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EXAMEN SECUENCIAL IV CORTE MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL IISEMESTRE2013 J2 1.

Asumiendo que hay 1019 clulas contaminantes de Escherichia coli en el reactor #1 en un proceso de produccin de butanol, y considerando que el volumen medio de una clula es de 0.8 micras cbicas y que su densidad es la misma que la del agua. Cunto pesa la biomasa de Escherichia coli para esta situacin? Justifique su respuesta Respuesta: - El volumen medio de una clula es 0.8 micras cbicas; en un centmetro cbico hay 1x1012 micras cbicas, por lo que el volumen medio de una clula tambin es igual a: 8x10-13cm3. - La densidad es igual a la del agua; =1g/cm3 - La frmula de la densidad es =m/v - La frmula para obtener la biomasa es: m=*v - Reemplazando los valores de (densidad) y de v (volumen), despus se multiplica el valor dado de clulas contaminantes y se obtiene cunto pesa la biomasa de Escherichia coli. - m= (1g/cm3)*(8x10-13cm3) *(1019) - m=8x106g 2. Mediante el siguiente grafico se observa el comportamiento de diversos compuestos durante 8 semanas, desde el momento que sucedi el derrame de un compuesto orgnico *x* sobre un suelo arcilloso. Dicho compuesto penetro las capas ms profundas y anaerbicas. Los microorganismos presentes en el suelo modularon la transformacin e incluso hasta que el compuesto *x* desaparece, tambin se analizaron otros compuestos presentes en el suelo, como sulfatos y carbonatos.

Qu tipo de microorganismos degradan el compuesto *x* en las tres primeras semanas? Explica el porqu crees que es esa clase de microorganismos. Nombra algn gnero. Justifique su respuesta -Respuesta: Los microorganismos que degradan el compuesto *x* presentes en el suelo arcilloso, son microorganismos productoras de cido actico y bacterias sulfato reductoras. Un ejemplo de bacterias productoras de cido actico es la Escherichia coli y la Salmonella spp, estas bacterias que podran estar presentes en el suelo segn lo que muestra la curva de concentracin del acetato por unidad de tiempo. Qu tipo o gnero de microorganismos aparece a partir de la tercera semana? Explica el porqu crees que es ese gnero o tipo. Justifique su respuesta -Respuesta: Despus de la tercera semana, el tipo de microrganismo que aparece es productor de cido sulfhdrico, debido a que la concentracin de H2S aumenta en el suelo, y reductor de sulfato, dicho microorganismo podra ser Acidithiobacillus thiooxidans.

3. El acido ctrico es uno de los compuestos esenciales de la industria qumica moderna. Durante la primera guerra mundial, Italia se involucro en el conflicto, dicha situacin llevo a una problemtica a nivel agrcola que causo grandes perdidas econmicas durante el tiempo de cosecha de productos ctricos, ocasionando una gran dificultad para la industria de produccin de acido ctrico. Buena parte del cuerpo cientfico a nivel mundial busco nuevas fuentes alternativas para la obtencin de acido ctrico. Fue el qumico norteamericano James Currie quien descubri en 1917 que el moho Aspergillus niger secretaba grandes cantidades de cido ctrico cuando se cultivaba en unas determinadas condiciones. Por qu hay tan pocos seres vivos que pueden aprovechar el cido ctrico como fuente de carbono? Justifique su respuesta. Respuesta: Porque son pocos los microorganismos que pueden transformar la glucosa en cido ctrico, aprovechndola como fuente de carbono en su proceso de respiracin anaerobia, por medio del ciclo de Krebs.

4. En un medio donde exista algn nutriente limitante (o sea, cuya concentracin est por debajo del lmite de eficiencia de las permeasas), el crecimiento balanceado es de tipo restringido, de modo que el coeficiente real de crecimiento es inferior al mximo

donde [S] es la concentracin del nutriente limitante; KS es la constante de saturacin, equivalente a la concentracin de nutriente para la que el coeficiente es semimximo. Si el sustrato a evaluar en una cintica de crecimiento de la Escherichia coli es el triptfano, y para la E. coli el KS para el triptfano es 2x10--7 M Y se conoce que la afinidad de las

permeasas de membrana hacia los sustratos ocasiona valores bajos en las constantes de saturacin Como cree usted que influye el valor del KS para el triptfano sobre la etapa de latencia en una curva de crecimiento para esta bacteria en un medio rico en triptfano? Determine si, existe la probabilidad de predecirlo y defina la ecuacin que permite determinar esta influencia? Justifique sus respuestas. - Respuesta: Influye ocasionando un aumento o disminucin en la fase de latencia de la curva de crecimiento para Escherichia coli, ya que, dependiendo del valor de Ks, y de la concentracin del nutriente, la tasa de crecimiento puede ser mayor o menor. Es posible predecir el valor de Ks, usando un modelo matemtico a partir de las ecuaciones:

1.

2. Reemplazando la ecuacin 1 en la ecuacin 2, se obtiene:

Y por ltimo resolviendo la ecuacin diferencial, es posible obtener el valor de Ks.

5. Calcule el tiempo necesario para incrementar el nmero de clulas microbianas de 104 a 108 UCF/ml asumiendo un tiempo de generacin de 5 das. Justifique su respuesta - Respuesta: A partir de las siguientes formulas, correspondientes al crecimiento bacteriano en la fase exponencial: 1. X=2nXo

2. De la ecuacin 1, se obtiene:

3.

; Donde n es el nmero de generaciones y para este caso

Ahora, resolviendo la ecuacin diferencial de la frmula 2

4. Es posible reemplazar la ecuacin 3 en la ecuacin 4, y se obtiene: = , Para obtener el valor de la constante, se simplifica el trmino t, y la ecuacin para

obtener es:

El valor de la constante es: = 0.138 [1/das] Reemplazando el valor de en la ecuacin 3:

Se sabe que el valor de Xo = 104 y el de X = 108, aplicando leyes de logaritmos, es posible obtener el valor de t.

6. Hay dos casos cuando la ecuacin de Monod puede ser simplificada. Describa estos casos y la ecuacin simplificada de Monod que se logra. Justifique sus respuestas - Respuesta Ecuacin de Monod

En esta ecuacin Monod asumi que solo se encuentra presente el sustrato limitante y que no hay productos txicos durante el metabolismo. La ecuacin de Monod puede ser expresada en trminos de la masa celular (X), de la siguiente manera:

Esta ecuacin tiene dos casos limitantes, el primero se da cuando S>>Ks y el segundo, cuando S<<Ks. 1. Para S >> Ks, no hay dependencia con la concentracin del sustrato (S), es decir, =max y la ecuacin que resulta es:

, esta ecuacin indica que el crecimiento ocurre a una tasa de crecimiento mxima. 2. Para S << Ks, hay dependencia de la concentracin del sustrato y la ecuacin resultante es la siguiente:

, esta ecuacin indica que cuando la concentracin de sustrato es baja, el crecimiento es dependiente de la concentracin de sustrato.

7. Se evala una cepa mutante con respecto a la silvestre, entre los datos obtenidos para la cepa mutante, se encontr mx= 0.39 1/h. En condiciones ideales la tasa mxima de crecimiento se alcanza. Justifique su respuesta Cunto tiempo se tarda para obtener 4X1014 UFC/ml, si usted inicia con un inoculo de 4X1010 UFC/ml? Justifique su respuesta. - Respuesta Se conoce: - mx= 0.39 1/h - La cantidad inicial 4X1010 UFC/ml -La cantidad final 4X1014 UFC/ml Se sabe que se alcanza una tasa mxima de crecimiento, en condiciones ideales, por lo cual, se puede utilizar la ecuacin:

Solucionando la ecuacin diferencial, se obtiene el tiempo que se demora en obtener 4x1014 UFC/ml.

Reemplazando los valores conocidos:

8. Compare las caractersticas de las fases de crecimiento (lag y estacionaria) para cultivo BATCH, realizando un cuadro comparativo. Justifique su respuesta.

FASE DE LATENCIA La tasa de crecimiento es cero. Se debe a la adaptacin fisiolgica de la clula a las condiciones del cultivo. Quiz requiera tiempo para la induccin de un mRNa y sntesis de protenas para adaptarse a los requerimientos del nuevo cultivo. El inicio del crecimiento de la clula, la divisin y la transicin a la fase exponencial es lenta.

FASE ESTACIONARIA El crecimiento no es exponencial. En el tiempo que dura la fase estacionaria, las clulas continan creciendo y dividindose, pero dicho crecimiento es balanceado, porque un nmero igual de clulas esta presentando lisis. En esta fase, las clulas tienden a dividirse lo mximo que les sea posible. Ya que la fuente de carbono y de energa est agotada, algunas clulas usan como nutriente otras clulas que presentaron lisis, teniendo un metabolismo endgeno.

9. Dibuje una curva de crecimiento de consumo de sustrato en funcin del tiempo. Clasifique, describa y defina cada etapa de crecimiento. Justifique su respuesta. - Respuesta

Desde el punto Ao hasta el punto A, se presenta la tapa de latencia o lag, en esta etapa el microorganismo est adaptndose a las condiciones del ambiente al que este expuesto. En esta fase el consumo del sustrato no ha empezado, debido a que las clulas an no se han adaptado al medio.

Desde A hasta B, se est llevando a cabo la fase exponencial, en la cual el crecimiento de las clulas del microorganismo aumenta rpidamente. Cuando las clulas se adaptan al medio, empiezan a reproducirse de manera rpida y continua, por lo que la concentracin de acetato aumenta.

Desde B hasta C, se presenta la fase estacionaria, en la cual el sustrato est empieza a agotarse, por lo que las clulas que mueren son iguales a las que estn reproducindose. En esta fase, la concentracin de acetato es constante, porque ya se est empezando a agotar.

Desde C hasta D, se lleva a cabo la fase de muerte, en la cual hay ms clulas prdidas que ganadas, debido al agotamiento completo de la fuente de energa y la tasa de

muerte es ms lenta que la tasa de crecimiento exponencial. En esta parte, el acetato ya est a punto de agotarse, por lo que su concentracin disminuye.

10. Mencione una utilidad industrial en la que el control de una (1) de las la fases de crecimiento microbiano puede ser utilizada para mejorar el proceso productivo. De un ejemplo detallado seleccionando una fase de la curva de crecimiento. Justifique su respuesta. - Respuesta: Produccin de aceites bacterianos. En esta utilidad industrial, existe un grupo restringido de bacterias que se especializan en acumular grandes cantidades de aceites, como lo son: Streptomyces,

Mycobacterium, Rhodococcus, Acinetobacter. Ahora bien, para mejorar la produccin de aceites bacterianos, es importante hacer que las condiciones del cultivo de las bacterias estn en adaptadas para que la bacteria pueda alcanzar un rendimiento ptimo en la produccin de aceites. Para esto, es importante que la fase de latencia se lleve en el menor tiempo posible, de esta manera ser posible mejorar la productividad de aceite, este factor contribuir a que la bacteria comience el proceso rpidamente y se aproveche ms antes de presentarse la fase muerte. 11. Las ecuaciones de balance de masas son muy parecidas cuando se comparan las respiraciones aerbicas y anaerbicas. Establezca una posible ecuacin qumica que relacione el uso de un sustrato especfico empleado para la obtencin de un producto especfico, identifique los bioelementos o biocompuestos que estn reducidos y oxidados en una respiracin anaerbica. balanceo y estequiometria. -Respuesta La ecuacin qumica en respiracin anaerobia se describe de la siguiente manera: CnHaOb + (n a/2 b/4) H2O (n/2 - a/8 +b/4) CO2 + (n/2 - a/8 +b/4) CH4 Con n=2, a=4 y b=1. La ecuacin queda de la siguiente manera: Defina un ejemplo suficiente, recuerde aplicar principios bsicos de

C2H4O + (2-2-1/4) H2O (1-1/2+1/4) CO2 + (1-1/2+1/4) CH4 12. Empleando un programa para diseo de un mapa de procesos, cree su propio modelo, considerando un proceso de degradacin de un analito cualquiera que pueda obtenerse por medio de cualquiera de las asignatura. temticas de seminario planteadas en el programa de la

Escriba la ecuacin matemtica que puede aplicarse para determinar la

concentracin del analito obtenido. Justifique su respuesta. - Respuesta: BIOLIXIVIACION DEL COBRE

La ecuacion matemtica para determinar la concentracion del analito es obtenida a partir de las dos ecuaciones diferenciales, obtenidas a partir de las diferentes maneras de expresar la ecuacion de Monod:

Ecuacin de Monod expresada como funcin de la concentracin y la produccin celular Y.

Ecuacin de Monod expresada en trminos de la masa celular.


La ecuacin resultante es:

13. Por que es importante establecer niveles de productividad y rendimiento en un proceso biotecnolgico que esta acoplado a la sntesis de compuestos a partir del cultivo y mantenimiento de microorganismos. Justifique su respuesta. - Respuesta: Los niveles de productividad y rendimiento son importantes en un proceso, porque indican la rentabilidad del proceso, en este caso, son indicadores de cuan efectivo es el metabolismo del microbio en las condiciones a las que se encuentra, si las condiciones son ptimas para el microorganismo, el proceso tendr mayor nivel de productividad y rendimiento. Por esto, al establecerlos es posible saber el grado de eficiencia en el que esta proceso biotecnolgico. 14. Cuando se desea establecer los valores matemticos de YATP. Cuales son los datos requeridos para poder calcular ese valor, considerando una reaccin qumica a partir de carbohidratos. Justifique su respuesta - Respuesta: Para calcular la cantidad de material celular formado por mol de ATP, los datos requeridos son: 1. Los equivalentes de reduccin usados en la formacin de biomasa. 2. Los sitios de fosforilacin presentes en la cadena respiratoria del organismo.

3. La cantidad de NADH2, FADH2 y ATP formadas por mol de carbohidrato desasimilada, y la cantidad asimilada de los mismos por mol de carbohidrato. Con 1,2 y 3, se determina la produccin total de ATP en funcin de Ysustrato, se toma Ysustrato de la siguiente manera: 4. Ysustrato = x = (YATP) * (produccin total de ATP) Con la ecuacin 4, es posible conocer los valores matemticos de YATP. 15. Cual es la importancia de conocer el bioelemento que acta como aceptor final de electrones en una respiracin aerbica estricta. Justifique su respuesta Respuesta

La importancia del aceptor es que este va a determinar si la clula va a tener la suficiente energa necesaria para realizar sus procesos celulares. Comnmente el aceptor final de electrones en un organismo aerobio es el oxgeno molecular, este es el ltimo elemento de la cadena de transporte de electrones. En ausencia de oxgeno, no se pueden oxidar los NADH ni los FADH2 por lo que permanecen en su forma reducida., por ende la sntesis de ATP se detiene, generando que la clula no pueda obtener energa, de este modo, si la clula no obtiene un suministro de oxgeno, no podr obtener ATP y las reacciones que requieren energa se detendrn. El resultado final ser la muerte de la clula. 16. Citacin Bibliogrfica. - MAIER, Raina M. Environmental Microbiology (Second Edition), Chapter 3. - QUAYLE.J.R, Microbial Biochemestry, Chapter 1 - http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/sedes/manizales/4090020/files/pdf/cap_5+.pdf

RECOMENDACIONES Para diligenciar su examen recomiendo considerar siempre que las respuestas entregadas deben ser objetivas e individuales, y adicionalmente deben de ser argumentadas para permitir darle validez a sus respuestas. Las justificaciones deben ser descritas considerando un criterio original de su parte y razones suficientes desde el punto de vista acadmico y cientfico conocidas hasta el da de hoy. Recuerden que se dio la oportunidad de enviarlo el mismo da con un premio adicional de 1.0 unidad. Sin embargo, el total de estudiantes del grupo prefirieron resolver todos los puntos en el tiempo adicional y prescindir del premio ofertado. El tiempo mximo de entrega comprende 4 das desde el sbado 15 de Marzo a partir de las 12:00 am hasta el mircoles 19 de Marzo 12:00 am. Muchos xitos a todos. :)

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