Está en la página 1de 9

INTRODUCCIN

Helicobacter pylori (H. pylori) es una bacteria que se considera, presente en la mitad de la poblacin humana y es un problema de salud pblica a escala mundial. Puede evadir la respuesta inmune que provoca y permanecer durante toda la vida en el humano que la hospeda, sin producir enfermedad; sin embargo, bajo condiciones no bien establecidas en algunas personas, esta relacin puede cursar provocando diferentes patologas: gastritis, lceras, linfoma MALT de clulas B y cncer gstrico. La infeccin ocurre mayormente en pases en vas de desarrollo y estrechamente relacionado con factores socioeconmicos. Con respecto al origen, las investigaciones de Helicobacter pylori generalmente se han realizado a partir de muestras directas o indirectas de pacientes humanos. Sin embargo, pocos trabajos en el mundo dan cuenta de su hallazgo en agua y menos en agua de consumo de una poblacin. Muchas evidencias han demostrado que H. pylori est bien adaptado para adherirse a la mucosa gstrica. Sin embargo, es difcil establecer que sta sea su nico nicho ecolgico (Hegarty et al., 1999; Leclerc et al., 2002). Diversos estudios epidemiolgicos y ambientales son consistentes en plantear que el agua juega un rol importante en la transmisin (Klein et al., 1991; Goodman et al., 1996; Bunn et al., 2002; Cellini et al., 2004). Se ha determinado que H. pylori est presente en diversas fuentes de aguas: lagos, ros, agua potable superficial y subterrnea, aguas municipales y residuales y ambientes marinos costeros, encontrndose tambin como microorganismo libre en el agua de mar y asociado a organismos planctnicos.

OBJETIVOS: Conocer las caractersticas generales de helicobacter pylori y el estudio en el medio ambiente

ORIGEN:
Con respecto al origen, las investigaciones de Helicobacter pylori generalmente se han realizado a partir de muestras directas o indirectas de pacientes humanos. Sin embargo, pocos trabajos en el mundo dan cuenta de su hallazgo en agua y menos en agua de consumo de una poblacin.

1. PRESENCIA DE Helicobacter pylori EN EL MEDIO AMBIENTE.


Diferentes estudios sobre la transmisin de Helicobacter pylori muestran que los factores ambientales tienen un papel fundamental. Se ha descrito que en los reservorios medioambientales, como agua y alimentos, las clulas de Helicobacter pylori pueden transformarse desde una morfologa espiral cultivable a una morfologa ms condensada de aspecto cocoide, viable pero no cultivable. Estos cambios morfolgicos son acompaados de cambios metablicos y fisiolgicos. Este hecho supone un problema importante para el aislamiento de este microorganismo con los mtodos de aislamiento en cultivo tradicionales, y es probablemente la razn por la que no se ha conseguido aislar Helicobacter pylori de muestras ambientales aunque se ha detectado por tcnicas basadas en el anlisis de cidos nucleicos. Se han demostrado que Helicobacter pylori sobrevive bastante bien en el medio acutico. Estudios publicados recientemente realizados por tcnicas de ADN, detectan fundamentalmente Helicobacter pylori en ambientes marinos, aguas superficiales y subterrneas en Estados Unidos, as como en agua para el consumo humano en pases con diferentes niveles socioeconmicos como Per, Japn, Gambia, Mxico y Suecia.

1.1.

Relevancia de su presencia en el agua de consumo

Se ha sugerido que el consumo de agua contaminada es una fuente potencial de infeccin, pero se necesitan estudios adicionales para establecer un posible vnculo con la transmisin por el agua. El ser humano es la fuente principal de H. pylori y el microorganismo es sensible a los desinfectantes oxidantes. Por lo tanto, para proteger las aguas de consumo de H. pylori pueden aplicarse las medidas de control siguientes: prevencin de la contaminacin por residuos humanos y desinfeccin adecuada. El anlisis de Escherichia coli (o bien de coliformes termotolerantes) no es un ndice fiable de la presencia o ausencia de este microorganismo.

1.2.

El papel del agua de consumo en la transmisin de H. pylori.

Una variedad de mtodos moleculares y ensayos con anticuerpos en el mundo han sido utilizados para detectar la presencia de la bacteria en pozos, ros, en agua de consumo humano, en biofilmes asociados tanques de almacenamiento de agua y en tuberas de redes de distribucin (Ramrez, 2004; Shahamat, 1993), y se ha demostrado su sobrevivencia a la cloracin sin encontrarse correlacin con niveles de cloro en agua tratada con respecto a la prevalencia de la infeccin en poblacin de riesgo (Azevedo, 2006). No obstante, se ha determinado que el H. pylori suspendido en el agua tiene muy bajo poder de cultivo comparado con otros patgenos de origen acutico (Azevedo, 2006). Por mucho tiempo se consider que muchos de los problemas que se han encontrado en la recuperacin de formas viables de H. pylori en el agua, se debe a que estas pasan a formas cocoides o VPNC. Desde un punto de vista ms amplio, ahora se acepta que lo que ocurre es que estas bacterias no se logran cultivar bajo mtodos rutinarios y convencionales de laboratorio, sin embargo se ha demostrado que formas cocoides de H. pylori son capaces de colonizar la mucosa gstrica y causar gastritis en ratones (Touati, 2003).Actualmente se presenta evidencia sobre la mayor resistencia de H. pylori con respecto a E. coli, al cloro y al ozono, por lo que, este microorganismo es capaz de tolerar desinfeccin en sistemas de distribucin de agua (Krumbiegel, 2004). El agua tiene as un rol significativo en la transmisin de la infeccin por H. pylori en el Per. Tambin se ha aislado DNA del H. pylori en el agua para consumo humano en el Japn, confirmando nuestros hallazgos. Esto explica los altos porcentajes de reinfeccin que observamos en el Per. El cloro inhibe el crecimiento del H. pylori, bacteria que es ms resistente al cloro residual que la E. Coli, indicador tradicional para la calidad microbiolgica del agua para consumo humano, por lo que la ausencia de unidades formadoras de colonias de E. Coli (UFC) no descarta la presencia de H. pylori. Se ha determinado que la media CT99 de cloro residual para el H. pylori (en condiciones de laboratorio) es de 0.299 mg/L (el CT99 es la concentracin de cloro residual por el tiempo de contacto con el desinfectante que produce una reduccin del 99% de organismos viables). Cuando los microorganismos estn atrapados en partculas o adsorbidos a superficies, pueden estar protegidos de los procesos de desinfeccin. En condiciones reales tales como en las redes de distribucin del agua el H. pylori est agregado o asociado con debris celulares, algunos de los cuales no pueden ser removidos totalmente por el tratamiento del agua. Estos agregados son considerablemente ms resistentes al cloro. Las bacterias que han crecido en diversas superficies (biofilm) son 150 a 3000 veces ms resistentes al cloro que las bacterias no adheridas. El H. pylori es capaz deformar biofilms de agua para consumo humano, mezclado con otras especies, pudiendo sobrevivir dentro de matrices de biofilm en sistemas de distribucin de agua con concentraciones adecuadas de Cloro. 2. MTODOS DE DETECCIN DE H. PYLORI EN AMBIENTES ACUTICOS

En los ltimos 15 aos, la mayora de los estudios se han orientado al desarrollo de mtodos que demuestren la presencia de H. pylori en el agua, los cuales han contribuido a la hiptesis de la transmisin acutica de este patgeno. El cultivo, la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), la inmunofluorescencia y la hibridacin in situ por fluorescencia (FISH) son los principales mtodos que han sido utilizados para determinar la presencia de H. pylori en diferentes fuentes de agua (Tabla I). A continuacin se describe brevemente cada uno de estos mtodos. Cultivo El cultivo de H. pylori en ambientes distintos al estmago humano ha sido difcil, debido a cambios morfolgicos de esta bacteria y al sobrecrecimiento o competencia de otros microorganismos. Se han realizado esfuerzos por cultivar esta bacteria en muestras de agua usando medios de crecimiento alternativos bajo condiciones microaeroflicas variables (Hulten et al., 1996; Lu et al., 2002; Degnan et al., 2003; Moreno et al., 2003; Carbone et al., 2005). Hasta el presente, se han reportado algunos casos de cultivo viable de este patgeno a partir de muestras de aguas residuales, agua marina y asociado al plancton, confirmando la presencia de H. pylori por anlisis de secuencias del gen 16S del ARNr (Lu et al., 2002; Cellini et al., 2005; Fernndez et al., 2007). Debido a las dificultades que presentan las tcnicas tradicionales de cultivo en recuperar este microorganismo del ambiente, la PCR y la inmunofluorescencia han sido usadas exitosamente para la deteccin de H. pylori.

a. Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) La PCR es un mtodo que permite la amplificacin de genes especficos para detectar H. pylori en distintas fuentes de agua. Algunos de ellos, como ureA (ureasa); hpaA (adhesina); cagA (gen que codifica para la protena inmunodominante CagA en la isla de patogenicidad, PAI cagA); y glmM (fosfoglucosamina mutasa), son los comnmente seleccionados con la finalidad de evitar la reactividad cruzada entre H. pylori y otras bacterias. Sin embargo, otras especies bacterianas estrechamente relacionadas y subespecies desconocidas del gnero Helicobacter podran interferir en los ensayos de PCR (Engstrand, 2001). Diversos trabajos han detectado por PCR a este patgeno en ambientes acuticos de distintas partes del mundo, donde existe contaminacin fecal animal o humana (Tabla I). Otros estudios han considerado la separacin inmunomagntica como un paso previo a la PCR para mejorar la sensibilidad de este mtodo molecular y obtener una mayor recuperacin de ADN (Enroth y Engstrand, 1995; Hulten et al., 1996; Hulten et al., 1998). La separacin inmunomagntica consiste en el uso de perlas magnticas cubiertas de anticuerpos especficos para antgenos de superficie de bacterias patgenas, que se

aplica para separar y concentrar estos microorganismos a partir de muestras heterogneas (Enroth y Engstrand, 1995). b. Inmunofluorescencia Las tcnicas inmunolgicas, entre ellas la inmunofluorescencia, son usadas para detectar, identificar y cuantificar antgenos en diferentes muestras. Esta tcnica ha sido aplicada por algunos autores para determinar la presencia de H. pylori metablicamente activa en fuentes de agua de consumo humano, utilizando un anticuerpo monoclonal anti-H. pylori marcado con un fluorforo. En estos estudios se identific H. pylori en muestras de agua y su asociacin con la colonizacin gstrica (Tabla I); sin embargo, no se mostraron evidencias de la viabilidad de la bacteria en el agua. En vista que existen pocos estudios realizados con inmunofluorescencia y que el nmero de muestras no es representativo, se considera necesario nuevas investigaciones para demostrar la sensibilidad y especificidad de esta tcnica inmunolgica. c. Hibridacin in situ por fluorescencia (FISH) Otra tcnica de gran utilidad para la deteccin de este patgeno en muestras de agua es la hibridacin in situ por fluorescencia (Moreno et al., 2003; Piqueres et al., 2006), la cual ha demostrado ser efectiva para la visualizacin de cidos nucleicos de microorganismos morfolgicamente intactos en su ambiente. El proceso involucra marcar sondas de ADN o ARN acopladas a un fluorforo, seguido de su hibridacin con la muestra y finalmente la visualizacin de las clulas marcadas usando microscopa de fluorescencia (Amann et al., 1990). Pocos estudios han evaluado la efectividad de FISH para la deteccin directa de clulas viables de H. pylori en muestras de agua dulce, potable, marina (Tabla I) y agua tratada con hipoclorito de sodio (Moreno et al. 2007). Aunque esta tcnica necesita una evaluacin ms exhaustiva, ha demostrado ser sensible, especfica, cuantitativa y rpida para detectar clulas completas de H. pylori en muestras ambientales. 3. Estrategias de Supervivencia de H. pylori en Ambientes Acuticos Varias hiptesis han sido propuestas para explicar las estrategias de supervivencia de las bacterias patgenas como H. pylori en ambientes acuticos. La formacin de biopelculas, la asociacin al plancton y el estado viable no cultivable (VNC) han sido las estrategias ms importantes reportadas para este microorganismo y se describen a continuacin. Biopelculas Las biopelculas son comunidades complejas de microorganismos adheridas a superficies o asociadas a interfases (Davey y O toole, 2000). La supervivencia de microorganismos patgenos, incluyendo a H. pylori, puede ser prolongada por la colonizacin activa de biopelculas como las encontradas en los sistemas de almacenamiento y distribucin de agua potable. Las biopelculas le proporcionan a la microbiota asociada un sustrato que le permite su multiplicacin, la adquisicin de nutrientes, el mantenimiento de un ambiente fisicoqumico apropiado y la resistencia a agentes antimicrobianos (Davey y O toole, 2000; Park et al., 2001).

Existen estudios in vitro que evidencian la formacin de biopelculas por H. pylori en medio de cultivo (Mackay et al., 1999; Stark et al., 1999; Cole et al., 2004). Azevedo et al. (2003), utilizando una nueva tecnologa basada en sondas fluorescentes denominada cidos nucleicos peptdicos (PNA, por sus siglas en ingls), demostraron que H. pylori forma biopelculas con otros microorganismos en un modelo de sistema de agua potable. Otros autores han determinado la formacin natural de biopelculas de este microorganismo en el agua potable. Park et al. (2001) detectaron Helicobacter sp. en una biopelcula de agua potable tomada de un sistema municipal de distribucin de agua localizado en el noreste de Escocia. Sin embargo, la deteccin por PCR no fue confirmada por anlisis de secuencias y no excluye la posibilidad de falsos positivos. A diferencia del estudio realizado por Park et al. (2001), Bunn et al. (2002) y Watson et al. (2004) demostraron la presencia del ADN de H. pylori en material de biopelculas de sistemas de distribucin de agua, mediante la confirmacin de la secuencia del gen 16S del ARNr. Trabajos recientes realizados por Braganra et al. (2007) detectaron mediante FISH, clulas de H. pylori en forma espiral (forma activa de la bacteria) en biopelculas presentes en sistemas de distribucin de agua potable. Estos resultados evidencian que el agua potable puede ser una ruta de transmisin de H. pylori y que las biopelculas pueden actuar como ambientes de acumulacin pasiva de especies de Helicobacter o como un reservorio importante de infeccin. Asociacin de H. pylori al plancton Se ha demostrado que las bacterias asociadas al plancton en ambientes acuticos sobreviven por perodos ms prolongados que en su forma libre, posiblemente como una adaptacin a los bajos niveles de nutrientes. El plancton provee de una fuente de C y N, as como proteccin contra el estrs y los cambios ambientales. La asociacin de H. pylori al plancton ha sido de particular inters en tres estudios desarrollados en ambientes marinos. Se ha observado igualmente que la presencia de H. pylori fue mayor cuando ocurre la surgencia de coppodos (crustceos microscpicos que forman parte del plancton), sugiriendo que estos organismos podran representar un microhbitat favorable para la bacteria (Cellini et al., 2004; Carbone et al., 2005; Fernndez et al., 2007). Adicionalmente, Cellini et al. (2005) demostraron que H. pylori poda salir del estado VNC solamente en presencia de un coppodo marino (Tigriopus fulvus), aportando evidencias sobre el papel de estos crustceos en la supervivencia y transmisin de H. pylori. Otros estudios experimentales han reportado que H. pylori es capaz de propagarse y permanecer viable por muchas semanas dentro de una amiba de vida libre (Acanthamoeba castellanii) bajo condiciones experimentales (Winiecka-Krusnell et al., 2002). De forma similar a lo que ocurre con el plancton, esta amiba le aporta nutrientes y condiciones favorables a la bacteria para su crecimiento, y puede contribuir a su persistencia y propagacin en el ambiente. Por otra parte, Azevedo et al. (2006) demostraron que H. pylori forma agregados que se adhieren a superficies abiticas expuestas al agua. Las superficies de cobre fueron especialmente favorables para la permanencia de la bacteria en su forma espiral, as como para la formacin de un gran nmero de aglomerados. Los autores sugieren que la coagregacin con los consorcios heterotrficos autctonos existentes en el agua es necesaria para la supervivencia a largo plazo de H. pylori a biopelculas asociadas a sistemas de agua potable. El estudio de la adhesin de H. pylori al plancton y a otras

superficies abiticas en los ambientes acuticos es importante para descifrar sus mecanismos de supervivencia y es un rea que requiere de mayor investigacin. Estado viable no cultivable En respuesta a condiciones de estrs ambiental, algunas bacterias adoptan un estado que se ha definido como viable no cultivable (VNC); viable porque mantiene la capacidad de realizar funciones metablicas, y no cultivable porque no puede aislarse mediante mtodos de cultivo en el laboratorio. Si las condiciones ambientales vuelven a ser favorables, el microorganismo puede retornar al estado cultivable. Durante el estado VNC las bacterias pueden permanecer adheridas a la superficie del fitoplancton y el zooplancton, mantenindose por perodos prolongados en el medio marino (Borroto, 1998; Cellini et al., 2005; Oliver, 2005). Al entrar en contacto con el agua, H. pylori es capaz de adoptar el estado VNC, transformndose de la forma tpica espiral a una forma cocoide que probablemente dificulta su cultivo (Oliver, 2005; Bellack et al., 2006). Algunos autores consideran que la transformacin a la forma cocoide puede ser la manifestacin de la muerte celular (Kusters et al., 1997; Azevedo et al., 2004; Bellack et al., 2006) mientras que otros autores consideran que este estado es una forma durmiente y viable (Mizoguchi et al., 1998; Sisto et al., 2000; Adams et al., 2003; Saito et al., 2003; Oliver, 2005; Queralt y Araujo, 2007). Recientemente, Azevedo et al. (2007a) demostraron que la transformacin a la forma cocoide es un proceso biolgico activo que le permite a la bacteria protegerse de las condiciones adversas del ambiente. Por otra parte, Chaput et al. (2006) y Nagai et al. (2007) demostraron que la conversin de H. pylori a su forma cocoide en las clulas gstricas e intestinales estimula el sistema inmune del hospedador, indicando que la morfologa cocoide es una forma viable y activa de la bacteria. En todo caso, la transformacin de la bacteria a la forma cocoide y al estado VNC debe ser motivo de investigaciones ms exhaustivas a fin de comprender las estrategias que utiliza este microorganismo para sobrevivir en el medio acutico. Azevedo et al. (2008) evaluaron la viabilidad de diferentes especies de Helicobacter en agua en condiciones in vitro mediante tcnicas de cultivo y de integridad de la membrana. Estos autores demostraron que diferentes cepas de Helicobacter pueden sobrevivir en agua por periodos prolongados, observando que H. pylori posee el mayor tiempo de supervivencia, sin encontrar diferencias entre especies gstricas y enterohepticas. Este trabajo aporta evidencia del rol del agua en la transmisin de diferentes especies de Helicobacter. La determinacin de la viabilidad de H. pylori en el agua ha sido difcil, debido a que los mtodos usados y descritos anteriormente deben mejorarse para distinguir entre clulas vivas y muertas (Bellack et al., 2006). La presencia de esta bacteria es sobreestimada por PCR, ya que esta tcnica puede detectar el ADN de clulas muertas no viables o VNC, mientras que las tcnicas de cultivo subestiman la presencia de este microorganismo debido a que la forma cocoide podra ser no cultivable (Queralt y Araujo, 2007) La asociacin al plancton, la formacin de biopelculas y el estado VNC se han reportado tambin para otras bacterias patgenas de transmisin acutica como Vibrio cholerae (). En V. cholerae se ha demostrado la importancia de estas estrategias para la supervivencia y transmisin de esta bacteria en el medio acutico (Lipp et al., 2002; Lipp

et al., 2003; Faruque et al., 2006). Recientemente se report que V. cholerae y H. pylori pueden coexistir en un medio de cultivo para aislar H. pylori a partir de muestras de agua, plancton e invertebrados marinos en las costas de Venezuela (Fernndez et al., 2007). Estos resultados evidencian que el agua puede ser una ruta de transmisin comn para estas dos bacterias, aunque se requieren ms estudios para demostrarlo. Conclusin Las evidencias epidemiolgicas y microbiolgicas indican la posibilidad que el agua acte como un reservorio en la transmisin fecal-oral de H. pylori. La deteccin de este microorganismo en muestras de agua ha sido motivo de controversia, debido a que no existe una tcnica estndar para su estudio. El cultivo de esta bacteria directamente del agua ha sido difcil, probablemente debido a su conversin a una forma no cultivable y al sobrecrecimiento de otros microorganismos en medios selectivos que arrojan resultados falsos negativos. Otras tcnicas utilizadas para su deteccin en agua, tales como la PCR, FISH y la inmunofluorescencia, pueden arrojar resultados falsos positivos. Futuras investigaciones deberan dirigirse a optimizar las condiciones de cultivo de H. pylori en muestras de agua y continuar los estudios sobre los reservorios ambientales implicados en las vas de transmisin de este patgeno humano.

. . BIBLIOGRAFA: http://www.tec-digital.itcr.ac.cr/servicios/ojs/index.php/tec_marcha/article/view/143 http://www.acadnacmedicina.org.pe/publicaciones/Anales_2006/helicobacter_pylori_ramir ez.pdf http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0378-18442008000600005 http://www.magrama.gob.es/ministerio/pags/biblioteca/revistas/pdf_AM/AM_2005_44_64_ 66.pdf