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INTRODUCCION

La gastroenteritis transmisible de los cerdos (GTC) representa uno de los principales problemas infecciosos dentro de la porcicultura, ya que provoca grandes prdidas econmicas debido a la elevada mortalidad de los lechones afectados (hasta 100%) en lechones menores de 2 semanas (hijos de cerdas seronegativas) y al deterioro de la condicin corporal de los animales recuperados. La enfermedad suele aparecer en forma explosiva, propagndose en pocos das a todos los animales de los diversos grupos; pero cuando afecta a los animales adultos o de engorda a menudo no es diagnosticada, ya que en ellos los signos son muy leves y fugaces, consistentes en diarrea e inapetencia La enfermedad fue reportada por primera vez en el ao 1946 por Doyle y Hutchings, quienes adems demostraron su etiologa viral, aunque con anterioridad ya se haban observado brotes de una enfermedad similar que bien podran haber correspondido a la GTC. En las reas de elevada densidad porcina, la TGE es reconocida como una de las ms importantes causas de enfermedad y muerte de lechones. No existe un tratamiento realmente eficaz para combatirla. Es difcil prevenir su entrada en las explotaciones a causa del probable papel que juegan los pjaros en la difusin de la enfermedad. Y adems no hay actualmente disponible una vacuna realmente eficaz. El presente informe compila un recuento de la enfermedad y la exposicin de un caso clnico y la necropsia del mismo para mayor conocimiento en el desarrollo de la asignatura.

GASTROENTERITIS TRANSMISIBLE DEL CERDO (GET) Agente etiolgico:

El agente etiolgico de la gtc es un virus que ha sido incluido dentro del grupo de coronavirus con base en el tipo de acido nucleco (ARN), morfologa al microscopio electrnico, tamao, forma y proyecciones en forma de ptalo, replicacin en el citoplasma por medio de un proceso de maduracin de membranas del retculo endoplasmico y vesculas y por sus caractersticas biofisicas y bioqumicas. Estructura del virus: La morfologa fue descrita por Tajima quien por medio del mtodo de tincin negativa aplicada directamente al sobrenadante de cultivos celulares observo que las partculas virales eran circulares y pleomorficas, con un dimetro entre 100 y 150 nm incluyendo las proyecciones de la superficie. Las proyecciones tienen forma de petalos de 24 nm de largo y estn unidas a las partculas por un delgado segmento, siendo la parte mas ancha de 10 nm de dimetro. La parte central es opaca a los electrones y a la cubierta tiene aproximadamente 10 nm de grosor. La membrana externa es de naturaleza lipidica, y dependiendo del tipo de clulas donde crezca el virus, algunos de sus glicolipidos pueden integrarse a la membrana viral. Probablemente esta sea la razn de que existan diferencias antignicas en los virus cuando se les dan pases en cultivos celulares o cuando crecen en clulas epiteliales del intestino del lechon. Al tratar con un detergente al virus, se remueve la membrana externa de lipoprotenas y proyecciones dejando partculas esfricas de un dimetro de 10 a 70 nm. Es posible que estas partculas subvirales representen la capa externa que se observa al microscopio electrnico en las secciones de clulas infectadas. El genoma consiste en una cadena sencilla y segmentada de arn que se puede aislar como un componente de 60 a 70 s y se disocia en 35 s y 4 s cuando se calienta sobre 60 C.

Con respecto a la composicin proteica, el virus de la GTC tiene varios polipeptidos. Los que se encuentran en mayor cantidad son: el polopetido viral 1 (VP1), que tiene un peso molecular de 200000 daltons, es una glicoprotena sulfatada y se encuentra en las poryecciones como la nica protena en la superficie del virion; el VP2, que es de 50000 daltons, y es tambin una glicoprotena. Hay otros dos polipeptidos que se encuentran en menor cantidad, y son el VP 1, de 105000 daltons; y el VP lb, de 80500 daltons. Debido a que el VP2 es rico en arginina, es probable que este asociado al arn, y en VP3+4 podrian estar formando la capa externa de la estructura esfrica que queda despus de haber eliminado las proyecciones. SEROLOGIA: Se considera que solamente existe un tipo serolgico del virus de la GTC, con base en las pruebas in vitro e in vivo de neutralizacin cruzada del virus. No se ha encontrado relacin serolgica con los virus del clera porcino, pseudorrabia, enterovirus porcinos T -80, cepa Synder Hill del moquillo canino, hepatitis canina, virus herpes canino, diarrea viral bovina, rinotraquetis infecciosa bovina, para-influenza y adenovirus bovino . McClurkin y Norman reportaron que antisueros contra cepas citopatgenas de virus de la GTC no neutralizaban la patogenicidad del virus de campo para los lechones. Ellos sugirieron que probablemente otro virus no citopatognico era el responsable de los signos clnicos en los lechones. Sin embargo, se debe tener en cuenta que los anticuerpos de la clase IgG del suero no son capaces de mantener al virus neutralizado in vivo. Phillips et al. y Bohae y Derbyshire , por medio de pruebas de inmunodifusin en gel de agar, indicaron que existen ciertas relaciones antignicas con el virus de la encefalomielitis aglutinante. Resultados semejantes se han observado con el virus de la bronquitis infecciosa de las aves, el cual es otro coronavirus. Adems, se ha reportado que el virus tiene cierta relacin antignica con el virus de la peritonitis infecciosa felina y con un coronavirus de perro. Recientemente Pike y Garwes informaron que el hombre tiene en el suero, anticuerpos contra el virus de la GTC y que cuando ste se calentaba a 56 C dm-ante 30 minutos perda la capacidad neutralizante. Se demostr que los anticuerpos son heterfilos que reconocen a los glicolpidos de la cubierta viral y que son capaces de fijar el complemento ya que producen hoyos sobre la membrana. Por otra parte, Torres, utilizando la prueba cintica de neutralizacin viral con varios pases del virus de la GTC en cultivos celulares y sus respectivos antisueros, demostr que haba diferencias antignicas muy pequeas entre los virus recin aislados a comparacin de los que haban sido pasados varias veces en cultivos celulares en que encontr que las diferencias antignicas eran mayores. Para determinar la presencia de anticuerpos neutralizantes se han utilizado los cultivos celulares en sus variantes de la inhibicin del efecto citoptico, reduccin de placas o de la tincin del monoestrato de clulas. Y una prueba de microcolor. Se ha descrito la aglutinacin de partculas de bentonita cubiertas con virus o una prueba de precipitacin de anillo. El virus no produce hemaglutinacin con eritrocitos humanos tipo O, de porcino, bovino o cobayo, por lo que esta prueba no se ha podido utilizar para el diagnstico. Es el agente etiolgico uno o dos virus? McClurkin y Norman sugirieron que la etiologa de la GTC era debida no a un solo virus sino a dos, con base en la dificultad de neutralizar el virus con sueros especficos. En una suspensin de virus de GTC, Ritchie y Norman , observaron la presencia de un segundo virus ms pequeo,

de 25 nm de dimetro, y se sugiri que probablemente la mezcla de los dos fuera la responsable de la discrepancia que se observa cuando un virus de campo se asla en cultivos celulares, y pierde la patogenicidad y la inmunogenicidad apropiada para proteger adecuadamente a las cerdas y a los lechones. En otros estudios se ha sugerido que en la etiologa de la GTC pudieran estar involucrados dos virus ; sin embargo, trabajos posteriores indicaron que el agente etiolgico de la GTC es un solo virus que pertenece al grupo Coronavirus, que posiblemente al crecer en diferentes tipos de clulas adquiere diferentes antgenos . Es de hacer notar que quiz en algunos de los casos de campo el virus de la GTC se ha confundido con un rotavirus que, como se ha informado recientemente, es capaz de provocar diarrea en los lechones. Ciclo de crecimiento: El ciclo de crecimiento del virus se ha estudiado en cultivos celulares por medio de anticuerpos fluorescentes y aislamiento de virus. Se determin que hay un periodo de eclipse de tres a seis horas despus de la infeccin; luego se empieza a detectar el virus en el sobrenadante y aparece la fluorescencia en el citoplasma como partculas pequeas individuales de las zonas perinucleares; entre las 12 a 15 horas el antgeno viral fluoresce como una masa difusa y aparece el efecto citoptico completndose entre las 24 y 30 horas. El ttulo mximo que se encontr en el sobrenadante de clulas de rin de cerdo fue dentro de las 48 a 72 horas despus de la infeccin y posteriormente el ttulo del virus disminuy a causa del efecto de la incubacin a 37 C . Con respecto al crecimiento del virus en las clulas epiteliales de las vellosidades intestinales se empieza a observar fluorescencia a las cinco horas post inoculacin slo en clulas aisladas; de las 9 a las 12 horas se observan grupos de clulas epiteliales fluoresciendo, lo que sugiere que la segunda generacin de virus es producida en ese tiempo y de 16 a 18 horas la mayora de las clulas fluorescen. Una vez que ocurre la descamacin de las clulas epiteliales empieza la regeneracin de las clulas que cuando se tien con anticuerpos fluorescentes muy pocas contienen antgenos virales. Conforme sigue la diferenciacin se llega a observar fluorescencia en aproximadamente un 20% de las clulas de algunas vellosidades mientras que en otras no hay clulas fluorescentes o hay muy pocas y a los siete das no se observa fluorescencia . En un informe de Pospisil et al. De un trabajo realizado en cerdos inoculados con virus de cultivos celulares en rin de cerdo la fluorescencia empez a las 18 horas y alcanz el mximo a las 96 horas, Segn estos autores el retraso pudo ser debido a que el virus estaba atenuado. Con respecto a la ultraestructura del ciclo de replicacin del virus de la GTC es en trminos generales semejante en los diferentes corona-virus. En cultivos de clulas diploides humanas de origen pulmonar, infectados con un coronavirus humano de la cepa Linder, se observ que despus de tres horas post infeccin, se increment el nmero de ribosomas; entre 6 y 15 horas posteriores a la infeccin es posible observar partculas virales en las cisternas del retculo endoplsmico rugoso. La replicacin viral en su forma inicial se lleva a cabo por un procedimiento de proyeccin del virus a partir de las membranas. La insinuacin y proyeccin de material denso, seguido de la formacin esfrica de la partcula y separacin de las membranas por pellizcamiento, deja a la partcula viral en forma libre. Despus de 18 a 24 horas, el nmero de partculas presentes en las cisternas del retculo endoplsmico rugoso, es abundante y la lisis celular es el procedimiento de liberacin viral. Se han demostrado

inclusiones citoplsmicas del tipo de vesculas con delimitacin de doble membrana, que contiene material finamente fibrilar. Otro tipo de inclusin consiste en vesculas que contienen estructuras tubulares . Los estudios ultraestructurales realizados por Wagner et al. postulan que el ciclo de replicacin del virus de la GTC en las clulas epiteliales intestinales de absorcin en lechones recin nacidos, implican la asociacin de microcanalculos como va de entrada viral a la zona apical de la clula. Posteriormente existe el periodo de eclipse, y la replicacin viral se lleva a cabo en la zona interna de los canalculos "o "vacuolas. La maduracin viral se lleva a cabo por la proyeccin a partir de la membrana de la vescula envolvente, hasta la liberacin y concentracin de munerosas partculas virales. Posteriormente, sobreviene la degeneracin de la clula y la liberacin de las vesculas conteniendo los virus . En Mxico se han podido evaluar diferentes facetas de la replicacin del virus de la GTC en las clulas de absorcin intestinal de lechones infectados con la cepa Texcoco. Las vellosidades intestinales y microvellosidades se encontraron disminuidas en tamao y en nmero, al grado de que muchas clulas slo mostraron algunas microvellosidades. La fotografa muestra una clula de absorcin epitelial de un animal control en que las microvellosidades llenan el borde de las clulas y tiene las dimensiones normales. Las clulas infectadas con el virus de GTC pueden apreciarse en buen nmero ; las microvellosidades intestinales han disminuido en nmero y en longitud, pudiendo observarse espacios grandes entre una y otra microvellosidad. Los coronavirus permiten ver su corona solar, cuando se estudian las preparaciones con tinciones negativas ; sin embargo, con la metodologa de cortes incluidos en resinas epoxy, la corona solar no es visible en su totalidad. La penetracin del virus de la GTC se lleva a cabo mediante la inclusin de partculas virales en vesculas que se revisten de pared trilaminar.

Patogenia: El virus generalmente entra por va oral, aunque tambin puede hacerlo a travs de la va respiratoria. Es posible infectar a los cerdos por va intramuscular, pero la dosis debe ser bastante mayor que la utilizada por va oral. El virus pasa por el estmago donde resiste el pH bajo de 3 a 4 y llega al intestino delgado donde resiste la tripsina; infecta las clulas epiteliales de la ltima porcin del duodeno y la totalidad del yeyuno y del leon. Las clulas infectadas se desprenden, lo cual hace que las vellosidades se acorten provocando su atrofia. El virus probablemente no crece en la primera porcin del duodeno debido a la presencia de lipasas u otras substancias lipolticas de la bilis; adems, sobre las placas de Peyer solamente unas cuantas clulas epiteliales se infectan y las vellosidades no se acortan. El virus se encuentra en mayor concentracin en el yeyuno en comparacin con el duodeno o el leon . En los cerdos infectados se ha podido recuperar el virus a altos ttulos adems del intestino delgado, de la mucosa nasal, tonsilas, trquea, pulmones, riones, y a bajos ttulos en otros rganos y la sangre. No se conoce dnde se replique el virus ni tampoco se han encontrado alteraciones histolgicas en esos rganos. Con respecto a los cerdos de cinco meses de edad cuando son inoculados pueden permanecer asintomticos o desarrollar a las 24 - horas vmito y diarrea que puede ser profusa. Adems hay una atrofia focal de las vellosidades del yeyuno en que las clulas epiteliales son reemplazadas por cuboidales . El virus de al GTC ha sido inoculado a cerdos fetales de 74, 77 y 95 das de gestacin en los que provoca atrofia de las vellosidades y su posterior recuperacin. No se han reportado alteraciones teratolgicas como ocurre en el clera porcino, pseudorrabia, virus de la encefalitis B japonesa, virus hemoaglutinante japons, parvovirus o enterovirus porcinos. Adems, los lechones fetales fueron capaces de establecer una respuesta inmune basada en IgA, IgM e IgG . La lesin caracterstica en la GTC es la atrofia de las vellosidades intestinales ocasionada por el desprendimiento de las clulas epiteliales, provocando una disminucin en la superficie y capacidad de absorcin y la actividad enzimtica . En los animales enfermos hay una marcada disminucin en la absorcin de grasas, glucosa, sodio, hierro y clortetraciclina ;adems hay poca o nula actividad enzimtica con respecto a la lactosa, fosfatasa cida y alcalina, adenosn trifosfatasa, deshidrogenasa succnica y esterasa no especfica. El material alimenticio que no es digerido y que permanece en la luz intestinal tiende a retener agua debido a su actividad osmtica, lo que contribuye a que se acente la diarrea. Lo mismo ocurre con la materia alimenticia que es fermentada por la flora intestinal, principalmente en el intestino grueso y que aumenta la cantidad de partculas activas osmticamente. Estas alteraciones llegan a provocar el sndrome de mal absorcin. Por otra parte, existe evidencia de que la hipersecrecin contribuye a la diarrea en la GTC. Esto parece ser debido a que las clulas de las criptas no son atacadas por el virus. Estas clulas son

secretoras y adems se dividen rpidamente para reemplazar a las clulas epiteliales descarnadas de las vellosidades, por lo cual la actividad secretora contina a pesar de haber migrado a las vellosidades atrofiadas. Se considera que la funcin del colon es normal; sin embargo, es posible que haya una estimulacin de la secrecin a causa de la fermentacin microbiana y de las sales biliares pobremente absorbidas en el leon. El pH de las heces es cido en comparacin al que se encuentra en la colibacilosis enterotxica . Se ha postulado que la causa de la muerte del animal es la deshidratacin, la acidosis metablica aunada a una hipercalemia, que lleva a una funcin cardaca anormal. Signos clnicos: El periodo de incubacin puede ser de 16 horas a 3 das, dependiendo del grado de exposicin, virulencia del virus y edad de los animales. En el caso de los lechones de menos de dos semanas de edad los signos clnicos generalmente son: vmito, que ocurre inmediatamente despus de comer, seguido en pocas horas de diarrea amarillenta o blanquecina que contina hasta que el animal muere. Los lechones tienden a amontonarse, pierden peso rpidamente, observndose decados. con el pelo erizado, sucios; y sin fiebre. No hay prdida de apetito pues los animales tratan de alimentarse; sin embargo, estn dbiles para llegar a la cerda. La mortalidad es alta, y la muelle ocurre dos o cinco das despus de haberse presentado los signos clnicos. La enfermedad generalmente es explosiva, atacando a casi todos los lechones de la camada a la vez; la cerda puede presentar diarrea, vmito, fiebre, anorexia y agalactia ligeras. En la zahrda se observan vmitos blanquecinos en el piso y la cama hmeda por la diarrea pro fusa. Los cerdos de ms de tres semanas de edad, generalmente presentan una enfermedad ms benigna y muy baja mortalidad y en los cerdos adultos slo hay ligera diarrea. En lechones anmicos de tres semanas de edad, la enfermedad es ms severa que en los lechones normales . Por otra parte, en Alemania se ha reportado la presentacin de un brote de GTC en cerdos de dos a seis meses de edad, con una mortalidad de 30% de los animales. TCNICAS DIAGNSTICAS: 1. Identificacin del agente: El virus se puede identificar por aislamiento en cultivo de tejidos, inmunofluorescencia, hemagutinacin pasiva inversa, enzimoinmunoensayo (ELISAs), radioinmunoensayo (RIA), hibridacin con sondas de ADN, microscopa electrnica, y, ms recientemente, por deteccin especfica del ARN vrico. En los ltimos aos las tcnicas moleculares, como la reaccin en cadena de la polimerasa con trascripcin inversa (RTPCR) y la RTPCR anidada, han aumentado la sensibilidad y la especificidad de la deteccin y la diferenciacin entre TGEV y PRCV directamente en muestras de campo. Un mtodo alternativo de diagnstico, que se recomienda para los laboratorios que carecen de medios para pruebas especializadas, es el suministro oral de contenido intestinal sospechoso a lechones susceptibles. Sin embargo, es necesario realizar pruebas de laboratorio para confirmar la susceptibilidad de los cerdos antes de la inoculacin y para demostrar que cualquier enfermedad inducida en estos animales se debe a GET. Los ensayos rpidos ms utilizados son probablemente los de inmunodiagnstico, en particular los enzimoinmunoensayos (ELISAs) con heces y las pruebas de inmunofluorescencia (FAT) sobre secciones congeladas de intestino. Tambin se ha descrito la deteccin de virus por hemaglutinacin pasiva inversa. Otra enfermedad entrica, la diarrea

epidmica porcina, est causada por un coronavirus serolgicamente distinto, que sin embargo tiene una morfologa idntica por microscopa electrnica. A efectos de diagnstico, la inmunomicroscopa electrnica evita este problema.

a. Aislamiento del virus en cultivo de tejidos: Aparte de la inoculacin de lechones vivos, ste es el mtodo ms seguro de diagnstico. Sin embargo, para uso rutinario es lento y laborioso. EL TEGV no crece bien en cultivo celular, lo que hace que esta tcnica sea poco prctica como procedimiento diagnstico rutinario. Normalmente, se intenta el aislamiento a partir de las heces o de canales, en particular del intestino delgado. Las muestras preferidas son las asas del intestino delgado afectado, atadas en cada extremo para retener el contenido. Como el virus es sensible al calor, todas las muestras deben mantenerse frescas o congeladas. El material de la muestra se homogeniza hasta producir una suspensin al 10% con medio de cultivo celular o con solucin salina tamponada con fosfato (PBS), pH 7.2, que contenga antibiticos, como penicilina (1.000 U/ml), dihidroestreptomicina (1.000 U/ml), y micostatin (20 U/ml). La suspensin se deja reposar a temperatura ambiente durante 30 minutos sin recibir la luz solar directa. A continuacin se sonica y se clarifica por centrifugacin a baja velocidad. El sobrenadante se puede mezclar con el mismo volumen de suero bovino inactivado por calor, para reducir el efecto citotxico del material, y se utiliza luego para inocular cultivos de tejidos susceptibles, como monocapas de 3 o 4 das de clulas primarias o secundarias de rin de cerdo. Tambin pueden utilizarse para el aislamiento primario del virus otros cultivos porcinos de pocos pases (de tiroides o de testculos) y algunas lneas celulares. Despus de incubar a 37C durante 1 hora, las monocapas se recubren con medio, como la solucin salina equilibrada de Earle con levadura y lactoalbmina (EYL), que contiene bicarbonato sdico y antibiticos, como penicilina (100 U/ml), dihidroestreptomicina (100 U/ml), micostatin (20 U/ml), y 1% de suero fetal bovino. La incorporacin de tripsina al medio de cultivo puede facilitar el aislamiento primario del virus. Se realizan en paralelo cultivos control no inoculados y se incuban todos a 37C. El efecto citoptico (ECP) se puede observar a los 37 das, caracterizado por un redondeamiento y agrandamiento celular, formacin de sincitios y liberacin al medio. La formacin de placas o calvas es a veces ms fcil de reconocer. Un medio de cobertura adecuado para las placas es agar noble al 1.6% en medio mnimo esencial 2x con 1% de NaCO3, antibiticos (como antes), rojo neutro al 0.7% y 1% de DEAE (dietilaminoetil) (100 g/ml). Las cepas de TGEV de campo no crecen fcilmente en cultivo de tejidos, por lo que pueden necesitarse varios pases antes de que se evidencien estos cambios. Los aislamientos con ECP deben confirmarse como TGEV por inmunomarcaje o por neutralizacin in vitro utilizando antisueros especficos contra TGEV. Si se dispone de anticuerpos monoclonales (MAbs), se pueden utilizar para distinguir entre TGEV y PRCV por tcnicas de inmunomarcaje.

La diferenciacin entre TGEV y PRCV tambin puede realizarse con sondas de cADN especficas de TGEV o por RTPCR discriminante o RTPCR anidada. b. Prueba de anticuerpo fluorescente para antgenos vricos: ste es un mtodo rpido, sensible y especfico para identificar antgenos vricos de TGEV en secciones congeladas de intestino. Se necesita un cerdo recin fallecido y el animal ideal debe tener menos de 4 semanas (preferiblemente, menos de 1 semana) y en el inicio de los sntomas clnicos de la enfermedad (es decir, a las 2448 horas de la infeccin). Dentro de los 30 minutos post mortem, se toman porciones de 2 cm de cuatro regiones diferentes de la parte posterior del intestino delgado. De estas porciones se cortan trozos de 510 mm y se congelan instantneamente con nieve carbnica. Es importante la orientacin correcta del material para asegurar que el posterior corte en el criostato produzca secciones realmente transversales. Se cortan secciones de 6 m de grosor, se montan en cubres, se secan al aire y se fijan en acetona. Se guardan a 20C secciones de controles positivos y negativos para su tincin en paralelo. Despus de lavar con tampn Tris, pH 8.7, o con PBS, las secciones se tien con una solucin diluida de anticuerpo contra TGEV conjugado con isotiocianato de fluorescena, y se colocan en un incubador con humedad a 37C durante 30minutos. El marcaje no unido se elimina lavando con tampn Tris. Si se desea, se puede realizar una tincin de contraste con una dilucin 105 de azul de Evans en tampn Tris y se montan con glicerol. Las secciones teidas se examinan de inmediato con un microscopio de luz ultravioleta. La calidad de la tincin se determina por comparacin con los controles. Una interpretacin correcta depende del grado de conservacin de la arquitectura de las vellosidades, cuyas clulas epiteliales se examinan para fluorescencia intracitoplasmtica. Recientemente se ha desarrollado un mtodo peroxidasa antiperoxidasa para la demostracin de TGEV mediante la deteccin de TGEV y PRCV en muestras congeladas fijadas con formalina, y en tejidos incluidos en parafina. c. Deteccin de antgenos vricos en muestras fecales por enzimoinmunoensayo Se puede utilizar un sistema sndwich de doble anticuerpo, por ejemplo con un MAb de captura y un anticuerpo policlonal detector unido a un enzima. Esta prueba se basa en la captura del antgeno vrico en la muestra fecal por tres MAbs, dos especficos para la protena S (sitio A y D) y uno para la nucleoprotena N. Como control de especificidad de la prueba se utiliza un recubrimiento negativo que consiste en anticuerpos purificados del lquido asctico de ratones inoculados con clulas de mieloma SP2/0 que no reconocen al TGEV. Los MAbs se depositan en microplacas de 96 pocillos en tampn bicarbonato, pH 9.6, y se incuba a 37C toda la noche. Todas las muestras se prueban en pocillos duplicados, uno con recubrimiento positivo (MAbs contra TGEV) y otro con el recubrimiento negativo. Las muestras fecales se diluyen en medio para cultivo celular (1/10), se agitan en vrtex y se centrifugan a baja velocidad (2.000 g) durante 15 minutos. Despus se decanta el sobrenadante en tubos estriles y se prueba o se guarda congelado. Las placas se lavan dos veces con tampn de lavado (PBS con 0,05% de Tween 20) antes de aadir las muestras fecales preparadas. Las placas se incuban a 37C toda la noche. Se lavan cuatro veces y se aade suero antiTGEV policlonal marcado con biotina en PBS con 0,05% de Tween

20. Las placas se incuban a 37C durante 1 hora y despus se lavan cuatro veces antes de aadir estreptavidina conjugada con peroxidasa de rbano, y se incuban a 37C durante 1 hora. Las placas se lavan seis veces antes de aadir el substrato enzimtico, que es ABTS (2,2 azinodi [3etilbenzotiazolina]6cido sulfnico) con H2O2 al 0,03% en tampn citrato, pH 4,2. La reaccin se detiene a los 30 minutos a temperatura ambiente aadiendo dodecil sulfato sdico al 5%. La absorbancia se determina con un lector para ELISA a 405 nm. En cada placa se incluyen muestras fecales positivas y negativas para TGEV.

d. Mtodos de reconocimiento de cidos nucleicos vricos Para la deteccin directa de TGEV en muestras clnicas se han descrito mtodos de hibridacin in situ (ISH) y de RTPCR, que permiten la diferenciacin del PRCV. Una segunda prueba de PCR anidada puede aumentar significativamente la sensibilidad. La diferenciacin entre los virus de la GET se puede realizar analizando los productos de la PCR con endonucleasas de restriccin o por secuenciacin. Se ha descrito una RTPCR doble para la deteccin combinada de TGEV y del virus de la diarrea epidmica porcina. 2. Pruebas serolgicas: La serologa puede ser de valor diagnstico si se demuestra un aumento en el ttulo de anticuerpos. Adems, un nico resultado seropositivo tiene valor diagnstico si se presenta en una poblacin previamente seronegativa. Las pruebas serolgicas son tambin una pre condicin para la importacin, ya que la posibilidad de adquirir cerdos portadores se puede reducir aceptando slo animales seronegativos. Despus de la infeccin con TGEV o PRCV, los anticuerpos especficos se pueden detectar en el suero a los 6 o 7 das, y persisten durante varios meses. Aunque los anticuerpos contra PCRV o TGEV muestran entre s una neutralizacin cruzada completa, hay diferencias en la especificidad de alguno de los anticuerpos no neutralizantes, ya que el PRCV carece de algunos epitopos presentes en el TGEV. Sin embargo, la neutralizacin (NV) no es un mtodo prctico para diferenciar la infeccin por PRCV de la del TGEV. Se pueden incorporar MAbs contra tales regiones en ELISAs por competicin para detectar anticuerpos sricos que sean por completo especficos para TGEV. Aunque tales pruebas son fiables porque no producen resultados de falsos positivos con antisueros PCRV, pueden darse falsos negativos debido a una sensibilidad reducida en comparacin con las pruebas de neutralizacin, y debido a variaciones de las cepas del virus de la GET, de modo que ningn MAb nico y especfico para TGEV reconocer todas las cepas. El problema de la falta de sensibilidad puede reducirse realizando las pruebas sobre un grupo de cerdos de la explotacin. Estas pruebas ELISA basadas en Mabs son el mtodo de eleccin para diferenciar PRCV de TGEV en la cualificacin de animales para exportacin. Tambin, utilizando estas pruebas de diagnstico diferencial antes de las 3 semanas siguientes a la exposicin al PCRV, se han producido resultados poco repetitivos y poco fiables. Los resultados ms seguros se obtuvieron probando sueros pareados (de agudo y de

convaleciente) y utilizando la protena recombinante de las espculas del TGEV como antgeno en lugar de clulas fijadas de testculo de cerdo infectadas por TGEV. a) Pruebas para virus de la gastroenteritis/coronavirus respiratorio porcino Estas pruebas detectan anticuerpos comunes a TGEV y PCRV, e incluyen pruebas NV, ensayos de tipo ELISAs indirectos y ELISAs competitivos basados en MAbs contra TGEV/PRCV especficos de grupo. Las pruebas NV se pueden realizar con varios tipos de clulas y de cepas de virus. Las lneas celulares ms frecuentemente utilizadas son las de testculo de cerdo o clulas primarias o continuas de rin de cerdo. Estas pruebas se han utilizado mucho durante muchos aos y se consideran como estndar, frente a las cuales se comparan pruebas nuevas. El mtodo modificado de Witte utiliza placas de microtitulacin para cultivo de tejidos con fondo plano, la lnea celular A72 que procede de un tumor rectal de perro, y una cepa natural de virus adaptado a crecer en dichas clulas: se incuban 100 DICT50 (dosis infectiva del 50% en cultivo de tejidos) de virus con los sueros problema inactivados por calor, y la neutralizacin se aprecia por la ausencia de ECP despus de la incubacin posterior con clulas A72 en medio Leibovitz 13 (Sigma, Reino Unido) con antibiticos incorporados, 10% de suero fetal bovino y 1% de Lglutamina. El volumen total de los reactivos es de 150 l. Neutralizacin de virus: procedimiento de la prueba i) ii) Los sueros se inactivan durante 30 minutos en un bao a 56C. Se hacen diluciones dobles de los sueros problema con medio de cultivo de clulas, empezando con suero no diluido (ste da una dilucin de cuando se mezcla con un volumen igual de virus en la reaccin). Las diluciones se preparan en placas de microtitulacin para cultivo de tejidos con 96 pocillos de fondo plano, usando, si es posible, tres pocillos por dilucin y volmenes de 25 l por pocillo. En la prueba tambin se incluyen controles con sueros positivos y negativos. No hay sueros estndar disponibles, pero deben prepararse estndares internos positivos y titularse adecuadamente. A cada pocillo se aaden 25 l de una dilucin del stock de TGEV en medio de cultivo, calculada para proporcionar 100 DICT50 por pocillo. El virus se debe aadir a dos de los tres pocillos de cada dilucin de suero. El tercer pocillo sirve como control de suero slo, y recibir 25 l de medio de cultivo por pocillo en vez de virus.

iii)

iv)

El virus residual se vuelve a titular haciendo cuatro diluciones decimales y utilizando 25 l por pocillo y por lo menos cuatro pocillos por dilucin; a cada uno de los pocillos de titulacin se aaden 25 l de medio de cultivo para compensar por la ausencia de suero problema.

v)

Las placas se agitan brevemente y se incuban despus durante 1 hora a 37C en una atmsfera con 5% de CO2.

vi)

A cada pocillo se aaden 100 l de clulas, por ejemplo de una suspensin de clulas A72 con 2 x 105 clulas por mililitro.

vii)

Las placas se incuban durante 37 das a 37C en una atmsfera con 5% de CO2; la prueba se puede realizar igualmente bien si las placas se incuban sin CO2.

viii)

Las placas se analizan microscpicamente para ECP. La tcnica se valida comprobando la titulacin del virus (que debera dar un valor de 100 DICT50 con un rango permitido entre 50200 DICT50) y la de los sueros control. El suero estndar positivo debera dar un valor dentro de 0.3 unidades log10 a cada lado de su media predeterminada. Las lecturas de cada dilucin de suero problema deben hacerse por comparacin con el control apropiado de suero slo para diferenciar el ECP vrico de la citotoxicidad inducida por el suero o por contaminacin.

ix)

Los resultados del suero problema se determinan por el mtodo de Spearman Krber como la dilucin de suero que neutraliza el virus en el 50% de los pocillos.

x)

Un suero negativo no debe producir neutralizacin a la menor dilucin probada (es decir, suero sin diluir, equivalente a una dilucin de en la tcnica de neutralizacin).

b) Pruebas especficas del virus de la gastroenteritis transmisible Las pruebas especficas para el TGEV son tcnicas ELISAs que utilizan un MAb que reconoce el TGEV pero no el PRCV y son las idneas para calificar animales de exportacin. Los sueros de cerdos infectados previamente con una cepa de TGEV reconocida por el MAb contendrn anticuerpos de la misma especificidad que pueden competir con l para unirse al antgeno del TGEV en placas de ELISA recubiertas con tal antgeno. Los antgenos para ELISA se pueden preparar de lisados de lneas celulares de rin inoculadas con cepas de TGEV adaptadas a cultivo de tejidos o no infectadas. Alternativamente, se han usado como fuente de antgeno clulas de testculo de cerdo, infectadas o no infectadas con TGEV, y fijadas con acetona al 80%. Tambin se pueden preparar antgenos de la protena recombinante S (recS) recogida en forma soluble de una lnea celular de insecto (Sf9) infectada con un baculovirus recombinante que expresa una protena S del TGEV que contiene los cuatro antgenos principales. Se fijan antgenos positivos y negativos a filas alternativas de placas de microtitulacin con tampn bicarbonato, pH 9.6. Los sueros problema diluidos, incluyendo controles positivos y negativos, se aaden a pocillos adecuados y se incuban durante la noche antes de la adicin a todos los pocillos de MAb diluido. El MAb unido se detecta por un anticuerpo antiratn conjugado con peroxidasa que produce una reaccin coloreada en presencia del substrato apropiado. Los cambios de color se miden en un espectrofotmetro y para cada suero problema el resultado neto es el que resulta de la diferencia en absorbancias entre el pocillo con antgeno positivo y con antgeno negativo, y que se expresa como porcentaje del resultado obtenido con el suero control negativo. El valor de corte entre negativo y positivo en la prueba se debe determinar con un ensayo previo de poblaciones negativas y positivas conocidas.

Existen varias preparaciones comerciales, muchas de las cuales son especficos para TGEV. Las pruebas descritas hasta la fecha basadas en hemaglutinacin se validaron antes de la aparicin del PRCV. Sin embargo, pueden ser especficas para el TGEV, ya que el TGEV, pero no el PRCV, es hemaglutinante.

Diagnostico diferencial: Colibacilosis: la diarrea tiende a ceder con el tratamiento y no presenta vmitos. La Coccidosis afecta a lechones de 5-15 das de nacidos con un gran rango de morbilidad con baja mortalidad. Clostridium Perfringens tipo C: Tiende a tener una diarrea hemorrgica. Enteritis por Rotavirus: alta morbilidad baja mortalidad Diarrea epidmica porcina: Es una enfermedad menos severa que la GET Diarrea en adultos: peste porcina clsica, salmonelosis, disentera porcina y enteritis proliferativa.

Alteraciones patolgicas 1. Lesiones macroscpicas: Las lesiones que se observan a la necropsia se encuentran principalmente en el tracto gastrointestinal. El estmago generalmente est distendido y lleno de leche coagulada. En ocasiones la mucosa es hipermica y con zonas hemorrgicas en el lado diafragmtico (65). El intestino delgado se encuentra distendido con las paredes adelgazadas y con leche semidigerida. Cuando se observa el intestino con una lupa de aumento, generalmente hay acortamiento de las vellosidades, que aunque es caracterstico de la GTC, tambin puede presentarse en la colibacilosis, la salmonelosis o en la enfermedad de las tres semanas (77). Hay diferentes grados de hiperemia y en general no hay quilo en los vasos mesentricos debido a la disminucin en la digestin y transporte de grasa. En el rin hay deposicin de uratos en la pelvicilla y alteraciones degenerativas.

2. Lesiones microscpicas En la mucosa del estmago puede encontrarse congestin y necrosis del epitelio profundo de las criptas gstricas . El cambio ms marcado se observa en el intestino delgado donde hay atrofia de las vellosidades . Normalmente existe una proporcin de 1: 7 entre lo largo de las criptas de Lieberkului y la altura de las vellosidades; en el intestino infectado la proporcin disminuye de 1: 1. Las lesiones pueden ser de inflamacin serosa catan-al, vacuolizacin, picnosis, destruccin del borde de las microvellosidades, necrosis de las clulas epiteliales y descamacin. Bohl hace mencin de la discrepancia que existe en las alteraciones histolgicas que se observan en la GTC y lo atribuye a infecciones concurrentes con otros microorganismos que modifican las lesiones, ya que en los lechones gnotobiticos inoculados con el virus en el intestino no se observa la inflamacin, edema, hemorragia y necrosis del intestino delgado . Es de hacer notar que al inocular cerdos fetales se ha observado que hay atrofia de las vellosidades y reparacin de las mismas por lo que esta lesin puede considerarse como caracterstica de la GTC. En el intestino grueso se ha observado congestin, infiltracin por clulas redondas y en ocasiones necrosis del epitelio de la superficie, pero podran corresponder a infecciones por otros microorganismos ya que el virus de la GTC no crece en el intestino grueso. En el rin hay degeneracin de los tbulos contorneados, que en ocasiones tapa a la lmina; en el cerebro, se ha encontrado congestin de las meninges y una activacin del sistema retculo endotelial.

3. Alteraciones qumicas Las alteraciones que se han reportado y que ocurren en la sangre, son de disminucin en los niveles de bicarbonato (HCQ,) y pH, lo que provoca una acidosis metablica y la muerte del animal . Hay aumento del nitrgeno ureico y nitrgeno no proteico especial-mente poco antes de la muerte . No hay disminucin de los niveles de glucosa a pesar de que hay disminucin en el glicgeno del hgado. Esto posiblemente ocurre porque hay catabolismo de las protenas y que quiz sera el responsable de los niveles elevados de nitrgeno. En relacin con los electrlitos, hay ligeros cambios en sodio y cloruros, disminucin del calcio, y aumento considerable del potasio antes de la muerte. 4. Infecciones mixtas El hecho de que la atrofia de las vellosidades intestinales ocurra en animales gnotobiticos y en fetos inoculados con GTC, indica que el virus por s solo, es capaz de provocar esta lesin. Por otra parte, Underdahl (157) report que las infecciones mixtas de E. col y del virus de GTC, exacerban su patogenecidad produciendo una mortalidad mayor. Haelterman (60) considera que aunque no se han estudiado a fondo las interacciones entre el virus y las bacterias, es muy probable que al ocurrir un mayor crecimiento bacteriano en animales enfermos de GTC exista un funcionamiento anormal del intestino, que ayude a la presentacin y duracin de la diarrea. Respuesta inmune y mtodos de vacunacin: I. Resistencia innata: La edad es uno de los factores ms importantes de la resistencia innata. Los lechones de menos de tres semanas de edad cuando se infectan con el virus de la GTC presentan signos clnicos severos y una alta mortalidad, mientras que los animales jvenes o adultos tienen una leve diarrea y se recuperan. Esto es debido a que existen factores fisiolgicos tales como la

velocidad en que las clulas epiteliales de las vellosidades intestinales de los lechones son reemplazadas en cinco o siete das, lo que da oportunidad a que el virus se multiplique o invada a otras clulas. En el caso de los animales adultos este proceso se acorta a dos o tres das, lo que probablemente impide que el virus infecte a las clulas vecinas con facilidad, ya que las clulas infectadas se descaman rpidamente . En los lechones, las clulas epiteliales son altamente pinocticas y tienen un sistema tubular y vacuolar extenso que favorecen que el virus pueda penetrar en forma masiva. El virus entra y se acumula en la zona tubular apical y sistema vacuolar de las clulas endoteliales del lechn recin nacido y es ah donde se infectan con el virus de la GTC presentan signos clnicos severos y una alta mortalidad, mientras que los animales jvenes o adultos tienen una leve diarrea y se recuperan. Esto es debido a que existen factores fisiolgicos tales como la velocidad en que las clulas epiteliales de las vellosidades intestinales de los lechones son reemplazadas en cinco o siete das, lo que da oportunidad a que el virus se multiplique o invada a otras clulas. En el caso de los animales adultos este proceso se acorta a dos o tres das, lo que probablemente impide que el virus infecte a las clulas vecinas con facilidad, ya que las clulas infectadas se descarnan rpidamente. En los lechones, las clulas epiteliales son altamente pinocticas y tienen un sistema tubular y vacuolar extenso que favorecen que el virus pueda penetrar en forma masiva. El virus entra y se acumula en la zona tubular apical y sistema vacuolar de las clulas epiteliales del lechn recin nacido y es ah donde se replica tomando parte de la membrana. En los cerdos mayores de tres semanas las clulas no son pinocticas, por lo que al virus se le dificulta la infeccin. Por otra parte, el nmero de microvellosidades del lechn recin nacido es de aproximadamente 400000 por mm2 y aumenta a un milln a los 12 das y alrededor de veinticuatro millones en el cerdo adulto, lo que permite a un animal adulto resistir fcilmente una infeccin por el virus de la GTC. 2. Resistencia adquirida a) El sistema inmune local y la respuesta inmune en la GTC La inmunoglobulina intestinal ms importante en la proteccin es la IgA secretoria (IgAS). Es un dmero en el que se encuentra una pieza secretoria que protege a la inmunoglobulina de las proteasas intestinales; adems posee una cadena J que probablemente ayuda en la formacin de los dmeros o a la secrecin de la inmunoglobulina de las clulas plasmticas . El sistema IgAS en el intestino funciona en forma independiente del sistema humoral. Una vez que nace el lechn, la maduracin del sistema IgAS del intestino ocurre a travs de la colonizacin con la flora normal ya que es el estmulo para que la lmina propia se infiltre con linfocitos y clulas plasmticas. En el cerdo adulto el 80% de las clulas plasmticas del intestino producen IgA y muy poca IgM, en contraste con el lechn en que hay un mayor nmero de clulas que producen IgM que de IgA . Es por este motivo que Allen y Poner sugieren que en el lechn, IgM pudiera ser ms importante en la proteccin a una IgA. Las clulas productoras de IgA e IgM son ms numerosas en la lmina propia del duodeno que en el yeyuno e leon. En la GTC existe una respuesta de resistencia inespecfica cuando las clulas epiteliales maduras de las vellosidades son destruidas y son reemplazadas por juveniles de la cripta; esto se debe a que el virus se replica en las clulas epiteliales maduras y no crece en las clulas epiteliales jvenes de la cripta, por lo que se observa una mayor resistencia a que el virus se replique. Por otro lado, cuando los cerdos se infectan con el virus de la GTC y se recuperan, se vuelven

resistentes a una segunda infeccin ya que son capaces de oponer una respuesta inmune a nivel intestinal. La forma en que el virus estimula a los linfocitos intestinales para que se produzca IgAS se desconoce. En el animal adulto algunos antgenos y quiz el virus de la GTC pueden cruzar la mucosa del intestino, llegar a la sangre y provocar una respuesta inmune principalmente IgG. El virus tambin podra estimular a los linfocitos a travs de las placas de Peyer y ah ser reconocido por linfocitos sensibilizados que en cuanto son estimulados migran por los vasos linfticos hasta llegar al conducto torcico y de aqu a la sangre. A travs de la sangre los linfocitos regresan al intestino donde lo convierten en clulas plasmticas y producen anticuerpos IgA y que al pasar por las clulas epiteliales adquieren la pieza secretoria, para cumplir la funcin de anticuerpos en la luz intestinal. Algunas de las clulas durante el proceso de migracin en la sangre llegan a alojarse a otras mucosas incluyendo la glndula mamara de la cerda cuando sta se encuentra en proceso de maduracin para producir calostro y leche. Es por este motivo que en el calostro y la leche hay IgAS contra el virus de la GTC . Las placas de Peyer se encuentran en mayor nmero hacia el final del intestino delgado y se extienden a. travs de la lmina propia y submucosa. Estn cubiertas por clulas cuboidales con gran actividad pinoctica (clulas M) y que contienen gran nmero de linfocitos intraepiteliales. En la Placa hay zonas T y B que pueden variar de tamao en relacin a la. estimulacin antignica. El antgeno entra a. las placas de Peyer a travs de la. clula M ya que se ha observado que hay paso de antgenos particulares tales como bacterias, por lo que seguramente el virus de la GTC estimula al sistema inmune local de la misma. manera . Es de hacer notar que las placas de Peyer son regiones anatmicas especializadas en atrapar al antgeno y probablemente su funcin sea la de estimular a linfocitos IgA sensibilizados a que migren por el torrente sanguneo y se alojen nuevamente en el intestino o en las diferentes mucosas y en un segundo plano sea la funcin efectora. Se considera que las clulas efectoras son las plasmticas que producen los anticuerpos y los linfocitos que se encuentran en la lmina propia y en las zonas intraepiteliales de las vellosidades. Parece ser que la respuesta inmune en la GTC no slo se debe a. la IgAS, pues Pensaert obtuvo un lavado y extracto de raspado de mucosa de a.sas intestinales infectadas, y el material contena sustancias que inhiban el virus de la estomatitis vesicular y de la GTC en cultivos celulares de rin de cerdo. La actividad antiviral nunca fue muy elevada, y variaba considerablemente en cada muestra, pero generalmente se encontraban a mayores ttulos durante la etapa degenerativa de la infeccin cuando un gran nmero de clulas estaban descarnndose. Esto no lo detectaron en los tejidos de control y lo encontraron a muy bajos ttulos o estaban ausentes en muestras que fueron tomadas en curso avanzado de la. infeccin. Esta substancia tena actividad en el lquido sobrenadante despus de la centrifugacin a 100 000 g por una. hora y despus de la dilisis a pH 2 por 24 horas seguido de dilisis a pH 7.3 por 24 horas. Era inactivado por tripsina al 0.25% en 2 horas a 37 C por lo que tiene caractersticas de interfern. Es posible que esta sustancia intervenga en la resistencia de las clulas intestinales a la infeccin viral pero quiz no en forma suficiente como para prevenir la destruccin masiva de las clulas. En el caso del intestino, cuando hay infeccin con el virus de la GTC ocurre una salida rpida de inmunoglobulinas en forma no especfica, encontrndose entre ellas IgAS. El mecanismo se desconoce, aunque se ha sugerido que ocurra a travs de la interaccin de anticuerpos IgE especficos que se encuentran en la superficie de las clulas cebadas que al ponerse en

contacto con el antgeno las clulas se desgranulan aumentando la permeabilidad capilar y por lo tanto la salida de lquido. La funcin de la IgAS no especfica pudiera ser de recubrimiento de receptores del virus y la clula. Aproximadamente a los 14 das se empieza a producir IgAS especfica contra el virus capaz de neutralizarlo . Se considera que la IgAS es la ms importante a nivel intestinal; sin embargo, se ha sugerido que la IgM pudiera tener un papel muy importante en la proteccin . Por otra parte, Carwright encontr anticuerpos neutralizantes en el contenido del leon, ciego y recto de cerdos que haban muerto de GTC a los 5, 6, 7 y 11 das postinfeccin. Es posible que la presencia de coproanticuerpos tendra a enmascarar la liberacin continua de virus del tracto gastrointestinal creando la dificultad en detectar portadores del virus. Los anticuerpos neutralizantes sistmicos pueden ser detectados en el suero a los siete das despus de la infeccin y pueden persistir por lo menos 18 meses. Se considera que los anticuerpos circulantes no intervienen en la proteccin del animal . Derbyshire et al observaron que los anticuerpos neutralizantes de la madre pueden ser detectados a niveles muy bajos en el suero de los lechones hasta siete semanas despus del nacimiento, pero no son protectores. Por lo que toca a la respuesta de inmunidad celular, Frederich y Bohl reportaron que los linfocitos de la lmina propia del intestino delgado de cerdos recuperados de GTC eran capaces de producir factor de inhibicin de la migracin (MIF) cuando se ponan en contacto con el virus de la GTC. En este caso, la reactividad de los linfocitos intestinales era mayor que la de los obtenidos del bazo; lo opuesto se observ cuando el virus se administraba por va subcutnea, en que la reactividad de los linfocitos del bazo era mayor y casi nula en los del intestino. En forma anloga, por medio de la prueba de transformacin blastoide se observ que los linfocitos que reaccionaban con el virus de la GTC se encontraban en los tejidos linfoides intestinales y sistmicos, cuando los cerdos fueron inoculados por va oral; pero cuando se inoculaban por va parenteral, slo hubo respuesta sistmica y no de los linfocitos de las placas de Peyer o ganglios linfticos mesentricos . Por otra parte se ha demostrado que como respuesta al virus se generan linfocitos citotxicos para las clulas infectadas. Se determin que los linfocitos citotxicos de las placas de Peyer y de los ganglios linfticos mediastinicos duraban ms tiempo como citotxicos (ms de 30 das) en comparacin con los obtenidos del bazo o sangre perifrica (20 das). Parte de estos linfocitos son T y quiz otra fraccin de clulas citotxicas podran ser K, que provocan una citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos . Se determin la respuesta del factor de inhibicin de la migracin de los leucocitos (UF) circulantes de animales infectados con antgenos de GTC. Se usaron animales de seis meses de edad inoculados con virus Miller 3 y Miller 10. Todos los animales tuvieron una respuesta de inhibicin de la migracin sin que existiera correlacin entre los ttulos de suero neutralizacin de virus y la prueba de UF. La inhibicin empez a los siete das post infeccin y continu por 35 das. Adems, la respuesta celular de LE parece ser mayor en cerdos expuestos al virus atenuado, mientras que ocurre lo opuesto en la respuesta humoral. Las razones para esta diferencia no se conocen. Tambin se ha reportado que los cerdos que han padecido la GTC, poseen linfocitos circulantes de memoria y que al ponerse en contacto con el virus hay una aglutinacin; este mtodo se ha relacionado con una respuesta de inmunidad celular . Por ltimo, es probable que la resistencia a la infeccin pueda ser establecida por una accin cooperadora de la respuesta celular local y la IgAS intestinal.

b) Proteccin de la madre al producto En el cerdo el tipo de placentacin es epiteliocorial por lo que no hay paso de inmunoglobulinas de la cerda al feto a travs de la placenta. Se considera que los lechones al nacimiento no contienen inmunoglobulinas en su suero aunque se ha logrado detectar una IgG 5 S y una IgA en niveles muy bajos. Los lechones adquieren la inmunidad inicial a travs de la absorcin de las inmunoglobulinas del calostro durante las primeras 36 horas de vida. El calostro de la cerda tiene un contenido total de protenas de aproximadamente 15 gramos por 100 ml y de 60 al 70% de la protena son inmunoglobulinas. De stas, el 80% es IgG, el 15% es IgA y el 5% IgM. La IgG, la mayor parte de IgM y un 40% de IgA provienen del suero de la cerda; el resto es sintetizado en el tejido de la glndula mamaria. En la GTC la inmunidad ocurre cuando la cerda se infecta con el virus por va oral durante el periodo de gestacin, particularmente en el ltimo tercio. En este caso la cerda puede presentar anorexia, decaimiento, vmito y diarrea. A nivel intestinal los linfocitos reconocen al virus y migran hacia la glndula mamara durante el proceso de su maduracin. En la cerda hay respuesta sistmica al virus basada en la produccin de IgG circulante, pero tambin se produce una respuesta inmune a nivel intestinal ya que en subsecuentes infecciones la cerda no presenta signos clnicos. En el calostro hay inmunoglobulinas IgM, IgAS e IgG con actividad neutralizante. La IgG e IgM se absorben a travs del intestino durante las primeras 24 horas quedando la IgAS protegiendo la luz del intestino del lechn, de que no se infecte con el virus de la GTC. Ya que el virus crece principalmente en el epitelio de las vellosidades intestinales, el lechn debe estar tomando leche de la madre cada 90 minutos para asegurar que en forma permanente el intestino est protegido con IgAS ya que la vida media de la IgAS en el intestino es de cuatro a seis horas. A los tres das del parto la concentracin de inmunoglobulinas baja de 7 a 0.75 g por 100 ml y hay un cambio de clases; la IgG en el calostro que era de 80%, en la leche es de 30% y la IgA en el calostro que era de 15%, en la leche constituye el 50%. La mayora de estas inmunoglobulinas en la leche son producidas en la glndula mamaria. A los siete das del parto, la concentracin de inmunoglobulinas en la leche es de 0.65 g por 100 ml. Un lechn de siete das toma 500 ml de leche por lo que la cantidad total de inm.unoglobulinas que toma es de 3 gramos por da y esta es una cantidad mayor que la que hay en todo el sistema circulatorio . Mtodos de vacunacin a) Virus de campo administrado a la cerda El mtodo de la administracin oral de virus patgeno de campo a la cerda, tres a cinco semanas antes del parto, ha dado buenos resultados para proteger a los lechones al nacimiento. Se ha utilizando en forma de suspensin viral obtenida de intestinos de ani males inoculados, administrndose en cpsulas de gelatina. Tambin se han dado intestinos de lechones muertos de GTC durante un brote y que han sido conservados congelados . La administracin de virus en cpsulas, da buenos resultados, pero tiene el inconveniente de que tiende a perpetuar la enfermedad en el hato; adems, debido a que se utilizan suspensiones intestinales de lechn infectado, es posible introducir otros virus, tales como los rotavirus, que adems se podran difundir a otras granjas cercanas. No se conoce por cunto tiempo se debe usar el virus en el hato y en caso de no administrarlo a las hembras, en qu periodo volveran a aparecer los brotes. Con respecto a la utilizacin de los intestinos infectados de lechn se ha

observado que el mtodo es difcil de llevar a cabo, pues en virtud de que en ocasiones se utilizan animales que han muerto de GTC la concentracin de virus generalmente es baja o nula dependiendo del tiempo transcurrido desde la muerte y la recoleccin de los intestinos. Adems, la preparacin de licuados con agua disminuye la cantidad de virus. Es probable que debido a la baja concentracin de virus no se llega a provocar una inmunidad slida en las cerdas llegndose a presentar la enfermedad en los lechones en forma atpica . Por otra parte, Saif y Bohl estudiaron las posibilidades de estimular la produccin de IgAS en la leche inmunizando a la cerda por va intranasal y utilizando como modelo el virus de la GTC y el de la pseudorrabia. Encontraron que no hubo produccin de IgAS, lo que sugiere que las clulas del tejido linfoide asociado a los bron-quios quiz no tengan el mismo potencial para migrar hacia la glndula mamara como lo tienen los inmunocitos del intestino. b) Virus atenuado o inactivado Se ha utilizado una vacuna de virus vivo de GTC modificado a travs de pases en cultivos celulares de rin de peno (TGE-Vac). El virus es apatgeno para el lechn y se administra a las cerdas gestantes a las seis y dos semanas antes del palto (47). La vacuna produce principalmente IgG en el calostro y la leche. Utilizando esta vacuna, Tamoglia (147) report una mortalidad del 38% en lechones de cerdas vacunadas, 71 % en lechones de cerdas no vacunadas y no hubo ninguna mortalidad en lechones provenientes de madres inoculadas con virus virulento de campo. Existe controversia con respecto a la eficacia de la vacuna ya que en ocasiones se ha observado que no proporciona proteccin a los lechones durante los brotes aunque los productores de la vacuna indican que su utilizacin reduce la mortalidad. Tambin, se ha utilizado una vacuna comercial inactivada, pero como no se le observ ninguna eficacia, el producto fue retirado del mercado. Por otro lado, se ha intentado vacunar a cerdas gestantes con virus de la GTC con diferentes grados de atenuacin en cultivos celulares y en la mayora de los casos los lechones no han sido protegidos cuando se les inocula con virus de campo, aunque s hay cierta proteccin cuando el desafo se hace con virus atenuado. En ocasiones se ha probado el calostro por su capacidad de virusneutralizacin encontrndose que slo hay produccin de IgG, que no protege in vivo. No se conoce todava el mecanismo por el cual los virus atenuados producen IgG en comparacin con los de campo, patgenos que producen IgAS; aunque es probable que exista una relacin directa entre el grado de patogenicidad y produccin de IgAS . Tambin existe la posibilidad de que los virus de cultivos celulares y los de campo, sean antignicamente semejantes, pero no idnticos. Se ha informado que el virus de campo que crece en clulas epiteliales del intestino posee un antgeno diferente del que crece en cultivos celulares . Esto es posible ya que el virus de la GTC incorpora fosfolpidos y glicolpidos propios de la clula donde crecen, por lo que stos podran ser importantes en la inmunogenicidad . Por otra parte, se ha aislado IgAS de calostro de cerdas vacunadas oralmente con virus de campo y virus atenuado, y por medio de pruebas de virus neutralizacin cruzada con cantidades estandarizadas de las inmunoglobulinas se determin que slo la IgAS proveniente de la cerda vacunada con virus de campo neutralizaba al virus de campo. La otra IgAS proveniente de la cerda vacunada con virus atenuado no fue capaz de neutralizar al virus de campo. Sin embargo, las dos inmunoglobulinas tenan el mismo grado de eficiencia para neutralizar al virus de cultivos celulares. Esta observacin sugiere que los dos virus, aunque comparten la mayora de los antgenos, no son idnticos. Tambin se debe tomar en cuenta que los coronavirus en general son difciles de aislar y es una

caracterstica que comparte el de la GTC; es probable que cuando se logra aislar en cultivos celulares se selecciona por un virus y que al drsele pases representa otra poblacin que no es el prototipo. Sin embargo, el virus es til para las pruebas de neutralizacin viral, aunque desafortunadamente no es efectivo cuando se utiliza como vacuna y se desafa a los lechones con virus de campo. En virtud de que el virus de cultivos celulares no protege, se ha sugerido el que sean dos poblaciones de virus las que intervienen en el desarrollo de la enfermedad, pero no se ha obtenido evidencia de que esto ocurra . Actualmente con el aislamiento de rotavirus porcinos que producen un cuadro diarreico semejante al de la GTC se tendr que evaluar la interaccin de los dos virus en la patogenicidad, presentacin de los signos clnicos e inmunidad . Aparte de las posibles diferencias antignicas entre el virus de campo y el de cultivos celulares, otro problema que se presenta para inmunizar a los animales, es que se desconoce la forma de estimular adecuadamente al sistema IgAS. Con este objeto se han utilizado diferentes vas para administrar el virus. Thorsen y Djurickovic utilizaron virus de la GTC virulento de campo o atenuado en cultivos celulares y administrado por va intramamaria y obtuvieron una res-puesta de IgAS que fue capaz de conferir proteccin a los lechones . Tamoglia y Hanson utilizaron virus atenuado en cultivos celulares e inactivado con Bpropiolactona para inmunizar cerdas gestantes por va intramamaria, pero no hubo proteccin para los lechones. Tambin se han inoculado por va intramamaria las pro-yecciones aisladas de la superficie del virus y se han encontrado anti-cuerpos neutralizantes del virus en el suero y en el calostro . Utilizando la va intramamaria se ha reportado una sobrevivencia del 76% de los lechones de tres das de edad provenientes de 47 cerdas vacunadas. Otros trabajos indican una mayor proteccin, pero desafor-tunadamente slo un nmero limitado de animales fue estudiado. Bohl et al, inocularon dos veces a cinco cerdas con virus atenuado y encontraron que haba una gran cantidad de anticuerpos neutralizantes en el suero y en el calostro, pero los niveles disminuyeron rpidamente en la leche. Los lechones de tres camadas fueron desafiados cuando tenan tres das de edad resultando en 100% de morbilidad y 86% de sobrevivencia Saif y Bohl inocularon cerdas gestantes por va oral y nasal con virus cepa Miller 3 que a pesar de haber sido pasado 14 veces en cultivos de rin de cerdo, sigue siendo patgeno para lechones; cuando nacieron los animales, slo una cerda que haba enfermado en la primera inoculacin fue capaz de proteger a los animales. Las cerdas que no mostraron signos clnicos no protegieron a los lechones, indicando que existe una relacin directa entre la patogenicidad de la cepa y la produccin de IgAS. e) Experiencias de vacunacin de los lechones Para proteger a los lechones se ha tratado en diversas ocasiones de inmunizar a los animales inmediatamente despus de nacer, con virus atenuados en cultivos celulares y posteriormente se han desafiado, encontrndose resultados variables. Tambin se ha utilizado virus de campo inactivado con diferentes dosis de luz ultravioleta, sin que se detectara proteccin. Furuuchi et al. utilizaron la cepa TO-163, que es una cepa atenuada de alto pasaje, y reportaron que al tercer da despus de su administracin a los lechones, stos mostraban proteccin contra el desafo de la cepa Shizouka, que ha sido mantenida en cerdos y por lo tanto es de campo. La proteccin ocurri cuando los lechones fueron mantenidos a 18-22 C y no hubo, cuando los animales fueron mantenidos a 31-34 C. El mecanismo de proteccin no se determin. Ramrez y Fragoso utilizaron el virus de la bronquitis infecciosa de las aves por va oral para proteger a los lechones de la GTC sin que se observara proteccin. La utilizacin de este virus se basa en

los reportes de Reyes , en los cuales sugiere que existe una relacin antignica entre el virus de la GTC y de la bronquitis infecciosa de las aves. Al inocular a los lechones por va oral se ha buscado que el virus atenuado o inactivado provoque una respuesta inespecfica en base a interfern, bloqueo temporal de receptores o algn otro mecanismo que neutralice al virus de campo (107). Esto es posible ya que en los bovinos existe una vacuna contra rotavirus que se administra a los becerros al nacimiento, y a las 48 y 72 horas los animales estn protegidos aunque el mecanismo de proteccin se desconoce. Sin embargo, la inmunizacin postnatal tambin podra provocar una inmunosupresin . Otra. probable explicacin para la dificultad que se ha tenido para inmunizar a los lechones es que los virus atenuados infectan una menor cantidad de clulas epiteliales intestinales y la atrofia de las vellosidades es pequea en comparacin con la cepa virulenta. Esto se puede observar por medio de anticuerpos fluorescentes en que la mayora de las clulas epiteliales infectadas con virus de campo fluorescen, en comparacin con la. cepa. atenuada donde slo fluorescen unas cuantas clulas sin que formen una capa continua. Estas observaciones permiten entender por qu el virus atenuado es incapaz de interferir con el virus virulento, ya que cuando se infecta primero a los lechones, siempre van a quedar porciones de intestino completamente susceptibles para la replicacin del virus de campo . Epizootiologa Transmisin La principal va de transmisin del virus de la GTC de un cerdo a otro es oral a travs de las heces infectadas, aunque se ha sugerido que la va respiratoria es importante ya que el virus se encuentra en los pulmones. El virus se asla principalmente de las heces; tambin se puede recuperar de la cavidad oral de los cerdos por lo que las gotas de saliva o moco de la nariz son una fuente de infeccin. En este sentido, Lee et al Y Reber demostraron que la infeccin poda ser transmitida de un animal a otro a travs del aire en espacios confinados o de un cuarto a otro donde no haba contacto directo, slo paso de aire. El virus entra a una granja a travs de cerdos portadores o enfermos ya que en ocasiones el brote coincide con la adicin de hembras de reposicin o sementales; tambin se ha involucrado a personas que tienen las botas contaminadas o al equipo o alimento contaminado. En algunos lugares se ha observado que los brotes ocurren en granjas situadas en las principales lneas de comunicacin, lo cual sugiere que el trnsito de camiones contaminados a las granjas podra ser un factor de transmisin. Con relacin a otros animales adems del cerdo, se ha podido demostrar que los perros, estorninos, zorros y posiblemente los gatos tengan un papel importante en la transmisin del virus al actuar como vectores. Caractersticas de los brotes En muchos de los brotes los animales de engorda son los primeros que presentan diarrea y anorexia y la enfermedad se difunde rpidamente a los lechones. La enfermedad se presenta en forma explosiva en la sala de maternidad atacando a los animales de menos de dos semanas de edad y provocando una morbilidad de casi el 100% y mortalidad que vara, la cual llega con frecuencia al 100%. Las cerdas pueden presentar diarrea y agalactia, lo que agrava la afeccin de los lechones.

Fenis describi que puede haber brotes de GTC en cerdos de cinco meses de edad si no hay lechones. Con frecuencia, la mayora de los brotes terminan en tres a cuatro semanas y se ha observado que al siguiente ao, generalmente la enfermedad no se presenta debido a que los animales del hato quedaron inmunes. Con relacin a la presentacin de brotes de GTC en hatos parcialmente inmunes, se ha informado que la enfermedad aparece principalmente en las camadas de las hembras primerizas, en cerdos de siete das a seis meses de edad, y los signos clnicos generalmente son menos severos y con baja mortalidad. Debido a que no se presenta la enfermedad en lechones menores de siete das de edad o en las cerdas, generalmente no se sospecha de un brote de GTC. En hatos donde hay slo cerdos adultos, se han observado brotes explosivos de diarrea con carcter benigno y transitorio. La diarrea en estos casos es griscea y muy lquida, conteniendo alimento sin digerir. Animales portadores: La forma en que el virus permanece en un hato o sobrevive de un invierno al otro no se conoce. Healterman sugiri cuatro posibles reservorios de la infeccin: 1) animales portadores por largo tiempo en el hato; 2) grupos de cerdos en los que el virus experimenta pases durante el verano; 3) otros hospedadores aparte del cerdo, y 4) intestinos infectados, congelados, que se utilizan para la inmunizacin o el virus de campo en cpsulas que se utiliza para inmunizar a los cerdos. Por lo que toca a los animales portadores por tiempo largo en el hato, se sospecha que stos sean una de las fluentes ms importantes para infectar a los animales susceptibles . Lee et aL aislaron el virus de la GTC de heces de cerdos que haban sido inoculados con ocho semanas de anterioridad Morin et al. aislaron el virus de raspados del yeyuno por 35 das post infeccin pero no al da 60 post infeccin. Underdahl et aL aislaron el virus de GTC de lesiones pulmonares de cerdos adultos aparentemente sanos, por lo que sugirieron que la GTC puede ser tambin una enfermedad del tracto respiratorio y que la infeccin de los pulmones puede dar por resultado un animal portador crnico. Underdahl et al informaron que el virus pudo ser recobrado en seis de nueve cerdos infectados experimentalmente de 30 a 104 das despus de la infeccin. El virus fue reaislado de los pulmones e intestino delgado y produjeron una ligera enfermedad en el primer pase y una enfermedad ms severa en el segundo. En un estudio de rastro, se aisl el virus de la cavidad oral del 3% de los animales indicando que el virus puede permanecer en esa regin anatmica por periodos variables . En algunos brotes de GTC se ha observado que en los cerdos de engorda es donde empiezan a observarse los signos clnicos y posteriormente la enfermedad pasa a los lechones y cerdas en las maternidades. En este ltimo caso se sabe que en algunas cerdas aparecen los signos clnicos durante o despus del parto, indicando que algunos factores hormonales o de stress en el tiempo del parto, podran inducir a que el virus excerbara su patogenicidad en el intestino, produjera signos clnicos y saliera con las heces . Por otra parte, se ha detectado la presencia de virus en el yeyuno de algunos cerdos por un periodo de hasta 63 das post infeccin y podra ser excretado a travs de una diarrea no especfica. Esto es posible ya que algunos cerdos desarrollan una diarrea transitoria cuando estn en estado de excitacin debido a que son llevados a otra granja o a un centro de concentracin . Llama la atencin que es posible reactivar el virus de la GTC con ciertos frmacos, como son las sales de Glauber y la lentina , logrando con esto alargar el periodo de excrecin del virus; esto sugiere que los cerdos portadores, en estado de stress pueden excretar el virus durante considerables

periodos. Es aparente que el virus en animales infectados se excreta durante la primera semana y conforme pasa el tiempo va disminuyendo el nmero de animales que los excretan. El virus puede aislarse de raspados de yeyuno a los 35 das, pero no del contenido rectal indicando que es posible que el virus se est replicando en el intestino pero se inactive en su paso por el intestino grueso. La presencia del virus de la GTC en la piara, se debe a una continua fuente de cerdos susceptibles a la granja, los cuales perpetan la infeccin. Estos provienen de un continuo programa de partos o por frecuentes adquisiciones de nuevos cerdos de engorda Se sospecha que los cerdos de engorda y los grupos de cerdos parcialmente inmunes, en continuos programas de pariciones, constituyen el reservorio para mantener al virus en la poblacin . Por este motivo las medidas de control epizootiolgico para la GTC deben estar enfocados sobre los cerdos de todas las edades, con estrictos programas de manejo; sin embargo, las medidas requeridas en ocasiones pueden ser difciles de aplicar en virtud de la organizacin y tipos de manejo que requiere una granja, los cuales facilitan el mantenimiento y propagacin del virus en la poblacin de cerdos. En relacin a otros animales hospedadores del virus, diferentes del cerdo, muchas especies se han inoculado con el virus por va oral sin que se produzcan signos clnicos. Se han inoculado humanos, gatos, bovinos, pollos, perros, zorros, cobayos, hmsters, equinos, ratones, conejos, ovinos y estorninos. Se ha demostrado que los zorros y perros excretan virus durante 15 das post infeccin ; cuando a los gatos se les expone al virus, ste es excretado por las heces durante periodos cortos, sin que el virus se multiplique en el intestino. Otros animales, incluyendo a los pjaros, han sido incriminados como portadores mecnicos del virus de una a otra piara, pero no pueden ser clasificados como reservorios del virus . Se ha sugerido que el perro es la mayor fuente de virus de la GTC despus de los cerdos. Haelterman inocul cachorros Mongrel de nueve semanas de edad, logrando recuperar el virus a los siete das postinoculacin y adems encontr anticuerpos neutralizantes del virus en el suero. Norman et al hicieron un muestreo serolgico en 116 perros de edades desde seis semanas hasta perros adultos con objeto de encontrar anticuerpos neutralizantes y llegaron a la conclusin de que los perros haban estado en contacto con el virus de la GTC u otro relacionado antignicamente. McClurkin et al reportaron que la inoculacin con virus de GTC a pen-os de seis a ocho semanas no produjo signos clnicos, pero que cuando se tomaban heces de los animales y se inoculaban oralmente a lechones de dos das de edad, era posible aislar nuevamente el virus. Por otra parte, Cartwright y Lucas reportaron la presencia de una enfermedad entrica de los perros que clnicamente es semejante a la GTC y hay anticuerpos contra el virus; concluyeron que un virus idntico o relacionado antignicamente al de la GTC provoc la enfermedad. Posteriormente, Binn et al aislaron un coronavirus la cepa 1-71 de una enfermedad diarreica en perros militares en Alemania. Los signos clnicos en los cachorros son muy semejantes a los de la GTC en cerdos, excepto que no hubo mortalidad y desarrollaron anticuemos neutralizantes para el virus de la GTC y el virus 1-71. Por otro lado, Larson et al inocularon 14 perros de 4 a 11 das de edad con la cepa Purdue de la GTC. Los animales no desarrollaron signos clnicos ni lesiones en el intestino. Sin embargo, por medio del microscopio electrnico observaron que las clulas epiteliales del yeyuno tenan virus de la GTC desde las 12 horas post inoculacin y los intestinos contenan virus patgeno para los lechones desde las 12 horas hasta los 10 das post inoculacin. Estos resultados indican que los perros de una granja, aparentemente sanos, podran ser una fuente del virus para los cerdos

susceptibles. Klemm y Ristic informaron que el virus de la GTC puede adaptar su crecimiento al intestino delgado de los cachorros y adems, que conforme se aumentaron los pases del virus, hubo un incremento en su virulencia de manera que en animales susceptibles, observaron diarrea severa, deshidratacin y debilidad. Prevencin y control: Hasta la fecha no se cuenta con vacunas que eviten la aparicin de os brotes de GTC, por lo que la prevencin en granjas no afectadas se caliza mediante la cuidadosa seleccin de las hembras y cerdos de exposicin, los cuales deben provenir de granjas libres de GTC. debido a que el virus puede penetrar en una granja llevado por los risitantes, es recomendable el uso de tapetes sanitarios para la desinfeccin de zapatos o botas; los tapetes deben ser colocados de >referencia a la entrada de la granja y de las salas de maternidad. Otras fuentes de infeccin pueden ser los perros o gatos procedentes de otras granjas, por lo cual debe impedirse su entrada. Cuando se ha declarado la enfermedad, es necesario evitar que se difunda el virus a travs del personal que realiza el aseo o de los utensilios. Es por este motivo que se deben establecer las precauciones higinicas convenientes, tales como la desinfeccin peridica de los corrales de lactancia y engorda y adems se debe evitar, hasta donde sea posible, el contacto entre el personal y los animales enfermos. Ya que los cerdos de engorda probablemente acten como reservorios, es recomendable que estos animales sean alojados en locales alejados de los panderos. Otra forma de control es la reportada por Bay en que interrumpe los programas de cruzamiento de 1 a 3 meses y la enfermedad desaparece del hato, Este hecho fue confirmado por Saunder el cual observ que en algunas granjas infectadas, un intervalo de dos semanas entre las cruzas fue suficiente para controlar la enfermedad. Con respecto al tratamiento de la GTC en condiciones de campo, se han obtenido resultados poco satisfactorios, especialmente en lechones menores de 10 das de edad. Bay et al reportaron que en lechones enfermos de uno a cinco das de edad, no hubo mejora cuando utilizaron para el tratamiento la estreptomicina, aureomicina, cloromicetina, circulina, sulfadiazina, sulfataladina y sulfametacina. Whitehair et al observaron cierta mejora clnica y ganancia de peso en lechones destetados infectados con GTC utilizando sulfatiazol y sufaguanidina, pero el tratamiento con penicilina fue infructuoso. Por otra parte, se han utilizado drogas que inhiben el peristaltismo intestinal como la octina, no obtenindose resultados benficos en el tratamiento de la enfermedad , Pensaert utiliz la droga antiviral Amantadina-HCI, que inhibe al virus GTC en cultivos celulares, pero al administrarla a lechones infectados en condiciones de campo, no se encontr ningn efecto curativo. De manera semejante, el empleo de la droga Isoprinosine, tampoco tuvo un efecto preventivo o teraputico contra la enfermedad , Por otro lado, la utilizacin de una terapia continua e intensiva a base de soluciones de electrlitos en lechones infectados con GTC es de utilidad, puesto que la mortalidad puede ser reducida en grado variable, Haelterman y Noble observaron que la utilizacin de suero hiperinmune o de sangre completa citratada, administrados por va oral, dos veces al da, suministra cierta proteccin, siendo de utilidad tanto profilctica como teraputica.