Está en la página 1de 13

Estudio de la disminucin y estimacin del plazo de agotamiento para la oxitetraciclina en tilapias criadas en Brasil.

Definiendo los parmetros farmacocinticas y los intervalos de disminucin de los antimicrobianos utilizada en el pescado representa importantes pautas para la futura regulacin por las agencias brasileas del uso de estas sustancias en la cra de peces. En este artculo se presenta un estudio del agotamiento de la oxitetraciclina (OTC) en tilapias (Oreochromis niloticus) cultivado en condiciones tropicales durante la temporada de invierno. Rendimiento alto de la cromatografa de lquidos, con deteccin de fluorescencia para la cuantificacin de OTC en filetes de tilapia y alimentos medicados, se desarroll y valid. El estudio de disminucin con peces se lleva a cabo bajo condiciones ambientales controladas. La OTC se administr en la alimentacin durante cinco das consecutivos a dosis diarias de 80 mg / kg de peso corporal. Grupos de diez peces fueron sacrificados a 1, 2, 3, 4, 5, 8, 10, 15, 20, y 25 das despus de la medicacin. Despus del octavo da del tratamiento, concentraciones de OTC en los filetes de tilapia estaban por debajo del lmite de cuantificacin (13 ng / g) del mtodo. La regresin lineal del modelo matemtico de anlisis de datos present un coeficiente de 0,9962. La vida media de la disminucin de OTC en filete de tilapia y el periodo de agotamiento fueron 1,65 y 6 das, respectivamente, considerando un percentil de 99% con un 95% de confianza y un lmite mximo de residuos de 100 ng / g. A pesar de que el estudio se llev a cabo en el invierno bajo las condiciones prcticas en las que la temperatura del agua vari, los resultados obtenidos son similares a otros a partir de los estudios realizados bajo condiciones de temperatura controlada. INTRODUCCION Las tetraciclinas se han empleado ampliamente en humanos y medicina veterinaria. Su uso teraputico ha sido de especial inters en la produccin ganadera debido a su amplio espectro y su menor coste en relacin a otros antimicrobianos. La oxitetraciclina (OTC) es el miembro principal del grupo de las tetraciclinas utilizado en la acuicultura mundial. OTC est aprobado actualmente en los Estados Unidos para el tratamiento de enfermedades causadas por bacterias Aeromonas, Pseudomonas, Haemophilus en los salmnidos y bagres de canal. En Brazil, el Plano Nacional de Controle de Resduos em Produtos de Origem Animal (Plan Nacional para el Control de Residuos en Productos animales), instituido por el Ministerio de Agricultura en 1995, contempla un programa de control de residuos de sustancias antimicrobianas en peces. En la actualidad, este programa incluye una inspeccin de los residuos de la tetraciclina y OTC, ambos con un mximo lmite residual (MRL) de 100 ng / g en la carne de pescado (MAPA, 1999). Los medicamentos veterinarios son autorizados oficialmente para la produccin ganadera en el pas, pero slo algunos de ellos estn regulados para su uso en la acuicultura. Existe la sospecha de que, inadvertidamente, el criadores de pescados emplean medicamentos veterinarios regulados para su uso en bovinos, pollos, y aves de corral para prevenir o tratar enfermedades en sus sistemas de cultivo. Estos usos no estn en conformidad con buenas prcticas veterinarias o

alimentos seguros, ya que no hay garanta de prescripciones fundamentales en las dosis de tratamiento, el periodo de tratamiento y tiempo de espera se han cumplido. Los parmetros farmacocinticas y estudios de la disminucin de los antimicrobianos utilizados en los peces, ya est regulada en los EE.UU. y los pases europeos, son guas importantes para la acuicultura brasilea en agencias reguladoras. Sin embargo, como los peces son animales poiquilotermos y, en consecuencia, su actividad metablica est determinada en gran medida por la temperatura del agua, es muy importante llevar a cabo estudios de eiminacin de los antimicrobianos en los peces criados bajo condiciones ambientales locales, para apoyar la regulacin para el uso de antimicrobianos en Brasil. Otro aspecto importante que debe ser considerado en el establecimiento de los parmetros farmacocinticas se relaciona con el lmite mximo permitido. El Codex Alimentarius no tiene un MRL establecido para OTC en el pescado. EE.UU. Food and Drug Administration (FDA de EE.UU.) ha establecido un nivel de tolerancia de 2,0 ug / g de OTC en el msculo y la piel del pescado, que es veinte veces mayor que el MRL establecido en Brasil (MAPA, Ministerio da Agricultura e do Abastecimiento do Brasil, 1999). Estas discrepancias se deben tener en cuenta cuando el periodo de agotamiento est establecido. Incluso cuando se trata de la misma especie, los mismos antimicrobianos y la misma condicin climtica de crianza, el periodo de agotamiento establecido para un pas con un lmite mximo superior permitido para el medicamento veterinario dar un tiempo de espera ms corto en comparacin con un pas con un menor lmite mximo permitido, teniendo en cuenta la misma dosis de tratamiento y el mismo perodo de tratamiento. Nuestro objetivo es presentar un estudio de la disminucin de residuos para OTC en tilapia (Oreochromis niloticus) criada en agua templada (bajo condiciones ambientales brasileas), as como para estimar el periodo de agotamiento despus del tratamiento del pescado a travs de alimentos medicados con OTC, teniendo en cuenta el MRL establecido en Brasil (100 ng / g). METERIALES Y METODOS Qumicos Todos los disolventes fueron de grado HPLC y todos los reactivos fueron de grado analtico. Estndares de clorhidrato de OTC (99,8%) y clorhidrato de tetraciclina (92,6%) fueron adquiridos de ICN Biomedical Inc. (Cleveland, OH, EE.UU.) y norfloxacina (99,9%) de Kyorin Pharmaceutical (Tokio, Japn). cido oxlico, cido actico e hidrxido sdico fueron suministrados por Merck (Darmstadt, Alemania). El cido tricloroactico (TCA) fue suministrado por Acros Organics (Fair Lawn, Nueva Jersey, EE.UU.), e hidrxido de amonio por Synth (Sao Paulo, Brasil). Acetonitrilo (ACN) y metanol (MeOH) fueron adquiridos de JT Baker (Philipsburg, PA, EE.UU.). Durante todo el estudio, el agua se obtuvo de un sistema Milli-Q de Millipore (Bedford, MA, EE.UU.). Antes del anlisis de HPLC, todas las soluciones y las muestras se filtraron a travs de filtros de 0,45 um de nylon de Millipore (Sao Paulo, Brasil).

Soluciones Estndar Soluciones Estndar de stock (1,0 mg / ml) de hidrocloruro de OTC e hidrocloruro de tetraciclina se prepararon por disolucin de los estndares en metanol. Una solucin normalizada (1,0 mg / ml) de norfloxacina (NOR) se prepar disolviendo 50,0 mg en 1 ml de cido actico glacial e el volumen completado a 50 ml con MeOH. Todas las soluciones se almacenaron a -18 C durante un mximo de 3 meses. Soluciones estndar Intermedias (10 lg / ml) se prepararon diariamente por dilucin de la solucin normalizada con agua. Las soluciones estndar funcionales de OTC en el intervalo de concentracin de la curva analtica se prepararon inmediatamente antes de su uso. Animales Quinientas cras de tilapia del Nilo de 7 das de edad fueron adquiridos de Aquabel (Rolandia, Paran, Brasil) y se criarn en un tanque de recirculacin de 16 m3 bajo aireacin continua en la universidad de Agricultura Luiz de Queiroz , Piracicaba, SP, Brasil. Los tilapia fueron alimentados con una dieta comercial (Nutripeixe, desde Purina do Brasil, Ltda., Paulnia, SP, Brasil.). Alimentacin Los peces fueron alimentados con dietas comerciales, que difieren principalmente respecto a concentraciones de protenas y vitaminas (Tabla 1). Los peces fueron alimentados tanto por la maana y la tarde a 3% del peso corporal promedio. La correccin de la cantidad de alimento diario se realiz peridicamente pesando una muestra aleatoria de 20 individuos. Alimento medicado Ciento ochenta gramos de un producto comercial que contiene 5,5% w / w de OTC (Terramicina, Pfizer Ltda.., Guarulhos, Brasil) se aadi a 3 kg de alimento de tierra y se homogeneiz. Esta mezcla en polvo finamente se humedeci con agua y fue reprocesado en una picadora de carne adaptada para la produccin de grnulos. Los grnulos se secaron en un horno a 35 C durante 48 h. El contenido de OTC del alimento medicado se determin utilizando el mtodo validado de HPLC-DAD.

Diseo experimental - estudio de la disminucion El estudio de deplecin comenz cuando los peces alcanzaron un peso corporal de 104 10,9 g (n = 100). Un centenar de peces fueron separados en diez grupos y se colocaron en jaulas (10 peces por 0,25 m3 de la jaula) para reducir la competencia por el alimento entre ellos durante el perodo en que recibieron el alimento medicado OTC, y tambin para facilitar el muestreo de pescado. Los peces se aclimataron en estas jaulas durante 30 das antes del comienzo del tratamiento con los alimentos medicados con OTC. Durante este periodo, los peces fueron alimentados con comida sin la adicin del medicamento. Los ensayos se llevaron a cabo durante la temporada de invierno (julio) con la temperatura promedio del agua de 20,5 4,0C. Durante el perodo de medicacin (5 das consecutivos), los peces recibieron el alimento medicado con OTC dos veces al da, una por la maana (8-9 h) y otra por la tarde (16-17 h), con la cantidad diaria de alimento total correspondiente a 3% w / w de su peso corporal, es decir, la cantidad de alimento medicado se separ en dos porciones. La alimentacin diaria se ajust utilizando el alimento medicado suplementado con alimento sin medicamento, para respetar la dosis de tratamiento establecido de 80 mg de OTC / kg de su peso corporal, y la cantidad establecida diaria de alimento. Los peces fueron muestreados 1, 2, 3, 4, 5, 8, 10, 15, 20, y 25 das, comenzando despus del final del perodo de medicacin. Un pez controlado y diez peces tratados de la misma jaula murieron por choque trmico, sumergindolas en un bao helado (0-2 C). Los filetes de pescado se tomaron, cada uno dividido en porciones de 5 g, colocadas en bolsas de plstico, identificados, y se almacenaron en un congelador (- 18 C) hasta los anlisis. Durante la fase de deplecin, los peces fueron alimentados con el alimento no medicado dos veces al da, de nuevo igual a 3% w / w de peso corporal.

Caractersticas Experimentales de calidad del agua Parmetros fsico qumicos, tales como la temperatura, pH, oxgeno disuelto y las concentraciones de amonaco se monitorizaron durante las fases de aclimatacin, de tratamiento y de deplecin, utilizando un kit comercial (Alfakit Ltda.., Florianopolis, SC, Brasil). La temperatura oscil desde 16,5 hasta 24,5C; El pH fue de entre 7 y 8, y el oxgeno disuelto y las concentraciones de amonaco fueron de 6,1 y 0,1 mg / L, respectivamente. Cuantificacin del Medicamento en alimentacin y filete de de pescado La extraccin de Oxitetraciclina de los alimentos. Sobre 5 g de alimento se pes con precisin en un matraz aforado de 250 ml y 10 ml de 0,10 M se aadi HCl. La mezcla se someti a ultrasonidos durante 10 min y el volumen completado con tampn de McIlvaine, pH 4,0, que contiene 0,10 M EDTA. Esta mezcla se someti a ultrasonidos durante 10 min y una alcuota de 5 ml se filtr secuencialmente a travs de 0,45 y 0,22 um de filtros de membrana. Un volumen de 50 uL del filtrado resultante se inyect en el sistema HPLC-DAD. Extraccin de Oxitetraciclina de los tejidos de peces. Acerca de 2 g de filete de pescado se pes con precisin en tubos de vidrio de 50 ml y 5 ml de TCA al 5% w / v y 5 ml de McIlvaine, pH 4,0, que contiene 0,10 M de EDTA aadido. La muestra se homogeneiz en un homogeneizador UltraTurrax (Modelo T18 bsico, Ika, Brasil), y se centrifug durante 20 min a 1000 g. El material sobrenadante se transfiri a otro tubo, y el grnulo precipitado se volvi a extraer con 5 ml de McIlvaine-EDTA, adems de 350 uL de 5,0 M NaOH. Despus de la centrifugacin, las fases sobrenadantes se recogieron y se percol a travs un cartucho de fase slida (HLB-Oasis, 500 mg, 6 ml, Waters, Milford, MA, EE.UU.), previamente acondicionado con 5 ml de MeOH y 5 ml de agua. El cartucho se lav despus con 10 ml de agua y los analitos se eluyeron con 5 ml de 0,010 M de cido oxlico en MeOH. El eluato se evapor a sequedad bajo un flujo de N2 suave en un bao de agua a 45 C. Finalmente, el residuo se disolvi en 1,0 ml de la fase acuosa de la fase mvil (0,0375 M de acetato de sodio, 0,0175 M de cloruro de calcio y 0,0125 M de EDTA). Esta solucin se filtr a travs de un filtro de 0,22 lm y una alcuota de 50 uL se inyect en el sistema HPLC-FLD. Anlisis de HPLC Un modelo Waters 1525 de HPLC sistema, equipado con un Waters modelo 2996 detector de red de fotodiodos (DAD), un modelo Waters 2475 multi-canal de fluorescencia detector (FLD) y un modelo de inyector Rheodyne 7725 con un bucle de muestra de 50 uL, se utiliz para cuantificar OTC en el alimento medicado y filete de pescado. La adquisicin de datos y el control de instrumentos se realizaron utilizando software Millennium 32 4,0 (Waters, Milford, MA, EE.UU.). Una columna cromatogrfica XTerra C18 (250 4,6 mm, 5 um, Waters) con una columna de seguridad que contiene la misma fase estacionaria fueron usados. La fase mvil utilizada para la cuantificacin de OTC en la alimentacin fue MeOH: solucin acuosa (AS) que contena 0,0375 M de acetato sdico, cloruro clcico 0,0175 M y 0,0125 M de EDTA, pH 7

(04:06, v / v). La tasa de flujo fue de 1,0 ml / min. La tetraciclina se utiliz como estndar interno y la OTC se cuantific utilizando el detector de red de diodos a 380 nm. La OTC se cuantific en el filete de pescado utilizando una fase mvil que contiene MeOH y un AS de 0,0375 M acetato sdico, cloruro clcico 0,0175 M y 0,0125 M de EDTA, pH 7. La gradiente de elucin se utiliz desde 18:82 MeOH: AS, v / v (0-6 min), a 39:51 MeOH: AS, v / v (6-7 min), 39:51 MeOH: AS, v / v (7-11 min), y finalmente MeOH a las 18:82: AS, v / v (11-12 min). El caudal fue de 1,0 ml / min. Norfloxacino (NOR) se utiliz como estndar interno y la cuantificacin de OTC se lleva a cabo utilizando el detector de fluorescencia multicanal. Las longitudes de onda de excitacin y emisin de 380 y 512 nm se utilizaron para la OTC y en 280 y 450 nm para NOR, respectivamente. Mtodo de validacin Los mtodos analticos para la cuantificacin de la OTC en alimentos y en filetes de pescado se validaron utilizando los parmetros de funcionamiento siguientes: alcance lineal y linealidad, la sensibilidad, selectividad, precisin intra-da e inter-da, lmites de deteccin y de cuantificacin, y exactitud. Las concentraciones de frmaco se determinaron mediante la estandarizacin interna, utilizando TC (5,0 ug / g) para los anlisis de alimentos y NOR (25 ng / g) para los anlisis de filete de pescado. Las curvas de anlisis para OTC se obtuvieron mediante la fortificacin de alimentos en blanco o muestras de filetes de pescado en cinco niveles. Para la alimentacin los niveles de concentracin fueron: 3,0; 4,0; 5,0; 6,0, y 7,0 ug / g, y para filete de pescado: 50, 100, 150, 200, y 300 ng / g. Linealidad (r) y sensibilidad (s) se expresa como el coeficiente de correlacin lineal (r) y la pendiente, respectivamente, de la curva analtica. Los lmites de deteccin (LD) y cuantificacin (LOQ) se expresaron, respectivamente, como 3 y 10 veces la seal / ruido de la muestra en blanco en el tiempo de retencin correspondiente de cada analito. La precisin de los mtodos desarrollados se evalu en dos etapas: intra-da precisin y de precisin inter da. La precisin intra-da de cada mtodo, expresada como la desviacin estndar relativa (RSD) de las mediciones de concentraciones conocidas, se evalu a partir de los resultados obtenidos para cinco rplicas (n = 5) con el mtodo operativo de ms de un da, bajo las condiciones establecidas, utilizando muestras en blanco (alimentos y filete de pescado) fortificados en el tercer nivel de fortificacin de la curva analtica. La precisin inter diaria se determin en las concentraciones correspondientes a lo segundo, tercera y cuarto niveles de fortalezimiento, de cada curva analtica, y los anlisis se realizaron en tres das consecutivos (n = 3). La selectividad de los mtodos se evalu utilizando muestras en blanco, la verificacin de la presencia o ausencia de compuestos que eluyen cerca del tiempo de retencin del analito (OTC) o el estndar interno (TC para la alimentacin y NOR para filete de pescado) en los cromatogramas.

La exactitud del mtodo fue evaluada utilizando un ensayo de recuperacin. Para este propsito, tres alcuotas (n = 3) de cada muestra en blanco (alimento y carne) fueron fortalecidos en el tercer nivel de la curva analtica correspondiente. La recuperacin media fue calculada para OTC en ambos tipos de muestra. Anlisis de datos Los anlisis de datos utilizados para estimar el tiempo de deplecin se llevaron a cabo de acuerdo con la EMEA (EMEA / CVMP / 036/95) y la FDA de EE.UU. (2006) las pautas para establecer un tiempo de espera. Para evaluar la deplecin terminal de OTC a partir de filetes de pescado, conocido como eliminacin de residuos, un modelo de regresin fue empleado despus de la asuncin de un de un compartimiento (regresin lineal) modelo de eliminacin cintica:

donde: Ct es la concentracin en el tiempo t; C0 es el intercepto de la tasa de modelo de un compartimento constante de deplecin y es la constante de velocidad de deplecin terminal. La aptitud del modelo se evalu utilizando software GraphPad Prism 5,00 (La Jolla, CA, EE.UU.). La vida media de deplecin (t ) de OTC en tejidos del filete se calcul utilizando la ecuacin (2):

Todas las muestras se analizaron por triplicado y el valor medio de cada muestra fue utilizado para el clculo para garantizar la independencia de los datos. Siguiendo la gua de EMEA (EMEA, 1995), las muestras con concentraciones de OTC por debajo del lmite de cuantificacin (13 ng / g) o lmite de deteccin (4 ng / g) fueron considerados como 6,5 y 2 ng / g, respectivamente, lo que representa una mitad de los respectivos lmites establecidos por el mtodo de anlisis validado. Cuando todos o la mayora de los datos obtenidos para un da determinado de muerte estaban por debajo del lmite de cuantificacin o de detalle, el punto de tiempo fue excluido. El periodo de agotamiento se estim de acuerdo con las pautas la FDA de Estados Unidos (2006), que se determina cuando el lmite de tolerancia de la concentracin residual est por debajo del MRL. Esta pauta describe un procedimiento que se basa en un procedimiento de tolerancia lmite estadstico (Owen, 1968). El lmite de tolerancia da el intervalo constituido por un percentil de la poblacin con un nivel de confianza determinado. Los EE.UU. Food and Drug Administration (2006) recomienda el empleo de un percentil de 99% con un 95% de confianza para este fin. Para establecer el perodo de suspensin, la Food and Drug Administration de EE.UU. (2006) recomienda un ajuste de regresin lineal a los datos, llevando el logaritmo natural (Ln) de la concentracin de residuos como una funcin del tiempo. El periodo de desistimiento que fue determinado como el tiempo en la parte superior de un lado lmite de tolerancia con un nivel de confianza determinado era inferior al MRL. Si este punto de tiempo no compensaba un da completo, el perodo de desistimiento se completara hasta el da siguiente.

RESULTADOS Los mtodos analticos para la cuantificacin de OTC de alimentacin y tejidos de pescado. Los mtodos analticos desarrollados para cuantificar OTC en la alimentacin (HPLC-DAD) y en filetes de pescado (HPLC-FLD) fueron validados. Los parmetros de validacin se presentan en la Tabla 2. El mtodo HPLC-FLD que se mostr para ser adecuado para la cuantificacin de OTC en filete de pescado durante los estudios de disminucin, incluyendo un lmite de cuantificacin inferior al MRL. Anlisis de deplecin de OTC en filete de pescado y estimacin de desistimiento La Tabla 3 muestra las concentraciones promedio de OTC en los filetes de pescado de cada grupo (n = 10) durante el ensayo de deplecin y su RSD, as como el intervalo de concentraciones de OTC dentro del mismo grupo. Como la mayora de los datos obtenidos para los peces en el octavo da de deplecin estaba por debajo del lmite de cuantificacin, estos datos no se consideran en el clculo.

La Figura 1 muestra la curva de disminucin de OTC en filete de tilapia despus del tratamiento con medicacin de OTC. Los tejidos de filete de pescado obtenidos del grupo de animales sacrificados 8 das despus de la ltima medicacin presentaron una concentracin de OTC por debajo del lmite de cuantificacin del mtodo (13 ng / g), slo los das 1-5 se consideraron en el modelo. La curva de disminucin se analiz asumiendo el modelo de compartimiento de eliminacin cintica:

Dnde: C representa la concentracin de de OTC en los filetes de pescado, t es el nmero de das despus de la ltima medicacin y -0,4193 es la constante de eliminacin de la fase terminal (). Usando la ecuacin (2), la vida media de OTC fue 1,65 das.

En el presente estudio, diez animales fueron evaluados para cada da de retirada. La RSD dentro de un grupo determinado vari de 9% a 49%. La dispersin est influenciada por el nmero de pescado utilizado en el diseo experimental, as como por la va de administracin utilizada para proporcionar la medicacin. Cuando todos los peces en un grupo determinado se alimentan juntos con el alimento medicado, existe una competencia natural para la alimentacin entre los individuos, lo que promueve una ingesta distinta entre ellos. Sin embargo, la separacin de los peces en grupos de diez individuos facilit el diseo experimental, y en el presente estudio, esta diferencia se muestra para estar dentro de un rango aceptable. El periodo de agotamiento se estim considerando un porcentaje de 99% con 95% de confianza, ya que los datos fueron linealizados por el trazado del Ln de la concentracin de residuos en funcin del tiempo, como se muestra en la figura 2. Los resultados obtenidos confirmaron el perfil de distribucin normal logartmica. Los datos se ajustaron a la ecuacin (4).

Software para evaluar la aptitud del modelo de compartimiento de eliminacin cintica de los datos obtenidos, los siguientes hiptesis de regresin fueron verificados mediante el PRISM (modelo 5,00): a) La homogeneidad de las variaciones: la prueba de Bartlett se utiliz como se recomienda por la Food and Drug Administration de EE.UU. (2006). Ninguna desviacin significativa de la linealidad se observ (P <0,05). b) Ln linealidad: el modelo de regresin lineal se compar con el modelo cuadrtico. El modelo lineal fue confirmado como la mejor opcin; c) La normalidad de los errores: el test de Shapiro-Wilk se aplic para verificar los resultados obtenidos a partir de la trama residual. La normalidad de los errores se confirm. La concentracin de OTC en los tejidos de filete de tilapia alcanzaron niveles por debajo del MRL (100 ng / g) despus de tres das de depuracin. La curva de disminucin se mostr un buen ajuste al modelo de un compartimiento de eliminacin cintica. Sin embargo, algunos individuos presentaron valores superiores a 100 ng de OTC / g de tejido. La concentracin mxima en los filetes de pescado fue de 165 ng / g, determinado el primer da de depuracin. Considerando un porcentaje del 99% con un nivel de confianza del 95%, los resultados indicaron un tiempo de agotamiento de 5,2 das, que se complet a 6 das.

DISCUSIN Los resultados obtenidos en el estudio de eliminacin utilizando tilapias (Oreochromis niloticus), criadas en un rango de temperatura entre 16,5 y 24,5 C, y tratados con OTC a travs de su alimentacin en cinco das consecutivos, con dosis diarias de 80 mg / kg de peso corporal, permiti estimar una vida media de 1,65 das y un periodo de agotamiento de 6 das. El promedio (n = 10) de concentracin de OTC en tejidos de filete de tilapia fueron menores que el MRL (100 ng / g) 2 das despus de suspender el tratamiento con el agente antimicrobiano. Hay varios aspectos a tener en cuenta cuando los resultados obtenidos para los parmetros farmacocinticas entre los diferentes estudios se comparan. Algunos aspectos, como las especies de peces, las condiciones de cultivo climticas (temperatura del agua, pH, fotoperiodo, etc.), el agente antimicrobiano, la dosis de tratamiento, perodo de tratamiento, va de medicacin, entre otros, se reconocen como factores importantes que influyen en la cintica del metabolismo. Sin embargo, hay otras variables que deben ser tomados en cuenta cuando los datos de diferentes estudios son comparados. Es importante tener en cuenta el MRL para estimar parmetros como el perodo de agotamiento. Comparando los resultados obtenidos en este estudio con los resultados presentados por Chen et al. (2004), es posible verificar algunas diferencias. Los autores utilizaron tilapias del Nilo (peso medio de 450 g) criadas en agua a temperaturas de 25 y de 30 C. El pescado recibi OTC (82,8 mg

/ kg de peso corporal por da) con la comida, durante 10 das consecutivos. Despus de 6 das despus del tratamiento, la concentracin de OTC en el msculo y la piel de las tilapias estaban por debajo del lmite de deteccin del mtodo analtico empleado en ese ensayo, para ambas temperaturas de agua. La dosis de tratamiento con OTC fue muy similar a la dosis utilizada en nuestro estudio, pero el periodo de tratamiento fue el doble de tiempo. Cabe destacar que el perodo de desistimiento se estim por Chen et al. (2004) teniendo en cuenta el nivel de tolerancia aprobado por la FDA de los EE.UU. (2000 ng / g). Los autores utilizaron bioensayos de inhibicin microbiana para determinar OTC en msculo y piel de pescado, que present un lmite de cuantificacin de 760-830 ng / g. Este mtodo podra ser no adecuada para cuantificar OTC, considerando el MRL adoptado en Brasil (100 ng / g). Choo (1995) utiliz la tilapia roja (peso medio de 205 g) criadas con una temperatura del agua de 27,3 0,5 C, con la misma dosis de tratamiento utilizado en el presente estudio (80 mg / kg de peso corporal durante 10 das consecutivos). El periodo de desistimiento estimado fue de 17 o 18 das, dependiendo del mtodo utilizado para calcular el tiempo de desistimiento. La observacin importante aqu es que el autor considera como MRL el lmite de deteccin del mtodo analtico (70 ng / g), que es similar a la utilizada por nosotros (100 ng / g). Sin embargo, el mayor perodo de desistimiento estimada por Choo (1995) puede atribuirse a: (i) el perodo de tratamiento con el medicamento que fue el doble del tiempo utilizado en nuestro estudio (10 y 5 das consecutivos, respectivamente), (ii) el el peso medio de los peces utilizados por Choo (1995) fue ms alta que para nuestros pescados (205 g y 104, respectivamente), y los peces jvenes como los nuestros, tienen una tasa de metabolismo ms alto, y (iii) si bien similar, la concentracin de OTC referencial para Choo (1995) fue ms baja que la nuestra (70 y 100 ng / g, respectivamente), por lo que se necesitara ms tiempo para llegar a un lmite inferior de concentracin. Consideramos que la mayor temperatura de crianza no aumenta el metabolismo de los peces suficiente para contrarrestar los puntos mencionados anteriormente. En otra publicacin, Chen et al. (2005) informaron de un estudio con tilapias en las mismas condiciones descritas previamente por Chen et al. (2004), criados bajo dos diferentes temperaturas del agua (25 y 30 C). Los autores observaron que la concentracin de OTC en el tejido comestible (msculo ms piel) cay por debajo del nivel de tolerancia adoptada por ellos (2000 ng / g) a partir del segundo da posterior al tratamiento. Los autores sugirieron que la diferencia entre las temperaturas evaluadas (5 C) no era suficiente para promover las diferencias en la cintica de metabolismo de los peces. En nuestros estudios, la variacin de temperatura durante el ensayo tuvo amplitud de 8 C debido a que el estudio se realiz en la poca de invierno, cuando la temperatura del agua vara. Sin embargo, los resultados obtenidos estn de acuerdo con los reportados en la literatura y obtenido bajo condiciones de temperatura controlada. Vale la pena sealar que nuestro estudio se llev a cabo con temperatura monitoreada, pero no controlada, para estimar el tiempo de vida media de OTC y el tiempo de espera en las condiciones de crianza similares a las condiciones reales de los productores de pescado en Brasil. Los resultados obtenidos en este estudio son importantes para el cultivo de tilapias en las regiones tropicales.

AGRADECIMIENTOS Los autores agradecen el apoyo financiero de la FAPESP (04 / 07.312-9) y CNPq, y gracias al profesor CH Collins para asistencia lingstica. REFERENCIAS Chen, C.Y., Getchell, R.G. & Wooster, G.A. (2004) Oxytetracycline residues in four species of fish after 10-day oral dosing in feed. Journal of Aquatic Animal Health, 16, 208219. Chen, C.Y., Wooster, G.A., Getchell, R.G. & Bowser, P.R. (2005) Distribution and depletion of oxytetracycline in two warmwater fish: tilapia and hybrid striped bass. Journal of the World Aquatic Society, 39, 564 569. Choo, P.S. (1995) Withdrawal time of oxytetracycline in red tilapia cultured in freshwater. Asian Fisheries Science, 8, 169176. EMEA, European Agency for the Evaluation of Medicinal Products Veterinary Medicines Evaluation Unit. (1995) Committee for veterinary medicinal products. Note for guidance: approach towards harmonization of withdrawal periods, EMEA CVMP 036 95. Available at http://www.emea.europa.eu/pdfs/vet/swp/003695en.pdf (active as of March 01, 2010). MAPA, Ministerio da Agricultura e do Abastecimento do Brasil. (1999) Instrucao Normativa no 42, de 20 de Dezembro de 1999. Available at http://extranet.agricultura.gov.br/sislegisconsulta/consultarLegislacao. do?operacao=visualizar&id=16717 (active as of March 01, 2010). Owen, D.B. (1968) A survey of properties and applications of the noncentral t-distribution. Technometrics, 10, 445472. U.S. Food and Drug Administration. (2006) General principles for evaluating the safety of compounds used in food-producing animals. Available at http://www.fda.gov/downloads/AnimalVeterinary/GuidanceComplianceEnforcement/Guidancefo rIndustry/UCM052180.pdf (active as of March 01, 2010).