Guia Practica 2013-2

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y Del Medio Ambiente Curso Microbiologa de suelos
s 303019
GUIA DEL EXPERIMENTO DE CAMPO PARA EL SEMESTRE 2013-2 I. IDENTIFICACION DE LA PRCTICA DE CAMPO Nombre de curso MICROBIOLOGIA DEL SUELO Cdigo de curso 303019 Nombre Director curso Nombre practica de del Susana Gmez Posada del Susana.gomez@unad.edu.co la CICLOS BIOGEOQUMICOS E INTERACCIONES MICROBIANAS
Objetivos de la Verificar la influencia de los microorganismos en la mineralizacin prctica de de materia orgnica y en la produccin de sustancias estimulantes campo de crecimiento para las plantas, la forma en que los microorganismos intervienen en los ciclos biogeoqumicos y por tanto son responsables del ciclaje de nutrientes y la fertilidad del suelo. Identificar los factores que afectan las interacciones a nivel de rizsfera y sus repercusiones en el desarrollo de las plantas. Justificacin El estudiante Deber identificar claramente como diferentes tipos de microorganismos, con diferentes tipos de metabolismo, intervienen en cada una de las etapas de cada ciclo biogeoqumico y como la actividad microbiana influye en todos los procesos edficos y pedogeneticos. El estudiante podr evidenciar la forma en que ocurren algunos de los mecanismos de interaccin entre las races de las plantas y la biota del suelo, la forma como los factores ambientales inciden en esos procesos de interaccin y la forma en que el desarrollo y salud de la planta depende en gran parte de esas interacciones. Mecanismo Documento escrito segn lo solicitado en esta gua y rubrica de mediante el cual evaluacin se evaluar la prctica: Valor asignado a la Gua de prctica: 50/500 El tutor del CEAD calificar 30 de 50 puntos El tutor virtual calificar 20 de 50 puntos
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NOTA IMPORTANTE PARA TENER EN CUENTA: La practica con el tutor del CEAD NO EXIME al estudiante de presentar en el foro detrabajo colaborativo 3, el ARTICULO CIENTIFICO resultante del anlisis y discusin de resultados del experimento. El montaje del EXPERIMENTO, no requiere de la presencia de un tutor. Se trata de un ensayo sencillo, que en caso de que el tutor de prctica aun no haya sido contratado, podr hacer sin ningn problema siguiendo paso a paso las instrucciones de sta gua. Posteriormente, cuando el tutor est contratado, usted ya debe tener el experimento montado y debe estar recogiendo informacin cuya interpretacin luego podr discutir con el tutor. As, aunque la contratacin de los tutores acompaantes se demore, el estudiante est en la obligacin de hacer el montaje del ensayo desde el mes de febrero, a fin de poder observar resultados y la directora de curso y los tutores virtuales, estarn atentos a solucionar sus inquietudes si las publica a tiempo por mensajera interna o por va telefnica. Las actividades de practica son las descritas en sta gua y por ningn motivo deben ser cambiadas a criterio del tutor del CEAD. Tampoco debern utilizar guas de semestres anteriores.
II.
METODOLOGIA
OBJETIVO DE LA PRACTICA : A partir de un experimento sencillo, el estudiante deber reconocer la influencia de la actividad microbiana sobre el ciclaje de nutrientes y los procesos de crecimiento, desarrollo y salud de las plantas.
III.
ACTIVIDADES A DESARROLLAR
ACTIVIDAD 1. ENSAYO DE RIZSFERA Y CICLOS BIOGEOQUMICOS MARCO TEORICO Las races al tiempo que se desarrollan, producen diferentes tipos de sustancias que cumplen funciones especficas y que permiten a la planta adaptarse al medio y sobrevivir. En trminos generales se ha denominado rizodeposicin a los compuestos de carbono producidos por la raz (lisados, excreciones y secreciones). Las rizodeposiciones modifican el suelo rizosfrico al generar cambios geoqumicos de transformacin de minerales y materia orgnica as como modificaciones de los contenidos de humedad disponible, pH, disponibilidad y/o agotamiento de nutrientes, ciclaje de nutrientes de las fases cambiable y no cambiable y potencial redox. La rizsfera no es un continuum sino que sufre variaciones a lo largo del eje radical dependiendo de las condiciones del suelo circundante y de las necesidades especificas de la raz. Las plantas de acuerdo a las caractersticas fisiolgicas propias de cada especie, desarrollan mecanismos de adaptacin que les permiten sobrevivir en condiciones ambientales adversas. Algunas son ms exitosas que otras, pero todas modifican el suelo rizosfrico generando efectos de diferente ndole segn necesidades especficas de adquisicin de agua y nutrientes, mecanismos de defensa o promocin de interacciones benficas como asociaciones con micorrizas o simbiosis con Rhizobium. Aunque la investigacin en torno a Rizsfera se ha desarrollado fuertemente durante el ltimo siglo, aun siguen sin ser dilucidados muchos de los mecanismos,
procesos y naturaleza de los compuestos que hacen parte del efecto rizosfrico de plantas. De otro lado, los cambios generados por la influencia de la raz en las propiedades fsicas, qumicas y biolgicas, son complejos e involucran cambios sustanciales a nivel de ultraestructura y geoqumica del suelo, cambios que no pueden delimitarse en un espacio preciso para ser cuantificados, pues el efecto rizosfrico es diferencial a lo largo del eje radical y depende de las condiciones agroecolgicas circundantes. Sin embargo, es posible tener un acercamiento al efecto rizosfrico en relacin al ambiente mediante observaciones del desarrollo fenolgico de las plantas, tomando como indicadores variables de crecimiento , balance entre el desarrollo parte area /parte radical y colonizacin por microorganismos simbiontes, parmetros que permiten evaluar el desarrollo de la planta en trminos de fijacin de carbono en materia seca, o gasto del mismo en mecanismos de sobrevivencia a expensas de los rendimientos y desarrollo general de la planta. As, tendremos en cuenta que las dinmicas microbianas en la rizsfera de las plantas son de doble va, por un lado estn influidas por las condiciones ambientales, los contenidos de materia orgnica y la salud del suelo. Al mismo tiempo, la actividad y metabolismo microbiano al tiempo que participa de la mineralizacin de la materia orgnica, activa los ciclos biogeoqumicos y libera a la rizsfera no solo nutrientes sino enzimas y metabolitos que actan como estimulantes del crecimiento vegetal y reguladores de crecimiento microbiano. Este ensayo pretende evaluar el efecto de diferentes sustratos de siembra y de la fertilizacin qumica y orgnica sobre el desarrollo de plantas, el establecimiento de simbiosis y las modificaciones en la arquitectura radical como estrategias de la planta para asegurar su supervivencia. El establecimiento de cualquier tipo de simbiosis ocurre siempre a expensas de un costo de Carbono1 y por ello, son catalogadas como relaciones de parasitismo, cuyos efectos negativos en la merma de acumulacin de Carbono por la planta son evidentes en los estados iniciales de la simbiosis. Con ste ensayo tambin podremos evidenciar los efectos de los microorganismos celulolticos sobre la mineralizacin de la materia orgnica, la liberacin de elementos a la solucin del suelo y los efectos de antibiosis y estimulacin de crecimiento que provocan en la planta.
El costo de carbono se refiere a la cantidad de C que se gasta para hacer la simbiosis y que de no haberla, sera transformado en biomasa.
OBJETIVOS DE LA INVESTIGACION
Objetivo General
Reconocer la influencia de los factores ambientales sobre las interacciones Rizosfericas y la manera en que dichas interacciones inciden en el desarrollo y salud de la planta.
Objetivos especficos: Evaluar el efecto de la calidad del suelo y la fertilizacin qumica y orgnica en el establecimiento de relaciones simbiticas. Evaluar el efecto de la simbiosis sobre el desarrollo de la planta y los cambios en la arquitectura de la raz.
MATERIALES Y METODOS Para realizar esta actividad usted necesitar: Bolsas plsticas negras de almcigo o macetas de plstico con capacidad para una libra de suelo. Profundidad mnima del recipiente 18 cms. 8 kilos de suelo pobre o de horizonte B con bajo contenido de MO, 4 kilos de suelo de capote rico en materia orgnica. Materia orgnica compostada 4 kilos. Debe describir claramente el tipo de materia orgnica utilizada ya que todas son diferentes dependiendo de su composicin y proceso de compostaje. Micorrizas 60 gramos de micorriza comercial fresca (fecha de
procesamiento no mayor a 3 meses) . Si no puede conseguir micorriza comercial, podr obtenerla as: Ubique un cultivo de maz o sorgo que est rodillero, en estado vegetativo, arranque unas 40 plantas, separe la raz de las plantas, triture la raz de las plantas finamente hasta casi obtener polvo. Revuelva las races pulverizadas con unos 30 gramos de suelo rizosfrico
de donde arranc esas plantas. El producto obtenido contiene micorrizas activas e inoculo de Trichoderma harzianum. Otra forma de obtener micorrizas es dirigirse a un cultivo de Pinos e identificar los sitios en donde se encuentran sombrillitas de hongos. En el lugar en donde se ubiquen esos hongos bastar con escarbar a unos 10 cms de profundidad y extraer tierra de mantillo 2 que tendr una gran cantidad de inoculo de micorrizas. De cualquiera de las dos opciones anteriores necesitara 300 gramos.
Semillas de maz. EM bio activador de mineralizacin de materia orgnica ( 50 cc), Bacthon o similares.
METODOLOGIA
El mantillo de bosque es un sustrato rico en microorganismos y micorrizas. Muchos de los hongos en forma de sombrilla que se ven junto a los rboles son las estructuras areas de hongos micorrizicos. Igualmente, el maz es una planta que facialmente hace simbiosis con micorrizas y es utilizado para la produccin masiva de estas. Las micorrizas comerciales son generalmente una mezcla de tierra o arena y races molidas de plantas de maz que han sido previamente inoculadas con varias cepas de micorrizas. El mejor momento para recolectar las races inoculadas con micorrizas es cuando el maz est rodillero.
Se establecer un experimento con un diseo Completamente al azar con tratamientos y cada tratamiento con TRES repeticiones para un total de sembradas.
plantas
Tres repeticiones para cada tratamiento
TRATAMIENTOS T1. Maz sin inocular en suelo de capote (frtil) T2. Maz sin inocular en suelo pobre (Horizonte B) T3. Maz sin inocular en suelo pobre + 1 gramo de fertilizante qumico (urea o triple 15) T4. Maz en suelo pobre, inoculado con Micorrizas 5 gramos por bolsa T5. Maz en suelo pobre + compost3 + Micorriza 5 gramos por bolsa + EM Inicialmente deber sembrar tres semillas por bolsa. Una vez aparezcan las hojas verdaderas deber dejar una sola planta por bolsa, dejando la ms vigorosa. b) Precisar la informacin climtica presente en el sitio del ensayo: temperatura promedio, precipitacin promedio, altura sobre el nivel del mar, humedad relativa. c) Asegurar que las plantas estn en condiciones ptimas, es decir que controlar las condiciones del experimento minimizando al mximo el error experimental. Por ningn motivo la perdida de plantas por falta de cuidado ser excusa para no hacer el anlisis de resultados. d) Llevar registros semanales durante 6 a 8 semanas del desarrollo de las plantas. Tomar datos semanales para las siguientes variables PARA CADA REPETICION Y TRATAMIENTO: A manera de ejemplo se presenta la tabla para la primera semana.
3
Para los tratamientos suelo pobre + compost: Mezclar 2/3 de suelo + 1/3 de compost. Esta ser la mezcla con que llenar las bolsas
SEMANA N 1 TRATAMIENTO VARIABLE de respuesta Altura+ cm N totales 2 N totales 3 N totales 4 N totales 5 N totales
++
REPETICIONES R1 R2 R3
Promedio por tratamiento++
hojas
Altura+ cm hojas
Altura+ cm hojas
Altura+ cm hojas
Altura+ cm hojas
El dato final de cada variable corresponde al promedio de las tres repeticiones.
Al finalizar el seguimiento, tendr 6 o 7 tablas diligenciadas, una para cada semana. e) En la ltima semana de seguimiento (mnimo 6, mximo 8), o en el momento en que se perciban los primeros sntomas de deficiencias nutricionales, se cosechan las plantas (las deficiencias indican que la raz ha agotado los nutrientes disponibles en el volumen de suelo de la bolsa). En cualquier caso, las plantas deben permanecer como mnimo 6 semanas en las bolsas o macetas. f) Al momento de cosechar las plantas se toman datos de todas las variables.
Luego, se separa parte area y races de cada planta. Con ayuda de una gramera, tomar peso fresco de raz y peso fresco de parte area. Recuerde que tienen tres datos por cada variable tratamiento y que el dato final de cada variable es el promedio de las tres repeticiones. g) Para medir el volumen final de races y de parte area, deber conseguir una probeta graduada de 200 ml o ms. Se llena la probeta con 100 cc de agua, se introducen las races de la planta (bien lavadas, sin arena o suelo) y se mide el volumen de agua desplazado que ser equivalente al volumen de raz. Igual para la parte area, cortar las hojas en tozos que pueda acomodar dentro de la probeta para medir el volumen de la parte area. h) Si en su CEAD tienen acceso a laboratorio de microbiologa, podrn hacer determinacin de porcentaje de colonizacin de micorrizas para cada tratamiento y repeticin por el mtodo de tincin de races (OPCIONAL). As, obtendr las siguientes mediciones: SEMANA 8. COSECHA DE PLANTAS VARIABLE de respuesta REPETICIONES Promedio por tratamiento++para cada variable.
TRATAMIENTO
R1 1 Altura final parte area cm N hojas TOTAL Peso fresco raz en gramos Volumen final de raz en cm3 Peso fresco parte area en gramos Volumen final de parte area en cm3 Porcentaje de colonizacin de races(OPCIONAL)
R2
R3
Altura parte area cm N hojas TOTAL Peso fresco raz en gramos Volumen final de raz en cm3 Peso fresco parte area en gramos Volumen final de parte area en cm3
Altura parte area cm N hojas TOTAL Peso fresco raz en gramos Volumen final de raz en cm3 Peso fresco parte area en gramos Volumen final de parte area en cm3
Altura parte area cm N hojas TOTAL Peso fresco raz en gramos Volumen final de raz en cm3 Peso fresco parte area en gramos Volumen final de parte area en
cm3 5 Altura parte area cm N hojas TOTAL Peso fresco raz en gramos Volumen final de raz en cm3 Peso fresco parte area en gramos Volumen final de parte area en cm3 ANALISIS y DISCUSION De RESULTADOS TRATAMIENTO DE DATOS: Parmetros estadsticos de tendencia central A. Con los datos semanales y finales de altura, sacarn valores promedio y desviacin estndar para cada tratamiento. Con los valores promedio, construirn la grafica de crecimiento, comparando los tratamientos. Debern analizar los resultados en trminos biolgicos de cmo las interacciones microbianas afectaron la curva de desarrollo de las plantas en cada tratamiento ya que se debieron las diferencias. En la misma grafica deben comparar las 5 curvas de crecimiento Obtendr graficas como esta:
B. Usted obtendr datos de crecimiento diferencial entre parte area y raz que deber graficar y analizar en trminos del efecto rizosfrico que se haya logrado en cada tratamiento. Ej: Peso fresco Peso fresco parte area Peso fresco raz
T1
T2
T3
Tratamientos
De igual manera grafique los datos para volumen de parte area y volumen de raz. Saque sus conclusiones desde el anlisis de las interacciones microbianas y procesos microbiolgicos que se sucedieron y afectaron el crecimiento de la planta. Tenga en cuenta que aqu se estn sucediendo procesos de: Mineralizacin de materia orgnica, ciclaje de nutrientes, efecto promotor de crecimiento, competencia por Carbono en los estadios iniciales de la simbiosis, simbiosis como estrategia de sobrevivencia en ambientes adversos, factores que afectan las simbiosis. Por tanto, la primera pregunta que usted debe contestarse, es que tipo de relaciones Rizosfricas fueron recreadas en cada uno de los tratamientos y como se manifestaron en la planta. Luego podr interpretar los resultados obtenidos. Deber tener claro que el promedio de una medida se interpreta en trminos de las unidades en que cada variable fue medida mientras que la desviacin estndar y la varianza no tienen unidades y dan cuenta de que tanto se aleja una medicin del promedio de la poblacin. Deben tener muy claros sus conceptos de probabilidad, estadstica y diseo experimental para poder interpretar los resultados. Al comparar promedios de cada variable en cada semana, debera poder ver diferencias de crecimiento en la primera medicin entre tratamientos y posiblemente pueda ver un menor crecimiento INICIAL en las plantas micorrizadas el cual usted deber explicar. C. ANALISIS DE VARIANZA
Realizar el anlisis de Varianza ANAVA para el diseo Completamente al Azar del experimento con los valores FINALES obtenidos en la ltima semana y discutir los resultados en trminos de diferencias significativas o no significativas entre tratamientos. Si no ha cursado Diseo experimental o si ya lo hizo pero no tiene la competencia, busque asesora con el tutor del CEAD para que hagan un ejercicio de entrenamiento. Cuando se realiza un diseo experimental, se plantean una serie de hiptesis de investigacin relacionadas con las variables de respuesta a observar y a las que deber darse comprobacin y respuesta a travs de la experimentacin y el anlisis de datos. El ANAVA para cada variable de respuesta permitir responder a la Hiptesis de si hay o no diferencias significativas entre los tratamientos. Las variables para las que realizar ANAVA son: altura total, Peso fresco de parte area y peso fresco de raz. Ejemplo: ANAVA para la variable Altura de Planta Fuente de variacin Tratamientos Error Total En este ejemplo, tomaremos los datos finales de altura de planta para cada repeticin, realizaremos el ANAVA y podremos refutar o confirmar la Hiptesis nula que en este caso se ha planteado as: H0: Para la variable altura de planta, no existe diferencia significativa entre los tratamientos. En trminos biolgicos se correspondera con: H0: La aplicacin de compost, micorrizas y microorganismos eficientes, no tienen ningn efecto sobre el desarrollo de la planta en trminos de altura, por tanto, no ofrecen ninguna ventaja competitiva en trminos de disponibilidad de nutrientes. Si el ANAVA, NO arroja diferencias significativas entre tratamientos, diremos que no hubo ningn efecto rizosfrico y que todas las plantas acumularon igual cantidad de C y se desarrollaron de igual forma en las diferentes condiciones ambientales. GL SC CM Fc Ft Significancia
Por el contrario, si el ANAVA arroja diferencias significativas entre tratamientos, habremos confirmado que las condiciones especificas de suelo, ambientales, contenido de MO y simbiosis, s ejercen un efecto diferencial sobre el desarrollo de la planta, especficamente sobre la variable ALTURA. En caso de obtener diferencias significativas entre tratamientos, es necesario saber cules son los tratamientos que resultan diferentes entre s y para ello debe hacer la prueba de Diferencia Mnima Significativa DMS, para saber cules tratamientos fueron diferentes y poder as interpretar los resultados. Puede consultar http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2000352/html/un2/cont_207-27.html para mayor informacin sobre el ANAVA o ANOVA. En los ANEXOS DEL Documento FINAL, deben aparecer las tablas con los datos completos de seguimiento del experimento por semana y final. En el cuerpo del documento y en el artculo cientfico, solo deben parecer: 1. La tabla de parmetros estadsticos: promedio y varianza para cada variable de respuesta y cada tratamiento 2. Las tablas de ANAVA para cada variable de respuesta con su respectiva prueba DMS en caso de haber obtenido diferencias significativas. 3. Las grficas 4. La discusin y explicacin de esos resultados en trminos biolgicos de los procesos que se estn estudiando.
D. DISCUSION DE RESULTADOS Analizaran los resultados estadsticos y las graficas y sacarn sus conclusiones acerca de la influencia de las caractersticas del suelo, microbiota asociada y condiciones climticas sobre la acumulacin total de biomasa, la acumulacin diferencial de biomasa en parte area y raz, rea foliar fotosintticamente activa, rea de exploracin de races y absorcin de agua y nutrientes . Recuerde que cada una de las variables se convierte en un indicador de acumulacin o gasto de carbono, de desbalances de crecimiento entre parte area y raz o en indicador de un crecimiento deficiente o satisfactorio. A travs de las variables de mediacin, usted debe dar respuesta a los objetivos de investigacin y demostrar como las relaciones rizosfricas y el medio ambiente, influyen en el desarrollo de las plantas y como las plantas crean estrategias para hacer frente a condiciones adversas del medio.
Evidenciaran con base en resultados si las simbiosis ofrecen ventajas competitivas para las plantas en condiciones adversas. Evidenciarn si las condiciones fsicas o qumicas del suelo, limitan, impiden o favorecen que se lleve a cabo determinados tipos de simbiosis entre razmicroorganismo. Revise nuevamente los artculos cientficos que se analizaron en los trabajos colaborativos y el modulo, en donde encontrar el sustento cientfico para la discusin de sus resultados. Debern hacer la discusin de resultados apoyados en literatura cientfica. Realizarn una mesa redonda de discusin con el tutor acompaante y compaeros. Sacarn conclusiones relevantes acerca de la naturaleza de las interacciones microbianas y rizosfricas y las implicaciones metablicas que estas conllevan en gasto de carbono, acumulacin de biomasa, salud de la planta, generacin de suelos supresivos. Analizaran los resultados a la luz de la literatura cientfica y sacaran conclusiones acordes a los objetivos propuestos para la investigacin.
ACTIVIDAD 2. ELABORACION DE INFORME PARA EL TUTOR DEL CEAD PARA CALIFICACIN DE PRCTICA DE CAMPO En grupo de CEAD o de forma individual, como prefieran, elaborarn un informe que entregarn al Tutor de PRACTICA del CEAD servir para que l (o ella), les asigne la nota de prctica de campo. OJO: EL TUTOR DEL CEAD CALIFICAR 60 DE 100 PUNTOS. El documento se editar as: INTERACCIONES MICROBIANAS- PRACTICA DE CAMPO Participante 1, Participante 2,Participante n CEAD Nombre del Tutor acompaante de prctica: _____________________________________________________ INTRODUCCION Objetivos e Hiptesis de investigacin Materiales y Mtodos Materiales Diseo experimental: Diseo, Tratamientos, variables de respuesta, anlisis estadsticos, tipos de pruebas (ANAVA, DMS, Promedios, Varianza)
Discusin de Resultados Conclusiones Referencias bibliogrficas Anexos Anexo1. Tablas de datos semanales Anexo 2: Fotografas seguimiento ensayo y cosecha de plantas

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Tres repeticiones para cada tratamiento

Promedio por tratamiento++

El dato final de cada variable corresponde al promedio de las tres repeticiones.

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