Composicin de lipoprotenas

Introduccin
Las lipoprotenas son complejos solubles de las protenas (apolipoprotenas) y lpidos que transportan los lpidos en la circulacin de todos los vertebrados e incluso insectos. Las lipoprotenas se sintetizan en el hgado, en los intestinos, surgen de cambios en el metabolismo de las lipoprotenas precursoras, o se ensamblan en las membranas celulares de los lpidos celulares y las lipoprotenas exgenas o apolipoprotenas. En la circulacin, las lipoprotenas son muy dinmicas. Se someten a las reacciones enzimticas de los componentes lipdicos, transferencias de lpidos facilitados y espontnea, transferencias de apolipoprotenas solubles, y los cambios conformacionales de las apolipoprotenas en respuesta a los cambios en la composicin. Por ltimo, las lipoprotenas son tomados y catabolizan en el hgado, el rin, y los tejidos perifricos a travs mediada por receptor y otros mecanismos. En este captulo se trata casi exclusivamente de las lipoprotenas humanas.

1.1 Clases principales de lipoprotenas

Aunque el conjunto, la estructura, el metabolismo, y el receptor de las interacciones de las lipoprotenas son determinadas por sus componentes de apolipoprotena, las clasificaciones ms comunes de las lipoprotenas se basan en su densidad hidratada o la movilidad en electroforesis en gel de agarosa. La clasificacin en los quilomicrones (CM), de muy baja densidad (VLDL), de baja densidad (LDL), y lipoprotenas de alta densidad (HDL) se basa en sus contenidos relativos de protenas y lpidos que determinan las densidades de estas clases de lipoprotenas. Los quilomicrones tener slo 1-2 % de protena mientras que el HDL tiene protena de aproximadamente el 50 % en peso. Los dimetros de las lipoprotenas estn inversamente correlacionados con sus densidades y variar de aproximadamente 6,000 para CM a 70 para el HDL ms pequeo (fig. 1). La organizacin estructural general es similar para todas las clases de lipoprotenas: las apolipoprotenas y lpidos anfipticos (en su mayora fosfolpidos y colesterol no esterificado) forman una capa de 20 en la superficie de partculas esfricas. Esta cscara encierra un ncleo de lpidos neutros (triglicridos, steres de colesterilo, y pequeas cantidades de colesterol no esterificado y otros lpidos disueltos, por ejemplo, vitaminas solubles en lpidos). Los principales componentes de las protenas son caractersticos de cada clase de lipoprotena; que se indican en la figura 1. Las principales funciones de las clases de lipoprotenas estn determinadas por su apolipoprotena (apo) y los componentes lipdicos. Los CM son sintetizados en el intestino para el transporte de triglicridos dietticos a diversos tejidos. VLDL se sintetizan en el hgado para la exportacin de los triglicridos endgenos, mientras que el LDL se derivan de la transformacin metablica de VLDL en la circulacin. La funcin de las LDL es entregar los steres de colesterol a los

tejidos perifricos y el hgado. HDL se sintetiza y ensambla en el hgado y el intestino o se forma a partir de las transformaciones metablicas de otras lipoprotenas en la circulacin, y de los lpidos celulares en la celda. HDL elimina el exceso de colesterol de las clulas y lo transportan al hgado y los tejidos andrognica para el metabolismo y la excrecin. Las lipoprotenas se clasifican tambin por su movilidad electrofortica en geles de agarosa al , pre y lipoprotenas , correspondientes a HDL, VLDL, y clases de densidad LDL respectivamente, CM, cuando estn presentes, permanecen en el origen electrofortica. Aunque las concentraciones de lipoprotenas en el plasma sanguneo son muy variables, dependiendo de la edad, el sexo, la alimentacin de estado, estado metablico/hormonal y estado de enfermedad de las personas, una distribucin de lipoprotenas representativo de un saludable varn adulto en ayunas, en plasma es de aproximadamente 0 mg/dl de CM, 150 mg/dl de VLDL, 410 mg / dl de LDL y 280 mg/dl de HDL.

Figura 1. Clases principales de lipoprotenas (CM, VLDL, LDL, HDL) en funcin de su densidad. Dimetros lipoprotenas varan desde aproximadamente 6000 para CM a 70 para el HDL. La capa exterior (~ 20 ) de todas las lipoprotenas consiste apolipoprotenas, colesterol no esterificado y fosfolpidos; el ncleo esfrico contiene triglicridos y steres de colesterol. CM y VLDL tienen el mayor contenido de triglicridos y apolipoprotenas 1-10% en peso, LDL y HDL contienen steres de colesterol sobre todo en sus ncleos, y el 20-50% de las apolipoprotenas. Los principales componentes de apolipoprotena de las diversas clases de lipoprotenas se indican con las lneas continuas; apolipoprotena componentes secundarios o menor se indican con las lneas de trazos. En esta figura, "colesterol" se refiere a tanto el colesterol esterificado y no esterificado; triglicridos = triacilgliceroles.

1.2 Subclases de lipoprotenas

Las lipoprotenas dentro de cada clase son heterogneas en trminos de su densidad, tamao, y contenidos de lpidos y apolipoprotenas y composiciones, as como en sus propiedades funcionales. Ellos se pueden separar en subclases por ultracentrifugacin, filtracin en gel, electroforesis, o mtodos de cromatografa de afinidad.

Basado en separaciones ultracentrifugacin y de filtracin en gel, el HDL se han subdividido en HDL1, HDL2, HDL3 y subclases, desde el ms grande y menos densa que las partculas ms pequeas y ms densas. La subclase HDL1 se enriquece en apo E y es menos abundante y con frecuencia pasado por alto. Electroforesis en gel no desnaturalizante se ha separado an ms los principales HDL2 y HDL3 subclases en HDL2a, HDL2b, HDL3a, HDL3b, y especies HDL3c que abarca un intervalo de densidad de 1,085 a 1,171 g/ml y el tamao (dimetro) Rango de 106 a 76 , respectivamente. Uso de columnas de inmunoafinidad anti-apolipoprotena dos principales subclases de HDL han sido separados: uno que contiene apo A1, pero no la apo A2 (LpA - I) y otro que contiene tanto la apo A1 y A2 apo (LpA-I/A-II). Protenas menores (apo E, apo Cs) pueden o pueden no estar presentes en cantidades significativas en estas subclases de HDL. En promedio, HDL humana contiene aproximadamente 70 % en peso de la apo A1, 20 % de la apo A2, y 10 % de las apolipoprotenas de menor importancia. Separaciones bidimensionales de HDL (electroforesis en gel de agarosa en una dimensin y no desnaturalizante en gel de poliacrilamida - electroforesis en la segunda dimensin) han dado migracin, migracin pre -, y - migracin subclases de HDL de varios tamaos y composiciones. Las subclases pre - migratorias estn presentes en bajas concentraciones en el plasma (en contraste con las especies abundantes ), y en concentraciones algo ms altas en el lquido intersticial, pero son metablicamente muy importante ya que representan las formas nacientes de HDL que son especialmente activo en colesterol la absorcin de las clulas (pre1 - HDL) y el colesterol por esterificacin del colesterol lecitina aciltransferasa (LCAT) (pre2 y pre3 - HDL). Debido a su papel clave en la absorcin de colesterol de las clulas, la pre 1 - HDL se han estudiado muy intensivamente (JE Kane , 1985) . Contienen 2 molculas de apo A1 por partcula, y no A2 apo ni otras protenas. Su masa oscila entre 60 y 80 kDa, con un contenido de aproximadamente 90 % de protena, 7 % de fosfolpidos, colesterol no esterificado 0,3 %, y el colesterol esterificado 1,8 %. El pre 1 - HDL representan slo el 7 % del total de apo Un 1 en el plasma y tienen un apo A 1 conformacin distinta de la apo A 1 en - migracin HDL. Mucho menos se sabe acerca de las otras subclases prel3 - HDL, excepto que son de forma discoidal, contienen grandes proporciones de fosfolpidos, y tienen masas de alrededor de 300 kDa. Otras clases de lipoprotenas tambin se pueden separar en subclases de diferente densidad y tamao de las mismas por mtodos de separacin. Las subclases de LDL en el rango de densidad de 1,027 a 1,060 g/ml y el tamao de la gama 270-210 se han obtenido y demostrado que tienen diferentes propiedades metablicas. LDL pequeas y densas, que contiene altas cantidades de triglicridos, parece ser la especie ms proaterognicos LDL. Los quilomicrones y VLDL se someten a la densidad continua, el tamao, y cambios en la composicin debido a la hidrlisis de los triacilgliceroles por su lipoprotena lipasa y los intercambios de apolipoprotenas solubles, por lo tanto, estas clases de lipoprotenas consisten en un espectro continuo de partculas.

Componentes lipdicos

2.1 Composicin lipdica

El contenido de lpidos y la composicin de las clases principales de lipoprotenas se enumeran en la Tabla 1, que muestra que el contenido total de lpidos est inversamente correlacionado con la densidad de las lipoprotenas. Glicerolpidos, principalmente triacilgliceroles, son los principales componentes lipdicos de CM y VLDL, pero constituyen menos del 11 % de los lpidos de LDL y HDL, que estn enriquecidos en steres de colesterol (24-51 %). Colesterol no esterificado se encuentra en todas las clases de lipoprotenas en proporciones relativamente bajas debido a que es esterificado por la LCAT activamente sobre el HDL y luego

redistribuido a las LDL y VLDL por la protena de transferencia de ster de colesterol. El contenido total de fosfolpidos de las lipoprotenas aumenta al aumentar la densidad y est directamente relacionada con el rea superficial de las partculas de lipoprotenas, como la superficie de las lipoprotenas est cubierta por una monocapa de fosfolpidos (PL) y apolipoprotenas.

Tabla 1 Composicin lipdica de las clases de lipoprotenas (a*) CM (b*) Densidad (g/ml) Total de lpidos (% pt) Glicerolpidos (% pt lipdico) (d*) steres de colesterol (% pt lipdico) Colesterol no esterificado (% pt lipdico) Fosfolpidos (% pt lipdico) (e*) PC (% pt PL) SM (% pt PL) PC lisa Otros (% pt PL)
a b c d e Adaptado de Skipski. Los quilomicrones (CM) se aislaron durante la absorcin de las comidas grasas de plasma o de la linfa. VLDL, LDL, y HDL se aislaron a partir de plasma o suero en ayunas. La mayora de glicerolpidos son triglicridos, slo el 4% son diacilgliceroles o monoacilgliceroles. Fosfolpidos (PL), fosfatidilcolina (PC), esfingomielina (SM).

VLDL (c*) 0.94 - 1.006 90 - 92 50 - 58 15 - 23 4-9 19 - 21 60 - 74 15 - 23 5 6 - 10

LDL (c*) 75 - 80 7 - 11 47 - 51 10 - 12 28 - 30 64 - 69 25 - 26 3-4 2 - 10

HDL (c*) 40 - 48 6-7 24 - 45 6-8 42 - 51 70 - 81 12 - 14 3 5 - 10

< 0.94 98 - 99 81 - 89 2-4 1-3 7-9 57 - 80 12 - 26 4 - 10 6-7

1.006 - 1.063 1.063 - 1.210

Por el momento, los principales componentes de fosfolpidos son fosfatidilcolinas (PC) (57 a 81 % en peso PL) seguido de esfingomielinas (12-26 % en peso PL). Liso PC y otros fosfolpidos ( fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, y fosfatidilinositol) constituyen 5-15 % en peso de PL. Los glicolpidos estn presentes slo en pequeas cantidades y los cidos grasos libres contribuyen menos del 3 % de la masa total de los lpidos.

2.2 Composicin de cidos grasos

En el estado de ayuno, la composicin de cidos grasos de los lpidos de lipoprotenas refleja sus orgenes biosintticos y transformaciones metablicas en circulacin (Tabla 2). Los glicerolpidos (predominantemente triacilgliceroles) tienen altas proporciones de 18:1 y cidos grasos 16:0, lo que refleja la sntesis en el hgado. La mayor parte de los steres de colesterol de lipoprotenas humanas se forma en la circulacin por la accin de la LCAT. Esta enzima acta sobre fosfatidilcolinas HDL y colesterol no esterificado para formar liso PC y los productos de ster de colesterilo. En esta reaccin, la LCAT utiliza preferentemente especies de PC con cidos grasos 18:2 o 18:1 en la posicin sn - 2, enriqueciendo as los steres de colesterol en estos cidos grasos, En contraste, PC que contiene cidos grasos 18:0 o 20:4 es un mal sustrato para la LCAT, que explica el contenido de la disminucin de estos cidos grasos en los steres de colesterol. La composicin de cidos grasos de los fosfolpidos que se encuentran en las

Tabla 2 Composicin de cidos grasos de glicerolpidos, steres de colesterol y fosfolpidos presentes en las clases de lipoprotenas (a*) cido graso Glicerolpidos: 16:0 18:0 18:1 18:2 20:4 steres de colesterol: 16:0 18:0 18:1 18:2 20:4 Fosfolpidos: 16:0 18:0 18:1 18:2 20:4
a peso de cidos grasos totales.

VLDL 26.9 2.9 45.4 15.7 2.5 11.5 1.4 25.6 51.8 6.1 33.8 14.7 12.2 20.3 13.6

LDL 23.1 3.3 46.6 15.7 5.4 11.3 1 22.4 59.9 6.9 36 14.3 11.6 18.9 13.2

HDL 23.4 3.5 43.8 15.9 7.6 11.4 1.1 22.4 54.8 6.3 31.8 14.5 12.3 20.6 15.7

Adaptado de Skipski. Las lipoprotenas se aislaron a partir de plasma en ayunas. La composicin es en% en

lipoprotenas es similar a la composicin de cidos grasos de fosfolpidos de las membranas celulares, especialmente de heptica y las clulas intestinales, incluyendo contenidos relativamente altos de los cidos grasos esenciales 18:2 y 20:4. En general, en el estado de ayuno, las composiciones de cidos grasos a travs de las clases de lipoprotenas para tipos especficos de los lpidos son bastante similares debido a las transferencias de lpidos entre todas las lipoprotenas de protena de transferencia de ster de colesterol y de la protena de transferencia de fosfolpidos. Despus de la ingestin de la composicin de cido graso de glicerolpidos VLDL refleja en cierta medida la composicin de cidos grasos de la grasa de la dieta, pero las composiciones de cidos grasos de colesterol LDL y HDL apenas se ven afectados. En los quilomicrones, las composiciones de cidos grasos no reflejan la composicin de cidos grasos de la comida, especialmente 8-10 h despus de la comida cuando las concentraciones de CM en la linfa y el plasma son mximas.

2.3 Organizacin lipdica

La superficie de todas las lipoprotenas consiste en una monocapa lipdica que contiene todos los fosfolpidos, y alrededor de 2/3 de todo el colesterol no esterificado, adems de las apolipoprotenas correspondientes.

Las propiedades dinmicas de las monocapas de lpidos dependen en gran medida de la naturaleza de los lpidos constituyentes. Por ejemplo, los lpidos de la superficie de LDL son ms condensada y rgidas que las de HDL debido a la presencia de cidos grasos ms saturados en los fosfolpidos de LDL, una relacin de esfingomielina a PC superior, y una mayor proporcin de colesterol no esterificado - a - fosfolpido en el colesterol LDL (M.C. Phillips, 1989). La monocapa superficie de VLDL es incluso ms fluida que el de HDL debido a las diferencias en los lpidos monocapa. Las apolipoprotenas ejercen poco o ningn efecto sobre las propiedades dinmicas medias de los lpidos de la superficie, especialmente en LDL y VLDL. De hecho, los lpidos de la superficie aislados, reconstituida en vesculas o microemulsiones , tener fluidez similares, velocidades de difusin, y la movilidad como los componentes de una sola capa de lpidos de las lipoprotenas intactos. Los lpidos de ncleo (triglicridos y steres de colesterol) particin mal en la monocapa lipdica superficie, que representa aproximadamente el 3 y 1 % en moles, respectivamente, de los lpidos de la superficie. En condiciones fisiolgicas, el interior de las lipoprotenas es una gota esfrica de fluido de los lpidos neutros, incluidas las pequeas cantidades de colesterol no esterificado disuelto (aproximadamente 1/3 del total) y otras molculas lipfilas. En HDL y VLDL, los lpidos centrales no parecen ser organizado debido al pequeo volumen disponible en el HDL, y debido al alto contenido de triglicridos en VLDL fluido. Sin embargo, el ncleo de las partculas de LDL se sabe que tiene los steres de colesterol organizadas en dos capas concntricas interdigitados que pueden sufrir transiciones de fase de cooperacin a temperaturas entre 19-32 C. Esta organizacin es ptimo a una relacin de ster/triacilglicerol colesterilo especfica de 7/1 , donde est presente en el centro de una fase fluida separada de triacilglicerol. En diferentes proporciones de lpidos centrales existe la mezcla de los lpidos neutros. Las transiciones de fase en los lpidos de ncleo de LDL aparentemente resultan en cambios en las estructuras secundarias de la apolipoprotena B100 en la superficie. Esto indica algunos de acoplamiento de las regiones hidrfobas de la apolipoprotena con lpidos neutros adyacentes.

Apolipoprotenas

3.1 Clases y propiedades generals

Las apolipoprotenas que se encuentran en el plasma se clasifican en dos tipos generales: las apolipoprotenas no intercambiable y el intercambiable (o soluble). B100 apolipoprotena (apo B100) y la apo B48, los principales componentes de la protena de LDL, VLDL, Lp (a ) y CM son apolipoprotenas no intercambiables. Son protenas muy grandes e insolubles en agua que se ensamblan con los lpidos en su sitio de sntesis en el retculo endoplasmtico de las clulas del hgado o intestinal. Estas apolipoprotenas no intercambiables circulan enlazados a la misma partcula de lipoprotena a travs de varias transformaciones metablicas en el plasma, hasta que se borran, como lipoprotenas, a travs de receptores especficos. En contraste, las apolipoprotenas intercambiables (por ejemplo, apo A1, A2 apo, apo Cs, apoE) tienen masas moleculares mucho ms pequeas que la apo B100 o apo B48, son ms o menos solubles en agua en sus estados deslipidada, puede transferir entre las partculas de lipoprotenas, y se puede adquirir, mientras que los lpidos en la circulacin (vase la Tabla 3). La funcin comn de todas las apolipoprotenas es para ayudar a solubilizar los lpidos neutros en la circulacin. Los polipoproteins se unen fcilmente a fosfolpido/interfaces de agua y, en condiciones apropiadas, pueden formarse espontneamente partculas discretas con fosfolpidos. In vivo, el montaje de apolipoprotenas con lpidos a lipoprotenas de formulario puede requerir la asistencia de las protenas celulares, como la protena de transferencia de lpidos microsomal o el transportador ABC1.

Tabla 3 Lipoprotenas importantes en el hombre Apolipoprotena (a*) Peso molecular (b*) Tipo de lipoprotena (c*) Concentracin en plasma (mg/dl) Apo A1 28,100 HDL, CM 130 Apo A2 (d*) 17,400 HDL 40 Apo A4 (e*) 44,500 CM 15 Apo(a) (f*) 3 - 8 x 10^5 Lp(a) 0.1 - 40 Apo B100 (g*) 512,000 LDL, VLDL 250 Apo B48 (g*) 242,000 CM Apo C1 6,600 VLDL, CM, HDL 3 Apo C2 9,000 VLDL, CM, HDL 12 Apo C3 9,000 VLDL, CM, HDL 12 Apo D (h*) 22,000 HDL 12 Apo E (i*) 34,200 VLDL, CM, HDL 7
a

Otros apolipoprotenas, menores aislados de lipoprotenas / fracciones ein incluyen apo C, apo H, apo J, apo L, y apo M. Ellos estn presentes en el plasma en concentraciones bajas y no tienen funciones bien definidas en el metabolismo de las lipoprotenas.
b c

Pesos moleculares de polipptidos no incluyen las contribuciones de carbohidratos.

En negrita son las clases de lipoprotenas que contienen la mayor proporcin de la apolipoprotena, en cursiva son las clases de lipoprotenas secundarios.
d e f

Humano de apo A2 es un dmero unido por puentes disulfuro de dos monmeros idnticos de 8,7 kDa; otra apo mamferos A2s son monomricos. Apo A4 es una glicoprotena que se encuentra en los ganglios CM y es en su mayora (90 %) de lpidos - libres en el plasma. Existe en varios estados polimrficos. La apo (a) es una protena altamente polimrficas, que contiene un nmero variable de unidades estructurales kringle y glicanos cadenas. Homloga a la del plasmingeno, la apo (a) se une a la apo B100 de las LDL por un enlace disulfuro formador de la Lp (a).
g

Apo B48 contiene 48 % de la secuencia N-terminal de la apo B100. Ambos son glicoprotenas. Apo B48 est presente en cantidades variables en funcin de la alimentacin de la concentracin en estado y CM.
h i

Apo D pertenece a la familia de protenas de la lipocalina , puede obligar a la progesterona , pero su papel en la lipoprotena metabolismo es desconocido . Apo E est glicosilada y se compone de tres formas polimrficas (apo E2, E3, y E4).

ntimamente relacionada con su capacidad para unirse fosfolpidos, y para solubilizar los lpidos neutros dentro de las partculas de lipoprotenas, las apolipoprotenas tienen la capacidad de cambiar la conformacin de ajustar a los cambios de contenido de lpidos, composiciones, y los estados metablicos de las lipoprotenas. En apo A1, las regiones estructurales adaptables han sido llamadas los dominios mviles o bisagra. Dominios anlogos probables que existen en otras apolipoprotenas, como reconocimiento del eptopo por anticuerpos y la exposicin al cambio digestin proteoltica con el cambio de contenido de lpidos y composiciones de diversas lipoprotenas especficas. Varias de las apolipoprotenas intercambiables en sus respectivas lipoprotenas son conocidas para activar o inhibir las enzimas plasmticas. Apo A1, y en menor medida apo E, apoa4, y apo C 1, activar la LCAT, apo C2 activa la lipoprotena lipasa, y la apo C3 y APOA2 puede actuar como inhibidores de la lipasa heptica. Las apolipoprotenas tambin tienen un papel en el reconocimiento del receptor. La mejor interaccin caracterizada es el reconocimiento del receptor de LDL por la apo B100 y apo - E - que

contienen lipoprotenas. Recientemente, un receptor de HDL (SR - BI) se ha descrito que se une diversas apolipoprotenas, incluyendo la apo A1 y apo A2. Adems de las funciones conocidas de apolipoprotenas en unin de lpidos y la solubilizacin, la modulacin de las actividades enzimticas, y el reconocimiento del receptor, otras funciones se han descrito para apolipoprotenas, Por ejemplo, la apoE se ha implicado en la reparacin y la regeneracin del nervio in situ, as como en la formacin de placa en la enfermedad de Alzheimer. La apo (a ) puede tener una funcin en el proceso de coagulacin, mientras que la apo A4, producida en el intestino y el hipotlamo, puede tener un papel en la sealizacin de la saciedad en el estado alimentado. Evidentemente, las mltiples funciones de apolipoprotenas se determinan por sus estructuras nicas, modulares codificadas por familias de genes.

3.2 Organizacin gnica

Las estructuras de genes de las principales apolipoprotenas intercambiables son muy similares entre s, mientras que el gen de apo B es distinto, como son las estructuras de genes de apo (a) y Apo D. La mayora de los genes de las apolipoprotenas intercambiables contiene cuatro exones y tres intrones, con lugares similares de intrn/exn lmites, y el intrn y el exn longitudes similares para los tres primeros exones (vase la fig. 2). Las diferencias en la longitud total del ARNm se deben a las diferencias en la longitud del cuarto exn. Los ARNm abarcan una regin 5 'no traducida, una regin que codifica la secuencia seal, una pro - segmento corto, la secuencia madura de la protena, y una regin 3' no traducida. Los exones 3 y 4 de los genes que codifican toda la secuencia madura. Para el gen de la apo A4, la nica diferencia con respecto a los otros genes de apolipoprotenas intercambiables es la ausencia del primer exn y el intrn en la regin 5 'no traducida. Las homologas en las secuencias de genes y protenas de las apolipoprotenas intercambiables indican que estos genes han evolucionado por duplicacin gnica de un gen primordial que se asemeja el gen de la apo C1.

Figura 2. Organizacin de los genes de las apolipoprotenas intercambiables. Las cajas representan los exones unidos por intrones (lneas discontinuas). Las porciones abiertas de las cajas corresponden a las regiones 5'-y 3'-no traducida, las partes rayadas son las regiones de pptidos de seal, y las partes llenas representan las regiones, que codifican las secuencias de protenas maduras. Las porciones estrechas abiertas en el exn 3 de la apo AI y apo A2 genes representan a sus pro-segmentos. Los nmeros por encima de los exones indican el nmero de nucletidos en cada exn.

En contraste con los genes de las apolipoprotenas intercambiables, el gen de la apo B es corto con respecto a la longitud de sus 29 exones. Tambin es bastante asimtrica: 19 intrones se concentran dentro de los primeros codones de 1000, y dos exones muy largos (exones 26 y 29) se producen en el T - tercio de la secuencia del gen. No se encontr homologa entre el gen de apo B y otros genes conocidos. Codifica una de las ms largas cadenas de polipptidos conocidos que contienen 4536 residuos de aminocidos. Apo B48 es codificada por el mismo gen que la apo B100, pero el ARNm es editada por una enzima especfica en el intestino humano. La enzima cambios de codn 2153 de una Gln a un codn de parada, lo que resulta en la produccin de la apo B48, una protena de 242 kDa, que carecen de la regin de unin al receptor de LDL de la apo B100 (D. Driscoll, 1990).

3.3 Secuencias primarias

Las apolipoprotenas intercambiables, adems de tener los genes similares, tienen secuencias de aminocidos primarias similares. Sus secuencias contienen 11 y 22 aminocidos repeticiones homlogas, este ltimo consta de dos 11-mer, como se muestra en la figura 3. Los ltimos 33 aminocidos codificados por el exn 3 se pueden alinear en tres 11reef, mientras que las secuencias codificadas por el exn 4 ajuste, en general, en segmentos de 22-mer que a menudo comienzan con una Pro (J.I. Gordon, 1986). El significado de estas secuencias repetidas es que se prev que la forma hlices anfipticas. Estas hlices en apolipoprotenas y pptidos sintticos se han demostrado experimentalmente para unirse a superficies de fosfolpidos y para ser eficaz en la solubilizacin de los lpidos. Por lo tanto, los 22 aminocidos se repiten en la organizacin del -helicoidal son las unidades

Figura 3. Las secuencias de aminocidos de las apolipoprotenas humanos dispuestos en 11-mer y 22-mer repeticiones. (A) Los ltimos 33 aminocidos codificados por el exn 3 se dividen en tres (A, B, C) 11-mer repite. (B) Las secuencias codificadas por el exn 4 contienen 22-mer repite cada uno compuesto de dos 11-meros (A y B), y algunos 11-mer repite. Si hay 10 o ms aminocidos en la misma columna con propiedades fsicas

equivalentes (es decir, hidrfobo, bsica, cida), que estn en caja. Nmeros al principio y al final de una secuencia dan las ubicaciones de aminocidos en la apolipoprotena madura.

de lpidos vinculantes de las apolipoprotenas intercambiables. Por otra parte, se repite especficos en las secuencias codificadas por el exn 4 tienen otros papeles funcionales tales como la activacin de la LCAT por la 143 a 165 repeticin de la apo A1, LDL de unin al receptor por la regin 136-150 de la apo E, y las lipoprotenas de activacin de la lipasa por los residuos 44-79 de la apo C2. Por el contrario, la secuencia de apo B 100 contiene muchas secuencias repetidas internas que llevan poco parecido con las secuencias de las apolipoprotenas intercambiables. Hay Pro repeticiones ricas en nicos, de 25 y 52 residuos que contienen una alta proporcin de aminocidos hidrofbicos. Estas regiones podran estar en contacto con los lpidos de ncleo en LDL y VLDL. Otras caractersticas de la secuencia de apo B 100 incluyen 25 residuos de cistena (16 en enlaces disulfuro), al menos 4 regiones de unin a beparin, y 19 sitios de glicosilacin potenciales (16 de los cuales estn ocupados por cadenas de glicano, contribuyendo aproximadamente el 9% de la masa molecular de apo B 100). La mayora de los enlaces disulfuro y residuos Cys libres de racimo en la regin amino - terminal de la apolipoprotena. El dominio de unin al receptor de la apo B100, entre los residuos 3353 y 3371, tiene cierta homologa con la regin de unin al receptor correspondiente de la apo E. La apo (a) es una glicoprotena distinta, altamente polimrficos que se une covalentemente a la apo B100 de las LDL por un enlace disulfuro, para formar la Lp (a). La apo (a) es homloga a la del plasmingeno, que contiene tipos variables y nmeros de secuencias de kringle. Cada repeticin kringle contiene alrededor de 80 amino cidos y tres puentes disulfuro internos. Mientras que la apo (a) tiene secuencias homlogas a los que forman el plasmingeno cataltica, sitio de proteasa de serina, la secuencia de pptido correspondiente al sitio de escisin se requiere para la activacin de plasmingeno est modificado en la apo (a), de modo que la actividad de la proteasa serina no se expresa. De hecho, la funcin de la apo (a) en el plasma no se conoce en el 30 % de la poblacin que expresa esta apolipoprotena en niveles significativos (A.M. Scanu, 1988).

3.4 Estructuras secundarias

Las apolipoprotenas intercambiables, carentes de lpidos, tienen cantidades sustanciales de la estructura -helicoidal en soluciones acuosas fisiolgicas y su contenido en -hlice aumenta de forma significativa tras la unin de lpidos. Por ejemplo, apo A1 es de aproximadamente 50 % helicoidal en el estado libre de lpidos, y se convierte en 60-85 % helicoidal cuando se unen a lpidos, medidos por espectroscopia de dicrosmo circular. Varios algoritmos han predicho la existencia de segmentos de -hlices anfipticas, que coincide bastante bien con los 22-mer repeticiones de las apolipoprotenas intercambiables. Las estructuras helicoidales predichas tienen una cara no polar, y una cara polar ms grande. Dependiendo de la distribucin relativa de los residuos cargados en la cara polar, las hlices anfipticas de las apolipoprotenas intercambiables se dividen en tres clases: A, G hlices * , e Y. En las hlices de tipo A (vase la fig. 4) los residuos bsicos se encuentran en el lmite entre las caras hlice polares y no polares. Las cadenas hidrfobas de los aminocidos bsicos, de hecho, contribuyen a la hidrofobicidad de la cara no polar de la hlice. Los residuos cidos, por otra parte, se encuentran a lo largo de la cresta media de la cara polar y estn totalmente

Figura 4. Tipo-A hlice anfiptica correspondiente a los residuos 7-24 de la apo C1. (Izquierda) la representacin de la rueda helicoidal con el eje c ~-hlice en el centro de la rueda y aminocidos consecutivos en 100 el uno del otro. Los residuos no polares son en la parte superior de la rueda, se producen residuos bsicos en la interfaz entre las partes no polares y polares de la hlice, y residuos de carga negativa aparecen en el centro de la cara polar (en la parte inferior de la rueda). (Derecha) La hlice se representa como un corte del cilindro aplanado a lo largo del centro de la cara polar.

expuestos al solvente. Tales hlices A en pptidos sintticos diseados especficamente se unen eficazmente a los fosfolpidos y lipoprotenas, lpidos y solubilizan fcilmente. Las hlices de tipo A son de hecho las unidades de lpidos vinculante fundamentales de apolipoprotenas. Dos 22 aminocidos sintticos de hlices en tndem, unidos por un profesional, son an ms eficaces en los lpidos vinculante, lo que sugiere cooperatividad entre hlice. Las hlices G * son hlices anfipticas que tpicamente se encuentran en las protenas globulares. Sus residuos bsicos y cidos estn distribuidos al azar en la cara polar de la hlice. Las hlices G * por lo general participan en las interacciones protena-protena en lugar de las interacciones protena-lpido. G hlices de tipo * se encuentran principalmente en las regiones N terminales de apolipoprotenas intercambiables, que abarca el 11-mer repite codificada por el exn 3. Las hlices anfipticas del tipo Y presentan alternancia de grupos de residuos bsicos y cidos en la cara polar. Su distincin de las hlices de tipo A en trminos de unin a lpidos no est claro, en forma de pptidos sintticos que representan A- y Y- tipos de segmentos helicoidales de apo A1 tienen propiedades de unin a lpidos comparables. Debido al gran tamao y la insolubilidad en agua de la apo B100, mediciones de estructura secundaria se han realizado sobre las partculas de LDL intactas y fragmentos proteolticos solubilizados en los detergentes o vuelto a montar con los lpidos. Inform contenidos -hlice en el rango de LDL 20-43 %, y para la estructura 1312 a 41 %, segn lo determinado por dicrosmo circular y mediciones espectroscpicas infrarrojas. El anlisis informtico de la secuencia de apo

B100 sugiere la presencia de cinco regiones de estructuras secundarias agrupadas: (1) secuencia de un N- terminal que contiene hlices de tipo G (residuos 58 a 476); seguido de (2), un anfiptico - regin de hebra (residuos 827 a 1961) ; (3) una regin con -hlices se asemeja a - hlices anfipticas de tipo Y e incluyendo otros tipos de hlices (residuos 2103 a 2560) ; (4) una segunda regin -banda (residuos 2611-3867), y (5) un C-terminal, tercera regin de anfiptico -hlices (residuos desde 4061 hasta 4338). La regin N-terminal de la apo B 100, que contiene las hlices-G y altos contenidos de Cys, se compone de uno o ms dominios globulares (residuos 22-303 y 512721) que estn involucrados en las interacciones con la protena de transferencia de triglicridos microsomal, una protena necesaria para el montaje de incipiente apo B100 con los lpidos. Las regiones C-terminal del centro y de la -hlices pueden estar involucrados en lpidos reversible vinculante por apo B 100, y las regiones -captulo podrn participar en las interacciones con los lpidos irreversibles, posiblemente con los lpidos esenciales.

3.5 Estructura tridimensional en solucin

Aunque la mayora de las funciones conocidas de apolipoprotenas se asocian con sus estados lipoligados, existen apolipoprotenas intercambiables de lpidos libres o pobre en lpidos en el plasma y el lquido intersticial, y tienen importantes funciones metablicas en la absorcin de lpidos de las clulas, las transferencias entre las lipoprotenas, la remodelacin estructural de, lipoprotenas y apolipoprotena catabolismo. Fragmentos de dos apolipoprotenas, apo E (22 fragmento N-terminal kDa) y la apo A1 (fragmento C- terminal de falta 43 N-terminal de los residuos de aminocidos) se han cristalizado y sus estructuras determinado por mtodos de rayos X (Fig. 5). La estructura de apo E (Fig. 5A) se compone de un haz de cuatro hlices alargado (65 ) y una hlice corta la conexin. La estructura se estabiliza mediante interacciones hidrfobas, puentes de sal, y las interacciones de cremallera de leucina. La regin de unin al receptor contiene un agrupamiento de restos bsicos en la superficie de una hlice larga. Esta estructura confirma la importancia de las -hlices anfipticas

Figura 5. (A) la cinta de estructura de rayos X de la apo E 22 kDa fragmento Nterminal, que muestra el haz alargado 4-hlice de la protena de monmero libre de lpidos [15]. La regin de unin al receptor de LDL es en caja. (B) la estructura de rayos X de un tetrmero de fragmento de la apo AI que carece de los aminocidos N-terminales 43.

como un motivo estructural fundamental de apolipoprotenas, incluso en el estado libre de lpidos. De hecho, los cuatro hlices principales contienen 19, 28, 36, y 35 aminocidos y abarcan varios de la prediccin de 11 - mer y 22 - mer repetidos. Las dos primeras hlices y su conexin de hlice corta consisten en los tres 11 - mer repite codificados por el exn 3, ms la primera repeticin de 22 - mer del exn 4, mientras que los dos ltimos hlices se componen cada uno de dos 22 - mer se repite. Sin embargo, tan importante como esta estructura parcial de la apo E es para nuestra comprensin de la apolipoprotena plegado en solucin, no representa con precisin la configuracin de la regin de unin al receptor debido a la forma libre de lpidos de este fragmento de apo E se une al receptor de LDL con muy poca afinidad. Slo en forma lipidada no apo E adoptar la estructura correcta para la unin al receptor de alta afinidad. Se plante la hiptesis de que cuando la apo E se une a las superficies de lpidos del haz de cuatro hlices se abre en una regin de bisagra para exponer las caras hidrfobas de las hlices al lpido. Adems, el fragmento de 10 kDa C-terminal, que falta de la estructura cristalina, es un dominio de unin a lpidos importante de la apo E, pero su contribucin a la estructura intacta de la apo E no se conoce. Un fragmento de apo A1 carecen de 43 aminocidos del extremo N-terminal ha sido cristalizado en 2 o 3 conformaciones distintas. El mejor estudiado es un tetrmero donde cada cadena polipeptdica monomrica forma continua anfiptico -hlices que curva en forma de herradura con un dimetro de aproximadamente 100 . Los monmeros estn organizados en pares de dmeros de la superposicin de secuencias antiparalelas que dan una estructura circular cerrado, distorsionada (Fig. 5B). Esta estructura muestra una vez ms la importancia de la hlices anfipticas, muestra que pueden formar estructuras continuas largas , y propone modelos para la interaccin con los lpidos, sin embargo, no est de acuerdo con las caractersticas hidrodinmicas y espectroscpicas conocidas de monmeros Apo A1 lpidos libres bajo fisiolgica condiciones. La mejor informacin actual de la apo A1 intacta monomrica en la solucin indica que tiene una estructura alargada y ms bien rgida (125 x 25 A) alrededor de dos hlices de espesor. La Nterminal de los residuos de Trp agruparse cerca de uno al otro , y el compacto y estructurado N - y C - terminal de las regiones de la protena estn dentro de 35 uno de otro (A. Jonas , 2002). De hecho, una de las formas cristalizadas de el fragmento de Apo A1 sugiere una protena monomrica en un pliegue horquilla de hlices extendidas, que es bastante compatible con el pliegue de la propuesta monomrica apo A1 intacta. Las estructuras tridimensionales de dos apolipoprotenas en insectos, apolipoforina-III de la langosta y la polilla esfinge, han sido resueltos por medio de rayos X y los mtodos de RMN (M. A. Wells, 1991; RO Ryan, 1997). Ambas de estas protenas se unen reversiblemente a las

lipoprotenas de insectos (lipoforina) superficies y sufren cambios estructurales dramticos en el proceso. Las estructuras de los apolipophorins insecto, similar a la del fragmento de apo E, se componen de haces de hlice alargadas de 5 hlices anfipticas (Fig. 6). Es importante tener en cuenta que las apolipoprotenas intercambiables tienen una extraordinaria capacidad de adaptacin estructural en respuesta a condiciones de la solucin o para diferentes entornos de lpidos. En la solucin, condiciones de alta salinidad, cambios de pH, o la inclusin de disolventes orgnicos pueden conducir a estados estructurales distintas, con anormalmente altos o hlice contenidos y grados especficos de oligomerizacin, como se ve por el tetrmero cristalizado de apo A1.

Figura 6. Diagramas de cinta de la estructura de la polilla apolipophorin III: (a) la configuracin de hlice paquete determinado por anlisis de rayos X de la protena libre de lpidos, (B) propuso configuracin "abierta" del apolipophorin ya que se une a la superficie de la lipoprotenas de insectos. Las hlices estn numeradas del 1 al 5, comenzando en el extremo N-terminal (DR Breiter, 1991).

En condiciones fisiolgicas, la transformacin de un lpido libre a un estado unidos a lpidos implica a menudo un marcado aumento en el contenido de -hlice, y la transferencia de residuos de aminocidos hidrofbicos a partir de un entorno de protena enterrado a un entorno de lpidos. En los estados unidos a lpidos, los cambios en el contenido y la composicin de los lpidos fosfolpidos de superficie, colesterol o lpidos esenciales - pueden inducir cambios estructurales en las apolipoprotenas. Adems, la unin de otras apolipoprotenas a la superficie de la lipoprotena puede afectar a la conformacin de las apolipoprotenas residentes. Por lo tanto, existen potencialmente muchos estados conformacionales diferentes accesibles a cada intercambiable

apolipoprotena. Este es probablemente el caso tambin de los lpidos con destino apo B 100 y apo B48.

Complejos apoliprotenas lpidos

4.1 Unin de apolipoprotenas a las superficies fosfolipdicas

Interacciones de apolipoprotenas con fosfolpidos son esenciales para el ensamblaje de las lipoprotenas, la estabilizacin de las estructuras de las lipoprotenas , y la expresin y la modulacin de las funciones de apolipoprotena. Los principales enfoques experimentales para el estudio de las interacciones apolipoprotena con fosfolpidos han utilizado aislado, apolipoprotenas intercambiables en conjuncin con los lpidos agregados dispersados en agua o se extienden en la interfase aire/agua. Los estados agregados de lpidos incluyen monocapas de lpidos, diversos tipos de liposomas (vesculas pequeas unilamelares, grandes vesculas unilamelares, vesculas multilamelares), y emulsiones. Todos estos sistemas lipdicos consisten o contienen fosfolpidos, especialmente fosfatidilcolinas. Apolipoprotenas unen o absorben fcilmente a las superficies de fosfolpidos. Para superficies de fluido de PC de huevo, en forma de emulsin o de vesculas, las afinidades de unin (kDa) para apolipoprotenas intercambiables van 0,2-9 M, dependiendo de la apolipoprotena, la presencia o ausencia de colesterol en la superficie, y la curvatura de la superficie. ApoA4 tiene la menor afinidad para superficies de PC de huevo, de acuerdo con la observacin de que la mayor parte de la A4 apo en el plasma es libre de lpidos. Las otras apolipoprotenas intercambiables tienen afinidades comparables entre s, y estequiometras calculados similares de aminocidos unidos por PC, con un promedio 0,70 0,35. El por ciento de la superficie de fosfolpido ocupado por las apolipoprotenas, en la saturacin, es en el intervalo de 8 a 12%. En la ausencia de colesterol, lo que corresponde a la compresin mxima de la superficie de PC, necesario para acomodar las hlices anfipticas de las apolipoprotenas. El colesterol aadido a la superficie inicialmente aumenta el rea superficial disponible para la unin de la apolipoprotena, pero luego disminuye a mayores contenidos de colesterol (por ejemplo, 30 % en moles). Los tipos de interaccin con superficies de fosfolpidos son ms altos para las apolipoprotenas de bajo peso molecular o anlogos peptdicos que son monmeros y se desarrollaron. Sin embargo, tras la unin a superficies de fosfolpidos mayora de apolipoprotenas y pptidos se vuelven altamente - helicoidal. De hecho, la formacin de la hlice explica en gran medida la entalpa negativa de la unin. En la superficie de fosfolpido, las hlices anfipticas se encuentran con sus ejes paralelos a la superficie. Los residuos polares y cargados de la A-hlices estn en el nivel de los grupos de cabeza polar de los fosfolpidos, pero no parecen interactuar electrostticamente con ellos. La prevalencia y la importancia de las interacciones hlice- a -hlice intra o intermoleculares an no se han dilucidado. Desorcin de apolipoprotenas intercambiables de las superficies de fosfolpidos se produce en dos pasos: despliegue y la prdida de la estructura - helicoidal, seguido por una etapa de desorcin lenta cuya tasa depende de la longitud de la apolipoprotena y su constante de afinidad para la superficie. En general, las apolipoprotenas ms pequeas de peso molecular desorber ms rpidamente y el intercambio entre las superficies de fosfolpidos ms fcilmente que las apolipoprotenas ms grandes.

Una excepcin es la apo A2, que tiene una mayor afinidad para PC de la apo A1, y se puede desplazar a la apo A1 de las superficies de PC modelo y de lipoprotenas primarias. Como ya se ha sealado, sin lpidos apo B100 y Apo B48 no son solubles en agua, por lo tanto, su investigacin se ha limitado a las protenas solubilizadas con detergente o reconstituida con lpidos seleccionados. Las propiedades de las partculas de lipoprotenas de como reconstituidas con los lpidos definidos se describen en la siguiente seccin.

4.2 Complejos lipoproteno semejantes

Aunque liposomas de fosfolpidos son favorecidos sistemas para el estudio de la apolipoprotena unin a superficies de fosfolpidos, complejos de vesculas apolipoprotena no son modelos ideales para las lipoprotenas. Las vesculas tienen un compartimento de agua interior no presente en las lipoprotenas, son incapaces de solubilizar grandes cantidades de lpidos neutros dentro de la bicapa de fosfolpidos, y son demasiado grandes para imitar la curvatura de la superficie de las HDL. Por lo tanto, se han desarrollado mtodos para preparar pequeas, complejos micelares de apolipoprotenas intercambiables (en particular, apo A1) con los lpidos que imitan HDL discoidales y esfricas en forma, composicin, y propiedades funcionales. Por LDL y VLDL, microemulsiones y emulsiones de lpidos de dimetro y composicin seleccionada, con adicin de apo B 100, hacer buenos modelos de las lipoprotenas nativas. Se conocen varios mtodos para la reconstitucin de los complejos de HDL semejantes de componentes puros: (1) formacin espontnea de discos de HDL de liposomas dimiristoilfosfatidilcolina; (2) detergente mediada por la reconstitucin de los discos de HDL con diversos fosfolpidos, y (3) co-tratamiento con ultrasonidos de apolipoprotenas y los lpidos para formar cualquiera de los anlogos de HDL discoidales o esfrica. Liposomas de dimiristoil-PC pueden unirse reversiblemente apolipoprotenas, como se describe en la seccin anterior, sin embargo, a la temperatura de transicin (Tm) del lpido (24 C) y en suficientemente altas proporciones de apolipoprotena a dimiristoil-PC (1/3 o mayor, peso/peso), las apolipoprotenas pueden lisar los liposomas para dar lugar a pequeos discos anlogos a HDL originario. La tasa de la interrupcin y la solubilizacin de liposomas depende de la temperatura de la reaccin. Es ms elevada en el inicio de la transicin de fase principal de dimiristoil-PC y disminuye mil veces a cada lado de la lata. Mientras que la misma reaccin se produce con liposomas dipalmitoil - PC en la Tm de 41 C, la velocidad es mucho ms lenta que para dimiristoil - PC. Para los de cadena larga, PC insaturado, tal como palmitoyloleoyl - PC, las velocidades de reaccin son demasiado lentos para ser medido a temperaturas accesibles. Por lo tanto, para los propsitos prcticos, en condiciones ordinarias, slo dimiristoil - PC se puede utilizar con eficacia para discos de HDL reconstituir por este mtodo. En este sistema, las apolipoprotenas ms pequeos y los anlogos peptdicos interrumpen liposomas dimiristoil - PC a tasas ms altas que las apolipoprotenas ms grandes. As, en algunas circunstancias imitadores de pptidos sintticos de hlices anfipticas de tipo A pueden lisar PC incluso huevo o vesculas palmitoyloleoyl - PC.

El mecanismo de la interrupcin de los liposomas dimiristoil - PC en las partculas de HDL reconstituidas discoidales requiere la unin de la apolipoprotena a la superficie del liposoma, seguido de las interacciones protena-protena que conducen a la penetracin de la bicapa de la apolipoprotena, y la ruptura del liposoma en discos de doble capa. Los discos estn rodeados y se estabilizan en la periferia por las hlices anfipticas de las apolipoprotenas. Un mtodo ms universal para la produccin de partculas de HDL reconstituidas discoidales utiliza detergente (por lo general colato de sodio) para solubilizar el fosfolpido en micelas mixtas, seguido de la adicin de apolipoprotena intercambiable y la eliminacin del detergente por dilisis o cromatografa en columna. Dependiendo de las proporciones de PC a la apolipoprotena, en el intervalo de 1/1 a 4/1 (peso/peso), HDL reconstituido discos de dimetros diferentes que contienen diferentes nmeros de molculas de apolipoprotena con variadas conformaciones pueden ser producidos. El colesterol (hasta 15 % en moles) o pequeas cantidades de otros lpidos se pueden incorporar fcilmente durante la etapa de solubilizacin de lpidos. El tercer mtodo para la fabricacin de partculas de HDL semejantes es extensa cotratamiento con ultrasonidos de apolipoprotenas con fosfolpidos, en la ausencia o presencia de lpidos neutros. Por lo general, los componentes se mezclan en las proporciones que se encuentran en HDL nativo y producir anlogos de discoidales de HDL esfrica o en funcin de la ausencia o presencia de lpidos neutros. Mientras que la capacidad de sintetizar las partculas de HDL reconstituidas esfricas por este mtodo es muy atractivo, la homogeneidad de partculas de control y el rendimiento es difcil. Para producir modelos de LDL, VLDL y CM, mezclas de lpidos de PC y un lpido neutro se sometieron a ultrasonidos primero para dar partculas de la emulsin de metaestables el tamao general de las lipoprotenas deseadas, y luego se aade el componente de apo B a partir de una dispersin detergente, o apolipoprotenas intercambiables se agregan en solucin. Las ventajas de las lipoprotenas reconstituidas ms de las lipoprotenas nativas son que las partculas de modelo se pueden hacer con una sola apolipoprotena y uno o unos pocos componentes lipdicos definidos para estudiar cada componente individualmente. Adems, las partculas de tamao uniforme se pueden aislar en el anlisis estructural de alta resolucin es potencialmente posible. Tambin las lipoprotenas reconstituidas se prestan para el estudio de las relaciones estructurafuncin. De hecho, las lipoprotenas reconstituidas muestran todas las funciones conocidas adscritas a las lipoprotenas nativas, incluyendo la activacin de enzimas, la unin al receptor, y la captacin y la transferencia de lpidos.

4.3 HDL Reconstitudo

El mejor estudiado de HDL reconstituido son las partculas discoidales que contienen apo A1 y un solo tipo de PC, con o sin pequeas cantidades aadidas (< 20 % en moles) de otros fosfolpidos o colesterol. La forma discoidal de las partculas ha sido confirmada por microscopa electrnica de tincin negativa, dispersin de rayos X de ngulo pequeo, y mtodos de microscopa de fuerza atmica. Todos los mtodos indican un espesor del disco de 45-55 A, que

corresponde al espesor de bicapa de fosfolpidos, y dimetros que van desde 70 hasta 180 A. La transicin de fase principal de la PC se conserva en las partculas, pero Tm se desplaza alrededor de 3 C a temperaturas ms altas, lo que indica un mayor orden y la restriccin de la PC en las partculas que en liposomas correspondientes. Analizado por desnaturalizacin no electroforesis en gel de gradiente de las partculas presentan dimetros discretos y distribuciones de tamaos que varan dependiendo de la PC inicial / ratios de Apo A1 de las preparaciones. Partculas aisladas de un tamao especfico tienen propiedades fsicas y funcionales reproducibles, caractersticos. Por ejemplo, algunas partculas que contienen palmitoyloleoyl -PC (78 y 109 ) son sustratos pobres para la LCAT, mientras que otros, en particular la 96 A las partculas, son los ms conocidos LCAT sustratos (A. Jonas, 1989).

Figura 7. Diagramas de la disposicin propuesta de dos molculas de apo Al (residuos 44-243) en la periferia de una partcula de HDL discoidal reconstituido (MA Tricerri, 2001). N, denota el extremo N-terminal y C, el C-terminal de cada molcula de protena. (A) modelo "Picket-fence" en disposicin de cabeza a cola. (B) "Picket-fence" en una disposicin de cabeza a cabeza. (C) El modelo Cinturn. (D) veces 'Horquilla' en una disposicin de cabeza a cola. (E) 'Hair-pin' veces en una disposicin de cabeza a cabeza.

Adems, hay evidencia de diferentes afinidades de unin de las partculas para receptores SRBI (D. R. Van der Westhuyzen, 2001). As, las subclases de HDL reconstituido, con diferentes contenidos de lpidos, tienen diferentes conformaciones apolipoprotena que dan lugar a propiedades funcionales drsticamente alterados. In vivo, esta adaptabilidad conformacional de apolipoprotenas probablemente conduce a la conmutacin metablica para las diversas funciones de las subclases de HDL. Apo A1 conformacin tambin est regulada por la saturacin o insaturacin de las cadenas de acilo de PC y por un alto contenido de colesterol (> 15 % en moles) o PC poliinsaturados. Otras apolipoprotenas intercambiables (apo A2, apo E, apo A4) tambin

forman HDL discoidal reconstituido con dimetros que corresponden ms o menos a su contenido de -hlices anfipticas y pesos moleculares. HDL esfrica reconstituido se puede hacer por la co-tratamiento con ultrasonidos de los componentes seleccionados de HDL (por ejemplo, apo A1, PC, ster de colesterol) o por reaccin ampliamente HDL discoidal reconstituido con la LCAT en presencia de una fuente exgena de colesterol. Los productos son esferoidal y contienen 2, 3, o 4 molculas de Apo A1 por partcula, PC, colesterol, y un ncleo de steres de colesterol. Los dimetros de las partculas varan de 80 a 120 A. Aunque no se ha estudiado, la conformacin de la apo A1 aparece distinta de la de las partculas discoidales y variables en funcin del dimetro de partcula (A. Jonas, 1990). En HDL discoidal reconstituido, las apolipoprotenas forman una capa protectora, una hlice de espesor, alrededor de la periferia de los discos. De acuerdo a las pruebas y los modelos experimentales actuales (Segrest, 1999; Jonas, 2001), los ejes de hlice son predominantemente perpendicular a las cadenas de acilo de la bicapa de PC (vase la figura 7C, D.). Los modelos anteriores, sin embargo, orientada a las repeticiones helicoidales casi paralelas a las cadenas de acilo, con los segmentos helicoidales antiparalelos unidos por - giros cerrados (Fig. 7A , B) (Rosseneu, 1990; Schulten, 1997). La organizacin espacial de las hlices anfipticas en HDL reconstituido esfrica no se conoce o no se ha modelado.

4.4 Estructuras de lipoprotenas primarias

Imgenes de microscopa electrnica de lipoprotenas muestran formas predominantemente esfricas. Slo HDL naciente aparecen como pilas de discos por tincin negativa microscopa electrnica de transmisin. Las pilas son artefactos del mtodo, ya que en la solucin de HDL naciente y sus anlogos de HDL reconstituidas son discos libre de pie. En cuanto a la estructura de las HDL nativo, sus imgenes de microscopa electrnica no tienen suficiente resolucin para mostrar las caractersticas de la superficie significativos, y otros mtodos no han tenido xito en proporcionar informacin estructural fiable. Los modelos generados por computadora para los discos de HDL reconstituidas son probablemente aplicable a las partculas de HDL nacientes ms grandes, pero no existen modelos de ordenador crebles para el HDL esfrica. En base a las dimensiones de HDL; partculas, y los volmenes moleculares y las reas superficiales de sus componentes de fosfolpidos, colesterol, steres de colesterol y cidos amino, un modelo de llenado de espacio fue construido por Edelstein et al. en el ao 1979. Su modelo es todava vlida hoy en da, con la excepcin de que ms contactos hlice apolipoprotena probablemente estn presentes, y el espacio debajo de las hlices est probablemente llena de ster de colesterol (o triglicridos) en lugar de molculas con colesterol no esterificado , como se muestra en la figura 8. El dominio N-terminal de la apo B puede tener homologa estructural con lipovitelina. La Lipovitelina es una lipoprotena ovocito soluble que contiene 16 % en peso de lpidos y tiene homologa de secuencia con la N-terminales 670 residuos de apo B y con la protena microsomal de transferencia de lpidos. La estructura de rayos X de lipovitellin contiene una cavidad en forma de

Figura 8. Modelo estructural de HDL3 humanos basados en la composicin y las dimensiones de las partculas, y los volmenes moleculares y las reas superficiales de los componentes individuales. PL, fosfolpidos; FC colesterol no esterificado, CE, steres de colesterol, TG, triglicridos. Forma modificada del modelo presentado en Edelstein et al. que muestra una molcula de ster de colesterilo en el espacio debajo de las hlices de apolipoprotena, y colesterol no esterificado (FC) en la superficie de la monocapa. embudo formado por dos - hojas alineadas con residuos hidrfobos que se presumen de obligar a fosfolpidos. Una estructura similar puede estar presente en la apo B y de la protena microsomal de transferencia de lpidos. Mayor resolucin de la microscopa cryoelectron y microscopa electrnica de coloracin negativa combinada con etiquetado anticuerpo monoclonal han revelado algunas de las caractersticas estructurales de la apo B 100 en las partculas de LDL de tamaos relativamente homogneos. Imgenes de LDL parecen ligeramente ovoide y con un dimetro promedio de 233 . LDL imgenes individuales muestran cuatro o cinco regiones de alta densidad que corresponden a la molcula nica de apo B 100. Las regiones densas estn unidas por conexiones de baja densidad. A pesar de toda la protena aparece en muchas imgenes como un anillo en la superficie de las LDL (Fig. 9), la distribucin real de los dominios de la protena probablemente es ms disperso y complejo. El dominio N-terminal de la apo B100 puede ser identificado como un extremo en punta de alta densidad

Figura 9. Las imgenes individuales de LDL obtenidas por microscopa crioelectrnica. Los tamaos de la caja son 270 x 270 A. La flecha indica no marcado una regin de alta densidad que corresponde a un dominio de la apo B100; flecha con una "P" indica el dominio de puntas, N-terminal de la apo B100, y una flecha con 'puntos ld 'a una regin de baja densidad de apo B100.

que sobresale ms de la superficie de la partcula que cualquiera de los otros dominios. Algunos de los dominios putativos tienen proyecciones aproximadamente circulares, pero el mayor de ellos, el que corresponde a los residuos 1700-3070, es alargado y est situada en la latitud 50 a 140 de la N terminal.

Futuras direcciones
A pesar de los grandes avances en las ltimas dos dcadas en la elucidacin de las estructuras y de las relaciones estructura-funcin de las lipoprotenas, an queda mucho por hacer en este campo de investigacin. Las principales reas de investigacin futura: (1) Estudios estructurales y funcionales de las funciones de los componentes de menor importancia de lpidos y apolipoprotenas de lipoprotenas, incluyendo los productos de las reacciones oxidativas que ocurren in vivo e in vitro. (2) Investigacin de la adaptabilidad conformacional de apolipoprotenas durante el montaje con los lpidos y durante las transformaciones metablicas de las lipoprotenas en la circulacin. La elucidacin de los cambios conformacionales en el nivel atmico ser un gran desafo depende del xito de anlisis de alta resolucin de la apolipoprotena y estructuras de lipoprotenas. (3) la determinacin de alta resolucin de la estructura tridimensional de apolipoprotenas intactas y las lipoprotenas, en condiciones fisiolgicas. Lograr este objetivo requerir no slo grandes

avances en la cristalizacin, de rayos X, y metodologas de RMN, pero tambin el aislamiento o la preparacin de las lipoprotenas reconstituidas o nativos altamente homogneos. (4) Nuevos avances en modelos informticos de las lipoprotenas reconstituidas o nativas requieren potentes algoritmos de dinmica molecular, y una amplia informacin mucho ms experimental en el plegamiento y la topologa de las apolipoprotenas. Especialmente prometedor son mtodos de espectrometra de masas combinadas con qumica especfica o al azar de reticulacin de apolipoprotenas para establecer la proximidad espacial.

Abreviaciones

Apo CM HDL Kd LCAT LDL Lp (a) PC PL SR-BI Tm VLDL

Apolipoprotena Quilomicrones Lipoprotenas de alta densidad Constante de equilibrio de disociacin Lecitina colesterol aciltransferasa Lipoprotenas de baja densidad Lipoprotena a Fosfatidilcolina Fosfolpido Receptor scavenger BI Temperatura de transicin Lipoprotenas de muy baja densidad