REVISIN

Clonacin y clulas madre

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Ximo Soriano Felipe, Antonio Guerrero Espejo y Santiago Bonanad Boix

rea de Diagnstico Biolgico. Hospital de La Ribera. Alzira. Valencia. Espaa.

El desarrollo aplicado de las tcnicas de clonacin ha revolucionado el panorama cientfico de los ltimos tiempos. Muchas de sus aplicaciones biotecnolgicas (empleo de clulas madre, tratamiento tisular, trasplantes, etc.) se estn desarrollando en algunos campos de la medicina, con perspectivas hasta ahora inimaginables. La produccin a medida de recambios celulares y tisulares, a partir de clulas madre y su posterior diferenciacin en cultivo, es un buen ejemplo de ello. Sin embargo, tanto algunas cuestiones tcnicas del procedimiento como ciertos de sus posibles usos son objeto de un intenso debate, en el que la gran mayora de la comunidad cientfica se muestra contraria a la clonacin reproductiva y a favor de la teraputica. Este artculo intenta resumir las principales aplicaciones y problemas asociados a las tcnicas de clonacin y uso de clulas madre, desde la perspectiva de los profesionales sanitarios. Palabras clave: Clonacin. Clulas madre.

ner inmediatamente una gran tensin informativa y una considerable alarma social4-8. Debido a este impacto en la opinin pblica, numerosos gobiernos han modificado su legislacin y creado organismos reguladores. Nos encontramos probablemente frente a uno de los debates ms interesantes de la biologa aplicada en un tema de gran impacto futuro en el tratamiento de las enfermedades, y concretamente la clonacin de clulas madre ha abierto un debate con posiciones ideolgicamente muy enfrentadas en el caso del empleo de clulas de origen embrionario. En este texto abordamos sus aspectos ms interesantes desde la perspectiva de los profesionales sanitarios, sin profundizar en las consideraciones ticas, filosficas, antropolgicas o en el marco jurdico de la cuestin. Aplicaciones de la clonacin Segn la finalidad perseguida, se distinguen 2 grupos de aplicaciones de la clonacin: la realizada con fines reproductivos y la realizada con objetivos teraputicos (fig. 1).

Cloning and stem cells

Applied cloning technologies have become a great scientific advance. Many of their biotechnological applications (stem cells, transplants, tissue therapy) are improving medical fields to extents that we could not imagine a few years ago. Thus, for example, we are now able to produce cellular and tisular spares via differentiating stem cells in vitro. Yet the scientific community maintains a vibrant debate over technical aspects and applications of cloning technologies, with most scientists positioned against reproductive cloning while agreeing on its therapeutic use. This article summarizes the foremost applications and problems related to cloning and stem cells technologies, from an academic and health professionals point of view. Key words: Cloning. Stem cells.

Clula adulta

Oocito enucleado

Transferencia nuclear Embrin

El proceso de la propagacin de clulas idnticas a una primaria u original prescindiendo de mtodos de reproduccin sexual se denomina clonacin y ha supuesto uno de los mayores avances cientficos de los ltimos tiempos. Los trminos trasplante nuclear, transferencia nuclear o clonacin nuclear se refieren a la introduccin de un ncleo de una clula de donante adulto en un oocito enucleado, para poder generar un embrin clonado. Este proceder ha estado siempre acompaado de intensos debates de opinin, que alcanzaron cotas muy importantes cuando en 1997 se anunci pblicamente la obtencin del primer mamfero superior clonado a partir de clulas adultas1-3. En aquel momento, la oveja Dolly fue catapultada a la fama con innegable sensacionalismo por un proceso no tan novedoso, por entonces, como la opinin pblica interpretaba. La posibilidad de extender la aplicacin de la clonacin a humanos a partir del xito en la clonacin de una oveja ge-

Blastocito Clonacin reproductiva

Clonacin teraputica Clulas madre embrionarias

Transferencia uterina a una madre portadora Diferenciacin in vitro

Sujeto clonado
Correspondencia: Dra. A. Guerrero Espejo. rea de Diagnstico Biolgico. Hospital de La Ribera. Ctra. de Corbera, Km 1. 46600 Alzira. Valencia. Correo electrnico: aguerrero@Hospital-Ribera.com Recibido el 5-9-2003; aceptado para su publicacin el 12-11-2003. Fig. 1. Clonacin reproductiva y teraputica.

Hemates, neuronas, clulas musculares...

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Clonacin reproductiva Se entiende por clonacin reproductiva la que tiene como objetivo la creacin de un nuevo ser vivo, genticamente idntico a su progenitor, mediante la implantacin de un embrin clonado en el tero. La clonacin reproductiva de mamferos empleando clulas somticas adultas es un hecho constatado en ovejas, ratones, vacas, cerdos y cabras1,10-11. Es por ello que sus principales aplicaciones se centran en la produccin ganadera, la industria farmacutica, la generacin de nuevos conocimientos en experimentacin y el inters que genera su uso como posible tcnica de reproduccin asistida en humanos. Aplicaciones en la ganadera. En la industria ganadera la clonacin reproductiva constituye una importante aplicacin de la biotecnologa aplicada y abre un gran abanico de posibilidades. La clonacin de animales con mejoras1 o la obtencin de poblaciones celulares antes de la formacin del embrin12 proporcionara un mtodo rpido de diseminacin de mejoras alternativa a la cra tradicional1,12-15. Es posible introducir o interrumpir la expresin de determinados genes en la transferencia nuclear con el objetivo de conseguir fenotipos de inters. Esta tcnica supone ventajas respecto a la introduccin de ADN en el ncleo de un embrin temprano, pero se asocia a otros problemas, como la baja eficiencia de la tcnica, la expresin gnica impredecible, la presencia de mosaicismos, la transmisin variable en la lnea germinal y la necesidad del uso de un gran nmero de animales para la produccin de fundadores transgnicos13. Por tanto, su principal utilidad reside en la creacin de animales transgnicos y la propagacin de animales mejorados genticamente. Aplicaciones en la industria farmacutica. La transgnesis hace posible la produccin de un gran nmero de protenas tiles mediante animales manipulados7, entre ellas, por ejemplo, la produccin de protenas con valor farmacutico en la leche13 u otras sustancias con aplicacin biotecnolgica (pptidos hormonales y otros)15. Aplicaciones en la generacin de nuevos conocimientos. El empleo de tcnicas de transferencia nuclear facilita medios acadmicos para entender los efectos de la diferenciacin celular en genomas2. Tambin ofrece la posibilidad de estudiar la persistencia y el impacto de las modificaciones epigenticas, como la impronta y el acortamiento de los telmeros producidos durante el desarrollo y el envejecimiento, respectivamente1,16, as como el proceso de inactivacin del cromosoma X en hembras7. El xito en la clonacin de ratones proporciona un modelo a partir del cual evaluar estos fenmenos9, al tiempo que facilita la preservacin de cepas importantes para la experimentacin7. Aplicaciones en reproduccin asistida en humanos. La clonacin reproductiva permitira tericamente en la especie humana la reproduccin asexual y la generacin de clones hijos genticamente idnticos al padre o la madre. Esta tcnica podra tener aplicacin en la obtencin de descendencia biolgica en casos con formas graves de esterilidad, en parejas homosexuales o en casos de parejas con antecedentes de alteraciones mdicas o genticas que desaconsejan firmemente la descendencia. Dadas las enormes repercusiones que suscita este punto en los rdenes tico, filosfico, antropolgico y jurdico, el tema es merecedor de su tratamiento en textos especficos de la materia. El debate est servido.
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Clonacin teraputica El propsito del tratamiento de trasplante nuclear es obtener una lnea de clulas madre autlogas derivadas de un embrin clonado que puedan usarse para la sustitucin tisular. Estas tcnicas podran contribuir al tratamiento de enfermedades tan comunes como la diabetes, las cardiopatas degenerativas, determinados tipos de cncer, trasplantes de rganos y tejidos, y procesos degenerativos y enfermedades virales4,17 gracias a la generacin de clulas diferenciadas funcionales a partir de las clulas madre. La combinacin del trasplante nuclear con los campos de la terapia gnica y celular permitira el tratamiento de enfermedades de base gentica. Aplicaciones en el tratamiento gnico y celular. El tratamiento gnico en la lnea germinal es el proceso de manipulacin del genoma de un embrin temprano. Actualmente, su principal aplicacin sera corregir trastornos gnicos recesivos como, por ejemplo, la fibrosis qustica, reemplazando el gen causante de la enfermedad por otro sano mediante el uso de un vector17. La clonacin teraputica se puede usar para aumentar la facilidad y eficiencia del tratamiento gnico en la lnea germinal. Una de las limitaciones de esta tcnica es el pequeo nmero de clulas y la rpida prdida de la capacidad pluripotencial de los embriones tempranos. Combinadamente con la clonacin teraputica, los embriones tratados podran ser cultivados para crear una masa de clulas embrionarias no afectadas. Uno o ms de los ncleos resultantes podra transferirse a un oocito mediante transferencia nuclear para originar as un gran nmero de embriones totipotentes sanos17. Esta tcnica puede usarse tanto en clonacin teraputica (para la obtencin de clulas madre) como reproductiva (desarrollo del embrin a un individuo sano). Problemas asociados a la clonacin Las cuestiones que realmente estn determinando gran parte del inters meditico por las tcnicas relacionadas con los procedimientos de clonacin derivan de que algunas de las aplicaciones de sta y de las tcnicas asociadas a ella (el tratamiento gnico, por ejemplo) presentan una serie de inconvenientes de carcter tcnico y tico-moral. Acadmicamente, los argumentos del debate tico y moral en contra de la clonacin se pueden dividir en los supuestos daos que podra causar a un nico individuo y en los perjuicios que podra suponer para la sociedad en su conjunto (la especie humana). Problemas individuales La mayor parte de los argumentos en contra de la clonacin clasificables dentro del apartado de daos a los individuos hacen referencia a la clonacin reproductiva, concretamente, a los perjuicios a la salud fsica y mental del nuevo ser clonado. Muchas de las frecuentes anomalas detectadas en los animales clonados parecen secundarias a defectos de reprogramacin epigentica de los ncleos trasplantados, es decir, el fallo de un ncleo somtico donado para regresar al programa de expresin gentica correspondiente a un patrn de expresin embrionario. Los fallos en la reprogramacin de los clones son un impedimento potencial de sus aplicaciones teraputicas. La clonacin es una tecnologa relativamente nueva que no ha sido probada en seres humanos y cuyos efectos sobre stos se desconocen. La experimentacin en animales ha revelado la existencia de problemas asociados a la clonaMed Clin (Barc) 2004;122(4):150-4

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cin que causan muerte prenatal y perinatal de embriones, fetos y animales en desarrollo. Se estn investigando las causas de esta mortalidad, pero se especula acerca de su relacin con el proceso de reprogramacin al estado cigtico, el salto de procesos naturales como la meiosis y la fertilizacin, la manipulacin de las clulas durante el proceso experimental y el uso de ADN de clulas adultas (que presumiblemente contienen mutaciones)10,11,18. Los clones adultos tampoco estn exentos de problemas. Estudios recientes demuestran que el tamao de los fragmentos de restriccin de los telmeros de Dolly y otras ovejas clonadas son concordantes con la edad del donante, debido a lo cual estos animales envejecen prematuramente10,16. La muerte temprana de la oveja Dolly ha supuesto un reforzamiento de estos ltimos argumentos. La clonacin presenta una serie de problemas por el hecho de ser una forma de reproduccin asexual. La reproduccin sexual presenta la ventaja evolutiva sobre la anterior de prevenir el paso de mutaciones somticas dainas acumuladas por los parentales. El efecto de dichas mutaciones sobre el clon es incierto, se conjetura que ste podra tener menor capacidad de adaptacin y ser fsicamente ms dbil que los individuos generados por reproduccin sexual17. Todo esto hace que el nivel global de xito de la clonacin reproductiva (nmero de nacimientos comparado con el nmero de embriones manipulados) sea muy bajo14. Este ndice depende del animal usado y del tipo celular de partida7. As, por ejemplo, para la obtencin de la oveja Dolly a partir de clulas mamarias hicieron falta 277 oocitos1, mientras que para la clonacin de ratones se consigui un ndice de xito superior, en torno al 2-3%9. El uso de los mtodos habituales de diagnstico prenatal no permite examinar el conjunto global del estado epigentico de un genoma11, el cual podra ayudar a determinar su estado de reprogramacin. Los efectos de la clonacin se han investigado en animales mediante estudios comparativos entre poblaciones de ratones clonados y ratones control. La poblacin de ratones clonados puede presentar una disminucin de la tasa de supervivencia debida a disfunciones hepticas y pulmonares (neumona grave, necrosis y tumores). Se ha evidenciado una disminucin de la respuesta inmunitaria (se experiment con la capacidad de produccin de anticuerpos y la actividad fagoctica). Se han realizado estas mismas observaciones en animales bovinos y caprinos19. Algunos datos apuntan a un efecto de la clonacin sobre la embriogenia. Sin embargo, algunos aspectos del diseo experimental no permiten aportar datos concluyentes, a pesar de que algunos autores no han encontrado efectos adversos serios debidos a la clonacin10. Las tecnologas de reproduccin asistida sobrepasan muchos de los procesos biolgicos naturales (p. ej., la fertilizacin); sin embargo, muchos investigadores mantienen que no producen efectos graves no deseados en la descendencia, y stos no superan el nivel de incidencia en la poblacin general10. En cuanto al tratamiento gnico en la lnea germinal, las investigaciones actuales se centran en la produccin de vectores especficos que permitan el reemplazo de genes causantes de enfermedad. El principal problema radica en que la insercin de constructos en sitios equivocados podra llevar a la interrupcin de genes y secuencias reguladoras, lo cual podra acarrear efectos muy graves para la salud como, por ejemplo, incrementar el riesgo de cncer17. Problemas poblacionales Los detractores de la clonacin centran parte de sus argumentos en los perjuicios a la sociedad en la responsabilidad

de proteger la integridad de la especie humana, as como la integridad y diversidad de su acervo gnico17. Para algunas personas el embrin humano merece mayor respeto que el otorgado a otros tejidos del cuerpo, debido a su potencial de crear vida humana6,17. stas suelen pensar que, aunque estas tecnologas fueran seguras, los seres humanos no deberan intervenir en la creacin o alteracin de la vida17. Otro argumento en contra de la clonacin es la posibilidad de crear nuevos movimientos eugnicos. Preocupa que se generen nios por encargo, con ciertas caractersticas fsicas o intelectuales, lo que podra dar pie a un movimiento social para crear una raza humana superior, mediante la eliminacin de ciertos caracteres no deseados, y a que la produccin de clones humanos se empleara como banco de rganos de repuesto o lneas celulares de reserva17. En opinin de algunos, la esencia de la humanidad radica en la unicidad de cada uno de sus miembros y en la impredicibilidad de su desarrollo5. El empleo de tcnicas de clonacin representara en este caso la imposicin de una predeterminacin biolgica por terceras personas, por lo que estas prcticas no seran lcitas. Finalmente, preocupa que la clonacin y el tratamiento gnico pudieran tener efectos nocivos sobre la seleccin natural y limitaran la capacidad de adaptacin de la especie humana a un futuro incierto17. Trasplante y clulas madre La ingeniera tisular aplica los principios de la ingeniera y de las ciencias de la vida a la obtencin de sustitutos biolgicos para restaurar, mantener o mejorar la funcin tisular. Las clulas pluripotentes de origen embrionario son totipotentes por definicin y constituyen el material fundamental para la generacin de cualquier lnea celular diferenciada. Con ella se construyen clulas y tejidos que pueden utilizarse en tratamientos sustitutivos. Esto es una realidad en algunos casos, como la piel artificial, o una promesa alcanzable en el caso del tratamiento de la diabetes15. El trasplante de rganos es el tratamiento de eleccin para muchos pacientes en el ltimo estadio de la enfermedad de un rgano. El reducido nmero de donantes adecuados fuerza la investigacin del empleo de rganos de animales para reemplazar el rgano no funcionante (xenotrasplante). Las investigaciones actuales se centran, a pesar de que la controversia no permite la realizacin de ensayos clnicos, en la creacin de cerdos con genes humanos para una eventual produccin en serie, mediante clonacin, de rganos de recambio para trasplantar20. Desde el punto de vista tcnico, podra realizarse el xenotrasplante en sujetos seleccionados, aunque una preocupacin de salud pblica (especialmente con respecto a los retrovirus) no permite dar luz verde a los programas de xenotrasplante. Algunos expertos en xenotrasplante opinan que sus ventajas superan a sus riesgos, pero en el momento actual, en palabras de sir Roy Calne el xenotrasplante clnico est a la vuelta de la esquina, pero la esquina puede estar muy lejana. Los alotrasplantes y xenotrasplantes presentan problemas importantes: escasez de material, dificultades tcnicas, elevado coste, riesgo de infeccin por parte de retrovirus endgenos y, en cualquier caso, rechazo inmunolgico21. La obtencin de clulas madre propias, y su posterior diferenciacin en cultivo, podra producir recambios celulares y tisulares a medida y en cantidad suficiente sin los problemas de rechazo asociados a trasplantes entre la misma o diferentes especies7.
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Clulas madre embrionarias Las clulas madre son aquellas que tienen las capacidades de clonarse y autopropagarse, as como la de diferenciarse en mltiples lneas celulares. Las clulas madre embrionarias derivan de los embriones de mamferos a partir del estadio de blastocito y tienen la capacidad de generar cualquier clula diferenciada en el cuerpo. Cuando, por ejemplo, una lesin miocrdica llega a ser lo suficientemente grave como para comprometer la vida en un corto perodo sin que existan de alternativas mdicas, se dispone del trasplante de corazn. Se han propuesto diferentes tcnicas de trasplante celular como alternativa al trasplante de rganos. Los miocardiocitos son virtualmente incapaces de replicarse y reparar la lesin miocrdica. El tratamiento celular destinado a regenerar los miocardiocitos perdidos es novedoso y prometedor para dichos pacientes. Entre los usos clnicos potenciales ms inmediatos de los cultivos de clulas madre se encuentran, no slo la generacin de miocardiocitos para la miocardioplastia celular, sino la generacin de condrocitos para el tratamiento de reparacin de lesiones cartilaginosas y el tratamiento con osteocitos/osteoblastos en ciruga traumatolgica. Dos preocupaciones con el uso teraputico de las clulas madre embrionarias son su capacidad para formar teratomas in vivo y de sufrir rechazo. Clulas madre adultas como alternativa a la clonacin teraputica Adems de la obtencin de clulas madre propiamente embrionarias, existe la posibilidad de obtener clulas troncales a partir de tejidos fetales o adultos. Las clulas madre adultas son parte de las clulas especficas de tejidos del organismo posnatal con capacidad de diferenciarse. La principal objecin, y tema de intenso debate, es la opinin de algunos grupos sobre que las clulas fetales o adultas posean una menor capacidad de diferenciacin que la clula embrionaria y que ello, en consecuencia, pudiera dificultar su transformacin en otros tejidos. A diferencia de las clulas madre embrionarias, las clulas madre adultas pueden obtenerse de la propia mdula sea y as puede evitarse el rechazo que resulta de la expresin de las protenas del sistema mayor de histocompatibilidad de las clulas madre embrionarias22. Las clulas madre hematopoyticas son las clulas madre adultas mejor caracterizadas en el ser humano. Las clulas madre mesenquimales derivadas de la mdula sea de adulto ofrecen una alternativa potencial al uso de las clulas embrionarias o fetales para el tratamiento celular y gentico de enfermedades neurodegenerativas, miocardioplastia o reparacin cartilaginosa. La mdula sea contiene no slo las clulas hematopoyticas, sino tambin progenitores de tejidos que se pueden considerar como mesenquimales. Esos progenitores se denominan comnmente clulas madre mesenquimales y pueden ser expandidas e inducidas, in vitro o in vivo, a diferenciarse en osteoblastos, condrocitos, adipocitos, miotubos, clulas neurales y estromas de soporte hematopoytico. El potencial mltiple de las clulas madre mesenquimales, su fcil aislamiento y cultivo, as como su potencial de expansin, las convierten en una herramienta teraputica atractiva, capaz de cumplir un papel significativo en diversas aplicaciones clnicas22. Recientemente, no slo clulas embrionarias sino tambin clulas madre adultas se han guiado in vitro para diferenciarlas en miocardiocitos. La ventaja de las clulas madre originarias de la estroma de la mdula sea es que pueden cultivarse a partir del mismo paciente para evitar el rechazo inmunitario.
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El cartlago adulto tiene una capacidad mnima para repararse a s mismo; las clulas madre mesenquimales son un candidato atractivo de clulas progenitoras para la reparacin cartilaginosa debido a su potencial osteognico y condrognico, as como a su facilidad de cultivo y de desarrollo. Nos encontramos tambin en una nueva era de la reparacin cerebral gracias a las clulas madre. La informacin nueva ofrece tremendas esperanzas para el desarrollo de nuevos tratamientos celulares para enfermedades neurodegenerativas como las enfermedades de Parkinson, Huntington, Alzheimer y los traumatismos neurales23. A pesar de que hay que superar muchos obstculos para su uso teraputico, las clulas madre son capaces de reparar tejidos no linfohematopoyticos22. Conclusiones El debate en torno a la clonacin humana viene marcado desde sus inicios por la aparicin de multitud de aplicaciones potencialmente beneficiosas dentro de un marco legal vaco y por la influencia de una presin social desinformada. Por otra parte, la informacin desempea un papel principal dentro de este debate, dado que determina la opinin pblica, la cual, en ltimo trmino, a travs de los polticos, ha de definir los lmites legales (y por tanto ticos y morales) de las tcnicas de clonacin. En consecuencia, se precisa informacin veraz del estado de cada una de las aplicaciones. Las tcnicas de clonacin y el uso de clulas madre presentan muchas aplicaciones, cada una con sus riesgos y beneficios potenciales, que plantean problemas morales y ticos particulares24. Por lo tanto, una visin simplista en torno a estas tcnicas, a favor o en contra de todas sus aplicaciones, carece de sentido. As, no podemos incluir dentro del mismo saco a la genoterapia, la bioingeniera tisular y la reproduccin asistida mediante clonacin. En concreto, el empleo de clulas madre procedentes de tejido adulto (como las clulas mesenquimales procedentes de la mdula sea) carece de muchos de los inconvenientes atribuibles a las tcnicas de clonacin22. Actualmente, la gran mayora de la comunidad cientfica es contraria a la clonacin reproductiva pero se muestra a favor de la teraputica. De hecho, desde el ao 1997 existe un amplio consenso entre naciones (Cumbre de los Ocho en Denver, Unesco y Asamblea Mundial de la Salud) para no autorizar la clonacin para la reproduccin humana (La clonacin con miras a la reproduccin de seres humanos: cuestiones ticas, disponible en: http://www.unesco.org/ bpi/esp/bio98). Es necesario un debate acerca de los lmites de la investigacin cientfica en torno a las tcnicas de clonacin nuclear y el uso de las clulas madre. ste debe desarrollarse en un contexto de informacin y educacin social para corregir la llamada miopa legislativa25, regular el uso de la clonacin y permitir explorar las aplicaciones de inters.

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