EXTRACCIONYDETERMINACIONDEPROPIEDADESDESAPONINASOBTENIDASAPA

que como requisito parcial para optar por
el ttulo profesional de

UNIVERSIDAD MICHOACANA DE SAN NICOLAS DE HIDALGO
FACULTAD DE BIOLOGA
Extraccin y determinacin de propiedades de saponinas
obtenidas a partir del fruto de Enterolobium cyclocarpum
(J acq.) Griseb (parota).

TESIS

Director de Tesis: Ing. Martn J. Meja.

Morelia, Mich. Noviembre, 2006.

BILOGO
presenta

MNICA GARCA ALMANZA

Firmado digitalmente por
AUTOMATIZACION
Nombre de reconocimiento
(DN):
cn=AUTOMATIZACION,
c=MX, o=UMSNH, ou=DGB,
email=soporte@biblioteca.
dgb.umich.mx
Ubicacin: MORELIA
MICHOACAN MEXICO
Fecha: 2008.08.01 21:37:37
-05'00'
CONTENIDO.

Pg.

1.- INTRODUCCION. 1
2.- OBJETIVOS. 3
3.- ANTECEDENTES. 4
4.- CLASIFICACION TAXONOMICA 10
5.- DESCRIPCION BOTNICA 10
5.1.- Distribucin geogrfica. 13
5.2.- Hbitat. 14
5.3.- Ciclo de vida. 15
6.- DESCRIPCIN DEL REA DE ESTUDIO 16
6.1.- Localizacin y superficie 16
6.2.- Fisiografa 17
6.3.- Hidrografa 17
6.4.- Clima 17
6.5.- Tipo de suelos y caractersticas 17
6.6.- Recursos naturales 18
6.6.1.- Flora y fauna 18
6.6.2.- Recursos forestales 18
6.7.- Minera 18
6.8.- Actividades econmicas 18
6.8.1.- Agricultura 18
6.8.2.- Ganadera 19
6.8.3.- Comercio 19
7.- MARCO TERICO 20
7.1.- Descripcin general de los glicsidos 20
7.2.- Caractersticas generales de las saponinas 20
7.3.- Terpenos 22
7.4.- Esteroides 23
7.5.- Saponinas triterpnicas 24
7.6.- Saponinas esteroidales 26
7.7.- Aislamiento de las saponinas 27
7.8.- Importancia de las saponinas 28
7.9.- Hemlisis 30
8.- MATERIALES Y METODOS 31
8.1.- Trabajo de gabinete 31
8.2.- Trabajo de campo 31
8.3.- Trabajo de laboratorio 31
8.3.1.- Proceso de separacin en seco 32
8.3.2.- Prueba de la espuma 32
8.3.3.- Tcnica de obtencin del crudo de saponinas 32
8.3.4.- Prueba de Liebermann-Burchard 33
8.3.5.- Prueba de hemlisis 34
8.3.6.- Prueba de toxicidad 35
9.- RESULTADOS Y DISCUSION 37
9.1.- Prueba de la espuma 37
9.2.- Obtencin del crudo de saponinas 39
9.3.- Prueba de Liebermann-Burchard 43
9.4.- Prueba de hemlisis 43
9.5.- Prueba de toxicidad 52
10.- CONCLUSIONES 57
11.- LITERATURA CITADA 59

NDICE DE CUADROS Y FIGURAS.

Tablas y figuras. Pg.
Figura 1.- Haz de la hoja del rbol Enterolobium cyclocarpum. 11
Figura 2.- Envs de las hojas del rbol de Enterolobium cyclocarpum. 11
Figura 3.- Fruto verde del rbol de Enterolobium cyclocarpum. 12
Figura 4.-. Fruto seco de Enterolobium cyclocarpum, con semillas 12
Figura 5.- Semillas del fruto de Enterolobium cyclocarpum 13
Figura 6.- Distribucin de Enterolobium cyclocarpum en Mxico y
Amrica Central y del Sur.
14
Figura 7.- Ubicacin del Municipio de Chinicuila, Estado de Mich.,
Mxico.
16
Cuadro 1.- Estructuras de algunas saponinas triterpenoides ms
conocidas que se han establecido recientemente.
25
Cuadro 2.- Algunos tipos de saponinas esteroidales presentes en
algunas plantas.
27
Cuadro 3.- Concentraciones de saponinas, buffer isotnico y porcentaje
de hemlisis.
34
Figura 8.- Mecanismo del efecto limpiador de jabones y detergentes. 38
Figura 9.- Prueba de la espuma. 38
Figura 10.- Extraccin con equipo Soxhlet. 39
Figura 11.- Extraccin del crudo de saponinas del fruto E. cyclocarpum. 41
Cuadro 4.- Extracciones realizadas y crudo de saponinas obtenido del
fruto de Enterolobium cyclocarpum.
42
Cuadro 5.- Porcentaje de hemlisis en los eritrocitos. 44
Figura 12.- Muestra de eritrocitos con crudos de saponinas, hemlisis
100%. 100X.
45
Figura 13.- Eritrocitos con 92-90% de hemlisis 40X. 47
Figura 16.- Eritrocitos con 50-45% de hemsis 100X. 55
Figura 17.- Eritrocitos sin hemolizar 100X. 50
Figura 18.- Eritrocitos sin hemolizar 40X. 50
Figura 19.- Eritrocitos crenados 40X. 51
Figura 20.- Agua y alimento con el crudo de saponinas administrado a
los animales tratados.
52
Cuadro 6.- Pesos corporales de rata y ratn tratados con extractos de
crudos de saponinas y administrados en e alimento.
53
Figura 21.- Ratn tratado con crudo de saponinas en el alimento. 54
Figura 22.- Rata tratada con crudo de saponinas en el agua. 55
Figura 23.- Ratn tratado con crudo de saponinas en el agua. 55
Cuadro 7.- Pesos corporales de rata y ratn tratados con extractos de
crudos de saponinas y administrados en el agua.
56

Facultad de Biologa U.M.S.N.H.

RESUMEN.

En esta investigacin se pretende extraer y determinar las propiedades
de saponinas obtenidas a partir del fruto de Enterolobium cyclocarpum (parota);
para lo cual se procedi a la utilizacin de un mtodo de extraccin agua-
alcohol en un equipo Soxhlet. Se tomaron tres muestras del fruto de
Enterolobium cyclocarpum (cscara, pulpa, fibra); a una de stas se les
someti a un tratamiento mecnico previo como lo fue la molienda y el
tamizado; a la segunda slo se moli pero no se tamiz y a la tercera muestra
no se moli ni tamiz. De estas tres muestras se procedi a extraer el crudo de
saponinas presentes en el fruto de Enterolobium cyclocarpum. Para la
determinacin de las propiedades del crudo de saponinas obtenido del fruto de
la parota se procedi a someterlo a ciertos mtodos y pruebas como lo fue, la
prueba de la espuma, prueba de Liebermann- Burchard, prueba de hemlisis y
prueba de toxicidad en roedores.
La colecta del fruto de Enterolobium cyclocarpum (parota) fue realizada
en el municipio de Chinicuila, Michoacn. La colecta se realiz de forma
manual y no se colect muestra botnica, solo se colect como uso exclusivo
en el laboratorio y para los objetivos planteados en esta investigacin.


1
1.- INTRODUCCION.

La vida del hombre siempre ha estado ligada de manera muy importante a
las plantas, sta le ha proporcionado alimento, vestido, materiales de
construccin, salud e incluso muerte. Una prueba de esta realidad, es la especie
vegetal Enterolobium cyclocarpum conocida parota, la cual ha sido de mucha
utilidad para el hombre, ya que cuenta con caractersticas que le permiten ser un
rbol enteramente maderable, debido a que su madera es de textura gruesa, fcil
de trabajar y resistente a plagas; es ampliamente utilizada para la elaboracin de
muebles y embarcaciones; el follaje as como el fruto son utilizados como forraje
para el ganado vacuno y bovino. Otros usos menores incluyen el jabn hecho de
la pulpa, las semillas cocinadas como verdura para consumo humano y los
taninos extrados de las vainas y la corteza. Las flores se valoran en muchas
reas para produccin de miel (Zamora et al, 2001). No obstante esta especie
puede ofrecer grandes beneficios, el uso ms importante que se le da es el de
proporcionar sombra y las vainas como alimento para vacas y caballos.
El propsito de este trabajo es extraer las sustancias fitoqumicas llamadas
saponinas, las cuales tienen la caracterstica de estar constituidas por grandes
molculas orgnicas, como esteroides o triterpenos, unidas a una o varias de
azcares, por lo que contienen los elementos necesarios para emulsionar la grasa,
una caracterstica que puede ser aprovechable para la elaboracin de distintos
productos en beneficio de la salud, por ejemplo: extractos para el tratamiento de
enfermedades del corazn (Hernndez, 1996), reducen la colestoromia y son
antiinflamatorios (Palencia, 2003), entre otros muchos beneficios, dndole as a la
especie Enterolobium cyclocarpum un uso alternativo y viable, adems del
maderable, como una fuente de aprovechamiento industrial pero principalmente
como fuente teraputica y medicinal, ya que de acuerdo a la bibliografa
consultada, presenta ciertas macromolculas orgnicas. As tambin, se pretende
estudiar los efectos txicos de las saponinas extradas de Enterolobium
cyclocarpum, ya que una caracterstica de tales sustancias es la de producir
efectos adversos sobre la funcin hematolgica, principalmente hemlisis.

2
Otro propsito es darle un uso alternativo no solamente como especie
maderable, a esta importante especie vegetal, por lo que ayudara en la
conservacin y restauracin del ecosistema de las selvas medianas
subcaducifolias, ya que al lograr el inters de las personas y vean que pueden
tener un beneficio econmico, se integren a la conservacin de la especie, dando
como resultado un desarrollo sustentable de beneficio para la gente y la especie.

La informacin sobre Enterolobium cyclocarpum est limitada y se
encuentra concentrada en pases de Centro y Sudamrica. En lo que concierne a
Michoacn, la informacin es escasa y no se ha hecho ningn estudio sobre el
uso no maderable de la parota, por lo que esta investigacin se considera de
mayor importancia porque contribuir a su conocimiento y aprovechamiento.


3
2.- OBJETIVOS.

2.1. Objetivo general.

Extraer y determinar las propiedades de saponinas presentes en el fruto de
Enterolobium cyclocarpum (parota), as como su posible toxicidad.

2.2. Objetivos particulares.

1.- Obtener saponinas a partir del fruto de Enterolobium cyclocarpum (parota),
utilizando el mtodo fitoqumico de extraccin agua-alcohol.

2.- Determinar las propiedades de las saponinas obtenidas del fruto de
Enterolobium cyclocarpum (parota).

3.- Administrar el crudo de saponinas obtenido del fruto de Enterolobium
cyclocarpum (parota) en roedores, para determinar su posible toxicidad.


4
3.- ANTECEDENTES.

Para su empleo como agente hipocolesteromizante, se procedi a la
obtencin de crudos de saponinas a partir de la cascarilla de granos de
Chenopodium quinoa Wild (quina), mediante reflujo con etanol al 80%. Los
diferentes lotes de saponinas brutas obtenidas presentarn un rendimiento
promedio de 37.12%, sobre la base total de cascarilla (8.03% de la mas de
granos) y de 2.98% sobre la base total de granos. Estos productos no
reaccionaron fuertemente en las pruebas de Liebermann- Burchard y Selivoflo, y
su potencia hemoltica se enmarc en un recorrido de 42.6 hasta 28.4. Seis
muestras de crudos fueron sometidas a saponificacin sin que se observaran
cambios notables en la potencia hemoltica de los productos saponificados. Este
hecho, unido a que el total de los crudos obtenidos manifestaron una reaccin
negativa en las pruebas de Fehling y Molish. Sugieren que los productos
obtenidos se encuentran en forma de sapogeninas u otros derivados "no
saponificables (Hernndez, 1996).

En un estudio efectuado en el trpico seco, se encontr que la
suplementacin con concentrado a un nivel de 30% de gallinaza, parota o la
mezcla de ambas pueden usarse en la alimentacin de ovejas Pelibuey, sin
disminucin de su productividad ya que no hubo diferencias significativas, en
ninguno de los tres tratamientos cuanto a la ganancia diaria de peso, conversin
y eficiencia alimenticia. En forma prctica la recomendacin del uso de esos
ingredientes depender de su disponibilidad y costo (lvarez, 1999).

Se determinaron los efectos txicos de la asociacin fruto de parota
(Enterolobioum cyclocarpum) con estrella de frica (Cynodon plectostachyus) en
ovinos. Se concluy que, bajo las condiciones de este estudio, no existen efectos
txicos en ovinos alimentados con vaina y fruto de parota y estrella de frica, por
lo que resulta ser una alternativa en la alimentacin animal dado su valor
nutritivo, la facilidad de obtencin y bajo costo (Torres, 1999).

5
Es interesante destacar el alto rendimiento observado para Enterolobium
cyclocarpum (36.10g/espcimen / semana) y su viscosidad intrnseca (100ml/g),
en comparacin con la alta solubilidad en agua (50 g/ml) exhibida por la goma de
Anacardium occidentale. Los datos analticos estudiados sugieren la importancia
del cultivo de estas especies y la aplicacin de estas gomas en diversas
industrias nacionales (Rincn et al., 1999).
Las especies Enterolobium cyclocarpum, Samanea samn, Acacia
glomerosa y Anacardium occidentale producen goma con alto rendimiento. Las
propiedades fisicoqumicas estudiadas en los polmeros, provenientes de estas
especies, les confieren potencial aplicacin industrial (Rincn et al., 1999).

Realizaron un estudio sobre los efectos adversos de extractos de
saponinas obtenidas de Ilex paraguariensis y de una nueva especie de hierba
mate, Ilex dumosa var. reiss. Ante las evidencias de que las infusiones de Ilex
dumosa var. reiss podran ofrecer acciones diferentes a las infusiones de Ilex
paraguariensis, principalmente un bajo o nulo contenido en cafena y xantinas,
las cuales seran desde el punto de vista industrial potencialmente convenientes,
se propuso llevar a cabo la realizacin de investigaciones farmacolgicas bsicas
para profundizar en el conocimiento de las acciones de los extractos de Ilex
dumosa en animales de laboratorio, principalmente en el rea hematolgica
(Kochol et al., 2000),

Se realiz la extraccin de saponina del escarificado de quinoa
(Chenopodium quinoa). A lo largo de sta investigacin, se realizaron una serie
de experimentos para determinar el proceso ptimo de extraccin de la saponina
presente en la cscara de la quinua. Se determin que el mejor sistema de
extraccin es el de batch clsico con agitacin, porque tiene la ventaja de
recuperar el 30.4% de los slidos, si bien tiene la desventaja de presentar mayor
dificultad en la etapa de filtracin. El mtodo propuesto de extraccin batch bao
mara, slo recupera el 7.5% de los slidos, por lo que no es recomendable
(Campos, 2002).

6
La madera es muy apreciada para la lea y carbn, para la fabricacin de
canoas y embarcaciones ligeras por ser sumamente resistentes al agua, utilizadas
en carpintera y ebanistera en general. Los frutos verdes son astringentes y se
utilizan en medicina casera en casos de diarrea, el tronco exuda un lquido que se
emplea como remedio para bronquitis. En algunos lugares se cultiva como planta
de sombra y ornato particularmente en los potreros y a lo largo de los caminos, la
corteza contiene taninos y se utiliza para curtir pieles. El fruto contiene saponina y
se utiliza originalmente como sustituto de jabn. Los frutos maduros contienen un
jugo gomoso- resinoso que mezclado con la pulpa del mismo previamente
macerada sirve para fabricar aglomerados de carbn (Zamora et al., 2001).

Acacia glomerosa, Acacia tortuosa, Acacia macracantha, Samanea samn
y Enterolobium cyclocarpum, especies Mimosaceae venezolanas, tiene la
capacidad de exudar goma, despus de un estmulo apropiado. Datos de estas
gomas, determinados por mtodos analticos clsicos, son muy interesantes. Las
gomas de Acacia tortuosa y Acacia macracantha son muy solubles en agua; las
gomas de Enterolobium cyclocarpum y Samanea samn mostraron alto valor de la
viscosidad intrnseca. La composicin de azcares de las gomas estudiadas
demostr contener galactosa, arabinosa, ramnosa, cido glucuronico y su 4-0-
methyl derivado. Los datos obtenidos mostraron algunas similitudes con los
reportados para la goma de Acacia senegal, la cual tiene amplia aplicacin
industrial; por lo tanto, seria muy interesante ensayar el comportamiento de esas
gomas en la industria alimentara y en otras aplicaciones industriales.
(Abed, 2002).

La inclusin del 20% de la harina del fruto de la parota como sustituto de
grano y pasta proteica en la racin de ovinos estabulados, permiti mantener su
desarrollo con una disminucin significativa de los costos de produccin. La
viabilidad econmica de la utilizacin de la parota en la alimentacin de
rumiantes, refuerza la necesidad de orientar los estudios hacia el
aprovechamiento racional de los recursos forrajeros arbreos no convencionales

7
en la produccin animal (Peralta et al., 2003).

La incorporacin de Enterolobium cyclocarpum permiti mantener la
ganancia diaria y total de peso, as como el consumo de la materia seca sin
diferencia estadstica entre tratamientos, con una disminucin significativa en el
costo de la racin (Peralta et al, 2003).
La inclusin del 20% de harina del fruto de la parota como sustituto de
grano y pasta proteica en la racin de ovinos estabulados, permiti mantener su
desarrollo con una disminucin significativa de los costos de produccin.
La viabilidad econmica de la utilizacin de la parota en la alimentacin de
rumiantes, refuerza la necesidad de orientar los estudios hacia el
aprovechamiento racional de los recursos forrajeros arbreos no convencionales,
en la produccin animal (Peralta et al, 2003).

La cintica de la degradacin ruminal "in situ" del nitrgeno tiene un
comportamiento similar en los rboles de Enterolobium cyclocarpum y Brosimum
alicastrum en las primeras horas de incubacin en rumen, situacin que pudiera
estar relacionada con el alto contenido de prolaminas y/o glutelinas de estos
rboles (Febles. et al., 2003).

Se realiz la comparacin de los efectos de tres especies de rboles
frutales ricos en saponinas sobre la fermentacin del rumen. Las dietas contenan
100 mg/g de Sapindus saponaria (120 mg/g de crudos de saponinas), 200 mg/g de
Enterolobium cyclocarpum (19 mg/g de crudo de saponinas) o Pithecellobium
saman (17 mg/g de crudos de saponinas). Los resultados confirmaron el fruto de
Sapindus saponaria tiene efectos antiprotozoarios, lo cual indica que tiene el
potencial de reducir la produccin de metano en la fermentacin ruminal. Los
frutos de Enterolobium cyclocarpum y Pithecellobium saman, en las proporciones
usadas en este estudio, parecen tener un bajo valor en la reduccin del total del
rumen y el metano producido por los protozoarios. Los resultados tambin
muestran que la combinacin entre Sapindus saponaria y Enterolobium

8
cyclocarpum pueden ser particularmente promisorias como estrategias para
suprimir las emisiones de metano (Hess et al., 2003).

En este estudio fue probada la actividad antiprotozoa del follaje
Enterolobium cyclocarpum en el rumen de las ovejas. Los resultados del presente
estudio mostraron que la implementacin del follaje de E. cyclocarpum en la dieta
diaria de las ovejas claramente muestran una significante reduccin en la
poblacin de los protozoarios en el rumen, el perodo de aplicacin fue de 41 das.
En este estudio se concluye que la actividad antiprotozoa de E. cyclocarpum es
pasajera, con un corto perodo en donde efectivamente se reduce la poblacin de
protozoarios (arriba de 12-14 das), y solo cuando los animales son alimentados
por primera vez con tal dieta, ya que despus ste tiempo la poblacin se
restablece (Ivan et al., 2004).

Se estudiaron los efectos de remover el ganado y la aplicacin de
herbicidas sobre la sobrevivencia y crecimiento de tres especies plantadas dentro
de una regin tropical- seca de Panam, la cual est deforestada. La investigacin
se bas en demostrar si la utilizacin de ciertas plantas son herramientas viables
para la regeneracin natural de un rea expuesta a la reforestacin. Tres especies
econmicamente valiosas fueron escogidas para tal estudio; Cedrella odorata L.,
Enterolobium cyclocarpum (Jaq.) Griseb y Copaifera aromatica. Al inicio del
desarrollo de las plntulas, las semillas de C.odorata presentaron el mas grande
crecimiento con la aplicacin de ciertos rangos de herbicidas mientras que las
semillas de Enterolobium cyclocarpum tuvieron un crecimiento mayor con la
exclusin del ganado. La combinacin de estos dos factores, la aplicacin de
herbicidas y exclusin del ganado, ayudaron para un mejor crecimiento de ambas
especies. Adems, con la presencia del ganado, C. odorata creci
significativamente mejor que Enterolobium cyclocarpum. Para acelerar la sucesin
forestal, el herbicida debe ser aplicado al inicio y el ganado debe ser excluido
antes de fertilizar las plantas (Griscom et al., 2005),


9
En este estudio fue evaluado el valor de cuatro rboles tropicales de
leguminosas como fuentes de nitrgeno, Albizia lebbekoides, Enterolobium
cyclocarpum y Leucacena leucocephala, se utiliz la comparacin de la
produccin de gas in Vitro con otros mtodos para determinar la degradacin del
nitrgeno. La relacin entre la produccin de gas y amoniaco in Vitro es un
procedimiento til y barato para estimar la degradacin de nitrgeno de los rboles
tropicales utilizados. Albizia lebbekoides tuvo la mas alta produccin de gas,
asociado con una moderada degradacin del nitrgeno, indicando que es un
alimento potencialmente nutritivo para los rumiantes en el trpico (Mota et al.,
2005).


10
4.- CLASIFICACION TAXONOMICA.
Reino: Plantae
Divisin: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsida (Dicotiledneas)
Orden: Fabales (Leguminosae)
Familia: Mimosaceae
Gnero: Enterolobium
Especie: Enterolobium cyclocarpum (Jacq.) Griseb.

Tomado de: Sarukhn, 1998.

5.- DESCRIPCION BOTANICA.

Forma: rbol grande, llamativo, caducifolio, de 20 a 30 m (hasta 45 m de
altura), con dimetro normal hasta de 3 m.

Copa y hojas: Copa hemisfrica. El follaje es abundante, dando a la amplia
copa una forma mas ancha que alta. Libre de competencia por luz y puede
alcanzar grandes dimetros. Hojas bipinnadas con 4-15 pares de pinnas opuestas,
miden de 15 a 45 cm de largo; foliolos numerosos (15 a 30 pares por pinna) de
color verde brillante que se pliegan durante la noche.

(a)


11
(b)
Figura 1.- Haz de la hoja del rbol Enterolobium cyclocarpum.

(a)
(b)

Figura 2.-Envs de las hojas del rbol de Enterolobium cyclocarpum.

Tronco y ramas: Tronco recto y a veces con pequeos contrafuertes en la
base. Ramas ascendentes.

Corteza: Corteza externa lisa rugosa y a veces ligeramente fisulada, gris
clara a gris pardusca, con abundantes lenticelas alargadas, suberificadas,
dispuestas longitudinalmente. Corteza interna de color crema rosado, granulosa
con exudado pegajoso y dulce. Grosor de 2 a 3 cm.

Flores: En pequeas cabezuelas pedunculadas axilares, de 1.5 a 2 cm de
dimetro, sobre pednculos de 1.5 a 3.5 cm. de largo. Flores actinomrficas, cliz
verde y tubular; corola verde y clara, de 5 a 6 mm de largo.

Fruto: Caracterstico de la especie (fruto seco). Consiste en una vaina
circular indehiscente, de 7 a 15 cm de dimetro, aplanada y enroscada, leosa,

12
moreno oscura, brillante de sabor dulce. Contiene de 5 a 20 semillas.

Figura 3.- Fruto verde del rbol de Enterolobium cyclocarpum.

(a)

(b)

Figura 4.- Fruto seco de Enterolobium cyclocarpum, con semillas.

Semillas: Grandes, ovoides y aplanadas, de 2.3 por 1.5 cm, morenas y
brillantes con una lnea plida con la forma del contorno de la semilla, rodeadas
por una pulpa fibrosa y esponjosa de olor y sabor dulce.
Presentan una testa extremadamente dura que impide la germinacin hasta que
una modificacin estructural permite la hidratacin del embrin.


13

Figura 5.- Semillas del fruto de Enterolobium cyclocarpum.

Raz: Sistema radical extenso y profundo.
Sexualidad: Hermafrodita.
Numero cromosmico: 2n = 26

Tomado de: Sarukhn, 1998.

5.1.- Distribucin geogrfica.

Originaria de Amrica Tropical, se extiende desde el Oeste hasta el Sur de
Mxico (23 N), a travs de Centroamrica hasta el Norte de Sudamrica:
Colombia, Venezuela, Trinidad, Guyana y el extremo Norte de Brasil, (Quesada, et
al., 1997).
En Mxico se encuentra ampliamente distribuida en la vertiente del Golfo de
Mxico desde el Sur de Tamaulipas hasta la Pennsula de Yucatn y en la
vertiente del Pacfico desde Sinaloa hasta Chiapas, en altitud de 0 a 800 m.

Estados: Campeche, Colima, Guerrero, Jalisco, Chiapas, Michoacn,
Morelos, Nayarit, Oaxaca, Puebla, Quertaro, Quintana Roo, San Luis Potos,
Sinaloa, Sonora, Tamaulipas, Veracruz y Yucatn.


14

Figura 6.- Distribucin natural de Enterolobium cyclocarpum (parota) en Mxico y
Amrica Central y del Sur. Tomado de: Sarukhn, 1998.

5.2.- Hbitat.

Se desarrolla en regiones costeras del pas y a lo largo de ros y arroyos.
Su hbitat propicio es de baja elevacin (abajo de 500 msnm) presenta su mejor
desarrollo en los suelos conocidos como vertisol plico y vertisol gleyco (FAO).
Suelos arenoso- arcilloso, arenoso, negro.

Es componente frecuente de la vegetacin perturbada de las zonas
tropicales hmedas y subhmedas de baja altitud en Mxico y Centroamrica. Es
difcil relacionar esta especie con algn tipo de vegetacin primaria,
aparentemente se encuentra en asociaciones primarias de selvas medianas
caducifolias y subcaducifolias. Crece en zonas perturbadas de selvas altas y
medianas.


15
5.3.- Ciclo de vida.

Es una especie de crecimiento rpido (en condiciones de alta luminosidad).
Presenta follaje caducifolio, los rboles pierden sus hojas cuando fructifican.

Polinizacin: Entomfila. La polinizacin es llevada a cabo por palomillas y
abejorros pequeos de actividad nocturna.

Desarrollo de las Plntulas: La germinacin de la parota comienza casi
inmediatamente despus de la penetracin de agua a la semilla. Muchas plntulas
brotan del suelo al cuarto da despus de la siembra. La germinacin es epigea.
La siembra se puede efectuar en bandejas, semilleros, bolsas de vivero o
directamente en el campo. El presionar las semillas en turba hmeda o cubrirlas
con una capa de suelo hmedo de 1 2 cm, es adecuado para la germinacin.
Las plntulas se desarrollan con rapidez, no necesitan de sombra y son
resistentes a la sequa. Por lo general se puede obtener una buena supervivencia
usando plntulas en contenedores y el plantado de cepas o tocones (Bauer,
1982).

La regeneracin natural es poco frecuente, debido a varias causas: Las
semillas se esparcen principalmente a travs de los animales de pastoreo y
despus de germinar y crecer un poco, son casi siempre consumidas por los
mismos animales.


16
6.- DESCRIPCIN DEL REA DE ESTUDIO

6.1.- Localizacin y superficie.

El Municipio de Chinicuila se localiza al Suroeste del Estado de Michoacn,
en las coordenadas 1845' de latitud Norte y 10322' de longitud Oeste, con altitud
de 680 m. Limita al Norte con el Estado de Jalisco, al Este con Coalcomn, al Sur
con Aquila y al Oeste con Coahuayana y el Estado de Colima (INEGI, 1985). La
superficie es de 928.64 km y representa 1.35 % de la superficie de Michoacn.

Figura 7.- Ubicacin del Municipio de Chinicuila, Estado de Michoacn, Mxico


17
6.2.- Fisiografa.

Es de relieve escarpado por La Sierra Madre del Sur o Sierra de
Coalcomn. Los cerros ms importantes son: Silleta, El Cascarn, El Puerto del
Aire, Agua Colorada, Caimn y Naranjillo (INEGI, 1985).

6.3.- Hidrografa.

El sistema hidrogrfico lo constituyen los ros La Minita, Villa Victoria y
Huizontla, as como los arroyos Salitre de Coapala, El Bejuco y El Maicillo (INEGI,
1985).

6.4.- Clima.

El clima es Aw
1
(w); tropical con lluvias en verano, la precipitacin pluvial
anual es de 1,183.8 mm las temperaturas varan de 21.3 a 32.4 C. (INEGI,
1985).

6.5.- Tipo de suelos.

Los suelos del municipio datan de la Era Mesozoica y del perodo Cretcico
inferior. Predominan los feozem, regosol utrico y litosoles con textura media (Hh
+Re + I/2). Le siguen las resinas y luvisol clcico, con textura fina (E + I + Lk/3).
Finalmente se encuentran los de tipo vertisol plico, con textura fina (Vp/3). Su
uso es primordialmente ganadero y forestal. Se registra como una zona de suelos
no aptos para la agricultura (INEGI, 1985).


18
6.6.- Recursos naturales.

6.6.1.- Flora y fauna.

En el Municipio predominan los siguientes bosques: tropical subcaducifolio,
con parota, cueramo, ceiba, chico zapote; mixto, con pino, encino y cedro. La
fauna la conforman el coyote, cacomixtle, tlacuache, conejo, zorrillo, ocelote,
nutria, comadreja, ardilla, venado, puma, paloma, cerceta, trtola, pato, carpa y
mojarra (INEGI, 1985).

6.6.2.- Recursos forestales.

La superficie forestal maderable corresponde al bosque de pino-encino y el
bosque tropical subcaducifolio.
(http://mapserver.inegi.gob.mx/geografia/espanol/estados/mich/tsuelosagr.cfm)

6.7.- Minera.

Existen yacimientos de hierro y un yacimiento de manganeso.
(http://mapserver.inegi.gob.mx/geografia/espanol/estados/mich/tsuelosagr.cfm)

6.8.- Actividades econmicas.

6.8.1.- Agricultura.

Es la segunda actividad en importancia y se cultiva maz y frjol de temporal,
adems del cultivo de arroz (INEGI, 1988).


19
6.8.2.- Ganadera.

Es la primera actividad econmica en importancia con 17,733 cabezas de
ganado vacuno (INEGI, 1988).

6.8.3.- Comercio.

Cuenta con tiendas de abarrotes, farmacias, fruteras y venta de alimentos
(INEGI, 1988).


20
7.- MARCO TEORICO.

7.1.- Descripcin general de los glicsidos.

El trmino glicsido es un trmino general para los acetales o cetales,
formados por una reaccin de un azcar con un alcohol o un fenol. Los glicsidos
derivados de la glucosa, son llamados glucsidos.

Todos los glicsidos se nombran de acuerdo con el azcar particular del
cual derivan (monsidos, fructsidos, ribsidos, etc.). Los alcoholes o fenoles
naturales, a menudo se combinan en las clulas con algn azcar (normalmente
glucosa) formando un glucsido. Los mltiples grupos oxhidrilo presentes en la
porcin de azcar del glicsido, ayudan a solubilizar los compuestos que de otra
manera seran insolubles en el protoplasma celular. Mltiples pigmentos de
plantas, sustancias que dan sabor, esteroides, etc., se encuentran en la
naturaleza como glicsidos (Hart et al., 1980).

7.2.- Caractersticas generales de las saponinas.

Las saponinas son un grupo de glucsidos (sustancias orgnicas donde la
funcin carbohidrato est formada de una o ms molculas de monosacridos;
estn combinados con ms grupos no azucarados, son fcilmente hidrolizables
por la accin de enzimas cidos) que se disuelven en agua y disminuyen la
tensin superficial de sta; por lo tanto, tienen la propiedad de producir espuma
abundante, y relativamente estable. Por hidrlisis de las saponinas se obtienen
carbohidratos y una aglicona, llamada generalmente sapogenina, la cual puede
tener un esqueleto esteroidal o de triterpeno (Domnguez, 1979).

Entre las plantas que contienen saponinas, se encuentran la espinaca,
betabel (remolacha), esprrago, alfalfa, soya, etc., tambin se encuentran en el
veneno de las serpientes y en el de las estrellas de mar (Oakenful, 1981, de
acuerdo con Palencia, 2003).

21
Las saponinas estn constituidas por grandes molculas orgnicas,
esteroides y triterpenos, unidas a una o varias molculas, por lo que contienen
los elementos necesarios para emulsionar la grasa: Una parte lipoflica, que es el
esteroide o el triterpeno, por medio del cual se unir la grasa y una parte
hidroflica, que es el azcar (pentosas, hexosas cidos urnicos) por medio del
cual se unir al agua. Se conocen ms de 200 saponinas esteroidales,
localizadas en las monocotiledneas principalmente, en las familias de las
liliceas, amarilidceas y dioscoreceas y las saponinas triterpenoides se han
aislado principalmente en dicotiledneas (Hernndez, 1996).

Los dos tipos de saponinas presentan ciertas propiedades distintivas que
sirven de base para su identificacin rpida: a) sabor amargo, b) produccin de
espuma al ser agitadas en soluciones acuosas, c) produccin de hemlisis de los
glbulos rojos, d) toxicidad en animales de sangre fra, en especial los peces
(sapotoxinas), a los cuales les provocan parlisis de las agallas, e) la mayora de
las saponinas son solubles en diferente grado en soluciones de alcohol-agua,
propiedad que se emplea en diversas tcnicas para su extraccin y purificacin,
f) produccin de una reaccin positiva en la prueba de Lieberman- Burchard. Por
lo general, las saponinas esteroidales en esta prueba, manifiestan colores que
varan desde el azul hasta el verde y las triterpnicas, rosado, rojo o violeta
(Hernndez, 1996).

Antes de describir los dos tipos de saponinas, se dar una introduccin a
los componentes bsicos que forman a estas sustancias, los cuales son:
terpenos y esteroides.

Los terpenos y los esteroides son un conjunto heterogneo de molculas,
con las siguientes propiedades: Estn presentes en las clulas, se extraen con
solventes orgnicos, se derivan estructural y metablicamente del isopreno. El
isopreno a 2-metil-1,3-butadieno es un hidrocarburo de 5 carbonos.


22
Las sustancias asociadas a los lpidos, son mltiplos del isopreno y dan
lugar a estructuras lineales o acclicas, los terpenos y los esteroides,
respectivamente.

7.3.- Terpenos.

Estn constituidos por unidades mltiples del hidrocarburo de cinco
tomos de carbono isopreno. Los terpenos que contienen dos unidades de
isopreno se llaman monoterpenos, los cuales contienen tres unidades que se
denominan sesquiterpenos y los que contienen cuatro, seis y ocho unidades
reciben el nombre de diterpenos, triterpenos y tetraterpenos, respectivamente.
Los terpenos pueden ser molculas lineales o cclicas y algunos de ellos
contienen estructuras de ambos tipos (Lenhinger, 1995).

En los vegetales se han identificado un nmero muy grande de terpenos,
muchos de los cuales poseen olores o sabores caractersticos y son
componentes principales de los aceites esenciales, obtenidos de las plantas. De
este modo los monoterpenos geraniol, limoneno, mentol, pineno, alcanfor y
carvona, son componentes principales del aceite de geranio, de menta, de
trementina, de alcanfor y de alcaravea, respectivamente. Entre los triterpenos
figura el escualeno, precursor importante en la biosntesis del colesterol. Entre
otros terpenos superiores se incluyen los carotenoides, que son una clase de
CH
3

C CH
2

H
2
C CH

ISOPRENO

23
hidrocarburos tetraterpnicos; un carotenoide importante es el -caroteno,
hidrocarburo precursor de la vitamina A. Entre los terpenos ms importantes hay
tres miembros del grupo de las vitaminas liposolubles; son las vitaminas A, E, y
K, aunque de estas sustancias, solamente se requieren cantidades mnimas en la
dieta de los mamferos.

Otra clase importante de terpenos, es la representada por los poliprenoles,
compuestos poliisoprenoides lineales de cadena larga, con un grupo alcohol
primario terminal.

7.4.- Esteroides.

Los esteroides son importantes molculas derivadas del hidrocarburo
tetracclico saturado perhidrociclopentanofenantreno. De fuentes naturales se
han aislado muchos esteroides diferentes, cada uno de los cuales posee una
funcin o actividad caracterstica. Los esteroides difieren en el nmero y en la
posicin de sus dobles enlaces, en el tipo, localizacin y nmero de los grupos
funcionales sustituyentes en la configuracin y de los enlaces, entre sus
grupos sustituyentes y el ncleo y en la configuracin que adoptan los anillos
entre s, ya que el hidrocarburo originario posee seis centros de asimetra. Todos
los esteroides se originan a parir del escualeno, triterpeno lineal que se cicla con
facilidad. El primer producto esteroide importante de esta ciclacin es el
lanosterol, que es el precursor del colesterol en los tejidos animales. El colesterol
y el lanosterol son miembros de un gran subgrupo de esteroides, llamados
esteroles. El colesterol funde a los 150C y es insoluble en el agua, pero se
extrae fcilmente de los tejidos con cloroformo, ter, benceno o alcohol caliente.
El colesterol se encuentra en las membranas plsticas de muchas clulas
animales y en las lipo-protenas del plasma sanguneo.

En los tejidos animales, el colesterol es el precursor de otros muchos
esteroides; se incluyen entre ellos los cidos biliares, compuestos con carcter

24
detergente que ayudan a la emulsin de los lpidos y a su absorcin intestinal; los
andrgenos u hormonas sexuales masculinas; la progesterona, que es una
hormona progestgena y las hormonas adrenocorticales.

7.5.- Saponinas triterpnicas.

Las saponinas triterpnicas, por lo general tienen un anillo oleano y ms
raramente ursano o damarano. Muchos son cidos, debido a la presencia de uno
o dos grupos carboxilo en la aglicona y/o la mitad de azcar y se encuentran
unidos en la posicin 3. Los grupos de carbohidratos usualmente contenidos son
unidades de 1-6 monosacridos, siendo los ms comnes la glucosa, galactosa,
ramnosa, arabinosa, fucosa, xilosa, cido galacturnico y cido glucurnico
(Domnguez, 1979).

Las saponinas triteprnicas son raras en las monocotiledneas, abundan
en muchas familias de las dicotiledneas, especialmente en Caryophillaceae,
Sapindaceae, Polygalaceae y Sapotaceae, Compositae, Cucurbitaceae,
Linaceae.

Las saponinas triterpenoides se han clasificado en tres grupos,
representados por -amirina, -amirina y lupeol (esterol unido a una cadena corta
de uno o ms azcares). Los cidos triterpenoides relacionados, se forman por
sustitucin de un grupo metilo por un grupo carbonilo en las posiciones 4, 17 20
de las sustancias anteriormente citadas (Domnguez, 1979).

Las plantas contienen frecuentemente cantidades considerables de
saponinas triterpnicas, la raz de prmula contiene alrededor de 5-10%; la raz
de regaliz entre 2-12%, la corteza de quilaya contiene hasta 10% de la mezcla
conocida por el nombre de saponina comercial y las semillas de castao de
Indias, hasta el 13% (Palencia, 2003).


25
Cuadro 1.- Estructuras de algunas saponinas triterpenoides ms conocidas que
se han establecido recientemente.

Saponina Genina Componentes
glucosdicos
Fuentes
Aescina Aescigenina 2-glucosa, 1 cido
glucurnico, 1
cido tglico
Aesculus
hippocastanum
Aralina Aralidina 2 arabinosas, 1
cido glucurnico
Aralia japonica
Calndula-
saponina A
cido oleanlico 2 glucosas, 1
galactosa 1 cido
glucurnico
Calendula
officinalis
cido glicirrcico cido glicirretnico 2 cido
glucurnicos
Gilicirriza spp.
Gualanina cido
noroleanlico
1 ramnosa, 1
glucosa, 1
arabinosa
Guaiacum spp.
Gipsfila Gipsogenina 1 galactosa, 1
xilosa, 1
arabinosa, 1
fucosa, 1
ramnosa
Gipsophila spp.
Hederacsido A
(hederina)
Hederagenina 1 glucosa, 1
arabinosa
Hedera helix
Prmula- saponina Primulgenina 1 ramniosa, 1
glucosa, 1
falactosa, 1 cido
glucurnico
Primula spp.
Quilaya-saponina cido quilyco 1 cido
glucurnico, 6
azcares y restos
acilo
Quillaia saponaria
Salko-saponina A Saikogenina 1 glucosa, 1
fructosa
Bupleurum spp.


26
Todas las saponinas triterpnicas poseen actividad hemoltica, la cual
puede ser dbil a fuerte dependiendo del tipo de sustituyentes (Domnguez,
1979).

La mayora de las saponinas en alimentos son del tipo triterpenoide como
las presentes en la soya (Oakenful, 1981, de acuerdo con Palencia, 2003).

Las saponinas triterpenoides desempean diversas funciones biolgicas
en animales. Por ejemplo, algunas provocan la formacin de espuma en el
intestino, lo cual causa indigestin gaseosa (timpanitis) en el ganado que come
plantas jvenes de alfalfa. Sin embargo, estas saponinas no repelen el ganado,
por el contrario, ste prefiere tales plantas que las maduras, con mucho menor
contenido de saponinas (Salisbury et al., 1994).

7.6.- Saponinas esteroidales.

Las sapogeninas de las saponinas esteroidales, son principalmente
derivados de espirostanol y furostanol, que son normalmente convertidas en
espirostanoles durante el aislamiento. Estas sapogeninas no tienen grupos
carboxilo, no muchas unidades de azcar como las triterpnicas; la mayora de
los compuestos de este grupo, estn presentes en las plantas como glucsidos.
Las uniones glucosdicas estn usualmente unidas a C-1, C-8 y C-6 y los
glucsidos estn presentes en forma de antrona: los glicsidos encontrados
glucosa, ramnosa y apiosa (Domnguez, 1979).
Estn menos distribuidas en la naturaleza que las saponinas
triterpenoides. Los estudios fitoqumicos han demostrado su presencia en
muchas familias de las monocotiledneas, especialmente en Dioscoreaceae y
Liliaceae. Entre las dicotiledneas, en Leguminosae y Solanaceae.


27
Cuadro 2.- Algunos tipos de saponinas esteroidales presentes en algunas plantas.

Saponinas Componentes
glucosdicos
Localizacin
Sarsaponina 2 glucosas, 1 ramnosa Smilax spp.
Digitonina 2 glucosas, 2 galactosas
1 xilosa
Digitalis purpurea
Gitonina 1 glucosa, 2 galactosas,
1 xilosa
Digitalis purpurea
Dioscina 1 glucosa, 2 ramnosas Dioscorea spp.

Las saponinas esteroidales son de gran inters e importancia por su
relacin con compuestos como las hormonas sexuales, cortisona, esteroides
diurticos, vitamina D y hetersidos cardacos. Algunas son utilizadas como
material de partida para la sntesis de estos compuestos (Palencia, 2003).

Aunque algunas saponinas esteroidales han mostrado diversas actividades
biolgicas (antimicrobiana, citotxica, antitumoral, ictiotxica, molusquicida,
insecticida, antihelmntica, expectorante, diurtica, cardiovascular, antiinflamatoria,
anti-lcera, espermicida, analgsica, antipirtica, sedante, antifertilidad,
antihepatotxica, etc.), fundamentalmente se han constituido desde hace bastante
tiempo, como precursores nicos de muchos medicamentos esteroides tales como
hormonas sexuales, corticoides, contraceptivos orales y diurticos a
partir de esteroides naturales. La produccin industrial de estas sustancias
requiere una serie de procesos microbiolgicos de fermentacin y una serie de
conversiones qumicas relativamente complejas y en su gran mayora patentadas
por los grandes laboratorios farmacuticos (Martnez, 1999).

7.7.- Aislamiento de las saponinas.

Las saponinas son sustancias muy polares y es posible extraerlas en
caliente o en fro, con agua o alcoholes de bajo peso molcular. Los materiales

28
lipoides presentes en estos extractos, se separan con benceno. Por hidrlisis de
las saponinas se obtienen carbohidratos y una aglicona, llamada genricamente
sapogenina, la cual puede tener un esqueleto esteroidal o de triterpeno. Las
saponinas se pueden hidrolizar con cido clorhdrico cido sulfrico.

7.8.- Importancia de las saponinas.

Antes de que el hombre creara la industria del jabn, se usaban jabones
naturales, conocidos por los mexicanos como amole entre los cuales se incluyen
a las saponinas. Los pueblos prehispnicos del centro de Mxico, llamaban
amole a las plantas que tiene la propiedad de hacer espuma con el agua, como
es el caso de la parota, por lo que se han utilizado desde la antigedad para
lavar ropa. An en la actualidad en muchas comunidades rurales se emplea el
amole tanto para lavar ropa fina, como para evitar que se deteriore, ya que es un
detergente neutro perfectamente degradable (Hernndez, 1996).

Como ya se mencion, las saponinas son altamente txicas a peces y a
otros animales acuticos de sangre fra o que respiran por branquias, sin
embargo, su efecto daino en animales superiores es variable. En la actualidad
se ha realizado un notable incremento en el conocimiento de este tipo de
compuestos, porque aparte de que manifiestan ciertas propiedades txicas,
tambin se les han reconocido otras cualidades tecnolgicas y medicinales (Birk
and Peri, 1980; Oakenful, 1981, de acuerdo con Palencia, 2003).

Las saponinas se encuentran altamente distribuidas en el reino vegetal,
donde se pueden encontrar en hojas, races, tallos y flores. Dentro de las plantas
comestibles que contienen este tipo de sustancias, se encuentran las siguientes:
soya, alfalfa, espinacas, esprragos, avena y garbanzo; tambin se encuentran
presentes en el veneno de las serpientes y en el de las estrellas marinas. La
mayora de las saponinas son del tipo triterpenoide como las presentes en la
soya. (Oakenful, 1981; Hegsted and Linkswiler, 1980, de acuerdo con Palencia,

29
2003).

Entre las saponinas de naturaleza esteroidal, son muy importantes los
glicsidos cardiacos, como el obtenido de la dedalera (Digitalis purpurea). El
extracto obtenido de las semillas contienen una mezcla de saponinas y es muy
til en el tratamiento de enfermedades del corazn (Hernndez, 1996).

Debido a que las saponinas slo son absorbidas en cantidades nfimas por
el intestino, actan especialmente en la luz del tracto gastrointestinal. Se les
atribuye un efecto protector del cncer de estmago e intestino. Las saponinas
presentes en las legumbres ejercen, as mismo, una influencia sobre diversos
factores inmunitarios, actan sobre determinados tipos de clula haciendo que se
produzcan ms anticuerpos. Las saponinas son capaces de captar y combinarse
con el colesterol alimentario en el intestino, e impedir as que pueda llegar a la
sangre. Adems, pueden captar tambin cidos biliares primarios y facilitar su
eliminacin del cuerpo (Palencia, 2003).

Las saponinas son irritantes celulares, aprovechndose en dosis
medicinales como expectorantes diurticos, por va oral, en dosis altas irritan la
mucosa bucofarngea y digestiva, produciendo un aumento de la secrecin de
todas las glndulas, lo cual aclara el mucus denso facilitando su expulsin y
consigue que el nuevo mucus que se forme fluya fcilmente, lo cual tambin se
refleja en los bronquios.

Las saponinas se producen de forma comercial y tienen mltiples usos:
agente emulsionante de grasas y aceites, protector de sustancias coloidales,
dentfrico, emulsificador de la industria fotogrfica. Se agrega a las bebidas para
la espuma y en extinguidores de incendios (Tocal y Rosende, 1986).


30
7.9.- Hemlisis.

Una caracterstica muy importante que presentan las saponinas, es la
capacidad de provocar hemlisis en los eritrocitos, caracterstica que merece una
mencin especial; a continuacin se explica ste importante fenmeno.
En general, las membranas celulares son permeables al agua y a algunos
solutos e impermeables a otros, pero en equilibrio las concentraciones, y por
tanto, las presiones osmticas de un lado y otro de la membrana, son iguales.
Una situacin fisiolgica dada, se define en relacin con la concentracin de
soluciones en ambos lados de una membrana, si la presin osmtica es igual a
un lado y otro de la membrana, se habla de soluciones isosmticas o isotnicas;
si la solucin tiene menor presin se denomina hipotnica. Un ejemplo es el de
los glbulos rojos, suspendidos en soluciones de distinta concentracin; cuando
se colocan en agua o en soluciones salinas con menos de 320 miliosmoles
(equivalentes a 0.9 g de NaCl por 100 mL de agua), los glbulos rojos se hinchan
y se rompen debido a la tendencia de igualar la concentracin de solutos en el
interior del glbulo y en su exterior; las protenas no pueden salir del eritrocito y la
velocidad de entrada del agua supera con mucho a la velocidad de salida de los
solutos de pequeo tamao molecular; la pared del glbulo rojo no resiste esa
presin: el fenmeno de ruptura de los glbulos rojos se denomina hemlisis.
Cuando los glbulos rojos se colocan en soluciones con ms de 320 miiosmoles,
entra y sale la misma cantidad de agua y los glbulos estn en una solucin
isotnica. La isotonicidad entre todas las clulas y los compartimentos lquidos
debe de mantenerse constante; cualquier alteracin implica su correccin
inmediata para regresar al equilibrio. Por ejemplo, si se bebe mucha agua y la
sangre se diluye, la presin osmtica de la sangre baja y pasa ms agua, de la
sangre a los tejidos, el organismo tiende a restablecer el equilibrio eliminando
agua por va renal, mientras la concentracin de agua en los tejidos no vuelve al
estado normal.


31
8.- MATERIALES Y METODOS.

8.1.- Trabajo de gabinete.

Esta parte consisti en una investigacin bibliogrfica continua, que
permiti reunir la informacin necesaria que fue bsica para la elaboracin del
marco terico del protocolo de la tesis, as como apoyo en el desarrollo de esta
investigacin y la discusin de los resultados obtenidos.

8.2.- Trabajo de campo.

Colecta del fruto.

El rbol de Enterolobium cyclocarpum, se localiza en zonas subtropicales
y tropicales, en Michoacn se localiza en Tierra Caliente y la Costa Michoacana,
por lo que se consider necesario desplazarse al Municipio de Chinicuila,
Michoacn y recolectar los frutos en el periodo comprendido entre marzo y mayo.

La semilla se recolect de forma manual, puesto que en las fechas de la
colecta el rbol suelta los frutos y son recogidos directamente del suelo (antes
de que el ganado los consuma), para luego proceder a colocarlos en sacos de
yute para ser transportados al laboratorio. Los frutos colectados fueron usados
exclusivamente como muestras de laboratorio para analizar sus propiedades.

8.3.- Trabajo de laboratorio.

El presente trabajo se realiz en el Laboratorio de Qumica de la Facultad
de Biologa de la Universidad Michoacana de San Nicols de Hidalgo y su
desarrollo contempl las siguientes etapas:


32
8.3.1.- Proceso de separacin en seco.

Antes de comenzar con la extraccin del crudo de saponinas a partir del
fruto de Enterolobium cyclocarpum, se procedi a la separacin de las partes del
fruto de la siguiente manera:

- La primera parte fue separar la capa externa del fruto, en donde se encuentran
concentrados los azcares que forman la pulpa, misma que al encontrarse el
fruto seco se fue desprendiendo. Este procedimiento fue de forma manual.
- La segunda parte fue separar la fibra, que al encontrarse el fruto seco se fue
desprendiendo manualmente.
- La ltima parte fue la obtencin de la semilla, la cual tambin se separ
manualmente.

8.3.2.- Prueba de la espuma.

Se colocaron en un matraz erlenmeyer 10g de muestra del fruto de
Enterolobium cyclocarpum (pulpa, cscara, fibra) con 75 mL de agua destilada a
40 C aprox., inmediatamente se agit vigorosamente por cinco minutos. La
prueba se considera positiva si la espuma perdura por ms de 5 minutos. Esta
prueba fue realizada con el fin de determinar la presencia de saponinas.

8.3.3.- Tcnica de obtencin del crudo de saponinas.

Se utiliz la cscara (epicarpio), la pulpa y la fibra (mesocarpio) del fruto
de Enterolobium ciclocarpum para la obtencin de crudos de saponina, los cuales
se molieron en un molino manual y se tamizaron.

La obtencin del crudo de saponinas, se realiz siguiendo la tcnica de
extraccin con etanol segn el proceder descrito por Domnguez (1979) mediante
el cual, el crudo de saponinas fue extrado con 300 mL de etanol acuoso al 80%

33
y 50g de muestra seca, haciendo el reflujo durante dos horas en un equipo
Soxhlet. El extracto se concentr por sequedad en Bao Mara para la
eliminacin del etanol. El extracto se disolvi en etanol acuoso al 50%, se le
aadi igual volumen de benceno saturado con etanol al 50% y se agit
vigorosamente.

Se repiti varias veces el proceso de extraccin y se elimin en cada paso
la fase bencnica con las grasas y colorantes vegetales. La fase hidroalcohlica
se evapor hasta la sequedad y se obtuvo un material de color pardo oscuro, que
es el crudo de saponinas. Se realizaron tres extracciones de la siguiente manera:

La primera extraccin se realiz a partir de la molienda y tamizado de 50g
de muestra seca (cscara, pulpa, semilla).
La segunda extraccin se realiz a partir de 50g de muestra seca, pero
solamente molida, sin tamizar.
Por ltimo, la tercera extraccin se realiz a partir de 40g de muestra seca,
pero sin moler ni tamizar.

8.3.4.- Prueba de Liebermann-Burchard.

La prueba de Liebermann-Burchard fue utilizada como una herramienta de
identificacin del tipo de saponinas presentes en el fruto de Enterolobium
cyclocarpum.

Se tomaron algunos mg del crudo de saponinas obtenido con 1 mL de
anhdrido actico y uno de cloroformo, se enfriaron a 0 C y se les aadi una
gota de cido sulfrico concentrado. Si hay formacin de colores azul, verde,
rojo, anaranjado, los que cambian con el tiempo, la prueba es positiva.


34
8.3.5.- Prueba de hemlisis.

Se procedi a la realizacin de la prueba de hemlisis con el fin de
comprobar que las saponinas presentes en el fruto de Enterolobium cyclocarpum
son capaces de producir hemlisis en las clulas sanguneas, la cual es una
caracterstica importante que presentan las saponinas

Se determin el porcentaje de hemlisis de las saponinas (obtenidas del
fruto de Enterolobium cyclocarpum) en eritrocitos. Se utiliz sangre humana, la
cual se puso directamente en contacto con las muestras del crudo de saponinas a
diferentes concentraciones.

A continuacin se muestra el cuadro en donde se presentaron y registraron
los resultados obtenidos. La primera columna muestra la concentracin del crudo
de saponinas, en la segunda columna se muestra la cantidad de buffer isotnico y
en la ltima columna el porcentaje de hemlisis en la sangre.

Cuadro 3.- Concentraciones de saponinas, buffer isotnico y porcentaje de
hemlisis.
(1) Muestra de saponinas
(mg/ mL)
(2) Buffer isotnico (mL)

(3) Porcentaje de hemlisis
en los eritrocitos.
10 0
8 2
6 4
4 6
2.0 8.0
1.8 8.2
1.6 8.4
1.4 8.6
1.2 8.8
1.0 9.0


35
(1) Muestras de saponinas: Se prepararon diluciones de los crudos de
saponinas en buffer isotnico. La primera dilucin fue solamente con 10
mL de crudo de saponinas, sin buffer isotnico. La segunda dilucin fue con
8 mL de crudo de saponinas diluido en 2 mL de buffer isotnico. La tercera
dilucin fue con 6 mL en 4 mL de buffer isotnico, y as sucesivamente
hasta lograr que el porcentaje de hemlisis causado por el crudo de
saponinas sea el menor posible.

(2) Buffer isotnico: Se disolvieron 3.95g de HNa
2
PO
4
.2H
2
O: 0.76g de H
2
KPO
4
y 7.20g de NaCl para 1 L de solucin a pH 7.4.

(3) Porcentaje de hemlisis: El porcentaje se midi a partir de la observacin
directa de los eritrocitos en el microscopio a 40X y 100X. Se puso en
contacto una gota de sangre con el crudo de saponinas a diferentes
diluciones en buffer isotnico y se observ al microscopio. Se observ a
qu nivel el crudo de saponinas disminuye o deja de producir hemlisis en
los eritrocitos, esto se manej de manera porcentual.

8.3.6.- Prueba de toxicidad.

Esta prueba fue realizada en el bioterio del Instituto de Investigaciones
Qumico-Biolgicas de la Universidad Michoacana de San Nicols de Hidalgo.
Se utilizaron 2 ratones blancos y 2 ratas blancas. Fueron escogidos al azar
y colocados individualmente en jaulas.
A un ratn y a una rata se les administr el crudo de saponinas por medio
del alimento normal que consumen diariamente, mientras que a los otros
animales, una rata y un ratn, se les administr el crudo de saponinas por medio
del agua en sus bebederos, con una concentracin inicial de 50/50 mg/ mL con
una administracin diaria de 25 mL en ratn y 50 mL en rata.
El perodo experimental fue de dos meses, en el cual todos los roedores
fueron alimentados por la maana. Al trmino de cada semana se les pes y


36
diariamente se observ la excreta de los roedores; as tambin se les pes al
inicio y final del experimento.


37
9.- RESULTADOS Y DISCUSION.

9.1.- Prueba de la espuma.

Se realiz una primera prueba de la espuma para determinar si haba o
no la presencia de saponinas en el fruto de Enterolobium cyclocarpum. Por lo
que, se procedi a tomar una muestra de tal fruto (corteza, pulpa, fibra)
agregando agua destilada y agitndola para as, formar una espuma abundante.

Esta prueba result positiva, ya que al momento de agregar el agua
destilada en la muestra y comenzar a agitar, comenz a formarse una espuma
abundante, la cual perdur por ms de cinco minutos, tiempo suficiente para
comprobar cualitativamente la presencia de saponinas en el fruto de
Enterolobium cyclocarpum. Los responsables de formar tal espuma son los
glicsidos que forman a las saponinas, los cuales se disuelven en agua y
disminuyen la tensin superficial de sta, de ese modo se aumenta la capacidad
de penetracin del agua y se facilita la formacin de pequeas gotas; por lo tanto
al momento de sacudir o agitar la solucin, se forma una espuma abundante, y
relativamente estable. Tal espuma formada es un sistema coloidal en el cual se
encuentran burbujas gaseosas dispersas en un lquido.
La presencia de espuma en el fruto de Enterolobium cyclocarpum, tambin
confirma su efecto limpiador, razn por la cual se ha utilizado desde la
antigedad para lavar ropa; as el fruto de parota ha sido utilizado como jabn
"natural".
El efecto limpiador de jabones y detergentes se debe en parte a su
accin como agentes emulsionantes para mantener las gotas de grasa
suspendidas en el agua, ya que en su molcula presenta una parte lipoflica
por medio de la cual se unen a la grasa o aceite, mientras que la otra parte de
la molcula es hidroflica, por lo que tiene afinidad con el agua as, el jabn
toma la grasa y la lleva al agua formando un conjunto soluble en agua, una
vez que el jabn es soluble en agua, sus molculas rodean las manchas o

38
grasa de cualquier tejido, formando un anillo alrededor denominado micela.
Tal como se muestra en la Figura 8.

Figura 8.- Mecanismo del efecto limpiador de jabones y detergentes.

En la figura 9 se puede observar la espuma formada en la muestra del
fruto de Enterolobium cyclocarpum al momento de agregarle el agua destilada y
se observa perfectamente el sistema coloidal que se forma.

Figura 9.- Prueba de la espuma

39
9.2.- Obtencin del crudo de saponinas.

La obtencin del crudo de saponinas se realiz por medio de una
extraccin slido-lquido, en un equipo Soxhlet, tal como se muestra en la figura
10. En el extractor Soxhlet, el crudo de saponinas que se extrae est contenido
en un material slido (fruto de Enterolobium cyclocarpum), junto con otros
componentes, los cuales son celulosas, semi-celulosas y fibra, estos
componentes son prcticamente insolubles en el disolvente utilizado en la
extraccin. Como disolvente se utiliz el etanol acuoso al 80% debido a que es
un material voltil lo que facilita la obtencin del producto deseado.

Figura 10.- Extraccin con equipo Soxhlet.


40
A partir del fruto procesado (cscara, pulpa y fibra) de Enterolobium
cyclocarpum se procedi a extraer el crudo de saponinas. En la figura 11 se
puede observar el momento en que se extrae el crudo de saponinas a partir del
fruto de Enterolobium cyclocarpum en un equipo Soxhlet:

a)


41

b)
Figura 11.- Extraccin del crudo de saponinas a partir del fruto de Enterolobium
cyclocarpum.

Los crudos de saponinas obtenidos mediante tres extracciones con etanol
acuoso al 80% en un equipo Soxhlet, tienen la apariencia de una miel de color
pardo oscuro, que al enfriarse se solidifica, pero conserva su alta viscosidad
debido a la presencia de una gran cantidad de azcares, conservando un olor
fresco, hmedo y dulce, caracterstico del fruto, pero con un sabor demasiado
amargo.

Estas caractersticas se mantuvieron iguales en las tres extracciones, slo
difiriendo en la cantidad obtenida del crudo de saponinas, como se muestra en el
cuadro 4:


42
Cuadro 4.- Extracciones realizadas y crudo de saponinas obtenido del fruto
de Enterolobium cyclocarpum.

Extraccin etanol-
agua.
Muestra seca en
gramos.
Crudo de
saponinas
obtenido en
gramos.
Porcentaje
aprovechable del
crudo de
saponinas.
Primera
extraccin
50 g. (muestra
molida y
tamizada)
22.92 g 45.84%
Segunda
extraccin
50 g. (molida y
sin tamizar)
22.68 g 45.36%
Tercera
extraccin
50 g. (sin moler y
sin tamizar)
21.87 g 43.74%

La cantidad extrada de crudo de saponinas es considerablemente alta
como se puede observar en los resultados registrados en la tabla anterior. As
tambin, se comprob que el efecto de moler y tamizar la muestra no es
determinante al momento de obtener mayor o menor cantidad de crudo, porque
al concentrar ms la muestra no genera un extracto ms rico en crudo, esto es
debido a la alta solubilidad de las saponinas. Aunque para favorecer la extraccin
siempre es conveniente dar un tratamiento fsico previo, como lo es la molienda y
el tamizado, ya que si el tamao de la partcula es muy grande no se pone en
contacto con el solvente adecuadamente, pero si es muy pequeo, puede que se
apelmacen e impidan el movimiento del solvente. Se necesita que el slido tenga
una estructura porosa y abierta, o bien como en este caso, preparados en
tamao y forma que proporcionen mayor superficie de contacto y el disolvente se
mueva libremente.


43
9.3.- Prueba de Liebermann-Burchard.

Para la identificacin del tipo de saponinas contenidas en el fruto de
Enterolobium cyclocarpum se procedi a la utilizacin de un mtodo colorimtrico
cualitativo debido a que las saponinas dan coloraciones con diferente intensidad
al someterlas en contacto con varios reactivos cidos.
Los crudos de saponinas obtenidos a partir de la extraccin con etanol-
agua, resultaron positivos a la prueba de Liebermann- Burchard, ya que al
ponerse en contacto la muestra del crudo de saponinas con el reactivo (anhdrido
actico, cloroformo y cido sulfrico), hubo formacin de un color rojo oscuro, lo
cual es sugerente de saponinas triterpnicas. Esta prueba de identificacin del
tipo de saponinas presentes en el fruto de Enterolobium cyclocarpum es
netamente cualitativa. Sin embargo existen tcnicas de anlisis como la
cromatografa de lquidos o de gases para una identificacin exacta de los
compuestos, las cuales no fueron realizadas en esta investigacin debido a las
limitaciones con las que cuenta el laboratorio de Qumica.

9.4.- Prueba de hemlisis.

Una caracterstica que presentan las saponinas es la capacidad de
producir hemlisis en las clulas sanguneas, por lo que se procedi a realizar tal
prueba. Se tom una gota de sangre humana que se puso en contacto directo
con el crudo de saponinas y se procedi a observar en el microscopio.

El cuadro 5 muestra el porcentaje de hemlisis que presentaron los
eritrocitos al someterlos en contacto con el crudo de saponinas obtenido de la
extraccin etanol-agua del fruto (cscara, pulpa, fibra) de Enterolobium
cyclocarpum.


44
Cuadro 5.- Porcentaje de hemlisis en los eritrocitos.

(1) Muestra de
saponinas (mg/mL))
(2) Buffer isotnico
(mL.)
(3) Porcentaje de
hemlisis en los
eritrocitos
10 0 100
8 2 100
6 4 100
4 6 100
2.0 8.0 97
1.8 8.2 92-90
1.6 8.4 87-85
1.4 8.6 50-45
1.2 8.8 No hay hemlisis
1.0 9.0 No hay hemlisis

Como se puede observar en el cuadro anterior, el crudo de saponinas
obtenido presenta un alto porcentaje de hemlisis, el cual mantiene el mismo
margen hasta los 4 mL de muestra disueltos en 6 mL de buffer isotnico, esto
indica que aunque la cantidad de saponinas sea menor que el disolvente, estas
siguen manteniendo su alta potencia de produccin de hemlisis en los glbulos
rojos, caracterstica importante para determinar las propiedades de las
saponinas; as como, su identificacin. En la figura 12 se muestran los eritrocitos
con hemlisis al 100%, donde se observan todas las clulas sanguneas
hemolizadas:

45

a)

b)
Figura 12.- Muestra de eritrocitos con crudo de saponinas, hemlisis 100%.
100X


46
Se observ un cambio mnimo en el porcentaje de hemlisis en la
concentracin de 2 mL de crudo de saponinas disuelto en 8 mL de buffer
isotnico, presentando un porcentaje del 97% de hemlisis; aqu las saponinas
siguen conservando su alta potencia hemoltica, an cuando la muestra de
saponinas es menor que el disolvente. Las saponinas siguieron conservando un
alto porcentaje de hemlisis, entre el 90% y 85%, con las diluciones de 1.8 mL y
1.6 mL de crudo de saponinas disueltos en 8.2 mL y 8.4 mL de buffer isotnico,
respectivamente. La figura 13 y la figura 14 muestran tales porcentajes de
hemlisis:

a)


47

b)
Figura 13.- Eritrocitos con 92-90% de hemlisis.
40X

100 X


48
El porcentaje de hemlisis baj en las concentraciones 1.4 mL de crudo de
saponinas disuelto en 8.6 mL de buffer isotnico, presentando una baja en el
porcentaje de hemlisis del 50-45%. Tal como se muestra en la figura 15 y la
figura16:

40X


49

Figura 16.- Eritrocitos con 50-45% de hemlisis
100X.

El cambio drstico en el porcentaje de hemlisis se present en las
concentraciones 1.2 mL y 1.0 mL de crudo de saponinas diluido en 8.8 mL y 9.0
mL de buffer isotnico, respectivamente; al grado que los eritrocitos no
presentarn ningn efecto, ni de hemlisis ni ningn otro dao o cambio alguno,
los eritrocitos conservaron su forma normal, el porcentaje de hemlisis disminuy
debido a que la concentracin de crudo de saponinas es muy bajo, y en cambio,
la concentracin del disolvente es alta, por lo que la cantidad de saponinas debe
ser mnima para que no afecte a los clulas sanguneas y segn los resultados
obtenidos en esta investigacin la concentracin lmite de crudo de saponinas
para evitar la hemlisis est a parir de los 1.2 mL de crudo de saponinas disuelto
en 8.8 mL de buffer isotnico. Este cambio se puede observar en la figura 17 y la
figura 18:

50

Figura 17.- Eritrocitos sin hemolizar.
100 X

Figura 18.- Eritrocitos sin hemolizar.
40 X


51
Durante esta prueba se observ que no debe pasar mucho tiempo entre el
momento de preparar las concentraciones y el momento de observar el
fenmeno de hemlisis en los eritrocitos; debido a que, con el paso del tiempo la
mezcla entre las saponinas y el buffer comienza a descomponerse o degradarse
y al momento de ponerla en contacto con la sangre, los eritrocitos presentan otro
fenmeno llamado crenacin, el cual consiste en la deshidratacin de las clulas
debido a que la cantidad de sales es mayor en el exterior de las clulas que en el
interior de las mismas. La figura 19 muestra tal fenmeno:

Figura 19.- Eritrocitos crenados.
40 X

Tambin se observ que en las muestras que presentaron un alto
porcentaje de hemlisis de eritrocitos, se detect la presencia de eritrocitos
"fantasma" que son glbulos sin pigmentacin.


52
9.5.- Prueba de toxicidad.

Para probar qu tanta toxicidad, si es que la presenta, contiene el crudo de
saponinas obtenido del fruto de Enterolobium cyclocarpum se procedi a realizar
un experimento en el cual fueron sometidos ratas y ratones a dosis con el crudo
de saponinas disuelto en el agua y en el alimento diario que consumen
normalmente, como se muestra en la figura 20:

Figura 20.- Agua y alimento con el crudo de saponinas administrado a los animales
tratados.

Los animales tratados (rata blanca y ratn) para la prueba de toxicidad del
crudo de saponinas obtenido del fruto de Enterolobium cyclocarpum, presentaron
una aceptacin a la hora de administrarles el crudo, tanto en el alimento como
en el agua. En ningn momento demostraron rechazo al alimento o al agua, al
contrario siguieron consumiendo el alimento de forma normal, en el caso del
agua, los animales mostraron un mayor inters al consumirla, ya que desde el
primer momento en que se les administr empezaron a tomarla, sin mostrar
ningn rechazo.

53
La administracin del crudo de saponinas obtenido del fruto de
Enterolobium cyclocarpum, a los roedores (rata blanca y ratn), tanto en el
alimento como en el agua, no demostr alteraciones en el comportamiento, ni en
la excreta de los animales tratados durante el perodo de experimentacin y lo
ms importante, la administracin del crudo de saponinas no produjo mortalidad
en ningn animal. A los animales se les administr la misma dosis a lo largo de
todo el experimento.

En el siguiente cuadro se observa que los animales, tanto el ratn como la
rata, tratados con la misma dosis en el alimento, mostraron un ligero incremento
en el peso corporal total al final del experimento. Sin embargo, este incremento
no es significativo.

Cuadro 6.- Pesos corporales de rata y ratn tratados con extractos de crudos
de saponinas y administrados en el alimento.

Rata Ratn
Peso corporal inicial g. 309 30
Peso final corporal g. 316.27 34.24
Ganancia total corporal
g.
7.27 4.24

La figura 21 se muestra al ratn tratado con el crudo de saponinas en el
alimento que consume diariamente:


54

Figura 21.- Ratn tratado con crudo de saponinas en el alimento.

As tambin, se administr el crudo de saponinas en el agua diaria de los
animales tratados, con una dosis diaria de 25 mL en ratn y 50 mL en rata con
una concentracin inicial de 50/50 mg/ml del crudo de saponinas. En la figura 22
y la figura 23 se muestra a la rata y ratn, tratados con el crudo de saponinas
disuelto en el agua:


55

Figura 22.- Rata tratada con crudo de saponinas en el agua.

Figura 23.- Ratn tratado con crudo de saponinas en el agua.


56
El cuadro 7 muestra los resultados obtenidos, los cuales demostraron un
incremento menor en el peso corporal final de los animales, teniendo una
ganancia mnima que no es significativa.

Cuadro 7.- Pesos corporales de rata y ratn tratados con extractos de crudos
de saponinas y administrados en el agua.

Rata Ratn
Peso corporal inicial g. 283 30.5
Peso corporal final g. 294.58 36.72
Ganancia total corporal
g.
11.58 6.22

En ambas tablas se muestran resultados similares, hay ganancia de peso
corporal en los animales tratados, la cual en ambos casos es mnima, ya que
durante los dos meses que dur la experimentacin los animales no mostraron
un incremento significativo en el peso corporal final.


57
10.- CONCLUSIONES.

Del fruto de Enterolobium cyclocarpum (cscara, pulpa y fibra) se
obtuvieron y se extrajeron las siguientes cantidades de crudo de saponinas:

- Primera extraccin (50 g de muestra seca molida y tamizada): 22.92 g.
- Segunda extraccin (50 g muestra seca molida y sin tamizar): 22.68 g.
- Tercera extraccin (50 g muestra seca sin moler ni tamizar): 21.87 g.

Presentando el siguiente porcentaje aprovechable:

- Primera extraccin (50 g de muestra seca molida y tamizada): 45.84%
- Segunda extraccin (50 g muestra seca molida y sin tamizar): 45.36%
- Tercera extraccin (50 g muestra seca sin moler ni tamizar): 43.74%

Los crudos de saponinas obtenidos de las tres extracciones anteriores, as
como el fruto (cscara, pulpa, semilla) presentan las siguientes propiedades:

- Capacidad del fruto de Enterolobium cyclocarpum de formar una espuma
abundante al momento de agregarle agua y agitarlo, la cual perdura por
ms de cinco minutos, caracterstica cualitativa para determinar la
presencia de saponinas en el fruto.
- El crudo de saponinas obtenido de las tres extracciones resultaron ser
positivos en la prueba de color de Liebermann-Burchard, prueba que
determin de manera cualitativa, el tipo de saponinas presentes en el fruto
de Enterolobium cyclocarpum, las cuales de acuerdo al color rojo oscuro
formado en la muestra, son saponinas triterpnicas.
- Capacidad del crudo de saponinas de producir hemlisis en las clulas
sanguneas; an cuando las cantidades usadas del crudo de saponinas
son relativamente pequeas y son disueltas en buffer isotnico.
- Los crudos de saponinas no presentan toxicidad en roedores, en este
caso, ratas y ratones blancos, por el contrario los animales tratados

58
presentaron un ligero incremento en su peso corporal al final del
experimento, aceptaron de manera positiva y normal el alimento y agua
con el crudo de saponinas, las excretas no mostraron alteracin alguna ni
cambios en su comportamiento.

Con respecto a los dos ltimos puntos tratados anteriormente, se concluye
que el crudo de saponinas obtenido del fruto de Enterolobium cyclocapum
administrado de manera directa en la sangre es daino, ya que produce un alto
porcentaje de hemlisis en los eritrocitos, pero administrado de manera oral en
el organismo de algn mamfero no produce ningn dao. Esto es debido a que
las saponinas solo son absorbidas en cantidades nfimas por el intestino,
actuando principalmente en el tracto digestivo con los cidos biliares, que
combinados con las saponinas se forman molculas tan grandes que son
incapaces de atravesar los canales de las clulas intestinales y terminan por ser
eliminados con las heces.
El aumento de peso corporal mostrado en los animales tratados con el
crudo de saponinas, puede ser debido, adems del efecto de las saponinas, a la
presencia de una alta concentracin de carbohidratos presentes en el fruto, 57.20
g/100 g de fruto seco.
Segn los resultados obtenidos en esta investigacin, la ingesta del crudo
de saponinas provenientes del fruto de la parota no produce ningn efecto
negativo de forma oral. Este producto puede ser utilizado como consumo
alternativo para el ser humano con beneficios para su salud, esto es debido a
que las saponinas presentes principalmente en las leguminosas, ejercen una
influencia sobre diversos factores inmunitarios, actan sobre determinados tipos
de clulas haciendo que se produzcan ms anticuerpos (Palencia, 2003), as
tambin las saponinas son usadas como expectorantes y diurticos, reducen el
colesterol e influyen en la digestin y absorcin de distintos componentes de la
dieta.
Por lo anterior, se sugiere un posterior estudio sobre el aprovechamiento
alimenticio y teraputico del fruto de Enterolobium cyclocarpum.

59
11.- LITERATURA CITADA.

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- http://mapserver.inegi.gob.mx/geografia/espanol/estados/mich/tsueloagr.cfm

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