Estructura externa del cromosoma eucaritico Los cromosomas varan su morfologa antes de un proceso de divisin mittica o meitica.

Cromosoma metafsico mittico Cada cromosoma est formado por dos cromtidas Cada cromtida est formada por una molcula de DNA En trminos generales, se admite la constancia en la morfologa, la medida y el nmero de cromosomas o Morfologa: clasificacin morfolgica en funcin de la posicin del centrmero

o o

Medida: variable en funcin de la tcnica utilizada Nmero: las clulas somticas de la mayora de las especies se caracterizan por la presencia de una pareja de cada tipo de cromosoma. El nmero de cromosomas se representa por 2n y las clulas como diploides. El par de cromosomas se conocen con el nombre de cromosomas homlogos.

No hay relacin entre el nmero de cromosomas y el contenido de DNA. La distribucin de las diferentes especies eucariotas es diferente. Por ejemplo, en comparacin con los 46 cromosomas de las clulas somticas humanas, las de los pequeos crvidos solo tienen 6. Igualmente, especies muy prximas entre s que tienen un genoma de tamao similar, pueden presentar un nmero y una dimensin de cromosomas diferente. As pues, no existe ninguna relacin directa entre el nmero de cromosomas, la complejidad de las especies y el tamao del genoma. El nmero de cromosomas no tiene un significado evolutivo directo.

En la imagen vemos representados los cromosomas de dos especies de crvidos estrechamente relacionadas que tienen un nmero de cromosomas muy diferente. Durante la evolucin en el ciervo muntjac indio se han fusionando cromosomas que inicialmente estaban separados, sin que esto afecte prcticamente al animal. Las dos especies tienen aproximadamente el mismo nmero de genes. Definiciones Complemento o extensin cromosmica: conjunto de cromosomas de una clula u organismo. Los cromosomas tal como se ven, desordenados, a partir de la clula lisada. En las imagenes vemos la extensin cromosmica de Homo sapiens y Mus musculus. Cariotipo: estudio de las caractersticas morfolgicas externas (forma, medida y nmero) que se realiza ordenando los pares de cromosomas homlogos en relacin a su medida y forma. Ideograma: es una representacin grafica del cariotipo

Cromosoma metafsico meitico Metafase I: se presentan en forma de bivalente, cada cromosoma (formado por dos cromtidas) se empareja con su homlogo unido por los quiasmas. Segn el nmero, la localizacin de los quiasmas y la medida de los cromosomas, los bivalentes presentan morfologas diferentes.

Metafase II: los cromosomas presentan las dos cromtidas muy separadas

Estructura interna del cromosoma eucaritico Un cromosoma acta como una unidad estructural diferenciada: para que cada clula hija reciba una copia en cada divisin celular, cada cromosoma tiene que ser capaz de replicarse, y las copias replicadas deben separarse y repartirse correctamente entre las dos clulas hijas. Estas funciones bsicas estn controladas por tres tipos de secuencias de DNA especializadas que se encuentran en todos los cromosomas de las clulas eucariotas, a cada una de estas secuencias se unen protenas especficas que guan la maquinaria que replica y segrega los cromosomas. Orgenes de replicacin - replicacin del DNA Un tipo de secuencia de nucletidos acta como un origen de replicacin del DNA, lugar donde se inicia la replicacin del DNA. La mayora de los cromosomas de las clulas eucariotas contienen muchos orgenes de replicacin, lo que asegura que todo el cromosoma se replique con rapidez. Centrmero segregacin de las copias replicadas

La presencia de una segunda secuencia especializada de DNA, denominada centrmero, permite que cuando una clula se divide, cada copia de un cromosoma replicado sea arrastrada a cada una de las clulas hijas. En el centrmero se forma un complejo de protenas denominado cinetocoro, que une los cromosomas duplicados al huso y facilita su posterior separacin. Telmeros mantenimiento del DNA La tercera secuencia especializada de DNA, denominada telmero, se localiza en cada uno de los dos extremos de un cromosoma. Los telmeros contienen secuencias de nucletidos repetidas que permiten la replicacin eficiente de los extremos de los cromosomas. Los telmeros tienen otra funcin: las secuencias repetidas del telmero, junto con las regiones colindantes, forman estructuras que protegen el extremo de ser confundido por las clulas como una molcula de DNA rota que necesita ser reparada.

Centrmero Regin del cromosoma que se asocia con las fibras de huso durante la divisin celular facilitando la migracin de las cromtidas hermanas o de los cromosomas homlogos hacia los polos celulares durante la anafase. Incluye el cinetocoro, una regin especifica del centrmero que se asocia con los microtbulos del huso. Se observa como una constriccin entre las dos molculas de DNA, entre las dos cromtidas hermanadas de un cromosoma. Parece que la presencia de nucleosomas que contienen variantes de histonas produce marcajes en la cromatina que raramente son duraderos. Considrese, por ejemplo, la formacin y herencia de la cromatina que forma los centrmeros, la regin requerida de DNA de cada cromosoma para la segregacin ordenada de los cromosomas en las clulas hijas cada vez que una clula se divide. En muchos organismos complejos, incluidos humanos, cada centrmero est embebido en un tramo central especial de heterocromatina que persiste durante toda la interfase, a pesar de que el desplazamiento del DNA mediado por el centrmero solo se produce durante la mitosis. Esta cromatina contiene una variante de la histona H3 especfica del centrmero, conocida como CENP-A, acompaada de protenas adicionales que empaquetan los nucleosomas en una organizacin especialmente densa que forma el cinetocoro, la estructura especial necesaria para el anclaje del huso mittico. La organizacin molecular del centrmero se puede realizar de varias formas segn el tipo de organismo: S. cerevisiae

La levadura presenta unas secuencias especficas de DNA de aproximadamente 125 pares de bases de nucletidos muy similares entre los diferentes cromosomas de la especie que son suficiente para actuar como centrmero. CDE I y CDE III: son dominios caractersticos que presentan variantes de nucletidos que atraen protenas implicadas en la estructuracin del cinetocoro. CDE II: es el dominio central, presenta una secuencia de nucletidos muy rica en A-T (>90%) que es una seal para que se una con un nucleosoma que presenta una variante de las histona H3, la CENP-A o H33.

La formacin del centrmero es bastante desconocida. A pesar de su pequeo tamao, sobre esta secuencia de DNA se ensamblan ms de una docena de protenas diferentes, como la variante de la histona H3 CENP-A que, junto con las otras tres histonas del ncleo nucleosmico, forman un nucleosoma especfico del centrmero. Las dems protenas adicionales del centrmero de la levadura lo unen a un solo microtbulo del huso mittico. S. pombe:

Las secuencias de DNA que estructuran el centrmero no tienen nada que ver con las de la levadura y son diferentes entre sus cromosomas. Las regiones centromricas son muy grandes (65 Kb) y presentan un dominio central (CC), formado por una secuencia de DNA no conservada, que est flanqueada por dominios de DNA repetitivo (B, K y L), que pueden presentar orientaciones diferentes (invertidos uno respecto al otro). Tanto el dominio CC como el B presentan la variante de la histona CENP-A, pero como hay muchas no se estructura un solo nucleosoma sino una

serie de ellos, uno al lado del otro. En las regiones K y L las colas de las histonas estn metiladas (modificacin epigentica) por la Lys 9, permitiendo la heterocromatinizacin y la formacin del cinetocoro.

Metazoos (animales):

Los centrmeros de las moscas y de los humanos ocupan cientos de miles de pares de bases y no parecen contener ninguna secuencia especfica de centrmero. Los centrmeros consisten fundamentalmente en secuencias cortas de DNA repetidas, que en los humanos se conocen como satlites alfa de DNA. Sin embargo, estas mismas secuencias repetidas tambin se encuentran en otras posiciones de los cromosomas, lo cual indica que por s mismas no son suficiente para dirigir la formacin del centrmero.

Las histonas que forman parte de esta secuencia tienen una agrupacin muy concreta. En la parte ms central (heterocromatina cntrica) hay unas regiones con la variante de la histona H3 (en humanos H3.3), que reconoce las secuencias repetitivas de DNA-satlite, alternadas con regiones donde encontramos la H3 que presenta dimetilacin de la Lys 4 de la cola N-terminal. La regin cntrica est envuelta por heterocromatina, la regin pericntrica. El modelo ms aceptado que explica cmo se determina la formacin del centrmero es el siguiente: Hay un plegamiento concreto de la cromatina centromrica, que determina la estructuracin del cinetocoro. La cromatina cntrica est directamente en contacto con el cinetocoro, donde encontramos la histona CENP-A, y presenta unas seales que permiten la asociacin de las protenas del cinetocoro. La cromatina pericntrica est en contacto directo con la otra cromtida, permitiendo la cohesin entre las dos cromtidas hermanas. Hay ms cohesin en el centrmero porque la metilacin de la lisina 4 es una seal que hace que se unan ms cohesinas, que en el resto del cromosoma.

As pues, parece que los centrmeros de los organismos complejos no estn definidos por una secuencia especfica de DNA sino por un ensamblaje de protenas. Cuando se examina el tramo de cromosoma de los centrmeros se observa una alternancia de dos formas modificadas de cromatina. Parece que esta organizacin permite a la heterocromatina cntrica plegarse de tal modo que los nucleosomas que contienen la CENP-A se coloquen en el lado exterior del cromosoma mittico, donde unirn el conjunto de protenas que forman la placa de los cinetocoros.

En la mayora de las especies nicamente hay una regin centromrica por cromosoma, se forma un centrmero localizado, insercin de los microtbulos restringida a un segmento del cromosoma. Pero en algunas especies podemos observar: Centrmero difuso: insercin de las fibras del huso sobre toda la extensin cromosmica. o Cromosomas holocinticos: un solo centrmero situado a lo largo de todo el cromosoma. o Cromosomas policntricos: mltiples centrmeros uno al lado del otro Anomalas: o Cromosomas dicntricos: con dos centrmeros o Misdivisin: divisin transversal del centrmero

Telmeros Son secuencias localizadas en los extremos de los cromosomas de eucariotas, importantes en la replicacin y el mantenimiento de los cromosomas. Repeticiones en tndem de una secuencia simple de DNA muy ricas en G-C. Los extremos lineales de los cromosomas eucariotas son muy complejos, ya que estn fuertemente unidos a protenas que le proporcionan una estructura de bucle, el t-loop. Para conseguir esta estructura compleja se necesitan tres tipos de protenas: Enzimas procesadoras de DNA Protenas reparadoras del DNA Protenas de unin a cadena simple de DNA

Secuencias fuertemente unidas a protenas que forman estructuras circulares que protegen los extremos de exonucleasas, evitan la fusin entre cromosomas y asocian los telmeros a dominios especficos del ncleo. Estas regiones son muy ricas en protenas reparadoras del DNA, que reparan roturas de doble cadena. Como el extremo del telmero es monocatenario ha de haber protenas que se unan en estas regiones para evitar anomalas como la fusin entre cromosomas (son regiones estndar, iguales en todos los telmeros). En ausencia de los tres tipos de protenas y, si no se formase el T-loop, los cromosomas se fusionaran entre s, porque las cadenas tienen terminaciones monocatenarias. Esto producira anomalas cromosmicas y entre otras cosas, la aparicin de clulas cancerosas. Telmeros y replicacin de cromosomas lineales: En la replicacin encontramos una cadena avanzada y una retardada que se van replicando. La cadena lder o avanzada se sintetiza completamente de una tirada, pero el cebador de inicio (extremo 5) no se puede sustituir por DNA porque no hay ningn extremo OH libre para iniciar la sntesis. Con la cadena retardada pasa algo similar, como

es sintetizada a partir de muchos primers, estos han de ser sustituidos por DNA pero solo es posible cuando se encuentran en el interior de la cadena ya que, all, encontramos extremos OH libre. En el caso del ltimo primer (extremo 5), cuando se elimina, no se podra sustituir por DNA porque tampoco hay un extremo OH libre. Esto provoca un acortamiento de los telmeros en cada replicacin. Este hecho se puede solucionar gracias a la telomerasa, una ribonucleoprotena presente en las clulas germinales y cancerosas con actividad retrotranscriptasa o transcriptasa inversa. El RNA que forma parte de esta enzima es muy corto pero complementario a los extremos de los cromosomas.la telomerasa reconoce y se une especficamente a estos extremos 5 monocatenarios y acta alargando la cadena aadiendo repeticiones. Despus la primasa vuelve a formar un primer sobre el fragmento recin sintetizado y se sintetiza el DNA a partir de este cebador. Finalmente se eliminar el primer de RNA y quedar un extremo libre (monocatenario) pero sin que el cromosoma sea ms corto. La telomerasa nicamente est presente en clulas germinales y cancerosas, de tal forma que en la transmisin de cromosomas los telmeros mantienen su longitud. Todas las clulas somticas son telomerasa -, de tal manera que van perdiendo unidades de los telmeros. Esto es una consecuencia directa del envejecimiento celular y del individuo ya que el acortamiento de los telmeros desencadena la apoptosis. Las clulas cancerosas han modificado su ciclo celular y han mutado de telomerasa a telomerasa +, por tanto, preservan la longitud de los telmeros y tienen ms viabilidad celular. Crommeros Son partculas discretas de cromatina, de medida y forma variables, ordenadas linealmente sobre la longitud del cromosoma. Se interpretan como enrollamientos de la cromatina. En las tinciones uniformes aparecen con una coloracin diferente. Regin organizadora nucleolar Constriccin secundaria que presentan algunos cromosomas. Ocupa una posicin subterminal en el cromosoma (el segmento distal se conoce con el nombre de satlite). En el ncleo interfsico se encarga de organizar el nuclolo. Contiene, adems, los genes que codifican para el RNA ribosmico. Los genes rRNA presentan repeticiones en tndem, en humanos se encuentran en los cromosomas acrocntricos (13, 14, 15, 21 y 22), donde hay satlites. Arquitectura nuclear y territorios cromosmicos Los cromosomas ocupan territorios discretos en el ncleo interfsico. Se consigue mediante uniones entre los cromosomas (telmeros, centrmeros, segmentos de DNA altamente repetitivo) y la envoltura nuclear. Evidencias indirectas:

Se observa que los cromosomas homlogos estn ms cerca entre ellos que de otros, tienen una territorialidad compartida. Esto se ha demostrado por la gran cantidad de intercambios entre cromosomas homlogos en enfermedades acompaadas de roturas cromosmicas. Algunos tipos de intercambios entre cromosomas no homlogos se observan con ms frecuencia que otros. Por ejemplo, la t(9;22) que da lugar al cromosoma Philadelphia y la leucemia mielgena crnica. Evidencias directas:

Estudios de localizacin cromosmica mediante tcnicas de hibridacin in situ fluorescente. Gracias a estas evidencias se va a demostrar claramente que los cromosomas no estaban situados al azar dentro del ncleo sino en territorios (territorialidad cromosmica). Estas evidencias se basan en estudios de localizacin cromosmica mediante tcnicas de hibridacin in situ fluorescente, es decir, en la tincin especfica de cromosomas. Por ejemplo, en clulas de races se observ que haba una organizacin en funcin de los telmeros y los centrmeros. En el caso del pollo se marcaron los microcromosomas y despus los macrocromosomas, y se vio que se encontraban en lugares diferentes del ncleo. Cuando se construa un modelo de tres dimensiones, se vea que los cromosomas estn dispuestos en territorios concretos, tienen territorialidad, no estn dispersos y mezclados. Esto tiene sentido porque una estructura tan organizada en la divisin no poda ser que estuviese tan desordenada, ya que podran producirse nudos y roturas. En humanos la localizacin de los cromosomas depende de la densidad gnica, los cromosomas con pocos genes se encuentran en la periferia mientras que los que tienen muchos genes, en el interior del ncleo. Esto no pasa en todos los tipos celulares pero si en los linfocitos. El cromosomas 19 tiene una elevada densidad, mientras que el 18 tiene baja densidad, cuando se localizan los territorios cromosmicos en ncleos interfsicos se observa que el 19 est situado en el interior del ncleo y el 18 en la periferia. Otro criterio puede ser la medida cromosmica, los cromosomas ms grandes se situarn en la periferia y los ms pequeos en el interior del ncleo. Adems, dentro de cada territorio cromosmico el DNA est altamente organizado. En el caso de los humanos, se observa que en el ncleo interfsico los brazos p y q de los cromosomas 19 y 18 estn bien diferenciados. En el cromosoma X se puede observar que las regiones centromericas (rojo) y las regiones telomericas (verde) tambin estn muy diferenciadas. Incluso la cromatina se organiza hasta el nivel de bandas, es decir, que si se identifican genes, se observa territorialidad. Los territorios cromosmicos forman estructuras porosas donde encontramos los complejos multienzimticos implicados en la replicacin, transcripcin, reparacin y splicing. Si, en ncleos interfsicos, identificamos la H2B con una protena verde fluorescente, en cualquier lugar donde haya H2B lo veremos de color verde. Cuando esto se realiza, se observan dos estructuras que no son verdes, los nuclolos. El resto de regiones irregulares que no son verdes son zonas donde no hay cromatina. Si se marca el factor splicing con anticuerpos de color rojo, observaremos las regiones

donde se localizan. Si superponemos las dos imgenes veremos que se corresponden, en las regiones donde no hay cromatina encontraremos el factor splicing. Modelo CT (chromosome territories)/IC (intherocromatin compartment) Diversos tipos de experimentos han llevado a concluir que la posicin de un gen en el interior del ncleo cambia cuando se expresa intensamente. As, una regin que se transcribe de forma muy activa, con frecuencia se encuentra extendida fuera de su territorio cromosmico y forma un bucle extenso. Los cromosomas se organizan formando territorios cromosmicos que contienen compartimentos intercromosmicos, en estos espacios encontramos los complejos multienzimticos encargados de la replicacin, transcripcin, reparacin y splicing (permite obtener a partir de un transcrito primario de RNAm o pre-RNAm diferentes molculas de RNAm maduras), que tambin se encuentran en los espacios entre los territorios cromosmicos. Segn este modelo los cromosomas ocupan un espacio discreto dentro del ncleo, el territorio cromosmico, que est altamente organizado. Dentro de cada uno encontramos regiones de eucromatina y heterocromatina. Los territorios cromosmicos son estructuras porosas donde se encuentran los compartimentos interocromosmicos, por tanto, cuando un gen necesita ser transcrito ha de moverse a un CI donde se encuentren las enzimas necesarias. Este modelo se basa en una dinmica de los territorios cromosmicos. Una prueba sera un experimento donde podemos activar y desactivar genes. Inicialmente tenemos el gen inactivo (amarillo) que se encuentra en el interior del territorio cromosmico (verde). Cuando se activa se observa que el gen no est en el mismo lugar, se ha alejado del territorio cromosmico mediante un loop de cromatina. Esta dinmica se basa en el movimiento de los territorios cromosmicos para poder llegar o alejarse de los compartimentos intercromosmicos en el ncleo interfsico.