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El tejido nervioso es un tejido de origen ectodrmico, ectodrmico formado por corpsculos bien diferenciados, de naturaleza estrellada con numerosas prolongaciones, una mas larga que las dems, y tienen por objeto establecer relacin dinmica con otros elementosde su misma naturaleza o de tejidos subordinados. ( ajal!.
Tipos de muestra
Biopsia cerebral o me !lar e car"c#er ia$%&s#ico 'ra$me%#os #!morales e resecci&% %e!ro(!ir)r$ica Ma#erial e %ecropsia *cerebro + me !la espi%al, Reseccio%es #ra%ses-e%oi ales e lesio%es .ipo-isiarias *sis#ema %e!roe% ocri%o,
MTODOS
Debe ser retirado lo mas rpido posible Colocar en abundante fijador Cubrir con gasa para manipular Hacer cortes con cuchillo muy afilado
FIJADORES
'ormol b!--er 'ormol sali%o *Na/l, 'ormol3brom!ro e amo%io Li(!i o e M4ller *l5(!i o e Or#., Aci o &smico 'i1a ores a base e .ip%&#icos6
7i ra#o e cloral Vero%al
IDEN2I'I/A/I8N
/OLORA/I8N
19 /oloraci&% para %e!ro%as + c!erpos e Nissl 29 /oloraci&% para $l5as 39 /oloraci&% para 0ai%as e mieli%a
IM:RE;NA/I8N AR;<N2I/A
Patologas en SNC
EN/E'ALI2IS Y MENIN;I2IS 2UBER/ULOSA6 =IE7L3 NEELSEN AMILOIDE6 ROJO /ON;O MEORRA;IAS AN2I;UAS6 7EMOSIDERINA MEDIAN2E REA//ION DE :ERLS DE:OSI2O DE /AL/IO /ONSE/UEN/IA DE /UADORS IN'E//IOSOS VIRALES6 VON KOSSA EN'ERMEDADES DESMIELINI=AN2ES6 ES/LEROSIS MUL2I:LE6 2E/NI/AS :ARA LA MIELINA
Cuerpos neuronales y sustancia de Nissl Colorantes : azul de metileno, azul de toluidina , tionina, violeta de cresilo galocianina
Cuerpos neuronales y prolongaciones Mtodo de Golgi para somas y prolongaciones nerviosas. Mtodo de Kluver-Barrera para ncleos, grumos de Nissl y vainas de mielina. Mtodo del nitrato de plata de Ca al para terminaciones a!"nicas. Mtodo de Bielsc#o$s%y cilindros e es y dendritas Neuroglas: Mtodo del su&limado de oro de Ca al para astrogla. Mtodo del car&onato de plata de 'io-(ortega para microglia. Mtodo de Golgi-(ortega para oligodendroglia. )cnica de (olzer para astrogla Sistema nervioso perifrico )er"!ido de osmio vainas de mielina *zul de toluidina vainas de mielina y cuerpos neuronales +denti,icaci"n enzim-tica *cetilcolina esterasa.
Corteza cerebelo H - E
www.wesapiens.org/es/.
3. IMPRE"NACI%NES AR"NTICAS
Aplicadas al sistema nervioso tienen un fundamento emprico, con gran nmero de modificaciones Dependen del rgano del !N "ue se "uiera identificar #referentemente incluir en celoidina Cortes entre $% y $& 'm.
Les neurones forment un rseau continu; leurs membranes sont lies (ils partagent le mme cytoplasme) : thorie rticulariste
Les neurones ne sont pas lis physiquement les uns aux autres; ce sont des cellules indpendantes : thorie neuroniste
N()*+NA!
19 'i1aci&% e blo(!es e 2 mm9 e espesor *m? !la o cerebro e a%imal a !l#o e% -ormol al 10@> e 3 a 1A 5as9 29 Re#allar los blo(!es + s!mer$irlos e% la sol!ci&% e piri i%a>333333 2 5as9 39 La0ar e% a$!a corrie%#e 333333333333333333333333333333333333333333333333333312 .oras9 B9 I%mersi&% e% -ormol al 10@ 333333333333333333333333333333333333333333333333.as#a s! cor#e9 A9 /or#e por co%$elaci&% *20330 micras,9 C9 La0ar e% a$!a es#ila a *AD,9 D9 I%#ro !cir e% sol!ci&% e %i#ra#o e pla#a> m"s !%as $o#as e piri i%a .as#a (!e los cor#es #ome% color amarillo9 E% -r5o 623B .oras9 E% calie%#e6 !%os mi%!#os9 E9 Re !cci&% e% la sol!ci&% -ormol3.i ro(!i%o%a333333333333333333333333333 mi% F9 La0ar e% ab!% a%#e AD 109 Des.i ra#as> aclarar + mo%#ar9
,-.+D+ D( N/.*A.+ D( #0A.A D( CA1A0, PARA TERMINACIONES NERVIOSAS 1.- Fijacin de blotques de 2 mm. de espesor ( mdula o cerebro de animal adulto en formol al 10%, de 3 a 15 das. 2.- Retallar los bloques y sumergirlos en la solucin de piridina,------ 2 das. 3,- Lavar en agua corriente ----------------------------------------------------12 horas. 4.- Inmersin en formol al 10% ------------------------------------------------hasta su corte. 5.- Corte por congelacin (20-30 micras). 6.- Lavar en agua destilada (AD). 7.- Introducir en solucion de nitrato de plata, ms unas gotas de piridina hasta que los cortes tomen color amarillo. En fro (2-4 horas). En caliente (unos minutos). 8.- Reduccin en la solucin formol-hidroquinona--------------------------3 min 9.- Lavar en abundante AD 10.- Deshidratas, aclarar y montar. Las terminaciones axnicas ulares etc. se tien en negro sobre fondo claro.
M)todo de 3iels*4o5s6,
MTODOS PARA NE RONAS
"olgi
MTODOS PARA NE RONAS
/oloraci&% $ris6
Biclor!ro e merc!rio
"olgi
MTODOS PARA NE RONAS 19 :ieGas m!+ -rescas e me%os c 3 mm9 c espesor9 Se -i1a% e% 2A0ml9 e la Sol!ci&% e Hopsc.3-ormol3bicroma#o por 2B .oras9 29 :asar las pieGas a la Sol!ci&% e bicroma#o e po#asa al 3>A@ por 23C 5as9 39 :asar las pieGas a !% baIo co% Sol!ci&% e %i#ra#o e pla#a> se -orma !% precipi#a o ro1iGo i%me ia#ame%#e> + se pasa a o#ro baIo e la misma> o% e perma%ecer" e 2B a 3C .oras9 B9 /or#e por co%$elaci&% DA3100 micras9 A9 Des.i ra#aci&% prolo%$a a6 alco.ol e FC@ 3 1A mi%9 Alco.ol absol!#o 3 pases e 10 mi%9 ca a !%o9 C9 Aclarar co% carboJilol3creoso#a 2 0eces e 1A mi%9 Jilol 3 0eces e 10 mi%9 ca a !%a + mo%#ar co% ab!% a%#e b"lsamo9 RES !TADOS Somas %e!ro%ales> e% ri#as> espi%as e% r5#icas> 0asos + ocasio%al me%#e eleme%#os $liales> e% %e$ro sobre -o% o amarillo
3iel*4o5s6,
para cili% ros e1es + e% ri#as e#c9
Corte en parafina
E9 F9
RES !TADOS
Ncleos y grumos de Nissl color rojo-violeta Vai!as de mieli!a a"ul oscuro
ll Neurogla:
-Mtodo del sublimado de oro de Cajal para astrogla. - Mtodo del carbonato de plata de Rio-Hortega para microglia. - Mtodo de Golgi-Hortega para oligodendroglia.
:ieGas -rescas e cerebro e mam5-ero se -i1a% e 2 a 1A 5as e% Sol!ci&% e -ormol3brom!ro9 /or#e por co%$elaci&% 9 303B0 micras La0a o bre0e e% AD BaIo e% Sol!ci&% e clor!ro e oro e% !%a placa e :e#ri 9
S!mer$ir e% ella B3C cor#es> eJ#e% i os e% el -o% o + si% co%#ac#ar !%os co% o#ros9 La #empera#!ra ebe ser 2B32CK/> el #iempo B3C .oras + e% la osc!ri a 9
La0a o r"pi o e% AD 'i1aci&% e% Sol!ci&% 'i1a ora93333333A310 mi%9 La0a o e% alco.ol e D0K/9 EJ#e%si&% sobre el por#a + seca o co% papel e -il#ro9 Des.i ra#ar> aclarar co% ese%cia e or?$a%o + Jilol> + mo%#ar9 RESUL2ADOS As#roci#os e color ro1o p)rp!ra9 Ne!ro%as e% rosa p"li o o 0iole#a9
5. 6. 7. 8. 9.
Lavado rpido en AD Fijacin en Solucin Fijadora.-------5-10 min. Lavado en alcohol de 70C. Extensin sobre el porta y secado con papel de filtro. Deshidratar, aclarar con esencia de organo y xilol, y montar.
RES !TADOS Astrocitos de color rojo prpura. Neuronas en rosa plido o violeta.
GANGLIO SIMPTICO(MOTOR) Tincin argntica virada cloruro de oro y Contrastada con azul de metilo
N()*+304A!
Impre$%acio%es ar$?%#icas
T)*ni*a de $ol+er
astroglia
anatpat.unicamp.br
NERVIOS PERIFRICOS
Los %er0ios peri-?ricos so% .aces e -ibras %er0iosas *aJo%es, ro ea os por 0arias .o1as e re0es#imie%#o (!e correspo% e% a #e1i o co%ec#i0o9 Es#os .aces #ambi?% se co%oce% como -asc5c!los
SN:
DE;ENERA/ION MALLERIANA DEL ANON6 m?#oi o e HLUVER3BARRERA
NERVIOS PERIFRICOS
epineuro
Nervios perifricos
NERVIOS PERIFRICOS
Nervio
Epineuro
Tcnica H - E
endoneuro
Clulas de Schwan
Tetrxido de osmio
conganat.uninet.edu
Tejido nervioso en corte semi-fino para M-E, teido con azul de toluidina (Profesor Eduardo. Couve Microscopa electrnica Universidad de Valparaso)
"anglios simp;ti*os
INMUNOFLUORESCENCIA
Mtodo de DEOXIGLUCOS
! DI CTI" #$ C
Cada animal se mantiene en ayunas 12 horas. una hora antes de realizar el experimento, se la inyecta intraperitonealmente 25 mCi. de 2-DG, 2(14C (U)) Trascurrido el experimento, se procede a: 1.- Sacrificio por decapitacin y extraccin inmediata del cerebro 2.- Congelacin en N2 lquido, corte en cristato a 50 micras, secado instantneo en placa caliente y colocacin sobre placa autorradiogrfica (Kodak XOMAT) 3.- Mantener en congelador de -80 C durante 15 das y revelado. 4.- Captura y anlisis de imagen (Image 8a). 5.- Comparacin de imgenes homologas procedentes de animales experimentales y animales testigos respectivos.
RES !TADO