UNIVERS¡DAD DE ANTIOQUIA FACULTAD DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE F¡SIOLOGíA Y BIOQUíMICA

MANUAL DE LABORATORIO HEMOSTASIA NORMAS PARA EL INGRESO AL LABORATORIO:

LABORATORTO DE HEMATOLOGíA il (HEMOSTASTA)

El mecanismo hemostático está diseñado para detener la hemorragia en vasos que presentan daño en su integridad. El proceso es rápido y localizadó y no afecta la fluidez de la sangre en circulación. La hemostasia comprende una interacción integrada compleja de: 1) vasos sanguíneos,2) plaquetas y 3) factores de la coagulación y 4) la fibrinólisis.

Para las pruebas de coagulación, el anticoagulante utilizado es el Citrato de sodio al3.25o/o, el cual tiene como principio la frecipitación del calcio.
TIEMPO DE SANGRíA
OBJETIVO

Evaluar

función. Esta prueba es utilizada como:

la hemostasia primaria, involucrando el recuento de plaquetas y

su

'

' Prueba de tamizaje de las diferentes trombopatías: Enfermedad willebrand, Trombastenia de Glanzmann y síndrome de Bernard soulier. , Control de los medicamentos antiagregantes.

Prueba prequirÚrgica para evaluar los trastornos hemorrágicos relacionados con las plaquetas y su valor predictivo positivo es bueno.

de

von

FUNDAMENTO

Al lesionar pequeños vasos la hemorragia provocada es determinada por

la

liberaciÓn sustancias vasoconstrictoras y por la agregación plaquetaria que tapona la lesión.

MATERIALES . Lanceta desechable . Papelfiltro ' Cronómetro . Algodón . Alcohol ' Portaobjetos METODOLOGíA

' Selección del sitio de punción: Se selecciona la parte anterior, aproximadamente 5 cm por debajo del pliegue antecubital. del brazo, este no debe estar paralizado ni con edema. Debe evitarse lesionar grandes vasos, así como las áreas callosas y cicatrizadas. Si es necesario, se debe afeitar el lugar de incisión seleccionado. ' Colocar el tensiómetro sobre la porción superior del brazo del paciente. , Desinfectar el lugar de la incisión Subir el tensiómetro a 40 mmHg durante 30 segundos antes de hacer la ' incisión ' Colocar la lanceta en la zona elegida, asegurándose de que esté en contacto con la piel. ' Si la prueba se realiza con lanceta, se deben hacer tres punciones y los extremos de la lanceta deben quedar marcados en la piel, para garantizai que penetró completamente.
(rasgado), sin tocar el tapón que se está formando. ' En caso de que la sangre que fluya sea muy abundante, puede absorber con mayor frecuencia.

' cada 30 segundos absorba la sangre que fluye, con papel de filtro #1

' Detenga el cronómetro una vez que el sangrado de haya detenido completamente. Si después de 15 minutos continúa la hemorragia se hace un vendaje con gasa estéril y seca, el resultado se reporta mayor de 1S minutos. . Retire el tensiómetro y limpie el área de incisión.
vALoR DE REFERENCIA: El valor normal es de 3 a 6 minutos.

.

lnterpretación: La prueba se encuentra alterada en:

número de plaquetas está por debajo de 100.ó00/ mm3

Trombocitopenia: Hay una correlación inversa entre el número de plaquetas y la prolongación del tiempo. El tiempo de sangría se encuentra alterado cuando el

)

Trombopatías: I Enfermedad de

Bernard Soulier etc.

por lo general, el tiempo es de más de 1s minutos von wiilebrand, Trombasienia de Granzmann, síndrome

en: de

Cushing, Amiloidosis, desórdenes del tejido conectivo y Ehlers Danlos. se puede alterar.

vasculares primarios: vasculitis, Sindrorne de

uso de medicamentos antiagregantes (aspirina)

PRUEBA DE TORNIQUETE: METoDo DE RUMPEL _ LEEDE OBJETIVO Determinar la fragilidad capilar del paciente.
FUNDAMENTO Determina la fragilidad capilar, al aumentar la presión sanguínea. La obstrucción del flujo venoso por el aumento de la presibn puede producir la ruptura de pequeños vasos y la aparición de petequias

MATERIALES

. .

Tensiómetro. Cronómetro.

METODOLOGIA

' Antes de iniciar la prueba se debe observar cuidadosamente el antebra zo, para comprobar si hay petequias, de haberlas, se deber encerrar en un círculo, y determinar si aparecieron nuevas o aumentaron de tamaño. ' se coloca el rensiómetro en er brazo der paciente y se ileva a gOmmHg manteniéndolo así por 5 minutos. ' Transcurrido este tiempo se retira, se esperan otros 5 minutos y se observa la aparición de petequias en el antebra zo y en la mano. ' El resultado se da por cruces de 1 - 4 dependiendo del número de petequias: ) + Mas de 10 petequias en el antebrazo. F ++ Mas de 20 petequias en el antebrazo. ) +++ Mas de 40 petequias en el antebra zo y el dorso de la mano.

F ++++ lncontables petequias.

No se deben contar las que aparecieron en el sitio donde se colocó et Tensiómetro, ni en el pliegue del brazo, ya que estas se presentan por
continuidad.
VALOR DE REFERENCIA: Hasta '10 petequias en el antebrazo. FRAGILIDAD CAPILAR AUMENTADA: Se asocia a deficiencia de vitamina C, trombocitopenia, púrpura de Schelein Henoc, púrpura senil, diabetes, sepsis, hiperesplenismo. TIEMPO DE COAGULACIÓN SANGRE TOTAL
UTILIDAD Evaluar el sistema intrínseco de coagulación FUNDAMENTO El contacto de la sangre venosa con una superficie extraña (vidrio) produce la activación del factor Xll que a su vez activa el factor Xl así sucesivamente hasta la formación del coágulo de fibrina.

MATERIALES . Jeringa . Tubo de sangría sin anticoaugulante . Baño maria a 37oC . Cronómetro . Sangre . Algodón . Alcohol . Torniquete
PROCEDIMIENTO lnmediatamente después del sangrado se activa el cronometro, se mantendrá en la mano para mantener la temperatura corporal, posterior a ello se gira el tubo a 90 grados suavemente cada 30 segundos y se debe observar dátenidamente hasta que se forme completamente el coágulo.

El valor normal es de 6 a 15 minutos. Un resultado menor indica, una técnica defectuosa. Un valor mayor de 15 minutos indica un defecto severo en alguno de los factores, exceptuando el factor VII o Xll. Puede indicar también presencia de un anticoagulante circulante.

RETRAccTór.l

orl coÁculo

UTILIDAD Evaluar la funciÓn plaquetariay la estructura de la fibrina en la inducción de la retracción del coágulo.

FUNDAMENTO El coágulo formado en un tubo de vidrio se retrae por acción de las plaquetas y la fibrina.

PROCEDIMIENTO La sangre utilizada en el procedimiento anterior la dejamos en el baño maría y observamos el tubo cada 15 minutos sin agitarla. Transcurrida una hora, rá observa la separación del coágulo de las paredes del tubo, con la presencia de suero alrededor del coágulo. La retracción o separación debe ser total en 12 horas, el coágulo formado debe persistir por 72 horas. El resultado se reporta. Normal: Si hay retracción. Negativa: Si no se observa retracción. La retracción depende del número de plaquetas y su función. Es negativo en las trombocitopenias y trombopatía.

DESFIBRINACIÓN DE LA SANGRE
OBJETIVO Promover la coagulación de la sangre total, dando como resultado la formación de fibrina FUNDAMENTO La sangre total es un conjunto de células y plasma. En el plasma encontramos los
la

formación de fibrina que será atrapada en los palillos.

factores de la coagulación, los cuales al ser activados dan como resultado

MATERIALES

. . . . . .

Jeringa Agujas Alcohol Algodón Cápsula de porcelana. Palillos.

PROCEDIMIENTO . Tomar 2 cm de sangre venosa en una cápsula de porcelana ' Agitar con los palillos juntos impidiendo que se coagule la sangre, se obtendrá un coágulo adherido a los palillos el cual debe lavarse y observar cuidadosamente su forma y contextura. Examinar la sangre que queda en el recipiente.

TTEMPO DE PROTROMBTNA (TP)

OBJETIVO Medir el tiempo requerido para la formación del coágulo de fibrina, después de agregar tromboplastina tisular y cloruro de calcio a un plasma citratado pobre en plaquetas. Los factores que evalúa el TP son: . El FVll (que es el que se activa con la tromboplastina tisular) . Los factores comunes (FX, FV, Fll y Fibrinógeno) ' Es la prueba ideal para el control de la anticoagulación con anticoagulantes orales, en este caso se debe reportar con el lNR.

convierte la protrombina en trombina y el fibrinógeno en fibrina.

y calcio, agregados al plasma reaccionan con los otros factores (V, Vll, X y fibrinogeno) para formar un compuesto activo, que

FUNDAMENTO Un exceso del extracto tisular

MATERIALES

. . ' . . . . . .

Alcohol Algodón Agujas Tubos tapa azul (citrato a\3.25%) Tubos de ensayo Pipetas pasteur de 0.2 y 0.1 ml Baño de maría a 37"C Cronómetro Tromboplastina tisular que contiene calcio

PROCEDTMTENTO (SOLO DOCENTES)

anticoagulante). ' Centrifugar 10 minutos a 3.000 r.p.m.para obtenerplasma pobre en plaquetas y separar el plasma. ' En un tubo se colocar 0.2 ml de tromboplastina tisular e incubar a 37 "C durante 60 segundos ' Adicionar 0.1 ml de plasma y poner en marcha el cronómetro.

' Extraer 4.7 ml de sangre en un tubo de tapa azul o hasta que se agote completamente el vacio. Esto permite mantener la relación 9:1 (Sangre:

' Se inclina el tubo hasta la mitad para poder observar los hilos de fibrina y la formación del coágulo, cuando se inicia formación de los hilos, se detiene el cronómetro y se lee el tiempo.
se utiliza para las pruebas de laboratorio es un extracto de pulmón o cerebro más calcio. La prueba se debe realizar por duplicado, el valor normal es de 10 a 15 segundos aproximadamente, pero cada
laboratorio tendrá sus propios valores de refeiencia. INTERPRETAC¡ÓN La tromboplastina tisular que

El tiempo de protrombina mide principalmente la actividad del complejo protrombinico. La vía extrínseca recibe éste nombre porque requiere la presencia del factor tisular presente en los tejidos extravasculares. El factor tisular en presencia del calcio activa al factor Vll, pero también puede ser estimulada, por células endoteliales y los leucocitos.
T¡EMPo TROMBOPLASTTNA pARcrAL AcflvADA (TTpa)
OBJETIVO Medir el tiempo requerido para la formación del coágulo de fibrina, después de agregar un activador de contacto (sílica coloidal) a un plasma citratado pobre en plaquetas. Los factores que evalúa el TTp son: Factores Xll, Xl, lX y Vlll Los factores comunes (FX, FV, Fll y Fibrinógeno) Es la prueba para la monitorización de pacientes bajo terapia anticoagulante con heparina

FUNDAMENTO

Medir el tiempo de coagulación del plasma en presencia de una tromboplastina parcial activada, la cual sustituye la acción del factor 3 plaquetario, necesario para la formación del coagulo de fibrina.

, . . . , . . . ' .

MATERIALES Alcohol Algodón Agujas Tubos tapaazul (citrato al3.2S%) Tubos de ensayo Pipetas pasteur de 0.2 y 0.1 ml Baño de maría a 37'C Cronómetro Reactivo para medir tiempo parcial de tromboplastina (cefalina) Calcio 0.025 M

PROCEDIMIENTO

anticoagulante). ' Centrifugar 10 minutos a 3.000 r.p.m.para obtenerplasma pobre en plaquetas y separar el plasma. ' Tomar 0.1 ml de plasma y adicionar 0.1 ml de tromboplastina parcial e incubar por 5 minutos exactos a 37'C ' Agregar 0.1 ml de cloruro de calcio 0.025 M previamente incubado y poneren marcha el cronómetro. ' lnclinar el tubo hasta que aparezcan los hilos de fibrina y se forme el coágulo. Se detiene el cronómetro en el momento que aparezcan los hilos de fibrina y se anota el tiempo. INTERPRETACIÓN La prueba se debe realizar por duplicado, el valor normal es de 28-32 segundos aproximadamente, pero cada laboratorio tendrá sus propios valores de referencia. El TTPa evalúa la vía intrínseca, esta vía es más lenta que la extrínseca, se inicia con la activaciÓn del factor Xll en el momento en que la sangre entra en contacto

' Extraer 4.7 ml de sangre en un tubo de tapa azul o hasta que se agote completamente el vacio. Esto permite mantener la relación g:1 (Sangre:

con el endotelio lesionado

cininógeno de alto peso molecular, el colágeno y el F3p.

y esta activación participan la precalicreína,

e

TTEMPO DE TROMBTNA (TT)

OBJETIVO Medir el tiempo requerido para la formación del coágulo de fibrina, después de agregar trombina a un plasma citratado pobre en plaquetas. Eltiempo de trombina mide la calidad y cantidad del fibrinógeno FUNDAMENTO El fibrinógeno, se convierte en fibrina, gracias a a la trombina mediante dos pasos, en el primer paso Ia trombina fija el fibrinógeno para formar monómeros de fibrina, luego estos se agregan para formar polímeros insolubles de fibrina. MATERIALES . Alcohol . Algodón ' Agujas . Tubos tapaazul (citrato al3.ZS%) , Tubos de ensayo . Pipetas pasteur de 0.2 y 0.1 ml . Baño de maría a 37"C , Cronómetro . Trombina . Solución Salina

/'se se detiene el cronómetio en el momento que aparezcan los hilos de fibrina y se anota el
coágulo'
tiempo. INTERPRETACIÓN La prueba se debe realizar por duplicado, el valor normal es

anticoagulante). Centrifugar i0 minutos a 3.000 r.p.m. para obtener plasma pobre en plaquetas y separar el plasma. Tomar 0.2 mt de plasma control y adicionar 0.2 ml de salina hasta que el tiempo se encuentre en el intervalotrombina con solución de referencia (16_22 segundos). ' Tomar 0'2 ml de plasma problema y adiciona r 0.2 mlde trombina ajustada. ' lnclinar y agitar el tubo hasta que aparezcan ros-hilos de t¡uiin, forme el

. .

' Extraer 4.7 mr de sangre en un tubo de rapa azur o hasta que se agote completamente er vacio. Esto permite mantener ra reración ó:r (sangre:

PROCEDTMTENTO (SOLO DOCENTES)

aproximadamente,
referencia.

de 16-22 segundos pero cada laboratorio tendrá sus propios valores de

Elvalor del TT pueden ser alterados por:
Afibrinogenemia Hipofibrinogenemia Disfibrinogenemia Anticoagulación con heparina En presencia de productos de degradación de fibrinógeno y/o fibrina Hipergammaglobulinem ias

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