Las caspasas tienen un papel clave en la apoptosis.

Las investigaciones sealan que tambin tienen funciones no apoptticas en mltiples procesos celulares como la plasticidad sinptica, desarrollo dendrtico, el aprendizaje y la memoria. Las caspasas con una familia proteasas de cistena que tienen un residuo conservado de cistena en su sitio activo que se unir a un residi de aspartato en sus sustratos. Es una enzima proteoltica clave en la apoptosis y se encuentra en una amplia variedad de animales, desde gusanos hasta seres humanos. En los mamferos se han identificado 12 tipos de ellas. Las caspasas se traducen como zimgenos inactivos, que se activan por medio de ruptura proteoltica. En base a su estructura y funcin, se clasifican en dos grupos a) Caspasas iniciadoras: (caspasa-1, 2, 4, 5, 8, 9, 10,11y12) tienen un largo prodominio N-terminal, por donde son reclutados a complejo de protenas especficas para la activacin del proceso. Cuando se activ el proceso, estas caspasas pueden separar y activar las caspasas efectoras, que pasarn a proteolizar otros sustratos celulares b) Caspasas efectoras: (caspasa -3,6,7). Una de ellas es la C. elegans ced caspasa-3, que tiene una funcin crtica en la apoptosis, y gracias a ella se descubri que la mayora de los miembros de esta familia son componentes de las vas de sealizacin de apoptosis

La bioqumica y la funcin de estas proteasas se han estudiado principalmente en el contexto de la apoptosis. En las clulas sometidas a la apoptosis, las caspasas se activan mediante dos vas principales: la va extrnseca y la va intrnseca a) La va extrnseca: comienza por la unin de ligandos especficos (como: factor de necrosis tumoral alfa [TNF], ligando de Fas, factor de crecimiento nervioso [NGF]) a receptores de muerte de la superficie celular (como: receptor de factor de necrosis tumoral 1 [TNFR1], Fas, y del factor del receptor de crecimiento nervioso p75). Cuando se uni el ligando, los receptores de muerte comienzan un montaje de los multimeros de una molcula dada (eso se llama multimerize) y tambin reclutan mltiples molculas adaptadoras para formar el complejo que lleva a la muerte de sealizacin (DISC),

que a la vez activa el iniciador caspasas. Para

TNFR1, TNF receptor-

protena asociada con el dominio de la muerte (TRADD), TNF protena asociada receptor 2 (TRAF2), receptor de la protena asociada a la quinasa 1 (RIPK1), inhibidor de la apoptosis celular de las protenas cIAP1 y cIAP2 y protena Fas-dominio de muerte asociado con (FADD), son reclutados para formar un disco que activa la caspasa-8 b) La va intrnseca: Es la va mitocondrial de la apoptosis, y aqu los estmulos que inducen la muerte activa pro-apoptticas Bcl-2, la familia de protenas para alterar la permeabilidad de la membrana mitocondrial y de inducir la liberacin de citocromo c de la mitocondria. Citoslica de citocromo c promueve el ensamblaje de un apoptosoma, un complejo proteico multimrico que contiene Apaf-1 y citocromo c. Los reclutas apoptosoma activa el iniciador caspasa-9, que luego se divide en caspasa-3 o -7. Resumen: vas extrnseca e intrnseca de apoptosis. Estas son las dos principales vas de apopotosis. La va extrnseca se inicia por la unin a receptores de muerte en la membrana plasmtica ligando. La va intrnseca tambin se denomina la va mitocondrial. Ambas vas conducen a la activacin de las caspasas.

Durante un largo periodo, las caspasas se han estudiado principalmente por sus funciones pro-apoptticos. Sin embargo, los estudios funcionales de caspasas en los ltimos aos han cambiado este punto de vista. Es cada vez ms claro que las caspasas tienen funciones no apoptticas en mltiples procesos celulares, como la inflamacin, la diferenciacin y la proliferacin celular. En el sistema nervioso, las caspasas han demostrado que tienen un papel no apopttico en la plasticidad sinptica. Se puede ver aquello en, por ejemplo: La poda dendrtica durante el desarrollo en Drosophila neuronas (neurona sensorial tipo 2); en las respuestas quimiotrpicas de los conos de crecimiento de la retina en Xenopus; en el crecimiento de neuritas; y en el desarrollo y la maduracin de las neuronas sensoriales olfativas. Se ver las funciones de las caspasas en la modulacin de la transmisin sinptica en condiciones fisiolgicas y patolgicas, y su importancia para la cognicin.

Va apopttica mitocondrial y la caspasa-3 en LTD (depresin a largo

plazo) La plasticidad sinptica es un medio importante por el cual el sistema nervioso responde a la experiencia previa y se adapta a los cambios ambientales. El cambio en la plasticidad sinptica puede ser transitoria (de segundos a minutos) o durante un perodo prolongado. La larga duracin de la plasticidad sinptica desempea un papel crucial en el refinamiento de las conexiones neuronales durante el desarrollo y en las funciones cognitivas como el aprendizaje y la memoria. En el cerebro de los mamferos, la potenciacin a largo plazo dependiente del receptor NMDA (LTP) y depresin a largo plazo (LTD) de la transmisin sinptica son dos formas principales de la plasticidad sinptica de larga duracin. El movimiento de los receptores AMPA en y fuera de la sinapsis parece ser el mecanismo biolgico de clula primaria que subyace al cambio de la eficacia sinptica durante LTP y LTD. Sin embargo, las vas de sealizacin y los mecanismos moleculares que subyacen a LTP y LTD no se entienden claramente. Una caracterstica interesante de la plasticidad sinptica es el cambio morfolgico que acompaa la modificacin funcional de la sinapsis. LTP se asocia con la formacin y el crecimiento de las espinas dendrticas, mientras que LTD se asocia con la contraccin y la prdida de espinas. Se establece una hiptesis donde LTP y LTD reflejan oposicin en procesos biolgicos celulares que controlan el crecimiento celular. Podran los mediadores de la apoptosis (que representa la principal va para la involucin celular controlada) tambin desempear un papel en el debilitamiento y la eliminacin de sinapsis? Recientemente se ha visto que la caspasa-3 y la ruta mitocondrial de la apoptosis desempean un papel crtico en la induccin LTD. En la caspasa-3 en ratones knockout, es abolido NMDA-receptor LTD dependiente de las neuronas CA1, mientras que LTP puede ser inducida normalmente. LTD tambin se bloquea, especficamente por la inhibicin farmacolgica de la caspasa-3 (el verdugo caspasa) y la caspasa-9, pero no se ve afectada por un inhibidor la caspasa-1.En LTD, caspasa-9 y la caspasa-3 se activan a travs de la participacin de la va intrnseca por la activacin de BAD, que es una protena pro-apopttica de la familia Bcl2. BAD tambin se activa en las clulas apoptticas, pero en las neuronas sometidas a LTD, BAD se activa a un nivel ms bajo y de forma transitoria, lo que conduce a un grado moderado de activacin de la caspasa, que es suficiente para promover la internalizacin del receptor de AMPA. Niveles de activacin ms prolon-

gados y mucho ms altos de caspasa-3 se requieren para inducir la muerte celular, y la endocitosis del receptor de AMPA pueden contribuir a la sealizacin de apoptosis. Activar la caspasa-3 en las neuronas sometidas LTD es necesario para la endocitosis del receptor AMPA sin causar la muerte celular. En la caspasa-3 los ratones knock-out y ratones knockout malo, que tienen deficiencia de los receptores NMDA inducida por la activacin de la caspasa-3, la internalizacin del receptor AMPA se bloquea. Del mismo modo, BAD y BAX ratones KO son defectuosos de LTD. LTD tambin es bloqueado por la sobreexpresin de Bcl-XL (un miembro de anti-apoptticos de la familia Bcl2) o XIAP (un inhibidor de la protena directa de la caspasa-9 y la caspasa-3). En contraste, la LTP es afectada por frmacos, gentica molecular o la interrupcin de la caspasa-3 y de la va apopttica intrnseca. En conjunto, estos resultados confirman la importancia de la va apopttica mitocondrial - que culmina en la activacin de la caspasa-3 - especficamente en la induccin LTD. Resumen: Participacin de la va apopttica mitocondria e intrnseca en LTD. Se requiere que la ruta mitocondrial para la depresin de NMDA dependiente del receptor a largo plazo de la transmisin sinptica. La activacin del receptor de NMDA conduce activacin de la va mitocondrial, que se requiere para la endocitosis del receptor de AMPA a moderada.

La va apopttica mitocondrial es enganchada por la protena fosfatasa calcineurina y PP1, que se activan por los receptores de NMDA, que activa la calcineurina y PP1 dephosphorylate BAD para iniciar la va apopttica mitocondrial en las neuronas. La implicacin crtica de calcineurin/PP1 en la va intrnseca de la apoptosis puede explicar por qu estas fosfatasas de protenas son necesarias para la induccin LTD, aunque esto no excluye la posibilidad de que calcineurin/PP1 tambin actan sobre otros sustratos relevantes en LTD (tales como los receptores AMPA, PSD-95). Se presume que las caspasas activas pueden funcionar en LTD como enzimas proteolticas. Pasos cruciales en la comprensin del mecanismo de las caspasas son la identificacin de los sustratos de la caspasa-3, que son relevantes para LTD, y para averiguar cmo la ruptura de estos sustratos conduce a la internaliza-

cin del receptor AMPA. Se considera que el pro-supervivencia y pro-LTP protena quinasa Akt (un sustrato conocido de la caspasa-3 en la muerte celular) para jugar un papel en la supresin de LTD por GSK3 fosforila e inhibiendo. La sobreexpresin de una forma mutante de Akt que no es susceptible a la ruptura por caspasa-3 previene la induccin de LTD, consistente con la idea de que se requiere Akt proteolisis por la caspasa-3 para la LTD en neuronas. Por lo tanto, la cascada de las mitocondrias-caspasa puede encajar en las vas de sealizacin claves para induccin LTD. LTD es normalmente considerado como "homosinptica" (que se producen slo en las sinapsis estimuladas), aunque en algunas condiciones, tambin puede observarse en la ONU-estimulados sinapsis ("heterosinptica LTD"). Postulamos que slo las mitocondrias, cerca de las sinapsis activadas, participan en la induccin de LTD. Debido LTD resultados de la estimulacin de la activacin slo moderada y transitoria de la va mitocondrial de apoptosis, las caspasas activadas se limitan a la proximidad de las sinapsis estimuladas, evitando de este modo la propagacin a larga distancia de LTD. Aunque las propiedades espaciales y temporales de la activacin mitocondrial en LTD an no estn claros, se encontr que las mitocondrias pueden estar muy cerca de las sinapsis (algunos estan incluso presente en las espinas dendrticas), y su morfologa, distribucin y de la motilidad son regulados por estimulacin sinptica. Las caspasas en LTP y el aprendizaje y la memoria La caspasa-1 (interleucina-1 de la enzima convertidora, ICE) es el primer miembro de mamferos identificados de la familia de las caspasas. Activar la caspasa-1 procesa proteolticamente citocinas IL-1 e IL-18, y es una caspasa proinflamatoria conocida. Adems de su funcin proinflamatoria, activar la caspasa-1 inhiben la LTP. Un inhibidor de la caspasa-1 pptido (z-YVAD-FMK) mejora la LTP de NMDA dependiente del receptor cuando se aplica a cortes de hipocampo. El efecto de la caspasa-1 inhibidor de LTP podra estar mediado por su sustrato de IL-1, ya que la aplicacin de la IL-1 a cortes de hipocampo inhibe la LTP en CA1, CA3 y el giro dentado, y la inyeccin intra-cerebro-ventricular de IL-1 en ratas deteriora la LTP en el giro dentado. Sin embargo, no hay ninguna evidencia publicada de IL-1 ratones KO caspasa-1 o que esta va est implicada en el control de la plasticidad sinptica.

La plasticidad sinptica es crucial para las funciones cognitivas del cerebro, tales como el aprendizaje y la memoria. De acuerdo con sus funciones en la LTP y LTD, caspasa-3 y caspasa-1 han sido reportados para contribuir al aprendizaje y la memoria. En el pinzn cebra auditiva del cerebro anterior, la caspasa-3 actividad es necesaria para la consolidacin de la memoria durante el aprendizaje de canto de los pjaros, y la exposicin provoca una liberacin rpida y transitoria de la actividad caspasa-3 de su XIAP protena inhibidora en espinas dendrticas. Perfusin cerebral crnica de la caspasa-1 inhibidor en ratas de edad aminora el aumento relacionado con la edad en el hipocampo de IL-1, y mejora el hipocampo que dependen de la memoria contextual. Los experimentos farmacolgicos anteriores sufren de la advertencia de especificidad de drogas. No hay estudios de comportamiento de la caspasa-3 y caspasa-1en ratones knock-out. Las caspasas en la neurodegeneracin La disminucin progresiva de las capacidades cognitivas es el sntoma prominente de la enfermedad de Alzheimer (EA). La prdida de sinapsis y la reduccin de las protenas sinpticas se detectan en el hipocampo y la corteza en las primeras etapas de la AD, y se correlacionan con disfunciones cognitivas. Patologa sinptica, se cree que es un factor importante para el aprendizaje y el deterioro de la memoria en el ao, pero su etiologa no est clara. Activar la caspasa-6, una caspasa efectora, se ha informado en post mortem de cerebros de pacientes con AD prodrmicos que todava no muestran morfologa apopttica, y el nivel de la caspasa6-troceados Tau se correlaciona inversamente con la puntuacin cognitiva global. La nocin de que la actividad de la caspasa podra tener efectos no apoptticos perjudiciales sobre las sinapsis en enfermedad de Alzheimer precoz es apoyada por estudios recientes en modelos de ratones transgnicos de la EA. En ratones transgnicos que expresan la protena humana precursora de amiloide mutante, caspasa-3 actividad se ha mejorado en las espinas dendrticas ms o menos coincidentes con el inicio de la disminucin de la memoria y en la ausencia aparente de la muerte celular neuronal en estos animales. En Tg4510 Tau ratones transgnicos, que desarrollan ovillos neurofibrilares, se detectan las caspasas efectoras activos en algunas neuronas que preceden a la aparicin de ovillos. Las caspasas efectoras activas aparecen para iniciar la formacin de ovillos mediante la escisin de tau, pero no inducen la muerte celular. El anlisis de las funciones sinpticas en los ratones Tg2576 sugiere que la activacin de la caspasa

conduce a la desfosforilacin y la eliminacin de los receptores AMPA subunidad Glu-A1 de las sinapsis (posiblemente mediante la activacin de la calcineurina), altera la transmisin sinptica glutamatrgica, y una mayor LTD en neuronas del hipocampo CA1. El deterioro de la plasticidad sinptica tambin est implicado en la fisiopatologa de la EA. In vitro, el amiloide 1-42 (A1-42) se aplica durante dos horas a cortes de hipocampo, inhibe LTP; esta inhibicin mediada por A depende de la ruta mitocondrial de la apoptosis, la caspasa-3, la escisin de AKT por caspasas, as como GSK3 y BAX. El deterioro de la LTP por A requiere la funcin del receptor de NMDA, y por el contrario, A puede mejorar LTD. Sin embargo, a diferencia de LTD, caspasa-9 inhibidor no bloquea el efecto de A en LTP, lo que sugiere que A puede activar la caspasa-3 a travs de las dos vas que dependen de las mitocondrias y las mitocondrias-independiente. Por lo tanto la supresin A de la LTP implica - por lo menos en parte - los mismos mecanismos que se usan en LTD. Estos estudios sugieren que las caspasas anormalmente activas pueden contribuir a dficits sinpticas en el cerebro AD, incluso antes de franca muerte neuronal. Es intrigante que la inyeccin de inhibidor de la caspasa-3 en los ratones transgnicos Tg2576 mejora los defectos de memoria. Conclusin El descubrimiento de las caspasas como amplificadores y verdugos de la apoptosis destac su importante papel en la muerte celular programada. Hasta hace poco, se crea que la presencia de las caspasas activas para conducir irreversiblemente a la muerte celular, y por lo tanto era un marcador ampliamente utilizado de las clulas apoptticas. Sin embargo, las caspasas activas tambin se pueden detectar en las clulas que no estn destinados a morir, y que es ampliamente aceptado que las caspasas pueden jugar roles no apoptticos en diferentes contextos de desarrollo y fisiolgicos. En los ltimos aos, los estudios de varios grupos de puntos colectivamente a una funcin esencial de las caspasas en la plasticidad sinptica, independientes de la muerte de las clulas neuronales. Dos caspasas iniciadoras (caspasa-1 y la caspasa-9) y el efector caspasa-3 se muestran para regular la plasticidad sinptica de larga duracin en las neuronas del hipocampo. En particular, no hay pruebas convincentes de que la induccin de NMDA LTD dependiente del receptor es crticamente dependiente de la activacin de la caspasa-3, y por otra parte, activar la caspasa-3 es suficiente para inducir la de-

presin sinptica. BAD y BAX inducida por la liberacin de citocromo c mitocondrial que juega un papel crucial en la activacin de la caspasa-3 en LTD. Se requiere activar la caspasa-3 para la endocitosis del receptor de AMPA y la consiguiente reduccin de la fuerza sinptica, pero el mecanismo de cmo la caspasa-3 controla el trfico del receptor AMPA no est an clara. Nuevas pruebas indican que las caspasas se activan en las primeras etapas de la EA, y podra mediar la disfuncin sinptica y la prdida antes de la llegada de la muerte celular y neurodegeneracin. Estos nuevos puntos de vista tienen implicaciones potenciales para el tratamiento de la EA, y destacan el papel regulador de las caspasas en la plasticidad sinptica, tanto en condiciones normales como patolgicas.