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AVISOS LEGALES

LEA TODOS LOS MANUALES DEL PRODUCTO Y CONSULTE CON PERSONAL ENTRENADO POR
BECKMAN COUL TER ANTES DE INTENTAR DE OPERAR EL INSTRUMENTO
PELIGROS Y LIMITACIONES Y PRECAUCIONES OPERACIONALES
Las ADVERTENCIAS. PRECAUCIONES Y los IMPORTANTES lo alertan de la forma siguiente:
ADVERTENCIA
PRECAUCION
IMPORTANTE
Puede causar daos.
Puede causar daos al instrumento.
Puede causar resultados engaosos.
PRECAUCION: La integridad del sistema puede resultar comprometida y ocurrir fallos operacionales si:
Se usa este equipo de una forma otra que la especificada. Opere el instrumento como ha sido indicado
en los Manuales del Producto.
Usted introduce programacin que no ha sido autorizada por Beckman Coulter en su computadora.
Opere solamente la computadora de su sistema con programacin autorizada por Beckman Coulter.
Usted instala programacin que no es una versin con derechos de copia original. Use solamente
programacin que sea una versin con derechos de copia originales para evitar la contaminacin de
los virus.
Beckman Coulter Inc. urge a sus clientes a que cumplan con todos los estndares nacionales para la salud y
seguridad tales como el uso de una barrera de proteccin. Esto puede incluir, pero no se encuentra limitado a, gafas
protectoras, guantes y batas de laboratorio apropiadas cuando se est operando o dando mantenimiento a este o
cualquier otro analizador de laboratorio automatizado.
COULTER, COULTER COUNTER CHANNELYZER, ISOTON, GENS, MAXM, ONYX, STKS son marcas
registradas de BECKMAN COUL TER
Derechos de Copia de Beckman Coulter 2002. Todos los derechos reservados.
CONTENIDO
Seccin 1 Introduccin
Sobre este Manual 1
Como Usar Este Manual 2
Convenciones 4
Definicin de lo Normal 4
Tabla 1
Sustancias Interferentes 3
Seccin 2 Procedimientos Generales
Procedimiento 1
Rechazo Total (-----) 6
Procedimiento 2
Rechazo de Un Solo Periodo de Recuento (*V)_ 8
Procedimiento 3
Errores de Aspiracin 10
Seccin 3 Procedimientos con Leucocitos
Procedimiento 1
Obtencin de los Resultados Correctos cuando
el Resultado de LEUC se encuentra Extralimitado
(+++++) o por Encima de la Linealidad (+) __ 13
Procedimiento 2
Resultados de LEUC Sealizados con * *R 18
Procedimiento 3
Aglutinacin de LEUC o LEUC pequeos 20
Procedimiento 4
Eritrocitos Nucleados 22
Procedimiento 5
Crioglobulinas y/o Criofibringenos 25
Procedimiento 6
Fragmentos de LEUC 28
Procedimiento 7
Cl ulas Rojas Resistentes al Estromalizante (Lyse) _ 30
Procedimiento 8
Micromegacariocitos __________ _
Seccin 4 Procedimientos con Eritrocitos
Procedimiento 1
Obtencin de los Resultados Correctos cuando
el Resultado de ERIT se encuentra Extralimitado
(+++++) o por Encima de la Linealidad (+) ____ _
Procedimiento 2
Resultados de ERIT Disminuidos
---------
Procedim ento 3
Resultados de Hemoglobina Aumentados ____ _
4
Resultados de Hemoglobina Disminuidos ___ _
Procedimiento 5
Resultado de VCM Aumentado ________ _
Procedimiento 6
Resultado Bajo de VCM __________ _
Procedimiento 7
Distribuciones Sealizadas de Eritrocitos _____
Procedimiento 8
Aglutinacin de ERIT ___________ _
Procedimiento 9
ERIT Pequeos o Fragmentos de Erit ___
Procedimiento 10
Muestras Hemolizadas ________
Procedimiento 11
Muestras Lipmicas _________ __ --
32
36
39
41
43
45
47
49
51
55
57
60
11
Procedimiento 12
Seccin 5
Qumicas Anormales
(Sodio, Glucosa o BUN) ________ _
Procedimientos con Plaquetas
Procedimiento 1
Obtencin de los Resultados Correctos cuando
el Resultado de Plq se encuentra Extralimitado
(+++++) o por Encima de la Linealidad (+) ___ _
Procedimiento 2
Resultados de Plq Disminuidos ________ _
Procedimiento 3
Distribuciones de Plq Sealizadas con una "R" ___ _
Procedimiento 4
Plaquetas Gigantes ____________ _
Procedimiento 5
Plaquetas Agrupadas ___________ _
Procedimiento 6
Plaquetas Satlites ____________ _
Seccin 6 Procedimientos Diferenciales
Procedimiento 1
Muestra con un Grfico de Datos, Grfico de Dispersin
o Histograma de Distribucin de LEUC Atpico ___ _
Apndice
Estimado de Leucocitos _____________ _
Estimado de Plaquetas _____________ _
63
67
70
72
74
77
81
84
87
89
111
INTRODUCCION 1
SOBRE ESTE MANUAL
Ciertas anormalidades del espcimen pueden afectar adversamente los
resultados del anlisis y requieren una mayor atencin. Este manual se
encuentra destinado para ser usado con los instrumentos hematolgicos
COULTER con capacidad de diferencial. Su propsito es ayudar al operador a
reconocer, revisar y verificar la exactitud de los resultados cuando existen
condiciones anormales.
Los instrumentos hematolgicos automatizados COULTER emplean diversos
sistemas de sealizacin que ayudan al operador a identificar las muestras que
necesitan una mayor atencin. El objetivo de este manual es utilizar los datos de
estos instrumentos para reconocer exitosamente una muestra anormal. Estos
datos incluyen: resultados de parmetros, seales, codificaciones y alertas, asi
como la apariencia de los grficos de datos, los grficos de dispersin y/o los
histogramas que se encuentren asociados con los resultados de una muestra.
Este material no es para localizar malfuncionamientos en el instrumento. Si usted
sospecha que existe un problema con el instrumento, refirase a la Gua de
Procedimientos Especiales y Localizacin de Malfuncionamientos de su
instrumento.
IMPORTANTE
Este documento se encuentra destinado a ser una gua solamente. Siempre
cumpla con el protocolo de su laboratorio antes de reportar los resultados.
COMO USAR ESTE MANUAL
La Tabla 1 de esta seccin contiene una lista de anormalidades y los parmetros
que pueden ser afectados cuando existe esta anormalidad. La tabla tambin
contiene una referencia a los procedimientos que usted debe usar para obtener
los resultados ms precisos para los parmetros afectados.
Observe que no todos los parmetros indicados en la columnas de Pudiese
Afectar son siempre afectados. Es funcin del operador evaluar los datos y
decidir cuales parmetros, si hay alguno, son afectados y necesitan ser
corregidos.
Tenga en consideracin que ms de un parmetro puede ser afectado cuando
una muestra exhibe mltiples anormalidades.
Usted puede usar la informacin de la Tabla 1 de varias formas para hallar el
procedimiento apropiado para corregir los resultados de la muestra.
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
INTRODUCCION
Si usted ya ha identificado la sustancia interferente en el frotis de sangre,
busque la sustancia en la columna de Interferencia y use el procedimiento
indicado.
Si usted observa interferencia en un grfico de datos, grfico de dispersin o
histograma pero no observa las sustancias anormales en el frotis de sangre,
revise las sustancias relacionadas en la columna de Interferencia para ver
las posibilidades. Revise la lmina otra vez. Si alguna de estas sustancias se
encuentra en el frotis de sangre, use el procedimiento asociado.
Si los resultados de la muestra son inconsistentes con el cuadro hematolgico
del paciente, y no existe una anormalidad aparente en el frotis, considere las
sustancias interferentes listadas en la Tabla 1 que puede no ser detectadas
en un frotis de sangre. Estas sustancias pueden incluir qumicas anormales,
ERIT resistentes a la estromalizacin, ERIT rgidos, LEUC frgiles y otras
sustancias interferentes conocidas. Si una de estas interferencias es
sospechosa, emplee el procedimiento asociado.
Tenga en cuenta que las inconsistencias tambin pueden encontrarse
relacionadas con la tcnica empleada para hacer el frotis, la coleccin de la
muestra y manipulacin de sta o una posible mala identificacin de la muestra,
frotis Ylo resultado impreso.
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
2
..
*
i
I
INTRODUCCION
Tabla 1 Sustancias Interferentes
Pudiese Afectar


. I
Los procedimientos citados en la Tabla 1 se encuentran localizados en sus respectivas
secciones.
TPS H114A202 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
3
CONVENCIONES
Los instrumentos tienen diferentes sistemas de sealizacin basados en sus
capacidades. Por lo tanto, ciertos procedimientos o partes de procedimientos van
a ser especficos para un instrumento en particular. Los pasos en un
procedimiento que son nicos para un instrumento determinado se encuentran
marcados con un icono especfico del instrumento.
Estos iconos son:
@ Para el sistema COULTER GENoS
OM
@) Para el Analizador COUL TER STKS
C0 Para el Analizador COULTER MAXW
M
@) Para el Analizador COUL TER ONyx
Siempre haga referencia a la Gua del Operador especfica para su instrumento y
Manual de Referencia o Sistema de Ayuda en Lnea para la interpretacin de las
seales.
DEFINICION DE LO NORMAL
Para el propsito de este manual, usted puede aceptar una muestra como
"normal" con un 95% de fiabilidad cuando existan las condiciones siguientes:
o Los resultados se encuentren dentro de las escalas de su laboratorio o lmites
prestablecidos.
o No hayan cdigos de parmetros o seales.
o No hayan mensajes de sospechoso.
o No hayan irregularidadles en el grfico de datos, grfico de dispersin o
histograma.
o Resultados de parmetros que sean compatibled unos con los otros.
o Los resultados sean fisiolgicamente posibles.
Este manual se refiere a los resultados de la muestra que no cumplan con esto
criterios, y por tanto se les refiere como "Anormales".
4
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
CONTENIDO 2
IMPORTANTE
Los procedimientos siguientes son ofrecidos solamente como
~ u a . Siempre siga y cumpla con el protocolo de su laboratorio
antes de reportar los resultados
Procedimiento 1
Rechazo Total (-----) 6
Procedimiento 2
Rechazo de Un Solo Perodo de Recuento (*V) _ 8
Procedimiento 3
Errores de Aspiracin 10
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
5
PROCEDIMIENTOS GENERALES 2
PROCEDIMIENTO 1 Rechazo Total ( .... )
Principio
Un rechazo total ocurre cuando los resultados de las tres aperturas (o resultados
del perodo de recuento) no concuerdan. Los guiones (-----) reemplazan al
resultado numrico.
Cuando el cdigo (-----) reemplaza el resultado de un parmetro, la computadora
no puede calcular los resultados que se encuentran basados en los valores
numricos de este parmetro. Como resultado, los parmetros computados son
reemplazados con el cdigo ( ..... ) para indicar un clculo incompleto.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.

Procedimiento
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @
@ (Q) y dentro de las 48 horas para @) .
. 1. Revise visualmente para ver si se encuentran algunas partculas presentes en
las apertura( s) si su instrumento tiene pantalla para la observacin de las
aperturas. Si no tiene pantalla, observe la matriz de rechazo.
2. Procese otra vez la muestra.
3. Si vuelve a ocurrir el rechazo, efecte los pasos siguientes en el orden
ofrecido hasta que sea resuelto el problema.
a. Examine si la muestra presenta cogulos o si tiene fibrina. Si hay fibrina
presente, obtenga otra muestra.
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
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PROCEDIMIENTO 1
IMPORTANTE
Cercirese de que el frotis de sangre fue hecho recientemente del
tubo que est siendo analizado. Algunas anormalidades, tales como
agrupaciones de plaquetas y aglutinacin de ERIT pueden no
aparecer hasta que la muestra no est a temperatura ambiente por
un rato.
b. Haga un frotis fresco del tubo de sangre que est siendo analizado. Examine
el frotis de sangre, particularmente el borde extendido, a ver si observa
clulas anormales, agrupaciones o cristales.
Si hay presentes agregados de LEUC, vea el Procedimiento 3 para LEUC.
Si hay presentes cristales de crioglobulinas/criofibringenos, vea el
Procedimiento 5 para LEUC.
Si hay presentes aglutinaciones de ERIT, vea el Procedimiento 8 para
ERIT.
Si hay presentes plaquetas gigantes, vea el Procedimiento 4 para PLQ.
Si hay presentes agrupaciones de plaquetas, vea el Procedimiento 5 para
PLQ.
C. Revise la apertura o los resultados del perodo de recuento. Si los resultados
de LEUC, ERIT PLQ se encuentran extralimitados (+++++), vaya al
procedimiento apropiado.
Si los resultados de LEUC se encuentran extralimitados, vea el
Procedimiento 1 para LEUC.
Si los resultados de ERIT se encuentran extralimitados, vea el
Procedimiento 1 para ERIT.
Si los resultados de PLQ se encuentran extralimitados, vea el
Procedimiento 1 para PLQ.
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
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PROCEDIMIENTO 2 Rechazo de Un Slo Perodo de Recuento (*V)
Principio
En los analizadores MAXM y ONYX, la codificacin *V aparece a continuacin del
. parmetro cuando ocurre el rechazo de un solo perodo de recuento. Puede
indicar un resultado errneo debido al bloqueo parcial o temporal de la apertura
durante la fase de recuento. El cdigo *V aplica solamente a los parmetros de
LEUC, ERIT, VCM, ADE, VPM ADP. La codificacin de V aparece a continuacin
de cualquier parmetro que sea calculado del parmetro con el rechazo de un
solo perodo de recuento.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin.
Procedimiento
1. Revise visualmente para ver si se encuentran algunas partculas presentes en .
la apertura. Refirase a la Gua Para Procedimientos Especiales y
Malfuncionamientos en la limpieza de las aperturas.
2. Cualquiera de los procedimientos siguientes puede ser empleado para
resolver el problema:
a. Procese de nuevo la muestra. Si no recurre la V*, reporte los resultados.
b. Revise los tres perodos de recuento. Si no hay diferencias significativas
entre los perodos de recuento, puede ser reportado el resultado
promedio.
Revise los tres perodos de recuento oprimiendo primero F7, entonces
Oprima AIt+F1 para proyectar los resultados del perodo de recuento
uno, oprima Alt+F2 para el perodo de recuento dos y Alt+F3 para el
perodo de recuento tres.
Revise los tres perodos de recuento oprimiendo F3. Oprima F3
repetidamente para ver individualmente las proyecciones de los tres
perodos de recuento.
c. Detecte (o "escane") un frotis de sangre para verificar los resultados del
instrumento.
8
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTO 2
3. Si el problema no puede ser resuelto, obtenga un recuento correcto usando
un hemocitmetro.
a. Si se usa el resultado de LEUC del hemocitmetro, calcule los nmeros de
clulas absolutas de la forma siguiente:
% Clulas (reportadas) x LEUC Correctos
Recuento Absoluto =
100
b. Si se usa el resultado de ERIT del hemocitmetro, calcule La CHM y la
CHCM de la forma siguiente:
Hgb
CHM= x 10
ERIT (contados)
Hgb
CHCM= x 100
VCM x ERIT (contados)
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
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PROCEDIMIENTO 3 Errores de Aspiracin
Principio
@) El sistema GEN.S tiene detectores de sangre para garantizar la integridad de la
muestra en el modo automtico de frasco cerrado. Las muestras identificadas
como que no cumplen con los requisitos de aspiracin normal sealan todos los
resultados con una P. El mensaje Parto Asp. aparece en el campo de Estado.
@ @ Los analizadores STKS y MAXM tienen detectores de sangre para garantizar la
integridad de la muestra en el modo primario de frasco cerrado. Las muestras
identificadas como que no cumplen con los requisitos de aspiracin normal son
sealizadas con ( ..... ) como reemplazo de los resultados numricos. El mensaje
Parto Asp. aparece en el campo de Estado.
@) El analizado ONYX tiene detectores de sangre para garantizar la integridad de la
muestra en ambos modos el abierto y el cerrado. Cuando una muestra es
aspirada, ambos el detector frontal y el detector del espacio de aire son
activados. Si el detector del espacio de aire detecta aire antes de que el frontal
detecte sangre, el sistema identifica la muestra como que no cumple los
requisitos de aspiracin normales. El mensaje Error-Blood not detected
aparece y todos los resultados son sealizados con una RR.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EOTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @
@ y dentro de las 48 horas para @) .
Procedimiento
1. Inspeccione visualmente la muestra.
2.
a. Si no hay cogulos presentes, procese de nuevo la muestra. Si la seal no
vuelve a aparecer, reporte los resultados.
b. Si hay cogulos presentes, vuelva a extraer la muestra y repita el anlisis.
3. Examine los datos para ver si los resultados son lgicos, especialmente los
ndices de ERIT.
10 .

TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTO 3
4. Inspeccione los histogramas para ver si presentan anormalidades que se
puedan relacionar con la integridad de la muestra.
5. Revise la historia del paciente, si es posible, para ver si hay sntomas que
correspondan con los resultados.
6. Examine un frotis. Si hay una aglutinacin de ERIT, refirase al
Procedimiento 8 de ERIT.
Notas del Procedimiento
Las muestras con hemoglobinas bajas pueden no exhibir las caractersticas
pticas detectables mediante el proceso de aspiracin normal. Sin embargo,
usted va a tener el resultado bajo, sealizado con RR en el analizador ONYX
y con P en el Sistema GEN.S.
Los tubos llenados inapropiadamente o con un volumen bajo pueden producir
un muestreo escaso o corto del espcimen.
_______________________________________________________________________ 11
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
CONTENIDO 3
IMPORTANTE
los procedimientos siguientes son ofrecidos solamente como
gua. Siempre siga y cumpla con el protocolo de su laboratorio
antes de reportar los resultados
Procedimiento 1
Obtencin de los Resultados Correctos cuando
el Resultado de LEUC se encuentra Extralimitado
(+++++) o por Encima de la Linealidad (+) ____ _ 13
Procedimiento 2
Resultados de LEUC Sealizados con * *R _____ _ 18
Procedimiento 3
Aglutinacin de LEUC o LEUC pequeos ______ _ 20
Procedimiento 4
Eritrocitos Nucleados __ _ 22
Procedimiento 5
Crioglobulinas y/o Criofibringenos ________ _ 25
Procedimiento 6
Fragmentos de LEUC ____________ _ 28
Procedimiento 7
Clulas Rojas Resistentes al Estromalizante (Lyse) __ _ 30
Procedimiento 8
Micromegacariocitos _____________ _ 32
____________________________ ~ ~ ~ 1 2
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON LEUCOCITOS 3
PROCEDIMIENTO 1 Obtencin de los Resultados Correctos cuando el
Resultado de LEUC se encuentra Extralimitado (+++++) o
por Encima de la Linealidad
Principio
Los resultados de LEUC generados por un sistema GEN.S son considerados
extralimitados cuando el resultado es >500.0 x 10
3
clulas/ A... Los resultados de
LEUC generados por un analizador STKS MAXM son considerados
extralimitados cuando el resultado es >99.9 x 10
3
clulas/ A... El resultado de
LEUC en el analizador ONYX es considerado extralimitado cuando el resultado
excede 150.0 x 10
3
clulas/ A... (Vea el Manual de Referencia de su instrumento
para la definicin exacta de la extralimitacin).
Una extralimitacin del resultado de LEUC es reemplazada por el cdigo
(+++++) y los nmeros absolutos diferencias son reemplazados por el cdigo
( ..... ) para indicar un clculo incompleto.
La linealidad en el sistema GEN.S es de 140.0 x 10
3
clulas/ A... El GEN.S
proyecta una "+" a continuacin del resultado que se encuentre por encima de la
escala lineal, pero por debajo del lmite de extralimitacin. La linealidad en los
analizadores STKS, MAXM y ONYX es de 99.9 x 10
3
clulas/ A... El analizador
ONYX proyecta una "+" a continuacin del resultado que se encuentre por
encima de la escala lineal, pero por debajo del lmite de extralimitacin.
El Espcimen o Muestra
Reactivos



Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @
@ @) y dentro de las 48 horas para @).
Diluente - ISOTON III es el fluido diluente preferido.
13'

TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON LEUCOCITOS
Procedimiento
1. Si el resultado se encuentra extralimitado (+++++), determine un valor
de base numrica del cual proceder lo mismo revisando un frotis de
sangre (vea el apndice) o siga las instrucciones a continuacin:
(K) Logre el acceso a Bsqueda en la Base de Datos y recupere la muestra
en cuestin. Haga resaltar la muestra en la pantalla. Seleccione F3 Edit Y
entonces oprima PgDn para proyectar la segunda pgina. El valor
numrico promedio del resultado extralimitado aparece en la parte
inferior de la pantalla.
Este resultado no puede ser editado, impreso o transmitido a una
computadora principal. No debe ser reportado. Este nmero es
simplemente un valor de base numrica para determinar la relacin de
dilucin necesaria para traer el resultado de LEUC dentro de la escala
lineal.
Logre el acceso a Bsqueda en la Base de Datos y recupere la muestra
en cuestin. Haga resaltar la muestra en la pantalla. Seleccione F3 Edit Y
entonces oprima End para proyectar la segunda pgina. El valor
numrico promedio del resultado extralimitado aparece en la parte
inferior de la pantalla.
Este resultado no puede ser editado, impreso o transmitido a una
computadora principal. No debe ser reportado. Este nmero es
simplemente un valor de base numrica para determinar la relacin de
dilucin necesaria para traer el resultado de LEUC dentro de la escala
lineal.
IMPORTANTE
Si el resultado de LEUC es (+++++), procese un ciclo en blanco para
evitar el acarreo a la muestra siguiente.
2. Usando el diluente y un sistema de pipetear apropiadamente calibrado,
prepare la dilucin ms baja para llevar el resultado de LEUC dentro de la
escala lineal.
IMPORTANTE
Las diluciones de las muestras pueden producir resultados
diferenciales errneos. No reporte el diferencial de la muestra diluida.
__________________________ ~ ~ 1 4
TPS H114A202 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON LEUCOCITOS
3. Cicle la muestra diluida inmediatamente.
4. Multiplique los resultados del Paso 3 por el factor de dilucin para
obtener un resultado de LEUC correcto.
5. Efecte y reporte los porcientos de clulas blancas de un diferencial
manual. Calcule los nmeros de clulas absoluto del diferencial de la
manera siguiente:
% Clulas (reportadas) x LEUC Correctos
Recuento Absoluto =
100
6. Corrija los ERIT sustrayendo el valor corregido de LEUC del resultado de
ERIT impreso del valor original, muestra no diluida. La diferencia es el
valor de ERrr corregido.
ERIT corregidos = Resultado Original de ERIT - Result Corregido LEUC
7. Determine los resultados correctos de Hgb, Hct, VCM, CHM, CHCM y ADE
usando lo mismo los mtodos manuales o automatizados a continuacin:
Uso de los Mtodos Manuales
a. Efecte una hemoglobina manual de acuerdo con NCCLS H15-A2. La
hemoglobina debe leerse usando el sobrenadante despus de la
centrifugacin para remover la turbidez de los leucocitos.
b. Realice un hematocrito centrifugado de acuerdo con el procedimiento
de la NCCLS H7-A2.
C. Calcule el VCM, CHM y CHCM de la forma siguiente:
Hct (centrifugado)
VCM= x 10
ERIT (corregidos)
Hgb (manual)
CHM= x 10
ERIT (centrifugado)
_______________________________________________________________ 15
TPS "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales"- febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON LEUCOCITOS
Hgb (corregida)
CHCM=
x 100
Hct (centrifugado)
el. Prepare un frotis de sangre para estimar cualquier anisocitosis.
e. Despus de completar estos procedimientos manuales, proceda al Paso 8.
liso de Mtodos Automatizados
a. Centrifugue una alcuota de sangre.
b. Retire tanto plasma como sea posible y la capa tamponada sin perturbar los
ERlT.
c. Reemplace el plasma retirado con un volumen equivalente de diluente;
mezcle bien.
d. Cicle esta muestra.
IMPORTANTE
Es muy difcil retirar la capa tamponada sin perturbar los ERIT y
reemplazarla con el volumen correcto de diluente. Si el resultado de
ERIT no es comparable con el resultado de los ERIT corregidos, lo
mismo puede realizar otro reemplazamient del plasma o hacer los
mtodos alternativos ofrecidos a continuacin.
e. Verifique que no haya error de dilucin comparando los resultados de ERlT
con el resultado de ERlT corregido.
a). Reporte solamente los ndices (VCM, CHM y CHCM) y ADE de este tubo
de reemplazamiento del plasma.
b). Realice un hematocrito centrifugado de acuerdo con el procedimiento de
la NCCLS H7 -A2 o calcule el Hct:
ERIT corregido x VCM corregido
Hct Corregido =
10
__________________________________________________________________ 16
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
~
PROCEDIMIENTOS CON LEUCOCITOS
e). Calcule de nuevo la Hgb:
CHCM corregida x Hct corregido
Hgb Corregida =
100
8. Revise el histograma de plaquetas y el frotis de sangre para ver si existen
fragmentos de LEUC. Si los fragmentos se encuentran presentes y aparecen
como interferentes con los resultados de Plq y VPM:
a. Obtenga un recuento de plaquetas correcto usando un hemocitmetro;
se prefiere un microscopio con contraste de fase.
b. Observe el tamao de las plaquetas (pequeas, normales o grandes) del
frotis de sangre y verifique el nmero.
Notas del Procedimiento
Referencias:
Los resultados de ERIT y VCM pueden ser falsamente elevados debido a que
los LEUC estn siendo contados simultmeamente con los ERIT y Plaquetas
en el bao de ERIT.
El Hct centrifugado es aproximadamente un 2% a un 5% ms elevado que el
Hct calculado debido al plasma atrapado.
La hemoglobina puede ser falsamente elevada debido a la turbidez dentro del
bao de LEUC.
Los resultados de CHM y CHCM pueden ser imprecisos debido a los
parmetros afectados de los cuales son calculados.
Los resultados de LEUC falsamente elevados pueden ser observados con
muestras de sangre criofibrinognicas, crioglobulinmicas o cualquier
espcimen que contenga partculas anormales tales como eritrocitos
nucleados o micromegacariocitos que tengan un tamao mayor de 35fL.
Cowell K. Hematology No. H-4, Tech. Sample, American Society of Clinical
Pathologists, 1996.
Koepke JA. Tips on Technology, MLO, 1992; 24; 8: 14.
Kohn, JH. Hematology Problem. Am J. Med Technolo. 1979; 45: 1018-1019.
__________________________________________________________________ 17
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
..
PROCEDIMIENTO 2 Resultados de LEUC Sealizados con * *R.
Principio
Todas las partculas 35 fL o ms son contadas como LEUC usando el Principio
Coulter. Los resultados de LEUC son sealizados con una * o un *R indicando
que la comprobacin en el umbral de 35 fL fall.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @
@ @J y dentro de las 48 horas para @) .
IMPORTANTE
Cercirese de que el frotis de sangre fue hecho
recientemente del tubo que est siendo analizado. Algunas
anormalidades, tales como agrupaciones de plaquetas y
aglutinacin de ERIT pueden no aparecer hasta que la
muestra no est a temperatura ambiente por un rato.
1. Revise un frotis de sangre para determinar si la interferencia es significativa.
Examine cuidadosamente el frotis de sangre, particularmente el borde
extendido, a ver si hay partculas anormales (Vea el Apndice).
Si hay una anormalidad presente, vaya al procedimiento recomendado a
. continuacin; de lo contrario proceda al paso 2.
Si hay LEUC pequeos presentes, vea el Procedimiento 3 para LEUC.
Si hay Eritrocitos Nucleados presentes, vea el Procedimiento 4 para LEUC.
Si hay cristales de crioglobulinas o criofibringenos presentes, vea el
Procedimiento 5 para LEUC.
Si hay ERIT anormales resistentes al reactivo ltico presentes, tales como las
clulas falciformes, vea el Procedimiento 7 para LEUC.
Si hay micromegacariocitos presentes, vea el Procedimiento 8 para LEUC.
Si hay presente aglutinacin de ERIT, vea el Procedimiento 8 para ERIT.
__________________________________________________________________ 18
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON LEUCOCITOS
Si hay plaquetas gigantes presentes, vea el Procedimiento 4 para LEUC.
Si hay agrupaciones de plaquetas, vea el Procedimiento 5 para LEUC.
Si hay plaquetas satlites, vea el Procedimiento 6 para LEUC.
2. Manipule el especmen de la forma siguiente:
a. Obtenga un resultado de LEUC corregido usando lo mismo un
hemocitmetro o un instrumento semi-automatizado tal como un
COULTER COUNTER Modelo F Z.
b. Si los resultados del porciento diferencial son sealizados, detecte un
frotis de sangre para verificar los resultados diferenciales del instrumento.
1). Si el diferencial del instrumento viene de acuerdo con la deteccin,
reporte el diferencial del instrumento.
2). Si la deteccin no viene de acuerdo con el diferencial del instrumento,
realice un diferencial manual.
C. Si el resultado de LEUC corregido y/o los resultados de un diferencial
manual van a ser reportado, calcule de nuevo el diferencial absoluto de la
forma siguiente:
% Clulas (reportado) x LEVC correcto
Nmero Absoluto =
100
Notas del Procedimiento
Referencias
La seal * *R tambin puede ser producida por la presencia de
microorganismos en la muestra. Esta posibilidad debe ser considerada cuando se
revise la lmina, y si estn presentes, indicado en el reporte.
Marshall BA, Theil KS, Brandt JT. Abnormalities of Leukocyte Histograms
Resulting from Microorganisms. Am J Clin Pathol, 1990; 93: 73-76.
____________________ ----------------------------______ --____ 19
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTO 3
Aglutinacin de LEUC O LEUC Pequeos
Principio
Todas las partculas 35 fL o ms son contadas como LEUC usando el Principio
Coulter. Los resultados pueden ser falsamente disminuidos cuando partculas,
tales como las aglutininas de los LEUC se encuentren presentes o si la muestra
contiene LEUC anormalmente pequeos que caigan por debajo del umbral de 35
. fL Y son excluidos del recuento.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el (])
@ @) y dentro de las 48 horas para @) .
Procedimiento
1. Si los resultados de LEUC son cuestionables, revise el frotis para verificar el
resultado de LEUC (vea el Apndice). Si el resultado de LEUC del instrumento
est correcto, reporte el resultado del instrumento.
IMPORTANTE
Cercirese de que el frotis de sangre fue hecho
recientemente del tubo que est siendo analizado. Algunas
anormalidades, tales como aglutinaciones de LEUC pueden no
aparecer hasta que la muestra no haya estado a temperatura
ambiente por un rato.
2. Si la lmina muestra aglutinacin de LEUC, vuelva a extraer la muestra. Si los
LEUC se aglutinan en la muestra fresca, tome una muestra de la yema del
dedo, sin usar anticoagulantes y realice un recuento manual de leucocitos
usando un hemocitmetro.
3. Si la lmina muestra LEUC pequeos, efecte un recuento con el
hemocitmetro o analice la muestra en un instrumento semi-automatizado tal
como un COUL TER COUNTER de la Serie F Z con un Analizador
CHANNELYZER adjunto. Cercirese de que el umbral se encuentre ajustado
para incluir todos los LEUC presentes.
__ ____________________________________________ 20
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON LEUCOCITOS
4. Si los resultados del diferencial son sealizados, detecte una muestra de
sangre para verificar los resultados del diferencial del instrumento.
a. Si el diferencial del instrumento concuerda con la deteccin, reporte el
diferencial del instrumento.
b. Si la deteccin no concuerda con el diferencial del instrumento, realice un
diferencial manual en un frotis hecho a partir de una extraccin capilar.
5. Si un resultado de LEUC corregido y/o los resultados de un diferencial manual
deben ser reportados, recalcule los nmeros absolutos del diferencial de la
forma siguiente:
% Clulas (reportadas) x LEVC Correctos
Nmero Absoluto =
100
Notas del Procedimiento
Referencias
Los resultados de LEUC pueden ser sealizados bajo en muestras con
agregacin de granulocitos en vitro debido a que un grupo de varios LEUC es
contado como una sola partcula. Volver a extraer esta muestra en otro tipo
de anticoagulante no corrige el resultado de LEUC.
Los pacientes con leucemina linfoctica crnica de la clula pueden ser
linfocitos muy pequeos que caen por debajo del umbral de 35 fL y no son
incluidos en el recuento de LEUC.
Epstein H y Kruskall M. Spurious Leukopenia Due to In Vitro Granulocyte
Aggregation. Ame J Clin Pathol, 1988; 89; 652-655
Rohr LR y Rivers FM. Spurious Leukopenia Due to In Vitro Granulocyte
Aggregation. Ame J Clin Pathol, 1990; 93; 572-574.
Coulter Corporation, Seminars & Case Studies, The Automated Differential.
Pierre, R., Mayo Foundation, Rochester, MN, 1989.
____________________________________________________________________ 21
) TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTO 4
Eritrocitos Nucleados
Principio
Todas las paltculas 35 fL o ms son contadas como LEUC usando el Principio
Coulter. Algunas clulas rojas nucleadas pueden caer en o por encima de este
umbral de 35 fL Y son incluidas en el resultado de LEUC.
El Espcimen o Muestra



Procedimiento
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @
@ @) y dentro de las 48 horas para @J .
1. Si el resultado de LEUC es sealizado con un * o *R y/o un mensaje de
Sospechoso tal como NRBC Platelet Clumps se produce, revise un frotis de
sangre para concordar del LEUC automatizado con un frotis manual estimado
de los LEUC. (Vea el Apndice).
a. Si concuerdan, reporte el resultado de LEUC automatizado.
b. Si no concuerdan, siga al Paso 2.
2. Revise el frotis de sangre para determinar si todos las clulas nucleadas
fueron lo suficientemente grandes para ser contadas y fueron, por lo tanto,
incluidas en el resultado de LEUC.
a. Si todos los eritrocitos nucleados fueron contados, el resultado de LEUC
es el recuento total de Erit Nuc; proceda al paso 3.
b. Si no todos los Erit Nuc fueron contados, efecte un recuento con el
hemocitmetro o analice la muestra en un instrumento semi-
automatizado tal como un COUL TER COUNTER de la Serie F Z con un
Analizador CHANNELYZER adjunto. Cercirese de que el umbral se
encuentre ajustado para incluir todos los eritrocitos nucleados del
recuento.
3. Corrija el resultado de LEUC de la forma siguiente:
a. Determine el nmero de Erit Nuc/ 100 LEUC del frotis de sangre.
___________________________________________________________________ 22
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON LEUCOCITOS
b. Emplee la frmula siguiente:
Recuento total de clulas nuc!eadas x 100
Resultado de LEUC corregido =
100 + nmero Erit Nuc /100 LEUC
4. Use el protocolo de su laboratorio (tal como una comprobacin H & H) para
verificar el resultado de Hgb. La turbidez de los eritrocitos nucleados puede
elevar falsamente el valor de la Hgb.
a. Si el valor de la Hgb es aceptable, reporte el resultado.
b. Si el valor de Hgb aparece elevado.
1). Verifique el resultado de Hgb realizando un Hgb manual de acuerdo
con el procedimiento NCCLS H15-A2. La lectura de hemoglobina debe
ser realizada en el sobrenadante despus de la centrifugacin de un
tubo alcuota para retirar el ncleo de las clulas rojas estromalizadas.
2). Si va a ser reportado un resultado corregido, calcule la CHM y la
CHCM de la forma siguiente:
Hgb Corregida
CHM= x 10
RBC
Hgb Corregida
CHCM= x 100
Hct
5. Revise el grfico de datos, grfico de dispersin o histograma para ver si hay
interferencia con el recuento de linfocitos. Si se halla alguna interferencia,
a. Realice un diferencial manual.
b. Calcule los nmeros absolutos diferenciales de la forma siguiente:
% Clulas (reportadas) x LEUC Correctos
Nmero Absoluto =
100
___________________________________________________________________ 23
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gcos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON LEUCOCITOS
Notas del Procedimiento
Referencias
Cuando los Erit Nuc se encuentran presentes en grandes cantidades, el
resultado de la Hgb puede ser errneamente elevado debido a la turbidez
causada por la presencia de ncleos de clulas rojas en el bao de LEUC.
Los Eri Nuc muy inmaduros con ncleos grandes puede no causar una seal
si todos los ncleos caen por debajo del umbral de 35 fL. En este caso, el
resultado de LEUC es en realidad el recuento total de clulas nucleadas,
(todos los LEUC + todos los Eri Nuc).
Los Eri Nuc muy inmaduros con ncleos grandes puede no causar una seal
si todos los ncleos caen por debajo del umbral de 35 fL. En este caso, , el
resultado de LEUC incluye solamente los LEUC y es, por lo tanto, correcto.
Cowell K. Hematology No. HA, Tech Sample, American Society of Clinical
Pathologists, 1996.
______________ ~ ~ ~ ~ ~ ~ 2 4
TPS- H114-A2-o2 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTO 5
Crioglobulinas y/o Criofibringenos
Principio
Todas las partculas 35 fL o ms son contadas como LEUC usando el Principio
Coulter. Las crioglobunlinas, las cuales son protenas de suero con solubilidad
. dependiente de la temperatura, pueden precipitarse. Si estas partculas
precipitadas son 35 fL o mayores son incluidas en el resultado de LEUC.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el lKl
@ @) y dentro de las 48 horas para @) .
Procedimiento
1. Seleccione y efecte alguna de las acciones correctivas siguientes:
a. Caliente el especmen a 37C durante un mnimo de 15 minutos y
procselo de nuevo. Un tiempo de incubacin mayor puede ser requerido
para eliminar la interferencia.
b. Coleccione una muestra nueva y anlcela inmediatamente. Mantenga la
muestra caliente hasta el anlisis usando arena caliente, un calentador,
una taza de agua a 3?OC o colectar el espcimen cerca del analizador.
2. Si el problema recurre con la muestra calentada, obtenga un resultado de
LEUC usando un hemocitmetro.
3. Si los resultados del diferencial son sealizados, detecte un frotis de sangre
para verificar los resultados diferenciales del instrumento.
a. Si el diferencial del instrumento viene de acuerdo con la deteccin,
reporte el diferencial del instrumento.
b. Si el diferencial del instrumento no concuerda con la deteccin,
1). Efecte un diferencial manual
2). Calcule los nmeros absolutos diferenciales de la forma siguiente:
_______________________________________________________________ 25
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON LEUCOCITOS
% Clulas (reportadas) x LEVC Correctos
Nmero Absoluto =
100
4. Las crioglobulinas pueden tambin afectar los resultados de ERIT, Plq Y VPM.
Si calentar la muestra no corrige estos resultado, obtenga los recuentos de
ERIT y Plq usando un hemocitmetro.
5. Use el protocolo de su laboratorio (tal como una comprobacin H & H) para
verificar el resultado de Hgb. La turbidez de los eritrocitos nucleados puede
elevar falsamente el valor de la Hgb.
a. Calentar el espcimen debe corregir los resultados de la hemoglobinaSi
el valor de la Hgb es aceptable, reporte el resultado.
b. Si el valor de Hgb aparece elevado.
3). Verifique el resultado de Hgb realizando un Hgb manual de acuerdo
con el procedimiento NCCLS H15-A2. La lectura de hemoglobina debe
ser realizada en el sobrenadante despus de la centrifugacin de un
tubo alcuota para retirar el ncleo de las clulas rojas estromalizadas.
4). Si va a ser reportado un resultado corregido, calcule la CHM y la
CHCM de la forma siguiente:
Hgb Corregida
CHM= x 10
RBC
Hgb Corregida
CHCM= x 100
Hct
Notas del Procedimiento


Los frotis de sangre pueden revelar numerosas agrupaciones amorfas de
glbulos de crioprotenas que pueden ser o no teidas.
Las crioglobulinas pueden ser vistas sin un estado de enfermedad subyacente
o en casos de desrdens neoplsticos, autoinmunes o infecciones.
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TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
Referencias
PROCEDIMIENTOS CON LEUCOCITOS
Gulati GL, Piao YF, Song AS, Kim WB, Hyun BH, Interference of Cryoproteins
in the Blood With Automated eBe. Lab Med, 1995; 26: 138-142.
Banfi G Bonini PA. Detection of Cryoglobulins by COULTER COUNTER Model
S-Plus IV/D. C1in Lab Haemat. 1988; 10: 453-459.
Gullani GL, Hyun BH, Gabaldon H .. Falsely Elevated Automated Leukocyte
Counts on Cryoglobulinemic and/or Cryofibrinogenic Blood Samples.
Laboratory Medicine, 1977; 8; 12: 14-16.
__ _____________________________________________ 27
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTO 6
Fragmentos de LEUC
Principio
Todas las partculas 35 fL o ms son contadas como LEUC usando el Principio
Coulter. Los LEUC que se han fragmentado y caen por debajo del umbral de 35
fL no son incluidas en el resultado de LEUC.
El Espcimen o Muestra
Reactivos



Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el
@ @) y dentro de las 48 horas para @) .
El fluido diluente preferido es el ISOTON IlI.
Albmina, 22% bovina.
Procedimiento
.1. Verifique el resultado de LEUC detectando un frotis de sangre. (Vea el
Apndice)
a_ Si el estimado de LEUC del frotis y el resultado de LEUC del instrumento
concuerdan, reporte el resultado del instrumento.
b. Si hay ms de un 2% de clulas rotas o "clulas borrosas" en la lmina,
proceda al Paso 2.
2. Prepare una lmina de sangre fresca de una mezcla de una gota 22% de
albmina bovina a 5 gotas de sangre (para reducir la formacin de clulas
borrosas). Detecte la lmina teida y estime los LEUC. (Vea el Apndice).
a_ Si el estimado de LEUC del frotis y el del instrumento concuerdan ahora,
reporte el resultado del instrumento.
b. Si el estimado de LEUC del frotis de sangre y el del instrumento no
concuerdan, proceda al Paso 3.
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TPS H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON LEUCOCITOS
3. Efecte un recuento de leucocitos usando lo mismo un hemocitmetro o un
instrumento semi-automatizado tal como un COULTER COUNTER Modelo F o
un instrumento de la Serie Z.
4. Si un resultado corregido de LEUC va a ser reportado.
a. Determine los porcientos de clulas del diferencial manual.
b. Calcule los nmeros absolutos diferenciales de la forma siguiente:
% Clulas (reportadas) x LEUC Correctos
Nmero Absoluto =
100
5. Revise el histograma de plaquetas a ver si existe una posible interferencia de
los fragmentos celulares. Si aparecen como que interfieren con los resultados
de Plq y VPM: .
a. Obtenga un recuento de plaquetas preciso usando un hemocitmetro;se
prefiere el microscopio de fase de contraste.
b. Observe el tamao de las plaquetas (pequeo, normal o grande) del
frotis de sangre y verifique el nmero.
Notas del Procedimiento
Referencias
Las clulas borrosas o fragmentacin de las clulas son el resultado de la
fuerza mecnica usada para hacer una lmina. Los frotis centrifugados
raramente muestras la presencia de clulas borrosas.
Los pacientes leucmicos pueden, en casos raros, tener LEUC fragmentados
parecidos a plaquetas. Los recuentos de plaquetas normales o casi normales
cuando un paciente est sangrando, pueden ser una indicacin de este
problema. La inspeccin visual de la lmina puede no revelar el problema ya
que los fragmentos son difciles de distinguir de la plaquetas. En casos no
resueltos, puede ser apropiado indicarle sealizaciones del instrumento al
mdico.
Nosanchuk JS. The Effect of Smudge CeHs on Leukocyte Counting - Are
Chamber Counts Necessary? Am J Clin Pathol, 1979; 71; 2: 161-166
Koepke JA. Tips on Technology, MLO, 1992; 24; 7: 14.
Hammerstrom J. Spurious Platelet Counts in Acute Leukaemia with DIC Due
to CeH Fragmentation. Clin Lab Hemat, 1992; 14: 239-243,
__________________________________________________________________ 29
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales"- febrero del 2002
PROCEDIMIENTO 7
Eritrocitos Resistentes al Lyse
Principio
Todas las partculas 35 fL o ms son contadas como LEUC usando el Principio
Coulter. Los eritrocitos que son resistentes allyse pueden elevar espuriamente el
resultado de LEUC y el de la hemoglobina debido a su presencia y producir
turbidez.
Los ERIT tambin son medidos usando el Principio Coulter. Los eritrocitos que
son resistentes al Iyse pueden permanecer rgidos a medida que pasan a travs
de la apertura de ERIT. Estas clulas son detectadas como mayores que lo que
son en realidad y pueden causar que el VCM y posiblemente el ADE sean
erroneamente elevados.
El Espcimen o Muestra
Reactivos
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el ()
@) @) y dentro de las 48 horas para @] .
El fluido diluente preferido es el ISOTON III.
Agua destilada.
Procedimiento
1. Verifique el resultado de LEUC detectando un frotis de sangre (Vea el
Apndice).
a. Si el estimado de LEUC del frotis y el resultado de LEUC del instrumento
concuerdan, reporte el resultado del instrumento.
b. Si el resultado de LEUC del instrumento y el del frotis no concuerdan,
realice un recuento del hemocitmetro.
2. Si el resultado corregido de LEUC del hemocitmetro va a ser reportado o si
los resultados del diferencial son sealizados con una R, corrija los nmeros
absolutos del diferencial de la forma siguiente:
a. Determine los porcientos de clulas con un diferencial manual.
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TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON LEUCOCITOS
b. Calcule los nmeros absolutos del diferencial de la forma siguiente:
% Clulas (reportadas) x LEUC Correctos
Nmero Absoluto =
100
3. Use el protocolo de su laboratorio (tal como una comprobacin H & H) para
verificar el resultado de Hgb. La turbidez de los eritrocitos resistentes puede
elevar falsamente el valor de la Hgb.
a. Si el valor de la Hgb es aceptable, reporte el resultado.
C. Si el valor de Hgb aparece elevado.
1). Verifique el resultado de Hgb realizando un Hgb manual de acuerdo
con el procedimiento NCCLS H15-A2.
a. Antes de leer, aada una cantidad equivalente de agua destilada
al tubo para irrumpir en los ERIT resistentes.
b. Mezcle bien V entonces lea la Hgb manual, multiplique el resultado
por 2 para obtener la Hgb corregida total.
2). Si va a ser reportado un resultado corregido de Hgb, calcule la CHM V
la CHCM de la forma siguiente:
Hgb Corregida
CHM= x 10
RBC
Hgb Corregida
CHCM= x 100
Hct
4. Estime la anisocitosis del frotis de sangre. Si la anisocitosis viene de acuerdo
con el ADE, reporte el ADE del instrumento. Sino, reporte la anisocitosis del
frotis.
Nota del Procedimiento
Los eritrocitos que contienen una gran cantidad de Hemoglobina S vio
Hemoglobina C pueden ser resistentes a la lsis.
__ ________ __________________________________ 31
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero de12002
PROCEDIMIENTO 8
Micromegacariocitos
Principio
Todas las partculas 35 fL o ms son contadas como LEUC usando el Principio
Coulter. Todas las partculas de 36 fL o ms son contadas como ERIT usando el
Principio Coulter. Todas las partculas entre 2 y 20 fL son contadas como
. plaquetas usando el Principio Coulter.
Si el recuento de plaquetas es mayor de 20 x 10
3
la computadora
suaviza cada histograma de plaquetas y usa la informacin para ajustar la curva
normal de un logaritmo de O a 70 fL. Ciertas comprobaciones distribucionales
son entonces realizadas contra la curva ajustada. Si no se cumple con alguno de
los criterios, ocurre una condicin de no ajuste. El recuento de plaquetas y VPM
es entonces derivado de la parte del histograma entre 2 y 20 fL.
Los micromegacariocitos pueden variar en tamao y son contados en ambos
baos de LEUC y ERIT dado a que el volumen de la clula excede el umbral
correspondiente.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el (J
@ @) y dentro de las 48 horas para @) .
Procedimiento
1. Si el resultado de LEUC es sealizado con un * o *R y/o el histograma de
plaquetas es consistente con posible interferencia, revise un frotis de sangre
para ver la concordancia del LEUC automatizado con un frotis manual
estimado del resultado de LEUC. (Vea el Apndice).
a. Si concuerdan, reporte el resultado de LEUC automatizado.
b. Si no concuerda con el resultado del instrumento, proceda al Paso 2.
2. Obtenga un recuento total de clulas nucleadas usando lo mismo un
hemocitmetro o analice la muestra en un instrumento semi-automatizado tal
como un COULTER COUNTER de la Serie F Z con un Analizador
CHANNEL YZER adjunto. Cercirese de que el umbral se encuentre ajustado
para incluir todas las clulas nucleadas del recuento.
_______________________________________________________________ 32
TPS Hl14-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON LEUCOCITOS
3. Corrija el resultado de LEUC de la forma siguiente:
a. Determine el nmero de micromegacariocitos por 100 LEUC del frotis de
sangre.
b. Use la frmula siguiente:
Recuento Total de Clulas Nucleadas x 100
Recuento de LEUC corregido =
100 + micromegacariocitos /100 LEUC
4. Si los resultados del diferencial son sealizados, detecte un frotis de sangre
para verificar el diferencial del instrumento.
a. Si el diferencial del instrumento concuerda con el frotis, reporte el
diferencial del instrumento.
b. Si no concuerda:
1). Efecte un diferencial manual
2). Calcule los nmeros absolutos del diferencial de la forma siguiente:
% Clulas (reportadas) x LEUC Correctos
Nmero Absoluto =
100
Notas del Procedimiento
Referencia
Los micromegacariocitos son vistos comunmente en las leucemias
mielocticas y mielomonocticas, los sndromes mieloproliferativos y la crisis
de blastocitos de la leucemia mielgena crnica.
Los micromegacariocitos pueden ser confundidos por linfocitos.
Las plaquetas gigantes y los Erit Nuc con frecuencia son observados con los
micromegacariocitos. El recuento total de nucleados debe incluir los tres tipos
de clulas anormales.
Cowell K. Hematology No. H-4, Tech Sample, American Society of Clinical
Pathologists, 1996.
__________________________________________________________________ 33
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002


CONTENIDO 4
IMPORTANTE
los procedimientos siguientes son ofrecidos solamente como
gua. Siempre siga y cumpla con el protocolo de su laboratorio
antes de reportar los resultados
Procedimiento 1
Obtencin de los Resultados Correctos cuando
el Resultado de ERIT se encuentra Extralimitado
(+++++) o por Encima de la Linealidad (+) 36
Procedimiento 2
Resultados de ERIT Disminuidos 39
Procedimiento 3
Resultados de Hemoglobina Aumentados 41
Procedimiento 4
Resultados de Hemoglobina Disminuidos 43
Procedimiento 5
Resultado de VCM Aumentado 45
Procedimiento 6
Resultado Bajo de VCM 47
Procedimiento 7
Distribuciones Sealizadas de Eritrocitos 49
Procedimiento 8
Aglutinacin de ERIT 51
Procedimiento 9
ERIT Pequeos o Fragmentos de Erit 55
Procedimiento 10
Muestras Hemolizadas 57
__ __ __ __ ____ __________ __ _______ 34
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
Procedimiento 11
Muestras Lipmicas _______________ _
Procedimiento 12
Qumicas Anormales
(Sodio, Glucosa o BUN) ____________ _
CONTENIDO 4
60
63
= ~ ~ 3 5
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
PROCEDIMIENTO 1
Obtencin de los Resultados Correctos cuando el
Resultado de ERIT se encuentra Extralimitado (+++++) o
por Encima de la Linealidad
Principio
Los resultados de ERIT generados por un sistema GEN.S son considerados
extralimitados cuando el resultado es > 20.00 x 10
6
clulas! f.-. Los resultados de
ERIT generados por un analizador STKS MAXM son considerados extralimitados
cuando el resultado es >9.99 x 10
6
clulas! f.-. (Vea el Manual de Referencia de
su instrumento para la definicin exacta de la extralimitacin).
Una extralimitacin del resultado de ERIT es reemplazada por el cdigo
(+++++) y cualquier parmetro derivado del parmetro extralimitado es
reemplazados por el cdigo ( ..... ) para indicar un clculo incompleto.
La linealidad en el sistema GEN.S es de 0.00 a 8.00 x 10
6
clulas! f.- . El GEN.S
proyecta una "+" a continuacin del resultado que se encuentre por encima de la
escala lineal, pero por debajo del lmite de extralimitacin. La linealidad en los
analizadores STKS, MAXM y ONYX es de 0.0 a 7.0 10
6
clulas! f.-. El analizador
ONYX proyecta una" +" a continuacin del resultado que se encuentre por
encima de la escala lineal, pero por debajo del lmite de extralimitacin.
Para obtener un resultado reportable, debe ser diluuda una alcuota de la
muestra de sangre total o entera y vuelta a procesar. El resultado es entonces
multiplicado por el factor de dilucin para obtener el resultado de ERIT correcto.
El Espcimen o Muestra
Reactivos
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el
@ @) y dentro de las 48 horas para @).
Diluente - ISOTON III es el fluido diluente preferido.
__________________________________________________________________ 36;
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
Procedimiento
1. Si el resultado de ERIT se encuentra extralimitado (+++++), determine un
valor de base numrica siguiendo las instrucciones a continuacin:
(ID Logre el acceso a Bsqueda en la Base de Datos y recupere la muestra
en cuestin. Haga resaltar la muestra en la pantalla. Seleccione F3 Edit y
entonces oprima PgDn para proyectar la segunda pgina. El valor
numrico promedio del resultado extralimitado aparece en la parte
inferior de la pantalla.
Este resultado no puede ser editado, impreso o transmitido a una
computadora principal. No debe ser reportado. Este nmero es
simplemente un valor de base numrica para determinar la relacin de
dilucin necesaria para traer el resultado de ERIT dentro de la escala
lineal.
Logre el acceso a Bsqueda en la Base de Datos y recupere la muestra
en cuestin. Haga resaltar la muestra en la pantalla. Seleccione F3 Edit Y
entonces oprima End para proyectar la segunda pgina. El valor
numrico promedio del resultado extralimitado aparece en la parte
inferior de la pantalla.
Este resultado no puede ser editado, impreso o transmitido a una
computadora principal. No debe ser reportado. Este nmero es
simplemente un valor de base numrica para determinar la relacin de
dilucin necesaria para traer el resultado de ERIT dentro de la escala
lineal.
IMPORTANTE
Si el resultado de ERIT es (+++++), procese un ciclo en blanco para
evitar el acarreo a la muestra siguiente.
2. Usando el diluente y un sistema de pipetear apropiadamente calibrado,
prepare la dilucin ms baja para llevar el resultado de ERIT dentro de la
escala lineal.
IMPORTANTE
Las diluciones de las muestras pueden producir resultados
diferenciales errneos. No reporte el diferencial de la muestra diluida.
________________ --------------------------------------------37
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
3. Cicle la muestra diluida inmediatamente.
4. Multiplique los resultados del Paso 3 por el factor de dilucin para obtener un
resultado de ERIT correcto.
5. Reporte el resultados de VCM, CHM. CHCM y ADE de la dilucin.
6. Si los resultados finales de la dilucin de ERIT son significativamente
diferentes de los resultados no diluidos de ERIT, corrija el Hct efectuando un
hematocrito centrifugado de acuerdo con el procedimiento de la NCCLS H7-
A2 o calcule el Hct de la forma siguiente:
VCM (Paso 5) x ERIT (Paso 4)
Hct=
10
7. Revise el histograma de plaquetas y el frotis de sangre para la presencia de
ERIT pequeos o fragmentos de ERIT. Si hay presentes algunos de stos y
aparecen como interferentes con los resultados de Plq y VPM:
a. Obtenga un recuento de plaquetas correcto usando un hemocitmetro, se
prefiere el microscopio por fase de contraste.
b. Observe el tamao de las plaquetas (pequeo, normal o grande) del
frotis de sangre y verifique el nmero.
Notas del Procedimiento
Un Hct centrifugado es aproximadamente de un 2% a un 5% ms elevado
que el Hct calculado debido al plasma atrapado.
Cualquier nmero grande de partculas mayores de 36 fL (LEUC y/o
plaquetas gigantes) pueden causar que los ERIT sean sealados como altos.
__________________________________________________________________ 38
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
PROCEDIMIENTO 2
Resultados de Eritrocitos Disminuidos
Principio
Todas las partculas de 36 fL o ms son contadas como ERIT usando el Principio
Coulter. Un resultado de ERIT puede ser sealizado como bajo en cualquier
muestra que tenga aglutinacin o fragmentacin de los ERIT.
El Espcimen o Muestra



Procedimiento
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @
@ @) y dentro de las 48 horas para @) .
IMPORTANTE
Cercirese de que el frotis de sangre fue hecho
recientemente del tubo que est siendo analizado. Algunas
anormalidades, tales como agrupaciones de plaquetas y
aglutinacin de ERIT pueden no aparecer hasta que la
muestra no haya estado a temperatura ambiente por un rato.
1. Verifique que la muestra no est coagulada. Si existe alguna aglutinacin
(macroscpica o microscpica) obtenga una nueva muestra.
a. Si la muestra nueva tambin contiene aglutinados de ERIT, vea el
Procedimiento 8 para ERIT.
b. Si no hay aglutinaciones de ERIT, pero el resultado de ERIT puede ser
incorrecto debido a ERIT pequeos, vea el Procedimiento 6 el
Procedimiento 9 para ERIT.
Notas del Procedimiento
Las muestras que contienen ERIT microcticos pueden tener resultados de
plaquetas sealizados como altos o de no ajuste.
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
39
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
La aglutinacin en vivo o en vitro de las clulas (aglutininas fras o cualquier
proceso de aglutinacin) puede producir bajas seales en los resultados de
LEUC, ERIT y Plq.
La recoleccin/manipulacin impropia de la mestra puede causar tambin
aglutinacin de ERIT.
~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ 4 0
TPS- H114-A2-02 UProcedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales
l1
- febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
PROCEDIMIENTO 3 Resultado Aumentado de Hemoglobina
Principio
La hemoglobina es medida fotomtricamente usando un procedimiento de
cianometahemoglobina modificado. La absorbancia del pigmento es directamente
proporcional a la concentracin de hemoglobina de la muestra. Cualquier
substancia que cause turbidez interfiere con la lectura de hemoglobina.
El Espcimen o Muestra
Reactivos
.. Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
.. Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el [J
@ [Q] y dentro de las 48 horas para @] .
El Diluente ISOTON nI es el fluido diluente preferido.
Procedimiento
1. Si el resultado de LEUC es alto o se encuentra extralimitado, vea el
Procedimiento 1 de LEUC, comience en el Paso 7. Si el resultado de LEUC es
normal proceda al Paso 2.
2. Inspeccione visualmente el plasma para ver si tiene turbidez o hemlisis
permitiendo que la muestra se asiente o centrifugando una alcuota de la
muestra.
a. Si se nota turbidez, vea el Procedimiento 11 de ERIT.
b. Si se nota hemlisis, vea el Procedimiento 10 de ERIT.
C. Si no hay turbidez o hemlisis presente! proceda al Paso 3.
3. Usando diluente y un sistema de pipetear preciso, prepare la dilucin ms
baja que va a traer el resultado de Hgb dentro de la escala reportable.de
laboratorio.
4. Cicle la muestra diluida tan rpidamente como sea posible.
5. Multiplique el resultados de Hgb del Paso 4 por el factor de dilucin para
obtener el resultado corregido de Hgb.
__________________________________________________________________ 41
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
Referencias
6. Reporte la CHM y la CHCM de la dilucin.
los resultados de Hgb pueden ser aumentados en las muestra cuyo
plasma es turbio debido a una anormalidad tal como la lipemia,
extralimitacin de los lEUC o ERIT no estromalizados.
Las emulsiones de nutricin parenteral tambin han sido asociadas con
elevaciones del resultado de hemoglobina.
Las proteinas del plasma anormales y/o elevadas, tales como el aumento
del IgM visto en la macroglobulinemia de Waldenstrom, puede reaccionar
con el reactivo ltico y causar la precipitacin de las protenas la cual
interfiere con el Hgb.
Si el resultado de Hgb es afectado, los resultados de CHM y CHCM son
tambin afectados.
Nicholls PD. Erroneous Model S COUl TER COUNTER Values on Patients
Undergoing Pa rentera I Nutrition with Intravenous Upid Emulsions. Med
lab Tech 1972; 30: 293-295.
linz LJ. Elevation of Hemoglobin MCH and MCHC by Paraprotein: How
to Recognize and Correct the Interference. Clin lab Scien[ 1994, 7; 4:
211-212.
------------------------------------------------------------________________________________________________________________________ 42'
TPS- H114-A2-02 UProcedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
PROCEDIMIENTO 4 Resultado Disminuido de Hemoglobina
Principio
La hemoglobina es medida fotomtricamente usando un procedimientos de
cianometahemoglobina modificado. La absorbancia del pigmento es directamente
proporcional a la concentracin de hemoglobina de la muestra.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @
@ (Q) y dentro de las 48 horas para @ .
Procedimiento
1. Repita la muestra en el modo manual
l
secundario o de frasco abierto.
2. Use el protocolo de su laboratorio para verificar los resultados de Hgb.
Mtodos que pueden ser usados para verificar la Hgb incluyen:
El Hgb yel Hct concuerdan (CHCM dentro de la escala aceptable)
El hemoglobinmetro
La Hemoglobina Manual ( de acuerdo al procedimiento NCCLS H15-A2)
3. Si el Hgb es incorrecto, reporte los resultados del manual de hemoglobina o
hemoglobinmetro.
4. Calcule la CHM y la CHCM, si es necesario, de la forma siguiente:
Hgb Corregida
CHM= xl0
RBC
Hgb Corregida
CHCM= x 100
Hct
__________________________________________________________________ 43
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales"- febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
Notas del Procedimiento
Las muestras analizadas en el modo automtico en el sistema GEN S pueden
dar errores de aspiracin ( todos los resultados con un fondo rojo y
sealizados \\P
/
'). Esta codificacin de error indica que la Hemoglobina era
demasiado baja para que los detectores de sangre la detectaran.
Las muestras analizadas en el modo automtico en un alizador GEN S pueden
dar errores de aspiracin (. . ... ) para todos los parmetros. Esta
codificacin de error indica que la Hemoglobina era demasiado baja para que
los detectores de sangre la detectaran.
Las muestras analizadas en el Analizador pueden dar errores de aspiracin Y
los resultados van a ser sealizados con una RR. Esta codificacin de error
indica que la Hemoglobina era demasiado baja para que los detectores de
sangre la detectaran.
-----------------------______________________________________________ 44
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales"- febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON
PROCEDIMIENTO 5 Resultado Aumentado de VCM
Principio
L.as partculas entre 24 y 360 fL son detectadas usando el Principio Coulter. Estas
partculas se usan para construir un histograma de ERIT que refleje la
distribucin de los eritrocitos que estn siendo analizados. Cuando la
acumulacin de datos para el histograma de ERIT se completa, el resultado de
VCM se deriva usando la informacin de partculas de 36 a 360 fL.
La distribucin de volumen de clulas rojas normal es unimodal y Gaussiano. Las
curvas no Gaussianas pueden ser indicadores de desrdenes discretos,
reconocibles como la fragmentacin de los eritrocitos, recuperacin de
deficiencias nutricionales, transfusin o aglutininas fras.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el (]]
@ @] y dentro de las 48 horas para @] .
Procedim iento
1. Use el protocolo de su laboratorio para verificar los resultados de VCM.
Detectar el frotis de sangre es un mtodo aceptable. Si el resultado de VCM
parece incorrecto debido a:
Aglutininas fras o aglutinacin de ERIT, vea el Procedimiento 8 para RBC.
Extralimitacin de LEUC, vea el Procedimiento 1 y comience en el Paso 7.
Niveles anormales de sodio, glucosa o BUN, vea el Procedimiento 12 para
ERIT.
2. Corrija el Hct, VCM y CHCM, si es necesario, de la forma siguiente:
a. Efecte un hematocrito centrifugado de acuerdo con el procedimiento de
la NCCLS H7 -A2.
--------------______________________________________________________ 45
TPS- H114-A2-02 l/Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
b. Calcule el VCM:
Hct (Centrifugado) x 10
VCM (corregido)
RBC
C. Calcule la CHCM:
Hgb Corregida
CHCM x 100
Hct (centrifugado)
Notas del Proced miento
Un Hct centrifugado es aproximadamente un 2/0 a un 51o ms elevado que
un Hct calculado debido al plasma atrapado.
Cualquier aglutinacin (in vivo o in vitro) tales como las aglutininas fras
t
pueden causar que el VCM sea sealizado como alto.
La hiperglicemia severa ha sido asociada cono una macrocitosis espuria
debido a la hiperosmolaridad de los ERIT comparado con el diluente
isotnico.
La extralimitacin de los LEUC puede causar que el VCM sea aumentado
debido al nmero significativo de LEUC que estn siendo medidos en el bao .
de ERIT.
Los reactivos que han estado congelados y no han sido mezclados
completamente antes del uso, pueden alterar el VCM.
___________________________________________________________________ 46
TPS- H114-A202 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
PROCEDIMIENTO 6 Resultado Bajo de VCM
Principio
Las partculas entre 24 y 360 fL son detectadas usando el Principio Coulter. Estas
partculas se usan para construir un histograma de ERIT que refleje la
distribucin de los eritrocitos que estn siendo analizados. Cuando la
acumulacin de datos para el histograma de ERIT se completa, el resultado de
VCM se deriva usando la informacin de partculas de 36 a 360 fL.
La distribucin de volumen de clulas rojas normal-es unimodal y Gaussiano. Las
curvas no Gaussianas pueden ser indicadores de desrdenes discretos,
reconocibles como la fragmentacin de los eritrocitos recuperacin de
deficiencias nutricionales, transfusin o aglutininas fras.
El Espcimen o Muestra
.. Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el (]
CM] [Q) y dentro de las 48 horas para @) .
Procedimiento
1. Examine el extremo inferior del histograma de ERIT
a. Si las partculas se encuentran localizalizadas por debajo de los 36 fL,
decida si esta prdida puede estar afectando significativamente los
resultados del parmetro de ERIT.
Si el nmero de partculas por debajo del umbral es significativo, vea
el Procedimiento 9 para ERIT.
Si el nmero de partculas por debajo del umbral es insignificante,
proceda al Paso 2.
2. Use el protocolo de su laboratorio para verificar los resultados de VCM.
Detectar el frotis de sangre es un mtodo aceptable.
3. Corrija el Hct, VCM y CHCM, si es necesario de la forma siguiente:
Efecte un hematocrito centrifugado de acuerdo con el procedimiento de la
NCCLS H7 -A2.
----------------__________________________________________________ 47
TPS- H114A202 itprocedmentos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
b. Calcule el VCM:
Hct (Centnfugado) x 10
VCM (corregido) =
RBC
c. Calcule la CHCM:
Hgb Corregida
CHCM= x 100
Hct (centrifugado)
-4. Revise el histograma de plaquetas para ver si hay una posible interferencia.
Si parece que ERIT pequeos o fragmentos de ERIT pequeos estn
interfiriendo con los resultados de Plq y VPM.
a. Obtenga un recuento correcto de plaquetas usando un hemocitmetro;
se prefiere el microscopio de contraste de fase.
b. Observe el tamao de las plaquetas (pequeo normal o grande) del
frotis de sangre y verifique el nmero.
Notas del Procedimiento
Un Hct centrifugado es aproximadamente de un 2/0 a un 51o ms elevado
que el Hct calculado debido al plasma atrapado.
Si estn presentes las partculas pequeas, tales como las crioglobulinas o
plaquetas gigantes, son detectadas con los ERIT y puede causar que el VCM
sea disminuido artificialmente.
____________________________________________________________________ 48
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
PROCEDIMIENTO 7 Distribuciones de Eritrocitos Sealizadas (R *)
Principio
Las partculas entre 24 y 360 fL son detectadas usando el Principio Coulter. Estas
partculas se usan para construir un histograma de ERIT que refleje la
distribucin de los eritrocitos que estn siendo analizados. Cuando la
acumulacin de datos para el histograma de ERIT se completa( la poblacin
principal de ERIT es evaluada y los extremos izquierdo y derecho de esa
poblacin son electronicamente eliminados. El ADE es calculado a partir de la
desviacin estndar de la distribucin de eritrocitos reducida y es expresada
como %CV.
La distribucin de volumen de clulas rojas normal es unimodat y Gaussiano. Las
curvas no Gaussianas pueden ser indicadores de desrdenes discretos(
reconocibles como la fragmentacin de los eritrocitos, recuperacin de
deficiencias nutricionales( transfusin o agtutininas fras.
El Espcimen o Muestra
.. Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el 1]]
@] (Q] y dentro de las 48 horas para @] .
Procedimiento
1.. Vuelva a procesar la muestra. Si la R * desaparecen, reporte el resultados
de ADE no sealizado. Si no es as, proceda al Paso 2.
2.. Examine el frotis de sangre para determinar el grado de anisocitosis y
proceda de la forma siguiente:
a. Si el grado de anisocitosis concuerda con el ADE, reporte el resultado
sealizado.
b. Si el grado de anisocitosis no concuerda con el ADE, y aparecen:
ERIT de diferente escala de tamao, reporte entonces el grado de
anisocitosis del frotis; el resultado de ADE representa solamente una
poblacin de ERIT.
Recuento de LEUC elevado, vea el Procedimiento 1 de LEUC.
__________________ ------------------------------------------------49
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
Referencia
ERIT aglutinados, vea el Procedimiento 8 para ERIT.
Fragmentos de ERIT, vea el Procedimiento 9 para ERIT
Plaquetas gigantes, vea el Procedimiento 4 para PLQ
Plaquetas agrupadas, vea el Procedimiento 5 para PLQ
Coulter Currents. More on Why ADE is Flagged. 1983,3: 1-2.
__ ________ __________________________ 50
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero de12002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
PROCEDIMIENTO 8 Aglutinacin de Eritrocitos
Principio
Las partculas entre 24 y 360 fL son detectadas usando el Principio Coulter. Estas
partculas se usan para construir un histograma de ERIT que refleje la
distribucin de los eritrocitos que estn siendo analizados. Cuando la
acumulacin de datos para el histograma de ERIT se completa, el resultado de
VCM se deriva usando la informacin de partculas de 36 a 360 fL.
Las muestras con aglutinacin de ERIT pueden conducir a resultados de ERIT
que son falsamente reducidos y correspondientemente, resultados de VCM, HCM
y CHCM falsamente elevados.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @J
@ (Q) y dentro de las 48 horas para @) .
Procedimiento
1. Caliente el espcimen a 3rC durante al menos 15 minutos entonces mezcle
y vuelva a procesar la muestra.
a. Si el precalentamiento de la muestra invierte parte de la aglutinacin,
pero no la elimina completamente, proceda al Paso 2.
b. Si el precalentamiento de la muestra no invierte significativamente la
aglutinacin, proceda al Paso 3.
2. Si el precalentamiento de la muestra invierte parte de la aglutinacin, pero
no la elimina completamente, trate con lo siguiente:
a. Colecte una muestra nueva y analcela inmediatamente. Cercirese de
mantener la muestra a 37C hasta el anlisis. Esto puede ser realizado
mediante el uso de arena caliente, un calentador, un recipiente con agua
a 37C o colectando la muestra cerca del analizador.
__________________________________________________________________ 51
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
~ .
~ .
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
b. Procedimiento para el Reemplazamiento del Plasma:
1). Centrifugue una alcuota de la muestra de sangre y marque la parte
superior del nivel del plasma.
2). Usando una pipeta de transferencia, remueva cuidadosamente tanto
del plasma como sea posible sin perturbar las capas celulares.
3). Reemplace el plasma con una cantidad equivalente de diluente tibio
(37C).
4). Mezcle la muestra y cclela por el instrumento.
a. Use los resultados de LEUC yde plaquetas como gua para
verificar los efectos de la dilucin.
b. Use los parmetros de ERIT de esta muestra.
IMPORTANTE
Las diluciones de la muestra pueden producir resultados
diferenciales errneos. No reporte el diferencial de la muestra
diluida.
3. Si el precalentamiento de la muestra nonvierte la aglutinacin, proceda de
la forma siguiente:' .
a. Efecte un hematocrito centrifugado de acuerdo con el procedimiento de
la NCCLS H7-A2.
b. Efecte una hemoglobina manual de acuerdo con el procedimiento de la
NCCLS H15-A2.
C. Calcule la CHCM de la forma siguiente:
Hgb Corregida
CHCM= x 100
Hct (centrifugado)
d. Use el protocolo de su laboratorio para reportar los ERIT, VCM y CHM.
Estos parmetros no son precisos en la presencia de agrupaciones de
ERIT.
= = ~ ~ ~ ~ ~ = ~ ~ ________________ . __________________ _________ 52
TPS H114A202 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
IMPORTANTE
Cercirese de que el frotis de sangre fue hecho
recientemente del tubo que est siendo analizado. Algunas
anormalidades, tales como agrupaciones de plaquetas y
aglutinacin de ERIT pueden no aparecer hasta que la
muestra no haya estado a temperatura ambiente por un rato.
e. Estime la anisocitosis del frotis de sangre. Si la anisocitosis concuerda con el
ADE, reporte el ADE. De lo contrario, reporte la anisocitosis solamente del
frotis.
f. Verifique los resultados de LEUC. Si los resultados de LEUC son sealizados
con una * una *R o el estimado de la lmina con concuerda con el
recuento automatizado, obtenga una resultados de LEUC usando un
hemocitmetro.
g. Si los resultados del diferencial son sealizados, detecte un frotis de sangre
para verificar el diferencial del instrumento, reporte el diferencial del
instrumento.
1). Si el diferencial del instrumento concuerda con la deteccin del frotis,
reporte el diferencial del instrumento.
2). Si la deteccin no concuerda con el diferencial del instrumento, realice un
diferencial manual.
h. Si un resultado de LEUC corregido y/o los resultados de un diferencial manual
deben ser reportados, calcule de nuevo los nmeros absolutos del diferencial
de la forma siguiente:
% Clulas (reportadas) x LEUC Corregido
Nmero Absoluto =
100
Notas del Procedimiento
Un Hct centrifugado es aproximadamente un 2% a un 5% ms elevado que
un Hct calculado debido al plasma atrapado.
__________________________________________________________________ 53
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
Referencias
Una CHCM elevada junto con un VCM elevado es una buena indicacin de
una aglutinina fra. Los pacientes con ERIT microcticos tambin pueden
tener aglutininas fras resultantes en una CHCM elevada con un VCM
aparentemente normal.
Bessman JD, Banks D, Spurious Macrocytosis, A Common Clue to Eritrocyte
Cold Agglutinins. Am J C!in Pathol, 1980; 74; 5: 797-800.
Behan KJ. Letters to the Editor. MLO Nov. 1996; 10.
~ ~ ~ ~ ~ = __ ~ ~ ____ _______________________________ 54
TPS H114A202 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
PROCEDIMIENTO 9
Eritrocitos Pequeos o Fragmentos de ERIT
Principio
Todas las partculas 36 fL o ms son contadas como ERIT usando el Principio
Coulter. Los ERIT ms pequeos de 36 fL no son incluidos en el resultado de
ERIT conduciendo a resultados de eritrocitos falsamente disminuidos.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el ()
(0 @) y dentro de las 48 horas para @) .
Procedimiento
1. Examine el extremo inferior del histograma de ERIT y el extremo superior del
histograma de plaquetas.
2. Si un nmero significativo de eritrocitos pequeos cae por debajo del umbral
de ERIT de 36 fL, o si un nmero significativo de fragmentos de ERIT cae por
encima del umbral de 36 fL, proceda al Paso 3. De lo contrario, proceda al
Paso 4.
3. Correcte los parmetros de ERIT de la forma siguiente:
a. Obtenga un recuento correcto de ERIT usando lo mismo un
hemocitmetro o analice la muestra en un instrumento semi-
automatizado tal como un COULTER COUNTER de la Serie F Z con un
Analizador CHANNELYZER adjunto. Cercirese de que el umbral se
encuentre ajustado para incluir todas los ERIT, pero excluya cualquier
fragmento de ERIT.
b. Realice un hematocrito centrifugado de acuerdo con el procedimiento de
la NCCLS H7-A2.
c. Calcule el VCM, CHM y CHCM de la forma siguiente:
Hct (Centrifugado)
VCM =
--------- x 10
RBC (corregido)
_______________________________________________________________ 55
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
Hgb
CHM= x 10
RBC (corregido)
Hgb
CHCM= x 100
Hct (centrigufado)
d. Estime la anisocitosis del frotis de sangre. Si la anisocitosis viene de
acuerdo con el ADE del instrumento, reporte el ADE; de lo contrario
reporte solamente la anisocitosis solamente de la muestra.
4. Si los resultados de VPM y plaquetas son sealizados o el histograma de
plaquetas muestra una posible interferencia de eritrocitos pequeos o
fragmentos de eritrocitos, proceda de la forma siguiente:
a. Obtenga el recuento correcto de plaquetas usando un hemocitmetro; se
prefiere el microscopio de contraste de fase.
b. Observe el tamao de las plaquetas (pequeo, normal o grande) del
frotis de sangre y verifique el nmero.
Notas del Procedimiento
Referencias
Los nmeros grandes de fragmentos de ERIT o microesferocitos pueden
causar que el recuento de plaquetas sea falsamente elevado.
Los pacientes quemados con frecuencia tienen microesferocitos y fragmentos
de ERIT en las etapas tempranas post trauma.
Akwari A, Ross D, Stass S. Spuriously Elevated Platelet Counts Due to
Microespherocytosis. Am J Clin Pathol, 1982; 77; 2: 220-221.
Bessman, D. Mycrocytosis Cause by RBC Fragmentatioll. JAMA, 1978; 239;
23: 2475-2476.
__ __ ____ ____ __ __ _______ 56
TPS H114A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
PROCEDIMIENTO 10
Especmenes Hemolizados
Principio
Todas las partculas de 36 fL o ms grandes son contadas como ERIT usando el
Principio Coulter. La hemoglobina es medida fotomtricamente usando un
procedimiento de cianometahemoglobina modificado. La absorbancia del
pigmento es directamente proporcional a la concentracin de hemoglobina de la
muestra.
Si la hemlisis est ocurriendo in vivo, los resultados del instrumento, los cuales
pueden ser sealizados como bajos, reflejan las verdaderas clulas circulantes.
Si, no obstante, la hemlisis es in vitro, el espcimen puede dar resultados de
ERIT falsamente bajos. Los recuentos de las clulas debido a la hemlisis in vitro
no representan el nmero de eritrocitos circulantes.
El Espcimen o Muestra
Reactivos
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @
CM) @) y dentro de las 48 horas para @) .
El Diluente ISOTON III es el fluido diluente preferido.
Procedimiento
1. Si es posible, obtenga y analice una muestra no hemolizada.
2. Si no puede obtener una muestra no hemolizada y la hemlisis es in vitro:
a. Reporte solamente los LEUC, diferencial y Hgb de la muestra hemolizada.
b. No reporte el resultado de ERIT y Hct porque pueden ser errneamente
bajo.
c. Revise el histograma de plaquetas para ver si hay una posible
interferencia de los fragmentos de ERIT.
1) Si no existe interferencia aparente, reporte los resultados de Plq y
VPM de la muestra hemolizada.
_______________________________________________________________ 57
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
2) Si existe interferencia:
a. Obtenga un recuento de plaquetas completo usando un
hemocitmetro, se prefiere el microscopio de contraste de fase.
b. Estime el tamao de las plaquetas (pequeo, normal o grande)
del frotis de sangre y verifique el nmero.
3. Si la hemlisis es in vivo:
a. Reporte los LEUC, diferencial, ERIT, VCM, Hct y ADE de la muestra
hemolizada.
b. Revise el histograma de plaquetas para ver si hay una posible
interferencia de los fragmentos de ERIT.
1) Si no hay interferencia, reporte los resultados de Plq y VPM de la
muestra hemolizada.
2) Si existe interferencia:
a. Obtenga un recuento de plaquetas completo usando un
hemocitmetro, se prefiere el microscopio de contraste de fase.
b. Estime el tamao de las plaquetas (pequeo, normal o grande)
del frotis de sangre y verifique el nmero.
c. Los resultados de Hgb representan ambos el plasma y la hemoglobina
celular. Para determinar los resultados de la hemoglobina celular:
1) Centrifugue una alcuta de la muestra. Realice un anlisis de hemoglobina
en el plasma (mtodo automatizado o manual),
2) Use la frmula siguiente para calcular la Hgb celular:
Hct
Hgb Celular = Hgb Total- [ (1 - x Hgb del Plasma
100
d. Calcule la CHM y la CHCM de la forma siguiente:
Hgb (celular)
CHM= x 10
RBC
_______________________________________________________________ 58
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
Hgb (celular)
CHCM= x 100
Hct
Notas del Procedimiento
.. En los especmenes lipmicos, el procedimiento para corregir la hemlisis in
vivo puede causar recuentos de plaqueta disminuidos debido al atrapamiento
en la capa lpida durante la centrifugacin.
Procesar plasma solamente a travs del instrumento puede dar resultado
una aspiracin parcial o mensaje de error de aspiracin.
______________________________________________________________________ 59
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
PROCEDIMIENTO 11
Muestras Lipmicas
Principio
La hemoglobina es medida fotomtricamente usando un procedimiento de
cianometahemoglobina modificado. La absorbancia del pigmento es directamente
proporcional a la concentracin de hemoglobina de la muestra. El plasma
lipmica puede causar turbidez suficiente y, como resultados, elevar la
hemoglobina. La lipemia tambin puede impedir la lisis de los eritrocitos e
interferir con el grfico de datos o el grfico de dispersin.
El Espcimen o Muestra
Reactivos
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @
@) @) y dentro de las 48 horas para @) .
El Diluente ISOTON III es el fluido diluente preferido.
Procedimiento
1. Determine el Hgb, CHM y CHCM correcta usando lo mismo el
reemplazamiento del plasma o el procedimiento de blanco de plasma a
continuacin.
Procedimiento de Reemplazamiento del Plasma
a. Centrifugue una alcuota de la muestra y marque la parte superior del
nivel del plasma.
b. Usando una pipeta de transferencia, remueva cuidadosamente tanto
plasma como sea posible sin perturbar las capas celulares.
c. Reemplace el plasma con una cantidad equivalente de diluente (aada le
diluente hasta la marca).
d. Mezcle la muestra y cclela a travs del instrumento.
1) Use el resultados de ERIT como una gua para verificar la redilucin
apropiada de la muestra.
_______________________________________________________________ 60
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
2) Si los resultados de ERIT se correlacionan con los resultados
originales, reporte la Hgb, CHM y CHCM de la muestra rediluida.
e. Si los resultados diferenciales son sealizados, proceda al Paso 2.
Procedimiento Para el Blanco de Plasma
a. Obtenga un resultado inicial de Hgb con sangre entera o total.
b. Centrifugue un alcuota de la muestra. Efecte una prueba de Hgb y
obtenga una lectura del "blanco" en el plasma de la forma siguiente:
1) Si hay plasma suficiente disponible, hgalo ciclar a travs del
instrumento. Verifique que los resultados se encuentre dentro de los
lmites de linealidad de la Hgb.
2) Si el volumen de plasma es insuficiente, realice una hemoglobina
manual del plasma.
c. Use la frmula siguiente para obtener un resultado de Hgb corregido:
Hct
Hgb Corregida = Hgb Inicial - [ Blanco de Plasma (1 - ) J
100
d. Calcule la CHM y la CHCM de la forma siguiente:
Hgb (corregida)
CHM= x 10
RBC
Hgb (corregida)
CHCM= x 100
Hct
e. Si los resultados del diferencial son sealizados, proceda al Paso 2.
2. Si los resultados del diferencial son sealizados, detecte un frotis de sangre
para verificar el diferencial del instrumento.
a. Si el diferencial del instrumento viene de acuerdo con la deteccin del
frotis, reporte el diferencial del instrumento.
b. Si la deteccin no viene de acuerdo con el diferencial del instrumento,
1) Efecte un diferencial manual.
______________ 6 1
TPS H114A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
2) Calcule los nmeros absolutos del diferencia de la forma siguiente:
% Clulas (reportadas) x LEUC
Nmero Absoluto =
100
Notas del Procedimiento
Referencias
Procesar solamente plasma en el instrumento puede dar por resultado en
una aspiracin parcial o mensaje de error de aspiracin.
Un resultado alto de triglicridos no significa necesariamente que la lectura
de hemoglobina sea incorrecta. La turbidez aumentada causada por los
triglicridos contenida en cilomicrones interfiere con la lectura de
hemoglobina mientras que los triglicridos contenidos en lipoprotenas de
muy baja densidad no.
El colesterol no causa turbidez en la muestra de sangre y, por lo tanto, no
afecta la lectura de la hemoglobina.
Las emulsiones para nutricin parenteral han sido asociadas con elevaciones
del resultado de hemoglobina.
Gagne C, Auger PL, Moorjani S, Brun D, Lupien, PJ. Effect of
Hyperchylomicronemia on the Measurement of Hemoglobin. Am J Clin Pathol,
1977; 68:584-586.
Nosanchuk JS, Roark MF, Wanser C. Anemia Masked by Triglyceridemia. Am
J Clin Pathol, 1974: 62:838-839.
__________________________________________________________________ 62
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
PROCEDIMIENTO 12 Qumicas Anormales (Sodio, Glucosa o BUN)
Principio
L.as partculas entre 24 y 360 fL son detectadas usando el Principio Coulter.
Todas las partculas de 36 fL o ms son contadas como ERIT usando el Principio
Coulter. Estas partculas son usadas para construir un histograma de ERIT que
refleje la distribucin de los eritrocitos que estn siendo analizados. Cuando la
acumulacin de los datos para el histograma de ERIT se complete, el resultado
de VCM es derivado usando la informacin de las partculas de 36 fL a 360 fL.
Los cambios en ciertas qumicas de la sangre, notablemente el sodio, la glucosa
yel BUN pueden causar un encogimiento temporal o hinchamiento de las clulas
cuando stas sean mezcladas con una solucin isotnica.
El Espcimen o Muestra
Reactivos
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @
@ (Q) y dentro de las 48 horas para @) .
El Diluente ISOTON III es el fluido diluente preferido.
Procedimiento
Para manipular los especmenes afectados por este problema, seleccione lo
mismo el mtodo manual o automatizado que sigue a continuacin.
Mtodo Automatizado
1. Reporte los LEUC, ERIT, Hgb, Plq Y diferencial si no son sealizados.
2. Haga una solucin 1:2 (1 parte de sangre total por una parte de diliuente)
3. Incube de 5 a 10 minutos.
4. Procese la dilucin y anote el VCM.
~ ~ ~ ~ ~ = ~ = ~ ~ = ~ ~ ~ ~ ~ = ~ ~ __ ~ ~ ~ __ ______ ___ 63
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
5. Calcule el Hct y la CHCM de la forma siguiente:
RBC x VCM corregido
Hct=
10
Hgb
CHCM= x 100
Hct (corregida)
Mtodo Manual
1. Efecte un hematocrito centrifugado de acuerdo con el procedimiento de la
NCCLS H7-A2.
2. Calcule el VCM y la CHCM de la forma siguiente:
Hct (Centrifugado) x 10
VCM =
RBC
Hgb
CHCM= x 100
Hct (centrifugado)
Notas del Procedimiento
Un Hct centrifugado es aproximadamente de un 2 a un 5% ms elevado que
un Hct calculado debido al plasma atrapado.
El efecto de glucosa hiperosmtica ocurre en las muestras que tienen valores
de glucosa >600 mg/dl. Las clulas tienden a hincharse en el diluente
isotnic a medida que la glucosa se equilibra. Esto puede ocurrir en los
pacientes diabticos o si la muestra es colectada a travs de una lnea
intravenosa que contenga una solucin con glucosa. La CHCM disminuye
anormalmente en estas muestras.
Los desbalances de la urea se equilibran ms rpidamente en el diluente
isotnico que con los aumentos o disminuciones de la glucosa.
Los individuos hipoosmolares e hipernatrmicos tienen valores disminuidos
de VCM debido al encogimiento de las clulas en diluente isotnico.
_____________________________________________________________ 64
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
Referencias
PROCEDIMIENTOS CON ERITROCITOS
.' Holt JT, DeWandler MJ, Arvan DA. Spurious Elevation of the Electronically
Determined Mean Corpuscular Volume and Hematocrit Caused by
Hiperglycemia. Am J Clin Pathol, 1982; 77:561-567.
Savage RA, Hoffman Gc. Clinical Significance of Osmotic Matrix Errors in
Automated Hematology: The Frequency of Hyperglycemic Osmotic Matrix
Errors Producing Spurious Macrocytosis. Am J Clin Pathol, 1983; 80: 831-865
~ ~ ~ ~ ~ = __ = ~ _____________________________________________ 65
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
~
CONTENIDO 5
IMPORTANTE
Los procedimientos siguientes son ofrecidos solamente como
gua. Siempre siga y cumpla con el protocolo de su laboratorio
antes de reportar los resultados
Procedimiento 1
Obtencin de los Resultados Correctos cuando
el Resultado de Plq se encuentra Extralimitado
(+++++) o por Encima de la Linealidad (+)
Procedimiento 2
Resultados de Plq Disminuidos
Procedimiento 3
Distribuciones de Plq Sealizadas con una "R"
Procedimiento 4
Plaquetas Gigantes
Procedimiento 5
Plaquetas Agrupadas
Procedimiento 6
Plaquetas Satlites
67
70
72
74
77
81
________________________ - - - - - - - - - - - - - - ~ ~ ~ - - ~ ~ ~ - - - - - - 6 6
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON PLAQUETAS 5
PROCEDIMIENTO 1
Obtencin de los Resultados Correctos cuando el
Resultado de Plq se encuentra Extralimitado (+++++) o por.
Encima de la Linealidad (+)
Principio
Los resultados de plaquetas en el sistema GEN.S y el Analizador ONYX son
considerados extralimitados cuando el resultado es >2500 x lO' clulaS/fA-. Los
resultados de Plq en los analizadores STKS MAXM son considerados
extralimitados cuando el resultado es >999 x 10
3
clulas/fA-. (Vea el Manual de
Referencia de su instrumento para la definicin exacta de la extralimitacin).
El resultado es reemplazado por el cdigo (+++++) y el resultado de VPM
reemplazado por el cdigo ( ..... ) para indicar un clculo incompleto.
La linealidad en el sistema GEN.S es de 1500 x lO'clulas/fA-. El GEN.S
proyecta una "+" a continuacin del resultado que se encuentre por encima de la
escala lineal, pero por debajo del lmite de extralimitacin. La linealidad en los
analizadores STKS, MAXM y ONYX es de >999 x 10
3
clulas/fA-. El analizador
ONYX proyecta una "+" a continuacin del resultado que se encuentre por
encima de la escala lineal, pero por debajo del lmite de extralimitacin.
Para obtener un resultado reportable, la sangre total o entera debe ser diluida y
vuelta a procesar. El recuento de plaquetas resultante es entonces multiplicado
por el factor de dilucin para obtener el resultado de ERIT correcto.
El Espcimen o Muestra
Reactivos



Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el [])
@ @) y dentro de las 48 horas para @).
Diluente - ISOTON III es el fluido diluente preferido.
______________________________________________________ 6 7
TP5- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON PLAQUETAS
Procedimiento
1. Para lograr el acceso a un valor de la base numrica cuando el resultado se
encuentra extralimitado (+++++), revise un frotis de sangre (vea el
apndice) o siga las instrucciones a continuacin:
Logre el acceso a Bsqueda en la Base de Datos y recupere la muestra
en cuestin. Haga resaltar la muestra en la pantalla. Seleccione F3 Edit Y
entonces oprima PgDn para proyectar la segunda pgina. El valor
numrico promedio del resultado extralimitado aparece en la parte
inferior de la pantalla.
Este resultado no puede ser editado, impreso o transmitido a una
computadora principal. No debe ser reportado. Este nmero es
simplemente un valor de base numrica para determinar la relacin de
dilucin necesaria para traer el resultado de Plq dentro de la escala lineal.
Logre el acceso a Bsqueda en la Base de Datos y recupere la muestra
en cuestin. Haga resaltar la muestra en la pantalla. Seleccione F3 Edit y.
entonces oprima End para proyectar la segunda pgina. El valor
numrico promedio del resultado extralimitado aparece en la parte
inferior de la pantalla.
Este resultado no puede ser editado, impreso o transmitido a una
computadora principal. No debe ser reportado. Este nmero es
simplemente un valor de base numrica para determinar la relacin de
dilucin necesaria para traer el resultado de Plq dentro de la escala lineal.
IMPORTANTE
Si el resultado de Plq es(+++++), procese un cido en blanco para
evitar el acarreo a la muestra siguiente.
2. Usando el diluente y un sistema de pipetear apropiadamente calibrado,
. prepare la dilucin ms baja para llevar el resultado de Plq dentro de la
escala lineal.
IMPORTANTE
Las diluciones de las muestras pueden producir resultados
diferenciales errneos. No reporte el diferencial de la muestra diluida.
__ ____ ____ __ __ _______ 68
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON PLAQUETAS
3. Cicle la muestra diluida inmediatamente.
4. Multiplique los resultados del Paso 3 por el factor de dilucin para obtener un
recuento de Plq correcto.
5. Reporte el VPM de la muestra diluida o reporte el tamao de las plaquetas
(pequeo, mediano o grande) del frotis de sangre.
6. Si los LEUe son sealizados con una * o *R vea el Procedimiento 2 para
LEUe.
Notas del Procedimiento
Cualquier partcula pequela tales como fragmenlos de clulas de LEUC u ERlT,
microcitos, o crioglobulinas pueden interferir con el recuento de Plq causando
que este sea falsamente elevado.
__________________________________________ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ 6 9
TPS H114A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTO 2
Resultados de Plaquetas Disminuidos
Principia
Todas las partculas entre 2 fL Y 20 fL son contadas como plaquetas usando el
Principio Coulter. Si el resultado es mayor que 20 x 10
3
clulas/JI, la
computadora suaviza cada histograma y usa la informacin para ajustarla a una
curva normal entre O y 70 flo Ciertas comprobaciones de distribucin son
entonces realizadas contra la curva ajustada. Si alguno de los criterios no es
cumplido, existe una condicin de no-ajuste. El resultado de plaquetas es
entonces derivado de la parte del histograma entre los 2 y los 20 fL. Los
resultados de Plq y VPM van a ser sealizados con una R.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @
@ (Q) y dentro de las 48 horas para @) .
Procedimiento
IMPORTANTE
Cercirese de que el frotis de sangre fue hecho
recientemente del tubo que est siendo analizado. Algunas
anormalidades, tales como agrupaciones de plaquetas y
aglutinacin de ERIT pueden no aparecer hasta que la
muestra no haya estado a temperatura ambiente por un rato.
1. Examine el histograma de Plq para ver si hay interferencia y un frotis de
sangre teida para ver si existen anormalidades.
2. Si no hay interferencias presentes o no se observa ninguna anormalidad,
verifique el recuento de plaquetas mediante estimado del frotis (vea el
Apndice) y/o una metodologa alterna tal como un microscopio de contraste
de fase.
3. Si hay presente interferencia en el histograma de Plq, examine el frotis de
sangre y proceda de la forma siguiente:
Si hay cristales de crioglobulinas/criofibringenos presentes, vea el
Procedimiento 5 para LEUC.
Si hay fragmentos de LEUC presentes, vea el Procedimiento de LEUC 6.
__ ____ __ ____ ____ __ _______ 70
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gcos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON PLAQUETAS
Si hay presentes ERIT o fragmentos de ERIT, vea el Procedimiento 9 para
ERIT.
Si hay presentes partculas celulares y clulas fantasmas, examine si el
espcimen se encuentra hemolizado. Si lo est, vea el Procedimiento 10
para ERIT.
Si hay presentes plaquetas gigantes, vea el Procedimiento 4 para Plq.
Si hay presentes agrupaciones de plaquetas, vea el Procedimiento 5 para
Plq.
Si hay presentes plaquetas satlites, vea el Procedimiento 6 para Plq.
Notas del Procedimiento
Pueden ser observados resultados bajos de plaquetas en los pacientes
quemados, quimioterapia antileucmica, trombocitopenia sptica o
prpura trombocitopnica inmune.
La pseudotrombocitopenia puede ser causada por la aglutinacin de las
plaquetas in vitro (EDTA o heparina), aglutininas fras de las plaquetas o
satlitositosis de las plaquetas.
--------__________________________________________________________ 71
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgcos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON PLAQUETAS
PROCEDIMIENTO 3
Distribuciones de Plaquetas Sealizadas con una R
Principio
Todas las partculas entre 2 fL Y 20 fL son contadas como plaquetas usando el
Principio Coulter. Si el resultado es mayor que 20 x 10
3
la
computadora suaviza cada histograma y usa la informacin para ajustarla a una
curva normal entre O y 70 fL. Ciertas comprobaciones de distribucin son
entonces realizadas contra la curva ajustada. Si alguno de los criterios no es
cumplido, existe una condicin de no-ajuste. El resultado de plaquetas es
entonces derivado de la parte del histograma entre los 2 y los 20 fL. Los
resultados de Plq y VPM van a ser sealizados con una R.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @)
@) @) y dentro de las 48 horas para @) .
Procedimiento
IMPORTANTE
Cercirese de que el frotis de sangre fue hecho
recientemente del tubo que est siendo analizado. Algunas
. anormalidades
r
tales como agrupaciones de plaquetas y
aglutinacin de ERIT pueden no aparecer hasta que la
muestra no haya estado a temperatura ambiente por un rato.
4. Examine el histograma de Plq para ver si hay interferencia y un frotis de
sangre teida para ver si existen anormalidades.
5. Si no hay interferencias presentes o no se observa ninguna anormalidad,
verifique el recuento de plaquetas mediante estimado del frotis (vea el
Apndice) y/o una metodologa alterna tal como un microscopio de contraste'
de fase.
6. Si hay presente interferencia en el histograma de Plq, examine el frotis de
sangre y proceda de la forma siguiente:
Si hay cristales de crioglobulinas/criofibringenos presentes, vea el
Procedimiento 5 para LEUC.
__________________________________________________________________ 72
TPS- H114A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON PLAQUETAS
Si hay fragmentos de LEUC presentes, vea el Procedimiento de LEUC 6.
Si hay presentes ERIT o fragmentos de ERIT, vea el Procedimiento 9 para
ERIT.
Si hay presentes partculas celulares y clulas fantasmas, examine si el
espcimen se encuentra hemolizado. Si lo est, vea el Procedimiento 10
para ERIT.
Si hay presentes plaquetas gigantes, vea el Procedimiento 4 para Plq.
Si hay presentes agrupaciones de plaquetas, vea el Procedimiento 5 para
Plq.
Si hay presentes plaquetas satlites, vea el Procedimiento 6 para Plq.
Notas del Procedimiento
Las agrupaciones de plaquetas, plaquetas gigantes, fragmentos de ERIT y/o
microesferocitos o variacin en el tamao de las plaquetas (transfusin) puede
causar una condicin de no ajuste de las plaquetas.
__________________________________________________________________ 73
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON PLAQUETAS
PROCEDIMIENTO 4
Plaquetas Gigantes
Principio
Todas las partculas entre 2 fL Y 20 fL son contadas como plaquetas usando el
Principio Coulter. Si el resultado es mayor que 20 x 10
3
clulasf.iI, la
computadora suaviza cada histograma y usa la informacin para ajustarla a una
curva normal entre O y 70 fL. Ciertas comprobaciones de distribucin son
entonces realizadas contra la curva ajustada. Si alguno de los criterios no es
cumplido, existe una condicin de no-ajuste. El resultado de plaquetas es
entonces derivado de la parte del histograma entre los 2 y los 20 fL.
G,M,S
Las seales generadas en estos instrumentos son el mensaje de sospechoso
"Giant P/ate/ets"(Plaquetas Gigantes) y/o una condicin de no ajuste de las
plaquetas donde las Plq y el VPM van a ser sealizados con una R.
o
Las seales generadas en este instrumento van a ser una condicin de no ajuste
donde las Plq y el VPM van a ser sealizados con una R.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el
@ @ y dentro de las 48 horas para @) .
Procedimiento
1. Si los resultados de las plaquetas son sealizados con una seal de "Giant
Platelet" y/o una seal R, detecte una lmina para verificar el resultado de
las plaquetas. (Vea el Apndice).
a. Si el estimado de plaquetas de la lmina viene de acuerdo con el
resultado de plaquetas del instrumento.
1) Reporte el resultado del instrumento.
2) Observe el tamao de las plaquetas (pequeo, normal o grande) del
frotis de sangre y verifique el nmero.
3) Proceda al Paso 3.
__ __ ____ __ ______________________ 74
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON PLAQUETAS
b. Si el estimado no viene de acuerdo con el instrumento, obtenga un
resultado de plaquetas correcto usando un hemocitmetro; se prefiere el
microscopio de contraste de fase.
1) Observe el tamao de las plaquetas (pequeo, normal o grande) del
frotis de sangre y verifique el nmero.
2) Proceda al Paso 3.
3. Si el resultado de LEUC es sealizado con una * una *R, evale el frotis de
sangre y determine si las plaquetas gigantes estn interferiendo con el
resultado de LEUC. Si lo estn:
a. Obtenga una resultado de LEUC corregido usando un hemocitmetro
b. Corrija el resultados de LEUC para plaquetas gigantes usando la forma
siguiente:
Recuento Total No Corregido de LEUC x 100
LEUC Corregido =
100 + nmero de Plaquetas Gigantes/lOO LEUC
4. Si los resultados del diferencial son sealizados, detecte un frotis de sangre
para verificar el diferencial del instrumento.
a. Si el diferencial del instrumento viene de acuerdo con la deteccin,
reporte el diferencial del instrumento.
b. Si el diferencial no viene de acuerdo:
1) Efecte un diferencial manual.
2) Calcule los nmeros absolutos del diferencial de la forma siguiente:
% Clulas (reportadas) x LEUC Corregidos
Nmero Absoluto =
100
5. Examine el histograma de ERIT y el frotis de sangre. Determine si las
plaquetas gigantes se encuentran interferiendo con los parmetros de ERIT.
Si lo estn:
a. Obtenga un resultado de ERIT corregido usando un hemocitmetro.
b. Efecte un hematocrito centrifugado de acuerdo con NCCLS H7-A2.
c. Calcule el VCM, CHM y CHCM de la siguiente forma:
________________ 7 5
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON PLAQUETAS
Hct (corregido)
VCM
=
x 10
RBC (corregido)
Hgb
CHM
=
x 10
RBC (corregido)
Hgb
CHCM= x 100
Hct (corregido)
d. Estime la anisocitosis del frotis de sangre. Si la anisocitosis viene de
acuerdo con el ADE, reporte del ADE. De lo contrario, reporte la
anisocitosis solamente de la muestra.
Notas del Procedimiento
Referencias
Cuando una plaqueta es del tamao de un ERIT, generalmente es
considerada como una plaqueta "gigante".
Las plaquetas gigantes pueden causar que el resultado de Plq sea bajo y que
los resultados de LEUC y ERIT sean altos. Tambin, debido a que son de
diversos tamaos, afectan los resultados de VCM, VPM y ADE.
Cowell K Hematology No. HA, Tech Sample, American Society of Clnical
Pathologists, 1996.
____________________________________________________________ 76
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON PLAQUETAS
PROCEDIMIENTO 5 Plaquetas Agrupadas
Principio
Todas las partculas entre 2 fL Y 20 fL son contadas como plaquetas usando el
Principio Coulter. Si el resultado es mayor que 20 x 10
3
la
computadora suaviza cada histograma y usa la informacin para ajustarla a una
curva normal entre O y 70 fL. Ciertas comprobaciones de distribucin son
entonces realizadas contra la curva ajustada. Si alguno de los criterios no es
cumplido, existe una condicin de no-ajuste. El resultado de plaquetas es
entonces derivado de la parte del histograma entre los 2 y los 20 fL.
Las plaquetas pueden formar grande grupos que interfieren con los parmetros
de LEUC, ERIT y ADE. Los resultados pueden ser sealizados con un * o una *R
en los LEUC, cdigos R en las plaquetas o un mensaje de sospechoso de
"Plaquetas Agrupadas" (Platelets C/umps).
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el @
@ (Q) y dentro de las 48 horas para @) .
Procedimiento
IMPORTANTE
Cercirese de que el frotis de sangre fue hecho
recientemente del tubo que est siendo analizado. Algunas
anormalidades, tales como agrupaciones de plaquetas y
aglutinacin de ERIT pueden no aparecer hasta que la
muestra no haya estado a temperatura ambiente por un rato.
1. Examine un frotis de sangre para confirmar la presencia de agrupaciones de
plaquetas.
2. Extraiga un especmen fresco en un tubo con EDTA y Citrato de Sodio.
a. Si la muestra fresca con EDTA no es sealizada, reporte los resultados. La
sealizacin fue probablemente debido a una muestra colectada
inapropiadamente.
__________________________________________________
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON PLAQUETAS
b. Si el especmen con EDTA aun muestra agrupaciones de plaquetas,
procese el tubo de citrato de sodio para obtener solamente resultados de
VPM y Plq. Cercirese de multiplicar el resultado de las plaquetas por 1.1
o multiplicar por el 10% y adalo al recuento obtenido del tubo con
Citrato de Sodio.
IMPORTANTE
Se pueden formar agregados de plaquetas en sangre
anticoagulada con EDTA, oxalato o heparina. Las muestras
extraidas con Citrato de Sodio tienen que ser corregidas por
el 10% de dilucin adicional de anticoagulante multiplicando
el resultados por 1.1 multiplicar por un 10% y aadir al
recuento obtenido del tubo de Citrato de Sodio.
c. Si las plaquetas se encuentran an agrupadas, proceda al paso 3, si no lo
estn, proceda al Paso 4.
3. Colecte la muestra mediante puncin en el dedo y determine el recuento de
plaquetas de la forma siguiente:
a. Efecte un recuento con el hemocitmetro. (se prefiere el microscopio
por contraste de fase).
b. Observe el tamao de las plaquetas (pequeas, medianas o grandes) del
frotis de sangre y verifique el nmero.
4. Si el resultado de LEUC es sealizado con una * una *R, evale el frotis de
sangre y determine si las agrupaciones de plaquetas estn interferiendo con
el resultado de LEUC. Si lo estn, obtenga un resultado de LEUC corregido
usando un hemocitmetro, entonces corrija los resultados del diferencial de
la forma siguiente.
5. Si los resultados del diferencia son sealizados, detecte un frotis de sangre
para verificar el diferencial del instrumento.
a. Si el diferencial del instrumento viene de acuerdo con la deteccin,
reporte el diferencial del instrumento.
b. Si no viene de acuerdo con el diferencial del instrumento:
1) Efecte un diferencial manual.
2) Calcule los nmeros diferenciales absolutos de la forma siguiente.
________________________ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ 7 8
TPS- H114-A2-02 UProcedimentos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON PLAQUETAS
% Clulas (reportadas) x LEVC Corregidos
Nmero Absoluto =
100
6. Examine el histograma de ERIT y el frotis de sangre. Determine si las
agrupaciones de plaquetas estn interfiriendo con los parmetros de ERIT. Si
lo estn:
a. Obtenga un resultado de ERIT corregido usando un hemocitmetro.
b. Efecte un hematocrito centrifugado de acuerdo con NCCLS H7-A2
c. Calcule el VCM, CHM y CHCM de la forma siguiente:
Hct (corregido)
VCM
=
x 10
RBC (corregido)
Hgb
CHM
=
x 10
RBC (corregido)
Hgb
CHCM= x 100
Hct (centrifugado)
d. Estime la anisocitosis del frotis de sangre. Si la anisocitosis concuerda con
el ADE, reporte el ADE. De lo contrario, reporte solamente la anisocitosis
del frotis.
Notas del Procedimiento
Referencias
El agrupamiento de plaquetas puede ser observado con aglutininas reactivas
al fro independientes del EDTA. '
El agrupamiento de plaquetas ha sido asociado con algunos anticoagulantes;
tales como la heparina y el EDTA.
El agrupamiento de plaquetas puede ocurrir con tcnicas no depuradas o
mediocres de extraccin de muestras.
Lombarts AJPF, De Kieviet W. Recognition and Prevention of
Pseudothrombocytopenia and Concomminant Pseudoleukocytosis. Am J Clin
Pathol, 1988; 89:634-639.
________ ________ ______ __ _______ 79
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON PLAQUETAS
Ward VJ. Resolution of Erroneous Platelet Counts Caused by Platelet
Autoagglutinins. Clin lab Science, 1993; 6;4:206-207.
________________________________________________ ~ 8 0
TPS H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON PLAQUETAS
PROCEDIMIENTO 6
Plaquetas Satlites
Principio
Todas las partculas entre 2 fL Y 20 fL son contadas como plaquetas usando el
Principio Coulter. Si el resultado es mayor que 20 x 10
3
clulas/l.iI, la
computadora suaviza cada histograma y usa la informacin para ajustarla a una
curva normal entre O y 70 fL. Ciertas comprobaciones de distribucin son
entonces realizadas contra la curva ajustada. Si alguno de los criterios no es
cumplido, existe una condicin de no-ajuste. El resultado de plaquetas es
entonces derivado de la parte del histograma entre los 2 y los 20 fL.
Las plaquetas que se adhieren a los neutrfilos (satelitosis) pueden ser
observadas en muestras con EDTA y dan por resultado pseudo-trombocitopenia.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el (])
@ @) y dentro de las 48 horas para @) .
Especmen alterno - Use Citrato de Sodio y colctelo de acuerdo con la
publicacin de la NCCLS H4-A3 o la publicacin de la NCCLS H3-A3.
Procedimiento
1. Examine el frotis de sangre para verificar las plaquetas adherindose en
satlite a los neutrfilos.
2. Extraiga una muestra en Citrato de Sodio para obtener los resultados de
Plaquetas y VPM solamente. Cercirese de multiplicar los resultados de las
plaquetas por 1.1 o multiplique por un 10% y aada al recuento obtenido del
tubo de Citrato de Sodio.
IMPORTANTE
Se pueden formar agregados de plaquetas en sangre
anticoagulada con EOTA, oxalato o heparina. Las muestras
extraidas con Citrato de Sodio tienen que ser corregidas por
el 10% de dilucin adicional de anticoagulante multiplicando
el resultados por 1.1 multiplicar por un 10% y aadir al
recuento obtenido del tubo de Citrato de Sodio.
___________________________________________________________________ 81
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON PLAQUETAS
3. Verifique la ausencia de plaquetas satlites mediante la revisin de la lmina
de la muestra con Citrato de Sodio.
4. Si el resultado de LEUC es sealizado, realice un recuento con un
hemocitmetro.
5. Si los resultados diferenciales son sealizados, detecte un frotis de sangre
para verificar el diferencial del instrumento.
a. Si el diferencial del instrumento concuerda con la deteccin, reporte el
diferencial del instrumento.
b. Si no concuerda con el diferencial del instrumento:
1) Realice un diferencial manual.
2) Calcule los nmeros absolutos del diferencial de la forma siguiente:
% Clulas (reportadas) x LEVC Corregidos
Nmero Absoluto =
100
Notas del Procedimiento
Referencias
Las plaquetas satlites son observadas en muestras anticoaguladas con
EDTA.
La formacin de satlite es dependiente de tiempo y temparatura. Las
muestras con EDTA mantenidas a 37"C no muestran este fenmeno.
Los hallazgos realizados sugieren que este fenmeno puede ser causado por
una protena tipo IgG que interacciona con el EDTA a temperatura ambiente.
Dale NL, Schumacher HR. Platelet Satellitism-New Spurious Results with
Automated Instruments. Lab Med, 1982; 13;5:300-304.
Bizarro N. Platelet Satellitosis to Polymorphonuclears: Cytochemicals,
Immunological and Ultrastructural Characterization of Eight Cases. Am ]
Hmatol, 1991; Am ] Hematol, 1991; 36:235-242.
__________________________________________________________________ 82
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
--j
CONTENIDO 6
IMPORTANTE
Los procedimientos siguientes son ofrecidos solamente como
gua. Siempre siga y cumpla con el protocolo de su laboratorio
antes de reportar los resultados
Procedimiento 1
Muestra con un Grfico de Datos, Grfico de Dispersin
o Histograma de Distribucin de LEUC Atpico ............. .
84
______________ ~ ____ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ = _ 8 3
TPS. Hl14-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
~
PROCEDMIENTOS DIFERENCIALES 6
PROCEDIMIENTO 1
Muestra con Grfico de Datos, Grfico de Dispersin o
Histograma de Distribucin de LEUC Atpico
Principio
Los resultados diferenciales pueden ser obtenidos mediante dos tecnologas
diferentes.
G, M, S
El volumen, la conductividad y a dispersin de la luz se usan para analizar las
clulas en su estado casi nativo y hacer un grfico de datos de cinco partes o
diferencial del histograma de dispersin.
o
Los leucocitos alterados qumicamente son separados por el volumen nuclear
usando el Principio Coulter para ofrecer un histograma diferencial de tres partes.
El grfico de datos, grfico de dispersin o distribuciones de histogramas atpicos
pueden ser sealizados con un mensaje de Sospechoso para alertar al operador
sobre la posible presencia de ciertos tipos de clulas anormales.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el m
@) (QJ y dentro de las 48 horas para @) .
Procedimiento
1. Haga un frotis de sangre fresca del tubo de sangre que est siendo
analizado.
2. Detecte el frotis de sangre, particularmente a lo largo del borde extendido,
para ver si hay clulas anormales.
a. Si el diferencial del instrumento concuerda con la deteCClon del frotis,
reporte el diferencial del instrumento.
b. Si la deteccin no concuerda con el diferencial del instrumento:
1) Realice un diferencial manual.
_____________________________________________________________ 84
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
PROCEDIMIENTOS CON DIFERENCIALES
2) Calcule los nmeros absolutos del diferencial de la forma siguiente:
% Clulas (reportadas) x LEUC Corregidos
Nmero Absoluto =
100
Notas del Procedimiento
Si no existe una anormalidad aparente en el frotis, considere las
anormalidades que no pueden ser detectadas mediante el frotis tales como
las qumicas anormales. Estas incluyen altos triglicridos, lipemia o eritrocitos
resistentes al estromalizante (Iyse).
La manipulacin de la muestra es crtica para el diferencial. Coleccin
impropia de la muestra, almacenamiento, transportacin y mezclado todas
afectan la calidad de los resultados del diferencial.
~ ~ ~ ~ ~ __ ~ __ __ ~ __ _______________________________ 85
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
CONTENIDO
IMPORTANTE
Los procedimientos siguientes son ofrecidos solamente como
gua. Siempre siga y cumpla con el protocolo de su laboratorio
antes de reportar los resultados
Estimado de LEue ______________ _
87
Estimado de Plaquetas _____________ _
89
~ 8 6
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
APENDICE
ESTIMADO DE LEUCOCITOS
Principio
IMPORTANTE
Los procedimientos siguientes son ofrecidos solamente como
gua. Siempre siga y cumpla con el protocolo de su laboratorio
antes de reportar los resultados
Se puede hacer un estimado general del recuento total de clulas blancas a
partir del nmero de clulas blancas observadas en un frotis perifrico teido.
Este mtodo se usa para revisar los recuentos excesivamente altos o bajos, asi
como cualquier resultado que sea cuestionable debido a la interferencia,
obtenida en contadores de clulas automatizados. Estos resultados cuestionables
pueden ocurrir debido a la hemlisis incompleta de los eritrocitos, eritrocitos
nucieados, agrupamiento de plaquetas, plaquetas gigantes, prdida de clulas
blancas debido a una permanencia prolongada o cualquier otra partcula
interferente mayor de 35 fL.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el
@ @) y dentro de las 48 horas para @J .
Frotis de sangre perifrica, preparada y teida de acuerdo con el protocolo
del laboratorio.
Procedimiento
1. Detecte un frotis con poco aumento para observar la distribucin de las
clulas y cercirese de la calidad del frotis.
2. Con el objetivo de alta potencia (40X), observe varios campos donde los
ERIT no se encuentre unos encima de los otros.
3. Cuente el nmero de leucocitos en seis o ms campos de alta potencia.
_______________________________________________________________ 87
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
APENO/CE
4. Determine el nmero promedio de clulas blancas por campo visual de alta
potencia
Nmero Total de LEUC
Promedio LEUCjc. visual = -----------
Nmero de Campos Contados
5. De la tabla ofrecida a continuacin, estime el total de leucocitos:
# LEUC por Campo Visual
2-4
4-6
Recuento Total Estimado de LeuSQ.cito_s_._
.. 4j QQ_:::.ZrQO.Q .
7,000 - 10
r
DOO
6 - 10 10,000 - 13 000
_____ -=1"-0_--=2"--0 ..... ____ ________.11000-:-JM()().
6. El estimado manual y el recuento de clulas automatizado deben
correlacionar. Si el estimado y el recuento de clulas automatizado no
concuerdan, los LEUC tienen que ser verificados lo mismo usando un
hemocitmetro o un instrumento semi-automatizado tal como un COULTER
COUNTER Modelo F o un instrumento de la Serie Z.
Notas del Procedimiento
Referencias
Recuerde que cada microscopio es diferente en el rea de campo visible.
Esto tambin vara con el aumento que se emplee. Cada laboratorio debe
determinar los estimados por cada microscopio particular que se use.
El rea que se usa para hacer el estimado es muy importante. Cercirese de
que las escogidas sean consistentes con el resto de la lmina.
Harmening DM. Clnical Hematology of Fundamentals of Hemostasis. F.A. Davis
Company, Philadelphia, PA; 1997:607-609.
Colorado Association for Continuing Medical Laboratory Education, Inc. A Review
of Routine Hematology Laboratory Procedures. 1988:24-25.
O'Connor BH, A Color Atlas and Instruction Manual of Peripheral Blood Cell
Morphology. Williams and Wilkins; Baltimore, M.D; 1984: 29-32.
~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ~ __ ____ ~ ~ ~ ~ ~ ~ ____ 88
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hematolgicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
APENO/CE
ESTIMADO DE PLAQUETAS
Principio
IMPORTANTE
Los procedimientos siguientes son ofrecidos solamente como
gua. Siempre siga y cumpla con el protocolo de su laboratorio
antes de reportar los resultados
Se puede hacer un estimado general del recuento total de clulas blancas a
partir del nmero de clulas blancas observadas en un frotis perifrico teido.
Este mtodo se usa para revisar los recuentos excesivamente altos o bajos, asi
como cualquier resultado que sea cuestionable debido a la interferencia,
obtenida en contadores de clulas automatizados. Estos resultados cuestionables
pueden ocurrir debido a eritrocitos fragmentados, partculas, agrupamiento de
plaquetas, plaquetas gigantes o satelitismo de las plaquetas.
El Espcimen o Muestra
Sangre Total o Entera - Use sal de EDTA y colctela de acuerdo con lo
establecido por la publicacin NCCLS nmero H4-A3 H3-A3.
Almacene la muestra tapada a temperatura ambiente.
Procese las muestras dentro de las 24 horas de la recoleccin para el
@) @) y dentro de las 48 horas para @) .
Frotis de sangre perifrica, preparada y teida de acuerdo con el protocolo
del laboratorio.
Procedimiento
1. Con el objetivo de 100X de inmersin en aceite del microscopio, observe
varios campos donde los ERIT no estn uno encima de los otros.
2. Cuente el nmero de plaquetas en 5 -10 campos de inmersin de aceite.
3. Determine las plaquetas contadas en los campos mediante:
Nmero Total de Plaquetas
Promedio Plq contadas =
Nmero de Campos Contados
----------------------------------__________________________ 89
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
APENO/CE
4. Tome el nmero promedio de plaquetas del paso 3 y multiplique por 20,000.
a. Si el frotis fue hecho con una centrfuga de lminas automatizada,
entonces tome el nmero de plaquetas del paso 3 y multiplique por
15,000.
5. Si el estimado y el recuento de clulas automatizado no concuerdan, el
recuento de las plaquetas tienen que ser verificado lo mismo usando un
hemocitmetro o un instrumento semi-automatizado tal como un COUL TER
COUNTER Modelo F o un instrumento de la Serie Z.
Notas del Procedimiento
Referencias
Recuerde que cada microscopio es diferente en el rea de campo visible.
Esto tambin vara con el aumento que se emplee. Cada laboratorio debe
determinar los estimados por cada microscopio particular que se use.
El rea que se usa para hacer el estimado es muy importante. Cercirese de
que las escogidas sean consistentes con el resto de la lmina. El rea usada
para el estimado debe ser consistente cada vez que es realizado el anlisis ya
que el nmero usado para multiplicar el promedio se basa en si las clulas se
encuentran una encima de las otras o no. Una revisin de la literatura hall
procedimientos que variaron de 10,000 a 25,000 basndose en el rea de la
que fueron tomadas los estimados de las plaquetas. Esto debe determinarse
en cada laboratorio.
Si son observados agrupamientos de plaquetas de pequeos a moderados en
un patrn consistente a travs del frotis y las plaquetas por individual son
fcilmente discernibles, intente un estimado del frotis y compare con un
recuento de plaquetas realizado mediante microscopio de fase. Si el estimado
del frotis y el recuento por fase no concuerdan, reporte solamente el
estimado del frotis ya que no es posible un recuento preciso debido al
agrupamiento.
Harmening DM. Clinical Hematology of Fundamentals of Hemostasis. F.A. Davis
Company, Philadelphia, PA; 1997:607-609.
Colorado Association for Continuing Medical Laboratory Education, lnc. A Review
of Routine Hematology Laboratory Procedures. 1988:24-25.
O'Connor BH, A Color Atlas and Instruction Manual of Peripheral Blood Cell
Morphology. Williams and Wilkins; Baltimore, M.D; 1984: 29-32.
_______________________________________________________________ 90
TPS- H114-A2-02 "Procedimientos Hemato/gicos para Sangres Anormales" - febrero del 2002
(GALENICA
BIOTECNOLOGIA. BIODIAGNOSTICa
APOQUINDO 6314 PISO 2 - LAS CONDES
TELEFONO 799.2900 - FAX 799.2950
www.galenlca.cl Info@galenlca.cl
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