PignataMariaL., Gonzalez.ClaudiaM., r r ~ r s HebeA.

,
. .
Wannaz EduardoD.
,
IAEATECHNICAL CO-OPERATION
PROJECT: RLA2013 04
AreaContaminaciony Bioindicadoresdel InstitutoMultidisciplinariode BiologJ
Vegetal OMBIV), Facultadde CienciasExactas, Ffsicasy Naturales,Universidad
NacionaldeCordoba,AvenidaVelez Sarsfield1161,CiudadUniversitaria,X501(
GCA, Cordoba,Argentina.
Guiaparael MuestreodeLiquenesy
PlantasEpifitasquese EmpleanComo
BiomonitoresdeAcumulaci6ndeMetales
Pesadosy ElementosTrazaen
Latinoamerica
IAEA TECHNICAL CO-OPERATION
PROJECT: RLA20I304
Autores
PignataMarfaL., GonzalezClaudiaM., CarrerasHebeA.,
WannazEduardo D.
AreaContaminaci6ny BioindicadoresdelInstitutoMultidisciplinariodeBiologia
Vegetal (IMBIV), FacultaddeGienciasExactas, Fisicasy Naturales,Universidad
NacionaldeC6rdoba, AvenidaVelezSarsfield 1161,GiudadUniversitaria,
X5016GGA,G6rdoba,Argentina.
Guia para el muestreo de Hquenes y plantas eplfltas como blomonitores en Latlnoamer;ca
indice
1. Introducci6n .
3
Bioindicadores y biomonitores ..
4
Biomonitores de acumulaci6n . 5
2. Liquenes como bioindicadores I biomonitores de la contaminaci6n atmosferica . 6
Generalidades . 6
Fisiologfa de los Ifquenes . 7
Uquenes y contaminaci6n atmosferica . 8
Metodos de esludio de la contaminaci6n atmosferica mediante el uso de
liquenes como bioindicadoreslbiomonitores . 13
BioindicadoreSlbiomonitores in situ (biomonitoreo pasivo) . 13
Bioindicadoreslbiomonitores transplantados (biomonitoreo activo) . 14
Parametres empleados en liquenes como indicadores de respuesta a la poluci6n
atmosferica . 15
Liquenes y metales pesados . 17
3. Disenos experlmentales en estudlos de biomonltoreo empleando Ifquenes 21
en C6rdoba, Argentina .
3.1. Evaluaci6n de la respuesta de tres especies de liquenes como biolndicadoras
de la contaminaei6n atmosferica en C6rdoba, Argentina . 21
3.2. Variaei6n lemporal de los parametros qufmicos en muestras sometidas a
distintas condiciones .. 27
3.3. Eleeto de distintas fuentes de emisi6n de contaminantes almosfericos
sobre la respuesta quimica de Ramalina cefastri, Canomaculina pilosa y
Punctelia microsticta transplantada durante un cono perlodo de exposici6n .... 29
3.4. Biomonitoreo de la caUdad del Bire mediante ellransplante de Ramalina celastri
durante 1,5 meses a un area urbano-industrial .. 32
3.5. Biomonitoreo de la calidad atmasferica en un area urbano-industrial mediante
el transplante durante 3 meses de R. celastri, Canomaculina pilosa y
Punctelia microsticta . 35
3.6. Efeclo de la incorporaci6n de Niquel sabre la respuesta quimica de los
Iiquenes Usnea amb/yoclada y Ramalina celastri a eontaminanles . 40
3.7. Evaluaci6n de la'respuesta qufmica del biomonitor Ramafina celastri a
luentes especrficas de emisi6n de eontaminantes atmosfericos: industrias
metal- mecanicas; aplicaci6n de agroqufmicos y crematorios . 44
3.8. Respuesta de dos biomonitores liquenicos en relaei6n a deposici6n total
atmosferica en C6rdoba Argentina .. 49
3.9. Ramafina celastri (Spreng.) Krog & Swinsc. como biomonitor de la deposici6n
Guia para el muestreo de Ifquenes y plantas epifitas como blomonltores en Latlnoamerica
aereade algunosmetalespesadosenlaProvinciadeC6rdoba. Argentina.............. 52
3.10.EvaluaciOndelliquenUsnea amblroclada (MUll. Arg.)Zahlbr. Comobiomonitor
delacalidadalmosfencaenunsectordelaprovinciadeC6rdoba, Argentina........ 58
3.11.Eleetodecontaminantesatmosfericosurbanossobrelacapacidad
deincorporaci6ndecaticnesmelaJicosenU. amblyoclada ................. 63
4. PlantasepifltascomobioindicadoresI biomonitoresde18 contamlnaci6n
atmosferlca 66
Generalidades 66
Genero nfJandsia 67
Especk!sdelgenero nflandsia comobiomonitoresdelacontaminaciOnatmosferica 68
Respuestafjsiol6gicadeplantassuperioresaconlaminantesalmosfencos 69
Partimetrosutilizadosenplantassuperiorescomobiomarcadoresde
contaminaci6natmosferica 72
5. Oisenosexperimentalesenestudiosdeblomonltoreoempleandoespec::lesdel
generoTillandsla enCordoba,Argentina... 73
5.1. BiomonitoreopasivodeIacontaminaci6natmoslericaempleanclo
Tillandsia capillaris. T. permutata y T. tricholepis _...... 73
5.2. Biomoniloreoactivodelacontaminaci6natmoslericaempleancloespecies
de Tillandsia: Calibraci6ndeespecles 96
6. Relacl6nentrelaconcentracl6ndemetalespesadosyelementostraza
en biomonitoresy salud humana 107
7. FotografiasdeIiquenesempleadoscomoBiomonitoresde
contaminacionatmosferlcaenlatinoamerlca 114
8. FotografiasdeplantaseplfitasdelgeneroTillandslaempleadascomo
Blomonltoresde atmosfericaen latlnoamerica 120
9. Aeferenclas _ ,........................... 124
-2-
......._-------------
Guts pars 81 muestreo de liquenes y plantas epifitas como blomonitores en Latln08merica
1. Introduccl6n
Durante dentos de miles de anos el hombre ha contribuido, tanto deliberada como
accidentalmente, con emisiones a la atm6slera de compuestos de diferenle naturaleza. Sin
embargo, no lue sino hasta despues de la Revoluci6n Industrial cuando estas emisiones
comenzaron a ser signifieativas para el balance de elementos dentro del ecosistema, alterando los
cdos biogeoquimicos y modilicando progresivamente los procesos biol6gicos sabre la tierra.
5egun Seinfek1 (1978), la contaminaci6n atmoslerica puede delinirse como cualquier
condici6n en la cual ciertas sustancias. en concentraciones 10 suHclentemente elevadas con
respecto a su nivel normal, se encuentran en el aire produciendo efectos mensurables en el
hombre, los animales. la vegelad6n 0 los materiales. De la misma manera, la Organizaci6n
Mundial de la Salud (OMS, 1980) estatece que existe contaminaci6n deJ aire cuando en su
composici6n hay una 0 varias sustancias. en cantidades y durante periodos de tiempo tales que
puedan resultar nocivos para el hombre, los animaJes. las ~ n t s 0 los materiales y perturbar el
bienestar 0 uso de los bienes.
Las invesUgaclones sabre eontaminaei6n atmosfltrica pueden orientarse a la evaluaci6n de
las fuentes y sus emisiones, a los niveles de contaminantes en el aire (inmisi6n) 0 bien a la
evaluaei6n de los raceplores de estos contaminantes. En el primer caso se reaJizan
determinaciones directamente en las fuentes mediante muestreadores apropiados que, junlo al
emp/eo de moclelos de dispersiOn, permiten obtener informaci6n local sobre el tipo y concentraci6n
de las emisiones en el mismo momento en que son etiminadas (Bourque and Arp, 1996). En el
segundo caso, las determinaciones de la coneentraei6n de contaminantes se realizan en un
volumen dado de aire mediante el empleo de instrumental y metodos estandarizados. En el
tercero, las mediciones sobre los organismos receptores de contaminantes permilen estimar los
electos cuando una mezela compleja de polutantes incide sobre un ser vivo. Hasta hace unes
anos, sin embargo, eran escasos los antecedentes sobre este ultimo tlpo de estudios,
principalmenle debido a la falta de tltcnicas sulicientemente sensibles que posibilitaran la medici6n
de compuestos 0 elementos acumulados por un organismo (Puckett, 1988), y a los escasos
eSludlos de base que relacionaran los nieles de contamlnaci6n con datos his16ricos y con la
respuesta de seres vivos.
Para estimar la eonlaminaci6n atmoslerica, la elecci6n del metodo de monitoreo a emplear
depende basicamenle de la situaci6n que se quiere evaluar. Asi, cuando se dispone de
instrumenlos de meclici6n automaticos y se pretende comparar las concentraciones de polutantes
individuales en la atm6sfera con los valores fijados por estandares, la melodologfa de elecci6n es
el monitoreo instrumental. Par el contrario, cuando el area de muestreo es de gran tamalio y es
dilicil contar con instrumentos para todos los puntos de muestreo 0 cuando se pretende establecer
distmtos niveles de caUdad atmoslltrica dentro de una extensa regi6n, el metodo de elecci6n es el
m ~ de bioindicadores. Estos pueden estar presentes en el area de estudio (biomonitoreo
pasivo) 0 ser transplantados en la misma (biomonitoreo activo), deliniendo de asta modo des
metodos de muestreo que se usan en este tipo de estudios. Una de las ventajas del empleo de
bioindicadores comparados con el uso de instrumentos de meclici6n. es que los primeros permiten
conocer el impaeto de los contaminantes sobre seres vivos, un aspecto relevante cuando se
prelende evaJuar el etecto de emisiones antropogenicas sabre la biosfera y en especial sabre la
saJud humana (Seaward, 1995). De este modo, la utilizaci6n de la respuesla biol6gica como
ncticadora de Ia presencia de sustancias t6xicas en eI ambiente. ofrace informaci6n que no puede
ser obtenida par mlttodos Hsico-qufmicos convencionaJes, par 10 cual ambos mlttOOos resultan
-3-
Gu{a para el muestreo de liquenes yplantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
complementarios (McCarthy and Shugart, 1990). Debe senalarse que, par su respuesta, los
bioindicadores brindan informaci6n acerca de la exposici6n no 5610 a un contaminante (cuya
concentraci6n puede medirse par metodos instrumentales) en un cierto periodo de tiempo, sino
tambien aotras variables ambientales (entre elias lapresencia deotros compuestos) can las que
el contaminante puede presentar interacci6n. En este sentido, los etectos de un contaminante
dependen tambien de la presencia de otros, cuyos etectos, pueden reforzarse mutuamenle
(sinergismo) y aumentar (aditividad) 0 disminuir (antagonismo) el efecta de cada contaminante
individual.
Bioindlcadoresybiomonltores
La evaluaci,on de la calidad atmasfericade un ecosislema par mediodeorganismoses 10
que generalmentese denominabioindicaci6n 0 biomonitoreo. EI termino bioindicadorserelaciona
can la respuesta de seres 'vivos a diferentes niveles de contaminaci6n. mediante cambios
observables y mensurables (Nimis et aI., 1993; McCarty and Munkittrick, 1996). Grodzinski and
Yorks (1981) clasificanalos bioindicadoresen tres grupos:(a) especiessensiblesa determinados
contaminantes. cuya presencia 0 ausencia indica si estos estan presentes en un area
determinada, (b) indicadoresverdaderos, aquellas especies que muestrandanoproporcionalalos
niveles de contaminacion y (c) especies acumuladoras de' sustancias potencialmente t6xicas.
Cuandoun bioindieadorbrindainformaci6n sabre aspectos cuantitativos de la calidad atmosferica
ypermite identificarcambioscon el pasodeltiemposondenominadosbiomonilores (Manning and
Feder, 1980;Martinand Coughtrey, 1982, Sioofetal.. 1988;Nimis. 1992). Es asique, teniendo en
cuenta estas definiciones, un bioindicador brinda informaci6n sobre la calidad de un ambiente
mientras que un biomonitor es empleado para estimar distinlos niveles de contaminacion en ese
ambiente(Markert, 1993).
SegunClementetal. (1995) losorganismospuedenreaccionaralaeonlaminaci6n del aire
dedosmanerasdiferentes:
Acumulando elementos y/o compuestos a partir del ambiente, 10 cual los define como
bioindieadoreslbiomonitoresdeacumulacion.
Mostrando cambios morfol6gicos, fisiol6gicos, quimicos y geneticos, a nivel de comunidad.
poblacion 0 individuo. yen este caso se habla de bioindicadores/biomonitores de respuesta
fisiol6gica.
Ademas, si los organismos utilizados en la investigaci6n son los Que existel'1 en el
ambiente, el biomonitoreo se denomina "pasivo"; mientras que el biomoniloreo "activo". es aquel
que emplea organismos que no existen en el area de estudio, pUdiendo ser tra.nsferidos a ella
duranteun tiempodeterminado.
Se hanestablecidociertas caracteristicas paraque un organismo puede serempleado en
estudiosdebiomonitoreopasivo:
1. Debenestarpresentesen,grandescantidades,
2. Debenencontrarseampliamentedistribuidos,
3. Deben serfacileS deidentificaryaislarparael muestreo,
4. Deben poder ser analizados de acuerdo a los metodos analiticos estandarizados
disponiblesen el momento(Markert. 1993),
5. Debenmostraruna respuestadistintivaquepermitadiferenciaren elias el estresprovocado
porcontaminantesdeotros tiposdeestresy,
6. Estarespuestadebepoderseranalizadacan exactitudyprecisi6n. ele. (Tingey, 1989).
-4-
Guts para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerlca
Denlro de los trabajos realizados con especies vegetales como bioindicadores de
contaminaci6n atmosfenca, existen numerosos antecedentes con relaci6n al empleo de musgos,
Ilquenes, gramlneas y conlferas los cuales han sido senalados como buenos monilores (Klumpp
andcol, 1994), Porolrolado, sibien losbioindicadoresreflejanlapoluci6natmosferica, su empleo
esla asociado mas precisamente, al concepto de calidad atmosferica (Hawksworth and Rose.
1970), donde el lermino "poluci6n" puede ser definido como aquella siluaci6n en que las
concentraciones de algunos elementos y compuestos se encuentran por encima de los valores
establecidos segun eSlandares, quedando implicito que los mismos deben ser medidos
individualmente mediante mlttodos isnlrumentales. EJ termino calidad atmosferica. se utiliZa casi
exclusivamenteparaindicaraquellacondicion atmosfericaque quedadefinidamediante el ~
de bioindicadores ylo biomonitores, debido a que si bien estos no pueden aportar informaci6n
sabre la concentract6n de compuestos 0 elementos en el aire, muestran los efectos que los
contaminantesproducen (solos0 encombinaci6n)sobreunservivo (Nimisetat,2000).
Las tecnicas de biomonitoreo permiten evaluar los cambios en Ia calidad atmosferica en
retaci6n a una condici6n considerada normal 0 con respecto a una situaci6n previa ,en un
moniloreo temporal (Nimis. 1999). Por ese motivo, el establecimiento de una situaci6n de
"normalidad" es crucial en estudios de biomonitoreo, ya que esta provee puntos cero en escalas
Que representan grados de diferenciaci6n aml:;liental expresada por datos biol6g)cos (Nimis and
Bargagli, 1999; Nimisetal. 2000).
Biomoniloresdeacumulacion
Para que un organismo pueda ser empleado como biomonilor de acumulaci6n (por
ejemplo,demelalespesadosyelementostraza),debereuniralgunosrequisitos:
Acumular y tolerar canlidades considerables de estos, independientemente de las
condicioneslocalestalescomoclima,topograffa,vegetaci6n,etc. ;
Tenerunaampliadislribuci6ngeografica*;
serabundanleyrepresenlativodelareaderecolecci6n-;
Estar disponible en cualquier epoca del ano, con un numerosuficiente de individuos que
permitanlosanalisis;
Serdefacil reconocimientoyrecolecci6n;
Manlener las concentraciones de los elementos acumulados duranle un tiempo
prolongado;
Poseer caracterlslicas morlol6gicas yanal6micas tares, quepermitan un mueslreorapielo
yunasencillapreparaci6ndelasmuestras;
Tener una respuesla conocida a determinados contaminantes (Martin and Coughlrey,
1982; Sioof etaI., 1988; Conti andCeccheti.2001).
- empleadosenmoniloreopasivo
Debe sei'lalarse que dentro de estas caracteristicas, deseables para un btomonitor de
acumulaci6n, los organismos epffitos resultan ideales ya que dependen exclusivamente de Ia
atm6sfera para obtenerlos nutrientes necesarios parasu desarrollo, son bastante Iongevos y su
morlofoglanovariacon las estaciones.Los Ilquenes,ademas, pueden acumular.mentoshasta
concentraciones que exceden ampfiamente sus requerimientos fisiol6gicos yporello los patrones
deacumulaci6npuedendiferenciarsedel contenidoelementalnormal (Nash, 1996).
-5-
, .
Guia para el muestreo de liquenes yplantas epifitas como blomonitores en Latinoamerica
2. Liquenescomobioindicadores!biomonitoresdelacontaminacionatmosferica
idades
Los Iiquenes son organismos formadas por la asociaci6n simbi6tica entre un alga,
denominada fotobionte, y un hongo que constituye el micobionte. Mas precisamente et termino
algaindicaun alga verde 0 una cianobacteria; el hongoes usualmenteun ascomicete, aunqueen
algunas simbiosis. el hongo puede ser un basidiomicete 0 ficomicete. EI cuerpo del riquen es
Ilamado tala yen la mayoriade los Ifquenessu forma no se asemeja a ninguno de los simbiontes
individuales (Hill, 1994). En general., se considera que los Ifquenes constituyen un caso de
mutualismo, donde ambos simbiontes se benefician con la asociaci6n. La fotosintesis del alga
provee al hongo la energfa necesaria para su metabolismo y a cambio la estructura del talo -
formadaporhifas- Ie proveeprotecci6n al algareduciendo sustancialmente la intensidadluminosa
a la cual el fotobionte esta: expuesto. Ciertamente el fotobionte junto al micobionte se han
expandido dentro de muchos habitats, donde separadamente son raros 0 no existen, asi los
Ifquene$ se encuentran distribuidos desde los tr6picos hasta las regiones palares. EI incremento
del melanismo, la forma de vida endolltica de algunas especies y la producci6n de metabolitos
protectores contra las fotoxidaciones, hacen a los Ifquenes exitosos que otros organismos
para responder a los cambios del medio (Kappen, 1988). Segun Galloway (1993) el exito de la
simbiosis liquenica en una gran variedad de ecosistemas, es estrictamente dependiente de la
protecci6n de las membranas fotosinteticas del fotobionte ya sea por medias morfol6gicos 0
qufmicos.
.La simbiosis liquenica involucra una intima integraci6n fisiol6gica. El usualmente
denominado micobionle es un organismo heterotrofo que obtlene el carbono para su nutrici6n
desde el fotobionte. Et flujo de carbohidratos, desde el fotobionte at micobionte esta bien
establecido yse debe aque las paredescelularesdel fotobionte son maspermeables alaperdida
de carbohidratos en el estado liquenizado que en el no liquenizado. No ha side demostrado un
flujo comparable desde el micobionte al fotobionte. Sin embargo, la capacidad del hongo para
.servir como reservorio denutrientesinorganicos para el lotobiontemerece serinvestigada, ya que
otres hongosfacilitan lacaptaci6ndenutrientesen otrasrelaciones simbi6ticas, talcomoocurreen
micorrizas yhongos (Nash, 1996).
En los Iiquenes se han identificado metabolitos primarios tales como proteinas,
aminoacidos, clorofilas, carotenoides, vitaminas, etc., los cuales son sintetizados por el alga 0 el
hongo y estan confinados en la pared celular yel protoplasma. La mayoriade estos compuestos
intracelulares aislados a partir de Ifquenes son inespecfficos, encontrandose tambi m en hongos
devidalibre, algasyplantassuperiores (Hale, 1983)
Como resultado de la intimaintegraci6n fisiol6gica entrelosbiontes, existe ademas en los
Iiquenes un amplio rango d(:l metabolitos secundarios, sintetizados en su mayorfa por el
componentefungico. Generalmenteestosmetabolitosestan ausentes en otros organismosdevida
libre. Los compuestos secundarios pueden comprender una proporci6n del peso seco del talo
comprendida ente el 0.1 al 5% (pip) Ygeneralmente son depositadosextracelularmenteen forma
de cristales superficiales (Fahselt et aI., 1973; Ahmadjian and Jacobs, 1985). Se considera que
los compuestos secundarlos pigmentados tales como el acido usnico y antraquinonas, esta.n
localizados exclusivamente en la cortez"! exterior, pero ladistribuci6n sobre la superficie del talo
no es uniforme (Culberson et aI., 1993). Los metabolitos secundarios intervienen en laprotecci6n
del aparato fotosintetico debido a que absorben radiaci6n UV (Quilhot et aI., 1991), pueden ser
-6-
Gula para el muestreo de Hquenes y plantas eplfltBs como blomonltores en Latinoarnerica
degradados a mol6culas que enlIan al cicio de la energla en perlodos de estrt!s nutricional
(VICente et at, 1980), regulan la humedad de los espacios Interhifales, de gran importancia para el
intercambio gaseoso y olros procesos fisiol6gicos, taJes como fOlosinlesls y forman compuestos
estables (quelatos) con los melales (Honegger, 1991).
Aslologia de los Iiquenes
Los Iiquenes son organismos perennes con una tasa de creclmiento muy lenta, por 10
tanto mantienen una morlok>gla uniforme a 10 largo del tiempo (Conti and Cechetti, 2001). s t ~ o s
de asimilaci6n ~ C han demostrado que los valores son ligeramente inferiores a los que
comunmente se encuentran en eI fitoplancton. A pesar de tener un potencial foloslnletk:o casi
normal, las tasas de crecimiento son menores debido a que eI alga -que es una fracci6n muy
pequei'la de \a biomasa tolm. tiene que mantener una canlidad de tejido heter6trofo del hongo
proporcionalma.n1e mucho mayor (Ahmadjian and Jacobs, 1981), el cual representa casi el 80 %
de Ia biomasa total delliquen (Smith, 1978)
Como an cualquk!r organismo, la acumulaci6n y translocaci6n de macro y micronutrientes
eseociales para las lunciones vitales del liquen son crfticos para su crecimiento y desarrollo. La
falta de un sistema radicular ha lIevado a estos organismos a presentar una mayor dependencia
de las fuentes atmosfericas de nutrientes:' a diferencia de las fuentes de origen edafico ulilizadas
por las plantas vasculares (Nieboer et aI., 1978). Debido a que los niveles de nutrientes
atmosfericos son muy inleriores a los presenles en sue10, los IIquenes han desarrollado
mecanismos concentradores que son esenciales para su supervivencia (Nash, 1996). Ademas, la
ausencia de una cuticula cerosa protectora y estomas asociadas, como se observa en las plantas
superiores, facllila que el intercambio can la atm6slera ocurra sobre toda la superficie del lalo
(Puckett, 1988).
Los IIquenes son poiquilohldricos, por esla raz6n su status hldrico varia pasivamente can
las condiciones del ambiente circundanle. Pueden sufrir una desecacl6n relativamenle rapida y
como consecuencia la disponibilidad de agua ser primordial para su supervivencia 10 cual
explicarfa su patr6n de ocurrencia. Muchas especies son altamente dependientes de las
precipitaciones, prlncipalmenle en forma de lIuvia, aunque algunas que viven en zonas aridas
tienen la habilidad de utilizar la neblina y el roclo como luentes de agua. Los ilquenes pueden
incluso extraer humedad del aire no saturado, bajo condiciones de baja temperatura; sin embargo,
en condiciones de temperaturas intermedias-altas y humedad intermedia-baJa, el gradienle de
potencial hldrico desde el liquen a la atm6slera se invierte y se produce la evaporaci6n (Nash,
1996).
En relacl6n a su capacidad bioacumuladora, los principales mecanismos a traves de los
cuales los liquenes incorporan y acumulan nutrientes (y contaminantes) incluyen el intercambio
i6nico, el transporte activo y la Incorporaci6n pasiva (Brown, 1987).
Mediante el intercambio i6nico los lanes se lijan a la pared celular a a la superfide externa
de{ tata del liquen mediante un proceso paSNo, rapido e independiente del metabolismo liquenico.
Transcurre exclusivamente en la matriz extracetular, lrecuentemente asociado a la presencia de
compuestos IIquenicos extracelulares; los niveles de saturaci6n se a)canzan en pocos minutos y
puede ocurrir tambi6n en celulas muertas (Nieboer ataI., 1978). Los lanes entrantes desplazan a
k>s iones hidr6geno a a otros Iones metaJicos con menor afinidad par )os sitios de intercambio
sabre a dentro de la pared cefular. Sa ha determinado que estos sitios de intercambio pueden
estar representados parlos ilcidos carboxnicos a hidroxicafboxnicos (Richardson et al., 1985). Sin
7

, "
Gula para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonltores en Latlnoamerlca
embargo, otros productos extracelulares tales como polimeros fen61icos U olros metabolitos
secundarios tambi(m pueden unir caliones metalicos eficientemente (Mullen et aI., 1992). De este
modo, los cationes son retenidos y pueden formar complejos, precipitar y cristalizar (Gadd, 1993).
De hecho, la tolerancia a metales obseNada en muchas especies de Iiquenes se explica por la
lormaci6n de complejos enlre los cationes melalicos y los grupos funcionales hidroxilos,.
carboxilos, foslalos, aminas 0 sulfhidrilos de los metabolitos secundarios (Sarret el aI., 1998). La
ineorporaci6n de aniones, par el contrario, es un proceso mas lento, se alcanzan menores niveles
de acumulaci6n y ocurre en fos sitios de intercambio ubicados en el exterior y dentro de la pared
celular (Nash, 1996).
EI flujo de iones hacia el interior de la celula es muy reducido comparado can la fijaci6n
par inlercambio i6nico. Asi par ejemplo, luego de 2.5 horas de exposici6n en soluciones de Cd, fa
incorporaei6n intracelular de este metal fue menor al 10 % de la captaci6n tolal (Brown and
Beckett, 1985). En general, la incorporaei6n intracelular aumenta con el tiempo, siguiendo una
cUNa de s.aturaci6n de Michaelis-Menten y se correlaciona can la concentraci6n de cationes
unidos a los sitios de intercambio de la pared celular. Este proceso podrfa involucrar un transporte
activo con gasto de energia, acoplado a la hidr6lisis del ATP. Ademas, es sensible a los cam bios
de acidez de los espacios apoplaslicos y es controlado por un mecanismo de retroalimentaci6n
negativa (Gadd, 1993; Michelet and Boutry, 1995).
La fijaci6n de material particulado atmosferico es et principal mecanismo por el eual los
Iiquenes incorporan metaJes y elementos traza, tanlo en ambientes contaminados como no
conlaminados. Asimismo, es el mecanismo par el cual se explican las concentraciones
extremadamente altas de algunos elementos en los talos liquenicos (Seaward, 1973, 1989;
Tomasini et aI., 1976; Nash, 1989). Debido a la morfologfa de los talos liquenicos, el material
particulado presente en la atm6sfera puede quedar atrapado en la superficie y dentro de los
espacios intereelulares de la corteza (Nash, 1996). Algunas de estas partfculas conlienen
elementos y compuestos solubles en agua como los catianes Na+, K+ Ca
2
+, Mg
2
+, NH
4
+ Y H+ asi
como aniones cloruros, sulfatos y nitratos (Wellburn, 1994). Nash (1996) afirma que el lavado de
los talas Iiquenicos probablemente no provoca la eliminaci6n total de materia! particulado, ni al
menos una proporci6n significativa de 10 que queda atrapado denlro de estos.
Liquenes y contaminaci6n atmosferica
Hist6ricamente, los Iiquenes han sido reconocidos como altamente sensibles a los
contaminantes atmosfericos desde que las primeras observaciones realizadas de manera
independiente en Londres, Munich y Paris en el siglo XIX, documentaron que estos organismos
estaban desapareciendo de las ciudades. A comienzos del siglo XX, ya se reconocia que este
"efecto urbano
n
estaba relacionado con las emisiones de gases (principalmente SOd y partfculas
contaminantes. Sin embargo, afirmar que los Iiquenes son sensibles a los contaminantes
atmosfericos supone una generalizaci6n, debido a que no todos son igualmente sensibles a todos
los contaminantes atmosfericos. Mas aun, diferentes especies de Jrquenes muestran diferente
grado de sensibilidad a un contaminante en particular. Como consecuencia de esto, no todas las
especies son apropiadas para ser empleadas como bioindicadores de ta calidad atmosferica.
Durante los ultimos 30 anos muchas investigaciones han demostrado la posibilidad de usar
Ifquenes como biomonitores de calidad del aire, teniendo en cuenta su sensibilidad a diferentes
factores ambieJ:ltales que provocan cambios en algunos de sus componentes y/o parametros
especfficos (Gries, 1996; Conti and Ceehetti, 2001). Mas aun, los cambios fisiol6gicos (Garty et aI.,
-8-
Gula para el muestreo de Ifquenes y plantas epffitas como blomon/tores en Latlnoamerica
1993) Y ultraestruclurales (Holopainen, 1983) han sido propuestos como de alerta
tempranos, antes de la aparici6n de sintomas de dana visibles en los talos liquenicos 0 en la
distribuci6n de especies.
EI fotobionte parece ser el elemento clave de la sensibiHdad de los Iiquenes a
contaminantes atmosfericos (Showman, 1972; Marti, 1983; Fields, 1988). Segun Hok>painen y
KMenlampi (1984) en comparaci6n con el fotobionte, S8 requieren concentradones de de casi
un orden de magnitud mas aha para indoor electos en el hongo. Sin embargo, Henckel y Pronina
(1983), a partir de observaciones a campo encontraron que et micobionte de Hypogymnia
physodes fue mas sensible a contaminantes que el 10toOOnle, el cual vivi6 independientemenle
despues de que el hongo muriera..
La relaci6n entre Iiquenes y contaminantes almoslericos ha sido estudiada, asl, desde
enloques muy diferentes. Una de las principales de investigaci6n es el mapeo de las
comunidades liqultnicas. Para ello sa pan\metros poblacionales tales como Ia frecuencia
de Ia ocurrencia de ciertas especies que generalmente estan en relaci6n con contaminante
en particutar y en algunos casas tambien con su concentraci6n. Un segundo enfoque es Ia
evaluaci6n de cambios morfol6gicos y anat6micos de liquenes como respuesla a conlaminantes
atmosfericos. Oesde otro punto de vista, pueden cuantificarse cambios lisiol6gicos 0 las
aheraciones en el metabolismo normal de Iiquenes frente a contaminantes atmoslencos, hecho
que induye el de denominados biomarcadores. En tados estos casas,
la respuesta de los liquenes depende de su estado lisiol6gico basal, de las concentraciones
ink::iaJes de los elementos 0 compuestos que se van a cuantificar en los talos, del nival de
contaminantes en la atm6sfera y de su naturaleza quimica. Muchas fisiol6gicos san
empleados para evaluar dana en Ilquenes: fotosintesis (Ronen el aI., 1984, Calatayud et aI.,
1999), contenido de clorofilas y su degradaci6n (Kardish et aL, 1987; Garty et at, 1988; Balaguer
and Manrique, 1991), integridad de membranas (Garty, 2001), disminuci6n en el contenido de ATP
(Kardish et aI., 1987; Garty et at, 1988), variaciones en las tasas respiratorias (Kardish et aI.,
1987), peroxidaci6n de Hpidos de membrana and Pignala, 1994; Levin and Pignata,
1995; et aI., 1996), cambios en los niveles de auxinas end6genas y producci6n de
elileno (Epstein et aI., 1986; Garty et al., 1993). EI de estos camblos morfot6gicos y
fisiot6gicos puede realizarse a campo empleando una especie determinada en donde sa
reconoce la presencia de contaminanles atmosfericos, 0 bien mediante experimentos de
lumigaci6n en condiciones controladas de laboratorio (Gries, 1996).
En donde todavra existen los Iiquenes, es posible realizar estudios de biomoniloreo
a trav6s del direeto de las especies presentes (biomonitoreo pasivo). Sin embargo, en
areas donde no hay soportes sobre los cuaJes los Hquenes cracen 0 bien estos u"imos han
desaparecido por efeeto de los elevados niveles de contaminaci6n liquenicosl, es
necesario el empleo de la tacnica de transplante (biomonitoreo activo). Obviamente, estos
procedimientos deben estar extremadamente bien estandarizados debido a que muchos otros
factores pueden afeetar la respuesta de los Ilquenes a contaminantes en un area donde
usualmente los Hquenes no cracen. Este metoda es partk:ularmente apropiado para evaluar
fuentes puntuales de emisi6n, tales como fundiciones, plantas generadoras de energia 0 relinerfas
de combustibles f6siles (Galun and Ronen, 1988), asr como luentes difusas en areas agricolas 0
ruraJes.
La aplicaci6n del metodo de transplante a situaciones mas compleias takts como centros
urbanos, requiere la medici6n de varios parametros ftsio'69icos en los transplantes, ademas de
.9-
Gu(a para el muestreo de Ifquenes y plantas epifitas como blomonltores en Lsllnoamerica
panunetros de acumulaci6n. Eslo es debido a que la respuesta liqutl'ntca esta a menudo asociada
con efeetos potencialmente sinergicos, aditivos 0 anlag6nicos de diferentes contaminanles bajo
cienas condiciones ambiantales tales como temperatura, humedad, vientos y radiaci6n. En
situaciones donde la composici6n de la alm6sfera responde al criterio de exposici6n a
multipolulantes, el anAl isis e interpretaci6n de los resultados es freeuentemente compltcado
(Pignata, 1998). Sin embargo, estos analisis han side realizados con exito en diferentes estudios
en la ciudad de C6rdoba, Argentina, (Gonzalez y Pignata, 1994; 1997; Levin and Pignata, 1995;
GonzAlez et al., 1996; 1998; Carreras et at, 1998; Carreras and Pignata, 2001), en distintas
regiones de Italia (Loppi et al., 1992; 1996; Monaci et aI., 1997; Scerbo et at, 1999; Nimis et ai,
2000; Loppi et aI., 2002) en Greda (Sawidis et aI., 1995), en Ftnlandia (Lippa et al.. 1995; Kubin
and Lippa, 1996) Y Suiza (Garty and Ammann, 1987).
En laboratorio se han reaJizado fumigackmes controladas para compfemenlar eI
conocimiento acarca de la sensibilidad de diferentes aspecies de liquenes a contaminantes
atmosfericos. En estas investigaciones el microclima. sustrato y concentraci6n de los
contaminantes pueden ser controlados y estandarizados. Sin embargo y a pesar de la rapidez con
la que sa obtienen resultados, estos estOOios han enlrentado numerosos problemas y crittcas
(Richardson, 1988). EI principal inconveniente es que los liquenas no pUeden ser mantenidos en
laboralorio por periodos mayores a unas pocas semanas. Par 10 tanto, no S8 pueden realizar
fumigaciones a largo p1azo y con bajas de contaminantes, tal como ocurre en la
mayorla de las situaciones reales. Otra desventaja es que en laboratorio 58 estudia la respuesta
de los talos liquenicos a un numero muy limitado de conlaminantes, en contraposici6n a 10 que
ocurre a campo donde los Ifquenes estan expuestos simuttaneamente a una mezcla de eUos, en
los que influyen ademas los factores climaticos (Gries, 1996). No resulta sorprendente entonces,
que los resultados obtenidos a partir de experimentos de laboratorio hayan sido contradictorios en
la manera en que se correlacionan con los resultados obtenidos a partir de estudios de mapeo con
Ilora natural y/o con transplanle. A pesar de todo to mencionado, los estudios de laboratorio son
lundamentales para una mejor comprensi6n de c6mo los contaminantes alectan el metabolismo
liquenico y proveen resultados de base para confirmar los estudios a campo.
Aunque existen clentos de compuestos contaminantes en la atm6slera, 5610 unos pocos
han sido investigados con relaci6n a sus eleetos sobre Ifquenes. En ambientes urbano-
industriales, los principales contaminantes son originados por combusti6n en sistemas de
calefacci6n, en los autom6viles y procesos industriales. Los contaminantes gaseosos incluyen el
S02, HF, CO, CO
2
, e hidrocarburos (VOCs) entre otros. Los contaminantes presentes
como material paniculado incluyen la mayorfa de los metales de origen antr6pico, radionuclidos,
asf como mezclas complejas de hidrocarburos (PAHs) (Nash and Gries, 1991; Ahmadjian, 1993).
Si bien de los polutantes gaseosos, el mas perjudiciaJ y astudiado en relacl6n a sus efeetos sobre
liquenes ha sido el SOt (Ahmadjian, 1993), debido a que en la atm6sfera Ia mezcla de gases es
muy compleJa, resulta dificil identificar et 0 los componentes responsables del dallo observado en
talas liquenicos (Matthes and Feige, 1983).
En los ambientes terrestres, las alias concentraciones de metales y elementos traza en la
atm6sfera generalmente sa relacionan con la actividad minera, las industrias qulmicas y
metalUrgicas y al de combustibles f6siles. Los metales pueden ejercer sus efec10s t6xicos
sabre al organismo cuando forman parte de reacciones bioqurmicas en las cuales normalmente no
estan invok.K:tados. Asi, en las cefulas pueden causar disrupcj6n a nivel del melabolismo
intermedio, y aun entrar al nUcleo aJteranda los procesos de slnlesis y reparaci6n de ADN
-1ll-
Gu(s para el muestreo de Ifquenes y plantas epifitas como blomonltores en Latlnoamerlca
(Tarhanen, 2000). Los metales pesados inhiben una gran variedad de enzimas en Ilquenes y
plantas causando alteraci6n en diferentes procesos bioqulmicos, incluidas la fotosfnlesis (Nash,
1975; Deruelle and Petit, 1983), la respiraci6n (Nash, 1975), la slntesis y degradaci6n de
pigmentos (Schutte, 19n; Gonzalez and Pignata, 1994), la peroxidaci6n de IJpidos membrana
(Tarhanen, 2000), asl como cambios en la eslructura e integridad de las membranas celulares
(Pucken, 1976).
Como un mecanismo protectivo, en estos organismos las membranas celulares controlan
Ia illCOfporaci6n y La eliminaci6n de moleculas e iones, medianle el tamaoo de los poros, bombas y
prolelnas transportadores. Par esla raz6n eI mantenimiento de su integridad es un requerimienlo
bask:o para eI buen tuncionamiento del metabolismo celular. Uno de los principales efeelos de los
contaminantes sabre Ifquenes, es Ia modificaci6n de Ia organizaci6n de las membi'anas celulares,
atterando su permeabilidad (Gries, 1996). EI tipo de respuesta yarra de acuerdo con el
contaminante y a su coocentraci6n. Garty et at (1993) encontraron slntomas de dafIo en las
membranas celulares cuando Ia incorporaci6n de ciertos metak!s en Iiquenes es elevada, aun
antes de que se detecte la degradaci6n de cIorofilas. Otros autores lambian observaron dana
significativo en las membranas liqu6nicas producido par exposici6n a SOz (Puckett el at, 19n;
Relds and 51. Clair, 1984a).
Se ha senalado que la decoloraci6n temprana de los talos es uno de los primeros signos
visibles en r s ~ t a 80
2
HF Y oxidantes atmoslericos (Puckett el at, 1973; Showman, 1975).
Sin embargo la degradaci6n de clorofilas a y'b a sus respectivas leofltinas puede ser observada
aun anles de la aparicl6n de cualquier slntoma de darn visible. Tanto Ia fotosintesis como Ia
resplraci6n son procesos Jlgados ar luncionamiento de las membranas y par 10 lanto dependen de
su integridad. Segun varios autores la foloslntesis es por 10 menos cinco veces mAs sensibkt que
la respiraci6n tanto al SOz (Turk et aI., 1974; Beekley and Hoffman, 1981) como a melales
pesados (Blyum, 1986; Fields, 1988). Esto hace que en flreas a1tamente contaminadas la
fotoslntesis disminuya considerablemente detect<\ndose sfntomas de dai\o visible en los talos
liquenicos. Un laclor que incide en esta susceptibilidad de los Ilquenes a contaminantes es su
conlenldo de agua; asl por ejemplo cuando pierden completamente el agua interna pueden
cambiar de ser especies relativamente sensibtes a ser relativamente tolerantes (TOrk et aI., 1974).
Olro factor que in!luye en la respuesla de los Hquenes a polutanles es elliempo de exposici6n. En
algunas especles la 1010slntesis disminuye gradualmente a medida que aumenla el Uempo de
exposici6n, 10 cual pone en evidencia la existencia de un len6meno irreversible 0 de una velocidad
de los procesos que producen dana superior a la de los procesos de recuperaci6n (Sanz el al.,
1992).
En sistemas biol6gicos, la presencia de productos de oxldaci6n tales como
malondialdehldo (MDA) esta directamente relacionada con el comlenzo de la peroxidaci6n de
acidos grasos insaturados presentes en membranas (Mehelman and Borek, 1987). Todas las
membranas biol6gicas son sensibles a los procesos oxidativos generados por radicaJes libres, los
cuales pueden originarse como reacci6n frente a contaminantes atmosf8ricos (Mead, 1987).
Contaminantes como 03, N(h Yalgunos metaJes son potentes catalizadaf'es de la peroxidaci6n de
Ilpidos (Menzel, 1976). Dilerentes autores han observado un incremenlo signiflCativo tanto en los
niveles de MDA como de hidroperoxidienos conjugados. en drterentes especies de Ilquenes
expuestas en flreas conlaminadas de Argentina: en Punctelia subrudecta, MDA alcanz6 vaJores
signiticalivamente atlas en lalos transplantados cerca de una ~ n t generadora de energia
e&ectrica (GonzftJez and Pignata, 1997).
Guia para el mueslreo de Ifquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
En relaci6n can su capacidad bioacumuladora, debido a que los Ifquenes incorporan
contaminantes de manera continua, su concentraci6n en los talos representa un promedio de la
ocurrida durante un cierto perioda de tiempo (Nieboer and Richarson, 1981). En 10
referente a elementos presentes en material particulado atmosferico, reflejan la deposici6n seca y
humeda durante ese perfodo. Por este motivo los niveles de elementos acumulados en los talos
pueden correlacionarse directamente can los niveles ambientales (Sloof and Wolterbeek, 1991;
, Herzig, 1993; Sari et ai., 2001). Sin embargo, debe senalarse que la respuesta fisiol6gica y de
acumulaci6n de los liquenes a contaminaci6n depende, no s610 de los niveles ambientales de
contaminantes, sino tambien del estado inicia! de los talos Iiquenicos y la naturaleza qulmica de
los polutantes.
La corteza externa de los Ifquenes. farmada por hifas fungicas aglutinadas can material
extracelular, es el primer sitio de interacci6n de los polulantes. En los talos can alto contenido de
los nutrientes disueltos atraviesan pasivamente la matriz de la corteza y circulan par los
espacios apoplasticos de las celulas fungicas mas superficiales que forman las hifas, para
final mente ,Ilegar al fotobionte (Honegger, 1991).
Las vias de acceso de los contaminantes gaseosos y metales disueltos son poco
conocidas. Se supone que podrfa ser a traves de la corteza, por los poros ubicados en las
estructuras reproductoras (Jahns, 1988). La superficie de los liquenes genera una gran
resistencia al flujo gaseoso (Wellburn, 1'994), por 10 cual un aumento en la velocidad del viento
facilita el ingreso de los gases al tala. del talo, el acceso de los contaminantes gaseosos a
los principales sitios de reacci6n, esta restringido por la resistencia a la difusi6n que originan los
gases que ocupan los espacios internos, los fluidos extracelulares, las paredes celulares del alga y
del hongo, la membrana plasmatica y finalmente las organelas que se encuentran dentro del
citoplasma (Tarhanen et aI., 1996).
La resistencia a la perdida de vapor de agua es muy alta en los talos secas y muy baja en
condiciones 6ptimas de humedad, mientras que la resistencia ala difusi6n de CO
2
se incrementa a
medida que aumenta el contenido de agua en el talo (Green et aI., 1994). Existen pocos datos
sabre la incorporaci6n de atros gases como 50
2
Y 0
3
: los que probablemente puedan in.Qresar al
talo y difundir de manera similar al CO
2
. Ha sido determinado que los talos secas absorben menos
S02 que los humedos y son resistentes a las fumigaciones can esle gas (Coxson, 1988). Sin
embargo, Gries et al. (1994) sostienen que la incorporaci6n inicial de 50
2
es un praceso pasivo,
no regulado por el Iiquen por 10 tanto el aumento en su incorporaci6n en talos humedos
posiblemente se debe a su solubilidad en agua, donde forma especies quimicas ionizables y por 10
tanto capaces de fijarse a las estructuras delliquen par media de inleracciones electroestaticas.
Puckett (1988) senala que los Iiquenes reunen ciertas caracteristtcas que permiten
considerarlos monitores biol6gicos ideales, muchas de las cuales ya han sido mencionadas. Sin
embargo este autor considera, ademas, como esenciales:
a} La amplia dislribuci6n geografica de los mismos. 10 que posibilita la comparaci6n de distintas
regianes.
b) La inexistencia de variaciones morlal6gicas estacionales, por 10 cuaJ acumulan 0 responden
durante todD el ana.
c) La ausencia de cutfcula y raiz, 10 que produce una dependencia casi total de la captaci6n de
nutrientes y mineraJes del aire y junto con l!l"os los contaminantes.
Tambien Gries (1996) indica que la alta sensibilidad de los Iiquenes a polutantes se relaciana
con su biologia, indicando como relevante que, son organismos simbiontes y la alteraci6n del balance
12-
Gufa para el muestreo de Ifquenes y plantas epifitas como blomonltores en lstlnoamerica
simbMStico entre el fotobionte (a}ga) y el micobionle (hongo) puede lIevar a la perdida de dicha
asociaci6n. Par eslo la dedinaci6n del liquen puede resultar no s6Io per la presencia de
concentraciones t6xicas de algunos compuestos, sino tambien debido a Ia alteraci6n del aporta de
nutrienles que favorezca a uno de los simbionles sabre eI olro.
Numerosas investigaciones Hevadas a cabo en las ultimas tres decadas respecto a Ia
interacci6n liquenes-poluci6n atmosferica. revelan que los Irquenes pueden ser asignados a tres
categorlas en terminos de su respuesta a la oontaminaci6n atmosfttrica (Garty et at 1977): (i)
especies sensibtes. con distinlos grados de sensibilidad a poManles, que finalmente sucumben a la
poluci6n atmosf8rica, r-1 especies tolerantes, resistentes a Ia potuci6n, provenientes de Ia comunidad
nativa que pennanecen intactas en su Mbitat, y (iii) especies de reemplazo, que aparecen despues
de Ia clestrueei6n de Ia mayor parte de Ia comuOOad Iiqu6nica nativa debido a Ia poIuci6n. Algunos
autores sugieren que estas Uttimas categorlas, par su capacidad acumuladora (biomonitores de
acurnulaci6n), serfan ideales para eI mooitoreo de metales pesados; mientras que las especies
sensibles serlan adecuadas para el monitoreo de Ia poIuci6n per mooiflCaciones flsOOgicas, ya que
eslas se manifleStan a tiempos cortos de exposici6n (btomonitores de respues1a).
Metodos de estudlo de la contaminaclon mediante el usa de Iiquenes como
bioindicadoreslblomonitores
Biolndicadoreslblomonitores In situ (biomonitoreo paslvo)
La valoraeb6n del impaclo de la conlaminaci6n almosferica sabre Ifquenes in situ se lIeva a
cabo mediante la medici6n de pan\metros ecol6gicos, morlolOgicos 0 qufmicos. Sin embargo en
esludios aplicados en Areas extensas, el efeeto de los poManles es evaluado principalmenle por
parAmetros eeol6gicos, los que permiten un mapeo de las comunidades liqultnicas. Asi, la
variaci6n en parAmetros, tales como la freeuencia de ocurrencia de ciertas especies, esta
relacionada a contaminantes especlticos y en algunos casos a su concenlraci6n (Gries, 1996).
Un gran numero de Irabajos de mapeo realizados en olras ciudades, moslraron que la
zonificaci6n de especies iqullnicas estaba correlacionada con el grado de poluci6n, el tamano de
area urbanizada y los vientos predomlnantes (Broda, 1966; Showman and Long, 1992; Loopi et aI.,
1994). Hawskworth and Rose (1970), delectaron una correlaci6n directa entre la declinaci6n de
comunidades Iiquenicas y las atlas emisiones de di6xido de azufre; de este mooo desarrollaron
una escala semicuanlitaliva basada en la occurrencia de 50 especies Iiquenlcas sobre cortezas
moderadamente acidas y rangos de mediciones medias invernales de S02. Esta escala ha
probado ser muy util para elaborar la hipOlesis de sensibilidad de los Ifquenes al S02. Por otro
Iado, una aproximaci6n Hgeramente diferente de la escala antes mencionada lue desarrollada por
LeBlanc and De Sloover (1970) mediante un Indice de Pureza Atmosfffica (lAP, Index
Atmospheric Purity). Este, se basa no 5610 en Ia existeocia de Ilquenes sino tambi(tn en la
Irecuencia y un Indice eeol6gico para las especies. Cabe selialar que, S8 han desarrollado
distinlos Indk:es de Calidad de Aire a partir de diferen1es parAmetros eco66gicos en las
comunidades liquenicas (LeBlanc and De Sioover, 1970; Gilbert. 1973; Seaward, 1976; Nieboer et
al., 1976; Lawrey, 1991; Terroo Manso and Barreno Rodriguez. 1994; Loopi et aI. 1994). La
ventaja de esta melodobgla es que hace posible monitorear Areas exlensas sin equipamienlo
costoso (Pirintsos et al., 1993; Soot. 1995).
Por otra parte. los parAmelros medidos a campo han side sometidos a anafisis
multivariados. que por tratarse de lecnicas de ctasiflcaci6n u ordenamiento, lambilm permiten
-13-
, "
Guia para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
establecer zonas a areas de isocontaminacion (Nash and Sigal, 1980; Nimis, 1985;
Diamantopoulus et aI., 1992; Pirintsos et aI., 1993; Loopi et aI., 1994).
Biolndicadores/biomonitores transplantados (biomoniloreo activo)
La estrategia para evaluar la calidad del aire mediante el empleo de Ifquenes transplantados,
consiste en tomar talos de ambientes considerados no contaminados, exponerlos durante
determinados perfodos a atmosferas polutas, y posteriormente medir sobre los mismos las respuestas
seleccionadas. Cabe sefialar, que una adecuada caracterizaci6n de las condiciones ambientales de
cada sitio de muestreo durante el perfodo de transplal'lte, permite estudiar la respuesta de un
biomonitor frente a diferentes condiciones almosfericas, dentro de las cuafes se incluyen las
diferentes fuentes de emisi6n de polUlantes; asi en funci6n de dichas respuestas es posible inferk
la calidad del aire. EI efecto de la poluci6n atmosferica sobre lfquenes transplantados a regiones
urbanas e industriales ha sido descripto en numerosos estudios, y en elias se demostrado que
muchas especies liquenicas presentan respuesta a diferentes niveles de poluci6n de la atm6sfera a la
que han estado expuestos (Brodo, 1961; Ferry et aI., 1973; Kauppi, 1976; Ferry and Coppins, 1979;
Richardson and Nieboer, 1981; Kardish et aL, 1987; Kauppi and Halonen, 1992; Gonzalez and
Pignata, 1994; Levin and Pignala, 1995; Canas et aI., 1997b; Canas and Pignata, 1998; Garty et aI.,
1985; 1998)
Los esludios que permiten evaluar la poluci6n atmosferica mediante el empJeo de Ifquenes
transplantados, generalmente estan basados en fa comparaci6n de su respuesta a las diferentes
calidades atmastericas de los distint<ls sitios de transplante (Broda, 1961; Seaward, 1976; Garty and
Hagemeyer, 1988; Garty et al., 1993; Carreras et aL, 1998). Los efeetos de la poluci6n del aire se
estudian midiendo las respuestas en el asociadas a dano, principalmente mediante
parametros qufmieos - fisiol6gieos (LeBlanc and Rao, 1973a; Epstein et aI., 1986; Rope and Pearson,
1990; Silberstein et al, 1996; Zambrano and Nash, 2000). Y midiendo la elemental (Pakarinen, 1981;
Gailey et aI., 1985; Gonzalez and Pignata, 1:994; Richardson, 1992; S1001,
EI transplante de Ifqllenes puede realizarse con difarenles modalidades, tales como
transplante con sustrato y transplante sin sustrato. EI transplante con sustrato se realiza
directamente con ramas del for6fito 0 sobre discos de corteza cortados cuidadosamente (Brodo,
1961; 1966; Kauppi" 1976; Ferry and Coppins, 1979; Holopainen, 1984; Garty et aI., 1998). Para
transplante sin sustrato han sido mencionados dos tipos de soporte: a} discos de diferente tamano
y calidad como, resinas epoxi, asbestos, cemento, entre otros (Richardson, 1967; Ahmadjian,
1993; Seaward, 1976; 1993; Sioof, 19.95, Zambrano and Nash, 2000) y b} bolsas de red de nylon
que permiten un contacto permanente del organismo con la atm6sfera circundante (Tarazona
Lafarga et aI., 1980; Martin aod Goughtrey, 1982, Gonzalez and Pignata, 1994, Levin and Pignata,
1995; Canas et aL, 1997b; Canas and Pignata, 1998; Carreras et aI., 1998; Carreras and Pignata,
2001 ).
La aplicaci6n de biomonitoreo en ambientes complejos como son los urbanos 0 induslriales
suele incJuir la medici6n de un conjunto de parametros qufmico-fisiol6gicos en las muestras
transpi antadas (Gries, 1996). Par otra parte, algunos de estos parametros (biomarcadores) son
utilizados para caJcular rndices, los cuales re11ejan el dana producido sobre el biomonitor par las
diferentes combinaciones de polutantes y condiciones meteorol6gicas (calidades del airel. Entre estos
indices pueden mencionarse los desarrollados por Werner (1993), Gonza.lez and Pignata (1994) Y
Carreras et al. (1998). EI primero denominado Indice de Vitalidad Fisiol6gica (PVI)f incluye tambiem
parametros morfol6gicos y ha side utilizado para proveer informacion de la calidad del aire en la
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Gula para el muestreo de liquenes y plantas eplfftas como blomonltores en Lalinoamerlca
ciudad de Hannover, AJemania. Los dos ultimos Indices de PoluciOn (PI) estan construidos en base a
parametros qulmicos y han sOO empleados para establecer dilerentes calidades atmosfericas en la
ciudad de COrdoba, Argentina.
Parametros empleados en Iiquenes como Indlcadores de respues1a a la polucion

Parametros ecologlcos
Para evaluar el impacto de los polutantes sabre las comunidades liquenicas, los
principales parametros medidos son: la distribucion de la flora liquenica, la diversidad, el
porcentaje de cobertura, la abundancia y la frecuencia, Son numerosos los estudios que muestran
una correlaciOn directa de estos parametros con los niveles de polutantes alrededor de las fuentes
de emisi6n, y con las sustancias acumuladas en los liquenes (Hawksworth, 1971; LeBlanc and
Rao, 1973; Nieboer et aI., 1976; Roberts and Thompson, 1980; Showman and Long, 1992),
Por otra parte, los efeetos de la poluci6n atmosferica estimados en base a la distribuciOn
de las especies liquenicas han sido confirmados en esludios de laboratorio, y aun cuando las
condiciones ambienlales no pueden ser simuladas en su totalidad los resuhados han arrojado
surlCienle evidencia al respecto (Gries, 1996).
Parametros morfo/ag/cos
EI eteelo de los polutanles atmosfericos ha side evaJuado sobre liquenes /n situ medianle
el esludio de morfol6gicas, Observandose par efeeto de los mismos: talo reducido
y compacto, cuerPos de fructificaci6n reducidos 0 ausentes, estimulaci6n de la produccion de
soredios, necrosis, blanqueo, aheraciones en la corteza y en la medula, entre olras (Ahmadjian,
1993). En general estos cambios morfol6gicos no han sido analizados bajo fumigaciones
controladas debido a que requieren de periodos prolongados para manifeslarse. Uno de los
primeros cambios morfoJ6gicos que producen los polutantes sobre Ifquenes es la decoloraci6n,
rosada 0 amarronada, hasta el blanqueo total juntamente con el desarrollo de poblaciones de talos
mas compactos y pequenos (Gries, 1996).
Debido a que las variaciones morfol6gicas generalmente se producen despuils de
perfodos de exposici6n prolongados, estes parametres se emplean como indicadores de peluci6n
pere no para el monitoreo de esta.
Parametros qu(mlco - tls/olog/cos
A fin de evaluar el dano provocado par contaminaciOn atmosfilrica en IIquenes in situ 0
Iransplantados se han cuantificado numerosos parametros tanto qufmicos como fisiol6gicos. Entre
eslos se pueden mencionar el contenido de clorofilas (Henriksson and Pearson, 1981) y su
degradaci6n (Rao and LeBlanc, 1965; Ronen and Galun, 1984; Garty et aI., 1985; 1998), peroxidaci6n
de Iipidos de membrana (Egger et aI., 1994; GonzAlez and Pignata, 1994; Levin and Pignata, 1995;
CarIas et ai" 1997b; Carreras et at, 1998), cambios en eI nival de auxinas end6genas y etileno
(Epstein et at, 1986), disminuci6n de ATP (Kardish et al" 1987; Garty at al., 1988), Ia acumulaci6n de
polutantes, tales como metales y azufre (Richardson arC Nieboer, 1983; Garty and Hagemeyer, 1988;
Showman and Long, 1992; Gonzalez and Pignata, 1994; Garty et aI., 1996), cambios en Ia respiraci6n
(Baddeley et at" 1972), disminuci6n en la fotosfntesis (Showman, 19n; Puckett et aI., 1973;
Richardson and Puckett, 1973; Canaani et ai" 1984) Y aheraciones en Ia permeabilidad de
membranas (Rope and Pearson, 1990; Tarhanen et at., 1995; Garty et aI., 1997; 1998).
-15-
,
\
.
Gula para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
Numerosas investigaciones han mostrado que la deeoloraci6n de los talos Iiquemicos, debido
a la degradaci6n de clorofilas, es un sfntoma de dana como cansecuencia de los polutantes
atmosfericos (Puckett et aI., 1973; 1974; Eversman, 1978). En Iiquenes los patrones de reacci6n a
polutantes especificos no son bien conocidos, y si bien la clorosis y la necrosis en general, oeurren
como respuesta a la exposici6n a dioxido de azufre, fluoruro de hidr6geno, oxidantes y cobre, no ha
sido identiftcado ningun patr6n especifico en ,elacion a un polutante en particular (Gries, 1996).
Ademas, previo a la aparici6n de sintomas visibles, se producen danos a nivel fisiol6gico que
resultan en lUna dismint,lci6n de la actividad fotosintetica (Baddeley et aI., 1972; Showman, 1972;
Beekley and Hoffman, 1981).
Las mediciones de fotosinlesis neta son mas sensibles que I'as cOl1centraciones de
pigmentos para estimar el efecto de los polutantes, ya que previa a una modificaci6n en los
eontenidos se produce la alteracion de la aetividad fotosintetica (Fields, 1,988). Sin embargo, los
para.metros mas utilJzados en Ifquenes han side el contenido de pigmentos (Rao and LeBlanc, 1965;
Kaupii, 198.0; Von Arb at aI., 1990) y la relacion entre ellos. Esta relaci6n, denominada feofitinizaci6n,
puede ser expresada por e! cociente feofitina-a1c1orofila-a, cuyo incremento es indicador de
degradaci6n de clorofila-a (Gonzalez and Pignata, 1994; Levin and Pignata, 1995; Carreras et
al.,1998).
EI di6xido de azufre es un polutante' muy comun yes citado especialmente como perjudicial
para fiquenes, ya que posiblemente su interacci6n can otros factores Caracterlsticos de ambientes
urbanos, tales camo temperatura y humedad, sea la principal causa de fa declinaci6n de
comunidades liquenicas y de la cobertur<yVegetal en ciudades y areas industrializadas (Gilbert, 1970;
Pearson, 1973; Richardson, 1992; Seaward, 1993). En este sentido, se han observado darios
significativQS sobre la integridad de membranas plasmaticas como resultado de la exposici6n a 50
2
(Puckett et aI., 1977; Pearson and Henriksson, 1981; Pearson and Rodgers, 1982; Fields and St.
Clair, 1984b; Fields, 1988; Garty et aI., 1993). Sin embargo, el grado de dano que este contaminante
produce sobre Iiquenes esta relaoionado a diferencias intraespecfficas de susoeptibHidad, como la
anatomfa, la fisiologfa, la capacidad buffer y de detoxificaci6n, ya que, en presencia de polutantes
podrfan desarrollarse estrategias de sensibifidad y resistencia (Taylor, 1978; Ahmadjian, 1982; Schlee
et aI., 1984; Nash and Gries, 1991). Por otra parte, tambien otros polutantes atmoslericos (0
3
, N00
son potentes !::atalizadores de peroxidacioli1 de Ilpidos de membrana (Menzel, 1976). Ademas, todos
los tipos. de membranas son sensibles a procesos de oxidaci6n generados par radicales 'libres y
6xidos de nitr6geno y entre los polutantes atmosfericos que padrlan iniciar estas reacciones puede
mencionarse al ozona, los oxidos de azufre y algunos metales (Mead, 1987). As!, en sistemas
biol6gicos, la presencia de productos de oxidaci6n tales como el malondialdehido (MDA) esta
directamente relacionada can el' comielllzo de la peroxidaei6n de acidos grasos polinsaturados
(Mehelman and Borek, 1987). Durante la peroxidacion de Iipidos, S6 observa, par medici6n del
espectro de absorci6n ultravioleta, la conjugacion de grupos etih3nicos de aeidos grasos
polinsaturados (Heath and Packer, 1968). Este pfOceso de peroxidaci6n de acidos ,grasos insaturados
contituyentes de membrana es acompanado. en la primera etapa por la reaccion de las dobles
ligaduras, Ilevando a la formaci6n de hidr;operoxidienos conjugados (HPDC), 10 cual resulta en un
incremento en la absorci6n a 233-234 nm (Slater, 1972; Menzel, 1976). 'En este sentido, en elliquen
Punctelia subrudecta se ha encontrado un incremento en las concentraciones de MDA en relaci6n al
contenido de azufre (Gonzalez and Pignata, 1,994), en Pseudoevemia furfuracea el, aumento en MDA
lue observado en reladon a las concentraoiones de ozono a 10 largo de un perfil altitudinal (Schlee et
aI., 1995) yen estudios con Hypogymnia physodes transplantada se ha observado correlaeion entre
-16-
- - - ---- -- -----
Gu(a para el muestreo de IIquenes y plantas epffitas como bfomonltores en Latlnoarnerlca
los conlenidos de MDA Yla concentraciones de ozono (Egger et al., 1994). Respecto a HPDC en
RamaJina eeldon;; transplantadaa sitios urbanos se hanobselVadocontenido$ mayoresen sitioscon
distintas combinaciones de tmnsilo pesado 6 medio (Levin and Pignata, 1995). En Parmotrema
uruguense, sehadelectado unincrementosignifICativeenlasconcentracionesdeHPOCenmuestras
transplantadasasitiosurbanos(CanasetaI., 1997).
La acunulaci6nde elementosdelaatm6sferaesttibiendocumentadaparamuchasespecies
liquenicas (Takala et aI., 1985; Kauppi and HaIonen, 1992; Sloof, 1995). En este sentido, unode los
elementos masestudiados en l}quenes esat azufre, y su correlaci6n dtrec1a con los niveles de
presentesenla atm6sfera hasido observadaenmuchasinvestigaciones (laaksovirtaand Ofkkonen,
19n; Pakarinen, 1981; Seaward, 1993). AsI, despues de laexposici6n de liquenesa tanto en
condiciones de campo amo en laboratorio se ha encontrado una asociaci6n entre las
concentraciones de azufre en at aire y at acumulado en los 1cOOs lquenK::os (lakshek el aI., 1986;
Garty etaI., 1988; ManninenetaI., 1991; Bruileg, 1993). En estesentido, medicionesdeacumulaci6n
de3CS tambienconfirmanque losliquenes acumulanazufreenrelaci6nalosnivefesdelmismoenat
aire (Richardson and Nieboer, 1983); ademAs se ha detectado una relaci6n inversa entre Ia
acumulatiOndeazufreenliquenesyladistanciaaIaluentede emisi6ndeSO:! (Showmanand Long,
1992). SegunGartyet al. (1977), Ia acumulaci6nde azufreenliquenespodriaproveef unaestmaci6n
razonab6edelas concentracionesde SOzenareasruraJes, suburbanasyurbanas.Asf,los contenidos
de azufre en RamaJ;na duriaei transplantadaa 13 sffios debiomonitOfeo renejaronlas velocidadesde
deposici6ndeSOz (Garty e1 aI., 1985). En R. ecklonii expuesta apoIutantes emitidos portrAnsito se
ha obselVado un en la acumulaci6n de azufre (Levin and Pignata, 1995); mientras en
Punctelia subrudecta sehadetectadomayoracumulaci6nenrelatiOnaluentesindustriales(Gonz3Jez
and P;gnata. 1994).
Liquenesy metalespesados
EI esde usofrecuente en el Area de lacontaminaci6n ambiental,
sin embargo su significado resulta a veces ambiguo. Una de las definidones mas comunes de
metales pesados es la de lodo metal cuya densidad es mayora 5 g. cm
3
(Passow el at, 1961).
Sin embargo en la blbliogralfa a menudo se emplea este para hacer referenda tanto a
metales livianos, metales pesados e incluso metaloldes, per 10 que no resulta muy precisa.
AdemAs, estA basada en un parametro ffsico elegido arbilrariamenle per 10 qua lncluye a
elementoscon propiedadasquimicas muy disimiles. Nieboerand Richardson (1980) propusieron
un esquema para evitar al uso indiscriminado del lermino Ellos diferencian tres
clases de elementos basados en las constantes de equilibrio que describen la formaci6n de
complejos i6n metalico- Ugando. Estas categorias queinclusorellejan las propledades acidas de
Lewis, son:
ClaseA: elementoscon preferenciaperligandosquecontienenO.
Clase8: conpreferenciaperligandosquecontienen NOS.
Intennedlos:ektmentosconcaracterfsticasintermediasentrelos dosanteriores.
En funci6n de esla dasilicaci6n, los metales pesados que son considerados
contaminantes (per su toxicidad 0 ecotoxicidad) generalmente pertenecen aI grupe de los
Umllroles y de Clase B. Si bien en el presente trabajo se mantiene at uso del termine
per ser at mAs ampliamente empleado en Ia bibliografia, en Is Tabla 2.1. se indican
aqueMos metalesyelementostrazaquesonconsideradoscontaminantesysuctasiflCaci6n.
17
------- ------- ------- -------
Gula para el mueSlreo de liquenes yplantas epffitas como blomonitores en Lalinoamerica
ClaseB
Rodio Rh (II)
Paladio Pd (II)
Cobre Cu (I)
Plata Ag (I)
Iridio Ir(II)
Platino Pt(II)
Oro Au (I)
Mercurio Hg (II)
Talio TI (I) YTI (111)
Plomo Pb (IV)
Bismuto Bi (III)
Intermedlos
Titanio Ti (II)
Vanadio V(II)
Cromo Cr(III) yCr(IV)
Manganeso Mn (II)
Hierro Fe (11) yFe (Ill)
Coballo Co (II)
Niquel Ni (II)
Cobre Cu (II)
Zinc Zn (11)
Galio Ga(III)
Arsenico As (III)
Cadmio Cd (II)
Indio In (III)
Estano Sn (II) ySn (IV)
Antimonio Sb (III)
Plomo Pb(lI}
Tabla2.1. Elementosde ClaseBeIntermedioscuyos nivelesdetoxicidad y
ecotoxicidad permitenconsiderarlos contaminantesambientalescuando
suscancentraciones son elevadas (Tornadode Martin and Coughtrey,
1982). ('
Si bien todos los liquenes pueden fijar elementos traza y metales pesados en su
superficie, los niveles de acumulaci6n dependen de la especie y mas concretamente de la
morlologiay las caracterfsticas estructurales (Chiarenzelli et aI., 1997). Por este motivo, distintas
especies presentes en un mismo lugar pueden acumular cantidades muy diferentes de metales;
incluso distintas espeeies de un mismo genero pueden tener patrones de acumulaci6n muy
disimiles. En general se considera que los talo$ foliosos mueslran mayores niveles de
acumulaci6n que los talos fruticosos; de la misma manera los talas pianos, delgados y muy
ramificados presentan una mayorsuperficie de exposicion (mayor area par gramode peso seeo)
(Nieboeret aL, 1972). Otrascaracterlsticas talescomolapresenciadecilios, isidios0 rugosidades
incrementan la eficienciapara la captaci6n de particulas (Puckett and Fi negan, 1980), aunque es
importante tener en cuenta, ademas, los fen6menos competitivos entre diferentes iones que
puedenmodifiearlaineorporaci6ndemetalesen eltalo.
Los metales pesados estan presentes en diferentes concentraciones en todos los niveles
de un ecosistema, por10 cuallacontaminaci6n parmetales pesados no solo signifiea la presencia
de un elementa, sino tambien un incremento en su concentraci6n par encima de los niveles
naturales en eseambiente. Esposibleasociarunaconcentraci6n elevadademetalespesados, par
tanto, no s610 con el desarrollo urbano e industrial sino tambien con eventos naturales. Las
principalesaetividadeshumanas quecontribuyen aportandometalespesadosalaatmosfera estan
relacionadas can el transporte, los centros urbanos, las industrias. la agricultura y las
explotaciones mineras. En la Tabla 2.2 se resumen las contrihuciones relativas de cada una de
estasactividades.
-18-
Guia para el muestreo de liquenes yplantas eplfitas como biomonitores en Latinoamerica
la
tas Tabla2.2. Principales fuentesantropogemicasquecontribuyen
aportandometalespesadosyelementostrazaalambiente
es;
(Tomadode MartinandCoughfrey, 1982).
lUy
de
Las primeras investigacionessabre lacontaminaci6n atmosferica,por metales pesados sa
Iluy
centraron en el estudio de los niveles de Pb en ambientes urbanos y cercanas a rutas can alto
:co)
transito debido a que se adicionaba este melal al combustible de los vehiculos como
des
antidetonante. Olras investigaciones tuvieron como objeto de estudio los niveles de Cd y Zn,
i es
derivados de laabrasi6nde las cintas deembrague, 0 bien losnivelesde Niy Croriginadosporel
que
desgastedelaspiezasmecanicasdelosautom6viles.Tambie!O sedesarrollaronestudiossimilares
en ambientes urbanosdonde las fuenles de emisi6n son muy numerosas (Martin and Coughtrey,
91es
1982). En los ultimos aiios, se ha dado un gran impulso a las investigaciones relacionadas can
1cia
emisiones provenientes de fuentes industriales 0 agricolas ya que si bien cualquier proceso
eles
industrial en el que se utilicen maleriales con alto contenido de metales pesados representa una
por
fuentepotencialdemetalesparaet ambiente;tambien el usadefertilizantesrepresentaunafuente
Las
importante para estos y produciendo emisiones que pueden ser tan importantes como las
stan
pr1imeras. Pl,Jede afirmarse que los metales que han recibido mas atenci6n tanto en terminos de
las
sus fuentes de emisi6n como porSUS efectos. son aquellosconsiderados comoesendalesporun
3 de
ladoy 16x,icos parotro, talescomoson:Zn, Fe. Cu, Mo, Pb, Hg, Cr, Ni yCd.
Cada vez mas, se canace que algunos de estos metales presentan etectost6xicos sobre
la mayorfade losorganismos, interfiriendo en las reacciones bioqufmicas ymodificandoprocesos
-19-
Actividad [Fuentedeemisi6n
Transporte General
Areasdedescanso
Neumaticos
Centro
Autapistas
Gelileral
Generadores
..,
Cenizas
Cablesdealta
Incineraci6nde
residuos
Industrias Fundiciones
Metalurgicas
Nomelalurgicas
Agricultura Escorrentias
Fertilizantes
General
Mineria rMlnasabandonadas
Minasde Pb0 Zn
Efluentesdeminas su
Metalespesadosy
elementostraza
Pb, Cd, Zn, Cu, Ni
Pb,Cd,Hg
Cd,Zn
Pb
Pb, Cd, Zn, Cu, Ni. Fe,
Ag, Cr, Sn, V, Mo
Zn, Hg, Sr, As, Sb,
Pb, Zn, Sb, In, Hg, As
Cu
As, Cr, Cu, Hg, Ni, Sc,
Pb, Zn, AI, Cd, Ag
Pb, Cd, Zn, Cu, As, Sb,
Ni. Cd, Fe, Se, Co, Mn,
Pb, As, Cd,Zn, Ni, Fe,
Mn,Cu, Cr
Hg, Cd, Cr, Ni, Se,U, V,
Zn, Fe, Pb, Cu, Co, Mo,
CO, Zn, Cu, Pb, Ni, Cr,
CO,Hg
Cd, Zn, Cr, Cu. Pb, Ni, U,
Hg,As
Cd, Co, Fe, Hg, Ni, Cu.
Ag, Cr, Pb, Zn
Pb,Zn.Cd
Pb, Zn, Cd, Cu
Cd,Pb,Zn
Gu(a para el muestreo de IIquenes y plantas epffitas como biomonitores en Latinoamerica
metab6licos. Para que ello ocurra, los iones metalicos deben atravesar la membrana plasmatica
{Vangronsveld and Clijsters, 1994} yaqui el efecto de los metales pesados se relaciona con el
tamano y geometria de los iones as! como con el tipo de ligando de la pared celular. La toxicidad
de los iones metalicos puede deberse a un bloqueo de los grupos funcionales presentes en
proteinas y enzimas; al desplazamiento de otros iones metalicos esenciales para enzimas 0 a la
modificaci6n de la conformaci6n activa de protei nas (Ochiai, 1997). Todos estos mecanismas
conducen a la disfundon de diferentes procesos bioqufmicos incluidos la lotosintesis, la sfntesis
de pigmentos y la integridad y estructura de la membrana plasmatica. EI dana producido por los
metales pesados aparentemente se debe a la lormaci6n de enlaces can aminaacidos azufrados
de membrana, que de este modo altera su conlormaci6n activa 0 bien se asacia con la producci6n
de radicales libres, los cuales originan la peroxidacion de Iipidos de membrana {Vangronsveld and
Clijsters, 1994}. En Iiquenes, el electo de estos iones depende ademas de su localizaci6n en el
talo. Por este motivo, los iones ligados extracelularmente no tienen un electo muy perjudicial,
mientras que los iones incorporados pueden modificar significativamente las distintas vias
metab61icas (Brown and Beckett, 1984; 1985; Brown, 1987; 1991).
Las respuestas lisiol6gicas de Ifquenes ala contaminaci6n par iones metalicos son todavia
escasamente conocidas. Exposiciones Qe corta duraci6n en soluciones muy concentradas de
metales dieron como resultado una inmediata reducci6n de la lotosintesis, degradaci6n de
clororilas y perdida de ~ en Umbificaria muhlenbergii (Puckett, 1976). Una prueba simple para
evaluar la integridad de la membrana plasmcitica tanto del lotobionte como del micobionte, es la
medicion de la conductividad !'ectrica 0 la concentracion de iones K+ eliminados en el agua
deionizada en que se han sumergido los talos. EI tipo de respuesta varia de acuerdo al metal y a
su concentraci6n. Asi por ejemplo, la exposici6n de liquenes a concentraciones crecientes de Ag,
Hg 0 ~ puede inducir una perdida gradual de K+, mientras que otros metales tales como Ni, Co,
Cd 0 Pb provocan un flujo abrupto hacia el exterior cuando alcanzan determinadas
concentraciones (Puckett, 1976). Tambien Garty et a1. (1998) encontraran diferencias signilicativas
en la conductividad electrica del media acuoso en contacto can liquenes que crecian en una zona
industrial respecto a los que crecian en areas rurales, 10 cual indica un proceso de dana en las
membranas celulares. Otros elementos como Fe, Si. Ti y Zn mostraron correlaci6n positiva can el
dana en las membranas celulares de Ramafina duriaiei (Garty et aI., 1998).
Los Hquenes expuestos a soluciones de metales muestran en general un cambia
significativQ en el espectro de absorci6n de las c1orolilas. Algunos cationes pueden relacionarse
directamente con la degradaci6n de estos pigmentos y/o can un dana en los mecanismos de
biosintesis de los mismos. Cheltri et al. (1998) demostraron, por ejemplo, la interferencia del i6n
Cu
2
+ con la biosintesis de clorolilas ademas de la participaci6n de este cati6n en mecanismos de
peroxidaci6n de las membranas fotosinteticas. Bajas concentraciones de Cu
2
+, Ag+ y Hg
2
+
provocaron una disminuci6n en la lijaci6n de C, mientras que otres metales como Sr+, Mg
2
., Ca
z
",
Ni
2
+ y Zn
2
+ no tuvieron electos significativos. La exposici6n a soluciones mas concentradas de
algunos de estos metales mostr6 diferencias en la sensibilidad de distintas especies y se observ6
el siguiente gradiente de toxicidad para la fotosintesis Ag, Hg > Co > Cu, Cd > Pb, Ni para
exposiciones cortas y Ag, Hg, Cu > Pb, Co > Ni para exposiciones largas. Deruelle y Petit (1983)
observaron una disminuci6n en la fotosintesis neta de Hypogimnia physodes que crecfa cerca de
una autopista. Los autores atribuyen este resultado al plomo emitido por los escapes de los
autom6v\les.
-20-
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Guia para eJ muestreo de liquenes y plantas epffitas como b;omonitores en Latinoamerlca
Otros parametrosfisiol6gicos evaluados con relaci6n al contenido demetales pesadosen
lostalos liquenicosson el malondialdehfdo, parael cualsehademostradounacorrelaci6npositiva
con el contenido de algunos metales en IIquenes (Cuny, 1999;Gonzalezand Pignata, 1994), y el
contenido de agua en el talo. AI respecto, CheUri and Sawidis (1997) observaron que algunos
metales pesados, como Cu y Pb, inducian una perdida significativa de agua en los talos
Iiquenicos,pormodificardiferenlesprocesosmetab61icosqueaceleranlaperdidadeagua.
En relacion a su tolerancia a los metales, algunas especies de Iiquenes tienen una
habilidad extraordinaria para crecer en areas muy contaminadas debido a que han desarrollado
mecanismos que les confieren una menor sensibilidad a los mismos (Brown and Beckett, 1983).
Segun Sarret et al. (1998) la capacidad de absorcion de diferentes metales par Ifquenes no s610
depende de la posibilidad de captaci6n de partfculas metalicas desde la atmosfera, sino de
cambiosfisiol6gicosqueincrementansutolerancia.
Dentro de estos, se encuentra la inmovilizaci6n de iones metalicos segun los siguientes
mecanismos: a) entrampamiento de partfculas atmosfericas con alto contenido de metales; (b)
formaci6n de complejos can aminoacidos azufrados, cuando la incorporaci6n es intracelular; (c)
formacian de complejos extracelufares con grupos funcionales de la pared celular tales como
hidroxilos, carboxilos, fosfatos, aminas 0 sulfhidrilos; (d) formaci6n de complejos extracelulares
can acidos organicos, como el acido oxalico, 0 compuestos liquenicos, como el acido parietfnico,
sintetizados por el hongo y (e) exclusi6n competitiva de iones con diferentes afinidades por los
sitiosdeuni6n(Nash, 1996;SarretetaI., 1998).
Sin embargo, apesarde investigacionesqueexistenacercadel empleode
Ifquenes como biomonitoresdecontaminaci6n pormetales pesados, todaviason insuficientes los
avances en el estudio de los procesos relacionados conlarespuesta de Iiquelles a la presencia
simultaneademetalesycontaminantes gaseosos,yaqueel danaproducidoporlosultimospodrfa
afectarlaacumulaci6ndemetales(Garty, 1993).
3. Disefios experirnentales en estudios de biomonltoreo empleando Iiquenes en
Cordoba, Argentina
3.1. Evaluacion de la respuesta de tres especies de Uquenes como biolndlcadoras de la
contaminacionatmosfericaenC6rdoba,Argentina.
ObjetivosGenerales
Determinar en Ramalina celastri (Spreng.) Krog & Swinsc., Punctelia microsticta (MOIL
Arg.) Krog y Canomaculina pilosa (Stizenb.) Elix & Hale, patrones qufmicos de respuesta a
distintostiposdefuentesdeemisi6ndepolutantesatmosfericos.
Obtenerinformaci6n paradesarrollarprotocol as de muestreo, preparaci6n, conservacion y
analisis de muestras liquenicas, asf como para interpretar los resultados en rprogramas de
biomonitoreodecalidaddeaire.
Objetivosespecificos
Determinar en Ramalina celastrl (Spreng.) Krog & Swinsc., Punctefia microsticta (Mull.
Arg.) Krog y Canomaculina (Stizenb.) fElix &Hale,. parametros qufmicos que se modifiquen
como respuestaa lapresenciadepolutantesatmosfericos.
-21-
- - ----
Guia para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latlnoamerica
Analizar para cada especie las variaciones lemporales de los parametros qulmicos en
muestras provenientes de su habitat natural y en muestras transplantadas tanto a sitios no
conlaminados como a urbanos.
Valorar para cada especie, si el efeclo de contaminantes atmosferitos urbanos sobre los
parametres medidos como respuesta quimica durante diferentes periodos de exposici6n es de
mayor, igual menor magnitud que el efecto del transplante.
Evaluar la respuesta especffica de Rama/ina ce/astri (Spreng.) Kmg & Swinsc., Puncte/ia
microsticta (MOil. Arg.) Krog y Canomaculina pilosa (Stizenb.) EHx & Hale a polutantes
atmosfericos pravenientes de diferentes fuentes de emisi6n ya distintos tiempos de exposici6n.
Materiales y Metodos
Material vegetal y procedlmiento de recoleccion
Las especies liqumicas empleadas fueron: Ramalina celastri (Spreng.) Krog & Swinsc.
Punctelia microsticta (MOIl. Arg.) Krog y Canomaculina pilosa (Slizenb.) Elix & Hale. Ejemplares
del material correspondiente a cada una de las especies estan depositados en el Herbario CORD.
Ramalina celastr; (Spreng.) Krog & Swinsc., pertenece af orden Lecanorales, familia
Ramalinaceae. Tala corticicola, fruticasa, erecto, rigido, gris-verdoso palido, moderadamente
ramificado desde la base, con sostem prominente, y de 1 a 12 cm. Ramificaciones aplanadas, mas
o menos lanceoladas, ramificaciones j6venes delgadas, mas 0 menos uniformes, ramificaciones
viejas estriadas longitudinalmente 0 reticuladas. EI ficobionle es un alga verde del genero
Trebouxia. Seudocifelas comunes. s ~ u r reproductiva: soralia ausente. Numerosos apolecios,
marginales en talos j6venes y terminales en viejos. No posee sustancias medulares. La
distribuci6n de la especie es paleotropical (Krog and Swinscow, 1976) y esta practicamente
ausente en la ciudad de C6rdoba (Estrabou, 1998).
Punctelia microsticta (Mull. Arg.) Krog, pertenece al orden Lecanorales, familia
Parme/iaceae. Talo corticfcola, gris a gris verdoso, adnato, hasta 8 cm de diametro; 16bulos
redondeados e irregulares, ocasionalmente eon lobulillos en el centro del lalo. Superfieie superior
plana a ondulada. frecuentemente con crestas, con numerosas seudocifelas. Medula blanca, can
un alga verde del genera Trebouxia como ficobionte. Superffcie inferior yarra desde negra hasta
ma ron beige 0 marfilino, ricinada. Eslructuras reproductivas: sin propagulos vegetativos,
numerosos apotecios estipilados, picnidios inmersos, conidios filiformes 11 (-15)-19 Ilm de largo.
No posee sustancias medulares. Especie representada en America del sur (Estrabou, 1999).
Citada para la provincia de C6rdoba, pero practicamente ausente en la ciudad de C6rdoba
(Estrabou, 1998).
Canomacu/ina pilosa (Stizenb.) Elix & Hale, pertenece al orden Lecanorales, familia
Parmeliaceae. Talo corticfcola, hasta 15 em de diametro, gris verdoso a gris mineral, laxamente
adherido al sustrato, 16bulos sUbirregulares, densamente ciliados, cilias cortas, 0,2-1,5 mm,
robustas, simples y bifurcadas. Superficie superior lisa. Medula blanca, con alga verde del genero
Trebouxia como ficobionte. Superficie inferior negra, densamente ricinada. Estructuras
reproductivas: soralios laminares, dispersos 0 coalescentes a la madurez; apotecios raros,
esporas de 11,5-14,5 x 6-8 Ilm de ancho; picnidios no vistas. Especie bien representada en
America del Sur y en el sm de Africa (Estrabou, 1999). Citada parala provincia de Cordoba,
aunque practicamente ausente en la ciudad del m;smo nombre (Estrabou, 1998).
-22-
en
no
os
de
elia
tes
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sc.
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~ D
f
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mas
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Inero
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I, con
hasta
ltivos,
largo.
1999).
rdoba
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raros,
Ida en
rdoba,
Guia para el muestreo de liquenes y plantas epffitas como biomonitores en Latinoamerica
Para cada uno de los muestreos se recolectaron individuos tom ados al azar en un numero
de 10 a 20 individuos (generalmente de distintos tamanos) por lorofito para obtener material
vegetal representativo de todos los estados presentes en el area de recolecciOn.
Area de recolecci6n
EI area de recoleccion del material vegetal, esta ubicada al noroeste de la ciudad de
Cordoba, distante de la misma a 25 km aproximadamente y cercana a la ciudad de La Calera (31 Q
21' 17" S; 64 18' 22" W; 490 m s.n.m.). Es considerada "Iimpia" respecto de la polucion
atmosferica y en ella las tres especies son abundantes. EI area de recolecci6n 0 habitat natural
corresponde a la provincia fitogeografica del Espinal (Cabrera, 1971) con influencia del Bosque
Serrano (Luti et aI., 1979). Los elementos dominantes son Prosopis alba y Prosopis nigra, aunque
las practicas forestales y agron6micas han dejado pequenas islas de formaci6n forestal. Pertenece
al dominio semiseco can una temperatura media anual de 16,8 C Y precipitaci6n media anual de
750 mm, con lIuvias concentradas principalmente en el verano.
Metodo de transplante
EI material vegetal recolectado en el area "limpia" fue removido cuidadosamente del
sustrato (corteza) y mezclado para obtener homogeneidad. Segun Gonzalez y Pignata (1994).
cada unidad experimental fue preparada pesando 6 9 del mismo y colocandaJos balsas de red de
nylon de 20 x 20 cm y abertura de mana de 1 x 1.5 mm, 10 que pelmite una exposicion adecuada
de la muestra a la atmosfera circundan)s-posleriormente dichas bolsas fueron transplantadas a 3
m de altura sobre postes yean exposici6n sur en los sitios seleccionados para cada estudio. Los
sitios de transplante esluvieron localizados en distintos sectores de la ciudad de C6rdoba, y en el
area de recolecci6n en uno de los muestreos. Transcurrido el perfodo de exposici6n las muestras
fueron recogidas y trituradas en un malinillo a un tamalio de 0,5 a 2 mm para obtener
homogeneidad. Posteriormente fueron conservadas a -15 C en oscuridad en recipientes
hermeticos, excepto el material separado para la determinacion de actividad enzimatica que fue
conservado sin triturar a - 4 C Y en oscuridad.
Area de estudio
La ciudad de C6rdoba esta ubicada en el centro de la Republica Argentina, 31 "24'S,
64 11 'W, se encuentra a 440 m s,n.m. y tiene una topografia irregular. Esta asentada sobre una
depresi6n, correspondiente al lecho del rfa Suquia, can una pendiente ascendente desde el centro
hacia las areas circundantes. Esta morfologfa concava produce convecciones cortas de las masas
de aire con la consecuente reducci6n de la circulacion en altura 0 dispersi6n de las mismas y
causa frecuentes inversianes termicas en otono e invierno. EI c1ima es subhumedo con tendencia
a semiarido, con un porcentaje anual de precipitaciones de 790 mm, concentradas principalmente
en verano. La temperatura media anual es de 17,4'C y los vientos predominantes son del NE y
SE. La vegetacion nativa corresponde a la Provincia Fitogeognifica del Espinal (Cabrera, 1971).
Debido a la actividad antr6pica la vegetacion natural ha sido practicamente eliminada y
remplazada por especies ex6ticas, principalmente de los generos Fraxinus, Ligustrum, Mefia,
Ulmus, Platanus, Populus, Acer. Exis'ten ademas ejemplares de algunos generos nativos de
diferentes unidades fitogeografic.as, tales como Jacaranda, Tabebuia y Prosopis.
La ciudad de C6rdoba tiene una poblaci6n de 1.189.000 habitantes (segun el Censo
Nacional del ana 1991). posee asentamientos industriales de distinta magnitud y obviamente
-23-
Gula para el muestreo de IIquenes y plantas eplfitas como biomonitores en Latinoamerica
arterias de transito vehicular con distintas densidades de circulacion. Es considerada una de tas
ciudades mas polutas del pais (Klumpp et aI., 2000); las nubes de smog ocurren trecuentemente y
durante periodos prolongados siendo el area centralia mas afectada debido a la alta densidad de
transito, situacion que se ve agravada por las caracterfsticas topograficas. Stein y Toselli (1996)
senalan que, en la ciudad de Cordoba la polucion atmosferica es importante durante el perfodo
invernal debido a la ocurrencia de una fuerte inversion termica, la que favorece la permanencia de
polutantes primarios en la atmosfera. Sin embargo, segun los datos de calidad de aire aportados
par el Sistema de Monitoreo de Aire (SiMA, implementado par al Gobierno municipal en el ana
1995) la situaci6n no es tan grave como la de otras megaciudades. Los informes del SiMA indican,
de acuerdo a los estandares fijados segun las normas EPA, que los niveles de polucion son bajos
a medias para la mayoria de los dfas.
Determinaciones quimicas
Las determinaciones quimicas se realizaron par triplicado a partir de malerial Iriturado y
conservado. ASI, para cada determinacion se tomaron tres submuestras a fin de obtener un set de
tres datos cuantitativos independientes. y a partir de elias se calcut6 la media aritmetica la
desviacion estandar.
Para la obtenci6n de peso seco (P.S.), empleado para referir las determinaciones qufmicas,
muestras de 1g de material vegetal fresco (P. F.), se colocaron en estufa a 60 2 C y fueron taradas
sucesivamenle hasta ta obtenci6n de peso constante.
Pigmentos fotosinteticos
A partir de 300 mg de material triturado y conservado en frezzer, se realizo la extraccion de
c1orofil,,!-s y feofitinas empleandose 5 mL de acetona:agua 80:20 v/v saturada con Na2C03 en un
homogenizador Ultra Turrax, posteriormente se complet6 a 10mL de volumen final. La soluci6n de
extraccion fue saturada can Na2C03 a fin de evitar la degradaci6n de c1orofilas a feofitinas
(feofitinizaci6n), por acci6n de sustancias Iiquenicas. El homogeneizado fue conservado en
oscuridad a temperatura ambiente durante 1 h (Rao and LeBlanc, 1965) y luego filtrado a traves de
papel. La absorbencia del extracto fue medida a 665 nm y 649 nm para calcular la concentracion de
clolofilas. Posteriormente a 9,7 mL del extracto se Ie agregaron 0,3 mL de soluci6n de acetona:agua
80:20 v/v saturada con acido oxalico y se conserv6 en oscuridad a temperatura ambiente durante 3 h
con ef objetivo de provocar la feofitinizaci6n de clorofilas. La absorbencia del extracto tue medida a
536 nm y 666 nm.
Las mediciones se realizaron en un espeetrofotomatro Beckman DU 7000 Y las
concentraciones de clorofilas y feofitinas fueron calculadas de acuerdo a las ecuaciones establecidas
par Vernon (1960). Los resultados sa expresaron en mg 9-1 P. S.
Carotenos
Material vegetal (1 00 mg) triturado y conservado en freezer fue homogeneizado en 10mL de
ETOH al 96% v/v a temperatura ambiente en un homogenizador Ultra Turrax. Despues de 15 min el
extraeto tue filtrado y la absorbencia fue medida a 470 nm, 649 nm y 665 nm en un
espectrofotometro Beckman DU 7000.
La concentraci6n de carotenos fue calculada de acuerdo a Lichtenthaler y Wellburn (1983) y
expresada en mg g.l P.S.
-24-
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Gula para el muestreo de Jlquenes yplantas epffitas como biomonitores enLatinoamerica
Productos de oxidaci6n de lipidos
Para la extracci6n de los hidroperoxidienos conjugados (HPDC) 50 mg de material vegetal
trituradoyconservadoen oscuridad a-15e,se homogeneizaron en 5mLde ETOH96%v/vconun
homogenizador Ultra Turrax. La suspensi6n lue centrifugada a 10.000 x 9 durante 30 min, e\
sobrenadante fue separado y la absorbencia fue medida a 234 nm en un espectrolot6metro
Beckman DU 7000. La concentraci6n fue calculada mediante et coeficiente de extinci6n de 2,65 x
10
4
M"1 em
1
(BoverisetaI., 1980). Losresultadosse expresaronen /lITlol g-1 P.S.
La concentraci6n de malondialdehido (MDA) lue determinada mediante una metodo
colorimetrico (Heath and Packer, 1968). 50 mg de material vegetal triturado y conservado fueron
homogeneizadosen 2,5 mLde H
2
0 destiladacanun homogenizadorUltraTurrax. Posteriormente58
Ieagreg6unvolumen igualdeTBA al 0,5%en solucionde TCAal 20%yla muestrafue incubada a
95Cdurante 30 min. La reacci6nfue detenidacolocando lostubos de reacci6n en banode hielo, y
luego la suspension lue centrilugada a 10.000 x g. EI sobrenadante fue separado y en este la
absorbencialueleidaa532nm;descontandosea estevaloreldela absorci6n noespecfficamedida
a600 nm. Laconcentraci6n de MDAfue calculadatomando el coeficiente de extincion de 155mM
l
cm-
1
(Kosugi et aI., 1989)y se expresoen Ilmolg-l P.S.
Contenido de azufre
A 0,5 9 de material vegetal triturado y coriservado se Ie agregaron 5 mL de una solucion
saturada de Mg(N0
3
h Y la mezda fue calentada durante 25 min en calentador electrieo.
Posteriormente S8 la lIev6 a 500 C el)-tio.a mufla hasla obtener cenizas c1aras, las que se
resuspendieronen 5mLdeHCI 6 M. Lasoluci6nresultantefue filtrada. lIevadaa ebullici6ndurante3
minutos yluego a un volumen final de 50 mL. EI contenido de S04
2
en la soluci6n fue determinado
parun metodo turbidimetrieo en suspension acida con BaCl
2
Yla absorbencia fue medida a420 nm
(Gonzalez and Pignata, 1994). Apartir de una curva de unacalibracion, preparadacon estandares
deK
2
S0
4
, luecalculadoelcontenidodeazulreen cada muestrayel mismofue expresado enmgg'l
P.S.
Composicion elemental
Se utilizaron muestras de 1,59de P.S. las cualesse sometieron a500 QC durante 1hora. Las
cenizas obtenidas fueron digeridas usando una mezda de 10 mL de Hel (36%) y 5 mL HN0
3
concentrado. EI residua solidofue eliminadoporcentrifugacion a3000 rpm y el sobrenadante se lIevo
a25 mLconaguaultrapurificada (Carrerasand Pignata,2002).
ElcontenidoelementalseanalizoparAASenunespee1rofot6metrodeabsorci6nat6mica Buck
210-VGP, usanda llamadeaire/acetileno. Las concentracionesdecadametalse expresaronen \.1g g"
P.S. Yfueron comparadasconmaterialde referenciacertilicado IAEA-336Lichen.
Ami/isis quimicos enmuestras basales
A fin de contar con datos qufmicos para muestras basales (F), definidas estas como el
material praveniente del sitio de recolecci6n a partir del cual sa tomaron las muestras para el
transplante, se realizaron en elias y para cada uno de los muestreos los mismos analisis qufmicos
queenlas muestrastransplantadas.
Guia para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Lalinoamer;ca
Indice de Poluclan
Se calcul6 un Indice de Polucion (IP) por modificaci6n de la ecuaci6n citadapar Gonzalezy
Pignata(1994), el cualestadefinidosegunlaexpresi6n:
IP=[(Feof-a/CI-ah+(ST/SF)][(MDAT/MDAF) +(HPDCr/HPOC
F
)]
Feoi-aTeslaconcentraci6ndefeofitina-aen lamuestraIique!nicatransplantadaexpresadaenmgg'l
P.S.
CI-aTes laconcentraci6ndec1orofila-a en lamuestralique'mica transplantadaen mgg'l P.S.
5
T
esel contenidodeazufreen lamuestraliquenicatransplantadaen mgg'l P.S.
SFesel contenidodeazufre en el materialliquenicobasalen mgg.l P.S.
MDA
T
es laconcentraciondemalondialdehldoen lamuestratransplantadaen IimOIg'l P.S.
MOA
F
es laconcentraci6ndemalondialdehfdoenel material basalen IimOIg'l P.S.
HFlDCr es el contenido de hidroperoxidienos conjugados en la muestra liquenica transplantada en
).lmol g'l P.S.
HPDC
F
es el contenido de hidroperoxidienos conjugados en la muestra liquenica basal en !J.ffiOI g.1
P.S.
Analisis de los datos
Los datos fueron sometidos al Analisis de la Varianza (ANOVA) a un criteria de
c1asificacion para analizar el efecto de los distintos tratamientos (diferentes periodos de
recolecci6n 0 transplante para cada ~ i c i n diferentes condiciones para cada perfodo;
diferentes niveles de transito;diferentescondiciones industriales;diferentes distancias a lafuente
de emisi6n) sabre cada uno de los parametros quimicos. Cuando el lest F del anal isis de la
varianzaresull6significativoanivel0,05 se realiz6 lacomparaci6na posteriori utilizandoel metodo
LSD (Least SignificantDifference) aTukey.
Para analizar el efecto de la interacci6n entre los tratamientos principales (periodo de
exposici6n y condici6n) sobre cada uno de los parametros qufmicos, se realiz6 el Analisis de la
Varianza(ANOVA) adoscrilerios declasificaci6n.
La correlacion entre los parametros qulmicos fue evaJuada mediante el coeficiente de
correlaci6n de Pearson.
Para todos los analisis estadrsticos mencionados 5e utilizo el software Statistica (Versi6n
4.2, 1993).
Afin dedetectarlas relaciones multiplesentre parametrosquimicos y variables ambientales
se realiz6 el analisis de redundancia (RDA, Redundance Analysis). Se utiliz6 el software CANOCO
(Versi6n 3.12, 1988-1991, desarrollado por Cajo J. F. Ter Braak, Agricultural Mathematics Group
OLO.TheNetherlands).
Tanto las variables qufmicas como las ambientales fueron estandarizadas para evitar
.arbitrariedades en las unidadesde medici6n, yde este modo Jograr que los coeficientes can6nicos
sean comparablesentre51. Los datosdelliquenfueron transformados lIevando todas las variables a
lamismaescala. Losdatosambientalesfueronestandarizadosamediaceroyvarianzauno.
Los resultadosdel RDAfueron graficados en un diagramadeordenaci6n 0 biplot, en el que
es posible observar simultaneamente las relaciones entre las variables del liquen y las variables
ambientales.
-26-
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Gula para e/ muestreo de liquenes y plantas eplfitas como biomonitores en Latinoamerica
3.2. Variacion temporal de los parametros qufmlcos en mueslras somelidas a dislinlas
condiciones
a) Muestras recoJectadas en su habitat natural
Oebido a que la variaci6n de algunos parametros qu[micos es utilizada para estimar la
respuesta de la especie a polutantes atmosfericos, es pertinente conocer la variaci6n de los
mismos en su habitat natural. La variaci6n temporal en estas muestras, refleja 5610 la respuesta
adaptaliva de la especie a su ambiente natural, y por 10 tanto a las condiciones c1imatico-
meteorol6gicas impeJantes en el mismo. De esta manera, es posible obtener informaci6n basica
aeerca del comportamiento de los parametros qufmicos, ya que la existencia de
en la variaei6n de alguno de ellos podria conducir a interpretaciones err6neas cuando se evalua la
respuesta qu[mica de la especie a polutantes atmosfericos. Cabe senalar que los Ifquenes no
rnl:Jestran estacionalidad morlol6gica, pere a nivel fisiol6gico sl reflejan variaciones estacionales
Material de R. celastri fue recolectado en su habitat natural (area de recolecd6n) a partir
del mes de septiembre y cada dos meses: perlodo 1 (septiembre), perfodo 2 (noviembre), periodo
3 (enero), perfodo 4 (marzo), periodo 5 (mayo) y periodo 6 Uulia).
Para cada perfodo se recoleclaron tres muestras independientes. EI malerial de
cada muestra fue removido del sustrato, triturado y conservado en freezer para su poslerior
analisis qufrnico seg(m 10 descripto en Ie Secci6n 3.1.
b) Muestras transplantadas
Material, de R. celastri recolectado durante un perfodo no superior a cinco dfas en el mes
de julio, fue removido del sustrato y preparado para su posterior transplante. Los talos liquenicos
fveron transplantadosa dos condicIOnes diferentes respecta a la calidad atmosferica: a) en el area
de recolecci6n con aire supuestamente y b) en el sitio urbano can atm6sfera
supuestamente contaminada. En cada uno de los sitios el numero de mvestras transplantadas fue
de 18.
Transcurridos los distintos periodos consecutivos de exposiCi6n: 1 (j ulio-septiembre), 2
(julio-noviembre), 3 (julio-enero), 4 (julio-marzo). 5 (juljo-mayo) y 6 Uulio-julio), cQrrespondienles a
2, 4, 6, 8, 10 Y 12 meses, las muestras fueron recogidas, cOlilservadas y analizadas segun 10
desc, ipta, en Ie Seed6n 3.1.
a} Variaci6n temporal de los parametros qufmicos en muestras transplantadas a su habitat natural
y eteeto del transplante
La variaci6n temporal de los parametros quimicos en las muestras transplantadas en su
habitat natural (area de recolecci6n). rellejarfa el electo del transplante durante periodos
consecutivos (2, 4, 6, 8, 10 Y 12 meses) y la incidencia de las condiciones climatico-
meteorologicas sobre dichas muestras. Por este motivo y debido a que los parametres son
ulilizados como respuesta a la poluci6n atmosferica, es necesario evaluar previamente si las
variaciones en los mismos se deben a factores "eslacionales", al eiecto del transplante 0 a la
interaccion de ambos. ASI, los resultados abtenidos para esta condicion permiten confirmar la
existencia de "estacionalidad" de los parametros segun la variaci6n temporal en las diferentes
condiciones, y tambien evaluar el efeC10 del transplante por comparaci6n entre muestras
transplantadas y basales. De este modo, seria posible interpretar con mayor certeza, las
variaciones qufmicas de la especie cuando fuera transplantada como biomonitora de poluci6n
atmosferica
-27-
Gula para el muestreo de /iquenes y plantas epffitas como blomonitores en Latinoamerica
b) Variaci6n temporal de los parametros qufmicos en muestras transplantadas al sitio urbano y
efecto de 105 polutantes atmosfericos
La variaci6n qufmica en las muestras transplantadas a sitios urbanos durante periodos
consecutivos reflejarfa la respuesta de R. celastri al efecto de polutantes atmosfericos y a la
incidencia tanto del transplante como de factores estacionales. Par 10 tanto, cuando la respuesta
de Ja especie es empleada como bioindicadora de polucion, es importante evaluar la incidencia de
factores estacionales sobre la misma, e imprescindible estimar si el etecta de los polutantes es
mayor que el del transpl'ante. De esta manera, conociendo los sentidos de variaci6n de las
respuestas se puede inferir can certeza si las mismas reflejan el efecto de los polutantes sobre el
bioindicador. Por otra parte, los resultados obtenidos permitirian establecer periodos 6ptimos de
exposici6n, es decir aquellos en los que la respuesta de la especie se deba a la presencia de
polutantes atmosfericos.
Considerando que la respuesta en muestras transplantadas en el sitio urbano podria estar
asociada al etecto del perfodo de transplante, al de los polutantes y/o a la interacci6n de ambos,
se realiz6 el analisis de la varianza ados criterios de clasificaci6n (periodo x sitio: t a 6 x sitio de
recolecci6n a sitio urbano). Los resultados mostraron interacci6n significativa para todos los
parametros cuantificados, aunque ninguno de elias reflej6 variaciones debidas solamente a la
interaccion. Posteriormente se realiz6 et anal isis de la varianza a un criteria de clasificaci6n para
cada uno de los tratamientos (distintos periodos para cada sitio de transplante; distintos sitios de
transplante para cada periodo).
Datos meteorol6gicos: En estos disenos es fundamental contar con los datos de las
variaciones de las temperaturas medias mensuales)'-de precipitaciones correspondientes a todo
el per(odo de estudio, y el promedio de las mismas para perfodos prolongados (c1imaticos); en el
presente corresponde a las ultimas cuatro decadas.
Resultados (Gonzalez C.M., 2000)
Los resultados aportaron informacion acerca de las vanaclones estacionales de los
parametros empleados como respuesta, del etecto de estres por transplante ypor polutantes, 10 cual
es prioritario cuando se evalua la capacidad biomonitora de una especie. Esto permite establecer un
biomonitor de condiciones especfficas can la certeza de descartar el efecta del estres por
trasnplante, la estacionalidad de la respuesta y la incidencia de condiciones climatico-meteorol6gicas
Las variaciones observadas entre los sitios de transplante permiten establecer cuales
parametros quimicos son sensibles a la presencia de polutantes urbanos. Es necesario senalar que,
la sensibilidad del bioindicador y par 10 tanto de sus respuestas, puede ser evaluada desde distintas
perspectivas: a) en base a la velocidad de respuesta de la especie; entendiendose como mas
sensible la respuesta a cortos perfodos de exposici6n, b) de acuerdo a la regularidad de la
respuesta. a sea por la permanencia de la misma durante un mayor numero de tiempos de
exposici6n, y c) en relaci6n a las fuentes de emisi6n de polutantes. Cabe destacar que, en el
presente estudio no se pretendi6 evaluar la respuesta del bioindicador a alguna fuente de emisi6n en
particular, sino mas bien estudiar sus modificaciones qufmicas cuando este es expuesto a una
atmosfera urbana. Sin embargo, puede considerarse que en este tipo de ambiente el mayor aporte
de polutantes atmosfMcos to realiza el transito vehicular (Strauss and Mainwaring, 1990; Stein and
Toselli, 1998; Gonzalez, 2000).
Par otra parte, los resultados permiten inferir tiempos 6ptimos de exposici6n para la especie.
Entendiendose por tal, aquellos perfodos de exposici6n a polutantes en los cuales la respuesta de la
-28-
y
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Gufa para el muestreo de Iiquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
especie se deba al etecto de los polutantes atmosfericos, 10 que valida su utilizaci6n como
bioindicador. l::n este aspecto se puso especial interes en los parametros que son utilizados para
calcular ellndice de PoILJci6n (Gonzalez and Pignata, 1994; Levin and Pignata, 1995)
Es importante destacar que la sensibilidad de las respuestas y los perfodos 6ptimos de
exposici6n son val.idos para condiciones similares a las del presente estudio. EI hecho de detectar
interacei6n signilicativa entre los electos de los distintos tratamientos (distintos perlodo de
recolecci6n 0 de transplante; distintas condiciones}, indica que las respuestas de la especie
transplantada no pueden atribuirse particularmente a la incidencia de factores "estacionales", al
eleeta del transp'lante 0 al de polutanles durante perfodos consecutivos; sino que la mayoria
respQndieron a cada tratamiento y a la interacci6n de los mismos, excepto la feofitinizaci6n. Este
lParametro mostr6 variaciones temporales en muestras transplantadas y en la evaluaci6n del eleeto
del transplante (basales vs. transplantadas al sitio de recolecci6n), pera no por la interacci6n de
ambos tratamientos; motivo por e\ cual es posible afirmar que tue el unico parametro que reftej6 el
eleeto del transplante propiamente dicho.
Cabe sei'ialar que los resultados conlirman la necesidad de contar con referentes a controles
internas (testigos no expllcitos) de respuesta, ya que serfa la unica estrategia valida para evitar
interpretaciones err6neas respecto a la respuesta de la especie cuando sea utilizada como
blomonitor. Fundamentalmente porque la condiciones de los sitios de muestreo pueden ser similares
desde el punta de vista c1imatico-meteoroI6gico, como en el presente estudio, pera los electos de la
complejidad de lactores existentes en ambientes urbanas a urbano-industriales sobre !a respuesla
de un organismo, hacen que los testigos controles localizados en sitios "Iimpios" no sean realmente
eomparables con los sitios contaminados. Sin embargo, el referente ~ ser explfcito 0 no; de
hecho la mayorfa de los estudios estan basados en la comparaci6n de la respuesta del
bi6i"ndicador/biomonitor liquenico a dilerentes condiciones, y cuentan can varios sitios (testigos no
explicitos), en los cuales la incidencia de las diferentes fuenles de emisi6n es menor. Estos estudios
han aportado evidencias suficientes para sefialar que el electa de los polutantes sobre el
bioindicadorlbiomonitor es mayor que el del transplante (Kauppi, 1976; Garty et aI., 1988; 1993;
1998; Von Arb and Brunold, 1990; Gonzalez and Pignata, 1994; Carreras et aI., 1998; Carreras and
Pignata, 2001; Zambrano and Nash, 2000). Por otra parte, son escasos los estudios que han
empl ado testigos 0 controles explfcitos, cuyas respuestas se utilizan para realizar comparaciones
can el resto de sitios (Levin and Pignata, 1995; Carreras et aI., 1998; Zambrano and Nash, 2000).
Por estos motivQs, La estrategia mas apropiada para evaluar la capacidad biomonitora de una
especie serfa eontar can testigos expllcitos, si las condiciones del ambiente a monitorear 10 permiten,
yean varios sitios como controles 0 referentes internos, en los que la incidencia de las fuentes de
emisi6n y por ende de los polutantes sea minima (Gonzalez et al. 1996; 1998).
3.3 Efeeto de dlstintas fuentes de emision de eontamlnantes atmosfericos sabre la
respuesta quimica de Ramalina celastrf, Ganomaculina pi/osa y Punctelia microsticta
transplantada durante un carta periodo de exposlclon.
AI evaluar la capacidad de un organismo para indicar poluci6n, es importante detectar
per/odos cortos de exposici6n durante los cuales se manifiestan las respuestas, asr como las luentes
de emisi6n asociadas a elias. Esto permitirfa, establecer las condiciones ambientales que pueden
ser monitoreadas en el menor plazo posible mediante la especie estudiada.
Material de R. cefastri "recolectado en el mes de enero lue transplantado durante 1,5
meses a 9 sitios ubieados en diferentes sectores de la ciudad de C6rdoba, los que representaron
-29-
Gula para el muestreo de /iquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamer;ca
distintas calidades de aire respecto a transito vehicular e industrias como fuentes de emision de
polutanles. Transcurrido el tiempo de exposici6n, fas muestras fueron traladas y analizadas segun
10 descripto en Ie Seccion 3.1.
Los sitios de transplante estuvieron representades en un numero de 3 para cada una de
las siguientes categorfas: a) bajo nivel de transite vehicular y baja densidad industrial, b) alto nivel
de transito vehicular (mas de 100 vehiculos/h, incluido transito pesado) y baja densidad industrial,
y c) alta densidad industrial (metalurgicas de distintos tipos) y bajo nivel de tn3.nsito vehicular.
Resultados (Gonzalez C.M., 2000)
Permitieron detectar entre los parametros medidos como respuesta aquellos que se
modifican, los sentidos de variacion de los mismos y su asociacion can las fuentes de emisi6n
seleccionadas, 10 cual permite establecer cuales se comp0rtan como biomarcadores para perfodos
cortos de exposici6n.
La respuesta qufmica de R. cefastri expuesta durante 1,5 meses indica que es una
especie sensible a polutantes provenientes principalmente de transito. Respeclo a MDA puede
seiialarse que, en las condiciones del presente estudio no se comporta como un parametro indicador
de poluci6n; mientras protefnas solubles, HPDC, S e IP si 10 hacen
EI comportamiento de los parametros quimicos, como respuesta a la presencia de
polutantes emitidos por transito 0 industria, indican que la respuesta de P. microsricta
transplantada durante 1,5 meses estuvo asociada principalmente a emisiones industriales. Los
parametros HPDC, S e IP se comportaron como indicadores de la presencia de polutantes
emitidos por industrias, y MDA como indicador de poluci6n atmosferica sin discriminar el origen de
la fuente de emisi6n.
Las respuestas qufmicas C. pifosa indican que ra especie fiensible a polutantes emitidos
por industrias. MDA y carotenos se comportaron como parame-fros indicadores de poluci6n sin
discriminar las fuentes de emisi6n de polutantes; mientras HPDC e IP fueron indicadores de poluci6n
industrial.
Cabe seiialar que el comportamiento de parametros tales como: clorofifas, feofitinizaci6n,
carotenos, actividad peroxidasa, azufre y su relad6n con protefnas, rellejan que esta especie serfa
mas tolerante a polutantes emitidos por et transito vehicular que R. celastri y P. microsticta.
-30-
Gufa para el muestreo de Jlquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
Tabla 3.1. Valores medios desviaci6n estandar de azufre (S) e Indice de Poluci6n (IP), y resultados del anc:llisis de la varianza para Ramalina celastr;
transplantada durante 1,5 meses a sitios con diferentes condiciones de transito e industria.
S (mg g'l P.S.)
1,190O,956b
Baja nivel de transito e
industria
(n ~
1,410O,197b
Alia nivel de
industria
~ n '" 3L
1,799O,349a
Alto nivel de
transito
(rJ = 3)
ANOVA
(p-valor)
p < 0,001
IP 2,966 O,292c 3,795 O,554b 5,961 1,019a P < 0,001
Los valores en cada fila seguidos por la misma letra no difieren significativamente a p < 0,05 para el test de comparaci6n de medias (LSD).
Tabla 3.2. Valores medios desviaci6n estandar de z u r ~ (S) e Indice de Poluci6n (IP), y resultados del analisis de la varianza para Punctelia microsticta
transplantada durante 1,5 meses a sitios con diferentes condiciones de transito e industria.
S (mg g" P.S.) 1,316O,207b
Bajo nivel de transito e
industria
(i1 := 3L
1,7990,251a
Alto nivel de
industria
(-'l = 3) _
1,502O,176b
Alto nivel de
transito
_ (n =3)
p < 0,001
ANOVA
(p-valor)
IP 4,388 1,154b 7,531 1,036a 4,678 0,478b P < 0,001
Los valores en cada fila seguidos par la misma letra no difieren significativamente a p < 0,05 para el test de comparaci6n de medias (LSD).
Tabla 3.3. Valores medios (n = 3) desviaci6n estandar de azufre (S) e Indice de Poluci6n (IP), y resultados del analisis de la varianza para Canomaculina pi/osa
expuesta 1,5 meses a diferentes condiciones de transito e industrias.
S (mg g-I P.S.)
1,533 0,170
Bajo nivel de transito e
industria
(n =3)
1,654 0,200
Alto nivel de
industria
(n = 3)
1,649 0,377
Alto nivel de
transito
( n =3)
n.s.
ANOVA
(p-valor)
IP 3,519 0,462b 4,744 0,794a 3,970 0,558b p < 0,001
Los valores en cada fila seguidos por la misma tetra no difieren significativamente a p < 0,05 para el test de comparaci6n de medias (LSD)
-31-
Guia para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomon/tores en Latinoamerica
3.4. Blomonitoreo de la caUdad del aire mediante el transplante de Ramalina celastrl
durante 1,5 meses a un area urbano-industrial
Material de R. celastri recolectado en el mes de mayo fue transplantado durante 1,5
meses a 29 sitios dentro de un area ubicada en el sector Sudeste de la ciudad de Cordoba. Por
tratarse de una de las zonas residenciaJes mas antiguas, el area esta. densamente poblada y se
caracteriza par una importante actividad industrial (pequenas y medianas empresas), como
tambien par la presencia de arterias con diferentes niveles de transito vehicular (Fig. 3.1.).
A lin de representar las condiciones ambientales respecto a transito e industria, cada sitio
de transplante fue caracterizado en base a variables categoricas ordinales. Una escala de valores
lue asignada a cada variable, donde el menor valor correspondi6 a la minima condici6n potencial
de poluci6n, mientras eJ mayor valor a la maxima.
Los rangos fueron delinidos de la siguiente manera:
(A) Transito vehicular: este fue evaluado durante las horas pico (1 0:00 a. m.-12:00 p. m.). Se
determinaron tres niveles: bajo, 0-5 vehfculos/h; medio, 6-50 vehfculos/h y alto, mas de 50
_vehiculos/h, incluyendo transporte publico y transito pesado.
(8) Densidad industrial: se consider6 el numero y tipo de industrias (talleres de chapa y pintura,
recauchutaje de neumaticos, pinturerias, cementeras, metalurgicas y curtiembres) presentes en
una cuadricula de 100 m, en la que cada sitio, de muestreo estuvo localizado en el extremo
sudoeste. Esta estrategia se aplic6 para delectar el posible electo de los vientos predominantes
(NE) sabre la dispersi6n de los polutantes emitidos por las industrias. Se establecieron tres
categorfas: baja, media yalta densidad industrial, en la ultima estuvieron incluidas las
curtiembres.
-32-
Gula para el muestreo de Ifquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
o

I;""''''
0.1 ~ 0-3 Q' o.s Om
&
Figura 3. 1. Localizaci6n de los puntas d(uestreo de R. celastri en la ciudad de Cordoba,
Argentina
Resultados (Gonzalez et aI., 1996)
Las respuestas de R. celastri transplantada a 29 sitios de biomonitoreo durante 1,5
meses dentro de un area urbano-industrial, confirm an que principalmente se camparta como
bioindicadora de poluci6n par transita. Los parametros indicadores de la presencia de polutantes
emitidos por transito fueron S e IP. Respecto a las emisiones industriales, como parametres
indicadores de las mismas pueden mencionarse la feofitinizaci6n e IP. Sin embargo, estas
respuestas sa manifestaron s610 en aquellos sitios sin influencia puntual de transito vehicular y
bajo condiciones particutares como la presencia de industrias muy cantaminantes (curtiembres) y
la proximidad del rfa.
-33-
Guia para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en l-atlnoamerica
Tabla 3.4. Valores medias desviaci6n estandar de azufre e Indice de Poluci6n, y resultados del analisis de la varianza (p-valar) entre niveles de transita bajo, media,
alto para RamaJina transplal}tada a 295itios de biomonitoreo urbano-industrial en C6rdoba, Argentina.
Transito bajo Transito medio Transito alto ANOVA
(n =10) (n =8) (n =11) (p-valor)
5 (mg. g'l P.S.)
0,627 0,053b 0,611 0,045b 1,022 0,115a p <: 0,01
IP 6,937 0,0309b 7,772 O,543b 11,442 1,096a p < 0,001
Valores en cada fila seguidos par la misma letra no difieren significativamente a p < 0,05 para el test de comparaci6n de medias (LSD); n.s. = no dilieren.
Tabla 3.5. Valares medios desviaci6n estandar azulre e Indice de Polucion, y resultados del analisis de la varianza (p-valor) entre sitios con transito alto (sin
inlluencia de industrias) y sitios con alta densidad industrial (sin inlluencicf'Qe transito) para Ramalina celastri transplantada a 29 sitios de biomonitoreo urbano-
industrial en C6rdoba, Argentina. )
Alto transito vehicular
(sin industria)
(n =7)
Alta densidad industrial
(sin transito)
(n =8)
ANOVA
(p-valor)
S (mg. g.1 P.S.)
1,115 0,172 0,672 0,063 p <: 0,05
IP 12,320 1,477 7,807 0,536 p < 0,01
Valores en cada lila seguidos por la misma letra no significativamente a p <: 0,05 para el test de comparaci6n de medias (LSD); n.S. = no difieren .
Tabla 3.6. Valores medios desviaci6n estandar de azufre e Indice de Poluci6n, y resultados del anaIisis de la varianza (p-va/or) entre densidad industrial baja, media
y altajsin influencia de transitQ) para Ramalina celastritransplantada a 29 sitios de biomonitoreo urbano-industrial en C6rdoba) Argentina.
Densidad industrial baja Densidad industria! media Densidad industrial alta ANOVA
(n = 7) (n =5) (n = 6) (p-valor)
5 (mg. g-l P.S.)
0,541 0,041 0,604 0,041 0,779 0,120 n.s.
IP 6,458 0,296b 7,266 0,429b 9,1170,871a p <: 0,01
Valores en cada fila seguidos par la misma letra no dilieren significativamente a p <: 0,05 para e! test de comparaci6n de medias (LSD); n.s. = no dilieren a p < 0,05
-34-
Guia para el muestreo de Jiquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
3.5. Biomonitoreo de la caUdad atmosferica en un area urbano-industrial mediante el
transplante durante 3 meses de R. celastrl, Canomaculina pi/osa y Punctelia microstlcta
Material, de cada especie recolectado en el mes de diciembre fue transplantado durante 3
meses a 21 sitios de muestreo: 2 controles internos y 19 de biomonitoreo. EI area de estudio
estuvQ localizada en el sector Noroeste de la ciudad C6rdoba, limita al Neon el rro Suqura y es
densamente poblada (Fig. 3.1.). Esta se caracteriza por una intensa actividad industrial,
fundamentalmente industrias pequenas y medianas, y tambien por la presencia de diferentes
niveles de transito vehicular. En el sector Noreste del area se encuentra la planta generadora de ..
electricidad Dean Funes, la cual comenz6 a generar electricidad (65 MW) en et ano 1967. Durante
el periodo de esludio la central termoellktrica luncionaba por combusti6n de nafta Y 9asoil, como
as! tambien con alternacia de combusti6n a gas. La chimenea de emisi6n de humo tiene una altura
de 19,5 m. no se realizan mediciones de contaminantes emitidos y por ser una central termica, el
sistema de refrig.eraci6n aporta volumenes importantes de vapor de agua a la atmosfera.
Cada sitio de biomonitoreo fue caracterizado respecto a un conjunto de variables
ambientales, tales como transito, densidad industrial, presencia de industria en el sitio, nivel
topogralica y distancia desde la central Una escala de valores fue asignada a cada
variable, donde el valor inferior correspondi6 a la menor condici6n potencial de poluci6n, mientras
el superior a 'Ia mayor.
Los rangos lueran definidos de 10 descripto en la Secci6n 3.4. y las muestras liquenicas
fueron analizadas segun la senalado en la Secci6n 3.1.
Resultados (Gonzalez and Pignata, 1997; 1999, 2000)
La respuesta quimica del biaindicador expuesto durante 3 meses, estuvo asociada
principal mente al transito como luente de emision de polutantes; sin embargo, los valores de IP
reflejaron el electo aditivo de los polutantes emitidos por transite y par la planta generadora de
electricidad. Esto permite inferir que la especie es sensible a polutantes provenientes de la
combustion de combustibles fosiles. Los parametros indicadores de poluci6n atmosferica lueron S,
HPOC e IP, Sin embargo, debido la regularidad de las respuestas en relaci6n al sentido de
variacion de las mismas respeC10 a la luente de emisi6n, el contenido de azufre y los valores del
Indice de Poluci6n son los parametros que permiten sena/ar que esta especie se comporta como
biomonitora de poluci6n atmosferica proveniente de transito.
La respuesta P. micros/icfa despues estuvo asociada esencialmente a polutantes emitidos
por .industrias, y por la planta generadora de electricidad, no 5610 por sus emisiones sino tambien
por el impacto indirecto sobre el area debido al aporte de humedad desde su sistema de
relrigeraci6n. Los parametros indicadores de poluci6n atmosferica fueron HPDC, MDA, S e IP, EI
contenido de HPDC mostr6 una relaci6n directa con la planta generadora de electricidad, mientras
que las cambios observados en los otros tres parametros fueron respuestas claramente asociadas
a pol'utantes emitidos par industrias, aunque con un impacto particular de la central termica. En
base a la regularidad de los parametros MDA, S e IP en relacion a los sentidos de variaci6n y a las
luentes, ,es posible afirmar que esta especie se comporta como biomonitora de poluci6n
atmosferica.
C. pilosa es una especle sensible a polucion atmosferica, mostrando que su respuesta
estuvo relacionada esencialmente a emisiones industriales puntuales.
Los pararametros feofiti na-alclorofila-a, el contenido de azufre y el IP, pueden ser
considerados como indicadores de dana causado por industrias; 10 mismo pUede senalarse para
-35-
Gufa para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
HPDC, aunque destacando que las emisiones de la central termoelectrica son similares a las
emitidas por el transito vehicular. MDA se comport6 como indicador de polutantes emitidos por
transito. Sus respuestas estuvieron particularmente asociadas a la proximidad de la industria, por
10 cual puede inferirse que posee mecanismos adaptativos 0 de tolerancia frente a otras
condiciones. Deestemodo, serialaespeciemasapropiadapararealizarseguimientostemporales
duranteperlodos muyprolongadosdefuentesdeemisi6nestacionarias.
Comparaci6n de las respuestas especfficas de las tres especies Iiquenicas empleando
sitioscomunesdeIransplanle
El ana..lisis de redundancia, aport6 suficiente evidenciaacercadelaexistenciade patrones
de respuesta especifico, 10 cual permitira realizar fa elecci6n de especies apropiadas para su
aplicaci6n en programas debiomonitoreo. Un modo simple de visualizar las relaciones entre los
dos conjuntos de variables es mediante un grafico bidimensional basado en los dosprimeros ejes
o.btenidos en el RDA, denominado "biplot" 0 diagramade ordenamiento. De acuerdo aTer Braak
(1987a, 1987b; 1990), lalongitudcan que se represenlaunavariable ambiental se interpretacomo
una medida de cuanto varia la distribuci6n de los parametros quimicos medidos en el liquen a 10
largo deesavariable ambiental. De esta manera, las variables ambientales masimportantespara
explicar el comportamiento de las variables quimicas tienden a ser representadas con lineas de
mayor longitud. Ademas, la coordenada de una variable del liquen en un eie de RDA, es la
proyeccion sobre el eje de la Hnea marcada para esa variable. De este modo, un valor positivo
significaquelavariablecrece a 10 largodeleje;unvalor negativo indica que lavariable decrece a
10 largo del mismo, y un valor cercano a cera, que la variable del liquen esta pobremente
relacionada(Iinealmente). Porotraparte, cuando los angulosentre lasIineasquerepresentanalas
variables ambientales y las correspondientes a las variables quimicasson pequenos indican una
luertecorrelaci6nentre ambostiposdevariables.
Las tecnicas de ordenaci6n can6nica pueden ser utilizadas para detectar patrones de
variaci6n de un conjunto de variables e ~ n i n de olro conjunto de variables. AsI, se utiliz6 el
analisis de redundancia (RDA) para detectar en cada una de las especies las relaciones
simultaneas entre las variables ambientales y los parametros qufmicos medidos (Gonzalez et aI.,
1998), 10 que permiti6 establecer las variables ambientales que mejor explican el patron de
variaci6n de la respuesta qufmica especifica. Para cada especie se construyeron "biplots" 0
diagramas de ordenaci6n, que mostrar6n la correlaci6n entre los parametros quimicos y las
fuentes de emisi6n (transito e industria) y otras variables ambientales que determinarian la
respuestadecada especie, par 10 tanto, estos permiten compararglobalmente el comportamiento
delasespecies. Parotraparte, lainformaci6nobtenidaesvaliosarespeeto afuturos programasde
biomonitoreo 0 bioindicaci6n, ya que los diagramas de ordenaci6n muestran c1aramente cuci.les
combinaciones de variables ambientales deberian ser consideradas para cada especie a fin de
interpretarsu respuestaafuentesdeemisi6n particulares.
-36-
I
Guia para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomon/tores en Lstlnoamer/ca
Figura 3.2. Oiagrama de ordenaci6n del analisis de redundancia para las Ires especies
transplantadas transplantada a 17 sitios en un sector urbano-industrial, con las variables
ambienlales representadas por Ifneas continuas: densidad industrial (In), industria en el sitio (Til.
distancia a industria (Oi), transito vehicular (Tr), distancia desde la planta generadora de
electricidad (Op), distancia desde el rio (Or), edificaci6n (Ed), ubicaci6n en la cuadra (Ub) y
arbolado (Ar), y con los parametros qUlmicos representados por Iineas discontinuas: clorofila-a
(CA), clorofila-b (CB), feofitina-a (FA), feofitina-a1clorofila-a (FEOF), azufre (S) hidroperoxidienos
conjugados (0), malondialdehido (MOA), e Indice de poluci6n (IP).
-11-'------------------'
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Eje 1
RamaJina celastr/
-37-
Gula para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como blomonitores en Lstinoamerica
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Eje 1
Punctella microsticta
-38-
Guia para eJ muestreo de IIquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinol!merlca

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_._. 1.
E]e 1
Canomaculina pi/osa
ResuJtados (Gonzalez et al. , 2003)
La comparaci6n de los resultados obtepidos para cada una de las especies en el analisis
de redundancia, aporta suficiente evidencia--ara confirmar la existencia patrones de respuesta
espedfiea, aun cuando las tres especies respondieron en alguna medida a transito e industrias. En
esta sentido, los dos primeros ejes de RDA separaron los grupos de variables ambientales
responsables de las respuestas qufmicas de cada especie. ASI, R. cefastr; mostr6 un patr6n de
respuesla asociado principalmente a la planta generadora de electricidad y al transito como
fuentes de emisi6n de polutantes. Entre las caracterfsticas ambientales que afectan la dispersi6n
de polLitantes y consecuentemente el efecto de los mismos sabre la especie, pueden mencionarse
el nivel lopografica y la ubicacion en la cuadra. Para P. microsticta y C. pi/osa los ejes reflejaron
que tas emisiones industriales fueron las mas importantes para determinar la respuesta del
biomonitor. Sin embargo, los resultados permiten inferir que para C. pifosa la proximidad a la
industria fue, entre las condiciones industriales, la mas imporlante para determinar de sus
-39-
Guia para el muestreo de Ifquenes y plantas eplfitas como blomonitores en Latinoamerica
respuestas qu[micas. En cuanto a las caracteristicas que influyen en la distribuci6n de los
contaminantes e inciden en la respuesta del biomonitor a los mismos. pueden mencionarse para
ambas especies la edilicacion; ademas para P, microsticta el grado de arbofado en el sitio tambien
fue importante.
Entre los parametros qufmicos indicadores de poluci6n, para R. cefastri pueden
mencionarse principalmente Ja acumulaci6n de azufre, las concentraciones de HPDC y los valores
de IP en relaci6n a transito y a las emisiones de la central termica. que son similares a las del.-
transito; mientras que el contenido de prote[nas y MDA sedan indieadores de polutantes emilidos
par industrias en el sitio. Para P. microsticta puede sefialarse que Ja acumulaci6n de azufre, MDA,
feofitinizaci6n y proteinas son eseneialmente marcadores de poJuci6n industrial; mienlras el IP es
indicador de esta y de Ja originada par el transito vehicular, 10 mismo puede seiialarse para HPDC.
Todas las respuestas de esta especie estan relacionadas en menor 0 mayor grado a industrias.
Para C. pifosa pueden mencionarse la acumulaci6n de azulre. el IP y la feolitinizaci6n
principalmente como indicadores de poluci6n industrial, aunque tambien muestran relaci6n con
transito; mientras MDA, HPDC Y proteinas solubles son respuestas asociadas exclusivamente a
industrias.
Los resultados conlirmaron que las especies responden diferencialmente a poluci6n
atmoslMca, 10 cual permite senalar que muestran diferente sensibilidad segun la fuente de emisi6n
de polutantes. Si bien las tres especies responden tanto a transito como a industria, puede
indicarse que R. cefastri responde principal mente a transito, mientras P. microsticta y C. pilosa 10
hace a industrias.
Por otra parte, los resultados de RDA confirmaron cuales son los parametros indicadores 0
marcadores de poluci6n para cada especie y que condiciones ambientales son las que producen la
respuesta del bioindicador. Asi, el comportamiento de cada especie tanto en relaci6n a los
parametros de respuesta como a las fuentes de emisi6n asociadas a dichas respuestas, en
general mostr6 regularidad respecto a los muestreos anteriores; sin embargo en relaci6n a
caracteristicas ambientales que ineiden sobre la dispersion de los polutantes y el consecuente
efecto sobre eJ biomonitor, este analisis aport6 nuevas evideneias.
,3.6. Efecto de ta incorporacl6n de Niquel sabre la respuesta qufmlca de los Iiquenes
Usnea amblyoclada y Ramallna ceJastri a contamlnantes atmosfericos.
Los ambientes eontaminados por aetividades industriales 0 urbanas frecuentemente
presentan altos niveles atmosfericos de metales pesados en asociaci6n can otros contaminantes
gaseosos. En el contexto de contaminaci6n y bioindicadores, estudios realizados en la Argentina
han evidenciado que los Iiquenes son eficaces biomonitores de la calidad del aire en ambientes
urbano-industriales (Carreras and Pignata, 2002; Gonzalez et aI., 2003). De este modo el
empleo de Ifquenes transplantados permite estudiar la respuesta de o r n i s ~ vivos expuestos
a diferentes condiciones atmosfericas (Garty et aI., 1988; Gonzalez et aI., 2003). I
Entre los metales presentes en Ja atmosfera. el n[quel es emitido par diferentes fuentes
antropogenicas, provocando daflos fisiol6gicos en talos Jiquenicos expuestos (Garty, 2000).
51 bien existen numerosos antecedentes acerca de la acumulaci6n de metales pesados
en Ifquenes, no hay suficiente informaci6n de los efeetos fisiologicos que producen estos
elementos en talos transplantados a zonas urbanas. Es conocido el dana provocado par niquel
sobre la permeabilidad de fTlembranas bajo condiciones de laboratorio, sin embargo a campo se
produce la incorporaei6n de varios elementos y resulta dificultoso asociar las respuestas a un
-40-
--
[
a
S
n
a
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el
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es
os
os
lei
se
un
Guia para el muesfreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
elemento en particular. Por ella, antes de transplantar los talos a una atm6sfera uroana, estes
fueron expuestos a dilerentes concentraciones de n[quel, considerando entre elias
concentraciones similares alaspresentesen ambientesurbanos.
ObjetivosGenerales
Establecer si la incorporaci6n previa de dilerentes niveles de Ni en Usnea
ambfyoclada (MOil. Arg.) Zahlbr. y Ramalina celastrj (Spreng.) Krog & Swinsc. afecta sus
respuestasquimicasacontaminantes atmosfericos.
Comparar los efeetos de la incorporacion de nfquel sobre las respuestas de U.
amblyocada yR. celastri.
Objetlvosespecificos
Analizarel electode concentraciones conocidas de Ni sobre la respuestaquimicade U.
amblyocada y R. calastr; acontaminantes atmosfericosurbanos.
Determinar si la presencia del anion SO/' incorporado a los talos liquenicos en las
solucionesdeNi
2
+ modificalas respuestasdelas especiesestudiadas.
Establecerel grado de sensibilidad/ tolerancia de las especies a polutantes urbanos en
presenciadeNi en lostalos.
TratamientodelostalosIiquenicosytransplante
Talos de Usnea amblyoclada {MOil. Arg.} Zahlbr. y Ramalina celastri (Spreng,) Krog &
Swinsc. fueron colectados en un area considerada "Iimpia". Parte det material sin tralar lue
sometido a los mismos analisis qufmicos realizades sobre el material transplantado a fin de
contarconel nivelbasal.
Las muestras se prepararon de manera independiente a partir de talos que fueron
sumergidos e incubados durante 30 minutos a temperatura ambiente en una de las siguientes
soluciones salinas: 10 mM, 5mM and 0.5 mM deNiS0
4
.6H
2
0. Se coloearon 6 9 dematerial en
bolsas de red de nylon parasu posterior transplante ycomo controles detratamiento con Ni se
prepararon bolsas con talos que habran side sumergidos 5610 en agua ultrapura. Se realiz6 el
transp:lantea lasdoszonas duranteunmes.
Sobre el material recolectado, se realizaron dilerentes tratamientos previos al
transplante: diferentes concentraciones de sulfato de niquel y pH de las soluciones
correspondientesacadaunodelostratamientosrealizados en los liquenes(Tabla3.7.).
Tratamiento
Ramalina celastri Usnea amblyocada
H
2
0 ultrapurificada
NiS0
4
.6H
2
0 5.10'
2
M
NiS0
4
.6H
2
0 1.10.
2
M
3,40
3,50
3,52
3,42
3,53
3,45
NiS0
4
.6H
2
0 5,10'3 M
NiS0
4
.6H
2
0 5.10'
4
M
3,49
3,49
3,41
3,52
H
2
S0
4
5.10'2 M
H
2
S0
4
1.10.
2
M
H
2
S0
4
5.10'
3
M
H
2
S0
4
5.10'
4
M
1,31
1,85
2,21
4,31
1,28
1,86
2,08
3,12
Tabla3.7. Concentracionde deexposici6naNiyH
2
S0
4
-41-

Guia para eJ muestreo de Jiquenes y plantas epifitas como blomonitores en Latinoamerica
Para incorporar Ni a los talos liquemicos el material vegetal fue sumergido
independientemente en distintas concentraciones de NiS0
4
.6H
2
0 durante 30 min, Tal como se
muestra en la la tabla previa. A fin de evaluar eJ electo que pudiera lener la incorparaci6n del
ani6n sot par las soluciones de NiS0
4
.6H
z
O, se prepararon muestras independientes
sumergidas en dislintas concentracianes de S04H2 durante 30 min. Se procedi6 de igual manera
can agua ultrapurificada para evaluar el efecla de inmersi6n. Luego el material fue secado a
temperatura ambiente durante tres dras aproximadamente y lue transplantado a los dos sitios
seleccionados denlro del area urbana. Ademas se transpJantaron muestras sin tratamiento
previa. A fin de obtener un set de tres valores independienles par sitio, en cada uno de ellos se
transplanlaron tres submuestras de cada Iralamienlo. Transcurrido el perfodo de exposici6n (un
mes), las mueslras lueren recogidas y preparadas para su canservaci6n.
Resultados (Rodriguez et aI., 2007)
Media:l: DE
Control Ni 0.5 mM Ni 5 mM Ni 10 mM
Feof-a/Clo-a
No eontaminada 1.270 to,183 1,328 t 0,075 1,164 t 0,107 1,1520,111 ns
Contaminada 1,477tO,193 1,559 to, 151 1,293 0,056 1,350tO,169 ns
ANOVA
a
ns ns ns ns
HPOC
No contaminada 54,111 0,027 b 69,224 0,051 a 56,174 0,087 b 67,465 0,011 a
Contaminada 58,600 0,028 c 62,933 0,019 be 63,474 0,038 b 76,150 0,003 a
ANOVA
a
ns ns ns
MOA (1lJO.g
1
ps)
No contaminada 0,109 O,007 0,101 to,018 0,112 0,024 0,113 0,006 ns
Contaminada 0,104 0,027 0,111 0,002 0,109 to,005 0,107 0,014 ns
ANOVA
a
ns ns ns ns
Azufre (mg.g
1
Ps)
No contaminada 1,279 0,057 d 1,359 t 0,039 c 1,500 0,057 b 1,698 0,075 a
Contaminada 1,466 0,096 b 1.572 0.071 b 1,619 0,083 b 2,264 0,105 a
ANOVA
a
" '"
Nfquel Ps)
No contaminada 3,871 0,328 c 12,354 0,413 b 12,148 0,263 b 23,307 0,484 a
Contaminada 6,261 0,271 d 11.893 0,344 c 31,048 0,389 b 46,018 0,325 a
ANOVA
3
ns
CE
No contaminada 2,500 0,194 b 2,338 0,065 b 2,852 0,115 a 2,887 0,172 a
Conlaminada 2,914 0.251 c 5,796 0,244 b 6,497 0,137 b 7,678 0,153 a
ANOVA
8
'"
IP
No contaminada 3,989 0,075) 8,097 0,527 b 7,512 t 0,505 b 9,200 0,558 a
Contaminada 5,165 0,238 d 9,203 0,867 b 8,174 0,390 c 11,057 0,679 a

Tabla 3.8. Valores medios de concentraci6n desviaci6n estandar y resultados del ANOVA de
parametros qu[micos de R, celastri transp[antada a una zona conlaminada y otra no
contaminada y tratada can diferentes soJuciones de Ni 0 agua ultrapurificada (control). los
valores en cada Ifnea horizontal seguidos par 'a misma letra no dilieren significativamente (p =
0,05).
-42-
a
el
,s
a
a
~ s
o
un
Ade
no
Los
(p '"
Guia para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores, en l".atinQamerica
MediaDE ANOVA
b
Control Ni0.5mM Ni5mM Ni 10mM
Clo-b/Clo-a
Nocontaminada 1,2940.039 1,3290.042 1,311 0,035 1,3650,047 ns
Contaminada 3,5440,341 a 2,6360,119b 3,4430,169a 3,4760,297a
ANOVA
a
'.
HPDC (1IDl.9-
1
ps)
No contaminada 35,1090,354b 22,190,193c 50,4150,301 a 50,8160,098a *
Contaminada 37,2320,400c 48,9850,712b 58,5860,755a 52,669:to,16Sab
ANOVA
B
ns ns
,MOA(I"m.g-'Ps)
Nocontaminada 0,1320,005 0,1140,O18 0,1320,019 0,131 0,018 ns
Contaminada 0,1150,027 0,108O,011 O,113O,010 0,1120,O11 ns
ANOVA
B
ns ns ns ns
Azufre(mg.g"\ Ps)
Nocontaminada 1,1970.034b 1,2370.089b 1,316O,038b 1,4560,149a

Contaminada 1,2840,097b 1,3270,019b 1,4200,023b 2,2830,224a
...
ANOVA
3
ns ns
Niquel ~ g . g Ps)
No contaminada 3,9550,090c 11,2650,697b 22,7370,871 a 21,6970,927a

Contaminada 4,7920,055d 15,991 0,880c 28,3460,815
,
b 60,165 0,443a
...
ANOVA
B
CE(I.1S.m;')
Nocontaminada 1,8790,096 2,194 0,084 2,2260,162 2,1140,179 ns
Contaminada 2,2440,042c 2,7250,101 a 2,5020,085b 2,8600,210a
ANOVA
a
IP
Nocontaminada 1,3180,153c 0,8530,077d 1,9840,081 b 2,139O,158a

Contaminada 2,8430,241 b 2,901 0,259b 4,4890,488a 4,6940,205a

ANOVA
a
Tabla 3.9. Valores medios de concentraci6n desviaci6n estandar y resultados del ANOVA de
parametros qufmicos de U. amb/yoclada transplantada a una zona contaminada y otra no
contaminada y tratada con diferentes soluciones de Ni 0 agua uttrapurificada (control). Los
valores en cada Ifnea horizontal seguidos por la misma letra no difieren significativamente (p '"
0,05). ns, nosignificativo;.,P< 0,05; **, P< 0,01; ***, P< 0,001. ANOVA
a
entre zonas; ANOVA
b
entretratamientos.
EI patr6nderespuestaespecificoa lascondicionesambientalesestudiadasfue diferente
en presencia 0 ausencia (control) de Ni, evidenciando que altas concentraciones del cation
incrementanel danocausado parcontaminantes atmosfericos enambas especies. Estopermile
inferir que en atm6sferas con alt,niveles de niquel, la incorporaci6n del mismo a lostalos de
ambas especies las haria mas susceptibles al efecto pravacado par atros contaminantes,
potenciando consecuentemente las respuestas de dana. No obstante, bajo las condiciones del
presente estudio R. celastri es el bioindicadormassensible al danocausado por contaminantes
urbanos, ya que las variaciones del IP fueron independientes del tratamiento con NL Ademas,
esla especie mostr6 mayor efic;:iencia para acumular azufre y Ni, por 10 cual bajo condiciones
simi laresa lasdelpresenteestudio, R. celastripodrfa emplearsecomounbiomonitorapropiado.
-43-
i
Gula para el muestreo de IIquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
3.7. Evaluaclon de la respuesta quimlca del biomonitor Ramal/na celastri a fuentes
especfficas de emision de contaminantes atmosferlcos: industrias metal- mecimicas;
aplicaci6n de agroquimicos y crematorios
En la practica, el esludio de los efectos de la contaminaci6n puede ser baslante complejo.
Esto se debe principalmente a las numerosas vias metab61icas que participan en la respuesta de un
organismo al estres provocado por la contaminaci6n, 10 que sa traduce en la dificultad para
adjudicar a los efectos de un contaminante un disturbio bioquimico particular (Pearson and Soares,'
1998). Algunos autores mencionan, a su vez, que la respuesta fisiologica esta relacionada no s610
con la concentraci6n y durati6n de la exposici6n a los contaminanles atmosfericos, sino tamqielO
con la sensibilidad relativa del organismo, siendo esta una funci6n de la etapa del desarrollo del
mismo, de las condiciones ambientales (previas y actuales) y de su composici6n genetica (Tingey,
1989; Seaward, 1993). Lo mismo puede indicarse respecto a la capacidad para acumular elementos
presentes en el aire (Chiarenzelli et aI., 1997; Carreras et aI., 2005)
En relaci6n a las fuentes de emisi6n de metales pesados, son.numerosas las relacionadas
con actividades humanas, Entre elias, se encuentran las industrias metal mecanicas que liberan a la
atmosfera importantes cantidades de Ni, Zn, Cu, Fe, Pb, Mn y Cr, entre olros (laaksovirta and
Olkkonen, 1977; Nieboer and Richardson, 1981; Martin and Coughtrey, 1982; Beckwith el aI., 1985;
Garty et aI., 1988; Nriagu and Pacyna, 1988; Garty, 1993; 2001; Pignata et aI., 2004). Ademas,
estas emiten algunos contaminantes gaseosos producidos no s610 por la utilizaci6n de solvenles
organicos sino tambien por procesos de combusti6n (Garty et al.. , 2001). Dentro de estos, se puede
destacar el 50
2
, cuya presencia esta asociada al empleo de combustibles fosHes y por ende a
muchos procesos industriales e incluso emisiones vehiculares. En este sentido existen numerosos
antecedentes respecto a la detecci6n de niveles altos de awfre mediante el empleo de
biomonitores tanto en zonas industriales como en aquellas con alto transito vehicular (Garty et aI.,
1988; 1996; 2001; Halonen et aI., 1993; Showman and Long, 1992; Gonzalez. and Pignata, 1997;
1999; 2000).
En 10 que respecta a las actividades agricolas, las practicas actuales aplican agroqulmicos
de manera intensiva contribuyendo at deterioro de la atmosfera, ya que aportan compuestos t6xicos
y metales. Actualmente, debido a la utilizacion masiva de pesticidas y fertilizantes, cuya contribuci6n
a la poluci6n atmosferica es comparable a la producida par fuentes industriales (Chernyak et aI.,
1996; Huskes and Levsen, 1997; Jager et aI., 1998), el ingreso de metales pesados en la cadena
alimentaria del hombre se esta. incrementando, especialmente Cd, Pb, Ni, Cu, Fe, Zn y Hg (Haynes
and Johnson, 2000). La presencia de niveles elevados de Cu en puntos alejados a fuentes de
emision urbanas e industriales, podria relacionarse can practicas agrfcolas tales como el empleo de
pesticidas con altos contenidos de Cu. Elevadas concentraciones de Cu en zonas rurales fueron
informadas por Poelt and Huneck (1968), quienes detectaron niveles muy altos en Ifquenes
expuestos a un rociado frecuente can una mezda funguicida preparada can CUS04. Por otre lado,
Scerbo et al. (1999) observaron aJtas concentraciones de Zn en zonas cultivadas, 10 cual podrfa ser
atribuido al empleo de pesticidas que contienen este metal, ingresando el mismo al ecosistema
como residuo de agroquimicos. )
Otra importante fuente de emisi6n de contaminantes atmosfericos son los homos
incineradores de cadaveres (crematorios), los que aportan tanto metales pesados y elementos traza
como contaminantes gaseosos y particulados organicos aI ambiente. Dentro de los metales
pesados se incluyen Cd, Co, Cr, Cu, Hg, Mn, Ni, Pb, 5b, Sn, TI, V YZn (Cheng et aI., 2004), siendo
una de las mas importantes fuentes de emisi6n de Hg. Las temperaturas intensas de la cremaci6n
-44-
'iea
lara
ien
del
gey,
nlos
adas
I ala
and
985;
Imas,
entes
uede
r
~ a
rosos
'0 de
et aI.,
1997;
miceS
Jxicos
luci6n
et aI'.,
adena
laynes
tes de
~ o de
lueron
luenes
D lado,
Iria ser
,istema
homos
IS traza
netales
siendo
maci6n
Guia para el muestreo de Hquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
(600-700 gc 0 mayores) producen la volatilizaci6n del mercurio presente en las amalgamas
dentales, liberando una gran cantidad del mismo a la atmosfera (Hylander et aI., 2006). En 10 que
respecta a contaminantes gaseosos 0 particulados originados por esta fuente pueden mencionarse
oxidos de nitr6geno, 6xidos de azulre, hidrocarburos policfclicos aromaticos (PAHs), dioxinas
(PCDDs), dibenzofuranos (PCDFs) y bifenilos policlorados (PCBs) entre olros (Takeda et al., 2001;
Santarsiero et aI., 2005). A pesar del deterioro ambiental producido por las dioxinas y
dibenzofuranos y su potencial riesgo sabre la salud humana y animal, hasta el momenta son
escasos a nivel mundial los esludios de las emisiones de estos compuestos por parte de los
crematorios (Hutzinger and Fiedler, 1993; Federal Slates Pollution Control Comite, 1994; Eguchi et
aI., 1996). La mayor parte de las investigaciones estan focalizadas en la estimaci6n de los niveles
de dioxinas producidas por incineradores de residuos de origen industrial, manufactura de acero y
autom6viles (Hiraoka and Okajima, 1994). En esle contexto, los estudios de biomonitoreo de
dioxinas (PCDDs) y dibenzoluranos (PCDFs) empleetndo Iiquenes son mas escasos aDn
(Schuhmacher et aI., 1997; Schuhmacher et aI., 1998; Braune et aI., 1999; Augusto et aI., 2004).
En la provincia de C6rdoba estudios de biomonitoreo han demostrado que existen
importantes fuentes de emision de contaminantes que estan empobreciendo paulatinamente su
calidad atmosferica. Entre los biomonilores empleados en dichos esludios S8 encuentra Ramalina
ce/astri, especie muy sensible al electo de polutantes emitidos por transito vehicular (Levin and
Pignata, 1995; Gonzalez et al., 1996; 1998: 2003; Gonzalez and Pignata, 1999; Pignata et al., 2002;
2004). Tambien en este sentido se pueden mencionar a las espeqies Parmotrema conferendum y
P. austrosinense (Canas et aI., 1997) y P. uruguense (Canas and Pignata, 1998), Usnea
amb/yoclada (Carreras et aI., 1998: 2005; Carreras and Pignata, 2001; 2002), Punctelia microsticla
(Gonzalez et a\., 2003; Gonzalez and Pignata, 1994; 1997) Y Canomacu/ina pi/osa (Gonzalez et al.,
'2003; Gonzalez and Pignala, 1999). Cabe destacar, que la capacidad biomonitora de una especie
debe ser evaluada exhaustivamente, 10 que permitira estandarizar su respuesta (protocolos de
muestreo, tecnicas analiticas, regularidad, intensidad y sentido de variaci6n de los parametros
medidos como biomarcadores, fuenles de emisi6n asociadas a la respuesla, etc.} y validar su
aplicaci6n para ser empleada de manera rutinaria en la estimaci6n de \a calidad atmoslerica 0
realizar seguimientos temporales de la misma. Por este motivo, se pretende estimar la capacidad
biomonitora de R. ce/astri a luentes especfficas de emisi6n escasamente evaluadas hasta el
presente.
ObjetivQ General
Determinar el grado de sensibilidad de la respuesta qufmico-fisiol6gica de R, celastri
(lransplantada) a emisiones provenientes de industrias metal mecanicas, homos incineradores
(crematorio), y de la aplicaci6n de agroquimicos.
ObjetlvQs especificos
Comparar, para cada perfodo de transplante, la respuesta de R. celastri entre los sitios que
presentan las fuentes de emisi6n seleccionadas.
Evaluar la variaci6n temporal de la respuesta de A. ce/astrf transplantada en cada uno de
los sitios seleccionados. ........\
Detectar entre las fuentes de emisi6n evaluadas. aquella que produce mayor dano en el
biomonitor.
-45-
Guia para el muestreo de Ifquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
Materiales y metodos
Se tomaron muestras vegetaJes de una zona alejada de loda fuenle de contaminacion y una
vez removidas del sustrato, estas fueron colocadas en bolsas de malla de nylon y expuestas a la
acci6n de contaminantes atmosfericos (Gonzalez and' Pignata, 1994).
Se seleccionaron cuatro sitios de transplante, uno correspondiente a un ambiente urbano
(ausencia de industrias y transite vehicular medio-bajo) y tres representativos de otras fuentes
especfficas de emisi6n: industrias metal mecanicas, homo incinerador (crematoria) y un seclor
agricola de cultivo de soja. Transcurrido el periodo de exposicion (3, 6,9 Y 12 meses, consecutivas
y continuos) las muestras se recogieron, y posteriormenle fueron procesadas y conservadas a -15
ce en oseuridad en recipientes hermeticos.
Resultados (Bazzano y Gonzalez, 2006)
Este estudio apQrt6 informaci6n valiosa respecto al, impaclo sobre esta especie
biomonitora frente a fuentes escasamente evaluadas hasta el presente. En esle senlido, los
resultados muestran que entre las condiciones evaluadas, las presentes en el sitio agricola son
las que produjeron mayor dana en el bjomonitor, 10 que permite indicar que la especie es
sensible a los efeetos noeivos de la aplicaci6n de agroquimicos y olres conlaminantes derivados
del manejo agricola del cultivo de soja.
En cuanto ar efeclo de las emisiones provenientes de los homos incineradores de
cadaveres, puede indicarse que provoc6 respuestas de dano, relacionadas a procesos de
combustion, destacandose las respuestas de acumulaci6n asociadas a dano de membranas.
-46-
IV -0
c:r --
!" (II til l:\) CD l:\) -0
0. til_CD D:lC
0. 0. 0 CO 0 0 Q. Q)

CD CD til rn ::J til (l)
Gula para ef muestreo de ffquenes y plantas epffitas como biomonitores en LatJnoamerica
Tabla 3.10. Comparaci6n de valores medios desviaci6n estandar de azufre y hierro y resultados del analisis de la varianza entre silios y entre periodos
de eXQosici6n para}3amalina ceJastri Iransplanlada.
Industrial Crematorio Urbano Agricola ANQYA
(Medias + DE) (Medias DE) __(Medias DE) (Medias DE)
S
3meses 0.7172 0.0593 8 0.7267 0.0151 8 0.6539 0.0066 B 0.6522 0.0116 c n.s
6 meses 0.7393 0.0048 B b 0.7763 0.0022 B a 0.6868 0.0116 B c 0.7847 0.0044 8 a ***
9 meses 0.7482 0.0152 B b 0.7732 0.0357 B b 0.7396 0.0105 B b 0.8269 0.0394 Ba
..
12 meses 1.0830 0.0123 A a 1.0749 0.0321 A a 0.9328 0.0963 A b 1.1769 0.0775 Aa
..
ANOVA
Fe
(
*** H* .....
"**
3 meses 742.8252 112.9661 ab 816.1846 57.2973 8 a 659.6314 66.1387 B b 805.8179 17.7997 C a
..
6 meses 747.6210 84.2875 c 862.7182 84.7623 8 b 731.660017.1074 Be 1004.5987 67.2723 B a
...
9 meses 744.5104 82.7479 923.6529 307.391 0 B 733.5239 134.1 463 B 1070.3674212.1410 B n.s
12 meses 1122.9325 322.5692 c 1810.3623 98.4142 A a 1470.2053 89.4052 A b 1257.3888 34.4235 A ab
**
... ..
ANOVA n.S *
n.s, no significativo. * significativo a p < 0.05; ** significativo a p < 0.01 ; *** significativo a p < 0.001.
Comparaci6n de valores medlos (LSD): entre silios, letra minuscula; entre perlodos, lelra mayuscula.
-47-
Guia para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonftores en Latinoamerica
Tabla3.11. Comparaci6n devalores mediosdesviaci6n estandarde manganeso, cinee indice de Poluci6n yresultadosdelanalisis dela varianzaentre
sitlos yentreperiodosdeexposici6nparaRamalina celastri transplantada.
Industrial Crematorio Urbano Agricola ANQVA
(Medias DE) (Medias DE) (Medias DE) (Medias DE)
Mn
3meses 28.3339 1.0485 C 33.5842 4.4494 B 26.7670 3.7413 B 32.38758.3875 C n.S
6 s ~ 27.2969 4.1969 C 33.7289 5.3135 B 27.00003.0000 B 35.9937 2.9959 C n.s
...
9meses 37.50004.5000 B b 35.25001.0607 B b 28.48451.4935 B c 45.6457 3.2405 B a
......
12meses 44.2278 4.2142 A b 58.377210.4761A a 35.6199 3.7343 A c 60.72693.5195 A a
... .. ...
ANOVA
Zn
.....
3meses 43.88750.8323 B a 18.98770.0077 B c 20.26670.9651 B c 20.2453 0.9438 B be
/---
....
6meses 48.5329 0.4253 B a 22.1968 1.3648 B b 21.6506 1.0097 B b 20.6778 0.4192 B be
9meses 53.56191.4476 B a 24.01652.9333 B b 22.3658 0.4175 B b 21.9510 3.2906 B b
12mesas 120.231726.2460A a 32.2515 3.3895 A b 29.8574 4.4329 A b 29.84730.9539 A b
... H.
u.
ANQVA
IP
3meses 1.77780.0105 B b 1.81160.1512 B b 1.89180.1231 B b 2.1438 0.0503 B a
6meses 1.94940.1288 B 2.0641 0.2042 B 2.0106 0.1816 B 2.12120.1458 B n.s
9meses 1.34190.0960 C b 1.5667 0.2159 B b 1.63120.0780 B b 2.01380.1892 B a
12meses 3.1328 0.1704 A b 3.4802 0.2479 A b 3.1920 0.1272 A b 4.0362 0.3076 A a .-
H. .... ...
ANOVA
ri
Gula para el muestreo de Ilquenes y plantas epffJtas como broman/tares en Latlnoamer/ca
Respecto a la capacidad bioacumuladora de la especie, en ,relaci6n al tiempo de
aparicion de la respuesta asociada a las distintas condiciones, puede indicarse que esta es
mayor en relacion a Zn y Fe, ya que acumula estos elementos a partir de perfodos mas cortos
de exposici6n; mientras que para Mn y S esta es menor.
Cabe destacar que los patrones de variacion espacial (entre sitios dentro de un
perfodo) fueron similares para todos los perfodos de exposicion estudiados, mostrando
diferencias mas marcadas respecto a los parametros de acumulacion durante perfodos
prolongados, 10 que permite seiialar que cualquiera de los tiempos de exposicion estudiados se
podria emplear para evaluar el efeeto de condiciones similares a las consideradas en este
estudio y por ende la calidad del aire en las mismas.
En relaci6n con la variaci6n temporal, el biomonitor reflej6 que el tercer perfodo de
exposicion es el de mayor variabilidad en las respuestas quimico fisiologicas, mientras que el
ultimo periodo mostr6 la mayor variabilidad en las respuestas de acumulacion, como tambien
en el indice de dana global sobre los talos Iiquenicos, eiIP. Asi, este parametro mostro mayor
dana fuego del perfodo mas prolongado de exposici6n, reflejando que aun cuando la mayor
variabilidad en este perfodo corresponda a parametros de acumulaci6n y estos no
correlacionen con los valores del indice, este biomarcador maniHesta el efecto sinergico de los
polutanles sabre el biomonitor.
3.8. Respuesta de dos biomonltores Iiquenicos en relacion a deposiclon total atmosferica
en Cordoba Argentina
Los Iiquenes son extensamente utilizados como biomonitores de contaminaci6n
atmasferica de acuerdo a la sensibilidad que exhiben a los contaminantes presentes en el area a
estudiar. Asf, el usa de biomonilares liquenicos en ambientes urbanos, rurales e industriales yel
estudio de los mecanismos de sensibilidad/tolerancia a contaminantes gaseosos y metales han
sido objeto de numerosas investigaciones en los ultimos aiios (Garty, 2003). En este sentido las
especies Iiquenicas Ramalina celastri y Canomaculina pilosa, ampliamente distribuidas en la
provincia de C6rdoba, han sido empleadas para eslablecer niveles de polucion atmosferica en
diferentes sectores urbano industriales de la ciudad de Cordoba (Gonzalez et aI., 1996; 2003;
Gonzalez and Pignata, 1994; 1997; 1999; 2000; Levin and Pignata; 1995). Esto ha permitido
restablecerlas como biomonitores de fuentes especificas de poluci6n, pero no han sido evaluadas
en relaci6n a los niveles de deposici6n atmosferica total. La relacion existente entre las
respuestas de dana y los niveles de deposici6n atmosferica, permitiria emplear a la especie como
indicadora de esta condici6n asociada a fuenles especfficas y su potencial eleeto sobre la
poblaci6n
Objetivo General
Intercalibraci6n especffica en relaci6n a la deposici6n total en zonas can fuentes
especfficas de emisi6n.
Objetivos especfficos
Comparar la variacion espacial y temporal de las respuestas quimicas de R. celastri, y C.
pilosa transplantadas a sitios con fuentes especificas de emisi6n de contaminantes (transito;
industrias; trasnito e industria). \
Detectar patrones de respuesfa especificos en relaci6n a los niveles de deposici6n total
atmosferica de Fe, Mn y Zn.
Materiales y metodos
Guia para eJ mueslntO de IIquenes y plantas epffllas como biomonitores en Latinoamerica
Ejempfares de Rama/ina celastri (Spreng.) Krog & Swinsc. y Canomaculina pi/osa
(Stizenb.) Elix & Hale fue recolectado en un area correspondiente a la provincia fitogeografica del
Espinal (Cabrera, 1971) con influencia del Bosque Serrano (Luti, 1979).
Esta ubicada al noroeste de la ciudad de Cordoba, distante de la misma a 40 km
aproximadamente, es considerada "Iimpia" respecto de la poluci6n atmosferica y en ella las dos
especies son abundantes
EI material vegetal fue removido cuidadosamente del sustrato {corteza) y mezclado para
obtener homogeneidad. Cada unidad experimental fue preparada pesando 10 9 de! mismo y
luego colocado en bolsas de red de nylon. Posteriormente dichas bolsas fueron transpfantadas
simultaneamente durante dos perfodos de 3 meses (invierno; primavera) a 3 m de altura sabre
pastes y con exposici6n sur en los sitios seleccionados. Una vez finalizados los periodos de
exposici6n las muestras fueron analizadas segun 10 descripto en la Secci6n 3.1.
SimultB.neamente con la exposicion del material vegetal se calocaron en los sitios
seleccionados muestreadores pasivos de deposici6n t01al atmosferica
Resultados (Gonzalez et aI., 2007)
Las dos especies mostraron patranes de respuesta espedficos asociados tanto a las
fuentes de emisi6n como a la deposici6n atmosferica total, conlirmando que R. celastri se
comporta como biomonitor de emisiones provenientes principalmente de transito; mientras C.
pi/osa de las de industria aunque tambien mostr6 respuestas en relaci6n a transito. Aespecto a
la capacidad bioacumuladora los resultados indican que C. pilosa posee mas capacidad
acumuladora de Fe, Mn y Zn en relaci6n a los niveles presentes en la atmosfera, tambien para
R. celastri es posible sefialar 10 mismo respecto a S y en menor grado de Zn. Sin embargo,
esta capacidad en ambas especies deberia ser estudiada durante perfodos mas prolongados.
-50-
sa
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y

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de
lias
-j se
F. C.
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para
argo,
os.
Gula para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
Figura3.3. Diagramadeordenaci6n obtenidoapartirde losdosprimeroscomponentesdepeA
empleando lasvariables liquenicasydedeposici6n total atmosferica
R. celastri
Mn
Feo-aiCI-a
S
1,16
Zn dep
MOA
C
P -0,53
Zn
-2,22
HPDC
-3,91 ..........---__----_----_.....----__
-2,64 -0,92 0,80 2,52 4,24
CP1
C.pilosa
3,63
Mn dep
Fe dep
1,95
MDA
S
c
P 0,27

Feo-aiCI-a
-1,41
- 3,09 ,..,----------------.......----...
-3,22 -1,64 -0,06 1,52 3,10
CP 1
Conclusiones Generales
Ramalina celastri (Spreng.) Krog & Swinsc., Punctelia microsticta (Mull. Arg.) Krog y
Canomaculina pi/asa (Stizenb.) Elix & Hale mostraron, como respuestas quimicas a polutantes
atmosf(ricos, variaciones caracterrsticas en algunos de los parametros qufmicos; par 10 cual
pueden serempleadoscuandoseutilicealas comobioindicadoras.
EI conjunto de parametros qurmicos que modificaron como respuesta a polutantes
atmasfericas y las condiciones ambientales asociadas a ellos fueron particulares para cada
especie; entonees, puede concluirse que cada una de elias muestra un patron de respuesta
especfficofrenteadistintostiposdepoluci6n atmos/erica.
Entre los parametros determinados, s610 el Indice de Poluci6n mostr6 el mismo sentido
devariaci6nenlastres especies, indicandodanaglobalprovocadaparpolutantes.
-51-
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Guia para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
Figura3.3. Diagramadeordenaci6nobtenidoa partirdelosdosprimeroscomponentesdePCA
empleando lasvariablesIiquenicasy dedeposici6ntotal atmosferica
R. celastri
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C.pilosa
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-1,41
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1,52 3,10
CP 1
Conclusiones Generales
Ramalina celastri (Spreng.) Krog & Swinsc., Punctelia microsticta (Mull. Arg.) Krog y
Canomaculina pilosa (Stizenb.) Elix & Hale mostraron, como respuestas quimicas a polutantes
atmQsfericos, variaciones caracteristicas en algunos de los parametras qufmicos; par 10 cual
puedenserempleadascuandoseutilicealasm i s ~ comobioindicadoras.
EI conjunto de parametros qufmicos que se modificaron como respuesta a polutantes
atmosfericos y las condiciones ambientales asociadas a elias fueron particulares para cada
especie; entonees, puede concluirse que cada una de elias muestra un patr6n de respuesta
especfficofrenteadistintostipasdepoluci6n atmosft3rica.
Entre los parametros determinadas, s610 el Indice de Poluci6n mostro el mismo sentida
devariaci6nen lastres especies, indicandodanaglobal provocadoparpolutantes.
-51-
Gufaparaelmuestreodeliquenesy plantasepifitascomob/omonitoresenLatinoamerica
Los resultados aportados respeeto al electo del transplante y el de los polutantes
confirman la necesidad de: i) contar can sitios internos de biomonitoreo, en los en cuales la
incidencia de las fuente de emisi6n sea minima, ii) madir simultaneamente varios parametros
como respuestas indicadoras de dana y iii) estabfecer alguna expresi6n matematica, como el
IndicedePoluci6n,quepermitaponderarlarespuestadelbioindicadorapoluci6n atmosfenca.
Si bien las tres especies son bioindicadoras de poluci6n atmosferica, debido a fa
regularidad de las respuestas quimicas asociadas a las distintas fuenles de emisi6n y sus
senlidos de variaci6n, se puede alirmar que R. cefastri y P. microsticta se comportan como
biomonitoresdepoluci6n atmosferica.
En relaci6n a la respuesta qufmic8.y las condiciones ambientales evaluadas es posible
afirmarque:
R. celastries una especie sensible a polutantes emitidos portransito vehicular0 fuentes
similares, por 10 tanto es la especie mas apropiada para biomonitoreo de la calidad del
aireen ambientesurbanos.
P. microstictaesunaespeciesensible apolutantes emitidos porindustrias,por10 cua!es
laespecie recomendadaparabiomonitoreodeestetipodepoluci6n.
C. pilosa es una especie mas tolerante a polutantes emitidos por transito vehicular e
industrias, ya que cuando se evalu6 su respuesta a diferentes fuentes de manera
simultanea, respondi6 principalmente a las emisiones de industrias presentes en el sitio
de transplante. Por esle motivo, es adecuadaparareaJizar seguimientos temporales de
poluci6n atmosfMca0 comobioindicadorde para periodosprolongadosde
exposici6n.
De acuerdo a las respuestas de dane, es posible establecer entre las especies
estudiadasgradosdesensibilidaddiferencial alapoluci6n atmosferica. Asi,en ordencrecientede
sensibilidad C, pilosa< P. microsticta< R. celastri
EI empleo de estas especies liquenicas como bioindicadoras de contaminaci6n
atmosferica debera realizarse siempre de manera mesurada. ASI, la necesidad de evaluar fa
calidad atmosferica a fin de protejer el recurso aire, no deberia ir en detrimento de otro recurso
naturalcomo10 es lacomunidadIiquenica.
3.9. RamalinacelastrJ(Spreng.) Krog& Swinsc. como biomonltordeladeposicionaerea
dealgunosmetalespesadosenla ProvinciadeCordoba, Argentina.
Objetivo
Determinar en talos liquenicos de Ramalina celas!ri (Spreng.) Krog & Swinsc.,
recolectados en 29 sitios de la Provincia de C6rdoba, el contenido de cobalto, cobre, hierro,
manganeso, niquel,plomoyzinc,analizandosuvariaci6nespacial.
Materlalesy metodos
EI area de esudio, ubicada en el centro de la Republica Argentina, comprendi6 un
cuadrilatero cuyos puntos extremos tuvieron las siguientes coordenadas: a) 31 0 25'21" S, 65
0
24' 0; b) 31
0
41'15" S, 62
0
38'34" 0; c) 30
0
36'S, 64
0
15'0;d) 32
0
48'S, 64
0
10'12"O. La
mismacomprendi6 una superficie de 50,000 km
2
(Figura 3.4.). Geomorfologicamente, el area
puede dividirse en una zona serrana al Oeste, can una altitud que va de los 500 a los 3000
m.S.n.m. aproximadament-e, y otra Iiana al Este, desde aproximadamente los 64
g
0, can una
pendientede0 aE, can unaaltitudquevadelos100alos 500 m.s.n.m.
-52-
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2" O. La
I, el area
los 3000
can una
Gula para el muestreo de Hquenes y plantas eplfitas como biomonitores en Latinoamerica
EI principal centro urbano en el area de muestreo es la ciudad de C6rdoba, la cual tiene una
poblaci6n de 1.368.301 habitantes (segun el Censo Nacional, 2001); es el, centro comercial e
industrial de la provincia y posee terminales automotrices, industrias autopartistas,
metalmecanicas y alimenticias. En su area metropolitana tambien posee industrias cementeras.
Desde el punto de vista fitogeografico, el area de estudio comprende las siguientes
regiones: provincia Chaquena (Chaco occidental y Chaco oriental), provincia del Espinal y
Estepa Pampeana (Cabrera, 1971).
EI area fue dividida segun una grilla en cuadriculas de 25 x 25 km, colectandose
muestras de R. cefastri en 29 puntos de muestreo. Estas se tomaron al menos a 500 m de
distancia de rutas principales y areas densamente pobladas y al menos a 300 m de calles can
menor intensidad de transito.
-66
2
-65
2
-64
2
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Figura 3.4. Localizaci6n del area de studio y los puntos de muestreo en C6rdoba,
Argentina.
-53-
Guia para ef muestreo de liquenes y plantas epifitas como blomonitores en Latlnoamerica
Diseno Experimental
En los 29 silios de muestreo se colectaron talos liquEmicos correspondientes a 40-50
individuos, tomados ar azar, los que constituyeran el "pool" inicial. Para cada muestra se
removi6 el material adherido a ella y se eo/aearon en balsas de papel. Se utilizaron guantes
descartables durante la recalecci6n para evitar cualquier contaminaci6n de las mismas.
Antes de realizar el muestrea se tuvo en cuenta que no hubiera habida precipilaciones
al menos con cinco dlas de anterioridad y en los casas en que se tomaron muestras en
presencia de lIovizna, despues de la lIegada de las mismas al laboratorio, se dejaron seear
sabre papel de filtro en un ambiente ais(ado, sin corrientes de aire y a temperatura ambiente
durante 24-48 horas.
Para representar cada punta de muestreo se prepararon "pooles" mezclando vaTios'
ejemplares colectados en las cuatro direcciones cardinales dentro de eada sitio y a una
distaneia no mayor de 100 m desde el punta referenciado geograficamente. Siempre que fue
posible se eoleetaron del mismo tipo de soporte. De cada muestra se prepararon tres
submuestras, las que fueron analizadas independientemente.
Tratamlento de las mueslras prevlo a la cuantificacion de metales
Las muestras, canservadas a temperatura ambiente, fueron lavadas con agua
bidestilada en una relacion 1:50 P/V para eliminar restas de material particulado deposilado
sobre las mismas. Una vez lavadas, se colocaron en una capsula de Petri y se lIevaron a estufa
a 50 2 "C para su secado durante 24 hs. Luega, homogeneizaron can una picadora
electrica, hasta reducirlas a pequenas partfculas. Una vez homogeneizadas se volvieron a
coloear en fa estufa hasta alcanzar peso constante.
Posteriormente, se realiz6 la cuantlficaci6n de metales segun Gonzalez y Pignata
(1994). De aeuerdo a esta tecnica se pesaron 2 9 de cada muestra los que se colocaron en un
criso! de porcelana y se lIevaron a mulla a 50Q2C por 45 minutos. Las cenizas obtenidas fueron
digeridas usando una mezela de 25 mL de aeido c1orhfdrico al 18% V/V y 5 mL de acido nftrico
concentrado. EI residuo solido fue eliminado por centrifugado. El sobrenadante se lIev6 a 50
mL con agua Milli Q.
Determinacion de metales
Las concenlraciones de Co, Cu, Fe, Ni, Mn, Pb y Zn se midieron con un especlrometro
de absorcion atomica Buck 210-VGP, usando una llama de aire/acetileno. Las concentraeiones
de cada metal se calcularon en base a peso seeD y se compararon con material de referencia
certifieado IAEAlV10 HAY (International Atomic Energy Agency, 1985).
An8tisis estadistico
Los datos fueron analizados estadisticamente por Anava y se realizo Antllisis de
Correlacion (Pearson) entre los valores de concentracion de los metales. A fin de contar con un
sistema de registro adecuado, en cada punta de muestreo se tomaron las coordenadas
geograficas mediante un geoposicionador satelital (GPS). Esto permiti6 su ubicaci6n posterior
en un mapa del sector, en el cual se incorporaron los datos de composici6n elemental
correspondientes a cada sitio.
-54-
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Guia para el ml,Jestreo de liquenes y plantas epifltas como biomonitores en Latinoamerlca
ResuJtados (Pigf'lata et aI., 2004)
Los valores medias de concentraci6n y el desvio estandar para Cll, Zn, Pb, CQ, Ni, Mn
y Fe en muestras de R. celastri colectada en los 29 sitios; y el coeficiente de variaci6n de
concentracion de cada elemento se presentan en tas Tablas 3.12 y 3.13,
Cu Zn Pb Co
__ JIl9/g PS) ~ g g PS) (Ilg/g PS) (1l9/g PS)
Media. 6,767 4,090 20,603 17,75 0,957 0,133 0,066 0,01
to.S
C.V. 0,6043 0,8619 0,1397 0,1505
Tabla 3.12. Niveles medios de Cu, Zn, Pb y Co (1l9/g I?S) en R. celas!r; colectada en 29 sitios
de la provincia de C6rdoba, Argentina. Las muestras rueron procesadas por triplicado para
cada sitio.
Ni Mn Fe
(1l9/g PS) ~ g g PS) (Ilg/g PS)
Media. 2,214 0,373 53,999 13,33 171,507 87,57
O.S
C.V. 0,1686 0,247 0,5106
Tabla 3.13. Niveles medias de Ni, Mn y Fe (1l9/9 PS) en R. celastri colectada en 29 sitios de la
provincia de Cordoba, Argentina. Las muestras fueron procesadas por triplicado para cada
sitio.
EI elemento can mayor concentraci6n en R. celastri fue hierro, seguido en forma
decreciente par manganeso, zinc, cobre, niquel, plomo y cobalto. Esle orden decreciente en la
concentraci6n de los siete metales es coincidente, excepto para nfquel y plomo, can el orden
de los valores mfnimos para Noruega encontrado por Steinnes et al. (1992), utilizando el
musgo Hylocomium splendens, y el citado por Bennett (1999) a partir de una revision que
aoarc6 75 estudjos independientes empleando el liquen Hypogymnia physodes. Para los
valores maximos en la concentraci6n de estos elementos no se observa concordancia entre los
dos autores citados. Sin embargo, nuestros datos se corresponden con los mencionados par
Steinnes et al. (1992), excepto para cobre y plom0, los que aparecen en orden inverso.
La Tabla 3.14 campara los rangos de valores obtenidos par Steinnes et al. (1992) y por
Bennett (1999) can los obtenidos en para R. celastri en el presente trabajo. Los mismos
muestran que los rangos de valores para los siete elementos obtenidos con R. celastri son
relativamente bajos. Esto podrfa relacionarse par un lado can menores niveles ambientales de
estos metales en nuestra regi6n, pera por otro can las caracterfsticas de la especie que podrfa
presentar menor capacidad bioacumuladora. Otro factor que puede tener incidencia es el
metoda de preparaci6n de las muestras previo al anaJisis, ya que en este trabajo el
procedimiento del lavado previa permite decir que s610 se midieron los metales bioacumulados
en el tala liquenico.
-55-
Gula para el muestreo de IIquenes y plantas epffitas como biomonitores en Latinoamerica
Elemento H.splendens H. physodes R. cefastri
Fe
Mn
Zn
Cu
Pb
Ni
Co
110 - 7350
22 - 1240
12 - 241
1,3 - 82
1 - 181
<0,5 - 88
0,03 - 3,7
114-21410
13 - 693
7 - 5621
0,8 - 199,6
0,05 - 1034
0,00 -150
sin datos
62 - 513
26,3 - 80,7
2,4 - 75,4
2,516.9
0,8 - 1,2
1,6 - 3,2
0,051 - 0,084
Tabla 3.14. Comparaci6n entre los rangos de variaci6n para Fe, Mn, Zn, Cu, Pb, Ni y Co
obtenidos por Steinnes et al. (1992) en el musgo Hylocomium splendens en Noruega; el
encontrado en 75 estudios par Bennett (1999), uti lizando el Iiquen Hypogymnia physodes; y los
obtenidos para R. celastri en C6rdoba, Argentina. Valores expresados en ppm.
En cuanto a los coeticientes de variaci6n de concentraci6n de cada elemento para el
total de sitios en que recolect6 R. celastri, los mismos se muestran bajos para plomo (0,140),
.cobalto (0,150), nlquel (0,169) Y manganeso (O,247). No ocurre 10 mismo con hierro (0,511),
cobre (0,604) y zinc (O,862), en donde los mayores coeficientes indican una mayor variabitidad
de los datos, la cual esla relacionada con la presencia de fuentes de emisi6n de dichos
elementos a con el aporte diferencial nalural segun el area.
En relaci6n a la distribuci6n espacial para los niveles de los distintos elementos, se
realizaron mapas que describen la misma. En el casa de coballo 'se detectaron los mayores
niveles hacia el O. exlendie'mdose al NO. Para cobre (Figura 3.5.), se observaron los niveles
mayores al SE, con olra area de niveles elevados a( Centro - Oeste. Hierro mostro niveles
elevados hacia el Centro - Sur, con cierta similitud a manganeso. En cuanto a niquet (Figura
3.6.), los mayores niveles de concentraci6n correspondieron al Sur y Centro. coincidiendo con
la ubicaci6n de la ciudades de Cordoba y RIo Tercero, esta ultima can una importanle actividad
industrial (qiuimicas y petroquimicas). Los mayores niveles encontrados para plamo
correspondieron al Norte y Oesle, con una zona central de niveles relalivamenle menores.
Finalmenle, los mayores niveles de zinc coarrespondieron a las zonas Centro y Sur. EI
coeficiente de variaci6n para este elemento fue de 0,519, valor que se interpreta coma elevado.
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Figura 3.5. Mapa de distribuci6n de Cu Figura 3.6. Mapa de distribuci6n de Ni
g'1 PS) medido en R. celastri. {119 g-1 PS} medido en R. celastri.
-56-
Gula para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
A partir del anal isis de correlaci6n entre los siete metales para los 29 sitios en que se
colect6 R. cefastrj (Tabla V), se encontr6, con un grada de significaci6n p < 0,05, una
correlaci6n significativa y pasitiva entre Cu y Pb; Cu y Co; Co y Ni; Co y Mn; Co y Fe; Mr\ y Fe;
mientras que Pb yMn correlacionaron en forma inversa.
Cu Zn Pb Co Ni Mn Fe
Cu 1,00
Zn 0,16 1,00
Pb 0,65 0,08 1,00
Co 0,37 - 0,15 - 0,01 1,00
Ni 0,25 0,04 0,02 0,37 1,00
Mn 0,04 - 0,13 0,36 0,58 0,15 1,00
Fe - 0,04 - 0,17 - 0,28 0,34 0,28 0,69 1,00
Tabla 3.15. Coeficientes de correlaci6n entre Cu, Zn, Pb, Co, Ni, Mn y
Fe para los 29 sltios en que se muestre6 R. cefastri. En negrita, se
indican los coeficientes de correlaci6n significativos con un grado de
significaci6n p < 0,05.
EI anal isis de correlaci6n entre metales muestra que Fe, Mn y Co probablemente
tengan un mismo origen. Sieinnes et al. (1992) citan que Fe y Mn provienen mayoritariamente
del suelo; mientras que Co liene principaimente origen minero local y en menor medida el
suelo', as! como el transporte lejano. Las correlaciones existentes entre Co, Fe y Mn podrfan
ser explicadas si se considera como principal fuente de los tres, a partrculas de suelo
transporladas por el vieo!o, ya que en los tres casas el valor medio mas bajo corresponde
significativamente a la zona montanosa, can menor erosi6n e6llca.
Zn no mostr6 correlaciones significativas can el reslo de los elementos analizados
cuando se consider6 la totalidad de los sitios. Sin embargo, cuando se analizaron las muestras
lomadas en soporte arb6reo, Zn mostro correlaci6n significaliva e inversa con Fe, 10 que
probablemente indica que el aporte de Zn no proviene de material particulado cuyo origen es
suelo.
Una explicaci6n distinta corresponderfa a Pb, ya que su nivel fue significativamente
mas alto en la zona serrana. Esto puede deberse a la presencia de minerales con Pb en esta
regi6n, ya que las rocas graniticas conlienen dicho elemento (Rankama and Sahama, 1949). A
su vez, correlacion6 en forma inversa con Mn.
En relaci6n aNi, es interesante notar que un sector con niveles altos de Ni corresponde
a la ubicaci6n de la ciudad de Cordoba. Markert (1996) cita que las alias concentraciones de
este elemento reflejan la posible rnfluencia del consumo de combustibles f6siles y la presencia
de plantas de generaci6n de energfa electrica e industrias melalurgicas. Nuestros resultados
explicarfan los elevados niveles encontrados en esla zona, as! como los hallados hacia el sur
del area de mueslreo, los que podrfan deberse a la influencia de polutantes originados por las
industrias qurmicas y petroqurmicas ubicadas en la ciudad de Rio Tercero, en el Sur del area
de estudio.
No se observaron diferencias significativas entre zonas para Cu, las mayores
concentraciones se detectaron en el Oeste 10 cual podrla relacionarse can la composici6n de
rocas graniticas, tal como citan Rankama y Sahama (1949). Sin embargo, en la zona Sur -
-57-
Gula para el muestreo de Jiquenes y plantas epifltas como biomonltores en Latinoamerica
Este, los elevados niveles de este elemenlo podrian eslar relacionados con el empleo de
peslicidas.
3.10. Evaluaclon delliquen Usnea amb/yoc/ada (Mull. Arg.) Zahlbr. como biomonitor de la
cali dad atmosferica en un sector de la provincia de Cordoba, Argentina
En los estudios de biomonitoreo liene gran importancia conocer los niveles de
referencia 0 iniciales de contaminantes dentro del ecosistema para poder evaluar el eslado de
conservaci6n a degradaci6n, predecir la incidencia de futuras aclividades humanas 0 controlar
su evoluci6n durante un periodo de liempo determinado. Debido a que los Ifquenes acumulan
metales pesados de manera continua, a partir de deposiei6n seca y humeda, conocer sus lasas
de acurnulaci6n y los factores que influyen sobre elias permile relacionar las concentraciones
de un determinado contaminante en el biomonilor con sus niveles ambientales (Nieboer and
Richardson, 1981). La posi bi lidad de utiJizar la respuesta de acumulaci6n de metales y
elementos traza en liquenes en estudios a campo depende de las concentraciones iniciales en
los talos, de su estado fisiol6gico, de la sensibilidad de cada especie, de los niveles de
contaminantes en la atm6sfera y de su naturaleza qufmica. Teniendo en euenta estas
premisas, se analizaron los niveles de algunos metales pesados acumulados en talos de
Usnea amb/yoc/ada (Mull. Arg.) Zahlbr. transplantados a un sector de la provincia de C6rdoba,
as! como parametros fisiol6gicos indicadores de dano Iiquenico provocado par contaminanles
Sa emple6 el analisis factorial para idenlifiear posibles fuentes, su contribuci6n y
localizaci6n.
Objetivo general
Evaluar la capacidad de bioacumulaci6n de algunos metales pesados y la respuesta
fisiol6gica de Usnea amb/yoclada (Mull. Arg.) Zahlbr frente a contaminantes atmosfericos.
Objetivos especificos
Evaluar la variaci6n espacial en la distribuci6n de algunos iones metalicos en un seclor
de la provincia de C6rdoba a partir del analisis de la concentraci6n de estos iones en lalos
Jiquenicos.
Relacionar la respuesta qufmico-fisiol6gica del liquen U. amb/yoc/ada a contaminantes
con la concentracion de iones metalicos acumulados en ellos.
Inferir la localizaci6n e importancia relativa de las principales fuentes de emisi6n en e!
area de estudio.
Comprobar la utilidad de un indica de Contaminaci6n, definido para la especie U.
amb/yoclada, en el biomonitoreo de la calidad del aire en extensas areas geograficas.
Materlales y MetodO$
Para la eleccj6n del area de estudio se tuvo en cuenta la ubicaci6n de las fuenles fijas
de emisi6n mas importantes (por su magnitud 0 por el tipo y cantidad de contaminantes
particulados que se emiten a la atm6sfera) y la distribuci6n de fuentes m6viles (transito),
evaluadas en funcion de cantidad, tipo y frecuencia de vehiculos. EI area de estudio
comprendi6 un cuadrilalero ubicado en la zona centro de la provincia de Cordoba, con una
superficie de 400 km
2
(Fig. 3.7). EI c1ima de la regi6n es sub-humedo con tendencia a
semiarido, can un porcentaje anual de precipitaciones de 790 mm, concentradas
principalmente en verano. La temperatura media anual es de 17.4 gc y los vientos
-58-
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Gufa para el muestreo de liquenes y plantas epffitas como biomonitores en Latinoamerica
predominanles son del NE y SE. La vegetaci6n nativa corresponde a la Provincia
Fitogeografica del Espinal, la Provincia Chaquena (Chaco occidental y Chaco oriental) y ,Ia
Estepa Pampeana (Cabrera, 197,6). Los elementos dominantes pertenecen al genera Prosopis,
aunque las practicas forestales y agrQnomicas han dejado s610 pequenas islas de formaci6n
forestal. Debido a la actividad antrppica, en las zonas pobladas la vegetaci6n natural ha sido
practicamente eliminada y reemplazada por especies ex6ticas, principalmente de los generos
FrExinus, Ligustrum, Melia, Ulmus, Platanus, Populus, Acer, etc, Existen ademas ejemplares de
algunos generos nativos de otras unidades fitogeogrcificas como Jacaranda, Tabebuia y
Prosopis.
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Figura 3.7. Puntas de muestreo y ubicaci6n de las principales fuentes de emisi6n en
el sector central de la Provincia de Cordoba, Argentina, 1997.
areas industriales; ilIMi. areas urbanas).
En esta z.ona se identificaron ademas plantas generadoras de electricidad e
industriales. principalmente metalurgicas, petroqufmicas, qufmicas. aceiteras, alimentarias y
cementeras, que eSIan localizadas en el centro y sur donde existe la mayor densidad
poblacional. La zona de estudio incluye ala ciudad de C6rdoba, ubicada a 31 "24'S Y6411' Ya
440 m s.n.m., con una poblacion de 1.284.582 habitantes (segun el Censo Nacional, 2001).
Posee asentamientos industriales de distinta magnitud y obviamente arterias de transito
vehicular can distintas densidades de circulaci6n. Es la segunda ciudad en importancia de
Argentina y una de las mas contaminadas del pais (Pignata et aI., 2000). Stein y Toselli (1996)
senalan que la poluci6n es importante sabre todo durante el perfodo invernal
debido a la ocurrencia de fuertes inversiones termicas, que favorecen la permanencia de
polutantes primarios en la atmosfera.
los puntos de muestreo (30) estuvieron distribuidos uniformemente, mediante el
trazado de una grilla can cuadrfculas de 10 x 10 km en el sector. Dichos puntos se localizaron
al menos a 500 m de distancia de rutas principales y areas densamente pobladas y al menos a
300 m de calles can menor intensidad de transito (Berg et aI., 1995). Ademas, cada uno de
estos sitios fue categorizado teniendo en cuenta las fuentes de emisi6n fiias (industriales) y
m6viles que predominaban en el sector, asf como la distancia respecto al microcentro de la

Guia para el muestreo de Ifquenes y plantas epifltas como blomonitores en Latlnoamerica
ciudad de Cordoba. Debido a la perdida de algunas muestras transplantadas, finalmenle se
recolectaron las correspondientes a 24 puntos de muestreo.
Material vegetal
Para la presente investigaci6n se emple6 la especie Usnea amblyoclada (MOIL Arg.)
Zahlbr. (Clase Ascomycetes, Subclase Ascamycetidae, Orden Lecanocarales, Familia
Usneaceae). Estos Ifquenes presentan talas fruticosos, radiales con un cordon axial y se
sujetan al sustrato mediante rizoides. Los apotecios son redondos, terminales 0 laterales y el
ficobionte pertenece al genero Trebouxia (Marcano, 1994). Esta especie se seleccion6 debido
a su amplia distribuci6n geografica en la provincia de C6rdoba. Es un liquen sax feola, can
eslruetura fruticosa, 10 cual facilita su separaci6n del sustrato. Debido a que es muy abundante
en los sitios donde esta presente, su recolecci6n no altera significativamente la poblaci6n de
Ifquenes. Esta especie ha sido empleada previamente en estudios de monitoreo (Carreras et
aI., 1998; Carreras and Pignata, 2001).
Procedimienlo de recoleccion
Los talos liquenicos fijados sobre sustrato rocoso fueron recolectados en fa zona de
Cerro Blanco, Los Gigantes, sabre el laldeo oriental de las Sierras Grandes (1200 m s.n.m.), a
100 km al N de la ciudad de Cordoba. Se puso especial atenci6n en recolectar material
aproximadamente del mismo tamaflO y en similares condiciones de exposici6n (orientaci6n
sur). De esta manera se intentaron minimizar las diferencias f,isiol6gicas, etareas, etc. en el
material basal inicial.
Metodo de transplante
A lin de evaluar la capacidad biomonitora de U. amblyocfada se emple6 la tecnica de
transplante descripla par Gonzalez y Pignata (1994). EI materialliquenico lue recolectado en
un area alejada de cualquier fuente de contaminaci6n. En el laboratorio. los Hquenes fueron
cuidadosamente limpiados y separados de la porci6n basal del tala para evitar contaminaci6n
por partfculas del sustrato. Las muestras fueron conservadas en bolsas de papel a temperatura
ambiente hasta su preparaci6n para el transplante. Cada unidad experimental lue preparada
pesando 12 9 de liquen y colocandolos en balsas de red de nylon de 20 x 20 cm, con una
abertura de maUa de 1 x 1.5 mm, 10 cual permite una exposici6n adecuada de los talos a la
atm6sfera circundante. Posteriormente las balsas fueron transplanladas a 2 m de altura sabre
pastes de madera yean exposici6n sur en cada uno de los sitios de muestreo. En cada uno de
los puntos de muestreo se colocaron tres unidades experimentales distanciadas 50 m
aproximadamente entre sl, a fin de contar can datos representativos del punta de muestreo y
no de alguna situaci6n local. Los Ifquenes estuvieron expuestos durante 3 meses, desde Marzo
a Mayo del ano 1997.
La tecnica empleada para el transplante del material liquenica difiere de otras, en las
cuales se emplea transplante con sustrato (Garty et aI., 1993) u otro5 metodos (McCune et aI.,
1996). Aunque el transplante can sustrato liene la ventaja de que el liquen no suIre el estres
causado por la falta del mismo, tiene el inconveniente de que junto con las especies
estudiadas, otras especies que crecen can elias son eliminadas del sitio de recalecci6n. Mas
aun, las especies arboreas son daiiadas y deben utilizarse muestras liquenicas de mayor
tamana para garantizar que scan representativas de la poblacion original (Pignata, 1998).
-60-
Gula para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonltores en Latinoamerica
La mayorfa de los estudios realizados por otros grupos de investigaci6n que tambiEln
utilizan la tecnica de transplante para el biomonitoreo de la calidad atmoslerica emplearon
periodos de exposiei6n demasiado prolongados a lin de deleetar eambios en la eomposici6n
elemental de los talos liquenicos. Algunas investigaciones emplearon 214 dias (Pilegaard,
1979), 240 dias (Garty and Fuchs, 1982), 300 dias (Garty et at., 1993) y 1 ana (Garty, 1987;
Kardish et aI., 1987). No obstante, para monitorear efeetos de contaminantes gaseosos
resultan mas adecuados cortos tiempos de exposici6n (Garty et aI., 1996). Gailey and Lloyd
(1986) evaluaron los efectos del tiempo de exposici6n sobre la concentraci6n de metales
acumulados en Ifquenes y teniendo en cuenta la posibilidad de reproducci6n de los resultados,
estos autores conctuyen que deberian ser empleadas exposiciones de 8-9 semanas de
duracion en esludios de biomonitoreo activo.
Tratamiento previa de las muestras
Transcurrido el tiempo de exposici6n, tanto "el material transplantado como parte del
material proveniente del sitio de recolecci6n lue triturado en un molinillo can cuchil!as de acero
inoxidable hasta un tamaRa de 0.5 a 2 mm para obtener homogeneidad. Las muestras lueron
conservadas en balsas hermeticas a - 15 QC en oscuridad hasla su posterior amilisis.
Medici6n de metales pesados
Para el analisis de metales pesados, 2 9 de material liquenico seco (PS) fue reducido a
cenizas a 450 QC durante 1 h. Luego estas fueron digeridas CQn una mezcla acida de HCI 18 %
VN Y HN0
3
concentrado (25:5 par voL) (pfeiffer and Barclay-Estrup, 1992). EI residua s61ido
lue eliminado por centrifugaci6n y la soluci6n resullante fue diluida can agua ultrapura (milli Q)
hasta un volumen final de 50 mL. EI contenido de Co, Cu, Fe. Pb, Ni Y Zn fue analizado en un
espectrofot6metro de absorci6n at6mica Buck 210-VGP, can llama de aire/acetileno y
correcci6n de background para deuterio. La precisi6n del analisis fue estimada mediante la
desviacion estandar relativa de cuatro replicados, siendo del 5-10 % para los elementos
estudiados. EI control de calidad de los resultados obtenidos por este metoda se realiz6
mediante el analisis regular (cada 10 muestras) de material de referencia certificado IAEAJV
Hay Powder, preparado can la misma metodologfa que las muestras. Estas determinaciones se
emplearon ademas para referir los datos de concentraci6n obtenidos, a fin de compensar la
perdida de metales ocurrida durante la manipulaci6n y procesamiento de las muestras. EI
calculo de concentraci6n se realizo sobre la base de peso fresco y para la conversi6n se
emple6 la relaci6n Peso seeo/Peso fresco (PS/PF) calculada para cada una de las muestras.
Analisis estadistico
Los ana.lisis estadfsticos se realizaron con el valor medio de las determinaeiones de
tres muestras independientes en cada sitio de muestreo. Con los elementos acumulados en los
talos liquenicos, se realiz6 un analisis de la varianza (ANOVA) entre los diferentes puntas de
muestro. Cuando se detectaran dilerencias signilicativas entre puntas de muestreo a un nivel
0.05 se empleo el test LSD (Least Significant Difference). Ademas se realiz6 un analisis de
cluster para explorar las interrelaciones entre los metales acumulados en los talos liquenicos.
Los supuestos de homogeneidad de varianzas y distribucion normal de los errores
fueron evaluados mediante metodos graticos (residuales vs. predichos, box-plots, steam and
leal plots). Los analisis estadfsticos se realizaron mediante el software Statistica (Versi6n 4.2,
1993).
-61-
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Gula para eJ muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
-62-
La distribuci6n geografica de las concet1traciones estandarizadas de los elementos
analizados en los Hquenes y los valores det Ie fueron representadas mediante un programa de
mapeo (Surfer Mapping System. Golden Software, 1993-94). Este programa transforma los
datos discretos efl un modelo de distribuci6n continua, mediante Kriging (autocorrelacion de
los valores correspondientes a los puntos de mues1reo mas cercanos que estima la varianza
de los cuadrados mfnimos) como algoritma de interpolaci6n (Olea, 1974). La influencia de un
punta de muestreo sabre los otros es por 10 tanto. inversamente proporcionaJ al cuadrado de
sus distancias.
Figura 3.8. Distribuci6n geogratica de Ni, Pb, Azufre (S) y Zn medidos en talos de Usnea
amb/yoclada transplantada en 24 puntos de la provincia de C6rdoba, Argentina.
Resultados y Conclusiones (Carreras and Pigna1a, 2002)
Se observo una elevada variabilidad local en los parametros fisiol6gicos cuantificados.
EI Indice de Poluci6n (PI) calculado por combinaci6n de parametros fisiol6gicos, as!
como los niveles de metales pesados y azufre acumulados en Usnea amb/yoclada permitieron
discriminar zonas can diferenles niveles de calidad atmosferica en el area de estudio Figura
3.8).
Los niveles de elementos acumulados en los talos fueron bajos en relaci6n a los de
estudios de biomonitoreo realizados en otras partes del mundo, por 10 que pueden ser
considerados niveles de referencia.
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Usnea
Gufa para el muestreo de Uquenes yplantas epifitas como biomonitores enLatinoamerica
3.11. Efecto de contaminantes atmosferlcos urbanos sobre la capacidad de
incorporaci6ndecalionesmetalicosen U. amb/yoc/ada.
EI empleo de una especie liquenica como blomonitor de los niveles de metales u otros
contaminantes presentes en la atm6sfera, requiere un conocimiento previa de los pracesos
involucrados en su incorporaci6n y eliminaci6n. En este sentido, la incorporaci6n de metales
puede variardependiendode la afinidaddelcati6n metalicoparelligandodelaparedcelular y
de la cantidad demetal dispanible, 10 cualdetermina que algunos metalessean retenidos mas
fuertemente que otros. Por olro lado, la deposici6n de partrculas metalicas cuyo origen es
antropogenico esla relacionada can la presencia de otros contaminantes gaseosos emitidos
tambiEln porfuentes antropogenicas, los quepueden interferiren losprocesos de captaci6n y/o
incorporaci6ndeiones. Debe considerarse ademasquetanto los nivelescomo ladisponibilidad
de los contaminantes gaseosos y las particulas mela.licas pueden variar de acuerdo con las
condiciones topograficas, climalicas y meteorol6gicasdel area.
Objetlvogeneral
Analizar la capacidad de bioacumu/aci6n de algunos meta/es pesados en ta/os de
Usnea amblyoclada (Mull. Arg.) Zahlbr. que han sido previamente expuestos a contaminacion
atmoslericaurbana.
Objetlvosespeclficos
Evaluar /a influencia de condiciones reales de contaminaci6n urbana sobre los
'.
procesos relacionados con la bioacumulaci6n de algunos cationes metalicos en lalos de U.
8mb/yoclada.
Aelacionar el dano provQcado parcontaminantes atmosferiCos urbanos en talos de U.
amb/yoclada can su capacidadde acumulaci6ndealgunosmetalespesados.
Estimar la relaci6n entre la presencia de contaminantes urbanos, la alteracion de
procesos fisiologicos en lostalosliquenicos ylaacumulaci6ndealgunosionesmetalices.
Inferir mecanismos de interacci6n entre contaminantes atmosfericos gaseosos tfpicos
deambientesurbanosyalgunos cationes metalicoscaracteristicosdedichosambientes.
Comparar las tasas de retenci6n de diferentes cationes metalicos en talos de U.
amblyoclada quepresentandanafisiol6gicoprovocadoparpolutantesatmosfericos.
Materialesymetodos
Reco/ecci6n yacondicionamiento del material vegetal
Se utilizaron talos /iquenicos de Usne8 amb/yoclada (MOil. Arg.) Zahlbr, los cuales
fueron recelectados sabre sustrato rocoso en lazona de Cerro Blanco, Los Gigantes, sobre el
laldeo oriental de las Sierras Grandes (Ver descripci6n del sitio y acondicionamiento del
materialvegetal en lasecci6n3.3.1).
Area de estudlo y Metodo de transpJante
Dentro del area urbana de la ciudad de C6rdoba, se selecclon6 una zona
"contaminada" y otra zona "no contaminada", caracterizadas previamente. Se prepararon
unidades experimentales con 6 g de talos liquenicos correspondientes al material basal. EI
material vegetal tue expuesto en el area de estudio empleando la tecnica de transplante y
estuvieron expuestos durante 30 dias, desde el 16 de mayo al 17 de junio de 1999.
Transcurrido el tiempo de exposici6n, en los talos liquenicos se determin6 el contenido de
agua, la concentraci6n de pigmentos fotosinteticos, hidroperoxidienos conjugados,
-63-
Guia paTa el muestreo de Iiquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latlnoamerlca
malondialdehido, la conductividad elEktrica del agua de inmersi6fl y fjnalmente el contenido de
metales pesados (Ver metodos descr.iptos en las Secciones 3.1 y 3.10.
A fin de evaJuar el efecto que pudieran haber provocado los contaminanles
atmosfericos en los procesos metabolicos normales de los talos liquenicos durante el tiempo en
eJ que las muestras estuvieron expuestas, se compararon los vaJores de diferentes parametros
fisiologicQS -indicadores de dano provocado par contaminantes- en los Ifquenes expuestos en
la..z.ona "contaminada" con aquellos expuestos en la zona "no contaminada".
Ademas, para estimar si hubo incorporaci6n a los talos liquenicos de metales presentes
en la atm6sfera durante el periodo de transplante, se compara el contenido de Cu, Ni, Pb Y Zn
de muestras correspondientes al estado basal inicial can muestras que habian sido
transp!antadas en las zonas "contaminada" y "no contaminada".
Finalmente, se evalu6 la incorporaci6n diferencial de los cationes Cu
2
., Ni 2., Zn
2
y
Pb
2
en los Ifquenes que previamente habfan sido expuestos en las dos zonas de transplante.
Transcurrido el tlempo de exposici6n de los -talos liquenicos, estos fueron tratados par
inmersi6n en agua ultrapura (Milli Q) 0 soluciones metalicas con diferente concentraci6n. Para
ello, se emplearon las siguientes soluciones metalicas: CUS04 (0.5, 1, 2.5, 5 y 10 mM), NiS0
4
(O.S, 1, 5 Y 10 mM), ZnS0
4
(0.5, 1, S Y 10 mM) y Pb(N0
3
)z (0.5, 1, 5 Y 10 mM). Teniendo en
cuenta que los tratamientos con acidos no provocaron alteraciones significativas en los
Iiquenes), la inmersi6n en agua ultrapura se consider6 tratamiento control.
Las concentraciones de las soluciones metalicas empleadas fueron seleccionadas
tomando como referencia las encontradas en la atmosfera de areas urbanas 0 industriales
(McKinney, 1993), reconociendo que por tratarse de diferentes solventes los compuestos
presentes pueden tener propiedades muy diferenles. Debido a que estudios previos revela-ron
que la incorporaci6n de metales varia con la acide;z del medio (Chettri et ai, 1997), el pH de las
soluciones metalicas se mantuvo alrededor de 3.5 mediante el agregado del acido
correspondiente al anion de la sal. Transcurridos los 30 minutos de exposici6n, los talos
liquemicos fueron lavados dos veces con agua ultrapura y agitados rapidamente para quitar el
exceso de agua. Posteriormente sa dejaron secar a temperatura ambiente en un ambiente
aislado.
Analisis estadistico
Los analisis estadfsticos se realizaron con el valor media de las determinaciones de
tres submuestras provenientes de los tres sitios de muestreo, en cada zona de estudio. Los
datos obtenidos fueron analizados mediante analisis de la varianza (ANOVA) a uno 0 dos
criterios de c1asificacion, de acuerdo al numero de factores considerados. Cuando se
detectaron diferencias significativas entre puntos de muestreo a un nivel 0.05 se empleo el test
LSD {Least Significant Difference}.
-64-
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Guia para el muestreo de Jiquenes yplantas epifitas como biomonitores en Latinoamerfca
Resultados
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CBasal
35 -
iiiContamlnada
CNoConlaminada
30 -
1
25
-
-
20
-
15
10
5
0
Fb
Ni OJ' Zn'
.. . _ - - ~ _ .
Figura 3.9. Concentraci6n de cationes metalicos en talos de U.
amb/yoclada correspondienles a muestras basales y
transplantadas
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700
600
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u.
ll. 400 j
Ol
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::>
200
100 -
. - ~ .. - -, o!-
Cu Zn Ni Pb
Figura 3.10. Incorporaci6n de Cu
2
+, Ni
2
., Pb
2
+ Y Zn
2
+ a partir de
soluciones metalicas de distinta concentraci6n en talos de U.
amb/yoclada .
-65-
Guia para eJ muestreo de liquenes y plantas epifjtas como blomonitores en Latinoamerica
Tratamlento %Cu %Pb
H
2
0 - P b 2 ~ 0 0 5 M 86,81
Cu
2
0.05M- Pb
2
+ 0.05M 19,47 83,03
Cu
2
+ 0.1 M- P b 2 ~ 0.1 M 11,00 76,23
Cu
2
' 0.5 M- Pb
2
+0.5 M 7,27 65,45
Cu
2
+ 1M- Pb
2
1M 2,78 68,24
Tratamiento %Cu %Pb
H
2
0 - Cu
2
+ 0.05 M 91,78
Pb
2
0.05 M- Cu
2
+ 0.05 M 53,98 99,78
Pb
2
+ 0.1 M- Cu
2
+ 0.1 M 47,94 84,40
P b 2 ~ 0.5 M- Cu
2
+ 0.5 M
6,86 69,27
Pb
2
+ 1M- Cu
2
1M
8,65 89,66
Tabla 3.16. Porcentaje de incorparaci6n de Cu
2
+. y P b ~ en talas de U. amb/yoclada !ratadas
con solucionesdeCu
2
en combinaci6nconsolucianesde Pb
2
+.
Concluslones(CarrerasetaI., 2005)
Los contaminantes atmosfericos provocaron alteraciones significativas en la fisiologia
de los Ifquenestransplantados
La secuenciade incorporaci6ndeionesmetalicosen U. ambfyocJada fue: Pb
2
.. > Cu
2
+>
Ni
2
+ > Zn
2
+.
Las interacciones entre contaminantes-Iiquen son significativas, pudiendo modifiear la
captaci6n yJo acumulacion deelementosasfcomosuselectossobre el biomonitor.
La especie estudiada tiene una excelente capacidad para tolerar elevados niveles de
metales pesados en el ambiente, sin mostrar dano fisiol6gico significativo. Esto permite
proponera U. amb/yoclada como biomonitor de acumulaci6n para metaJes pesados, teniendo
encuentasuselectividad0 elevadaafinidad porPb ysu escasarespuestaaZn.
4. Plantas epifitas como bioindicadores/biomonitores de la contaminaci6n
atmosferica
Generalldades
En el biomonitoreo de la contaminaci6n atmosferica el empleo de especies epffitas
presenta laventaja deque por no tener raiz funcional, estos organismos obtienen minerales y
nutrientesdel aire ynode un sustrato, 10 cualpermitededrqueloselementos acumuladospar
estas reflejan la composici6n atmosferica(Wolterbeek, 2002). Dentro de las plantas superiores
la familia Bromeliaceae (Monocotiled6neas} presenta un alto grado de epifitismo, siendo el
genera TilJandsia la maxima expresi6n (Smith, 1989}. En el ana 1750 Linneus nambra al
-66-
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Gula para el muestreo de /{quenes y plantas epifitas como biomonitores en I,.atjnoamerica
genera de esla familia Bromelia en honor al cientffico Sueco Olaf Bromelius. 'EI genero
TilJandsia debe su nombre al botanico Sueco Elias Tillands. La similitud entre la Usnea (que es
un liquen) y una de las especies de Til/andsia lIamada en America musgo espanol, hiza que a
esta ultima se la denominara Tillandsia usneoides.
Las Bromeliaceae presentan una distribuci6n exclusiva en el neotr6pico, si 58 exceptua
a ulila especie de Pitcairnia del Africa tropical. Este grupo ha sido particularmente exitoso en la
ocupaci6n de un area geografica extensa que abarca desde el sur de los Estados Unidos,
hasta el sur de Chile (Smith and Downs 1974, 1977, 1979). Dentro de este amplia territorio las
bromeliaceas ocupan practicamente todos los nichos ecol6gicos disponibles. Esta diversidad
incluye un conjunto de espeeies terrestres, saxfeolas y epifitas, can marcadas diferencias en su
tolerancia al deficit hidrico, regimenes de iuz y disponibilidad de nutrientes durante el
crecimiento.
Los estudios taxon6micos muestran a las Bromeliaceae como una familia bien
diferenciada, caracterizada par la presencia de tricomas foliares peltados (escamas) de
marfologia muy variada los cuales poseen un largo pedicelo uniseriado completamente
embutido en la epidermis (Tomlinson 1969). Presentan un desarrollo impartante de tejidos
acuiferos que determinan la formaci6n de hojas de anatomia suculenta y la aparici6n de
'epidermis con superficies impermeables (cutinizaci6n), caracteres estes, de especial
importancia para la evoluci6n de la familia en Mbitat secos (Medina 1990).
Dentro de la familia Bromeliaceae se distinguen tres subfamilias bien caracteristicas
(Smith and Downs 1974), can una notable tendencia al epif\tismo, habito frecuente en las
Bromeliodeae y muy dominante en las Tillandsioideae. Esta tendencia se encuentra asociada
can la reducci6n de la funcionalidad de las rarces como 6rganos de absorci6n, en doMe para
las formas epifitas las raices funcionan solo camo 6rganos de adhesi6n al sustrato. Por otro
lado, la estructura de los tricomas peltados alcanza su maximo grado de diferenciaci6n dentro
de las Tillandsioideae. donde tambien se ha demostrado una mayor captac\6n de absorci6n de
agua y nutrientes (Benzing 1976).
Genero Tlllandsia
Las Tillandsias son plantas que obtienen tanto agua camo nutrientes del aire, a traVElS
e las hojas. Las hojas, en algunos casas suculentas 0 semisucuJentas estan cubiertas par
tricomas, unas celulas adaptadas que les permiten absorber agua. Las rarces no tienen
eapacidad de absarci6n, 5610 les sirven para fijarse a un saporte. Las inflorescencias,
particularmente las bracteas, generalmente tienen colores vivos y variados en las regiones
humedas.
Algunas Tillandsias del desierto (regiones Midas a semiaridas), resisten tanto a la
escasez de agua como ciertos Iiquenes y se mantienen exclusiva 0 principalmente con la
escasa agua del roero; lienen una expasici6n total de la superfieie foliar y poseen una gran
cantidad de escamas a tricomas peltados; asi prevalecen las especies de hojas angostas y
grises (color debido a las escamas). Dentre de estas especies se encuentran en America del
Sur: Tillandsia tectorum, T aurea, T. tricholepis, T paleacea, T. straminea, T. capillaris y T.
recurvata, entre otras. En las especies que viven en zonas lIuviosas, predominan las de hojas
anchas y poco escamosas. como son Tillandsia rubra, T. wangerini, T. fuscoguttata, T.
schimperiana, T. complanata, T. maculata y T. tetrantha, entre otras.
Entre las especies del genero Tillandsia hay marcadas diferencias morfo16gicas,
fisol6gica y de habitat. ASI, T. usneoides es una planta epffita herbaeea que habita las zonas
humedas de America del Sur, America Central y el sur de EEUU. Cuelga de los arboles en
-67-
Guia para el muestreo de /fquenes y plantas epffitas como' bJomonitores en Latinoamerica
hebras ramificadas que alcanzan hasta 10$ 8 m de longitud. No posee rarees, tiene hojas
dfstieas, de 25-50 mm, densamente eubiertas de eseamas grises a pardas; ,escapo casi nulo;
inflorescencia reducida a una sola flor terminal, braetea floral apieulada, flor subsentada,
sepalos agudos, de 7 mm, petalos agudos u obtusos, de 9-11 mm, de color verde pal ida 0 azul;
capsula de hasta 25 mm, cilfndrica. En T. usneoides la presencia de celulas con las paredes
espesadas, de hipodermis, de idioblasto can rafidos, mucilago y cauees de aire constituyen las
caracterfsticas adaptativas al habito epifitico.
A diferencia de esta, T. capiJIaris sa encuentra desde los 400 m.S.n.m., hasta
aproximadamente 4000 m de altura. En Bolivia, se la ha encontrado a mas de 4000 m.s.n.m.
senalando esto su gran capacidad de adpataci6n a condiciones extremas como son la falta de
agua, la elevada irradiaci6n solar y la amplitud termica entre noche y dfa. T. capiflaris pertenece
a las Tillandsias grises (color debido a las escamas) y de hojas cortas. Es una planta pequena
con ramas simples unidas a un tallo de aproximadamente de 10-15 centimetros de largo; hojas
disticas, vaina eseariosa, limbo de 1 a 4 em, pafcialmente lambiEln hasta 6 em de largo, con
escamas grises tupidas y absorbentes, inflorescencia hasta aproximadamente de 8 centimetros
de largo, la espiga con 1 0 2 flores; sepalos lanceolados, puntiagudos; fa f10r verdoso-amarilla
hasta el castano 0 blanquecino.
Debido a estas caracterfslicas, estas como otras especies en este genero debido a su
naturaleza epifitica, morfologfa y 1isiologfa, se consideran desde hace alg6n tiempo como
potenciales bioacumuladores y biomonitores de elementos aerotransportados. Los estudios
cualilativos de la contaminaci6n atmosferica han mostrado variaciones geograficas en las
coneentraciones de elementos acumulados por Tiflandsia, las que se relacionan con la
proximidad de las fuentes de emisi6n de los mismos.
En relacion a la 1isiologla de Tilfandsia, la ocupaci6n de habitat secos, terrestres 0
epifiticos, ha sido favorecida por el desarrollo de la capacidad de fijaci6n nocturna de CO
2
(CAM) (Tomlinson, 1969). EI melabolismo CAM es un proceso caracterizado par la
acumulaci6n de acidos organicos libres, esencialmente acido malico y, bajo ciertas condiciones
acido citrico, en las vacuolas de tejidos fotosinteticamente activos (Winter, 1985). EI acido
malico acumulado durante la noche entra en el citoplasma aJ dla siguiente, donde es
descarboxilado y el CO
2
resultante es fijado en Jos cloroplastos por la enzima ribulosa-difosfato-
carboxilasa (RUBISCO) e incorporado a carbohidratos mediante el cicio de Calvin. Er resultado
es que la apertura ~ s t o m t i y la fijaci6n de CO
2
ocurren durante la noche, cuando la
demanda evaporativa de la atm6sfera es manor. Par ello la eficiencia de usa de agua (cantidad
de materia organica sintetizada par unidad de agua Iranspirada) es mucho mayor en estas
plantas que en las que no poseen este tipo de metabolismo (Winter 1985).
Las escamas peltadas funcionan como el principal mecanismo en Ja incorporaci6n de
agua y nutrientes, y ademas provocan una efectiva sustituci6n de la funci6n de las rafces,
pudiendo vivir eslas plantas sobre soportes totalmente inertes como son, par ejemplo, los
cables del tendido ehktrico (Benzing 1976; BenZing et aI., 1985; Benzing and Renfrow, 1980).
La presencia de un gran n6mero de escamas peltadas incrementa la superficie de contacta
aire-planta 10 cual aumenta la eficiencia de la absorci6n de agua y otras sustancias presentes
en la atmosfera, ineluidos los contaminanles (Braga, 1977, Brighigna et aI., 2002, Scatena y
Segecin, 2005).
Especies del genero T/!Iandsia como biomonitores de ia contaminacion atmosferica
Can respecto a la capacjdad bioindicadora de poluci6n atmosferica plantas eprfitas
vasculares del genera Tilfandsia demostraron ser sensibles al S02 (Arndt and Strehl, 1988), y
-68-
Guia para el muestreo de IIquenes y plantas eplfitas como blomonltores en Lat;noamer;ca
se han empleado para el biomonitoreo de la contaminaei6n par metales pesados (Martinez et
aI., 1,971; Figueiredo et al., 2006), residuos organieos (Sehrimpff, 1981) e hidrocarburos
aromatieos policicl ieos (Brighigna et aI., 2002).
Tillandsia usneoides fue utilizada para evaluar los niveles de fluoruros en el agua de
lIuvia (Strehl y Amdt, 1989); como monitor atmosferieo de la eontaminaei6n por mereurio de una
planta de c1or-alcali en Rio de Janeiro (Calasans and Maim, 1997; Amado Filho et aI., 2002) y
recientemente como biomonitora de los niveles de metales pesados en la atmosfera en la zona
metropolitana de Sao Paulo (Figueiredo et aI., 2006). En tanto ejemplares de T. aeranthos y T.
recurvata fueron utilizadas para comparar las concentraciones de azufre y metales pesados en
la zona mas industrializada de Porto Alegre eon respecto a las eneontradas en areas
residenc\ales (Flores, 1987).
En Costa Rica se empleo T. caput-medusae en el biomonitoreo de la conlaminaci6n
atmosferica par metales pesados (Pb, Cu, Cd) en la eiudad de San Jose (Brighigna et aI.,
1997), mienlras que en Colombia, T. recurvata y T. usneoides se utilizaron como indicadores
de acumulaci6n para identifiear las principales fuentes de emisi6n de polutantes (Schrimpff,
1981). En Venezuela T. recurvata se utiliz6 para estudios de poluci6n por metales pesados
(Tugues, 1976) y en Italia, las especies T. caput-meduseae y T. bulbosa fueron transplantadas
a un area de Floreneia, para el monitoreo de hidroearburos aromaticos policfclicos presentes en
el aire (Brighigna et aI., 2002).
En un estudio preliminar realizado en nuestro pafs se encontr6 que T. capil/aris, con
amplia distribuci6n en la zona central de Argentina se comporta comq buena bioindicadora de
la calidad atmosferiea, tanto a partir de su respuesta fisiol6gica, como por su capacidad para
acumular metales pesados (Pignata at aI., 2002).
Por 10 expuesto anteriormente consideramos que plantas del genera Tillandsia son
apropiadas para el monitoreo la contaminaci6n atmosferica pudiendo, incluso, ser biomonitores
mas elicaces que otres organismos como por ajemplo Ifquenes y musgos. Algunos autores
como Brighigna et al. (2002) recomiendan especificamente el usa de Tilfandsia en aquellos
parses donde algunas especies de este genero astan ampliamente distribuidas.
Respuesta fisiologica de plantas superiores a contaminantes
I..OS electos de los eontaminantes atmosferieos sobre la vegetaci6n se manifiestan a
traves de cambios fisiol6gicos, distinlos tipos de dano en hojas y otras partes de la planta,
reduccion en el crecimienlo que, en muchos casos, puede conducir a la muerte de la planta
(Buse et at, 2003; Bell and Treshow, 2002). Las consecuencias relativas de los distintos
electes dependen del tipo de contaminante, de su concentraci6n, de lactores c1imaticos asf
como tambien de la especie vegetal sabre la cual inciden.
EI dana en hojas puede manilestarse como clorosis, seneseeneia temprana eon
cambios coneomitantes en la pigmentaci6n y necrosis. EI tipo de lesiones y la extensi6n,
provacada par un determinado polutante en una especie esta influenciado por factores
meteorologicos tales como la humedad, las precipitaciones, la radiaci6n solar, la temperatura,
la turbulencia del aire, ademas de otros como son la humedad del suelo y el contenido de
nutriantes (Bell and Treshow, 2002). Por otra parte, la mezcla de contaminantes puede mostrar
efectos sinergicos sobre las plantas tal como ocurre en los electos combinadas de S02 y N0
2
.
Sin embargo S02 y 0
3
lreeuentemente muestran efeetos no 5610 sinergicos sino tambiEln
antag6nicos 0 adilivos dependiendo de la concentraci6n de cada uno de estos gases y de la
s
especie vegetal (Klumpp et aI., 2004).
y
-69-
Guia para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
Las respuestas de las plantas a la contaminaci6n atmosferica pueden ser estudiadas a
partir del antllisis de los factores que determinan la resistencia a ta susceptibilidad de cada
especie a la contaminaci6n del alre. Estas, pueden presentar un amplio rango de estrategias
frente a la presencia de contaminantes como par ejemplo cierre de estomas, activaci6n de
enzimas de detoxificaci6n y sintesis de compuestos antioxidantes (Malhotra y Khan, 1984).
Levitt (1972) sugiere dos mecanismos mediante los cuales las plantas aumentan su proteccion
frente a los cambios ambientales, par un lado pueden "anular el estres" representando esta una
habilidad para excluir la situaci6n estresante. Por otro lado pueden "tolerar el estres" mediante
cambios quimico-fisioI6gicos. Sin embargo, la tolerancia al estres puede afectar el
funcionamiento fisiol6gico normal de la planta ya que conlleva un gasto extra de energia
metab6lica.
En las hojas es donde se lIeva gran parte de la captaci6n de gases en las plantas,
mecanismo controfado par la apertura de los estomas (Mansfield and Pearson, 1993; Heath,
1994). Los cambios en la apertura estomatica regulan el movimiento de CO
2
y O
2
como asi
tambien de los polutantes gaseosos. Estos cambios dependen del estado de lurgencia de las
celulas que conforman el estoma asf como el de las celulas vecinas. Mansfield y Free-Smith
(1984) sugieren que el ingreso de gases t6xicos en las hojas afecta a las celulas de la
epidermis 0 bien, cuando ingresan a la cavidad sub-estomatica producen dana a las celulas
que forman el e5toma. Esto lIeva a una perdida de turgencia de estas, dando como resuliado
una disminuci6n en el eontenido de agua foliar. Sin embargo. las plantas presentan una
cutfcula serosa que no solo protege a los tejidos de la perdida de agua, sino tambien ejerce un
efecto protectivo contra polutantes gaseosos, actuando como una barrera en la cual gran parte
de los gases se pueden absorber 0 solubilizar. Entonces, la permeabilidad de esta cutfcula a
los conlaminantes. resulta de gran importancia para determinar los niveles de dano que estos
producen sabre las plantas (poborski, 1988).
Aunque existen denies de compuestos 16xicos en la atm6sfera, s610 unes pocos han
sido investigados can relaci6n a sus efeetos sobre vegetaci6n. Los estudios se han centrado"
principalmente, en ambienles urbano-industriales, donde los principales contaminantes son:
S02, HF, NOx, CO, CO
2
, N0
2
, 0
3
, hidrocarburos, PAN y metales, entre olros (Heath, 1980;
Klumpp et aI., 2004).
En relacion a los efectos del S02, se ha demostrado que esle induce un aumento en la
tasa de apertura e5tomatica, por 10 cual incrementa la perdida de agua por transpiraci6n
(Majernik and Mansfield, 1971). Par otra parte este gas, pravoca decaimiento en la tasa neta de
fotosfntesis (Black 1982), as! como tambien un aumento en la degradaci6n de clorofilas (De
Kok, 1990; Vema et aI., 2000). En la celula el S02 forma acidos pudiendo asf modificar el
balance del pH celular. Esto resulta en una degradaci6n de los componentes Jipidicos de las
membranas y en una reducci6n de la eficiencia de fjjaci6n de CO
2
y de la actividad de
fosforilaci6n (Foyer et aI., 1994). Como componente de aminoacidos, el azufre es esencial en
numerosas vias metab6licas, par 10 cual, a bajos nil/eles de deposici6n el S02 y sus derivados
(HS0
3
', S03- ) pueden resultar incluso beneficiosos para las plantas. Sin embargo. a altos
niveles la producci6n de radieales libres inducida por la presencia del i6n sulfito resulta
perjudicial. Sulfito y sulfito acido pueden reaccionar directamente con las uniones disu,lfuro,
compuestos ciclicos y ADN 0, en presencia de iones metalicos formar especies reactivas
(Foyer et aI., 1994; Hewitt et aI., 1994).
Otros polutantes t6xicos para las plantas son: NO y N0
2
; sin embargo en la atmosfera
el NO se oxida rapidamente a N0
2
, por 10 cual su tiempo de res;dencia no es elevado. El
di6xido de nitr6geno produce una resistencia a la captaci6n de CO
2
por parte de las plantas. La
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Gula para el muestreo de Jlquenes y plantas epltitas como biomonitores f'n Latinoamerica
entrada alas hojas es similar a la del S02, sin embargo el ingreso a traves de las cutfcwlas es
mas alto ya que la resistencia cuticular para el NO
z
es menor que para eJ SOz a el 0
3
(Srivastava et aI., 1975).
EI ozona (0
3
) presente en la troposfera se origina, como contaminante secundario,
mediante reacciones que involucran a los 6xidos de nitr6geno, a hidrocarburos volatiles (los
que dependen de emisiones antropogemicas) y luz solar (Hewitt et aI., 1994). Una alta
cOl1centracion de 0
3
en la atmosfera afecta la permeabilidadde la celulas oclusivas que forman
parte de la estructura estomatica, produciendo un incremento de la permeabilidad de estas
celutas para los iones K+ y un posterior cierre estomatico (Heath, 1994}. EI cierre de los
estomas trae aparejado una disminucion de la tasa fotosintetica dada por una disminucion de la
fijaci6n de CO
z
(Farage et aI., 1991).
Sobre plantas los efectos del S02, 0
3
Y NO
z
se deben, primariamente. a la formacion
de especies reactivas del oxigeno, tales como el radical hidroxilo ('OH), el ani6n superoxido
(0
2
") y el peroxido de hidrogeno (H
Z
0
2
} (Asada and Takahashi, 1987). Una vez que ingresan a
los tejidos, los contaminantes pueden causar un incremento local de las concentraciones de las
especies activas del oxfgeno y as!, alterar la aetividad de enzimas detoxificantes y modificar la
concentracion de antioxidantes (Nast et aL, 1993). Para hacer frente a estos efeetos, las
planlas cuentan con varios sistemas de detoxificacion, los que incluyen complejos sistemas
enzimalicos (catalasas, peroxidasas, superoxido dismutasas, etc.), acido ascorbico, vitamina E,
peplidos (g lutation), carotenoides y poliaminas (Larson, 1988; Foyer et al.. 1994).
En la celula, las membranas controlan la incorporacion y la eliminaci6n de moleculas e
iones, mediante procesos pasivos, bombas y transportadores. Por esta raz6n el mantenimiento
de la integridad de la membrana es un requerimiento Msico para el buen funcionamiento del
metabolismo celular. Uno de los principales efectos de los contaminantes sobre plantas, es la
modificacion de la organizacion de las membranas celulares, alterando su permeabilidad
(Gries, 1996). EI tipo de respuesla yarra de acuerdo al contaminante y a su concentraciOn.
Garty et al. (1993), encontraron sintomas de dano en las membranas celulares, aun antes de
que S8 detecte la degradaci6n de clorofilas.
Algunos melales resultan t6xicos para plantas y producen la inhibicion de la fotosinlesis
en hojas (Clijsters and Van Assche, 1985; Prasad and Strzalka, 1999; Wozny and Zrzeslowska,
1993; Krupa et aI., 1996; Kastori et aI., 1998; Chen et aI., 1995). Uno de los mecanismos de
esta disrupci6n es a partir de la sustitucion del Mg
z
+ de la molecula de c1orofila por otro metal,
con la consiguiente inhibicion de los folosistemas I y II (Prasad and Strzalka, 1999). La
inhibici6n del aparato fotosintetico genera la peroxidaci6n de Iipidos por la actividad de
radicales libres del oxigeno. dando como resultado la destruccion de pigmentos fotosinteticos y
de las membranas tilacoideas (Droppa and Horvath, 1990). Entonces, tanto el aumento en la
peroxidaci6n de Ifpidos de membranas, cuanto la disminucion en et contenido de pigmentos
fotosinteticos pueden ser empleados, en plantas, como parametros indicadores de la presencia
de estres provocado por contaminantes gaseosos y metales pesados (Dietz et aI., 1999).
En relaci6n a matalas pesados, las plantas poseen distintos mecanismos para resistir a
tolerar el estres causado por la presencia de algunos que resultan toxicos. EI control
homeostcitico es esencial para ciertos iones esenciales como por ejemplo Cu
z
y Zn
2
-t, aunque
no resulta claro para otros iones como Pb
2
.., Hg
2
-t, Cd
2
\ que no son esenciales y mas aun,
carecen de funci6n fisiol6gica en plantas.
Puede decirse, en terminos generales, que la regulaci6n de las concentraciones de
metales en las plantas depende en gran medida de los niveles de concentracion de estos, de
los cambios en sus estados de oxidaci6n, de la fijaci6n de ellos a la pared celular, de la
-71-
Guia para el muestreo de liquenes y plantas epffltas como biomonitores en Latinoamerica
posibilidad de atravesar membranas, y del secuestro intra 0 extracelular de los mismos par
proteinas U olras biomolEkulas para su almacenamiento en compartimentos vesiculares (Baker
and Walker 1990).
En cuanto a la respuesta que muestran las plantas frente a exposiciones a metaJes,
hay considerables evidencias que muestran una gran variabilidad genetica en relaci6n a la
capacidad para tolerar metales no esenciafes como Pb, Cd, Ag, AI, Hg, etc. (Woolhouse, 1983).
En algunas especies los elementos se incorporan s610 en cierto grado, por 10 que el fen6meno
corresponde mas a una evitaci6n que a tolerancia (Taylor, 1987). En otros casos los metales se
acumulan en las ralces, y el transporte hacia las partes aereas es limitado. Del mismo modo,
hay especies en las que tanto rarces como partes aereas contienen elevadas concentraciones
de ciertos elementos no esenciales para su metabolismo. Uno de los mecanismos protectivos
que algunas especies presentan frente a elevadas concentraciones de metales, es la
posibilidad de que estes sean quelados par moleculas como las fitoquelatinas., pequeflos
peptidos ricos en el aminoacido azufrado cisteina, con 10 cual dismil1uye su toxicidad (Gekeler
et aI., 1989; Steffens, 1990). Estos peptidos por 10 general tienen de dos a ocho unidades de
cisteina en el centro de la molecula, asr como acido glutamico y gllcina en los extremos
opuestos. Son numerosas las especies que producen fitoquelatinas, pera hasta ahora 5610 se
han encontrado en aquellas que pueden incorporar un metal en cantidades t6xicas, aunque
tambien se producen en presencia de cantidades excesivas de metales esenciales como por
ejemplo cobre y cinc (Rauser, 1990). Estos peptidos no son los {micos que participan en los
mecanismos de tolerancia a metales que presentan las plantas. para muchas especies tambien
es importante el secuestro de metales por acidos organicos, fa redtlccion del ingreso de estos a
la celula y asi tambien el aislamiento de los iones en compartimentos celulares (Steffens,
1990),
Parametres utilizados en plantas superiores como biomarcadores de conlaminaci6n
almosferica
Los primeros estudios realizados can biomonitores, se concentraron en observar
modificaciones en parametros ecol6gicos como por ejemplo, cambios en (a distribuci6n,
diversidad y abundancia de especies (Hawksworth, 1967; Le Blanc and Aao, 1973b; Neiboer et
aI., 1972; Showman and Long, 1992).
Posteriormente las investigaciones se orientaron al estudio de los cam bios en la
morfologra de los organismos, como par ejemplo en algunos Ifquenes se observaron
modificaciones del tala, reducci6n en el numero de cuerpos de fructificaci6n, necrosis,
blanqueo, alteraciones de la corteza, entre otras (Ahmadjain, 1993). A partir de estas
modificaciones comenzaron a incorpararse cambios en una gran variedad de parametres
qufmicos como indicadores de los efectos producidos por los contaminantes sabre fos
organismos.
Todas las membranas biol6gicas son sensibles a los procesos oxidativos generados
por radicales libres, los cuales pueden originarse como reacci6n frente a contaminantes
atmosfericos (Mead, 1987). EI aumento en el contenido de hidroperoxidienos conjugados y
malondialdehfdo, esta relacionado con el aumento de las oxidaciones de Iipidos de las
membranas celulares (Mead, 1987; Menzel, 1976), Y este fen6meno se encuentra
frecuentemente asociado can un incremento en fa permeabilidad celular (producida par
contaminantes atmostericos), y con la posterior perdida de agua y nutrientes de las hojas
conduciendo a la planta a una senescencia temprana (Singh, 1993). De hecho, en muchas
-72-
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Guia para el muest"eo de liquenes y plantas e{1it/tas como biomonitores en Lat/noamerlca
especiesde plantas, la perdidade agua foliarconstituye un buen parametroindicadordedano
porpolutantes,talcomo10 citan Robinson yWellburn (1991).
Diferentes autares han observado cambios significativos en estes parametros
indicadoresdedanaprovocadoporGontaminantes en diferentesespeciesde IIquenesyplantas
expuestas en areas urbanas e industriales (Gonzalez and Pignata, 1997; Egger et aI., 1994;
Pignata etal. 2002, WannazetaI., 2003; Vavilin et aI., 1998; Kumar et aI., 1993). La variacion
delcontenido de pigmentos (clorofilas, leofitinasycarotenos), tambieln hasideempleado como
indicador del dano provocado por contaminantes atmosfericos sobre plantas en estudios de
biomonitoreo. Lehnherr et al. (1988) observaron la disminucion de clorolila total en hojas de
Triticum aestivum L.. cuando las mismas son traladas con diferentes niveles de 0
3
; Ruth y
Weisel (1993). seflalan un efecto similar en Picea abies (L.) Karst. bajo concentraciones
variables de 0
3
; Elvi ra et aI., (1995) observaron un efecto si milar en Pinus halepensi.
Spedding y Thomas (1973) senalan que el nivel de clorofila total disminuye en Hordeum
vulgare bajo condiciones deestresparcontaminaci6n atmosferica. Plantasdearroz expuestas
a S02y0
3
presentaron unadisminuci6n del contenido declorofilas ycarotenoides (Agrawal et
al.,1982).
Existe un gran numerode estudios donde se mencionaun efecto negativo. provocado
porlapresenciade metalespesados, sobre el contenidodepigmentosen distintasespeciesde
plantas, asicomo en el aumento en la relacion CI-b/CI-a (Gadallah, 1994; Drazkiewicz. 1994;
Abdel-Basset et al.. 1995; Egger el aI., 1994; Ewais, 1997) debido, fundamentalmente, a la
degradaci6ndeclorofila8.

Tambien se ha mencionado. en diferentes estudios, que el contenido de azulre

presente en hojas de distintas especies de plantas es un buen indicador de los niveles de
contaminaci6n par di6xido de azulre en la atmosfera (Garty et aI., 1985; Garty et aI., 1988;
Materna, 1982;LeggeelaI., 1988;Arndtand Strehl, 1988; Dmuchowskiand Bytnerowicz, 1995;
WannazetaI., 2003).
5. Disenosexperimentalesen estudiosdebiomonitoreoempleandoespeciesdel
genero Tillandsia enCordoba,Argentina
5.1. Biomonitoreo pasivo de la contaminaci6n atmosferica empleando Tillandsia
capillaris, T. permutata y T. tricholepls
Objetivos
Comparar las especies a fin de determinar cual de elias se comporta como mejor
biomonitardecontaminantes atmosftftricos.
Estudiarel gradode correlaci6n entre las distintas fuentes de emision presentes en el
area de estudio y: a) las tasas de retenci6n de metales pesados y elementos traza y b) la
respuestafisiol6gicade T. capillaris, T permutata y T. tricholepis.
Confeccionar mapas regionales para el area de estudio que permitan mostrar la
distribuci6n geografica de los elementos quimicos analizados en hojas de tres especies del
genera Tillandsia.
Conleccionar mapas para el area de estudio, que permitan discriminar diferentes
niveles de calidad atmosferica, a partir del empleo de parametros que rellejen la respuesta
qufmica-fisiol6gicadelosbioindicadores adiversascondiciones ambientales.
-73-
Gula para el muestreo de' Ifquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
Material Vegeta,l
Se emplearon plantas adultas de Tillandsia capillaris Ruiz & Pav. 1. capillaris; Tillandsia
permutata A. Cast y Tiflandsia tricholepis Baker, todas pertenecientes a la Clase Liliopsida,
Subclase CommeJinidae, Orden Bromeliales. Familia Bromeliaceae. Estas especies se
seJeccionaron debido a su abundancia y distribuci6n geogn3.fica en la provincia de C6rdoba,
Argentina.
Area de Estudio
EI area de estudio (Fig. 5.1), ubicada en el centro de la Republica Argentina estuvo
definida por un cuadrilatero cuyos puntos extremos tienen las siguientes coordenadas: a) 31
0
25"21" S, 6524"W; b) 3141'15" S, 6238"34"W; c) 3036" S, 6415"W; d) 3248' S, 64
0
10'12" W. La misma comprende una superficie de 50.000 km
2
. Desde el punta de vista
geomorfol6gico el area presenta variaciones importantes, con una a!tilud media aproximada
desde 250 m hacia el sudeste y 2.500 m hacia el centro-oeste. Dentro de la misma se
encuentran ciudades de mediana e importante magnitud y pequenas villas; tambien plantas
industriales, principalmente metalurgicas, pelroqufmicas, qufmicas, aceiteras, alimentarias,
cementeras, etc., localizadas en el centro y sur donde existe fa mayor densidad poblacional.
Fitogeograficamente, el area eomprende Jas siguientes regiones: provincia Chaquena (Chaco
Occidental y Chaco Oriental), provincia del Espinal y Estepa Pampeana (Cabrera, 1976).
EI Chaco Occidental se presenta con diversas fisonomfas tales como el bosque
serrano, arbustales y paslizales de altura. La provincia fitogeografica del Espinal esta
desapareciendo de la regi6n y quedan relictos en la planieie nor-oriental. La desaparici6n
paulatina de la vegetaci6n autoctona se produce como resultado de la transformaci6n realizada
a causa de la expansi6n agropecuaria. Esla unidad presenta de norte a sur importantes
variaciones climaticas. La vegetaci6n predominante es el bosque xer6filo abierto caducifolio y
estepas arbustivas. La provincia fitogeograJica Pampeana tambien se denomina Estepa
Pampeana y en la misma predomina la eslepa de gramineas, la eual se ve modificada en
funcion de las variaciones del c1ima. Esta unidad, caracterizada por la ausencia de ejempJares
arb6reos, esta constituida por suelos fertiles que han motivado el desarrollo de las mayores
actividades agrfcolas de la regi6n.
La zona de estudio incluye ala ciudad de Cordoba. ubicada a 31 "24' S Y 64011' ya 440
m S.n.m. (punto 42), con una poblaci6n de 1.368.301 habitantes (segun el Censo Nacional,
2001). Es considerada la segunda en importancia para la Argentina y muestra problemas de
contaminaci6n de aire, principalmente durante el invierno.
-74-
'ca

ida,
se

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31
64


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Gufa para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
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66 75
S7 '01"76 __
4B '58 ,68
39. .. . -77
30' 49 59 {;S" 78
-31 21 ' 31,41 '50 "SO' 7f1 79
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11'22 '324l'h' 51 '60
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5 14 23 3} 4} 53 .- 63'
I> '24 34 44' 54' 73 4
15' 25 '35 45 '. 64' 74
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B ''17 27. 37' 5S-
9 18 26 3rt!
to 19 '29
eo 1.1 .20.

-33
-34
35
-65 64 -6)
Figura 5.1. Puntas de muestreo (e) para tres especies
de Tilfandsia en la provincia de Cordoba, Argentina
(Anos 2000-2003)
Muestreo
EI area seleccionada fue dividida segun una grilla en cuadriculas de 25 x 25 km (81
puntos de muestreo) (Fig. 5.1) tomandose muestras de las tres especies de Tillandsia cuando
estaban presentes, en cada uno de los puntas de intersecci6n (puntos de muestreo). En elias,
los sitios de recolecci6n estuvieron ubicados at menDS a 500 m de distancia de rutas
principales y areas densamente pobladas y al menos a 300 m de calles can menor intensidad
de transito.
Se realizaron tres muestreos sucesivos, el primero entre los meses de noviembre de
2000 y enero del 2001, el segundo durante los meses de noviembre de 2001 y enero 2002 yel
ultimo entre noviembre de 2002 y enero de 2003. Las precipitaciones medias anuales
registradas para los anos en que se realizaron los muestreos (datos tomados en Cordoba
capital) muestran pequenas variaciones, observandose 959 mm en el ana 2000; 901 mm en el
ano 2001 y 726 mm en el ultimo ano de muestreo.
En el sitio 42, el cual corresponde a la ciudad de Cordoba, las especies lueron
colectadas en el Parque Sarmiento en el primer ano de muestreo, y para el segundo y tercer
ana de muestreo se ar'iadi6 un sitio (42.1) localizado en la zona de Chateau Carreras.
Gula para el muestreo de Jiquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latlnoamerlca
Diseno experimental
Antes de realizar el muestreo se tuvo en cuenta que no hubiera ni hubiese habido
precipitaciones al menos can tres dias de antelaci6n. Cada una de las muestras fue idenlificada
despues de su recolecci6n con un c6digo alfanumerico.
Para las tres especies, se prepar6 en cada punta de mueslreo un "pool" inicial el que
consisti6 en una mezcla de 30 a 40 individuos recolectados al azar en los cuatro punlas
cardinales dentro de cada sitio. De cada individuo fue removido el malerial extrafio y las
muestras se colocaron en balsas de papel hasta la lIegada allaboratorio. Se utilizaron guantes
descartables durante la recolecci6n a fin de evitar cualquier conlaminaci6n de las mismas.
Tratamlento de las muestras
En el laboralorio, parte del malerial fue separado para determinar el contenido de agua
y la concentraci6n de azufre y de metales pesados. EI resto del material fue colocado a -15 lie
en oscuridad. De cada una de las plantas se seleccion6 la parte apical de las hojas
(aproximadamente 3 em) con las cuales se form6 un "pool" para cada una de los puntos de
muestreo. Para los procedimientos analiHcos de cada una de elias se separaron tres
submuestras.
Determinacion dell peso seeo (PS)
Se utilizaron 2 9 del malerial fresco (PF) los que fueron colocados a 60 2C. Se
realizaron pesadas sucesivas cada 24 h hasta la obtenci6n de peso constante. Los resultados
de la relaci6n PS/PF se expresaron como 9 PS.g1pF.
Analisis qufmieos
Cuantlficaci6n de carotenoides, clorofilas y feofitinas
Se homogeneizaron 100 mg de material vegetal en 10 mL de etanol al 96% VIV.
Posteriormente se separ6 el sobrenadante yen el se midi6 la Densidad Optica (DO) a 470,665
Y 649 nm para la cuantificacion de carotenoides, clorofilas a y b (Carot, CI-a, CI-b)
respectivamenle, y a 666 y 654 nm para la cuantificaci6n de feofitinas a y b (Feot-a, Feof-b)
segun el metoda de Wintermans y De Mots (1965). Los resultados se expresaron como mg.g
1
PS.
Cuantificacion de hidroperoxidienos conjugados
Del sobrenadante proveniente de la extracci6n de pigmentos, obtenido tal como se
detall6 en el punta anterior, se tomaron 0,2 mL y se midi6 fa DO de la soluci6n diluida 1/15 {con
etanol al 96% VN} 234 nm. EI contenido de hidroperoxidienos conjugados (HPDC) se calcuJ6 a
partir de 'E:= 2.65)(10
4
M-
1
.cm-
1
(Levin and Pignata, 1995). Los resultados se expresaron como
IJmol.gl PS.
Cuantificaci6n de malondialdehldo
Se homogeneizaron 100 mg de material fresco con 2,5 mL de H
2
0 destilada. A la
-76-
665
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1
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como
t. A la
Guia para e/ muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
mezcla se Ie agregamrl 2,5 ml de una disoluci6n de acido tiobarbiturico (TBA) al 0.5% PN en
acido tricloroacetico (TCA) al 20% PIV incubandose la suspensi6n a 95C durante 30 min.
Transcurrido ese tiempo, la muestra se enfri6 sobre bano de hielo con el objetivo de detener la
reacci6n, se centrifugo a 6500 rpm durante 10 min y posteriormente se filtro. Se ley6 en el
sobrenadante la absorbencia a 532 nm, restando la absorcion no especffica a 600 nm (Stewart
and Bewley, 1980). La cancentraci6n de malondialdehido (MDA) se calcul6 a partir de = 155
nM-'.cm-
1
(Heath and Packer, 1968) yel resultado se expreso en nmol. g-' PS.
Contenido de azufre
A una muestra de 2 g de material seeD se Ie agregaron 2,5 mL de soluei6n saturada de
Mg(N0
3
h, ealentando en estufa electrica hasta lIegar a sequedad. Posteriormente la mezcla se
lIev6 a 500C en una mufla durante 30 min hasta la.obtencion de eenizas blaneas, las cuales
fueron resuspendidas en 2,5 mL de HCl 6N. Se filtr6 y la soluci6n resultante se lIevo a
ebulliei6n durante 2 min enrasando luego a 50 mL con agua destilada (Gonzalez and Pignata
1994). Mediante estos pasos se asegura la oxidaci6n y liberacion del azutre tanto organico
como inorganico el cual es transformado en sulfatas, encontrandose como MgS0
4
soluble en
medio a.cido. Por otro lado, mediante la calcinaci6n se elimina la materia organica presente.
El contenido de sulfatos en la soluci6n resultante se determino a partir de un metoda
turbidimetrico mediante la precipitaci6n de los sulfatos con BaCl
z
. Su cuantiticacion fue
realizada espectrofotometricamente a 420 nm a partir de una curva de calibraci6n y el resultado
fue transformado en contenida de azufre cuya concentraci6n se expreso como mg. g-lpS.
Determinacion de la conductividad ellktrica
Para esta determinacion se emplearon hojas de Tillandsia enteras, a fin de evitar la
ruplura de los tejidos y la destrucci6n de membranas con la consecuente perdida de iones.
Aproximadamente 2 9 de material vegetal fueron sumergidos en 50 mL de agua ultrapura
durante 2 h a temperatura ambiente (Pearson, 1985). La conductividad electrica se midio solo
para las muestras de los dos ultimos muestreos, con un ConducHmetro Oalkton WD-35610 y
electrodo de vidrio. Se realizaron 5 replicados par muestra y la conductividad eh3ctrica (CE) se
expres6 en mS.m
1
.g"lPS.
fndice de dana foliar
Se caleul6 un indice de dana foliar (IDF) mediante la combinacion de parametros
quimicos (biomarcadores), teniendo en cuenta aquellos que aumentan en la planta cuando es
dariada par etecto de eontaminantes can respecto al valor media que presentan
estos parametros en el total de las muestras earrespondientes a un mismo periodo de
exposici6n (Gonzalez and Pignata, 1994; Cuny et aI., 2002). Asl por efecta de la contaminaci6n
se observarfa un aumento en la degradaci6n de Cl-a (Ruth and Weisel, 1993), aumento en la
peroxidaci6n de Ifpidos de membrana (Sakaki et aI., 1985) y aumento en la concentracion de
azufre (Garty at aI., 1985).
-77-
Gufa para el muestreo de Ifquenes y plantas eplfitas como biomonitores en Latlnoamerica
lDF = [( CI-b/CI-a)+(S/Smedio)] x [(MDAlMDAmedio)+(HPDC/HPDCmedlo)) x [PS/PF]
Donde:
CI-b/CI-a = relacion entre la concentraci6n de clorolila by clorofila a.
MDA = concentraci6n de malondialdehfdo de cada muestra.
MDA
medio
::: es el valor promedio de malondialdehido calculado a partir de todas las
determinaciones para ese periodo de muestreo.
S = es Ja concentrad6n de azufre de cada muestra.
Smad'o::: es el valor promedio de azufre calculado a partir de todas las determinaciones
para ese periodo de muestreo.
HPDC = concentraci6n de hidroperoxidienos conjugados de cada muestra.
HPDC"'''d;o = es et valor promedia de hidroperoxidienos conj ugados calculado a parti r de
todas las determinaciones para ese periodo de muestreo.
Analisis de metales
a) AnaJisis por Fluorescencia de Rayos X-Reflexi6n Total (TXRF)
Para la cuantificad6n por TXAF de los metales depositados ylo incorporados en los
,
biomonitores, muestras de 2 9 de peso seco lueron reducidas a cenizas (550 QC durante 4 h).
Las cenizas fueron digeridas con una mezcla de acidos clorhidrico 18%: nftrico concentrado
(3:1) a calor moderado; el residuo s61ido fue separado por centrifugaci6n. Finalmente la
soluci6n resultante fue diluida con H
2
0 ultrapura hasta completar 25 mL. A esta soluci6n se
agregaron 20 ppm de solud6n de Ge como estandar interno y luego se tomaron alicuotas de 5
III que se secaron sabre soportes acrflicos. la concentraci6n de los elementos lue
determinada mediante Fluorescencia de Rayos X- Total (TXAF) can radiaci6n
Sincrotron (Fig. 6). Siguiendo el mismo procedimiento se prepar6 y analiz6 material de
referencia certificado (IAEAN-10 Hay Powder). Ademas sa prepararon y analizaron soluciones
estandar con concentraciones conocidas de diferentes elementos, para la calibraci6n del
sistema.
las muestras fueron medidas durante 200 s, usando el equipo de reflexi6n total
montado en la linea de Fluorescencia de Rayos X del laboratorio Nacional de luz Sincrotron
(lNlS), Brasil. Para la excitaci6n de las muestras se emple6 un haz policromatico de 0.3 mm
ancho y 2 mm de alto. EI detector empleado fue un semiconductor HPGe, con una ventana de
entrada de Be de 25 Ilm; la energfa de resoluci6n fue de 165 eVa 5.9 keV.
-78-
Gufa para el muestreQ de Ifquenes y plantas eplfltas como biomonitores en Latinoamerica
.- .. Experiment
I'e
- Fitting
li5 10
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III
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VI
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M
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Rb
1'1
C
.
r
Sr
2 4 6 8 10 12 14 16 18
Energy (keV)
Figura 5.2. Espectro de TXRF obtenido al
mediruna muestrade T. capiflaris.
La tecnica de TXRF es una poderosa herramienta analitica para la determinacion de
elementos traza en diferentes tipos de muestras. Como todas las tecnicas de dispersi6n de
energfa permite determinarde manera simultanea gran cantidad de elementos y presenta una
geometrfa de excitaci6n especial. Ademas, la posibilidad de optimizar las condiciones de
excitaci6n permite negar a Iimites de detecci6n muy bajos, en el orden de los fg para los
elementos con numero at6mico (2) intermedio como Mn, Fe, Co, Ni y Cu. Sin embargo, estos
resultados dependen de la fuente de rayos X empleada en relaci6n a la intensidad, energfa,
estadodepolarizaci6n ydistribuci6nespectral.
En este sentido, el alto brillo con flujo extremo de fotones sabre la muestra, la
colimaci6n natural, polarizaci6n linear, y la posibilidad de seleccionar la energia mediante
monocromadores, hacen que la mejor fuente de rayos X sea la radiaci6n sincrotron. Esto
implica la posibilidad de excitar un elemento de interes con mayor eficiencia, a bien suprimirla
mayoria de los elementos ydejar s610 aquellos de interes, evitando la superposicion de picas
(Wobrauscheketal., 1996).
Ademas, par requerir muestras muy delgadas, la conversi6n de las intensidades de
fluorescencia (I) en datos de concentraci6n (C) es muy sencilla. A partir de determinaciones
realizadasen soluciones deconcentraci6n conocida, se construyeunacurvadecalibraci6n que
permite realizar rapidamente la conversi6n de I en C (Fig. 5.3). Mediante la adicion de un
elemento de concentraci6n conocida como estandar interno, que no este presenle en
cantidades significativas en las muestras, se puede mejorar la calidad de las mediciones
debido aque deeste modose eliminan los errores volumetricos ygeometricos. Los resultados
fueron expresadoscomoIlg.gPS-1 (ppm).
-79-
Gulaparaelmuestreodeliquenesy plantasepifitascomobiomonitoresenLatinoamerica
012 0,04
nt =0.092.[Ni) Int=O.029.[Pb}
2 =0.997
R'.0980 /0
/
0.00, , , , , , , o o o ~ ",.:-'-.....,-,-----r,---..,-----"
0,0<1 017 037 0,$8 0.79 0,99 1.20 MO ~ Qro OM 13
Ni,oneentr alion Pbeoncenlrabon
a) b)
Figura 5.3. Regresi6n lineal entre Jas intensidadesdefluorescencia y laconcentraci6n de
los elementos: a) Ni yb) Pb.
b)AmillsisporEspectrofotometriadeAbsorcionAtomica(AAS)
Para el analisis de metales pesados mediante Espectrofotometria de Absorci6n
At6mica (AAS) se parti6 de la soluci6n final preparada para el analisis por TXRF la cual fue
,analizada en un espectrofol6metro de absorci6n at6mica Buck 210-VGP, con llama
aire/acetileno ycorrecci6n debackgroundpara deuterio. EI control decalidad de los resultados
obtenidos par este metodo se realiz6 mediante el analisis regular (cada 20 muestras) de
material de referencia certificado IAEAIV-10 Hay Powder. Los resultados fueron expresados
como~ g g PS
1
(ppm). '
CaracterizaciondelosslUosdemuestreo
Con el prop6sitoderelacionar0 interpretarlos resultadosseg0nlascaracteristicasdel area
de muestreo, los sitios de recolecci6n de los biomonitores fueron categorizados segun la
proximidadafuentes de emisi6n0 usosdel suelo. Las variables ylas categorfas consideradas
fueron lassiguientes:
(a) Industria: se adjudic6 la categoria 1, a los silios sin industrias; el valor 2 se asign6 a
sitioscan industriaspequenas amenosde 10km delpuntademueslreo; yel valor3 se
asigno asilioscon induslriasgrandesamenosde 10km dedistancia.
(b) Transito vehicular: se Ie asign6 el valor 1alos sitios sin rulas0 caminospavimentados
a menos de 2 km; 2 a sitios con rulas provinciales a menos de 2 km; y el valor 3 fue
asignado asitioscon rutasnacionalesamenosde2km.
(c) Mineria: para esta variable se Ie asignaron a los silios de mueslreo los siguienles
vafores: 1a sitios sin minasdentrode un radiodemasde 10km;2as;liosdemueslreo
can minas situadas entres5km y10km; y3asitios con minasamenosde 5km.
(d) Agricultura: se lorna asta variable en consideracion debido a que una gran parte del
area de estudio esta dedicada a la agricultura. Las categorfas fueron: 1, sitios sin
actividad agricola; 2, sitios can poca actividad agrfcolay el valor3 fue asignado asitios
dondepredominalaactividadagricola.
(e) Incendios: los incendios la provincia de Cordoba se desarrotlan principalmente a fines
del periodo invernal. Estos han ido variando durante los distintos anos, siendo las
superficies afectadas en los arios donde se efectuaron los muestreos las siguientes:
89920ha la superficieafectada en el ano 2000; 83173ha parael ario 2001 yenel ana
2002 la superficie afectada fue de 104773 ha. Esta variable fue categorizada, para
cada ano de muestreo, teniendo en cuentaincendios de mas de 10 hade superficie y
-80-
i
-19.,---------------------, -29.,---------------------,
-'0 -30
-" -"
-11
-33
,"
~
-f>]
Figura 5.4. Mapa de ta actividad industrial
ell el area de estudio.
-35
-65 -63
Figura 5.5. Mapa de la distribuci6n del
transito vehicular en el area de estudio.
s
e
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la
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sa
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fines
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intes:
!I ana
para
lieie y
G(Jia para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como blomonitores en Latinoamerica
can menos de 9 meses de ocurrido a la fecha de muestreo. Las categorias fueron las
siguientes: el valor 1 se Ie asign6 a los sitios sin incendios a menos de 10 km; el valor 2
a sitios con incendios a menos de 10 km y mas de 5 km; y par ultimo el valor 3 fue
asignados a aquellos sitios con incendios a menos de 5 km.
Posteriormente y para una mejor visualizacion, las variables ambientales fueron
representadas mediante un programa de mapeo. Los mapas creados para las variables:
Industria, Transito, Mlneria y Agricultura se presentan en las Figuras 8, 9, 10, 11
respectivamente. Para la variable Incendios se realizaron tres mapas, cada uno
correspondiente a un ana de muestreo (Fig. 5.4 a 5.9).
-81 ~
Gu(a para el muestreo de liquenes y plantas epffltas como biomonitores en Latinoamerica
79,--------------------, : l ~
)0
3t
33
3{
31
32
35
-6. -6J .2
Figura 5.6. Mapa de la actividad minera Figura 5.7. Mapa de la aclividad
en el a'rea de esludia. agricola en el area de estudio.
. ~ g .
JO
31
oJ]
.J'
lS
-82 -66 -El;
Figura 5.8. Mapa de incendios en er area
estudio para el primer ana de mueslreo
-79,-----------------.
-30
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-32
-J)
34
-35
I
-6' -G'J 62
Figura 5.9. Mapa de incendios en el area
de estudio para el segundo ana de muestreo
-82-
d
area
Jeo
Guia para el de Ilquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
Analisi,s estadfstlco
A lin de contar con un sistema de registro adecuado, en cada punto de muestreo se
tomaran coordenadas geograficas, mediante un geoposicionador satelital (GPS),
Con los datos obtenidos se realiz6 ancilisis de correlaci6n (Pearson y Spearman),
analisis discriminante can6nico, analisis de cluster y analisis de la varianza (ANOVA). Cuando
se detectaron diferencias significativas en el ANOVA a un. nivel igual 0 menor a 0.05 se emple6
el test LSD.
La distribucion g,eognMica de las concentraciones de los elementos analizados en los
biomonitores fueron representados mediante un programa de mapeo (Swier Mapping System,
Golden Software, 1994), Este programa transforma los datos los datos en un modelo de
distribucion continua, mediante Kriging como algoritmo de interpolacj6n (Olea, 1974). La
influencia de un punto de muestreo sabre los otros es, par 10 tanto, inversamente proporcional
al cuadrado de la distancia.
Resultados
Analisis de cluster
Se realiz6 un analisis de cluster, complementario del analisis discriminante para los tres
anos de muestreo can e1 fin de determinar el grado de asociaci6n entre las especies. Las
var"lables utilizadas lueron las mismas que las empleadas en el analisis discriminante y, previa
al analisis, los datos fueron estandarizados. En el dendrograma (Fig. 5.10) se observa que T.
,
trichofepis aparece separada de las otras dos especies, similar a 10 encontrado anleriormente
en el analisis discriminante, 10 cual confirma que esta es la especie que mas diferencias posee
can respecto a las otras dos.
Encadenamlento Completo (Complete linkage)
DistBflCiB: (Eucfidca)
T, ....,
T. ------ ---,
T. capillaris ----'
I \
0.00 2.11 4.22 6.32 8,43
Figura 5.10. Dendrograma de las especies en base a todos los
parametros qufmicos (marcadores fisiol6gicos y de acumulaci6n
elemental) medidos en las mismas durante tres anos de
muestreo.
-83-
Guia para ,el muestreo de liquenes y plantas epifitas como b/omonltores en Latinoamerica
Correlacio" entre las variables categorlcas y las variables cuantificadas en los
biomonitores
Con el prop6sito de relacionar las variaciones en los parametres cuantificados en hojas
de los biomonitores con las diferentes fuentes de emisi6n de contaminantes presentes en la
zona de estudio, se rea[jzaron correlaciones (Spearman) entre las variables categ6ricas
asignadas a cada categoria de fuentes y los parametros cuantificados en los biomonitores. Se
exceptuaron de este analisis el contenido de los pigmentos (Carat, CI-a, CI-b, Feof-a y Feof-b)
ya que en un analisis anterior se observ6 Que estos muestran una fuerte dependencia can los
niveles altitudinales.
T. capillarls
En esta especie la relacion CI-b /CI-a correlacion6 positivamente con las variables
Industria y Agricultura en el primer y tercer ano de muestreo (Tabla 5.1). De acuerdo con
Puckett et al. (1973), GadaUah (1994), Drazkiewic (1994), AbdeI-Basset et aI., (1995), Ewais
(1997) y Manios et aI., (2003) la relaci6n entre el contenido de clorofila b y el de clorofila a es
un buen indicador de dano fisiol6gico pravocado por polutantes ya que la clorofila a es mas
labil. Estudios realizados con diferentes especies de Tilfandsia han mostrado que ta relaci6n CI-
b/CI-a es independiente del contenido de pigmentos que posee la planta (Martin et aI., 1986;
1999; Maxwell et aI., 1995) 10 cua! permite comparar sitios diferentes 0 con diferentes altitudes.
En zonas con alta densidad industrial el dano en el bioindicador podrfa deberse a estas
emisiones, asi como tambien en menor medida por et t r n ~ t o vehicular. Entre los principales
polutantes en zonas urbanas e industrializadas pueden mencionarse los oxidos de nitrogeno,
oxidos de az.ufre y metales pesados (Heath, 1980; Koziol and Whatly, 1984; Winner et aI.,
1985).
En zonas agricolas el dana puede atribuirse al efecto de la utilizaci6n de agroqufmicos
(fertilizantes, herbicidas, insecticidas, etc). En Argentina se ha observado un incremento en la
utilizaci6n de agroquimicos en los ultimos anos (Giuffre de Lopez Carmela et a!., 1996; Ghida
Daza, 2005). Estos compuestos, no solo poddan aumentar la degradaci6n de pigmentos, tal
como se observa mediante la relaci6n CI-b/ CI-a, sino tambien pueden afectar las membranas
biol6gicas, aumentado las peroxidaciones lipidicas en elias. En este sentido en el segundo ana
de muestreo, se observ6 una correlaci6n significativa entre la variable Agricultura y los niveles
de HPDC en hojas de T. capillaris.
-84-
!s
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0,
aI.,
COS
n la
1ida
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'eles
Guia para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonltores en Latinoamerica
Variable Industria Trimsito Minerfa Agricultura Incendios
CI-b/CI-a 0.44*** 0.31*
Feof-aiCI-a
HPDC
PS/PF
MDA
S 0.60"* 0.35' 0.38'
[OF 0.33*
V 0.47***
Mn 0.33"" 0.34"
Fe
Co 0.32"
Ni 0.43**
Cu
Zn 0.42" 0.32'
Pb
K 0.41"
Ca 0.32<-
Sr 0.41
Sr
Nivel de significaci6n: " p < 0.05; ... p< 0.01 ; ..... P <0.001.
Tabla 5.1. Coeficientes de correlaci6n entre variables ambientales categ6ricas
y parametros quimicos cuantificados en T. capilfaris (1 er ano de muestreo).
T. permutata
Las correlaciones entre las variables ambientales y los parametros cuantificados en
hojas de T. permutata para los tres anos de mueslreo 'Indican que la variable Industria es la que
m.ostr6 el mayor numero de correlaciones can los parametros de acumulaci6n cuantificados en
T. permutata: (S, V, Mn, Fe, Co, Cu, Zn, Pb, Ca, Sr y Sr (Tabla 5.2). Sin embargo las variables
Agricultura e Incendios fueron las que en mayor medida correlacionaron con parametros
fisiol6gicos indicadores de dana foliar.
AI comparar los resultados obtenidos en el primer ano de muestreo para esta especie
can los encontrados en el primer ana de muestreo en T. capillaris se observa un patr6n de
correlaci6n similar al encontrado en T. capillaris.
T. permutata presenl6 diferencia en su respuesta con respecto a T. capillaris, ya que el
IOF en esta especie correlacion6 con la variable Incendios, mientras que en T. capillaris
correlacion6 con la variable Industria; en T. permutata el contenido de Pb correlacion6 can
Industria y Transito.
-85-
Guia para el muesfreo de IIquenes y plantas ,epifitas como biomonitores en Latlnoamerlca
Variable Industria Transito Mineria Agricultura 'ncendios
CI-b/CI-a 0.35-
Feof-a/CI-a 0.3r
HPDC
PSJPF 0.38-
MDA
$ 0.37** 0.42-
iDF 0.35-
V 0,45**
Mn 0.49"
Fe 0.35*
Co 037*
Ni
Cu 0.50**
Zn 0.54"" 0.44"
Pb 0.52"" 0.38"
K
Ca 0.38"
Br 0.40"
Sr 0.40"
Nivel de significaci6n: * p < 0.05; ** p< 0.01; u .." P <0.001.
Tabla 5.2. Coeficientes de correlaci6n entre variables ambientales
categ6ricas y parametres quimices cuantificados en T. permutata (1
or
ano
de muestreo).
T. trichoJepls
Los coeficientes de correJaci6n entre las variables ambientales y los parametros
cuantificados en T. tricholepis para los tres anos de muestreo indican para el primer ana de
muestreo que la variable Industria correlacion6 positivamente con el contenido de $, Co, Zn y
Pb en hojas. observandose un numero de correlaciones menor que el encontrado para la
misma variable en las otras dos especies (Tabla 5.3). La variable Transito correlacion6 can el
contanido de $ en eJ biomonitor.
En este ario tambien se observaron correlaciones entre el IOF, el contenido de MOA.
Mn y Cu; y la variable Agricultura, y par ultimo la variable Incendios correlacion6 con eIIOF.
-86-
.a
netros
LJ10 de
), Zn y
lara la
con el
iMDA,
IF.
Guill para el muestreo de liquenes y plantas epffitas como' biomcmitores en L.atinoamerica
Variable Industria Transito Mineria Agricultura Ihcendios
'CI-b/CI-a
Feof-alCI-a
HPDC
PS/PF
MDA 0.53
S 0.50* 0.49
IDF OAr 0.60
Co 0.52'
Fe
Zn 0.49'
Mn 0.64**
Ni
Cu 0.48'
Pb 0.42*
(
Nivel de significaci6n: p < 0.05; ** p< 0.01;** p <0.001.
\.
Tabla 5.3. Coeficientes de correlaci6n entre variables ambientales categ6ricas
y parametros cuantificados en T. tricholepis (1er ano de muestreo).
Mapas de dlstribucion geografica (Mapeo)
Cuando se realizan esludios de biomonitoreo, par 10 general se manejan gran cantidad
de variables, sitios, condiciones ambientales, etc. Esto puede determinar que algunos de los
resultados a conclusiones oblenidas sean mas importantes que olros. Tambien, cuando se
presentan resultados dificiles de interpretar 0 que no se cuente con una explicaci6n 16gica de
elias, es de suma importancia la realizaci6n de distintos analisis de los datos a fin de confrontar
resultados.
Can el proposito de conocer la distribuci6n espacial de los diferentes elementos
medidos en los biomonitores en el area de estudio, y ademas, confrontar estos resultados con
los obtenidos en los analisis anteriores se construyeron mapas de distribuci6n para los mas
representativos. Para las variables que correlacionaron significativamente entre los diferentes
anos (S, Mn, Cal se construyeron mapas de distribuci6n geogratica tomando como valor de
cada sitio el valor medio de los valores obtenidos en los tres aflos de muestreo. No se
realizaron mapas de distribuci6n con los parametros cuantificados en el biomonitor T.
fricholepis debido a la escasa distribuci6n de la especie en el area de estudio.
T. capillaris
En la Figura 5.11 sa presenta el mapa de distribuci6n de la concentraci6n de azufre
medida en hojas del o ~ o n t o r T. capillaris, correspondiente a los datos de la media aritmetica
obtenida para los tres anos de muestreo. Esle parametro correlacion6 en todos los anos de
muestreo, 10 cual denota una distribuci6n similar en una escala temporal yespacial.
-87-
Guia para eJ muestreo de Jiquenes y plantas eplfitas como biomonitores en Latinoamerica
En el mapa de distribuei6n se observa que las concentraciQnes mas altas de esle
elemento en hojas de T. capillaris co,mspondieron al cenlr,o del area de esludio, donde esla
locatizada la ciudad de Cordoba (Sitio 42). Ademas, tambien se observ6 una elevada
concenlraci6n en la zona Este del area de esludio correspondiente a zona de cullivos en la
,provincia. En el analisis de correlaci6n enlre elemenlos y variables ambientales, la
eoncentraei6n de azufre en hojas de T. capillaris correlaeion6 durante los tres arios de
mueslreo con las variables Industria, Transito y Agricultura; con 10 eual se puede atribuir un
origen antropico. Sudistribuci6npermitirfaidentifiearlas fuentesdeemisi6n paraeste elemento
en el areaestudiada.
Figura 5.11. Distribuci6n de la coneentraci6n de Azufre (mg.g"' PS)
cuantificada en hojas de T. capillaris en el areade estudio para~ t s
aiiosdemuestreos.
Ladistribuci6n deMn medidoen hojasde T. capillaris se muestraen laFigura5.12. En
un anal isis anterior, esle elemento correlacion6 durante todos los arios can la variable
ambiental Agriculturayen los dosprimeros aiioscon lavariable Industria.
Figura 5.12. Distribuci6n delaconeentraci6n deMn (/lg.g"l) medida
en hojas de T. capillaris en el areade estudio para lostres anosde
muestreos.
En la distribuei6n espacial se observaron mayores coneentraciones de este metal en
las hojas de T. capillaris en el noreste del area de estudio, 10 cua] se podria atribuir a la
-88-
I

e
a
ja
la
la
tie
un
to
2. En
riable
fletal en
luir a la
Guia para el muestreo de liquenes y plantas epffitas como biomonitores en Latinoamerlca
remocion de sue/os par actividades agrfcolas. La expansion de la frontera agricola en la
Provincia de C6rdoba comprende las zonas Norte y Este de la Provincia, donde los campos en
eslas zonas, fueron desmontados para dar lugar a esla actividad. Debido a eslo, y a que no
presentan condiciones 6ptimas para la agricultura, si los comparamos can suelos encontrados
en el sureste de la provincia, esla ampliaci6n supuso un mayor usa de fertilizantes y
agroquimicos que los utilizados en zonas propiamente agricolas (sur y sureste provincial).
La distribuci6n de la concentracion de Pb en hajas de T. capillaris en el primer ana de
esludio (Fig. 5.13) mostro las mayores concentracianes de este elemento en la zona Norte del
area de estudio. Esta distribuci6n de Pb en hojas de T. capillaris podrfa atribuirse a la aclividad
cinegetica (caza de palomas en cuya actividad se emplean municiones de plomo) presente en
esa area en particular, 10 cual aportarfa una gran cantidad de Pb al ambiente.
Figura 5.13. Distribucion de la concentracion de Pb (1l9.9
1
) medida en
hojas de T. capillaris en el area de estudio para el primer ano de
muestreo.
En el segundo periodo de muestreo se observo que la concentracion Pb present6 una
distribuci6n que difiere en algunas areas de la distribucion a la encontrada para el primer ana
de muestreo (Fig. 5.14). Este ano, igual a 10 observado en el primer ana, presenta una
concentraci6n elevada en el Norte del area de estudio, sin embargo tambien 58 observa una
zona can elevadas concentraciones en las hojas de T. capilfaris, correspondiente al Sur del
area de estudio.
La elevada concentraci6n de Pb en hojas de T. capillaris encontrada en la zona sur
puede atribuirse a la presencia de palos Industriales en esa zona, como por ejemplo: Rio
Tercero y General Deheza, ya que para aste periodo y este elemento la concentraci6n de Pb
en el biomonitor correlacion6 con la variable Industria. Ademas para este ano de muestreo la
concentracion de Pb en hojas del biomonitor correlacion6 con la variable Industria.
En el mapa de distribuci6n de Pb en hojas de T. capilfaris en el tercer ano de muestreo
(Fig. 5.15) muestra claramente un area de mayor concentraci6n de este elemento en la zona
que corresponde a la localidad de de RIo Tercero, coincidiendo con 10 encontrado en el analisis
-89-
Guia para el muestreo de Jfquenes y plantas epifltas como biomonJtores en Latinoamerica
de carrelaci6n, ya que este elemento mastr,6 para este aria et mayor coeficiente de correlaci6n
can la variable Industria.
Figura 5.14. Distribuci6n de la concentraci6n de Pb (J..lg.g.1) medida en
hojas de T. capillaris en et area de estudio para el segundo ana de
muestreo.
Figura 5.15. Distribuci6n de la concentraci6n de Pb (J..l9.g.1) medida en
hojas de T. capillaris en el area de estudio para el tercer ana de muestreo.
Los mapas de distribuci6n de la concentraci6n de Zn media en hojas de T. capillaris
para los tres a;;os de muestreos se presentan en las Figs. 5. 16 a 5.18.
il
Ipillaris
Gula para el muestreo de flquenes y plantas epffitas como biomonitores en Latinoamerica
Figura 5.16. Distribuci6n de la concentraci6n de Zn (Jlg.g.1) medida en
hojas de T. capillaris en el area de estudio para el primer ario de
muestreo.
..

Figura 5.17. Oistribuci6n de la concentraci6n de Zn (Jlg.g'l) medida en

hojas de T. capillaris en el area de estudio para el segundo ana de
muestreo.
- ~ ...
......
,oft ... #; , ..............
"""oa 4 I I - G ~ ~ ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' ' .. . . ... ' .........,
~ : ~ ' ......~
.... P:
...
Figura 5.18. Distribuci6n de la concentraci6n de Zn (lLQ.g") medida en
hojas de T. capiflaris en el area de estudio para el tercer ana de
muestreo.
-91-
, ,
Gula para eJ muestreo de Jiquenes y plantas epififas como bJomon/tores en Latinoamerica
Los tres mapas de distribucion para este elemento muestran claramente que las zonas
eon mayores niveles de Zn eorrespondieron al centro del area de estudio, localizaci6n proxima
ala ciudad de Cordoba y a la zona oeste de asta (Carlos Paz, Cosqufn, La Falda).
Debido a que los muestreos fueron realizados en epoca estival, esta elevada
concentraci6n de Zn en hojas de T. capillaris podrfa reflejar la gran cantidad de vehfculos
presentes en esta zona por la actividad turfstica ya que una de las fuentes de Zn es el empleo
de catalizadores (Helmers, 1996), desgaste de neumaticos, aeeites lubricantes y cintas de
frenos (Ward, 1989; Block, 2005; Viard et aI., 2004).
Debe senalarse que la concentracion de este elemento correlacion6 en todos los anos
can las variables Transito e Industria, 10 cual es reflejado en los mapas de distribuci6n
realizados.
Las concentracion de Ca en las hojas de T. capillaris mostr6 correlaci6n entre todos los
anos de muestreo por 10 cual el mapa que presenta la distribuci6n de la media aritmelica de su
concentraci6n durante los tras anos en hojas de T. capilJaris (Fig. 5.19) es considerado como
representativo de su distribuci6n espacial. La zona que present6 las mayores concentraciones
de este elemento correspondi6 a la ubicaci6n de las Canteras Quilpo (Mineria). productoras de
cal. Este elemento correlacion6 en los tres anos can la variable Industria y solo en el segundo
ano can la variable Mineria. Sin embargo, el mapa de distribucion realizado can la media
aritmetica de los tres anos de muestreo puso de manifiesto que el aporte por mineria es el mas
importante para el area de estudio.
Figura 5.19. Distribuci6n de la concentraci6n de Ca (}lg.g-l) medida en
hojas de T capillaris en el area de estudio para los tres anos de
muestreos.
Los mapas de distribuci6n del contenido de Cu en hojas de T. capilfaris, para el
primero, segundo y tercer ario de muestreo se muestran en las Figs. 5.20 a 5.22
respectivamen1e.
-92-
Qu(a para eJ muestreo de liquenes y plantas epffitas como blomonltores en Latinoamerica
el
Figura 5.20. Distribuci6n de la concentraci6n de Cu (l-lg.g.
1
)
medida en hojas de T. capillaris en el area de estudio para el
primer ano de muestreo.
Figura 5.21. Distribuci6n de la concentraci6n de Cu (1-l9.9-
1
) medida
en hojas de T. capillaris en el area de estudio para el segundo ana
de muestreo.
Figura 5.22. Distribuci6n de la concentraci6n de Cu (Jlg.g'l) media
en hojas de T. capillaris en el area de estudio para el tercer ana de
muestreo.
.22
Guia para el muestreo de /iquenes y plantas epif/tas como bfomonitores en Latinoamerica
En el primer ano de mueslro, los mayores canlenidos de Cu en T, capillaris se
observaron en et Noreste y Oesle del area de estudio. En el segundo ana ef mapa de
distribuci6n lue diferente y la zona can mayor concentraci6n para este elemento correspondi6 a
la ciudad de C6rdoba (Sitios 42 y 42,1).
Para el ultimo muestreo el mapa de distribuci6n en la concentraci6n de este elemento
mostr6 un perfil intermedio entre los dos alios anteriores. Sin embargo, los valores medias y
maximos en la concentraci6n de Cu fueron mayores en el segundo ano de muestreo 10 que
podria indicar un mayor aporte de esle metal par la actividad Industrial presente en la ciudad de
C6rdoba. Para este ano de muestreo este elemento no solo correlacion6 can la variable
Industria, sino que tambien mastr6 correlacianes can las variables Minerfa e lncendios, aunque
eslas ultimas variables no se re11ejaron en e! mapa de distribuci6n.
Las Figuras que muestran la distribuci6n espacial del IOF calculado en hojas de T.
capillaris en los tres anos de muestreo (Figs. 5.23 a 5.25) permiten inferir que este parametro
mostr6 variaciones durante los diferentes muestreos.
Para el primer ano se observaron los valores mas altos del IOF en la zona de Jesus
Maria y alrededores. Si bien para esta ano el IOF correlacion6 con la variable Industria, el
mapa de distribuci6n no mostr6 los mayores valares del IOF en ciudades can mayor actividad
Industrial como C6rdoba 0 Rio Tercero sino en areas con actividad agricola.
Figura 5.23. Oistribuci6n del IOF calculado en hojas de T. capillaris en
el area de estudia para ef primer ana de muestreo.
La distribuci6n de IOF en el segundo y tercer ario de muestreo (Figs. 5.24 y 5.25)
mostr6 los mayores valores en el Este del area de estudio, la cual corresponde a un area
principalmente agrfcola. En coincidencia con el mapa de dislribucion en el tercer ano de
muestreo ellOF correlacion6 con la variable Agricultura.
-94-

Ie
e
T.
:ro
US
el
lad
5.25)
\ area
no de
Gura para el muestreo de liquenes y plantas epffitas como b;omonitores enLatinoameriCii
......... ".
Figura5.24. Oistribuci6n del IOFcalculado en hojas de T. capdlaris en
el areadeestudioparael segundo ana de muestreo.
Figura 5.25. Oistribuci6n del IOF calculado en hojas de T. capillaris en
el areade estudioparael terceranodemuestreo.
Conclusiones
Seobserv6que T. capillaris es laespecie con mayorhabilidadpara la acumulaci6nde
los elementos analizados(WannazetaI., 2006).
En T. capillaris se observ6 el mayor numero de correlaciones entre los parametros
cuantificados en hojas y las variables ambientales categ6ricas seleccionadas. Segun este
patron laactividadindustrialserralaprincipalfuentedeemisi6ndecontaminantes en el areade
estudio(WannazetaI., 2006).
Lapresenciade altas concentracionesde Pb yZnen hojasdelosbiomonitores es una
clarasenaldequelaemisi6ndeeste metalse relacionacon lapresenciadetransitovehiculary
altoscontenidosdeV, Co, Ni, Cu y Znestanrelacionadosconlaactividadindustrial (Wannazet
al.,2006).
-95-
Gura para el muestreo de Ifquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latlnoamerica
EI mapa de distribuci6n de la concenlraci6n de Ca en T. capillaris coincidi6 can la
presencia de minas de exlracci6n de carbonato de calcio (Wannaz et aI., 2008).
La especie Tillandsia capiflaris pueden ser utilizada para realizar biomonitoreo pasivo a
gran escala (Wannaz et aI., 2006; Wannaz et aI., 2008).
5.2. Biomonitoreo activo de la contamlnacion atmosferica empleando especles de
Tillandsia: Calibracion de especies
Objetivos
Calibrar y comparar la respuesta de especies del genero Tillandsia a fin de evaluar
si pueden ser empleadas como indicadoras de contaminaci6n almosferica, y establecer cuales
de elias pueden ser utilizadas en estudios de biomonitoreo activo.
Estudiar el grado de correlaci6n entre la deposici6n total en las distintas zonas de la
ciudad de C6rdoba y: a) las tasas de retenci6n de melales pesados y elementos traza en las
especies de Tillandsia y b) la respuesta fisiol6gica de estas especies.
Area de estudio
.EI area seleccionada para este esludio fue la cuidad de C6rdoba. localizada en e!
centro de la Republica Argentina (31
2
24' S. 64
Q
11' W) Y can una altilud aproximada de
aproximadamente 400 m. s.n.m (Fig. 5.26). La misma cuenta con una poblaci6n de alrededor
1.3 millones de habitantes (segun et Censo Nacional, 2001), siendo su topograffa irregular, en
,
forma de embudo y can una allitud menor hacia el centro de la ciudad. Esto reduce la
circulaci6n de los vientos produciendo frecuenles inversiones lermicas en el periodo frio (atono
e invierno) (Olcese and Toselli. 2002).
EI clima es sub-humedo, con una media anual de precipitaciones de 790 mm,
concentradas principalmente en primavera-verano. La le.t:nJ1eratura media anual es de 17.4 QC Y
los vientos que predominantes son del NE, S y SE.
La principal causa de conlaminaci6n del aire en la ciudad de Cordoba (centro) son las
fuentes m6viles (aulom6viles y transporte publico) (Stein and Toselli. 1996). EI transite
vehicular muestra un patr6n de emisiones eslrechamente relacionado con conlaminantes
primarios (CO, NO. Y PM
10
), 10 cual pone en evidencia que la conlaminaci6n en la ciudad es
ocasionada par estas fuentes (Olcese and Taselli, 2002). La ciudad de C6rdoba tam bien
cuenta can un impartante parque industrial, principalmente industrias metal-mecanicas, que se
localizan en el area periferica de la misma. principalmente en el sureste
-96-
Gula para el muestreo de /iquenes y plantas epifitas como biomonilores en Latinoamerica
N
+
Suroeste _
(Aesidencial)

Figura 5.26. Localizaci6n de los sitios de muestro (.) en la ciudad de
C6rdoba, Argentina, donde se trasplantaron los biomonitores y se lomaron
muestras de deposici6n total de material particulado atmosterico.
)
Material biol6gico y zona de recolecci6n
Plantas de Tillandsia capillaris Rufz & Pav. f. capillaris, Tillandsia permutata A. Cast.,
Tillandsia tricholepis Baker y Tillandsia rerorta Griseb. ex Baker, fueron colectadas en la
Reserva Natural "Dique la Quebrada", la cual esta localizada a 40 km de la ciudad de Cordoba
en direcci6n Norte. Este sitio tue seleccionado por encontrarse en 131 las cualros especies de
Tillandsia y ademas por estar alejado de fuentes de contaminaci6n importantes.
Se colectaron ejemplares del mismo tamano, y en similares condiciones de exposici6n
de las cuatro especies. Estas fueron colocadas en bolsas de papel para su transporte al
laboratorio. Un vez allf, tueron cuidadosamente limpiadas separando todo material extrano.
Part,e del material constituy6 el estado basal.
Trans,plante de las especles
Para el trasplante de las especies se utilizaron bolsas de red que contenfan 200 9 de
material vegetal, el cual tue acondicionado de acuerdo al procedimiento descripto par Gonzalez
y Pignata (1 994). Posteriorrnente las bolsas conteniendo las muestras de los bio monitores
fueron transplantadas simultaneamente a cuatro sitios de la ciudad de Cordoba, los cuales
presentaron diferentes condiciones 0 fuentes de cantaminaci6n atmosferica. En cada sitio 6
balsas de cada especie fue transplantadas sobre un soporte revestido can plasHeo y a una
altura del suelo de aproximadamente 3 m.
-97-
Gufa para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
EI pracesa de transplante camenz6 el dfa 14 de junia de 2002, y prasigui6 par el
termino de 6 meses (14 de diciembre 2002). La eleccion de junio como epoca para el inicio del
transplante se debi6 a que este es un mes con pocas precipitaciones can una temperatura
media baja, can 10 cual, se hat6 de minimizar el electo del clima sobre la adaptaci6n de los
biomonitores. En los meses siguientes tanto las precipitaciones como las temperaturas fueron
superiores, can 1o cual la presencia de dano sabre los biomonitores (a los 3 y 6 meses de
iniciada el transplante) no tendria como causa un electa climatico ya que las condiciones
metereol6gicas fueron mas lavorables que las condiciones aJ empezar el experimento.
AI cabo de 3 y 6 meses de exposici6n despues de comenzado el transplante, 3 bolsas
de cada especie fveron retiradas de cada silio de mueslreo. Las muestras de Tilfandsia lueron
conservadas a -15 QC en la oscuridad hasta la realizaci6n de los anaJisis quimicos
correspondientes. Las delerminaciones fueron realizadas en cada unidad de muestreo con 10
cual se canto con 3 submuestras independientes para cada sitio de muestreo. Del mismo
modo, se analizaron tres submuestras de cada especie antes de realizar el trasplante con el fin
de establecer el estado basal de la composicion de las mismas. Eslas muestras fueron
tomadas como referencia a fin de camparar los cambios que sufrieron los biomonitores
expuestos a distinlas condiciones de contaminaci6n atmosferica durante el periodo de
transplante.
Deposicion total
Para la evalluadon de la deposjci6n total atmosferica tanJo seca como humeda, se
prepararon colectores de deposici6n segun la metodologia descripta por Hewitt y Rashed
(1991). Los colectores cOrlstaron de recipientes de polipropileno de 5 L de capacidad a los
cuales se Ie agreg6 un embudo de plastico de 20 em de diametro. Estos fueron pueslos en
soportes y colocados en un numero de 6 por sitios a una altura de por 10 menos 3 m sabre el
niveJ del suelo. Los colectores de deposici6n total se ubicaron en cada sitio ef mismo dfa que
se transplantaron los biomonilores. Transcurrido el de exposicion (3 y 6 meses) se
retiraron (n=3 bidones/sitio) en el mismo momento en que se recolectaron los biomonilores.
Una vez en el laboratorio se les agregaron 10 mL de HN0
3
para su conservacion hasta su
tralamiento y analisis.
Zonas de transprante
Cuatro zonas en la ciudad de C6rdoba fueron seleccionadas para el transplante. Dos
de elias correspondieron a sitios con, supuestamente, alta contaminacion: una por transito
vehicular (Centro) y la otra por actividad industrial (Sureste). Las otras dos zonas
correspondieron a areas cesidenciales donde se esperaba encontrar un bajo nivel de
contaminaci6n atmosferica.
Zona Sureste 0 Industrial: corresponde a una zona con industrias metalurgicas y metal-
mecanicas (Ferreyra). Las muestras fueron colocadas en el techo de una industria (que posee
10.994 rn
2
de superficie), donde se fabrican cubas, tapas, tanques, radiadores, etc. Sus
principal'es sectores son: corte y plegado, mecanizado y pintura. Tambien funciona aUf un
sector de elaboraci6n de cables de cobre, con su respectivo sector de forrado.
Zona Centro: las rnuestras fueron colocadas en el centro de la ciudad de C6rdoba (entre las
calles Ituzaing6 y Corr'ieri.tes). En el lugar existen edificios, negocios, centros de compra y una
gran circulaci6n de velilfculos tanto de transporte privado como de transporte publico. Esta zona
ubicada en el microcentra de Ja ciudad presenta una escasa dispersi6n de los contaminantes.

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Dn
es
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lias
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Ires.
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)osee
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1m un
tre las
y una
a zona
1tes.
Guia para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
Zona Norte 0 ResidenciaJ N: corresponde a un area residencial sub-urbana (BQ Licea). En
esta zona el transito vehicular es menor al que se observa en el area central, correspondiendo
principal mente a vehiculos particulares y algunas Iineas de transporte que circulan por las
avenidas del barrio. Las muestras fueron colocadas en el techo de una casa de familia.
Zona 5uroeste 0 Residenclal SO: las caracteristicas de esta zona (BQ Vicor) fueron similares
a las descriptas para la Zona Norte con un nivel de transita similar y algunas calles sin
pavimentar. Las mueslras fueron colacadas en el techo de una casa de familia.
Cuantlficacion de metales pesados en los biomonitores
Las concentraciones de Mn, Fe, Co, Ni, Cu, Zn y Pb fueron analizadas por TXRF segun
la metodologia descripta en la Secci6n 5.1.
Cuantificaclon de metales pesados en las muestras de deposicion
La deposici6n total (seca mas humeda) en muestras colectadas en cada area y cada
periodo de exposici6n (3 y 6 meses) se evaporo hasta sequedad. EI residua se !lev6 a homo a
500 QC durante 4 h Y las cenizas lueron tratadas de la misma manera que las cenizas
correspondientes a las muestras vegelales. Posteriormente sa prepararon soluciones acidas
para su posterior medici6n par TXRF. Los resultados se exprasaron como mg/m
2
tiempo de
exposici6n.
Analisis quimicos en los bioindlcadores
Ver Secci6n 5.1.
Indice de dana foliar
Se ealcul6 un Indice de dana foliar (IDF) a partir de algunos parametros qufmicas
medidos en los biomonitores teniendo en cuenta aquellos que aumentan en la planta cuando
es danada por eleclo de contaminantes atmasfericos can respecto at valor obtenido en las
muestras basales, previo al t r n s p ~
As! por eleetas de contaminantes se observaria un aumento en la degradaci6n de CI-a
(Ruth and Weisel, 1993), aumento de los productos de oxidaci6n (Sakaki et aI., 1985) y
tambien aumento en la concentraci6n de azufre (Garty et aI., 1985).
IDF = [( CI-b/CI-a) + (S/Sbasall] X [(MDAI MDA
basal
) + (HPDC/HPDC
basa,
) ] x [PS/PFj
Donde:
Cl-b/CI-a= relaci6n entre la concentraci6n de c1arofila by c1orof(la 8.
MOA= concentraci6n de malondialdehldo de cada muestra.
MDA
basai
= es el valor medio en la concentraci6n de malondialdehfdo en las muestras basales.
S= es la concentraci6n de azulre de cada muestra.
Sbasal= es el valor media en la concentraci6n de azufre en las muestras basales.
HPDC== concentraci6n de hidroperoxidienos eonjugados de cada muestra.
HPDC
basal
= es el valor media en la concentraci6n de hidroperoxidienos conjugados en las
muestras basales.
AnaJisis estadfsticos
Con los datos obtenidos se realiz6 analisis de correlaci6n de Pearson, anfllisis de
regresi6n lineal y analisis de la varianza (ANOVA).
-99-
Gula para el muestre.o de IIquenes y plantas epffitas ,como bfomonitores en Latinoamerica
Resultados
Contenldo de meta'l'es pesados en muestras de deposici6n
En la Tabla 5.4 se presentan las concentraciones de los. metales analizados en
muestras de deposici6n tolal para las cuatro areas de estudio, tanto en las muestras expuestas
. durante 3 meses como en las expuestas durante 6 meses.
Para ambos periodos de exposici6n las concentraciones de Mn, Co, Fe, Ni, Cu y Pb
fueron mas alIas la zona Industrial, solo para Zn la deposici6n fue significativamente mayor en
la zona Centro. En las muestras correspondientes a los 6 meses de exposici6n, la deposici6n
de Co fue significativamente superior en las Zonas Industrial y Centro que en las Zonas
Residenciales. Estos altos niveles de deposici6n de metales pesados en el Zona Industrial
corresponden a emisiones provenientes de las industrias metalurgicas y metal-mecanicas
presentes en el area.
Por ouo lado, los niveles de deposici6n de Zn lueron superiores en e! centro de la
ciudad, probablemente relacionados con el transito vehicular. Altas concentraciones de Zn han
sido reportadas en areas can alto transito vehicular en atras regiones del mundo (Viard et aI.,
2004). Debido a que las emisiones provenienles del transito vehicular incluyen metales t6xicos
como Pb, Cd y Zn (Caussy et aI., 2003), estos alIos niveles de Zn en areas densamente
habitadas podrian lener eteetas adversos para la salud de la poblaci6n.
-100-
n
Gula para el muestreo de IIquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
Deposici6n (mg/m
2
despues de 3 meses) ANOVA
Zona Centro Zona Industrial Zona Res. N Zona Res. SO
Media DS Media OS Media DS Media t OS
Mn 6.09 1.13 b 18.00 2.51 a 4.29 1.53 b 7.48 1,46 b
H
Fe 409.6 66.6 b 1573.2 529.0 a 236.1117.2b 422.1 118.3 b *
Co 18.42 3.35 ab 27.72 9.20 a 3.85 1.31 b 6.00 1.02 b *
Ni 3.49 0.34 b 7.72 0.23 a 2.92 0.33 b 3.58 0.87 b **
Cu 9.75 0.84 b 29.71 1.11 a 1.96 0.86 c 2.99 1.34 e
...
Zn 797.33 41.29 a 28.69 0.35 b 12.39 2.70 b 10.77 2.99 b ***
Pb 6.60 1.55 b 18.35 4.58 a 2.76 0.52 b 2.17 0.50 b
..
Deposici6n (mg/m
2
despues de 6 meses)
Mn 8.14 0.37 b 31.40 3.85 a 11.54 2.65 b 19.98 4.19 ab
H
Fe 647.8 40.8 b 2762.8 259.6 a 536.8 293.4 b 688.9 194.2 b
..
Co 50.82 2.35 a 54.98 2.61 a 11.03 1.65 b 12.01 1.93 b
u.
Ni 10.26 0.60 ab 14.67 1.95 a 4.24 1.67 e 5.90 0.18 be **
Cu 25.40 1.77 b 59.06 10.51 a 2.96 0.57 c 4.53 0.06 be **
Zn 3965.0 643.4 a 98.98 35.44 b 42.42 11.64 b 20.51 1.11 b
...
Pb 14.43 1.36 b 34.08 7.31 a 6.84 1.98 b 3.71 1.06 b **
ns, no significativo. Los valores con la misma lelra no dirieren significativamente (Test a posteriori: LSD;
nivel de significaci6n: p < 0.05; p< 0.01; *-H P <0.001).
Tabla 5.4. Valores medias ( OS) de la eoncentraci6n de metales encontrada en muestras de
deposici6n total correspondiente a 3 y 6 meses de reco/eecian. ANOVA entre las
diferentes zonas de muestreo.
Acumulaci6n de metales pesados y dana fisiol6gico en hojas de Tillandsia
S610 se presentan los resultados obtenidos para T. capiflaris en las cualro zonas donde
fueron expuestas plantas de esta especie durante dos periodos de exposici6n (3 y 6 meses).
Las coneentraciones de todos los metales cuantificados se incrementaron a los 6
meses de exposici6n en todas las areas de estudio (Tabla 5.5), encontrandose los valores
maximos en la Zona Industrial. Esto fue observado tambien para Zn, aunque la deposici6n
atmosferica de este metal fue superior en la Zona Centro.
Los valores de coneentraci6n mas bajos de los metales cuantificados en T. capi/laris
eorrespondieron a las muestras transplantadas en las Zonas Aesideneiales 10 cual coneuerda
con los valores encontrados en las muestras de deposici6n total.
La alta tasa de deposici6n de Zn en la Zona Centro, no coincidente can su acumulaci6n
en el biomonitor, podr(a estar relacionada con una escasa selectividad en T. capillaris por este
metal. Despues de 3 meses de exposiei6n s610 algunos metales y en algunos sitios (Mn, Cu y
Zn) mostraron significativas en sus concentraciones si se comparan con las
eneontradas en las muestras basales. Puede eoneluirse, asf, que tres meses de exposici6n
-1
Gufa para el muestreC' de fiquenes y plantas epffltas como biomonftores en Latfnoamerica
para biomonitoreo activo, no es un tiempo adecuado para la utilizaci6n de T. capillaris como
biomonitor de acumulaci6n.
Mean tDS
Zona Centro Zona Industrial Zona Res. N Zona Res. SO
Mn
Basal 64.02 1.30 64.02 1.30 64.02 1.30 64.02 1.30
3 meses 102.16 12.39 69.01 19.88 92.27 10.64 114.159.71 Ns
6 meses 107.41 9.89 b 166.70 10.39 a 93.50 3.23 b 58.89 7.99 c
t-Test a 0;t3'; O;tS" 0;<6'" 0;t3'; 0;t6" 03**
Fe
Basal 929.2 182.1 929.0 182.1 929.0 182.1 929.0 182.1
3 meses
6 meses
1195.8 195.9
1851.4 186.4 b
1147.6 322.6
3789.9 280.7 a
1335.1 56.8
1811.5 287.5 b
1222.1 147.4
1192.8 65.9 c
Ns
,..
t-Test a 0#6' 0;t6'" 0;t6' Ns
Co
Basal 0.408 0.163 0.408 0.163 0.408 0.163 0.408 0.163
3 meses 0.546 0.096 0.498 0.129 0.509 0.010 0.509 0.001 Ns
6 meses 0.707 0.094 b 1.421 0.174 a 0.599 0.061 be 0.457 0.033c
".
I-Test a ns 01'6" ns Ns
Ni
Basal 1.0390.114 1.039 0.114 1.039 0.114 1.0390.114
3 meses 1.054 0.006 1.545 0.406 1.481 0.073 1.478 0.292 Ns
6 meses 1.713 0.064 b 3.521 0.259 a 1.358 0.169 be 0.983 ;t,,0.191c
I-Test a 0;t6" O;l!6'" ns Ns
Cu
Basal 5.890 0.671 5.890 0.671 5.890 0.671 5.890 0.671
3 meses 6.533 0.620 12.292 1.937 5.740 0.804 9.593 2.624 Ns
6 meses 9.255 0.139 b 64.082 4.749 a 7.911 1.099 b 4.855 0.430 b
t-Test a 0;t6" 0;t3'; 0;t6'" ns Ns
Zn
Basal 18.87 0.59 18.87 0.59 18.87 0.59 18.87 0.59
3 meses 30.09 5.36 30.95 12.03 25.72 6.11 29.22 2.01 Ns
6 meses 36.61 1.51 b 92.60 8.72 a 32.71 6.67b b 15.51 1.41c
t-Test a 0;i3'; O;tS'" 0;t6' 0;t3';0;f6-
Pb
Basal 3.183 0.926 3.183 0.926 3.183 0.926 3.183 0.926
3 meses 3.092. 1.543 5.302 0.391 2.615 1.244 2.187 0.720 Ns
6 meses 9.001 0.788 b 27.332 0.453 a 7.569 0.518 b 3.326 1.126c
I-Test a 06" Ns
IDF
Basal 0.595 0.012 0.595 0.012 0.595 0.012 0.595 0.012
3meses 1.7020.323 1.2660.198 1.1460.035 1.1700.031 Ns
6 meses 1.356 0.204 ab 1.911 0.312 a 0.892 0.191 b 0.796 0.175 b
I-Test a O;t3\ 0:#6' 0;t3; 0;=6' 0;t3" 0;t3**
ns, no significativo; * significativo a p < 0.05; ,- significativo a p< 0.01; ..... significativo a p <0.001. (-Test 8
entre el eSlado Basal (0) y los tiempos de exposiei6n; b ANOVA entre sitios, test a posteriori: LSD.
Tabla 5.5. Comparaci6n de los valores medios de concentraci6n ( OS) de Mn, Fe, Co, Ni. Cu,
Zn, Pb e fndice de Dana Foliar (IDF) en hojas de T. capillaris.
-102-
Guia para el mtlestreo de liquenes y plantas epifltas como biomonitores en Latinoamerica
EI ANOVA para las concentraciones de los metales .cuantiflcados en T.. capil/aris entre
los diferenles sitios de exposici6n mostr6 diferencias significativas para todos ellos a los 6
meses de exposici6n, observandose que las concentraciones mas altas de estos, se
encontraron en la Zona Industrial.
Con el fin de calibrar la respuesta fisiol6gica de cada especie en relaci6n a distintos
niveles de metales presentes en la atm6sfera y, posiblemente asociados a ella, los distintos
contaminantes gaseosos, las concentraciones de los parametros fisiol6gicos cuantificados en
los biomonitores fueron comparadas entre los diferenles tiempos de exposici6n y entre las
diferentes zonas de estudio. Estos parametros fueron escogidos teniendo en cuenta estudios
previos donde su variaci6n mostr6 ser sensibles a la presencia de contaminantes atmosfericos
{biomarcadores}, tanto en estudios realizados en Ifquenes (Cuny et aI., 2002) como en plantas
superiores (Wannaz et aI., 2003) yen particular en este genero (Pignata et aI., 2002).
Oespues de 6 meses de exposici6n el IOF permiti6 diferenciar las zonas estudiadas en
dos diferentes grupos. Un grupo lormado por las Zonas Centro e Industrial, en donde los
va/ores del IOF fueron significativamente mas elevados, 10 cual implica un mayor dano
fisiol6gico; y el otro grupo formado por las Zonas Residenciales (Norte y Suroeste) en donde se
detect6 un menor dane lisiol6gico en los biomonitores transplantados a estas zonas.
Factores de Enriquecimiento en tos biomonitores
Con el fin de comparar la capacidad de acumulaci6n de las diferentes especies, fueron
calculados factores de enriquecimienlo para cada metal en cada especie segun la siguiente
,
ecuaci6n:
FE =XI Xb
Oonde X
q
es la concentraci6n del elemento X en mg g,l PS en el tiempo i y el sitio j; X
b
es la concentraci6n el elemento X en mg g'l PS en las muestras basales. En la Tabla 5.6 se
muestran los maximos valores de enriquecimiento para cada unos de los metales analizados y
cada una de las especies estudiadas.
Cu, Zn y Pb fueron los metales con mayor enriquecimiento en T. capillaris, T. permutata
)
y T. tricholepis, para los cuales, ademas, los mayores valores de enriquecimiento se
encontraron en las Zonas Industrial y Centro indicando esto el origen antr6pico de los mismos.
Por otra parte, T. capillaris lue el biomonitor can mayor enriquecimiento en todos los metales y
T. retona fue la especie que mostr6 los niveles mas bajos de enriquecimienlo para estos
metales.
No se observaron elevadas tasas de enriquecimiento para Mn, Fe, Co y Ni en los
biomonitores 10 cual reflejando la ausencia de fuentes de emisi6n para estos
meta/es 0 que, el aporte de los mismos estarla dado por fuentes naturales.
Cu,
-103-
Guia para el muestreo de Hquenes y plantas epifltas como biomonltores en Latinoamerica
T. capiIJaris T. permutata T. tricholepis T, re.torta
Mn 2.60 1.28 1.17 1.37
Fe 4.08 1.68 2.51 3.49
Co 3.48 1.54 1.87 3.32
NI 3.39 1.05 1.51 1.40
Cu 10.88 3.52 6.79 2.51
Zn 4.91 2.50 2.21 2.84
Pb 8.59 4.75 4.20 2.88
Tabla 5.6. Factores de enriquecimienlo maximos para los metales pesados
cuanlificados en las cualro especies de Ti/landsia.
Amilisis de Regresi6n Lineal
Can el objelivo de comparar la habilidad de acumulacion de metales a partir de la
atmosfera en las cuatro especies de Tillandsia, 58 reaJizaron anal isis de regresion lineal entre
el contenido de metales en muestras de deposici6n total atmosferica y la concentraci6n de los
mismos en los biomonitores (Tabla 5.7). La regresi6n lineal entre la deposici6n y el contenido
de Cu y Pb en fos biomonitores fue significativa en todas las especies. Tambieln el analisis de
regresi6n fue significativo para Fe, Co y Ni en T. capillaris; Co en T. per'f1utata; Ni y Zn en T.
tricholepis y Fe en T. retorta.
EI parametro a (Tabla 5.7), el cual representa el incremento en fa concentraci6n de un
determinado melal en el biomonitor cuando esle se incrementa las muestras de deposici6n
lolal en una unidad, present6 mayores valores en T. capillaris para lodos los metales exceplo
para Zn, el cual fue mas elevado en T. tricholepis. Esto nos indicarfa una mejor eficiencia de T.
capilfaris en relacion a las olras especies para 18 acumulacion de metales, excepto Zn.
Por otro lado, las diferencias entre las concentraci6n de Zn en las tres especies que no
mostraron correlaci6n con los niveles de deposicion tolal almosferica, podrfan deberse a que
este metal posiblemente este presente en formas no biodisponibles segun la fuente de emisi6n
de origen formando parte del material particulado poco soluble en medios acuosos 0 forma
metalica.
T. capillaris T. permutata T. tricholepls T. retorta
R
2
a R
2
a R
2
a R
2
A
Mn 0.07 0.98 0.01 0.01 0.01 -0.09 0.09 0.73
Fe 0.62
u
0.85 0.18 0.26 0.10 0.33 0.68... 0.57
Co 0.56 0.01 0.26 0.004 0.15 0.01 0.02 0.003
Ni 0.66** 0.17 0.12 0.05 0.47* 0.10 0.04 0.04
Cu 0.78 0.88 0.68 0.38 0.58 0.61 0.69 0.23
Zn 0.0001 -0.001 0.002
~
0.42 0.01 0.003 -0.02
Pb 0.83 0.70 0.36 0.32 0.47** 0.20 0.58 0.08
significativo a p < 0.05: .. significativQ a p< 0.01; ... significativo a p <0.001.
Tabla 5.7. Coeficiente de regresi6n lineal (R
2
) y parametros a para la funci6n Ts
x
.. aTD
x
+ b
donde Ts
x
es el contenido del elemento x en las especies de Tillandsia y TD
x
es el valor de
deposici6n total del mismo elemento.
-104-

Gula para el muestret) de IIquenes y plantas epffitas CQmo blomonitores en Latinoamerica,

En las Figuras 5.27 y5.28 se observan los graficosdel am%lisis de regresi6n realizado
para cada uno de los biomonitores can las concentracianes de Cu y Pb respectivamente. Las
diferencias en la eficacia de acumulaci6n para estas metales entre las especies estudiadas
siguen el siguiente orden: T. capillaris> T. permutata:= T. trichofepis> T. reloHa.
Dilerencias en la eliciencia de acumulaci6n pasiblemente se deban a la anatomia de
cada uno de los biomonitores estudiados;porejemplo, T. capilfarises laespeciesquepresenta
mayor area foliar especflica (area loliar par gramo de peso) y T. retona es la especie que
presenta la menorarea foliar especifica. La mayorsuperficie de contacta con la atm6sfera en
T. capillaris permitirfa una mayor area para la deposici6n de material particulado y as! una
mayoracumulaci6n de metalesparpartedelbiomanitor.
Tambien, diferencias en la eficacia de acumulaci6n de metales pueden responder a
unaseriedefactarescomoparejemplos:factares morfol6gicos(numeros deestomas),factores
especfficos de cada especie (mayor selectividad para incorporar algun metal). factores
lisial6gicos (grosar de la cutfcula
composici6n de lamisma), etc.
a)
70
60
U)
50
0.
(1)
40
l-
e:
Ql30

a.
S 20
'"
10

I
CUre=0.02+0.88CUro

o ii', iii
o 10 20 30 40 SO 60
DeposicionTolalde Cu (uglm2)
c) CUTt= 6.80+0.61 CUro
70
60
U)
'Q.
'* 50

E
<.>
41
,..:

e:
III 31

e21
:>
(.) 11
:
2,

, i , i I
1 9 19 30 40 50
DepositionTolalde CU (uglm2)
b
Ie
serosa), lactares qurmicos (polaridad de la cutfcula,
b}
70
!!! 56
:;:
'"
E
42
t-=
c:
i28
0..
8
8 14
o
d)
70

,..: 40
c

III
30
a.
-;- 20
)
10
I
o
60
CUTp= 7.06+0.38CUm

I iiiIi'
o 10 20 30 40 50 60
DepOsitionTotal deCu (uglm2)
CUrr= 3.64+0.23CUro

r-,-""T,--r-'-""T'--'-'-""T'---"
o 10 20 30 40 50 60
Deposlct6nTotaldeCu (uglm2)
Figura 5.27. Analisis de regresi6n lineal entreladeposici6n total de Cu y el contenido del
mismoen (a) T capillaris, (b) T. permulata,(c) T. trichofepisy(d) T. retorta.
-105-
-106-


Pbrr= 0.98+0.08 Pb
ro
Pb
Tp
=2.45 + 0.32 Pb
TD
b)

.... l....-I-r-..... - - - - - - I t - ~ -
o 0'--"---'-1---=---r,----r,---.
o 10 20 30 40
Deposlci6n Tot"l de Pb (uglm2)
.:
o 0'--,..--,--..,..,---r,---"
o '0 20 30 40
Deposicion Total de Pb (ugfm2)
'"

;:;
E 20
Qj
<:l.
.-:
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'"
"[10

S
.Cl
a..
30
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t::
~ 20
...:
c
Q>
'E
.e 10
..0
El..

+
~
o ~ , +---'--' ~ - - - - - . - - - - . - - - .
o rrlJ 20 30 40
Deposicl6n Total de Pb (ugJm2)
Pb
TC
= -0.25 + 0.70 Pb
ro
Pbn= 1.97 + 0.20 Pb
rD
30
o 0'--.,...,---r'----rl--...,'
o 10 20 30 40
Deposicion Total de Pb (uglm2)
30
!:!!.
~
- ~ 20
'"
<.>
.-:
<::
OJ
~ 10
S
..0
0..
.-:
<::
OJ
E' 10
0-
S
.c
c...
Figura 5.28. Analisis de regresi6n lineal entre la deposici6n total de Pb y el contenido del
mismo en (a) T. capillaris, (b) T. permutata, (c) T. tricho!epis y (d) T. retorta.
Guia para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerlca
c)
Concluslones
Para fa ciudad de Cordoba, se observaron altos niveles de Cu, Ni, Fe, Co, Mn y Pb en
fa deposici6n de material particulado atmosferico. Los mayores valores correspondieron a una
zona industrial caracterizada por la presencia de industrias metal mecanicas, autopartistas y
automotrices (Wannaz and Pignata, 2006).
Para Zn, los niveles de deposici6n atmosferica fueron superiores en el centro de la
ciudad donde las principal fuente de emisi6n de contaminantes atmosfericos es el transito
vehicular (Wannaz and Pignata, 2006).
En relacion a la calibracion de las especies empleadas como biomonitores de
acumulaci6n de metales, T. capiJIaris fue la que mostr6 una mayor correspondencia para todos
elias (excepto Zn) entre enriquecimiento y deposici6n (Wannaz and Pignata, 2006).
Los metales que mas enriquecimiento mostraron en los biomonitores con respecto a
sus niveles basales fueron elemento.s claramente antropogelnicos (Wannaz and Pignata, 2006).
a)
en
!Jna
lS Y
e la
Isito
de
>dos
:to a
06).
Guia para eJ muestreo de liquenes y plantas epifltas como biomonitores en Latinoamerica
En T. capil/aris y T. tricholepis el IOF discrimin6 las zonas con mayores niveles de
contaminantes (zona centro e industrial) de las zonas residenciales, por 10 cual esle
biomarcador puede sar propuesto como instrumento para evaluar la calidad atmosferica
cuando se emplean estas especies (Wannaz and Pignata, 2006).
Concluslones Generales
En el analisis elemental de la deposici6n total atmosferica las mayores concentraciones
de metales (Cu, Ni, Fe, Co, Mn y Pb) correspondieron a muestras tomadas en una zona
industrial. Para Zn los mayores valores se encontraron en el centro de la ciudad de C6rdoba.
T. capillaris fue la que present6 mayor acumulaci6n de metales en hojas tanto en
estudios de biomonitoreo pasivo como activo
EI enriquecimiento en Pb para T. capillaris y T. permutata se relacion6, en biomonitoreo
pasivo a gran escala, con la actividad cinegetica e industrial. En biomonitoreo activo con la
actividad industrial.
En las especies estudiadas, se observ6 una mayor acumulaci6n de Zn relacionada can
eltransito vehicular.
Se observaron diferencias en la acumulaci6n de metales pesados, siendo T. capilfaris
la especie can mayor eficacia de acumulaci6n.
La acumulacion de metales pesados (biomonitoreo activo) provoc6 dano fisiol6gico
significativo en T. capillaris y T. tricholepis. De acuerdo a esto el IOF puede ser propuesto como
un biomarcador eficaz para evaluar la calidad almosferica emplei;\ndo estas especies.
6. ~ i n entre la concentraci6n de metales pesados y elementos traza en
biomonitores y salud humana.
En los ultimos anos un numero importante de estudios realizados en diferentes
ciudades han encontrado que, aun par debajo de los niveles de calidad del aire considerados
como seguros, los incrementos en los niveles de contaminantes atmosfericos se asocian can
efectos nocivos sabre la salud. Asi par ejemplo un estudio realizado en Francia, Suiza y Austria
(Kunzli et aI., 2000) indica que el 6% de la mortalidad y un numero muy importante de nuevas
casos de enfermedades respiratorias en estos paises puede ser atribuido a la conlaminaci6n
atmosferica. La mitad de este impacto es debido a la cootaminaci6n emitida par los vehiculos a
motor. Es decir, gran parte de la poblaci6n se encuentra expuesta a contaminantes
atmosfericos can posibles repercusiones negativas sabre su salud. Y todo ella a pesar del
ajuste de las normas de emisi6n de contaminantes, el mayor control de los nive/as de
contaminaci6n atmosterica y el descenso de los niveles de ciertos tipos de contaminantes.
La asociacion entre exposici6n a alglin contaminante atmosferico y la aparici6n de
efectos en salud humana, es el modelo mas simple que se puede pensar para evaluar la
relaci6n entre estos factores.
Exposici6n ambiental Efectos sobre la salud humana
De hecho, este enfoque fue el que prevaleci6 en la medicina del siglo XVIII, cuando los
dramaticos incrementos eri la frecuencia de enfermedades agudas y cr6nicas eran
simplamente explicados por las condiciones extremas de trabajo a las que eran sometidos los
-107-
Guia para el muestreo de Ilquenes y plantas epifitas como blomonitores en Latlnoamerlca
trabajadores. Sin embargo, esta metodologia dej6 de ser eficiente con la creciente
modernizaci6n de las ciudades, ya que en este proeeso apareeieron ademas otros factores que
introdujeron variaciones en esta relaci6n, tales como la presencia de niveles ambientales
importantes de contaminantes, la presencia de campos eleetromagneticos, la incorporaci6n de
con.taminantes a traves de la ingesta de alimentos, etc.
Estos nuevos factores que dificultan la evaluaci6n del grado de asociaci6n 0 bien la
presencia de una relaci6n causal entre exposici6n ambiental y efeetos en salud humana, han
promovido el desarrollo de nuevas metodologias, el uso de indicadores mas sensibles e incluso
el emplea de nuevas parametros para evaluar los riesgos de exposici6n a contaminantes
atmostericos. Asi, actualmente S8 emplea un modele mas complejo que incluye las diferencias
individuales
Exposici6n ambiental Efectos sobre la salud humana
il
Susceptibilidad individual
Si bien se podria Uegar a estableeer la asociaci6n entre un contaminante y la incidencia
de una enfermedad en particular, si se dispusiera de datos reales -in situ- de concentraci6n de
contaminantes y la incidencia de dicha enfermedad en una region; serra necesario contar con

un gran numero de instrumentos de medicion asi como personal capacitado para su manejo y
mantenimiento, 10 cual resultaria muy costoso. Por esta raz6n, el monitoreo cualilativo y
cuantitativo de contaminantes atmosfericos solo se ha realizado en muy pocos lugares, incluso
en parses desarrallados. Esla situacion es aun mas grave en Latinoamerka donde la mayoria
de los pafseS'"TIi"'siquiera cuentan con bases de datos reales sabre niveles de contaminantes
atmosfericos para sus principales ciudades.
Frente a este problema, el hioman/toreo representa una opci6n muy eficaz para
determ;nar la distribuci6n de contaminantes y sus etectos. La utilidad y el exito de este tipo de
estudios ha sido d'emostrada por la gran cantidad de muestreos realizados en tadas partes del
mundo, a nivel regional, nacional 0 internacional, que permitieron establecer claramente una
relaci6n entre la concentraci6n de contaminantes acumulados en una planta en funci6n del
tiempo y los efeclos que estos producen sobre la salud de poblaciones expuestas. Tenienda en
cuenta que los contaminantes ademas de alterar el ambiente pueden tambien tener efectos
perjudiciales sabre la salud humana, desde hace algunos aMs se han comenzado a analizar
los resultados de estudios de biomonitoreo en reladon a investigaciones epidemiol6gicas de
Incidencia de enfermedades posiblemente relacionadas con la presencia de contaminantes
atm osfericos.
La mayorla de estos estudios se han centrado en estudiar la relaci6n ente los niveles y
composici6n de la deposici6n atmosferica con efeetos observados en la salud de la poblaci6n.
Si bien la deposici6n atmosferica es la principal via de incorporaci6n de elementos en los
biomonitores, asta es s610 una de las posibles vias de ingreso de los contaminantes en el
hombre, la cual depende ademas de sus circunstancias personales y modo de vida. Sin
embargo, los estudios reaJizados hasta el momenta sugieren que la deposicion atmosfarica
podrfca ser el modo mas i'mponante de incorporaci6n de contaminantes al hombre ya que actua
tanto directa como indirectamente a traves de los alimentos 0 agua que consume.
-108-
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Guia para el muestreo de Ifquenes y plantas epifitas como blomonitores en Latlnoamerica
Es necesario destacar, ademas, que si bien existe gran cantidad de informaci6n sobre
los efectos perjudiciales del material particulado, son muy escasos los estudios realizados en
parses en desarrollo donde las condiciones socioecon6micas as! como el tipo y niveles de
contaminantes son muy diferentes a los de parses desarrollades (HEI, 2004). De heche, existe
un estudio realizado en la ciudad de C6rdoba en el que se analiz6 la relaci6n entre muestras de
deposici6n atmosferica total como indicadoras de MP, con la incidencia de algunas afecciones
respiratorias en la poblaci6n total (Carreras et ai., 2008). Los autores enconlraron una
correlaci6n positiva significativa entre las muestras de deposici6n total y la frecuencia de
enfermedades respiratorias (Figura 6.1), par 10 cual sugieren que los niveles de deposici6n total
podrfan ser empleados como indicadores de exposici6n aMP, particularmente para parses en
desarrollo donde la informaci6n sabre calidad de aire es frecuentemente escasa.
Teniendo en cuenta que la mayorfa de enfermedades respiratorias consideradas en
ese trabajo corresponden a afecciones del tracto respiratorio superior, la relaci6n encontrada
podrfa deberse a la presencia de particulas con un diatnetro superior a 10 ya que estas son
las que se depositan en las vias respiratoria5 alta5, y no a las particulas finas que penetran e
bronquios y alveolos pulmonares.
A R 0.771
P 0.072
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0.0 .1 .2 .3 .4
DAT
Figura 6.1. Correlaci6n entre muestras de deposici6n
atmosferica total (OAT, mg/m
2
/day) y frecuencia de
enfermedades respiratorias (EA) correspondientes al muestreo
realizado en algunas areas de la ciudad de Cordoba, en el afio
2005.
Uno de los trabajos pioneros en este area fue el realizado par Cislaghi y Nimis (1997)
en Italia en el ano 1996, quienes demostraron una asociaci6n positiva entre muertes debidas a
cancer de pulm6n en varones adultos y la biodiversidad de Hquenes, en la region del Veneto.
Sin embargo no se obtuvieron datos cuantitativos _respecto a las concentraciones de
contaminantes individuales (Fig. 6.2).
-109-
Guia para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
inquinamento
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140
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80

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cancro po!monare
Figura 6.2. Relaci6n entre la calidad atmosferica
medida como indice de biodiversidad liquenica y
mortalidad par cancer de pulm6n (Tomado de
Cislaghi and Nimis, 1997).
Posteriormente, al NE de Europa en una region compartida par Alemania, Republica
Checa y Polonia, se realiz6 un biomonitoreo empleando dos especies demusgos, durantedos
anos cansecutivos en los que se determin6 su composici6n elemental. Estas concentraciones
deelementos fueron correlacionadas can la frecuencia de enfermedades -incluso muertes- en
la pobl aci6n total de la regi6n durante los anos 1993 a 1997. Este estudio fue el primero en
comparar laconcentraci6ndeelementos ysu incidenciade varios tiposenfermedades. Parala
mayoriade los elementos medidos, los niveles encontrados fueron similares a los hallados en
otras regiones de Europa. Como era de esperar, se encontraron correlaciones significativas
con gran parte de las afecciones del trac10 respiratorio, dado que fa principal via de
incorporaci6n de contaminantes en el hombre es la inhalaci6n. Tambiem se encontraron
correlaciones significativas con algunas enfermedades cardiovasculares, para 10 cual los
nivelesdecontaminantesson 5610 unadelasposiblescausas (WappelhorstetaI., 2000).
Apartirdenumerososestudios de biomonitoreo realizados en Portugal (Reis, 2001; Freitas
et al.:1997,1999,2000;Godinho et at,2008), con los cuales se obtuvo informaci6n sobre la
composici6n elemental de material particulado y de biomonitores liquenicos, se ubicaron las
fuentes de emisi6n de contaminantes en gran parte del pais. Luego se estudi6 la
relaci6n entre lacomposici6n elemental de este material can los datos de mortalidad debida a
neoplasmas 0 tumores malignos en lodala poblaci6n de Portugal. Los aulores observaron una
fuerte asociaci6n entre los indices de mortalidad ylaconcentraci6n de 7 elementos (8r, I, Ni,
Pb, S, Sb YV) determinados en los biomonitores. Ademas, los autores serialan la importancia
deotres factoresderiesgoque pueden afectaresta asociaci6n, talescomo:
a) Habitos de vida, nivel deinstrucci6n 0 niveles de ingreso: algunos autores opinanque
los factores de riesgo tradicionales expfican menos del 50 % de de las diferencias
observadas en los indicadores de salud; mientras que otros consideran que las
caracteristicassocioeconomicastienen unagran influenciaen lamortalidad, quepuede
ser parcialmente explicadaporlamaneraen que esta situaci6n socioeconomicainfluye
en el mododevida.
b) Selecci6n del indicadorde salud.
c) Asociacion adependenciaentrelos elementoscontaminantes.
110-
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Guia para el muestreo de liquenes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerica
EI hechode haber identificado estos factores, permiti6 descontarsu influencia, con 10 cual
se obtuvo una disminuci6n en la asociaciones de s610 un 5%, 10 cual no es muy significativo
(Sarmento etaI., 2007).
En Latinoamerica son muy escasos los estudios de biomonitoreo que relacionen sus
resultados can algunos aspectos epidemiologicos. Unode elias es el realizado por Fugaet al
(2007) quienes emplearon una especie de Iiquen como biomonitor en la region metropolitana
de San Pablo, en la que determinaron su composici6n elemental mediante INAA. En esle
trabajo, ademas de encontrar asociaciones significativas entre los niveles de elementos
acumuladosen los talos con la presenciadeindustriasycomplejospetroqu[micos,encontraron
una asociaci6n positiva entre los niveles de Co, Mn y Na, can la proporcion de muertes por
enfermedades cardiopulmonares en adultos mayores de 45 anos (Fig. 6.3). Los autores
sugieren que esta relaci6n puede ser atribuida a la exposici6n prolongada a niveles
ambienlalesdecontaminantes.
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Figura 6.3. Tomado de: Fuga, A., Saiki, M., Marcelli, M.P., Saldiva, P.H.N., 2007. Atmospheric
pollutants monitoringbyanalysisofepiphyticlichens. Environmental Pollution 151,334-340.
Si bien la mayorfa de estos estudios han sido desarrollados con datos de poblaci6n
adulta, en losultimosanos lacomunidad cientfficahaprestadoespecial atenci6n a lapoblaci6n
infantil debido a que par sus caracterfsticas podrfan ser mas sensibles 0 bien estar mas
expuestos a losefectos nocivosde los contaminantes atmosfericos. Si tenemos en cuenlaque
los ninos respiran mas aire, comen mas alimentos y beben mas agua por kilogramo de peso
que los adultos; sus sistemas organicos son anat6mica y funcionalmente mas inmaduros,
dificultando la metabolizaci6n, detoxificaci6n y excrecion de las substancias quimicas
contaminantes; y los patrones tfpicos de conducta (actividades sociales y ludicas al aire libre,
contacto mano-boca, higiene deficiente, etc.) durante la infancia, facilitan una mayor
accesibilidad a los contaminantes.
Teniendo en cuenta este criterio epidemiol6gico, se reaJiz6 en C6rdoba, Argentina un
estudio de biomonitoreo comparando laacumulaci6n elemental de tres especiesdiferentes de
biomonitorescon los nivelesde deposici6ntotal (Carreras et aI., 2008),determinadosmediante
-111-
I
-112-
Gu[a para el muestreo de liquenes y plantas epffitas como biomonitores en Latlnoamerlca
10km
N
+
5 n
Figura 6.4. Localizaci6n de los sitios de muestreode material
particulado atmosferico y biomonitoreo (-) y silios con datos
cHnicos de salud en ninos (+) in C6rdoba, Argentina.

A pesar de que las tres especies de biomonitores empleadas (u. amblyclada, R.
celastri y T. capillaris) permitieron discriminar zonas can distintos niveles de contaminaci6n, las
especies liquenicas, mostraron mejores coeficientes de correlaci6n can la concentraci6n del
mismo elemenlo en el material particulado depositado.
XRF-Reflexi6n Total. La ventaja de esta tecnica es que permite la cuantilicaci6n de elementos
cuyo presencia en ambientes urbanos. esta relacionada can emisiones vehiculares e
industriales.
Sa seteccionaron puntas en la ciudad de Cordoba para los cuales se canto can datos
de salud de la poblaci6n infantil (ninos con una edad inferior a los 5 anos). En los mismos se
realiz6 el transplante de biomonitores y se colectaron muestras de deposici6n total
correspondientes a fos mismos periodos en que los biomonitores estuvieron expuestos (3
meses) (Fig. 6.4).
Gula para el muestreo de IiquelTes y plantas epifitas como biomonitores en Latinoamerlca
Total Deposition U. amb/yoclada R. celastri T. capillaris
Mn ns 0.87" ns
Fe 0.'19 0.99" 0.94
Co 0.74'" Ns 0.75"
Ni ns 0.83" 0.90
Cu 0.56, 0.92 0.93
Zn 0.93" 0.66 ns
Pb 0:55" 0.92' 0.98'"
Tabla 6.1. Analisis de correlaci6n entre el contenido de metales en muestras de
deposici6n total atmQsferica y el contenido de rnetales medido en biomonilores.
Por otro lado, se analiz6 la relaci6n ,entre, las concentraciones de los elementos
acumulados en los biomonitores y la incidencia de' algunas afecciones respira:torias, tales como
asma, laringitis, faringitis, amigdalitis, etc ,en la poblaci6n infantil (menor a 5 anos) de la ciudad
de Cordoba. Los resultados obtenidos confirmal"l la utilidad de los biomonitores para evaluar el
riesgo de exposici6n prolongada del hOmbre a I'illvales ambientales de contaminanles ya que se
encontraron correlaciones significativas can todos los elementos Guantificados, 10 cual se
explica par el hecho de que la mayor parte de estos elementos son de origen antropogenico.
Por otro lado, el heclilo de encontrar asociaciones entre niveles de elementos acumulados con
indicadores de salud, no pretende ser de ninguna manera un indicador absoluto de causa-
etecto, sino que sefiala una de las posibles causas de las afecciones consideradas. De todas
maneras, los resultados obtenldos alientan el uso de la tecnica de biomonitoreo p.ara estimar el
riesgo de exposici6n a un gran numero de contaminantes que pueden ser perjudiciales para el
hombre.
Faringitis
Deposicion Total
Mn", Fe''
U. amblyoc/ada
Fe'; Cu
R. celastr;
Mn"; Fe"'; Co';
T. capillar;s
R:---
Co'; Ni'; , Cu";
Ni'''; Cw"; Pb Zn\ Pb'
Tonsillitis Mo'; Fe"; Co'; Fe; Co; Cu Mn"; Fe'''; Co"; Mn; Fe; Co";
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*; Cu; Pb Ni; Cu"; Pb"" Ni**-; Cu"; Zn";
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Co; Ni; Cu"; iNl"; Cu**'ff; Pb; Ni"'; Cu"-; Zn";
Pb" Zn Pb
Rinitis Mn; Fe"; Ni*; Fe"; Cu Mn'''; Fe"; Co"; Fe; Cu**; Ni;
alerglca Cu; Pb Ni; Cu"; Pb" Cu"; Zn"; Pb"
Tabla 6.2. Analis;s de correlaci6n entTe el porcentaje de patologias respiratorias en ninos menores a seis
anos de edad y el contenido de metales en mueslras de deposici6n total atmosferica y biomonitores en la
ciudad de Cordoba, Argentina (. p<O.05; .. p<O.01; p<O.001).
-113-
7. Fotografias de liquenes empleados como biomonitores de contaminacion
atmosferlca en Latinoamerica
Usnea amb/yoclada (Mull. Arg.) Zahlbr.
-114-
Usnea amblyoclada (MOil. Arg.) Zahlbr.
-115-
Ramalina ce/astri (Spreng) Krog & Swinsc
Canomaculina pi/osa (Stizen.) Elix. & Hale
-116-
Canomaculina pi/osa (Stizen.) Elix. & Hale
Punctelia microsticta (MOIl. Arg.) Krog
-117-

Punctelia microsticta (Mull. Arg.) Krog
Parmotrema uruguense (Kremplh.) Hale
-118-
Parmotrema austrosinense (Zahlbr.) Hale
Parmotrema conferendum Hale
-119-
8. Fotograflas de plantas epifitas del genero Tillandsia empleadas como
biomonitores de contaminacion atmosferica en latinoamerica
Tillandsia capillaris Ruiz & Pay. f. capilfaris,
Tillandsia permutata A. Cast.
120-
Tiflandsia trichofepis Baker
Tiffandsia tricholepis Baker
-121-
Tillandsia retorta Griseb. ex Baker
Tillandsia xiphioides Kef Gawl.
-122-
Tillandsia bryoides Griseb.
Til/andsia usneoides (L.) L.
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Vegetal OMBN), FacuJtad de CienciasExactas, Fisicas yNaturales, Universidad
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