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TEJIDO NERVIOSO

UV 2013 ALONDRA DONOSO JIMENA LE ROY

El tejido nervioso es un tejido de origen ectodrmico, ectodrmico formado por corpsculos bien diferenciados, de naturaleza estrellada con numerosas prolongaciones, una mas larga que las dems, y tienen por objeto establecer relacin dinmica con otros elementosde su misma naturaleza o de tejidos subordinados. ( ajal!.

Tipos de muestra
Biopsia cerebral o me !lar e car"c#er ia$%&s#ico 'ra$me%#os #!morales e resecci&% %e!ro(!ir)r$ica Ma#erial e %ecropsia *cerebro + me !la espi%al, Reseccio%es #ra%ses-e%oi ales e lesio%es .ipo-isiarias *sis#ema %e!roe% ocri%o,

MTODOS

/or#es e% para-i%a /or#es por co%$elaci&% pre0ia -i1aci&% 2i%ci&% e% blo(!e

Debe ser retirado lo mas rpido posible Colocar en abundante fijador Cubrir con gasa para manipular Hacer cortes con cuchillo muy afilado

FIJADORES
'ormol b!--er 'ormol sali%o *Na/l, 'ormol3brom!ro e amo%io Li(!i o e M4ller *l5(!i o e Or#., Aci o &smico 'i1a ores a base e .ip%&#icos6
7i ra#o e cloral Vero%al

IDEN2I'I/A/I8N
/OLORA/I8N
19 /oloraci&% para %e!ro%as + c!erpos e Nissl 29 /oloraci&% para $l5as 39 /oloraci&% para 0ai%as e mieli%a

IM:RE;NA/I8N AR;<N2I/A

Patologas en SNC
EN/E'ALI2IS Y MENIN;I2IS 2UBER/ULOSA6 =IE7L3 NEELSEN AMILOIDE6 ROJO /ON;O MEORRA;IAS AN2I;UAS6 7EMOSIDERINA MEDIAN2E REA//ION DE :ERLS DE:OSI2O DE /AL/IO /ONSE/UEN/IA DE /UADORS IN'E//IOSOS VIRALES6 VON KOSSA EN'ERMEDADES DESMIELINI=AN2ES6 ES/LEROSIS MUL2I:LE6 2E/NI/AS :ARA LA MIELINA

Cuerpos neuronales y sustancia de Nissl Colorantes : azul de metileno, azul de toluidina , tionina, violeta de cresilo galocianina

RES MEN DE A!" NAS TCNICAS PARA TEJIDO NER#IOSO

Cuerpos neuronales y prolongaciones Mtodo de Golgi para somas y prolongaciones nerviosas. Mtodo de Kluver-Barrera para ncleos, grumos de Nissl y vainas de mielina. Mtodo del nitrato de plata de Ca al para terminaciones a!"nicas. Mtodo de Bielsc#o$s%y cilindros e es y dendritas Neuroglas: Mtodo del su&limado de oro de Ca al para astrogla. Mtodo del car&onato de plata de 'io-(ortega para microglia. Mtodo de Golgi-(ortega para oligodendroglia. )cnica de (olzer para astrogla Sistema nervioso perifrico )er"!ido de osmio vainas de mielina *zul de toluidina vainas de mielina y cuerpos neuronales +denti,icaci"n enzim-tica *cetilcolina esterasa.

TCNICAS $ISTO!%"ICAS PARA SN

Corteza cerebelo H - E

&'( T)*ni*a de Nissl


:ara %e!ro%as + c!erpos e Nissl6 !sa colora%#es b"sicos e a%ili%a (!e se !%e% a los "ci os %!cleicos> se precisa !% p7 "ci o> se i-ere%cia co% alco.ol e#5lico se -i1a la coloraci&% co% molib a#o e amo%io
medicina-uba.blogspot.com/2009/05/tecnicas-de-tincion-del-sistema.html

www.wesapiens.org/es/.

Sustancia gris mdula espinal Tcnica de Nissl

Corteza cerebelosa con tcnica de Nissl

T)*ni*a del a+ul de toluidina


2a%#o para el c!erpo %e!ro%al como para la i e%#i-icaci&% e s!s#a%cia e Nissl6 Da% b!e%os res!l#a os a em"s6 azul de metileno, azul de toluidina, tionina, violeta de cresilo y galocianina Se recomie% a !sar e% sol!cio%es #ampo%a as

Corteza cerebelo Clulas piramidales Azul de metileno

Conducto del epndimo H-E

TCNICAS NE RO$ISTO!%"ICAS l Neuronas , elementos


-Mtodo de Golgi para somas y prolongaciones nerviosas. - Mtodo de Kluver-Barrera para ncleos, grumos de Nissl y vainas de mielina. - Mtodo del nitrato de plata de Cajal para terminaciones axnicas.

3. IMPRE"NACI%NES AR"NTICAS
Aplicadas al sistema nervioso tienen un fundamento emprico, con gran nmero de modificaciones Dependen del rgano del !N "ue se "uiera identificar #referentemente incluir en celoidina Cortes entre $% y $& 'm.

Camillo Golgi (1843-1926)

Santiago Ramon y Cajal (1853-1934)

Les neurones forment un rseau continu; leurs membranes sont lies (ils partagent le mme cytoplasme) : thorie rticulariste

Les neurones ne sont pas lis physiquement les uns aux autres; ce sont des cellules indpendantes : thorie neuroniste

Prix Nobel conjoint de science de 1906

N()*+NA!

MTODO DE NITRATO DE PLATA DE CAJAL, PARA TERMINACIONES NERVIOSAS

Nitrato de plata de Ca-al


,-.+D+! #A*A N()*+NA!

19 'i1aci&% e blo(!es e 2 mm9 e espesor *m? !la o cerebro e a%imal a !l#o e% -ormol al 10@> e 3 a 1A 5as9 29 Re#allar los blo(!es + s!mer$irlos e% la sol!ci&% e piri i%a>333333 2 5as9 39 La0ar e% a$!a corrie%#e 333333333333333333333333333333333333333333333333333312 .oras9 B9 I%mersi&% e% -ormol al 10@ 333333333333333333333333333333333333333333333333.as#a s! cor#e9 A9 /or#e por co%$elaci&% *20330 micras,9 C9 La0ar e% a$!a es#ila a *AD,9 D9 I%#ro !cir e% sol!ci&% e %i#ra#o e pla#a> m"s !%as $o#as e piri i%a .as#a (!e los cor#es #ome% color amarillo9 E% -r5o 623B .oras9 E% calie%#e6 !%os mi%!#os9 E9 Re !cci&% e% la sol!ci&% -ormol3.i ro(!i%o%a333333333333333333333333333 mi% F9 La0ar e% ab!% a%#e AD 109 Des.i ra#as> aclarar + mo%#ar9

!as termina*iones a./ni*as se ti0en en negro so1re 2ondo *laro'

Depto Ciencias Biolgicas y Reproductivas Universidad de Valparaso

,-.+D+! #A*A N()*+NA!

,-.+D+ D( N/.*A.+ D( #0A.A D( CA1A0, PARA TERMINACIONES NERVIOSAS 1.- Fijacin de blotques de 2 mm. de espesor ( mdula o cerebro de animal adulto en formol al 10%, de 3 a 15 das. 2.- Retallar los bloques y sumergirlos en la solucin de piridina,------ 2 das. 3,- Lavar en agua corriente ----------------------------------------------------12 horas. 4.- Inmersin en formol al 10% ------------------------------------------------hasta su corte. 5.- Corte por congelacin (20-30 micras). 6.- Lavar en agua destilada (AD). 7.- Introducir en solucion de nitrato de plata, ms unas gotas de piridina hasta que los cortes tomen color amarillo. En fro (2-4 horas). En caliente (unos minutos). 8.- Reduccin en la solucin formol-hidroquinona--------------------------3 min 9.- Lavar en abundante AD 10.- Deshidratas, aclarar y montar. Las terminaciones axnicas ulares etc. se tien en negro sobre fondo claro.

M)todo de 3iels*4o5s6,
MTODOS PARA NE RONAS

Impre$%a c?l!las %er0iosas + s!s prolo%$acio%es U#iliGa6


Ni#ra#o e pla#a Ni#ra#o e pla#a amo%iacal *#o%ali a marr&%, 'ormol A$!a es#ila a 3 clor!ro e A!3 2ios!l-a#o e so io

"olgi
MTODOS PARA NE RONAS

2ie%e os m?#o os6


Impre$%aci&% %e$ra6
'i1a co% l5(!i o e M4ller *s!blima o 7$, Impre$%ar co% %i#ra#o e pla#a

/oloraci&% $ris6
Biclor!ro e merc!rio

"olgi
MTODOS PARA NE RONAS 19 :ieGas m!+ -rescas e me%os c 3 mm9 c espesor9 Se -i1a% e% 2A0ml9 e la Sol!ci&% e Hopsc.3-ormol3bicroma#o por 2B .oras9 29 :asar las pieGas a la Sol!ci&% e bicroma#o e po#asa al 3>A@ por 23C 5as9 39 :asar las pieGas a !% baIo co% Sol!ci&% e %i#ra#o e pla#a> se -orma !% precipi#a o ro1iGo i%me ia#ame%#e> + se pasa a o#ro baIo e la misma> o% e perma%ecer" e 2B a 3C .oras9 B9 /or#e por co%$elaci&% DA3100 micras9 A9 Des.i ra#aci&% prolo%$a a6 alco.ol e FC@ 3 1A mi%9 Alco.ol absol!#o 3 pases e 10 mi%9 ca a !%o9 C9 Aclarar co% carboJilol3creoso#a 2 0eces e 1A mi%9 Jilol 3 0eces e 10 mi%9 ca a !%a + mo%#ar co% ab!% a%#e b"lsamo9 RES !TADOS Somas %e!ro%ales> e% ri#as> espi%as e% r5#icas> 0asos + ocasio%al me%#e eleme%#os $liales> e% %e$ro sobre -o% o amarillo

METODO DE GOLGI-KOPSCH PARA SOMAS, DENDRITAS Y ESPINAS NEURONALES.

3iel*4o5s6,
para cili% ros e1es + e% ri#as e#c9

Corte en parafina

#aina de mielina7 m)todo de 8lu9er(3arrera


19 29 39 B9 A9 C9 D9 Despara-i%ar e .i ra#ar .as#a alco.ol e FCK/99 Sol!ci&% e aG!l l!Jol e% es#!-a *3DK/ o C0K/, e 12 a 20 .oras9 EJ#raer el eJceso e colora%#e co% alco.ol e FCK/> A310 se$9 Di-ere%ciar co% sol!ci&% e carbo%a#o e li#io> A310 se$9 :asar 0arias 0eces por alco.ol e D0K/ ba1o co%#rol microsc&pico .as#a (!e se i-ere%cie% bie% s!s#a%cia bla%ca + s!s#a%cia $ris9 La0ar e% AD 9 2eIir co% sol!ci&% e 0iole#a e /resilo C mi%!#os como m5%imo9 *No#a6 a%#es e !sar es#a sol!ci&% se le aIa e% 1A $o#as e ac9 ac?#ico> se -il#ra + se calie%#a a C0K/9 Di-ere%ciar e% alco.ol e FCK/9 Des.i ra#ar aclarar + mo%#ar9

E9 F9

RES !TADOS
Ncleos y grumos de Nissl color rojo-violeta Vai!as de mieli!a a"ul oscuro

MTODO DE KLUVER-BARRERA PARA NCLEOS, GRUMOS DE NISSL Y VAINAS DE MIELINA

ll Neurogla:
-Mtodo del sublimado de oro de Cajal para astrogla. - Mtodo del carbonato de plata de Rio-Hortega para microglia. - Mtodo de Golgi-Hortega para oligodendroglia.

Su1limado de oro de Ca-al para astro*itos


NE RO"!:AS

:ieGas -rescas e cerebro e mam5-ero se -i1a% e 2 a 1A 5as e% Sol!ci&% e -ormol3brom!ro9 /or#e por co%$elaci&% 9 303B0 micras La0a o bre0e e% AD BaIo e% Sol!ci&% e clor!ro e oro e% !%a placa e :e#ri 9
S!mer$ir e% ella B3C cor#es> eJ#e% i os e% el -o% o + si% co%#ac#ar !%os co% o#ros9 La #empera#!ra ebe ser 2B32CK/> el #iempo B3C .oras + e% la osc!ri a 9

La0a o r"pi o e% AD 'i1aci&% e% Sol!ci&% 'i1a ora93333333A310 mi%9 La0a o e% alco.ol e D0K/9 EJ#e%si&% sobre el por#a + seca o co% papel e -il#ro9 Des.i ra#ar> aclarar co% ese%cia e or?$a%o + Jilol> + mo%#ar9 RESUL2ADOS As#roci#os e color ro1o p)rp!ra9 Ne!ro%as e% rosa p"li o o 0iole#a9

,-.+D+ D(0 !)20/,AD+ D( +*+ D( CA1A0 #A*A A!.*+304A


1. Piezas frescas de cerebro de mamfero se fijan de 2 a 15 das en Solucin de formol-bromuro. 2. Corte por congelacin . 30-40 micras. 3. Lavado breve en AD 4. Bao en Solucin de cloruro de oro en una placa de Petri .
Sumergir en ella 4-6 cortes, extendidos en el fondo y sin contactar unos con otros. La temperatura debe ser 24-26C, el tiempo 4-6 horas y en la oscuridad.

5. 6. 7. 8. 9.

Lavado rpido en AD Fijacin en Solucin Fijadora.-------5-10 min. Lavado en alcohol de 70C. Extensin sobre el porta y secado con papel de filtro. Deshidratar, aclarar con esencia de organo y xilol, y montar.

RES !TADOS Astrocitos de color rojo prpura. Neuronas en rosa plido o violeta.

,-.+D+ D(0 !)20/,AD+ D( +*+ D( CA1A0 #A*A A!.*+304A N()*+304A!

GANGLIO SIMPTICO(MOTOR) Tincin argntica virada cloruro de oro y Contrastada con azul de metilo

N()*+304A!

MTODO DE GOLGI-HORTEGA, PARA OLIGODENDROGLIA

MTODO DE! CAR3ONATO DE P!ATA DE R:O( R:O($ORTE"A PARA MICRO"!:A

Otros m)todos "las


A%#ic!erpo :A;'6 I7L *as#roci#os -ibrosos, 2?c%ica e 7olGer eri0a o e la para-!csi%a,
U#iliGa 0iole#a e cris#al como colora%#e Mor e%#ar co% aci o -os-omol5b ico Di-ere%ciar co% acei#e e a%ili%a E%#re$a eJcele%#es res!l#a os e% sol!ci&% alco.ol3 cloro-ormo

Impre$%acio%es ar$?%#icas

T)*ni*a de $ol+er

astroglia

anatpat.unicamp.br

NERVIOS PERIFRICOS

Los %er0ios peri-?ricos so% .aces e -ibras %er0iosas *aJo%es, ro ea os por 0arias .o1as e re0es#imie%#o (!e correspo% e% a #e1i o co%ec#i0o9 Es#os .aces #ambi?% se co%oce% como -asc5c!los

NERVIOS PERIFRICOS Axon


Vaina de mielina Endoneuro Perineuro

epineuro Vasos sanguneos

SN:
DE;ENERA/ION MALLERIANA DEL ANON6 m?#oi o e HLUVER3BARRERA

NERVIOS PERIFRICOS

epineuro

Nervios perifricos

ENDONEURO: F. RETICULARES. PERINEURO: HAZ NERVIOSONERVIOSO- TCD EPINEURO: TCD Y TCL .

NERVIOS PERIFRICOS
Nervio

Epineuro

Tcnica H - E

endoneuro

Clulas de Schwan

Tetrxido de osmio
conganat.uninet.edu

Vaina retculo endoneural

Tejido nervioso en corte semi-fino para M-E, teido con azul de toluidina (Profesor Eduardo. Couve Microscopa electrnica Universidad de Valparaso)

"anglios simp;ti*os

*)lulas ganglionares en intestinos

Reaccin Ez. para acetilcolina

INMUNOFLUORESCENCIA

Mtodo de DEOXIGLUCOS

! DI CTI" #$ C

Cada animal se mantiene en ayunas 12 horas. una hora antes de realizar el experimento, se la inyecta intraperitonealmente 25 mCi. de 2-DG, 2(14C (U)) Trascurrido el experimento, se procede a: 1.- Sacrificio por decapitacin y extraccin inmediata del cerebro 2.- Congelacin en N2 lquido, corte en cristato a 50 micras, secado instantneo en placa caliente y colocacin sobre placa autorradiogrfica (Kodak XOMAT) 3.- Mantener en congelador de -80 C durante 15 das y revelado. 4.- Captura y anlisis de imagen (Image 8a). 5.- Comparacin de imgenes homologas procedentes de animales experimentales y animales testigos respectivos.

RES !TADO

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