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PRCTICAS DE FISIOLOGA VEGETAL MEDIDA DE LOS ESPECTROS DE ABSORCIN DE CLOROFLIDAS Y CAROTENOIDES 1.

INTRODUCCIN Para comprender el mecanismo a travs del cual los pigmentos del cloroplasto captan la energa luminosa en el proceso de la fotosntesis es importante conocer el espectro de absorcin de estos compuestos. Un espectro de absorcin es la representacin grfica del grado en el que un determinado pigmento capta las diferentes longitudes de onda de la radiacin luminosa.

% de absorcin

Longitud de onda () expresada en nm Espectro de absorcin de los pigmentos fotosintticos. Imagen tomada de Biology of plants . Peter H. Raven, Ray F. Evert, Susan E. Eichhorn.. Freeman and Company Worth Publishers. 1999

Las clorofilas presentan dos mximos de absorcin, uno en la zona del azul y otro en la zona del rojo con ligeras diferencias entre clorofila a y clorofila b. Los carotenoides absorben fundamentalmente las radiaciones azules y violetas. La exacta localizacin de los mximos de absorcin depende del disolvente en el que se encuentren y en esta prctica hay tambin que considerar que los pigmentos que se utilizan proceden de la extraccin realizada en una prctica anterior en la que recordemos que lo que se obtenan finalmente eran cloroflidas. Por ltimo no se deben descartar posibles contaminaciones debido a una no muy buena separacin. 2. MATERIAL Soluciones de pigmentos obtenidos en la prctica de separacin mediante disolventes qumicos y conservados en condiciones de oscuridad en el frigorfico. Espectrofotmetro y cubetas de vidrio Pipetas de 1 y 5 ml Gradilla Tubos de ensayo Agua ter etlico ter de petrleo Solucin de KOH en metanol

3. METODOLOGA En primer lugar se prepara un blanco para cada uno de los pigmentos con la siguiente composicin. Cloroflidas. En un tubo de ensayo se mezclan 1ml de solucin de KOH al 30% en metanol y 2 ml de agua destilada y se agita hasta que se mezclen bien Carotenos. ter de petrleo Xantofilas. ter etlico El blanco se prepara porque los distintos compuestos qumicos en que estn disueltos los pigmentos, absorben tambin y es necesario conocer cual es su absorbancia a cada una de las longitudes de onda para poder restrsela a la solucin de pigmentos, de modo que tengamos la absorbancia debida al pigmento. En la prctica se medir la absorbancia de cada uno de los pigmentos entre 350 y 700 nm a intervalos de 25 nm, es decir a 350, 375, 400 ....... 700 nm. Cuando se est cerca de un mximo de absorcin, las lecturas se harn de 5 en 5 nm. En primer lugar se mide la absorbancia de la solucin de pigmento y se procede del siguiente modo: a) Se selecciona la longitud de onda b) Se introduce la cubeta con la solucin de pigmento y se toma la lectura de absorbancia c) Se selecciona una nueva longitud de onda y as sucesivamente A continuacin se repite el mismo procedimiento pero con el blanco (previamente se habr lavado la cubeta con el propio disolvente para eliminar restos de pigmento). Se procede como con el pigmento y se anotan las lecturas de absorbancia. 4. RESULTADOS A la absorbancia obtenida en la solucin de pigmento a cada una de las longitudes de onda se le resta la absorbancia del blanco a esa misma longitud de onda. Los resultados se representan en papel milimetrado utilizando una misma grfica para los cuatro pigmentos Dis.= Absorbancia de la disolucin Blco.=Absorbancia del blanco Pig.=Absorbancia del pigmento = Absorbancia de la disolucin - Absorbancia del blanco Cloroflida a Longitud de onda Dis. Blco. Pig. Cloroflida b Dis Blco. Pig. Xantofila Dis. Blco. Pig. Carotenos Dis. Blco. Pig.