GENTICA BACTERIANA

Gentica Bacteriana
Pssst!! Oye chico quieres ser un Sperbicho? Pega unos de estos en tu genomaNi la penicilina podr daarte

Me enfermas!!!

Mutacin y mutantes
Mutacin cambio hereditario en la secuencia de bases del material gentico

El efecto de la mutacin (cambio genotpico) sobre el fenotipo puede ser observable o no

Nomenclatura
Genotipo se designa convencionalmente con tres letras minsculas seguidas de una letra mayscula. Por ejemplo, el gen hisC de E.coli. Las mutaciones en el gen hisC se designan como hisC1, hisC2, y as sucesivamente.

Fenotipo se designa por una letra mayscula seguida de dos letras minsculas, con un signo ms o menos como superndice para indicar la presencia o ausencia de tal carcter. Por ejemplo, una cepa His+ indica que la bacteria es capaz de sintetizar su propia histidina, no asi una cepa His-

Aislamiento de mutantes
Descripcin
Inmvil No capsulado Colonia rugosa

Naturaleza del cambio

Prdida de flagelos, flagelos no funcionales Prdida o modificacin de la cpsula Prdida o cambio lipopolisacrido de la capa externa Prdida de receptor de virus Prdida de una enzima en una va biosinttica Prdida de una enzima en una va degradativa Alteracin de la permeabilidad al compuesto, modificacin de su diana, bombas de exporte.

Deteccin del mutante

Colonias compactas en lugar de planas y extendidas Colonias pequeas y rugosas en lugar de lisas y brillantes Colonias granulosas e irregulares en lugar de lisas y brillantes Crecimiento en presencia de grandes cantidades de virus Incapacidad de crecer en medio carente del nutriente Prdida de cambio de color en medio conteniendo el azcar y un indicador de pH Crecimiento en medio que contiene una concentracin inhibitoria del antibitico

Resistencia a virus Auxtrofo Fermentacin de azcares Resistencia a antibiticos

Mutantes nutricionales
Prottrofo Bacterias silvestres capaces de crecer en medios mnimos (iones, fuente de carbono y agua) sintetizando autnomamente todas las macromolculas esenciales

Auxtrofo Bacterias generalmente mutantes incapaces de fabricar alguna molcula esencial y, por tanto, incapaces de crecer en medio mnimo.

Vas de intercambio de genes entre bacterias

Descubrimiento de la conjugacin
Descubrimiento de la conjugacin Joshua Lederberg Edward Tatum 1946 E. coli

A
met - bio- thr+ leu+ thi+

B
met+ bio+ thr leu thi -

Prottrofos consecuencia de intercambio gentico y recombinacin frecuencia 1/107

Bernard Davis Contacto fsico esencial para la transferencia gnica y recombinacin

Sembrar en medio mnimo No se recuperaron prottrofos

William Hayes 1953 E. coli

F + / macho
Factor de fertilidad (plsmido F)

F - / hembra
Interaccin fsica fase inicial del proceso de conjugacin mediada por el pilus sexual o F

 Clulas F+ poseen un factor de fertilidad y pueden donar material gentico

Cruza clulas F+ X clulas FTodas Clulas F+

Clulas F- clulas que pueden recibir DNA y por recombinacin lo integran en su genoma

Por tanto, el factor F es un elemento mvil Plsmido F codifica alrededor de 100 genes, alrededor de 19 productos gnicos estn implicados en la transferencia de informacin gnica incluyendo aquellos para la formacin de los pilli

Conjugacin
Plsmido F

La conjugacin se inicia cuando la clula F+ sintetiza el pilus y lo extiende hacia la clula F-

Cromosoma bacteriano

Una vez adherido el pilus a la superficie dela clula F- se retrae acercando a las dos clulas

Una cadena del plsmido F es cortada. Esa cadena se desplaza hacia la otra clula A medida que la cadena entra, se produce la sntesis complementaria del DNA en ambas cadenas

Al trmino de la conjugacin ambas bacterias tienen una copia ntegra del plsmido F, por tanto ambas son F+

Exconjugantes

 La frecuencia de transferencia del factor F es mayor que la frecuencia de recombinantes para marcadores genticos el plsmido F no es el responsable de los fenotipos silvestres despus de la conjugacin

Clulas Hfr (high frecuency recombination)

El plsmido F es capaz de integrarse al cromosoma bacteriano Episoma Elemento gnico que puede replicarse independientemente del cromosoma bacteriano o integrarse y replicarse como parte del cromosoma

F+

Hfr

La clula Hfr mantiene su capacidad de conjugacin por lo que puede conjugar con una clula F-

Comienza la transferencia de material gnico de Hfr hacia F- pero no hay transferencia completa del Fgenoma ni de la secuencia de plsmido F

Se transfiri parte del DNA cromosomal, si hay homologa ocurrir recombinacin. Sin embargo la clula F- permanece sin el plsmido F.

Recombinacin

Integracin del plsmido F al cromosoma

Cartografa cromosmica Conjugacin interrumpida

El mapa de tiempos permite conocer el orden de los genes en los cromosomas pero no la distancia entre ellos.

El estado F y los merocigotos

Hfr

En clulas Hfr el plsmido puede escindirse del cromosoma( con baja frecuencia) y formar un plsmido circular nuevamente. Durante la escisin el plsmido puede acarrear genes cromosmicos Loas plsmidos F tambin son transferidos por conjugacin creando merocigotos o diploides parciales

Resumen conjugacin

Transformacin

Plsmidos
Molculas de DNA circulares extra cromosomales que se replican independientemente del cromosoma bacteriano. Presentes en bacterias y algunas clulas de eucariotes Tienen un origen de replicacin reconocido por la maquinaria replicativa de la bacteria

Bajo numero de copias 1-10 Alto nmero de copias 10-100

copia= nmero de molculas de plsmido por clula

Autoregulacin del nmero de copias

Genes que regulan reparto y control del nmero de ellos por clula Mediado por un represor RNA o protena que impide que se repliquen exceso de copias del plsmido

Plsmidos incompatibles Mecanismos capaces de excluir a un plsmido relacionado cuando la clula ya posee uno

Tipos de plsmidos
Tipo
Plsmidos conjugativos Plsmidos de resistencia (R) Antibiticos Resistencia a metales pesados(Hg, Cd,Ni,Co,Pb)

Organismos tipo
E. coli plsmido F Bacterias entricas, Staphylococcus Pseudomonas

Produccin de bacteriocinas y antibiticos

Bacterias entricas,Clostridium, Streptomyces Bacterias entricas

Metablicos Metabolismo de carbohidratos (lactosa, sacarosa) Degradacin de hidrocarburos

Pseudomonas Plsmidos de virulencia o interaccin hospedero Enterotoxinas y hemolisinas Neurotoxina E.coli Clostridium tetani

Generalidades virus
Tamao: 24-300nm Material gentico: RNA o DNA de cadena doble o sencilla cubierto por envoltura proteica (cpside) puede tener lpidos

Generalidades virus
Simetra: icosahdricos, helicoidal, complejos (cabeza y cola)

Parsitos intracelulares obligados

Clulas animales Plantas Bacterias

Bacterifagos

Bacterifagos

Ciclo ltico del bacterifago T4

1. Adsorcin o fijacin el fago se une a receptores de la superficie bacteriana

2.

Inyeccin del material gentico viral

3.

Replicacin del genoma

Ciclo ltico del bacterifago T4

4.

Sntesis de envolturas proteicas

5.

Empaquetamiento del DNA dentro de la envoltura proteica y ensamblaje

6.

Lisis y liberacin de partculas virales

Anlisis de calvas o placas de lisis

Ciclo ltico de un fago

Ciclo lisognico Fagos temperados

1. 2. 3. 4. 5. 6. Fago se adsorbe a la superficie de una clula e inyecta el DNA El DNA del fago se circulariza Transcripcin de genes necesarios para la integracin Fago se integra en el cromosoma de la bacteria La bacteria se reproduce normalmente transmitiendo el profago a la descendencia La bacteria (lisgeno)es inmune a la infeccin de otros fagos

Profago El genoma de un fago que se ha insertado en el cromosoma bacteriano Lisgeno bacteria que tiene el genoma de un fago insertado dentro de su cromosoma Fagos temperados Fago capaz de llevar a cabo ciclos lticos o lisognicos

Ciclo lisognico vs ciclo ltico

Circularizacin del genoma e integracin

Transduccin
Mecanismo de transferencia de genes bacterianos mediado por fagos
1952 Joshua Lederberg Norton Zinder S. typhimurium

Transduccin generalizada

Transduccin especializada

Elementos transponibles
Transposones y secuencias de insercin Elementos transponibles son segmentos de DNA que pueden moverse de una posicin a otra en el mismo cromosoma o a diferentes cromosomas El movimiento de un elemento mvil puede producir mutaciones o rearreglos cromosmicos y afectar de esa manera la expresion de otros genes Descritos originalmente en maz por Brbara Mc Clinckton Se han encontrado en bacterias hasta humanos

La transposicin es una recombinacin no-homloga, es decir la insercin de un EM ocurre en ADN que no tiene homologa con el transposon.

a. En procariotes la transposicin puede ocurrir en el

cromosoma del organismo , en un plsmido o en el cromosoma de un fago. b. En eucariotes la insercin puede ser en el mismo cromosoma o en uno diferente.

Secuencias de insercin
Secuencias invertidas repetidas

10-30pb

10-30pb

Descubiertos por primera vez en E. coli en el opern gal y son transposones ms simples Tamao 700-1500pb Frecuentes en bacterias, plsmidos y fagos.

los

Transposones simples y compuestos

Mecanismos de transposicin

Mecanismo de transposicin Tn5

Transposasa. Enzima que corta al DNA blanco en sitios al azar y une los extremos del transposn Las secuencias invertidas y repetidas (IR) son el sitio de reconocimiento de la transposasa

Transposones en eucariotes Transposones de DNA Retrotransposones

Transposones de eucariotes