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Manejo del Virus del Nilo Occidental

Test With Condence

Virus del Nilo Occidental


La ebre del Nilo Occidental es una enfermedad causada por el virus del Nilo Occidental (VNO), un virus con ARN monocatenario de la familia Flaviviridae. Otros virus pertenecientes a esta familia son responsables de la encefalitis japonesa, la ebre amarilla y la encefalitis de San Luis. El nombre del virus proviene de la regin occidental del Nilo, en Uganda, donde la enfermedad se document por primera vez en 1937 en una mujer que presentaba ebre alta. En 1957, se atribuy al virus del Nilo Occidental un brote grave de meningitis y encefalitis en Israel. En 1999, la enfermedad se extendi a Occidente, donde apareci por primera vez en el rea de Nueva York y a continuacin en Canad, Mxico y Latinoamrica. Existen dos estirpes del virus. La estirpe 1 se encuentra sobre todo en Europa, en el norte y el centro de frica, Israel, India, Amrica Central, Norteamrica, Argentina y Colombia. La estirpe 2 es endmica del centro y el sur de frica, as como de Madagascar. Signos clnicos La ebre del Nilo Occidental afecta principalmente a aves, seres humanos y caballos. Se trata de una afeccin generalmente asintomtica, aunque en cerca del 20% de los casos cursa con sntomas gripales como ebre, cefalea, anorexia y mialgia. Tambin puede causar encefalomielitis en seres humanos y caballos. En caballos el perodo de incubacin es de 3 a 15 das. Los caballos infectados suelen sufrir ataxia y pueden tambin presentar debilidad, fasciculaciones musculares y dcits de los pares craneales. Transmisin del virus del Nilo Occidental Brotes de la ebre del Nilo Occidental Alrededor del 70% de los caballos no presentan signos clnicos y el 20% presentan signos leves. Entre el 1% y el 10% de los caballos infectados presenta formas neuroinvasivas de la enfermedad, como meningitis, encefalitis, paresia, afeccin de las neuronas motoras y parlisis cida. En los caballos, la tasa de mortalidad en el caso de infeccin neuroinvasiva se sita entre un 20% y un 60%. No existe ningn tratamiento especco para la ebre del Nilo Occidental.

La Prueba IDEXX IgM WNV Ab detecta la exposicin reciente al Virus del Nilo Occidental
La Prueba IDEXX IgM WNV Ab es un ELISA de captura en dos pasos que detecta de manera precisa anticuerpos IgM frente al Virus del Nilo Occidental (VNO) en suero equino. Ya que los anticuerpos IgM slo pueden detectarse en los tres meses que siguen al momento de la infeccin, un resultado positivo indica tanto una exposicin reciente al VNO como la presencia del VNO en la zona. Otras pruebas ELISA del VNO detectan anticuerpos IgG, que permanecen en el suero del caballo durante varios aos despus de la infeccin. La presencia de anticuerpos IgG no proporciona informacin sobre el momento de la infeccin o la presencia actual del VNO en el entorno. Mtodo ELISA de captura en dos pasos La gura siguiente ilustra el mtodo ELISA de captura en dos pasos empleado en el kit IDEXX IgM WNV Ab. 1.  Cada muestra se dispensa en dos de los pocillos de la microplaca. Si la muestra contiene IgM, stas quedarn jadas al revestimiento de IgM anti-equinas de los pocillos de la microplaca. 2.  Tras el lavado de la microplaca, en uno de los pocillos se aade el antgeno recombinante del virus del Nilo Occidental (ARVNO) y, en el otro, el antgeno de clulas normales (ACN), para cada muestra. Si la muestra contiene IgM especcas frente al VNO, el ARVNO se jar a las IgM de los pocillos. 3.  Despus, la microplaca se lava y se aade el conjugado HRP frente al virus del Nilo Occidental a todos los pocillos. El conjugado se unir al ARVNO que se encuentre jado a las IgM. 4.  Tras un nuevo lavado de la microplaca, se aade el sustrato enzimtico TMB a los pocillos. Si el conjugado se uni al ARVNO (paso 3), el sustrato enzimtico TMB formar un compuesto azul que se volver amarillo tras aadir la solucin de frenado. 5.  La microplaca se lee a 450 nm. La intensidad del color es proporcional a la cantidad de anticuerpo presente en la muestra. Ejemplo de interpretacin de resultados de la Prueba IDEXX IgM WNV Ab Criterios de validacin (Deben cumplirse los cuatro criterios. Todas las lecturas son a 450 nm.)
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El ndice de estado inmune (ISR) permite interpretar con claridad los resultados Los resultados del ELISA se expresan como un ndice de estado inmune (ISR), que es el cociente entre la densidad ptica del pocillo con ARVNO y la densidad ptica del pocillo con ACN para cada muestra. Los resultados se interpretan del siguiente modo:  ISR 2.00 = muestra negativa (la muestra no contiene IgM frente al virus del Nilo Occidental).  ISR 3.00 = muestra positiva (la muestra contiene IgM frente al virus del Nilo Occidental, lo que indica que ha habido una exposicin reciente al virus).  ISR entre 2,00 y 3,00 (2,00 < ISR < 3,00) = muestra dudosa (es necesario realizar una prueba de conrmacin).

Origen de la ebre del Nilo Occidental en Uganda

Protocolo de la Prueba IDEXX IgM WNV Ab

Conjugado HRP anti-VNO

Muestra equina (IgM)

ARVNO (o ACN)

Anticuerpo IgM anti-equina

Muestra: suero equino Volumen: 50 l (previamente diluido 1:100) Incubacin: 1 hora a 37 C

Lavado: 3 x 300 l

DO (ARVNO) Lectura de la DO a 450 nm

ARVNO: Filas A a D Volumen: 50 l Incubacin: 1 hora a 37 C o durante la noche a 5 C


1
1937 19501975

Lavado: 3 x 300 l

Conjugado: 50 l Incubacin: 1 hora a 37 C

Lavado: 3 x 300 l

Sustrato: 75 l Incubacin: 10 min a 21 C Solucin de parada: 50 l

10

11

12

+ 1 2 + 1 2

3 4 5 6 3 4 5 6

...

ARVNO

19942006

B C D E

10

11

12

DO control negativo < 0,15 ISR control negativo < 2 (ISR control negativo = DO (A1) / DO450 (E1))

A B C D E

+ 1 2 + 1 2

3 4 5 6 3 4 5 6

...

Las aves salvajes son el reservorio del virus del Nilo Occidental y el vector de transmisin, los mosquitos. Los mosquitos se infectan al picar a aves infectadas. Luego transmiten el virus a otras aves y a otras especies, incluidos los seres humanos y los caballos. Los seres humanos y los caballos son Hospedadores amplicadores (aves) considerados los hospedadores nales porque la replicacin del virus en estas especies es insuciente para alcanzar niveles de transmisin.

ACN

F G H

...

DO (ACN)
Hospedadores accidentales (Seres humanos, caballos y otros animales)

Lectura de la DO a 450 nm ACN: Filas E a H Volumen: 50 l Incubacin: 1 hora a 37 C o durante la noche a 5 C Lavado: 3 x 300 l Conjugado: 50 l Incubacin: 1 hora a 37 C Lavado: 3 x 300 l Sustrato: 75 l Incubacin: 10 min a 21 C Solucin de parada: 50 l DO control positivo > 0,40 ISR control positivo > 3 (ISR control positivo = DO (B1) / DO450 (F1))

F G H

Vectores (mosquitos)

DO (ARVNO) ndice de estado inmune (ISR): ISR = --------------DO (ACN)

Deteccin de IgM e infeccin por el virus del Nilo Occidental

Viremia

Anticuerpos IgM

Anticuerpos IgG

Infeccin

Aparicin de los signos clnicos (slo entre el 20% y el 30% de los caballos presentan signos clnicos)

3 meses

> 1 ao

Diagnstico de la fiebre del Nilo Occidental usando un mtodo de deteccin de IgM La presencia de signos clnicos de la ebre del Nilo Occidental apunta a una infeccin por el VNO, sin embargo puede haber casos de infeccin por el virus que cursan sin signos aparentes, por lo que el diagnstico requiere no slo una evaluacin clnica, sino tambin pruebas analticas. La ebre del Nilo Occidental se puede diagnosticar mediante la deteccin del virus con mtodos virolgicos o realizando una PCR (reaccin en cadena de la polimerasa). Sin embargo, el mtodo ms til es el que detecta IgM frente al VNO. Los anticuerpos IgM se pueden detectar hasta tres meses despus de la infeccin. Por consiguiente, la presencia de IgM indica la existencia de una infeccin reciente por el VNO, lo que hace que este mtodo de deteccin sea til en los estudios epidemiolgicos, as como en el diagnstico de la enfermedad. El Manual Terrestre de la OIE calica el mtodo ELISA de captura de IgM como particularmente til para detectar la exposicin natural y las infecciones recientes por el virus del Nilo Occidental.1 Un resultado positivo en una muestra equina analizada con el mtodo ELISA de captura de IgM indica que el caballo ha estado en contacto con el virus del Nilo Occidental en los ltimos tres meses. Los mosquitos responsables de la transmisin del virus del Nilo Occidental han estado circulando recientemente en la zona y pueden estar an presentes en el medio.

Medidas de proteccin La clave para la proteccin frente al virus del Nilo Occidental es el control de la poblacin de mosquitos y la disminucin de la exposicin a estos mosquitos. Las mallas anti-insectos y los repelentes son tiles. Otras recomendaciones son: aislar a los caballos de los mosquitos, utilizando ventiladores que los alejen, y apagar las luces por la noche.

Virus del Nilo Occidental

Una determinacin precisa del momento de la infeccin permite una respuesta adecuada Ya que las IgM son detectables a partir del sptimo da y hasta tres meses despus de la exposicin al VNO, un resultado positivo en una prueba ELISA de captura de IgM signica que el caballo ha estado expuesto al virus del Nilo Occidental en los ltimos tres meses. Una infeccin tan reciente indica que los mosquitos estn propagando el VNO por la zona. Sabiendo esto, es posible adoptar las medidas adecuadas para la proteccin de los animales y la eliminacin de los mosquitos. Estudios de especificidad y sensibilidad La Prueba IDEXX IgM WNV Ab mostr una sensibilidad del 99% y una especicidad del 100% en las poblaciones analizadas. Aunque no existe ningn suero de referencia para analizar las pruebas ELISA de deteccin del virus del Nilo Occidental, la Prueba IDEXX IgM WNV Ab se ha probado con un suero positivo del laboratorio de referencia francs. El kit de IDEXX detect este suero positivo con una dilucin de 1:102400. Caractersticas del kit IDEXX IgM WNV Ab Kit de 2 placas: Ref. P00730-2 Kit de 5 placas: Ref. P00730-5  Las IgM frente al virus del Nilo Occidental se pueden detectar entre los 7 das y los 3 meses posteriores a la infeccin.  La presencia de IgM frente al VNO indica que el animal contrajo la infeccin por el VNO recientemente.
Bibliografa 1.  Organizacin Mundial de Sanidad Animal. Fiebre del Nilo Occidental. En: Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals 2008. Pars, Francia: Organizacin Mundial de Sanidad Animal; 2008. Disponible en: www.oie.int/Eng/Normes/Mmanual/2008/pdf/2.01.20_WEST_NILE.pdf. Visitado el 31 de julio de 2009.

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