VALTEK DIAGNOSTICS

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UREA ENZIMATICA-UV
Reactivo para la determinacin enzimtica de urea en suero .
Para uso en el diagnstico in vitro.
SIGNIFICANCIA CLINICA
La urea es el producto final mayoritario del metabolismo del
nitrgeno proteico en los seres humanos. Constituye la
fraccin ms abundante del nitrgeno no proteico. La urea se
produce en el hgado y es excretada por la orina. Su
elevacin es producto de trastornos en la funcin renal o
heptica, problemas dietticos, diabetes y otros.
FUNDAMENTOS DEL METODO
La urea presente en la muestra, es desdoblada a amonio por
accin de la enzima ureasa, segn la proposicin de Faucet
y Scott.
(NH2)2CO + 2 H2O UREASA > 2 NH3 + CO2 + H2O
El amonio producido reacciona con 2-oxoglutarato en
presencia de la enzima glutamato-deshidrogenasa y del
coenzimo NADH, producindose l-glutamato. La disminucin
de la concentracin de NADH en la reaccin es proporcional
a la cantidad de urea presente en la muestra.
REACTIVOS
Conservado entre 2 y 8 C., estable hasta le fecha de
caducidad indicada en cada etiqueta.Estabilidad del reactivo
reconstitudo: 14 das entre 2 y 8C. Descartar el reactivo si
su absorbancia a 340 nm. contra blanco de agua, es inferior
a 1.000 D.O.
Componentes del reactivo enzimtico:
(Concentraciones al reconstituir)
Buffer pH 7.8 100mM
NADH 0,28 mM
Glutamato deshidrogenasa 15 U/ml
Ureasa !3 U/ml
2-oxoglutarato 4,0 mM
Estabilizantes y preservantes no reactivos c.s.
Solucin Standard
Urea 44 mg/dl
Equivalente Nitrgeno Ureico 20 mg/dl
Estabilizantes y preservantes no reactivos c.s.
MUESTRAS
De preferencia utilizar suero libre de hemlisis. En caso de
utilizar plasma, debe obtenerse utilizando anticoagulantes
libres de amonio. No utilizar fluoruro pues inhibe la accin de
la enzima ureasa. La urea es estable en el suero por a lo
menos 24 horas a temperatura ambiente, varios das entre
2 y 8 C., ms de seis meses a -20 C.
EQUIPO REQUERIDO
Espectrofotmetro o fotocolormetro de filtros capaz de leer
absorbancias a 340 nm., timer, pipetas y opcionalmente
bao termorregulado.
TECNICA
Llevar el reactivo a la temperatura a la que se realizar el
ensayo (25 , 30 o 37C.), y llevar a cero el instrumento
contra blanco de agua a 340 nm.
Standard o Muestra (ml) 0.01
Reactivo enzimtico (ml) 1.0
Mezclar e incubar 30 segundos. Leer las absorbancias (A1).
Incubar 60 segundos adicionales y leer nueva-mente (A2).
Determinar la diferencia de absorbancias (A1-A2)
CALCULOS
FACTOR = 44 .
"Abs Standard
Urea (mg/dl) = Factor x "Abs.desconocido
OBSERVACIONES
Para expresar los valores obtenidos como nitrgeno
ureico (mg/dl), multiplicar el valor obtenido por 0.455.
La reaccin es lineal hasta 180 mg/dl de urea (80 mg/dl
de nitrgeno ureico). Para concentraciones mayores,
diluir la muestra adecuadamente con agua destilada y
multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilucin
correspondiente.
Los volumenes de reaccin pueden ser modificados
proporcionalmente sin alteracin en los resultados.
RANGOS DE REFERENCIA
Suero o plasma:
Urea : 10 a 50 mg/dl
Nitrgeno Ureico : 4.5 a 22.7 mg/dl
Orina:
Urea : 15 a 30 g/24 hrs.
Nitrgeno Ureico : 7 a 14 g/24 hrs.
BIBLIOGRAFIA
1. Tiffany, T.O., Jensen, J.M., Burtis, C.A., Overton, J.B.,
and Scott, C.D., Ciln. Chem. 18(829), 1972.
2. Fawcet, J.K.& Scott, J.E., J.Clin.Path. 13(156),1960.
3. Chaney, A.L. & Marbach, C.P., Clin.Chem. 8(130),1962.