, !|||O||'||`||| .00. `.0
Er oso oxporimoro so Jsoror odos los rooci-
vos do Jr osJclo do ompliicocir do diororos
ropioros dol Lrozo lorpo dol cromosomo Y, sJsiJ-
yordo lo To dol osJclo por rJosro orzimo. El
rosJlodo oLorido Jo ol mismo porr do Lordos
osporodos, do ocJordo cor ol osJclo comorciol.
Por oro lodo, so proL lo loLilidod do lo orzi-
mo pJriicodo poro ompliicor DN/ do ovos. Er lo
ipJro 7 so mJosro ol rosJlodo Jo corrospordo o
Jr procodimioro do soxodo molocJlor do ovos
moromricos, or dordo so ompliicoror ropioros
ospociicos do los cromosomos soxJolos Z y \. Los
moclos posoor dos cromosomos Z y ompliicor Jro
solo Lordo (corrilos 1, 2, 4, 5, 7 y } y los lomLros
posoor Jr cromosomo Z y Jr \, y ompliicor dos
Lordos (corrilos 3, y 8}.

400 pb
100 pb
Z
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9
W
Fip. 7. /mpliicocir do los poros CHD-\ do lo lomLro y
CHD-Z dol moclo. Corrilos dol 1 ol 5, ^nozooo
|oucocoho||o y corrilos dol ol pororocor o Lo, sp.
Estobilidod de lo enzimo purificodo
Lo orzimo pJriicodo so olmocor o -2C
C
C or dos
diororos LJors y so morioro sJ ocividod o ro-
vos dol iompo, modioro lo ompliicocir por PCP
dol Tp p53 lJmoro o porir do poromo mJriro. Er
lo ipJro 8 so mJosro ol rosJlodo do lo ocividod
do To DN/ polimoroso o los ros, sois y rJovo mo-
sos do olmocoromioro (porol /, E y C, rospocivo-
moro}. Er los dos primoros porolos so oprocio Jo
lo irorsidod do los Lordos os comporoLlo or om-
Los LJors, os docir Jo lo ocividod pormoroco
similor loso los sois mosos. Por ol corrorio o los
rJovo mosos do olmocoromioro (porol C} oxiso
Jro ocividod liporomoro moyor or lo orzimo ol-
mocorodo or ol EJor l.
concIutin y ditcutin
Er oso roLo|o so lopr implomoror Jr procodi-
mioro poro lo pJriicocir do lo orzimo To DN/

Tg p53
(C)
M BII BI M BII BI M BII BI
(B) (A)
Fip. 8. Morioroo do lo To DN/ polimoroso cor rospoco o
sJ ocividod o rovos dol iompo or dos ipos do EJors do
olmocoromioro (Ell y El}. Porol /, E y C, orzimo cor 3, y
mosos do olmocoromioro. M os ol morcodor do poso molo-
cJlor 1KL.
polimoroso, o porir do Jro Locorio rocomLiroro
do E.co||. Er pororol lo ocividod do lo orzimo pJri-
icodo Jo similor o lo do Jro To DN/ polimoroso
comorciol Lo|o cordicioros osrdor do rJosro lo-
Loroorio. Lo coridod prodJcido o porir do 1L do
cJlivo Jo 1CC,CCC U. Dos pJros impororos
do rosolor do lo orzimo pJriicodo sor. (1} sJ ropro-
dJciLilidod poro ompliicor los ololos dol por
ordporo p53 mJriro (ipJro 5}, cor los cJolos ror-
molmoro so prosoroLor proLlomos or rJosro lo-
Loroorio cor lo orzimo comorciol y (2} lo orzimo
pJriicodo ompliic socJorcios do DN/ Locorioro,
o porir do DN/ oislodo do o|ido Loviro omLoLido
or poroiro, rJovomoro cor moyor roprodJciLili-
dod Jo lo orzimo comorciol Jsodo or oso roLo|o
(doos ro mosrodos}. /simismo, lo orzimo pJriico-
do so lo proLodo or dos osJclos comorciolos, Jro
do PCP mliplo poro lo dooccir do microdolocio-
ros dol cromosomo. Y, y oro poro rooccioros do
PT-PCP or lo ompliicocir do DN/s complomoro-
rios lJmoros y virolos (doos ro mosrodos}. Er om-
Los cosos ol Jso do lo To DN/ polimoroso pJriico-
do Jrcior or ipJol modido Jo lo orzimo To DN/
polimoroso prosoro or ol osJclo. Los comporocio-
ros Joror loclos do mororo cJolioivo y ro cJor-
ioivo. Firolmoro, lo vido modio do lo To Lo|o
cordicioros do olmocoromioro or rJosro loLoro-
orio lo sido sJporior o Jr oro. Er corclJsir so
implomor Jr procodimioro poro lo prodJccir y
pJriicocir do lo To DN/ polimoroso o porir do
Jro copo rocomLiroro do Escho|ch|o co||.
Agrodecimientot
Eso proyoco CN 314-CC Jo opoyodo por ol pro-
promo P/lCYT do lo Urivorsidod /Jromo do NJovo
Lor.
PPCDUCClCN Y PUPlFlC/ClCN DE L/ T/C DN/ PCLlMEP/S/ / P/PTlP DE E. CCL| PECCMElN/NTE
||||^ |^|| / \O|\, |o `, !|||O||'||`||| .00. `.
ketumen
Er ol prosoro roLo|o so implomor Jr moodo poro
lo prodJccir y pJriicocir do lo orzimo To DN/
polimoroso, o porir do Jro copo rocomLiroro do
Escho|ch|o co||. So doormir ol iompo do moyor
prodJccir or cJlivo, so proLoror dos diororos
modios poro ol crocimioro do diclo Locorio y dos
diororos LJors do olmocoromioro poro lo orzi-
mo pJriicodo. / porir do Jr liro do cJlivo so lopr
oLoror orzimo To DN/ polimoroso oJivoloro o
1CC,CCC Jridodos. Eso orzimo pJriicodo so lo
Jilizodo or proocolos osrdor do loLoroorio poro
lo ompliicocir do socJorcios pormicos do Loc-
orios, virJs, ovos, rooros, Loviros y lJmoros, mos-
rordo sor ipJol o ms oicioro Jo Jro proporo-
cir comorciol. Lo ocividod do lo orzimo pJriicodo
lo pormorocido osoLlo dJroro ol moros rJovo
mosos do olmocoromioro o -2C
C
C.
Folobros clove. To DN/ polimoroso, PCP, PCP
mliplo, PJriicocir.
Abttroct
lr lo prosor work wo dovolopod o proocol o pro-
dJco ord isoloo To DN/ polymoroso o
rocomLiror Escho|ch|o co||. \o doormirod lo
opimJm imo o To DN/ polymoroso prodJcior.
\o osod wo dioror cJlJro modio or lo prowl
o lo rocomLiror LocoriJm ord wo dioror
soropo LJors or orzymo soLiliy. From oro lior
modio cJlJro wo oLoirod 1CC,CCC Jris o soid
orzymo. Tlis orzymo wos Jsod or poro ompliicoior
rom dioror orporisms sJcl os Lirds, mico, lJmor
ord Locorio. Tlo orzymo ociviy los Loor soLlo
or o loos riro morls o -2C`C soropo.
Keywords. To DN/ polymoroso, PCP, PCP
mJliplox, PJriicoior.
keferenciot
1. MJllis Kory, Folooro F., Sclor S., Soiki P., Horr
C., ord Erlicl H. Espociic Erzymoic
/mpliicoior o DN/ |o \||o. Tlo Polymoroso
Cloir Poocior. CSH Symp. CJor. Eiol. 185,
51. 23-273, Cold Sprirp HorLor LoL.
2. Soiki P.K., Colord H., Sool S., Sclor P.,
HipJcli P., Horr T. y MJllis K. Primor-Dirocod
Erzymoic /mpliicoior o DN/ wil o
TlormosoLlo DN/ Polymoroso. Sciorco 188,
23. 487-41.
3. Lowyor F.C., Sool S., Soiki K., MyomLo K.,
DrJmmord P. y Colord H. lsoloior,
Clorocorizoior, ord Exprossior ir Escho|ch|o
co|| o lo DN/ polymoroso poro rom Thonus
ouo||cus. 1oJrrol o Eiolopicol Clomisry 18,
24. 427-437.
4. Erpolk D.P., Krikos /., ErJck E. y CirsLJrp D.
PJriicoior o TlormJs oJoicJs DN/
polymoroso Exprossod ir Escho|ch|o co||.
/rolyicol Eioclomisry 1C, 11. 3-4CC.
5. EirrLoim HC ord Doly 1. / ropid olkoliro
oxrocior procodJro or scroorirp rocomLiror
plosmid DN/. NJcloic /cids Pos. 17, 7.
1513-23.
. CJrosli, S.1., Poss /.P. Mo K. o| o| (1}
Polymoroso cloir roocior scroorirp or Y
clromosomo microdoloiors. / irs sop owords
lo dioprosis o lo poroicolly-doormirod
spormooporic oilJro ir mor. /o| |un. Pooo.,
2, 775-77.
7. Cpowo, /., MJroo, K. & MizJro, S. (18}.
Tlo locoior o Z- ord \-lirkod morkor poros
ord soJorco or lo lomomorplic sox
clromosomo o lo osricl ord lo omJ. foc.
No||. ^coo. Sc|. LS^, 5.4415-18.
8. NokomJro, T., Piclol, 1C., \illioms-Simors, L.,
\osplol, H. (15}. /r opopoic dooc ir lors
diororioior coJsod Ly lJmor p53 is roscJod
Ly o mJor ollolo. Proc. Nol. /cod. Sci. US/
2 142-14.
1CPCE CUlLLEPMC CCMEZ C., LUlS C. EEPMDEZ H., PEYES T/MEZ C., 1U/N M/NUEL /D/ME P., PCEEPTC MCNTES DE C.