HIDRLISIS DE ALMIDON DE YUCA

Tratamientos 1 2 3 4 5 6

Alfamilasa (mL/ml) 0,01 0,01 0,01 0,01 0,02 0,02 0,02 0,02 0,03 0,03 0,03 0,03

Tiempo (min) 120 120 180 180 120 120 180 180 120 120 180 180

Glucoamilasa (uL/ml) 1 1 1 1 2 2 2 2 3 3 3 3

Tiempo (min) 60 60 90 90 60 60 90 90 60 60 90 90

[ ] ART g/L 35,2 44,47 58,3 60 57,8 62,5 63,3 50 57,2 44,4 57,25 45

Tabla 1. Valores de ART para cada tratamiento de hidrlisis con Alpha amilasa (pH 6 y Temperatura 70 C) y Glucoamilasa (pH 4 y Temperatura 45C).

ALFA AMILASA ANLISIS DE VARIANZA ANOVA PARA TIEMPO Y CONCENTRACIN No existe una diferencia estadsticamente significativa entre la media de ART y la media de los diferentes tipos de concentracin y tiempo, con un nivel del 95,0% de confianza (P<0,05). Lo que nos permite establecer que no hay diferencia entre utilizar una cantidad de enzima mayor o menor lo cual genera un ahorro en los volmenes de enzima y por ende en los costos.
Medias y 95,0% de Tukey HSD

Medias y 95,0% de Tukey HSD

70 65 60
ART

62 59 56
ART

55 50 45 40 0,01 0,02 CONCENTRACIN 0,03

53 50 47 44 120 TIEMPO 180

ANOVA para ART por TIEMPO Fuente Suma de Gl Cuadrado Cuadrados Medio Entre 86,8332 1 86,8332 grupos Intra 781,872 10 78,1872 grupos Total 868,705 11 (Corr.)

Razn-F 1,11

Valor-P 0,3168

no existe una diferencia estadsticamente significativa entre la media de ART entre un nivel de TIEMPO y otro, con un nivel del 95,0% de confianza. Las concentraciones de ART fueron menores a las reportadas por MERA 2005 bajo las mismas condiciones de temperatura, pH y concentracin de la enzima alpha amilasa esto se puede mejorar adoptando el proceso de refinacin y purificacin del jarabe obtenido con tierras diatomeas y carbn activado mediante filtros al vaco. El rendimiento puede mejorar hasta un 52,4 % para obtencin de glucosa.

GLUCOAMILASA no existe una diferencia estadsticamente significativa entre la media de ART entre un nivel de CONCENTRACIN y otro, con un nivel del 95,0% de confianza.
Medias y 95,0% de Tukey HSD

70 65 60

ART

55 50 45 40 1 2 CONCENTRACIN 3

ANOVA para ART por TIEMPO

no existe una diferencia estadsticamente significativa entre la media de ART entre un nivel de TIEMPO y otro, con un nivel del 95,0% de confianza.

Medias y 95,0% de Tukey HSD

62 59 56

ART

53 50 47 44 60 TIEMPO 90

Tratamiento g/L

% Conversin promedio 1 35,2 27,47 44,47 2 58,3 40,79 60 3 57,8 41,48 62,5 4 63,3 39,07 50 5 57,2 35,03 44,4 6 57,25 35,26 45 Tabla 2. Porcentajes de conversin de almidn en ART para cada tratamiento. En la tabla 2 se puede observar una leve mejora en la conversin de almidon (41,48%) que el de CASTAO 2012 (40%)debido a los problemas que presentaron con el factor de gelatinizacin a una temperatura muy alta (85) en continuo y es menor comparado con el porcentaje de conversin reportado por CARDONA 2011 que fue de 79%, esto se debe al uso de un sistema de agitacin a 500 rpm lo cual favorece la accin de la enzima

Con base en el anlisis estadstico se escogi el segundo tratamiento ya que presentaba la mayor homogeneidad en los datos a pesar de que no existieran diferencias estadsticamente significativas entre las diferentes concentraciones y tiempos evaluados en cada tratamiento.

CINETICA DE LA FERMENTACIN

CONSUMO DE AZCARES REDUCTORES TOTALES Tiempos 0 2 14 16 18 20 22 24 26 [] g/L 57,340 50,917 33,157 28,445 26,270 22,501 21,051 18,804 18,659

[] g/L
68.000 58.000 [ ] ART g/L 48.000 38.000 28.000 18.000 8.000 0 5 10 15 Tiempr (h) 20 25 30 [] g/L

Segun los resultados plasmados en la grafica la el consumo de azucares reductores totales se dio inmediatamente al comienzo del proceso debido a que el microorganismo ya haba reconocido este sustrato como su fuente de carbono en una fase previa, as mismo podemos observar que la concentracin inicial fue de 57,340 g/L y una concentracin final de 18,659 g/L reportndose un consumo de sustrato total de 38,681 g/l durante 26 horas, al cabo de las cuales la levadura no alcanzo a consumir la totalidad del sustrato.

CRECIMIENTO CELULAR Tiempos 0 2 14 16 18 20 22 Log Cel/ml 8,511883361 8,808210973 9,699404082 9,707144188 9,700669111 9,700997761 9,702645907

24

9,702912818

Concentracion de biomasa vs tiempo

6E+09 5E+09 Biomasa cells/ml 4E+09 3E+09 2E+09 1E+09 0 0 5 10 15 tiempo 20 25 30 Series1

La grafica muestra el comportamiento de la levadura Saccharomyces cerevisae durante el proceso de fermentacin para el almidn de yuca previamente hidrolizado, el cual posee una concentracin inicial de azucares reductores totales de 57,340 g/l, durante el inicio del proceso se observa que el crecimiento es rpido y significativo, lo cual indica que la levadura reconoci el alimento enseguida y empez a crecer por lo que no hubo fase de adaptacin. Esto es debido a que el microorganismo ya haba reconocido y asimilado tal sustrato, puesto que en la etapa de preinoculo el microorganismo se desarroll en este medio adems de haber sido estimulado con agitacin orbital; all atraves su etapa de adaptacin, y por ende en el momento en que se agreg al mosto a fermentar ya venia en una fase exponencial donde destina todo el consumo de sustrato para el aumento de la densidad poblacional. Durante este proceso podemos observar una fase en donde se origina un crecimiento exponencial, en la cual se puede apreciar que el crecimiento va de una concentracin de biomasa de 3,25x108 cells/ml hasta 5,09x109 cells/ml a la hora 14 de proceso. Despus de la hora 14 de proceso el microorganismo entra a una fase estacionaria que es cuando el microorganismo emplea el sustrato para mantener su densidad poblacional constante y asi poder producir el etanol.

PRODUCCIN DE ETANOL

Tiempos 0 2 14 16 18 20 22 24 26

% Etanol V/V 0 0,56 1,64 1,97 2,45 3,02 3,37 3,75 3,83

[ ] Etanol % v/v
4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 0 5 10 15 Tiempo (h) 20 25 30

La produccin de etanol durante el tiempo de fermentacin para el almidn de yuca previamente hidrolizado alcanzo una concentracin final de 3.83 %v/v al cabo de 26 horas. Se observa que la mxima productividad se consigue a partir de la hora 14 hasta la hora 24. Era de esperarse el inicio de la mxima productividad a este tiempo ya que a partir de este momento Saccharomyces empez a destinar el sustrato consumido para la formacin de producto y no para el crecimiento celular. Para calcular el rendimiento del proceso se procede de la siguiente manera de acuerdo a la ecuacin entonces: Yp/s: Rendimiento producto- sustrato

% etanol v/v

P: concentracin de etanol (g/L) S: concentracin de glucosa (g/L) Hay que tener en cuenta que al iniciar el proceso de fermentacin en P 0 no hay produccin de etanol.

Concentracin final de producto:

= 0,778 Este dato es bastante bueno comparado con los reportados por Murgas y Torres en 2012 quienes evalan la obtencin de bioetanol a partir de almidn de ame mediante la hidrlisis enzimtica y posterior fermentacin, obteniendo rendimientos de 0,483. Monsalve y compaa en 2006 reportaron una concentracin obtenida de etanol de 7.92 + 0,31% con Saccharomyces cerevisae empleando como sustrato almidn de yuca. Este dato fue aproximadamente el doble al que hemos obtenido que fue de 3,83% , debido a que Monsalve y compaa manejaron tiempo de fermentacin de 72 horas, adems no mencionaron rendimiento ni productividad obtenida, mientras que nuestro tiempo de fermentacin fue de 26 horas, se decidi manejar este tiempo de fermentacin ya que nuestro trabajo investigativo est enfocado a aplicarse en escales industriales, las cuales exigen tiempos de proceso no mayores a 28 horas y con buenos rendimientos. La concentracin de etanol obtenida al final de proceso fue de 3,83%, este valor pudo haber sido mayor si aumentar el tiempo de proceso, y as permitir que saccharomyces consuma en su totalidad el sustrato, pues la concentracin de sustrato al cabo de las 26 horas fue de 18,659 g/l, los cuales pudieron haber sido aprovechado por la levadura para la produccin de etanol y por ende obtener una mayor concentracin de este si el proceso no se hubiese dado por terminado al cabo de 26 horas, pero ya hemos explicado el motivo de porqu no se dej mas tiempo en fermentacin.