Juego de soluciones para la coloracin de GIEMSA para microscopa
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PRINCIPIO El tpico color de los ncleos celulares, mayoritariamente rojo prpura, se basa en la interaccin molecular entre eosina y un complejo azur B ADN. Ambos colorantes forman el complejo. La intensidad de la coloracin depende del contenido de azur B y de la relacin entre azur B y eosina amarilla. El resultado de tincin puede ser influido por diferentes factores como el valor del pH de la solucin y de la solucin tampn, las substancias tampn (amortiguadores), el tiempo de tincin y la fijacin.
CONTENIDOS
COLORANTE DE GIEMSA Listo para su uso Azur eosina azul de metileno segn Giemsa 5 g/l Glicerina 50% Alcohol metlico R.A. 50%
BUFFER FOSFATADO GOTA GRUESA GIEMSA -Listo para su uso Di-Sodio hidrogenofosfato 12 H2O 14.02 g/l Potasio Di-hidrogenofosfato 3.522 g/l Agua desmineralizada tipo II cs
AZUL DE METILENO FOSFATADO Listo para su uso Azul de Metileno R.A. 4 g/l Di-sodio hidrogenofosfato anhidro 12 g/l Potasio Di-hidrogenofosfato 4 g/l Agua desmineralizada tipo II csp
CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Las soluciones deben almacenarse entre 15C y 30C y protegidos de la luz. Despus de abierto el contenido almacenado entre 15C y 30C y protegidos de la luz es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Temperaturas inferiores a 15C puede precipitar co lorantes de las soluciones colorantes. Los frascos deben mantenerse siempre bien cerrados.
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS La solucin R1 Colorante de Giemsa y la solucin R3 Azul de Metileno Fosfatado son irritantes en contacto con piel, ojos y mucosas. La solucin R1 Colorante de Giemsa a causa del contenido en metanol es txico e inflamable, por lo tanto se deben tomar los cuidados requeridos para el manejo de productos inflamables en el laboratorio. Observe la simbologa en los rtulos de las soluciones. Las soluciones usadas y las caducadas deben eliminarse como desechos especiales, debiendo cumplir las regulaciones locales para el desecho de compuestos peligrosos.
MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Cubeta de tincin Frasco lavador Agua Alcohol metlico Cronometro y/o timer
MUESTRAS Se deben usar lminas nuevas y prelavadas con alcohol de 96% para quitar la grasa. Se toman dos (2) lminas, una para la gota gruesa y la otra para el extendido, se limpia el dedo del paciente con Alcohol, y deja secar. Se realiza la puncin, la primera gota se descarta y con las lminas se recoge una sola gota en cada una de ellas. (No se debe tocar la piel con la lmina). En una de las placas se hacen movimientos circulares hasta alcanzar un dimetro de 1 cm para la gota gruesa, en la otra lamina se hace un extendido delgado y corto.
Toda muestra biolgica debe se considerada como potencialmente infecciosa.
PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIENTO GOTA GRUESA 1. Se deja secar la lamina durante 20 minutos. 2. Se deshemoglobiniza con Azul de Metileno Fosfatado, sumergiendo la lamina por 5 segundos y se lava varias veces con buffer fosfatado. 3. Se deja secar la lmina. 4. Realizar la Coloracin de Giemsa preparando 1 gota de Colorante y 1 ml de Buffer (Aprox. 3 ml por cada lamina). Se colorea la lmina 15 minutos boca abajo. 5. Se lava con agua del chorro y se deja secar.
PROCEDIMIENTO DEL EXTENDIDO 1. Se deja secar la lmina durante 10 minutos. 2. Se fija el extendido con alcohol metlico durante 3 a 5 minutos y se deja secar. 3. Se realiza la Coloracin de Giemsa que se prepara 2 gotas de Giemsa y 1 ml de Buffer Fosfatado (Aprox. 3 ml por cada lmina). 4. Se colorea la lmina boca abajo durante 30 minutos y se lava con agua del chorro y se deja secar.
LA GOTA GRUESA SE USA PARA VER LA CONCENTRACIN DEL PARASITO Y EL EXTENDIDO PARA VER LA ESPECIE.
RESULTADO
Tipo de clula Resultado Parsitos sanguneos ncleo rojo citoplasma del protozoario azul Linfocitos ncleo azul violeta citoplasma azul Monolitos ncleo (lobulado) azul violeta citoplasma azul claro Granulocitos neutrfilos ncleo azul oscuro citoplasma rosa plido grnulos tono rosado a azul claro Granulocitos eosinfilos ncleo azul citoplasma rosa plido grnulos rojo ladrillo
Coloracin GIEMSA Juego de soluciones para la coloracin de GIEMSA para microscopa
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CONTROL DE CALIDAD El control de calidad en la microscopia de extendidos sanguneos depende directamente de la formacin y experiencia del profesional que validara la calidad de los extendidos, coloracin, etc. El control debe realizarse incluyendo en cada proceso un portaobjetos de control positivo.
NOTAS SOBRE EL EMPLEO
Los procedimientos de tincin indicados en el presente inserto han dado resultados satisfactorios en nuestros laboratorios. Las preferencias de color individuales pueden precisar ligeros ajustes de los tiempos. Agua altamente clorada puede debilitar la coloracin de contraste.
BIBLIOGRAFA 1. Hematology: Principles and Procedures, Sixth Edition, Brown AB, Lea & Febiger,Philadelphia 1993 p101 2. Clark, George, Stains and staining (Microscopy), 4 th edition, Williams & Wilkins, (1981).
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