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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA Departamento de Formacin Bsica Disciplinaria Academia de Bioqumica Mdica I

MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUMICA MDICA I


Segundo Semestre 2013-2014 Enero 2014

Alumno: Profesor: Grupo: Grado: Equipo:

Escuela Superior de Medicina

Laboratorio de Bioqumica Mdica I

INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL ESCUELA SUPERIOR DE MEDICINA Departamento de Formacin Bsica Disciplinaria Academia de Bioqumica Mdica I
Reglamento Interno de Bioqumica Mdica I
CAPITULO I. DE LA INSCRIPCIN Y ORGANIZACIN DE LOS ALUMNOS CAPITULO III. DE LA ASISTENCIA

Artculo 1. La materia de Bioqumica Mdica I es impartida por los profesores de la Academia de Bioqumica Mdica I del Departamento de Formacin Bsica Disciplinaria.

Artculo 9. Como se indica en los incisos IV y VI del


artculo 107 del Reglamento Interno del I.P.N., es obligacin de los alumnos asistir con puntualidad y regularidad a las clases de teora y prcticas de laboratorio en los horarios que les sern notificados al inicio del curso.

Artculo 2. Para quedar inscritos y tener derecho a


asistir al curso, los alumnos debern: a) Aparecer en las listas oficiales del Sistema de Administracin Escolar del IPN. b) Llenar y entregar una forma de registro y control interno que les proporcionarn los profesores de grupo el primer da de clases. c) Entregar una fotografa reciente, de tamao infantil.

Artculo 10. Los profesores controlarn la asistencia


a clases de teora y laboratorio, llamando lista de presentes al inicio de las sesiones, con un periodo de tolerancia de 15 minutos. No hay retardos. En las sesiones de laboratorio, los alumnos que lleguen despus del periodo de tolerancia no podrn permanecer en la sesin.

Artculo 11. Los alumnos asistirn a las clases de teora, prcticas de laboratorio y exmenes con uniforme blanco, que incluye camisa o blusa blancos y zapatos blancos cerrados, NO TENIS y portando en la solapa izquierda del uniforme su credencial de alumno vigente, como lo marca el inciso VII del artculo 107 del Reglamento Interno del I.P.N. Quien no cumpla con este requisito no podr permanecer en la sesin, y se har acreedor a la falta correspondiente.

Artculo 3. Los incisos b y c mencionados en el artculo anterior, deben cumplirse a ms tardar una semana despus de iniciado el curso.

Artculo 4. Cada grupo deber elegir en la primera


semana de clases un representante, que ser su vocero oficial, quien tratar los asuntos acadmicos relacionados con el curso ante sus profesores o la Academia. CAPTULO II. DE LA ORGANIZACIN DEL CURSO

Artculo 5. El curso de Bioqumica Mdica I es Terico-Prctico y se desarrolla mediante tres tipos de actividades: a) Clases de Teora. Se imparten en las aulas de la Escuela Superior de Medicina, asignadas a cada grupo al inicio del curso. b) Prcticas de Laboratorio. Que se realizan en los Laboratorios de enseanza del Departamento de Bioqumica. c) Actividades complementarias. Las que sean asignadas por los profesores, y que complementen las actividades acadmicas. Artculo 6. En las clases de Teora se desarrollan los temas del programa con la participacin activa de los alumnos.

Artculo 12. Durante las sesiones tanto de Teora


como Laboratorio, los alumnos debern activar el modo silencioso de sus telfonos celulares, para no interrumpir el trabajo.

Artculo 13. Las inasistencias a teora y laboratorio


se podrn justificar dentro de los tres das hbiles siguientes, con la documentacin oficial pertinente. Debido a la falta de recursos, en caso de no asistir al laboratorio, el alumno podr justificar la falta pero no reponer la prctica.

Artculo 14. Las actividades de otras materias, realizadas en el horario correspondiente a Bioqumica Mdica I, no se consideran justificantes de falta. CAPTULO IV. DEL TRABAJO EN EL LABORATORIO

Artculo 7. En las prcticas de Laboratorio los alumnos realizan experimentos sobre temas que complementan la teora, y resuelven problemas aplicativos.

Artculo 15. Por razones de disciplina y seguridad,


ninguna persona podr trabajar en el laboratorio sin bata larga de laboratorio blanca y el equipo de seguridad. El alumno que no cumpla este requisito deber abandonar el recinto y se har acreedor a la falta respectiva.

Artculo 8. Las actividades complementarias, versarn sobre tpicos de inters para la formacin de los alumnos.

Artculo 16. Queda estrictamente prohibido fumar e


ingerir alimentos o bebidas en el laboratorio. En la misma forma, los alumnos debern abstenerse de mlvm / maov / i

Escuela Superior de Medicina recibir visitas, as como sentarse en las mesas de trabajo, o realizar cualquier tipo de acciones indisciplinadas.

Laboratorio de Bioqumica Mdica I nos que lleguen despus del periodo de tolerancia no podrn presentar examen.

Artculo 17. Para trabajar en el laboratorio los alumnos formarn equipos, con base en las instrucciones que reciban del profesor al inicio del curso. Artculo 18. Cada equipo de trabajo ser responsable del material de vidrio, utensilios, reactivos, aparatos, etc. que utilice durante el desarrollo de la prctica. Antes de iniciar la prctica debern revisar cuidadosamente dicho material y anotar en el vale cualquier anomala que observe, ya que de no hacerlo se harn responsables de los daos que presente el material y debern reponerlo en un plazo mximo de quince das, con nota de compra.

Artculo 27. Durante los exmenes, los alumnos no


podrn llevar consigo telfonos celulares.

Artculo 28. Para tener derecho a presentar cada


uno de los exmenes departamentales ordinarios, los alumnos debern tener un mnimo del 80% de asistencia global (en teora y laboratorio) en el periodo examinado, siempre y cuando no hayan acumulado ms del 20% de faltas en el laboratorio (del total de prcticas del curso). Artculo 29. Cuando por causa justificada (ver artculo 13 del presente Reglamento) un alumno no pueda asistir a presentar un examen ordinario, deber proceder segn el artculo 46 del Reglamento General de Estudios del IPN. Artculo 30. Cada evaluacin departamental ordinaria se integrar por el 50% de la calificacin del examen de teora, ms 30% de la calificacin de laboratorio, ms 20% de la calificacin de actividades complementarias del periodo correspondiente. Artculo 31. La calificacin final de la materia de Bioqumica Medica I se obtendr promediando las tres evaluaciones parciales ordinarias. La calificacin mnima aprobatoria es de 6 (seis).

Artculo 19. Al terminar la prctica, el equipo deber


dejar la mesa de trabajo limpia y en orden, como la recibi.

Artculo 20. Los alumnos no podrn abandonar el laboratorio hasta que la prctica termine, o cuando sean autorizados por el maestro. S un alumno abandona el laboratorio sin autorizacin, se har acreedor a la falta de ese da.

Artculo 21. El alumno deber entregar un reporte


escrito de la prctica, que formar parte de su evaluacin de laboratorio. CAPITULO V. DE LA EVALUACIN

Artculo 32. Cuando un alumno no apruebe o intente


mejorar su calificacin ordinaria, deber presentar el Examen Extraordinario, presentando el total de los contenidos de la materia.

Artculo 22. La evaluacin final de la materia, se har


con base en tres Evaluaciones Parciales Ordinarias, y los Exmenes Extraordinario y a Ttulo de Suficiencia.

Artculo 33. Para tener derecho a presentar el Examen Extraordinario de la materia, los alumnos debern contar con un mnimo de 80% de asistencia a las clases de teora y tambin 80% de asistencia a las prcticas de laboratorio, del total de clases del curso.

Artculo 23. Las calificaciones quedarn registradas


en el acta de examen correspondiente con un nmero entero de cero a diez. En calificaciones superiores a 6 con fracciones de cinco dcimas o ms, la calificacin se aumentar al entero inmediato superior. En calificaciones inferiores a 6, las fracciones decimales sern consideradas nulas.

Artculo 34. La calificacin mnima aprobatoria del


Examen Extraordinario ser de 6 (seis). Cuando un alumno presente este examen para mejorar la calificacin ordinaria obtenida, su calificacin final ser la ms alta.

Artculo 24. La evaluacin parcial ordinaria de la materia se har tomando en cuenta los resultados obtenidos en: a) El examen parcial departamental de los temas revisados en el aula. b) La calidad del trabajo en el laboratorio y de los informes de prctica. c) Las actividades acadmicas complementarias.

Artculo 35. Los alumnos que al trmino del curso


tengan calificacin reprobatoria y como mnimo 50% de asistencia a las sesiones de teora y prcticas de laboratorio, tendrn derecho a presentar el Examen a Ttulo de Suficiencia. CAPITULO VI. OTROS

Artculo 25. Los exmenes departamentales ordinarios, extraordinario y a ttulo de suficiencia, se realizarn en el lugar, fecha y hora que se dar a conocer al inicio del curso.

Artculo 36. Cualquier caso no contemplado en este


Reglamento deber someterse por escrito, a la Academia de Bioqumica Mdica I, para su discusin y resolucin inapelable. LA ACADEMIA DE BIOQUMICA MDICA I Agosto 2012

Artculo 26. Todos los grupos debern iniciar los


exmenes departamentales a la hora programada. Los sinodales de examen controlarn la asistencia, llamando lista de presentes al inicio del examen, con un periodo de tolerancia de 15 minutos, los alum-

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Reglamento de Laboratorio de Bioqumica Mdica I
CAPTULO I. DEL MATERIAL DE TRABAJO. Artculo 1. Durante las sesiones de prctica cada equipo de trabajo deber contar con el material siguiente: Franela, cerillos, masking tape, marcador indeleble, rollo de toallas de papel absorbente, 1 litro de agua destilada y un tubo de tiras reactivas para medir pH, con escala de 1 a 14.

Artculo 8. La segunda hoja ser el Reglamento Interno de la materia, seguido del presente reglamento y de las Reglas de Seguridad del Laboratorio. Artculo 9. El da martes anterior a la prctica, en el momento de tomar lista, cada equipo de laboratorio entregar un Formato de Reporte de Prctica, impreso en computadora o escrito a mquina, rotulado con los siguientes datos en la primera hoja: a)Nombre del laboratorio. b)Ttulo de la prctica. c)Grupo. d)Nmero de equipo. e)Nombre de los integrantes del equipo que participaron en la elaboracin. f)Nombre del profesor. g)Fecha de entrega. h)Fecha de la prctica.

Artculo 2. Para su proteccin, durante su permanencia en el laboratorio cada alumno debe contar con el equipo de proteccin siguiente: bata de laboratorio blanca larga y abotonada, gorro de cirujano, mascarilla de proteccin, NO GOGLES y guantes de cirujano. CAPTULO II. DE LA ASISTENCIA.

Artculo 3. Los(as) alumnos(as) que lleguen despus


del periodo de tolerancia, TENDRN FALTA Y NO PODRN PERMANECER EN EL LABORATORIO. NO HAY RETARDOS.

Artculo 10. El resto del formato debe incluir:


a)Objetivo y fundamento generales para toda la prctica. b)Objetivo y fundamento especficos de cada experimento. c)Cuestionarios resueltos, incluyendo reacciones y clculos. d)Espacios apropiados para: i.registro de resultados (Tablas, Cuadros, Grficos, etc.) ii.elaboracin de datos experimentales (clculos, transformaciones, etc.) iii.discusin y conclusiones de cada experimento, y de la prctica completa. e)Bibliografa consultada.

Artculo 4. Los(as) alumnos(as) que abandonen el


laboratorio sin autorizacin del profesor, TENDRN FALTA Y NO PODRN PERMANECER EN EL LABORATORIO.

Artculo 5. Los alumnos que no cumplan con los requisitos de seguridad sealados en el Artculo 3 del presente reglamento, NO PODRN PERMANECER EN EL LABORATORIO Y SE HARN ACREEDORES A LA FALTA CORRESPONDIENTE.

Artculo 6. Cuando sea necesario tomar muestra, y


no haya sido previamente designado algn o algunos donadores con un fin especfico, el donador de cada equipo ser el ltimo(a) alumno(a) que llegue a esa sesin. CAPTULO III. DEL TRABAJO EN EL LABORATORIO. Artculo 7. Al asistir a las sesiones de prctica, los alumnos debern entrar al laboratorio con su equipo de seguridad completo, bata blanca puesta abotonada y llevar consigo su manual de laboratorio engargolado con gusano de plstico y cubiertas de plstico transparente, debidamente rotulado con los siguientes datos en la primera hoja: a)Nombre del laboratorio. b)Nombre del alumno. c)Nombre del profesor. d)Nmero de equipo. e)Grupo y grado.

Artculo 11. Los equipos que no entreguen el Formato de Reporte de Prctica, en la forma y momento que se solicite, se harn acreedores a una calificacin de cero en esta parte de su evaluacin.

Artculo 12. Los equipos que hayan entregado en


tiempo y forma su Formato de Reporte de Prctica, lo recibirn calificado, el mircoles siguiente para que efecten, en el mismo documento, a mano las correcciones que se indiquen.

Artculo 13. Al inicio de cada prctica, los profesores


asignarn a cada alumno el experimento(s) que realizarn en la sesin.

Artculo 14. Al final de la sesin de laboratorio y antes de retirarse, cada equipo entregar el Formato de Reporte de Prctica completo, incluyendo: mlvm / maov / iii

Escuela Superior de Medicina a)Para cada experimento: i. Nombre del alumno(a) que lo efectu. ii. Registro de resultados. iii. Elaboracin de datos experimentales. iv. Discusin de resultados. v. Conclusin. b)Conclusiones generales de la prctica.

Artculo 15. Al terminar su trabajo y despus de


haber entregado el material de la prctica y su reporte, los integrantes de cada equipo abandonarn el laboratorio, para no distraer a sus compaeros, dejando su lugar de trabajo limpio y ordenado.

Artculo 16. El da hbil siguiente a cada sesin de


prctica, en el saln de clase se realizar la discusin de resultados, para lo cual los alumnos debern contar con los datos experimentales. CAPTULO IV. DE LA EVALUACIN.

Artculo 17. Formato Reporte de Prctica y muestras


por Equipo. Es hasta el 20% de la calificacin. Se evalan: a)Puntualidad en la entrega. b)La calidad de los objetivos y fundamentos de cada experimento. c)Respuesta de cuestionarios. d)Elaboracin de clculos. e)Que la(s) muestra(s) sea(n) adecuada(s).

Laboratorio de Bioqumica Mdica I Artculo 18. Trabajo Individual en el Laboratorio. Representa hasta el 50% de la calificacin. Incluye a)Puntualidad en la asistencia. b)Resultados prcticos, obtenidos en los problemas asignados en el laboratorio. c)La velocidad, orden, limpieza y disciplina con que cada alumno realice su trabajo en el laboratorio. Artculo 19. Reporte de prctica. Representa hasta el 20% de la calificacin. Se evala bsicamente: a)Puntualidad en la entrega b)Discusin. c)Conclusiones. d)Respuestas de los cuestionarios. e)Elaboracin e interpretacin de clculos y grficas. Artculo 20. Participacin en la sesin de discusin de resultados. Representa hasta el 10% de la calificacin. Se toma en cuenta: a)Participacin en la discusin. b)Calidad de la participacin.

Artculo 21. La calificacin parcial ordinaria de Laboratorio ser el promedio aritmtico de las calificaciones obtenidas en las prcticas realizadas durante el periodo evaluado, ajustadas a valores enteros, como se indica en el Reglamento Interno de la materia. PROFESORES DE TEORA Y LABORATORIO GRUPOS 2CM4 Y 2CM10 AGOSTO 2012

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Reglas de Seguridad en el Laboratorio de Bioqumica Mdica I
El manejo inapropiado de sustancias, materiales y equipo que se encuentran en el laboratorio, representa peligro tanto a la salud de las personas, como a la integridad de las instalaciones y equipo de trabajo. Es por ello que se deben obedecer las Reglas de seguridad que se enlistan a continuacin, clasificadas en los siguientes grupos: 1. Sustancias qumicas 2. Material biolgico y animales de laboratorio 3. Material de vidrio 4. Equipo elctrico e instalaciones de gas 5. Orden y limpieza 1. Sustancias qumicas. o Cada sustancia debe tener etiqueta de identificacin, si no es as no los utilice. o Antes de utilizar una sustancia, verifique que se trata del reactivo correcto y que tiene la concentracin requerida. o Identifique la naturaleza de la sustancia y el tipo de peligro que implica su manejo; es veneno?, qu tan txico es?, es inflamable?, es corrosivo? o Evite el contacto o exposicin innecesaria con sustancias qumicas, utilice el equipo de proteccin adecuado y disponible: bata larga, lentes, guantes, campana extractora, etc. o No pipete sustancias qumicas directamente. Siempre utilice la pre pipeta. o Evite inhalar productos qumicos y sus vapores. o Trabaje y mantenga bajo la campana los reactivos corrosivos o voltiles. o Los hidrocarburos ligeros y solventes deben manejarse lejos del fuego u otras fuentes de calor. Emple bao mara para calentarlos. o Para diluir los cidos, estos deben verterse lentamente en el agua, agitando cuidadosamente. o No vierta agua directamente sobre el cido porque provocar salpicaduras o No deje sobre la mesa tapones de frascos de cidos u otras sustancias corrosivas, porque se pueden contaminar o dejar residuos corrosivos que podran causar quemaduras. 2. Material biolgico y animales de laboratorio o Para el manejo de estos materiales protjase adecuadamente segn sea el caso. Usando guantes, cubre boca, etc. o Para la manipulacin y el sacrificio de los animales de experimentacin siga las indicaciones del Profesor. o Maneje cuidadosamente las muestras biolgicas (sangre, orina, saliva, etc.) para evitar contaminaciones de personas y materiales. o Todo el material biolgico, equipos y de desecho (cadveres, muestras biolgicas, algodn, gasas, guantes, jeringas, etc.) debern ser incinerados adecuadamente, para lo cual, deber usted seguir las instrucciones del Profesor para dejarlos convenientemente preparados. 3. Material de vidrio o Debe examinar todo el material de vidrio antes de utilizarlo, para detectar la existencia de grietas o roturas. En el caso de que encuentre material defectuoso, reprtelo de inmediato al encargado del laboratorio para que se lo cambie. o No use el material de vidrio con orillas cortantes, con cuarteadoras, o en general en mal estado. o Debe transportar, mover o manipular slo la cantidad de material de vidrio que pueda manejar con seguridad. o Use pinzas, franela o guantes de asbesto para transportar o mover recipientes de vidrio calientes. o Nunca deje material roto para ser lavado, reprtelo y trelo a la basura. o No deje vidrios rotos sobre la mesa o en cualquier otro lugar en donde pueda causar accidentes. o Al calentar recipientes de vidrio, use llama suave al principio del calentamiento. o Limpie inmediatamente los materiales que goteen o se derramen, mediante uso de la franela u otros materiales para embeber el lquido y evitar que se disperse. o En caso de lquidos txicos derramados, protjase adecuadamente y ventile el rea. 4. Equipo elctrico e instalaciones de gas. o No use equipo elctrico defectuoso. o Verifique que los enchufes y conexiones estn en buenas condiciones; en caso de que existan cables desnudos o en mal estado, reprtelos inmediatamente. o Maneje el equipo elctrico y sus conexiones con las manos secas y cercirese que el piso se encuentra seco. Mantenga seco el espacio alrededor del equipo elctrico. o Antes de encender el mechero, revise que tanto ste como la manguera se encuentren en buen estado, verifique que est adecuadamente conectado a la tubera de gas (tubos de color amarillo) y retire todo material inflamable cercano. mlvm / maov / v

Escuela Superior de Medicina o En caso de accidente, retrese inmediatamente y cierre la llave de paso que se encuentra bajo la tarja de cada mesa. 5. Orden y limpieza o Una vez verificado el buen estado del material de vidrio, lvelo para asegurar su limpieza. o Mantenga siempre limpia y en orden su rea de trabajo. o No intercambie el contenido de los frascos de reactivo. Use slo los tapones de los recipientes correspondientes.

Laboratorio de Bioqumica Mdica I o Cuando requiera volver a llenar sus frascos reactivos, transfiera del frasco de almacenamiento, la cantidad necesaria a travs de un vaso de precipitados, no devuelva el sobrante al envase original, busque otro frasco reactivo y vierta el sobrante. Nunca emplee pipetas para efectuar este procedimiento. ACADEMIA DE BIOQUMICA MDICA I Enero 2007

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Calendario de Prcticas de Laboratorio


Grupos 2CM4 y 2CM10
Prctica Introduccin al Laboratorio de Bioqumica Mdica I Propiedades de las Soluciones Soluciones Electrolticas y pH Soluciones Reguladoras Propiedades de Protenas Cintica Qumica y Catlisis Cintica Enzimtica Propiedades de Glcidos Oxidaciones Biolgicas Propiedades de Lpidos Propiedades de cidos Nuclicos Fecha 30 de Enero 13 de Febrero 20 de Febrero 6 de Marzo 13 de Marzo 27 de Marzo 3 de Abril 24 de Abril 8 de Mayo 19 de Mayo

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Contenido
REGLAMENTO INTERNO DE BIOQUMICA MDICA I REGLAMENTO DE LABORATORIO DE BIOQUMICA MDICA I CAPTULO I. DEL MATERIAL DE TRABAJO. CAPTULO II. DE LA ASISTENCIA. CAPTULO III. DEL TRABAJO EN EL LABORATORIO. CAPTULO IV. DE LA EVALUACIN. REGLAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE BIOQUMICA MDICA I CALENDARIO DE PRCTICAS DE LABORATORIO CONTENIDO INTRODUCCIN AL LABORATORIO DE BIOQUMICA MDICA I Distribucin de alumnos El Vale de material de laboratorio. Manejo del mechero Fisher. Como calentar un lquido en un tubo de ensaye. Manejo de reactivos lquidos. Manejo de reactivos slidos. Como tarar tubos para centrifugacin. PROPIEDADES DE LAS SOLUCIONES Medida de la presin osmtica. Mtodo directo Preparacin de una solucin de NaCl 2% p/v Dilisis Preparacin de una solucin de CH3COOH 0.1M Titulacin Difusin en lquidos SOLUCIONES ELECTROLTICAS Y PH Disociacin de una sal y Electrolisis del agua Conduccin de corriente en electrolitos fuertes y dbiles Diferencia de conductividad entre electrolitos dbiles y fuertes Preparacin de soluciones de pH conocido con electrolitos fuertes y dbiles. Acidez de titulacin SOLUCIONES REGULADORAS Apreciacin del poder regulador y efecto de la concentracin Curva de titulacin de Glicina Preparacin de soluciones amortiguadoras de pH conocido. PROPIEDADES DE PROTENAS Determinacin del punto isoelctrico de la Casena Reaccin de Ninhidrina. Reaccin del Biuret Reaccin Xantoprotica Reaccin de Millon Reaccin de aminocidos azufrados. Precipitacin de protenas por metales pesados Precipitacin de protenas por cidos fuertes. I III III III III IV V VII VIII 1 1 1 2 2 3 4 4 6 6 6 7 8 9 10 11 11 11 12 13 14 15 15 16 17 18 18 19 19 20 20 21 22 23
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Precipitacin por alcohol CINTICA QUMICA Y CATLISIS Comprobacin de la ley de accin de masas Velocidad de descomposicin del H2O2 y Orden de Reaccin Influencia de la temperatura sobre la velocidad de una reaccin qumica Efecto del pH sobre la velocidad de una reaccin qumica. Efecto de un catalizador inorgnico sobre la velocidad de hidrlisis de la Sacarosa Efecto de un catalizador biolgico sobre la velocidad de degradacin de la Sacarosa CINTICA ENZIMTICA Preparacin de la solucin de Amilasa Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica Efecto del pH sobre la actividad enzimtica. Efecto de la concentracin de sustrato sobre la velocidad de una reaccin enzimtica. Efecto de la concentracin de enzima sobre la velocidad de una reaccin enzimtica. PROPIEDADES DE GLCIDOS Determinacin de la estructura cristalina de glcidos. Formacin de Osazonas Reaccin de Molisch-Udransky Reaccin de Fehling Reaccin de Barfoed Reaccin de Bial Reaccin de Seliwanoff Reaccin de Lugol OXIDACIONES BIOLGICAS Oxidacin por prdida de electrones Oxidacin por deshidrogenacin Obtencin de la fraccin mitocondrial del tejido Determinacin de la actividad de Deshidrogenasa Succnica Determinacin de la actividad de Citocromo-Oxidasa. PROPIEDADES DE LPIDOS Reaccin de Hanus o ndice de yodo Extraccin de lpidos de Cerebro. Identificacin de fosfolpidos de cerebro por cromatografa en capa fina. Identificacin de cerebrsidos. Reaccin de la Acrolena. Identificacin de acilglicridos. Reaccin de Liebermann-Burchards Grado de permeabilidad de una capa lipdica PROPIEDADES DE CIDOS NUCLEICOS Obtencin de DNA del bazo Identificacin y Cuantificacin de DNA. Identificacin y Cuantificacin de RNA Identificacin y Cuantificacin de Fosfato Total APNDICE I. CURVA TIPO DE AZUCARES REDUCTORES APNDICE II. PUENTE DE WHEATSTONE

23 25 25 25 26 27 28 29 30 30 30 31 32 33 35 35 35 36 37 37 38 38 39 41 41 42 42 43 44 46 46 47 47 48 48 49 49 51 51 52 53 54 56 57

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INTRODUCCIN AL LABORATORIO DE BIOQUMICA MDICA I


Distribucin de alumnos
Desarrollo a) Antes de entrar al laboratorio, todos los alumnos debern tener puesta y abotonada su bata de laboratorio. Tambin deben tener listo su material de trabajo. b) Cuando el profesor lo indique, los alumnos colocarn su mochila en el lugar que les sea designado. c) Siguiendo las instrucciones de su profesor, localice su mesa de trabajo e inmediatamente dirjase a ella. d) En su mesa, localice tomas de corriente, desages, tuberas y sitios donde puede trabajar. e) Ubique la posicin de su mesa de trabajo, respecto de la mesa de la campana, instalaciones de seguridad, extintores, zonas de seguridad y rutas de evacuacin. f) Con base en la explicacin recibida, identifique el uso de cada una de las tuberas que encuentre en su mesa de trabajo y mrquelas con masking tape. Espere a que su profesor confirme que su etiquetado es correcto. g) Localice la posicin de las vlvulas de seguridad de cada tubera. Cuestionario 1. Elabore un esquema de su mesa sealando la posicin de las tomas de corriente, desages y vlvulas de flujo. 2. Elabore un esquema del laboratorio e indique en l, las zonas de seguridad, la posicin del equipo de seguridad y marque la ruta de evacuacin desde su mesa. 3. En el esquema de la mesa de trabajo que elabor en el ejercicio anterior, marque la posicin de las vlvulas de seguridad.

El Vale de material de laboratorio.


Desarrollo a) Tomando como referencia el vale de laboratorio, que se encuentra en la charola de material, identifique y revise cuidadosamente, cada una de las piezas que se le proporcionaron, indicando en el vale, cualquier defecto que encuentre. b) Rotule cada pieza identificada con una etiqueta de masking tape. Rena en la charola el material de nombre y/o empleo desconocidos, o de cuyo estado tenga duda, y pregntelo a su profesor. Espere a que su profesor compruebe que su marcado es correcto. c) Una vez revisado todo el material, complete la informacin que se solicita en el vale y entrguelo al personal tcnico de laboratorio. Cuestionario 1. Para qu se emplea cada una de las piezas de material de laboratorio siguientes? Tubo de ensaye
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Pipeta Bureta Probeta Mortero

Manejo del mechero Fisher.


Desarrollo a) No encienda el mechero hasta que su profesor se lo indique. b) Asegrese que el tornillo de control de flujo de gas est abierto aproximadamente a la mitad de su capacidad total. El flujo de gas se disminuye girando el tornillo en el sentido de las manecillas del reloj y se aumenta en sentido contrario. c) Si es necesario, conecte el tubo de hule del mechero a la llave de gas, la llave debe estar completamente cerrada, con la manija en posicin transversal respecto de la salida del gas. Recuerde que la tubera de gas es de color amarillo. d) Abra la llave de gas, colocando la manija en un ngulo aproximado de 45 grados respecto de la salida del gas. Escuchar un ligero zumbido provocado por el flujo del gas. e) Encienda el mechero, aproximando la flama de un cerillo o encendedor al borde de la parte superior del mechero, no coloque la flama del cerillo en el centro del mechero porque el flujo de gas la apagara. Tenga cuidado de no acercar su rostro ni objetos inflamables al mechero al momento de encenderlo, ni mientras est encendido. f) Ajuste la cantidad de aire que entra, usando el arillo de control de flujo de aire, para cambiar el tamao de las aberturas de la parte inferior, hasta que la flama tenga una zona central de color azul claro, rodeada de otra de color azul oscuro o violeta, la parte ms caliente de la flama se encuentra en la punta de la zona azul claro interna. Cuando la combustin es incompleta, por falta de oxgeno, la flama tiene color amarillo. g) Deje el mechero encendido para usarlo en el ejercicio siguiente Cuestionario 1. Elabore un esquema del mechero Fisher, en el que se indique la posicin del tornillo de control de flujo de gas, el arillo de control de flujo de aire y la entrada del gas.

Como calentar un lquido en un tubo de ensaye.


Desarrollo a) En este ejercicio es aconsejable que todos los miembros del equipo se coloquen las mascarillas de proteccin. b) Llene su tubo de ensaye, aproximadamente hasta el 20% de su capacidad, con agua de la llave y sujtelo con las pinzas para tubo de ensaye. Si es necesario, qutese los guantes de ltex antes de iniciar el calentamiento. c) Coloque el tubo sobre la flama del mechero, en posicin inclinada, aproximadamente 70 grados, cuidando que la flama caliente la parte superior del lquido. Nunca caliente un tubo de ensaye en el fondo, o en posicin vertical, porque se puede proyectar su contenido.
Introduccin al Laboratorio de Bioqumica Mdica I mlvm / maov / 2

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d) Mueva el tubo cuidadosamente, sin sacarlo de la flama, para que todo el lquido se caliente de la manera ms uniforme posible. e) Durante el calentamiento, dirija la boca del tubo hacia un lugar en que no se encuentre ninguna persona o material que se pueda daar. f) Jams mire directamente la boca de un tubo de ensaye que se est calentando, aunque est fuera de la flama del mechero. g) Contine el calentamiento hasta lograr que el agua hierva, sin proyectarse. h) Nunca caliente solventes orgnicos en tubo de ensaye, directamente en la flama del mechero; siempre se hace en bao mara. Cuestionario 1. Elabore un esquema de la forma correcta de calentar un lquido en un tubo de ensaye.

Manejo de reactivos lquidos.


Desarrollo a) Cuando se miden cantidades pequeas de reactivos lquidos, se usan pipetas graduadas o volumtricas. Para manejar con seguridad reactivos lquidos con pipeta, se usa siempre la pre-pipeta. b) Al abrir un frasco de reactivo, coloque el tapn sobre la mesa para evitar contaminacin. c) Para extraer el lquido utilice una pipeta o un gotero limpios, Nunca vierta reactivos, directamente del frasco para evitar escurrimientos. d) Usando la pipeta de 10 mL, transfiera 5 mL de agua de un vaso de precipitados a un tubo de ensaye. Repita la maniobra hasta que pueda realizarla con seguridad. e) Para manejar cantidades mayores de lquidos se usa la bureta. Siguiendo las instrucciones de su profesor, monte la bureta en el soporte universal. La graduacin debe quedar hacia adelante. f) Usando un vaso de precipitados, llene completamente la bureta con agua de la llave. No importa que rebase la graduacin, pero tenga cuidado de que el agua no se derrame. g) Coloque el vaso de precipitados debajo de la bureta y usando la mano izquierda abra completamente la llave de esta para que el agua salga con velocidad y arrastre todo el aire del cuerpo de la bureta y de la llave. h) Vuelva a llenar la bureta y ajuste el nivel superior a la graduacin. i) El uso ms frecuente de la bureta es la titulacin, en la cual se aade el reactivo gota a gota. Usando un matraz Erlenmeyer para recibir el agua, practique a abrir la llave de la bureta, siempre con la mano izquierda, hasta obtener velocidades de goteo constantes y a cerrarla cuando sea necesario. Es conveniente que al realizar esta maniobra utilice guantes de ciruga porque los reactivos que se usarn en las prcticas de laboratorio pueden causar dao al entrar en contacto con la piel. j) El otro uso de la bureta es para aadir cantidades medidas de reactivo. Coloque un vaso de precipitados debajo de la bureta y practique a vaciar la bureta, 5 mL cada vez. Recuerde que la llave se maneja nicamente con la mano izquierda. Nunca debe dejar
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que la bureta se vace completamente, pero si esto llegara a suceder, debe reiniciar el trabajo, en la forma como se indic en los incisos f, g y h de este ejercicio. Cuestionario 1. Escriba la forma como prepar su pre-pipeta. 2. Elabore un esquema de la forma correcta de montar la bureta. 3. Explique por qu se maneja la llave de la bureta con la mano izquierda.

Manejo de reactivos slidos.


Desarrollo a) Prepare una charola de papel, usando una hoja de papel limpio, si es posible encerado. La charola se prepara doblando el papel, aproximadamente a un centmetro de cada borde, y colocndolos en ngulo recto para formar una pared alrededor del papel. El tamao de la charola depende de la cantidad de reactivo a pesar. b) Encienda la balanza y espere a que se estabilice la lectura, si no est en cero, ajstela usando el botn de tarar (T) c) Coloque la charola de papel en el plato de la balanza. Cuando se estabilice la lectura, tare a cero la balanza. d) Abra el recipiente de reactivo y coloque la tapa sobre la mesa, boca arriba para evitar contaminacin. e) Usando una esptula, saque el reactivo del recipiente y colquelo sobre la charola de papel. Si se rebasa la cantidad deseada, regrese el exceso de reactivo a su recipiente, usando la esptula. Nunca regrese al recipiente original un reactivo que se derrame fuera de la charola de papel o sobre la mesa. f) Al terminar de pesar, cierre inmediatamente el frasco de reactivo para evitar que se hidrate y contamine. g) Pese la cantidad de Cloruro de Sodio (NaCl, sal de mesa) que le indique su profesor y colquela en el sobre de papel que se le proporcione. Escriba en el sobre, la cantidad de reactivo que contiene y entrguelo a su profesor. Cuestionario 1. Elabore un diagrama de la balanza, sealando la posicin del botn de encendido y apagado, del botn de tara y el de registro (R). 2. Cul es la funcin del botn de registro?

Como tarar tubos para centrifugacin.


Desarrollo a) En este ejercicio se usar la balanza de dos platillos. b) Coloque las pesas de medicin en la posicin de cero. Asegrese que la aguja o fiel de la balanza est en posicin cero. Si no lo est gire cuidadosamente las pesas de ajuste en el sentido que sea necesario, hasta lograr el equilibrio. c) Coloque un frasco Gerber en cada platillo, cuidando que el ms pesado quede en el platillo del lado izquierdo.
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d) Deslice las pesas de medicin de la balanza, hasta lograr que el fiel vuelva a la posicin de equilibrio. e) Coloque en cada frasco, una camisa de la centrfuga con un tubo de centrifuga que contenga 5 mL de agua. f) Si el fiel de la balanza sale de equilibrio, usando una pipeta, aada agua de la llave, entre la camisa y el tubo de ensaye ms ligero, hasta lograr que el fiel de la balanza regrese al equilibrio. g) Coloque los tubos tarados en la centrifuga, en posiciones simtricas y pngala a funcionar al mximo de revoluciones durante 3 minuto. Cuestionario 1. Elabore un esquema de la balanza de platillo, sealando la posicin de las pesas de ajuste y las de medicin. 2. Escriba la razn por la que es necesario tarar los tubos antes de centrifugar.

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PROPIEDADES DE LAS SOLUCIONES


Medida de la presin osmtica. Mtodo directo
Material Reactivos Saco de colodin grande Sacarosa 6 M con rojo de Fenol Tubo capilar con tapn ( = 1.325 g / cm3) Vaso de precipitados de 500 mL Agua Soporte Universal Pinza para bureta Desarrollo a) El osmmetro que se encuentra en la mesa al frente del laboratorio, consiste en el cuerpo de una jeringa, cerrada con una membrana de colodin grande previamente preparado, conteniendo Sacarosa 6 M, teida con rojo neutro. En la jeringa se fija un tubo capilar. El dispositivo se sumerge en un vaso de precipitados con agua. b) Marque el nivel inicial de la Sacarosa en el tubo capilar. c) Observe el nivel de la solucin cada 10 minutos, hasta que se detenga el proceso, anotando la altura ascendida en cada intervalo en la tabla siguiente. Tiempo min 10 20 30 40 Altura cm Tiempo min 50 60 70 80 Altura cm Tiempo min 90 100 110 120 Altura cm

Cuestionario 1. Cundo debe detenerse la smosis? 2. La presin en el osmmetro depende de la altura o del radio de la columna de solucin? 3. Con los datos obtenidos, calcule la presin osmtica () a cada tiempo sabiendo que la densidad de la solucin de Sacarosa es 1.088 g/mL y la aceleracin de la gravedad es 9.81 m s-2. Anote los resultados en la tabla siguiente. Tiempo min 10 20 30 Pa Tiempo min 40 50 60 Pa Tiempo min 70 80 90 Pa Tiempo min 100 110 120 Pa

4. Construya la grfica de presin osmtica en funcin del tiempo.

Preparacin de una solucin de NaCl 2% p/v


Material Matraz aforado de 50 o 25 mL Pipetas de 10, 5 y 1 mL
Propiedades de las Soluciones

Reactivos NaCl (cloruro de sodio) slido agua destilada


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Desarrollo a) Calcule el volumen de una solucin de NaCl de concentracin 2%, que se puede preparar con la cantidad de cloruro de sodio slido que le proporcionen, considerando que el reactivo tiene 100% de pureza. b) Anote a continuacin los mL de solucin de NaCl que preparar. gramos de NaCl ______________ g Volumen de solucin __________ mL c) En un vaso de precipitados de 100 mL disuelva el cloruro de sodio en una cantidad de agua destilada menor que el volumen final de solucin y virtalo en un matraz aforado del volumen adecuado. d) Con un vaso de precipitados de 100 mL llene el cuerpo del matraz aforado con agua destilada, sin llegar al cuello. Para llenar el matraz hasta la marca de aforo, utilice una pipeta de 5 10 mL e) Guarde esta solucin porque la utilizar en el experimento de Dilisis. Cuestionario 1. Describa detalladamente los clculos realizados. 2. Considerando que la solucin es exactamente 2%, calcule su concentracin en: Molaridad Normalidad Osmolaridad mEq/mL mg/mL moles %

Dilisis
Material Saco de colodin pequeo Pipeta 10 o 5 mL Vaso de precipitados de 500 mL hilo de algodn 12 tubos de ensayo Reactivos NaCl 2% preparado por su equipo Almidn 2% Solucin de Lugol Solucin de AgNO3 (nitrato de plata) agua destilada

Desarrollo a) En este experimento se utilizar la solucin de NaCl 2% que prepar su equipo. b) Humedezca un saco pequeo de colodin en agua destilada (mnimo 10 minutos) y ate un extremo con el hilo de algodn que se le proporcionar. c) Con las pipetas apropiadas, coloque 1 mL de NaCl 2% y 10 mL de Almidn 1% y ate cuidadosamente el otro extremo del saco

Propiedades de las Soluciones

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d) Llene un vaso de precipitados de 500 mL con H2O destilada hasta 2/3 partes de su capacidad e) Prepare dos tubos de ensayo, uno con 2 mL de NaCl al 2% y agrguele 2 gotas de AgNO3 (nitrato de plata), al otro tubo agrguele 2 mL de solucin de almidn al 1% y 2 gotas de solucin de Lugol. Rotlelos como testigo + de cloruros y almidn respectivamente f) En un tubo de ensaye coloque 2 mL del agua contenida en el vaso y aada 2 gotas de Lugol. En ausencia de almidn la solucin se torna de color amarillo. g) En otro tubo coloque 2 mL del agua contenida en el vaso y aada 2 gotas de AgNO3 Sin cloruros, la solucin permanece translcida. h) Coloque el saco con Almidn y NaCl en el vaso de precipitados. i) Despus de introducir el saco, determine la presencia de Almidn y/o Cl- en el agua destilada cada 30 minutos, como hizo en los incisos e y f, hasta completar 2 horas. j) Los testigos negativos t(-) para Almidn y Cl-, sern las muestras tomadas a tiempo cero, antes de introducir el saco. k) Anote los resultados en la tabla siguiente. Tiempo/min Cl Almidn l) No deseche los tubos, para comparar los resultados a los diferentes tiempos. Cuestionario 1. Escriba si al final dializaron el Almidn y los Cl- a travs de la membrana. 2. Anote las reacciones qumicas que us para detectar Almidn y Cl-. 0 Testigo (-) 20 40 60 80 Testigo (+)

Preparacin de una solucin de CH3COOH 0.1M


Material Matraz aforado de 100 mL Pipetas de 10,5 y 1 mL Reactivos CH3COOH (cido actico) grado reactivo Agua destilada

Desarrollo a) Calcule el volumen de una solucin de CH3COOH comercial, con PM = 60, pureza = 99.7% y densidad a 20 C de 1.06 g/mL, que necesita para preparar 100 mL de solucin 0.1M de CH3COOH b) Anote el volumen de CH3COOH que usar para preparar la solucin. mL de CH3COOH = __________ mL c) Usando una pipeta, mida el volumen calculado de cido actico y colquelo en un matraz aforado de 100 mL limpio y seco. Mida la cantidad con la mayor precisin y cuidado posibles.
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d) Con un vaso de precipitados de 100 mL llene el cuerpo del matraz aforado con agua destilada, sin llegar al cuello. Para llenar el matraz hasta la marca de aforo de 100 mL, utilice la pizeta o una pipeta de 5 10 mL. e) Rotule y guarde esta solucin porque la utilizar en el experimento de Titulacin directa. Cuestionario 1. Describa detalladamente los clculos que realiz para conocer el volumen de CH3COOH concentrado que utiliz para preparar 100 mL de dicha solucin. 2. Considerando que la solucin es exactamente 0.1M calcule su concentracin en: % (p/v) Normalidad Osmolaridad mmoles/L mg/L mEq%

Titulacin
Material Matraz aforado de 100 mL Pipeta volumtrica de 10 5 mL Bureta Reactivos CH3COOH 0.1M preparado por su equipo indicador de Fenolftalena NaOH (hidrxido de sodio) 0.2N agua destilada

Desarrollo a) En este experimento se utilizar la solucin de CH3COOH 0.1 M que prepar su equipo. b) En un matraz Erlenmeyer de 250 mL coloque 10 mL de la solucin de CH3COOH 0.1 M, usando una pipeta volumtrica. c) Aada 3 gotas de Fenolftalena. d) Monte la Bureta en el soporte universal, usando la pinza para bureta. e) Usando un vaso de precipitados de 100 mL, llene la bureta con NaOH (hidrxido de sodio) 0.2 N. Recuerde que no debe dejar burbujas de aire dentro de la bureta. f) Titule dejando caer gota a gota el hidrxido dentro del matraz Erlenmeyer, hasta que la solucin adquiera un ligero color rosa, que persista por 30 segundos. Anote el volumen hasta ese momento y aada una gota ms, la solucin debe tomar un color rosa intenso. g) Anote los mL de NaOH 0.2N que gast para neutralizar los 10 mL de CH3COOH.
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Resultado = _______________ mL de NaOH 0.2N Cuestionario 1. Considerando que la solucin de NaOH es exactamente 0.2N, calcule la verdadera normalidad del CH3COOH problema.

Difusin en lquidos
Material Probeta de 100 mL Mechero Bunsen Reactivos Azul de Metileno en polvo agua

Desarrollo a) Llene casi completamente una probeta de 100 mL con agua de la llave. b) Espolvoree una pequea cantidad de azul de metileno sobre la superficie y observe. Anote sus observaciones.

c) Caliente ligeramente un punto de la probeta y observe lo que sucede. Anote sus observaciones.

d) Observe el descenso del colorante a travs de la columna de agua, anote si es uniforme o no antes y despus de calentar.

Cuestionario 1. Escriba el concepto de disolucin, difusin y conveccin. 2. Elabore una tabla donde resuma 3 caractersticas que permitan diferenciar los tres fenmenos anteriores

Propiedades de las Soluciones

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SOLUCIONES ELECTROLTICAS y pH
Disociacin de una sal y Electrolisis del agua
Material Cristalizador Puente de Wheatstone Electrodos de carbn matraz de 500 mL Probeta de 50 mL Desarrollo a) Coloque el cristalizador sobre un fondo blanco y agregue 50 mL de solucin de NaCl 10%. b) Introduzca en la solucin los electrodos de carbn conectados a una fuente de energa como el Puente de Wheatstone (ver esquema). c) Observe si se desprende o no, gas en los electrodos y anote en cual. Reactivos NaCl 10% (50 mL) Azul de Bromofenol agua destilada

d) Agregue 3 gotas de Azul de Bromofenol como indicador. Este indicador es amarillo a pH por debajo de 3 y azul o prpura a pH mayor e) Observe los cambios de coloracin cerca de los electrodos y antelos.

Cuestionario 1. Anote a que se deben los cambios de color del indicador. 2. Escriba las reacciones qumicas que se llevan a cabo en cada electrodo.

Conduccin de corriente en electrolitos fuertes y dbiles


Material Vaso de precipitados de 100 mL caimanes con alambre Puente de Wheatstone Electrodos de carbn Reactivos Solucin de HCl (cido clorhdrico) 0.5 M Solucin de CH3COOH (cido actico) 0.5 M

Soluciones Electrolticas y pH

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Desarrollo a) Coloque la solucin de CH3COOH 0.5 M en un vaso de precipitados, en cantidad suficiente para cubrir la tercera parte de los electrodos. b) Introduzca los electrodos conectados a una fuente de energa (ver esquema). c) Registre la intensidad de la luz emitida por el foco d) Aproxime los electrodos, sin que se toquen y observe la intensidad de la luz emitida.

d) Devuelva la solucin de CH3COOH 0.5 M al frasco correspondiente. Cuestionario 1. Escriba qu relacin existe entre la intensidad luminosa y la distancia que separa los electrodos, y explique por qu.

Desarrollo (continuacin) e) Lave bien el material y repita el experimento, incisos a, b, c y d, usando HCl 0.5 M. f) Compare la intensidad de la luz emitida al usar esta solucin respecto del CH3COOH. Anote sus observaciones.

g) Devuelva la solucin de HCl 0.5 M al frasco correspondiente. Cuestionario (continuacin) 2. Anote a que se deben las diferencias en la intensidad de la luz emitida

Diferencia de conductividad entre electrolitos dbiles y fuertes


Material Pipetas de 10 mL Medidor de Conductividad Reactivos Solucin de HCl 0.5 M Solucin de CH3COOH 0.5M

Soluciones Electrolticas y pH

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Desarrollo a) Siguiendo las instrucciones del Apndice II, determine la resistencia de las soluciones de HCl 0.5 M y CH3COOH 0.5 M. b) Cuando termine de usar cada solucin devulvala al frasco correspondiente. Cuestionario 1. Calcule la conductividad de cada solucin. 2. Compare los valores de conductividad y concluya respecto de la fuerza de cada electrolito.

Preparacin de soluciones de pH conocido con electrolitos fuertes y dbiles.


Material Matraz aforado de 250 y 100 mL vaso de precipitados de 100 mL Pipetas de 1 y 10 mL Reactivos CH3COOH grado reactivo HCl grado reactivo H2O destilada

Desarrollo a) Empleando la frmula para cidos fuertes, calcule la concentracin de cinco soluciones de HCl de pH 0.7, 1, 1.3, 1.6 y 2 b) Calcule los volmenes de HCl con 37% de pureza y densidad = 1.18 g/mL, necesarios para preparar 250 mL de cada una de las cinco soluciones de pH conocido calculadas en el inciso anterior (a). c) Empleando la frmula para cidos dbiles, calcule la concentracin de cinco soluciones de CH3COOH de pH 2.72, 2.87, 3.02, 3.17 y 3.37. d) Calcule los volmenes de CH3COOH con 99.7% de pureza, densidad = 1.06 g/mL y pKa = 4.74, necesarios para preparar 250 mL de cada una de las cinco soluciones de pH conocido calculadas en el inciso anterior (c). e) Prepare las soluciones de HCl y CH3COOH que le indique su profesor y mida el pH de cada solucin por el mtodo potenciomtrico. Solucin CH3COOH HCl f) Guarde las soluciones preparadas para usarlas en el experimento siguiente. pH Terico pH Potenciomtrico

Soluciones Electrolticas y pH

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Acidez de titulacin
Material Matraz Erlenmeyer de 250 mL Bureta Reactivos Solucin de NaOH 0.1N Solucin de HCl preparada por su equipo Solucin de CH3COOH preparada por su equipo Fenolftalena

Desarrollo a) Mida exactamente 10 mL de la solucin de CH3COOH, preparada en el experimento anterior y colquelos en un matraz Erlenmeyer de 250 mL. b) Aada 3 gotas de Fenolftalena y titule la muestra con NaOH 0.1N. c) Mida exactamente 10 mL de la solucin de HCl, preparada en el experimento anterior y colquelos en un matraz Erlenmeyer de 250 mL. d) Aada 3 gotas de Fenolftalena y titule la muestra con NaOH 0.1N. e) Anote sus resultados en el cuadro siguiente. Solucin CH3COOH HCl Cuestionario 1. Describa los conceptos de acidez total y acidez verdadera. 2. Explique sus resultados experimentales, tomando como base los conceptos anteriores. pH Gasto de NaOH 0.1N

Soluciones Electrolticas y pH

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SOLUCIONES REGULADORAS
Apreciacin del poder regulador y efecto de la concentracin
Material 12 tubos de ensayo Pipeta de 10 5 mL Pipeta de 1 mL Reactivos KCl (cloruro de potasio) 0.5M KH2PO4 (fosfato de potasio monobsico) 0.01 M y 0.1M Na2HPO4 (fosfato de sodio dibsico) 0.01 M y 0.1M Indicador de Rojo de Fenol Indicador de Verde de Bromocresol Indicador de Azul de Timol HCl 0.01N y 0.1N NaOH 0.01N y 0.1N Fenolftalena

Desarrollo a) Prepare 3 series de cuatro tubos cada una con la composicin siguiente. Serie Tubo I II 1 5 mL H2O hervida y fra 5 mL H2O hervida y fra 2 5 mL KCl 0.5M 5 mL KCl 0.5M 2 mL KH2PO4 0.01M + 2 mL KH2PO4 0.01M + 3 3 mL Na2HPO4 0.01M 3 mL Na2HPO4 0.01M 2 mL KH2PO4 0.1M + 2 mL KH2PO4 0.1M + 4 3 mL Na2HPO4 0.1M 3 mL Na2HPO4 0.1M Indicador Rojo de fenol Verde de Bromocresol III 5 mL H2O hervida y fra 5 mL KCl 0.5M 2 mL KH2PO4 0.01M + 3 mL Na2HPO4 0.01M 2 mL KH2PO4 0.1M + 3 mL Na2HPO4 0.1M Azul de timol

b) Serie I. Compruebe que el pH es neutro aadiendo a cada tubo 5 gotas de Rojo de Fenol. Este indicador vira de amarillo a rojo en el rango de pH de 6.4 a 8.0. A pH neutro es rosa plido. c) Serie II. Aada a cada uno de los tubos, 5 gotas de Verde de Bromocresol. Este indicador vira de amarillo a verde en el rango de pH de 3.8 a 5.4, y a azul a pH mayor. Aada al tubo 1, 10 gotas de HCl 0.01N, y observe el cambio de color. Cuente el nmero de gotas, de HCl 0.01N que debe agregar al tubo 2 para igualar el color del tubo 1. Para los tubos 3 y 4 cuente las gotas de HCl 0.1N que debe agregar para igualar el color del tubo 1. Anote sus resultados en la tabla siguiente, multiplicando el nmero de gotas del HCl 0.1N por diez para poder comparar con los tubos 1 y 2. d) Serie III. Agregue a los cuatro tubos, 5 gotas de Azul de Timol. Este indicador vira de amarillo a azul en el rango de pH de 8.0 a 9.6. Agregue al tubo 1, 10 gotas de NaOH 0.01N. Cuente el nmero de gotas de NaOH 0.01N que debe agregar al tubo 2 para igualar el color del tubo 1. Para los tubos 3 y 4 cuente las gotas de NaOH 0.1N que debe agregar para igualar el color del tubo 1. Anote sus resultados en la tabla, multiplicando el nmero de gotas del NaOH 0.1N por diez, para poder comparar con los tubos 1 y 2.

Soluciones Reguladoras

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Serie II III

Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

Tubo 4

Cuestionario 1. Escriba que indica el cambio de color en cada una de las series y la razn de la diferencia, en las cantidades cido y base que hay que agregar a los tubos 2, 3 y 4 de cada serie, para igualar la coloracin con el tubo 1. 2. Escriba las reacciones que ocurren al aadir, el cido y la base fuertes al sistema amortiguador de fosfatos de las series II y III.

Curva de titulacin de Glicina


Material 2 vasos de precipitados de 100 mL Pipeta de 10 mL Probeta de 50 mL Agitador magntico Potencimetro Bureta Desarrollo a) En un vaso de precipitados de 100 mL, coloque 30 mL de Glicina 0.1N. b) Introduzca en la solucin una barra magntica y colquela sobre el agitador. c) Determine el pH de la muestra con el potencimetro. (ver esquema ) d) Titule aadiendo los volmenes de HCl 0.1N que se indican en la tabla siguiente. e) Registre sus resultados en la tabla. mL agregados de HCl 0.1N Aadido Acumulado 0 0 0.5 0.5 0.5 1 1 2 2 4 3 7 4 11 pH de la mL agregados de solucin de HCl 0.1N Glicina Aadido Acumulado 4 15 5 20 5 25 2 27 1 28 1 29 1 30 pH de la solucin de Glicina Reactivos Glicina 0.1N NaOH 0.1N HCl 0.1N

f) En un vaso de precipitados limpio de 100 mL, coloque 30 mL de Glicina 0.1N. g) Introduzca en la solucin una barra magntica y colquela sobre el agitador.
Soluciones Reguladoras mlvm / maov / 16

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h) Determine el pH de la muestra con el potencimetro. i) Titule aadiendo los volmenes de NaOH 0.1N que se indican en la tabla siguiente. j) Registre sus resultados en la tabla. mL agregados de NaOH 0.1N Aadido Acumulado 0 0 0.5 0.5 0.5 1 1 2 2 4 3 7 4 11 pH de la mL agregados de solucin de NaOH 0.1N Glicina Aadido Acumulado 4 15 5 20 5 25 2 27 1 28 1 29 1 30 pH de la solucin de Glicina

Cuestionario 1. Elabore la grfica de pH en funcin del volumen acumulado de HCl y NaOH. 2. En la curva de titulacin, calcule los pKa de los grupos amino y carboxilo. 3. Compare los pKa obtenidos en la curva, con los valores tericos para Glicina y calcule el punto isoelctrico real y experimental.

Preparacin de soluciones amortiguadoras de pH conocido.


Material 2 vasos de precipitados de 100 mL Pipeta de 10 mL Probeta de 50 mL Potencimetro Reactivos KH2PO4 0.1M Na2HPO4 0.1M

Desarrollo a) Calcule los volmenes de KH2PO4 0.1M y Na2HPO4 0.1M necesarios para preparar 50 mL de soluciones amortiguadoras con pH de: 6.2, 6.6, 7.0, 7.2, 7.4, 7.8 y 8.2. El pKa del par conjugado es de 7.2. b) Tomando como base el resultado de sus clculos, prepare la solucin que le indique su profesor y compruebe el valor de pH con el potencimetro. Cuestionario 1. Describa el procedimiento de preparacin de la solucin.

Soluciones Reguladoras

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PROPIEDADES DE PROTENAS
Determinacin del punto isoelctrico de la Casena
Material 10 tubos de ensayo Pipetas de 10 mL Pipetas de 5 mL Pipetas de 1 mL Reactivos Casena 5% en CH3COONa 0.1N CH3COOH 1N CH3COOH 0.1N CH3COOH 0.01N H2O Destilada

Desarrollo a) Preparar una serie de 10 tubos de ensayo, con las soluciones que se indican en la tabla de la pgina siguiente. Tubo Solucin mL de Casena 5% en CH3COONa 0.1N mL de H2O Destilada mL de CH3COOH 1N mL de CH3COOH 0.1N mL de CH3COOH 0.01N pH Terico Observacin a 15 min. Observacin a 30 min. b) Mezcle completamente el contenido de cada tubo. c) Observe el grado de turbidez o la precipitacin que se produce en cada tubo inmediatamente despus de prepararlo y transcurridos 15' y 30', anotando en la tabla con cruces. d) Si no se observa diferencia en el grado de turbidez de los tubos, coloque las soluciones en tubos de centrfuga y centrifugue 10 minutos a 1000 r.p.m. y anote las diferencias de tamao del precipitado de cada uno de los tubos. Cuestionario 1. Calcule el pH terico de cada tubo y antelo en la tabla, marcando el punto Isoelctrico de la Casena. 0.6 1.2 0.2 0.5 1.0 2.0 4.0 8.0 1 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 1 8 1 9 1 10 1 9.0

8.4 7.8 8.8 8.5

8.0 7.0

5.0 1.0 7.4 1.6

Propiedades de Protenas

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Reaccin de Ninhidrina.
Material Papel Whatman #1 Reactivos Ninhidrina en Butanol al 0.1% Glicina 2% Peptona 2% Gelatina 2% Casena 2% Albmina 2% agua destilada

Desarrollo PRECAUCIN! Use guantes o pinzas para manipular el papel. a) Numere 7 rectngulos de papel filtro Whatman # 1 y coloque 3 gotas de: (1) H2O como testigo negativo, (2) Glicina, (3) Peptona, (4) Gelatina, (5) Casena, (6) Albmina y (7) la sustancia problema. Todos al 2%. b) Con lpiz, anote debajo de cada muestra el nombre del compuesto y adale una gota de solucin de Ninhidrina en Butanol al 0.1%. c) Coloque las muestras en el horno a 110 C durante 5 min, cuidando que no disminuya la temperatura. d) Anote la intensidad de la coloracin obtenida, en la tabla resumen que se encuentra al final del captulo. Cuestionario 1. Escriba la reaccin qumica efectuada. 2. Escriba los nombres de otras sustancias que dan positiva la reaccin de Ninhidrina, adems de protenas, pptidos y aminocidos.

Reaccin del Biuret


Material 6 tubos de ensayo Pipetas de 5 mL Reactivos CuSO4 (sulfato de cobre)1% NaOH 10% Peptona 2% Gelatina 2% Casena 2% Albmina 2% agua destilada

Desarrollo a) Numere 6 tubos de ensaye y agregue 2 mL de: (1) H2O como testigo negativo, (2) Peptona, (3) Gelatina, (4) Casena, (5) Albmina y (6) la sustancia problema. Todos al 2%. b) Aada a cada tubo, 2 mL de solucin NaOH al 10%. PRECAUCIN!!!

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c) Aada 3 gotas de solucin de CuSO4 al 1%, a cada tubo. d) Mezcle completamente el contenido de los tubos y djelos reaccionar en reposo. La aparicin de una coloracin violeta o rosa, mximo en 20 minutos, se considera prueba positiva. La intensidad del color es proporcional al nmero de enlaces petdicos. e) Anote la intensidad de la coloracin obtenida en la tabla resumen que se encuentra al final del captulo.

Reaccin Xantoprotica
Material 6 tubos de ensayo Pipetas de 5 mL Reactivos HNO3 concentrado NH4OH (hidrxido de amonio) concentrado Peptona 2% Gelatina 2% Casena 2% Albmina 2% agua destilada

Desarrollo a) Numere 6 tubos de ensaye y agregue 2 mL de: (1) H2O como testigo negativo, (2) Peptona, (3) Gelatina, (4) Casena, (5) Albmina y (6) la sustancia problema. Todos al 2%. b) Con cuidado!, aada al tubo uno, 1 mL de HNO3 concentrado, mezcle completamente. c) Caliente ligeramente con precaucin y observe si aparece una coloracin amarilla. d) Deje enfriar la solucin y aada, resbalando por la pared del tubo, lenta y cuidadosamente para estratificar, 15 gotas de NH4OH concentrado, para obtener alcalinidad, observe si en la interfase aparece un anillo de color naranja. e) Repita el experimento (incisos b, c y d) con el resto de los tubos. f) Anote sus resultados en la tabla resumen que se encuentra al final del captulo. Cuestionario 1. Se puede considerar esta reaccin general para todas las protenas? 2. Explique por qu se tie de amarillo la piel al contacto con el HNO3.

Reaccin de Millon
Material 6 tubos de ensayo Pipetas de 5 mL Reactivos Reactivo de Millon Peptona 2% Gelatina 2% Casena 2% Albmina 2% agua destilada
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Desarrollo a) Numere 6 tubos de ensaye y agregue 2 mL de: (1) H2O como testigo negativo, (2) Peptona, (3) Gelatina, (4) Casena, (5) Albmina y (6) la sustancia problema. Todos al 2%. b) Aada 5 gotas del reactivo de Millon a cada tubo y mezcle completamente. c) Con sumo cuidado, caliente cada tubo hasta que empiece a hervir PRECAUCIN!!!! La presencia de Tirosina se pone de manifiesto por la aparicin de un precipitado blanco que por accin del calor se vuelve rojo. La presencia de sales, as como soluciones muy alcalinas puede interferir en esta reaccin. d) Anote en que soluciones apareci el precipitado y su coloracin, en la tabla resumen que se encuentra al final del captulo. Cuestionario 1. Escriba la composicin del reactivo de Milln. 2. Anote la reaccin qumica que se llev a cabo en este experimento.

Reaccin de aminocidos azufrados.


Material 6 tubos de ensayo Pipetas de 5 mL Vaso de Precipitados de 500 mL Reactivos NaOH 10% Pb(CH3COO)2 (acetato de plomo) Peptona 2% Gelatina 2% Casena 2% Albmina 2% agua destilada

Desarrollo a) Numere 6 tubos de ensaye y agregue 2 mL de: (1) H2O como testigo negativo, (2) Peptona, (3) Gelatina, (4) Casena, (5) Albmina y (6) la sustancia problema. Todos al 2%. b) Aada a cada tubo 2 mL de solucin de NaOH al 10% y calintelo ligeramente. PRECAUCIN! c) Aada a todos los tubos, 0.5 mL de solucin de Pb(CH3COO)2. d) Coloque los tubos en bao Mara a ebullicin por 5 min. El oscurecimiento de la
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solucin o la formacin de un precipitado negro, indica la presencia de aminocidos azufrados. e) Anote sus resultados en la tabla resumen que se encuentra a continuacin. Cuestionario 1. Escriba la reaccin qumica que se ha efectuado. 2. Escriba algunas sustancias que pueden interferir en esta reaccin Resumen de propiedades qumicas de aminocidos Solucin Ninhidrina Biuret Xantoprotica Millon Aa azufrados Glicina Peptona Gelatina Casena Albmina Problema

Precipitacin de protenas por metales pesados


Material 6 tubos de ensayo Pipetas de 5 mL Reactivos FeCl3 (cloruro frrico) 3% AgNO3 2% HgCl2 (cloruro mercrico) 2% Pb(CH3COO)2 2% Peptona 2% Gelatina 2% Casena 2% Albmina 2%

Desarrollo a) Prepare una serie de 6 tubos de ensaye numerados y agregue 2 mL de: (1) H2O como testigo negativo, (2) Peptona, (3) Gelatina, (4) Casena, (5) Albmina y (6) la sustancia problema. Todos al 2%. H2O. Esta ser su serie testigo en este y los experimentos siguientes. b) Prepare otra serie de tubos igual a la del inciso anterior. A cada tubo de esta serie adale 2 gotas de solucin de FeCl3 al 3%. c) Observe y anote. A continuacin aada a cada tubo exceso de FeCl3 (5 gotas ms) si no ocurre precipitacin compruebe el pH. d) Repita los incisos b y c utilizando AgNO3, HgCl2 y Pb(CH3COO)2, todos al 2%. e) Anote sus resultados en la tabla resumen que se encuentra al final del captulo. Cuestionario 1. Qu efecto tiene el pH en la precipitacin de las protenas con metales pesados? 2. Todos los metales pesados tienen el mismo efecto precipitante?, Por qu?

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Precipitacin de protenas por cidos fuertes.


Material 6 tubos de ensayo Pipetas de 5 mL Reactivos CCl3COOH (cido tricloroactico) 5% Peptona 2% Gelatina 2% Casena 2% Albmina 2%

Desarrollo a) Numere 6 tubos de ensaye y agregue 2 mL de: (1) H2O como testigo negativo, (2) Peptona, (3) Gelatina, (4) Casena, (5) Albmina y (6) la sustancia problema. Todos al 2%. Su testigo negativo ser la serie preparada en el inciso a del experimento anterior. b) Aada 2 mL de CCl3COOH al 5%, a cada tubo. c) Anote sus resultados en la tabla resumen que se encuentra al final del captulo. Cuestionario 1. Anote el mecanismo del efecto desnaturalizante del CCl3COOH y, en general, de cualquier cido.

Precipitacin por alcohol


Material 6 tubos de ensayo Pipetas de 5 mL Reactivos Alcohol de 96 Peptona 2% Gelatina 2% Casena 2% Albmina 2%

Desarrollo a) Numere 6 tubos de ensaye y agregue 2 mL de: (1) H2O como testigo negativo, (2) Peptona, (3) Gelatina, (4) Casena, (5) Albmina y (6) la sustancia problema. Todos al 2%. Su testigo negativo ser la serie preparada en el inciso a del experimento de precipitacin por metales pesados. b) A cada tubo, agregue resbalando cuidadosamente por la pared, 3 mL de alcohol de 96 para estratificar, y observe lo que ocurre en la interfase. c) Anote sus resultados en la tabla resumen que se encuentra a continuacin. Cuestionario 1. Anote si se presenta turbidez o precipitacin en todos los tubos.

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Agente Solucin Peptona Albmina Gelatina Casena Problema Fe Hg Pb Ag CCl3COOH Alcohol

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CINTICA QUMICA Y CATLISIS


Comprobacin de la ley de accin de masas
Material 1 vaso de precipitados de 500 mL 4 vasos de pp. de 100 mL Probeta de 100 mL Pipetas de 1 mL Reactivos NH4SCN (sulfocianuro de amonio) 0.2M FeCl3 0.2M en HCl 0.1N NH4Cl (cloruro de amonio) 3M H2O Destilada

Desarrollo a) En un vaso de precipitados de 500 mL, coloque 100 mL de H2O destilada, ms 1 mL de solucin de NH4SCN 0.2M y 1 mL de solucin de FeCl3 0.2M en HCl 0.1N, y agite vigorosamente hasta mezclar completamente. Se observar la aparicin de un color rojo, debido a la formacin de Sulfocianuro frrico (Fe(SCN)3). Esta ser la mezcla reaccionante (M.R.) b) Numere cuatro vasos de pp. de 100 mL, y coloque en cada uno, 25 mL de la M.R. c) Agregue a cada vaso el volumen de la sustancia indicada en la tabla siguiente: vaso 1 2 3 4 0.5 1.0 mL de FeCl3 0.2M mL de NH4SCN 0.2M Solucin M.R. (testigo) 0.5 1.0 5.0 mL de NH4Cl 3M Color

Cuestionario 1. Observe la intensidad de la coloracin en cada vaso y antela en la tabla. 2. Explique sus resultados, con base en la ley de Accin de Masas. 3. Para cada uno de los vasos, escriba la reaccin qumica que se ha efectuado, y su direccin.

Velocidad de descomposicin del H2O2 y Orden de Reaccin


Material Matraz Erlenmeyer de 250 mL Pipetas de 10 mL 5 Vasos de precipitados de 150 mL Probeta de 100 mL Reactivos 0.25g de KI (yoduro de potasio) slido H2SO4 1:6 solucin de Almidn Na2S2O3 (tiosulfato de sodio) 0.02N H202 (perxido de hidrgeno) 0.2 % H2O Destilada

Desarrollo a) En un matraz Erlenmeyer de 250 mL, coloque 0.25 g de KI y aada 25 mL de solucin de H2SO4 1:6 (DE UNA BURETA DE 50 mL QUE USARA TODO EL GRUPO) Agite hasta disolucin completa y agregue 25 mL de H2O destilada para completar 50 mL. Esta solucin se denominar "solucin de HI (cido yodhdrico)" y se utilizar en este experimento y los dos siguientes.

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b) Prepare una serie de vasos de precipitados de 100mL que contengan las cantidades de reactivo que se indican en la tabla siguiente y mezcle completamente. Reactivo Solucin HI (mL) Na2S2O3 0.02N (mL) Almidn (gotas) Vaso 1 5 1.5 5 Vaso 2 5 1.5 5 Vaso 3 5 1.5 5 Vaso 4 5 1.5 5 Vaso 5 5 1.5 5

Agua destilado (mL) 3 2.5 2 1.5 1 c) Midiendo con la mayor precisin posible, agregue a cada vaso la cantidad de perxido de hidrgeno que se indican en la tabla siguiente y mezcle completamente. Vaso 1 Vaso 2 Vaso 3 Vaso 4 Vaso 5 H2O2 0.2% (mL) 0.5 1 1.5 2 2.5 d) Utilizando un cronmetro, mida el tiempo transcurrido desde que se inicia la adicin del perxido, hasta que en la solucin aparezca un color azul. Despus de que aparezca el color en cada vaso, mida la temperatura y el pH del contenido del mismo. e) Escriba sus resultados en la tabla siguiente Vaso 1 Tiempo / segundos Temperatura/C pH Cuestionario 1. Escriba las reacciones qumicas que se han efectuado. 2. Con los datos del experimento calcule la concentracin mM y la velocidad de descomposicin del perxido en mM/s, en cada vaso. 3. Elabore la grfica de velocidad de reaccin en funcin de la concentracin y determine el orden de reaccin y la constante de velocidad especfica. Vaso 2 Vaso 3 Vaso 4 Vaso 5

Influencia de la temperatura sobre la velocidad de una reaccin qumica


Material Pipetas de 10 mL Pipetas de 5 mL 5 vasos de precipitados de 150 mL Reactivos Solucin "HI" del experimento anterior solucin de Almidn Na2S2O3 (tiosulfato de sodio) 0.02N H202 0.2 % H2O Destilada

Desarrollo a) Prepare una serie de cinco vasos de precipitados como se indica en la tabla del inciso b del experimento de descomposicin del H2O2. b) Pre-incube la mezcla de reaccin durante 10 minutos en bao mara a la temperatura que le indique su profesor (bao de hielo, 40 60 C). c) Midiendo con la mayor precisin posible, agregue a cada vaso la cantidad de H2O2 que se indica la tabla del inciso c del experimento de descomposicin del H2O2, sin sacar el vaso del bao mara.
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d) Utilizando un cronmetro, mida el tiempo transcurrido desde que se inicia la adicin del perxido, hasta que en la solucin aparezca un color azul. Despus de que aparezca el color en cada vaso, mida la temperatura del contenido del mismo. e) Escriba sus resultados en la tabla siguiente Vaso 1 Tiempo / segundos Temperatura/C Cuestionario 1. Con los datos del experimento calcule la concentracin mM y la velocidad de descomposicin del perxido en mM/s, en cada vaso. 2. Elabore la grfica de velocidad de reaccin en funcin de la concentracin y determine el orden de reaccin y la constante de velocidad especfica a la temperatura asignada. 3. Con los valores de velocidad especfica de todo el grupo elabore la grafica de velocidad especfica en funcin de la Temperatura y determine la energa de activacin. Vaso 2 Vaso 3 Vaso 4 Vaso 5

Efecto del pH sobre la velocidad de una reaccin qumica.


Material Pipetas de 10 mL Pipetas de 5 mL 5 vasos de precipitados de 150 mL Reactivos Solucin "HI" del experimento anterior solucin de Almidn Na2S2O3 0.02N H202 0.2 % H2O Destilada

Desarrollo a) Prepare una serie de cinco vasos de precipitados como se indica en la tabla del inciso b del experimento de descomposicin del H2O2. b) Aada a los vasos 5 mL de la solucin de HCl que le indique su profesor (HCl 0.01N, HCl 0.1N HCl 1N). c) Midiendo con la mayor precisin posible, agregue a cada vaso la cantidad de H2O2 que se indica la tabla del inciso c del experimento de descomposicin del H2O2. d) Utilizando un cronmetro, mida el tiempo transcurrido desde que se inicia la adicin del perxido, hasta que en la solucin aparezca un color azul. Despus de que aparezca el color en cada vaso, mida el pH del contenido del mismo. e) Escriba sus resultados en la tabla siguiente Vaso 1 Tiempo / segundos pH Cuestionario 1. Con los datos del experimento calcule la concentracin mM y la velocidad de descomposicin del perxido en mM/s, en cada vaso. 2. Elabore la grfica de velocidad de reaccin en funcin de la concentracin y determine el orden de reaccin y la constante de velocidad especfica al pH asignado. Vaso 2 Vaso 3 Vaso 4 Vaso 5

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3. Con los valores de velocidad especfica de todo el grupo elabore la grafica de velocidad especfica en funcin del pH. 4. A partir de las reacciones qumicas, explique el efecto del pH sobre la velocidad de esta reaccin.

Efecto de un catalizador inorgnico sobre la velocidad de hidrlisis de la Sacarosa


Material Pipetas de 10 mL Pipetas de 5 mL 5 tubos de ensayo Bao Mara a Ebullicin Reactivos Sacarosa 0.05M H2SO4 1:6 NaOH 10% Solucin de Fehling A" Solucin de Fehling "B" H2O Destilada

Desarrollo a) Prepare cuatro tubos de ensayo, siguiendo las instrucciones de la tabla siguiente. Recuerde mezclar completamente el contenido de los tubos despus de aadir cada reactivo. Tubo Sacarosa 0.05 M / mL H2O destilada / mL 1 5 2 5 3 5 4 5

H2SO4 1:6 / gotas 6 6 b) Coloque todos los tubos en un Bao Mara a ebullicin, durante 15 minutos. c) Neutralice el cido de los tubos 1 y 3, aadiendo 12 gotas de NaOH 10%. (la normalidad aproximada de las soluciones es de 5.9 para el H2SO4 1:6 y 2.5 para el NaOH 10%). Compruebe que se ha neutralizado el cido, usando papel indicador de pH. S es necesario, aada ms gota de NaOH 10%. d) Aada a cada tubo 2 mL de Reactivo de Fehling A y 2 mL de Reactivo de Fehling B y mezcle completamente. e) Coloque todos los tubos en un Bao Mara a ebullicin, durante 5 minutos. f) Esta prueba se considera positiva con la presencia de precipitado rojo de Cu2O (xido cuproso). Anote sus resultados en la tabla siguiente. Tubo Resultado Cuestionario 1. Anote la reaccin de Fehling, sus resultados y conclusiones. 2. Acta el cido sulfrico como catalizador? Por qu? 1 2 3 4

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Efecto de un catalizador biolgico sobre la velocidad de degradacin de la Sacarosa


Material Pipetas de 10 mL Pipetas de 5 mL 5 tubos de ensayo Bao Mara a 40 C Bao Mara a Ebullicin Reactivos Sacarosa 0.1N Regulador de CH3COONa pH = 4.7 Solucin de Invertasa Solucin de Fehling A" Solucin de Fehling "B" H2O Destilada

Desarrollo a) Prepare cuatro tubos de ensayo, siguiendo las instrucciones de la tabla siguiente. Recuerde mezclar completamente el contenido de los tubos despus de aadir cada reactivo. Tubo Solucin Sacarosa 0.1N / mL H2O destilada / mL 1 5 2 5 5 5 3 4

Sol. reguladora, pH = 4.7 1 1 b) Preincubar todos los tubos en Bao Mara a 40 durante el tiempo que sea necesario para que la solucin alcance la temperatura de 40. c) Aadir a todos los tubos 0.2 mL de solucin de Invertasa, mezclar completamente y volver a colocar los tubos en el Bao Mara. d) Incubar todos los tubos a 40 durante 15 minutos. e) Aada a todos los tubos 2 mL de Reactivo de Fehling A y 2 mL de Reactivo de Fehling B y mezcle completamente. f) Coloque todos los tubos en Bao Mara a ebullicin, durante 5 minutos. g) Esta prueba se considera positiva con la presencia de precipitado rojo de xido cuproso. h) Anote sus resultados en la siguiente tabla: Tubo Resultado Cuestionario 1. Compare los resultados con los del experimento anterior, anote sus observaciones. 1 2 3 4

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CINTICA ENZIMTICA
Preparacin de la solucin de Amilasa
Material Matraz aforado de 100 mL Una Pipeta de 10 mL Vaso de precipitados de 100 mL Bao de hielo Reactivos Regulador de fosfatos pH 7 Amilasa en polvo

Desarrollo a) En un vaso de precipitados, disuelva la enzima que le proporcionen, en la mnima cantidad posible de regulador de fosfatos de pH 7. Vace la solucin a un matraz aforado de 100 mL y afore con solucin reguladora. b) Conserve esta solucin en bao de hielo. Esta es la solucin de Enzima que se usar en todos los experimentos.

Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica


Material 7 tubos de ensaye 2 pipetas de 1 mL 2 pipetas de 5 mL 1 vaso de precipitados de 600 mL 2 tubos Klett Reactivos Solucin de enzima Sustrato de almidn Regulador de fosfatos de pH 7 cido 3,5-dinitrosaliclico Agua destilada

Desarrollo a) Prepare una serie de 7 tubos siguiendo las instrucciones de la tabla siguiente. Recuerde mezclar perfectamente los tubos al aadir cada reactivo. b) El tubo 1 ser el testigo negativo t(-) por lo que antes de colocarle la enzima, se le agrega 1 mL de cido 3,5-dinitrosaliclico que acta como inhibidor y como revelador de color. Solucin 1 t(-) 2 3 5 6 7 Sustrato de Almidn (8 mg/mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 Solucin reguladora de fosfatos 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 0.02M pH = 7 Agua destilada 3 3 3 3 3 3 3 Preincubar 5 minutos a: 20C 0C 20C 40C 50C 60C 92C cido 3,5-dinitrosaliclico 1 Enzima 0.5 (b) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 Incubar 15 minutos a: 20C 0C 20C 40C 50C 60C 92C cido 3,5-dinitrosaliclico 1 1 1 1 1 1 Bao Mara ebullicin por 10 minutos c) Despus de los 10 minutos en bao Mara a ebullicin, los tubos se enfran al chorro de agua y se leen en el espectrofotmetro a 540 nm, empleando el tubo 1 como blanco para ajustar a cero.
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Tubo 4 0.5 1.5

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d) En caso de que las lecturas salgan de la escala, es necesario diluir la mezcla reaccionante 1 a 6 con agua destilada (1 mL de solucin ms 5 de agua), antes de leer. e) Convierta la Densidad ptica en concentracin molar de azucares reductores [AR], usando la curva tipo que se le proporcionar. S es necesario, multiplique la concentracin calculada por la dilucin (por 6) f) Escriba sus resultados en la tabla siguiente. Tubo Densidad ptica [AR] 1 0 0 2 3 4 5 6 7

Cuestionario 1. Elabore la grfica de [AR] en funcin de la Temperatura 2. En la grfica obtenida, ubique la temperatura ptima de la enzima.

Efecto del pH sobre la actividad enzimtica.


Material 6 tubos de ensaye 2 pipetas de 1 mL 2 pipetas de 5 mL 1 vaso de precipitados de 600 mL 2 tubos Klett Reactivos Solucin de enzima Sustrato de almidn Regulador de fosfatos de pH 5, 6, 7, 8, 9 cido 3,5-dinitrosaliclico Agua destilada

Desarrollo a) Prepare una serie de 6 tubos, siguiendo las instrucciones de la tabla siguiente. Recuerde mezclar perfectamente los tubos al aadir cada reactivo. b) El tubo 1 ser el testigo negativo t(-) por lo que antes de colocarle la enzima, se le agrega 1 mL de cido 3,5 dinitrosaliclico que acta como inhibidor y como revelador de color. Tubo Solucin 1 t(-) 2 3 4 5 6 Sustrato de Almidn (8 mg/mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 4 mL de Sol. Reg. de Fosfato 7 5 6 7 8 9 0.2M y NaCl 0.05M a pH de Preincubar 5 minutos a 40C cido 3,5-dinitrosaliclico 1 Enzima 0.5 (b) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 Incubar 15 minutos a 40 C cido 3,5-dinitrosaliclico 1 1 1 1 1 Bao Mara ebullicin por 10 minutos c) Despus de los 10 minutos en bao Mara a ebullicin, los tubos se enfran al chorro de agua y se leen en el espectrofotmetro a 540 nm, empleando el tubo 1 como blanco para ajustar a cero. d) En caso de que las lecturas salgan de la escala, es necesario diluir la mezcla reaccionante 1 a 6 con agua destilada (1 mL de solucin ms 5 de agua), antes de leer.
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e) Convierta la Densidad ptica en [AR], usando la curva tipo que se le proporcionar. S es necesario, multiplique la concentracin calculada por la dilucin (por 6) f) Escriba sus resultados en la tabla siguiente. Tubo Densidad ptica [AR] 1 0 0 2 3 4 5 6

Cuestionario 1. Elabore la grfica de [AR] en funcin del pH 2. En la grfica obtenida, ubique el pH ptimo de la enzima.

Efecto de la concentracin de sustrato sobre la velocidad de una reaccin enzimtica.


Material 9 tubos de ensaye 2 pipetas de 1 mL 2 pipetas de 10 mL 1 vaso de precipitados de 600 mL 2 tubos Klett Reactivos Solucin de enzima Sustrato de almidn Regulador de fosfatos de pH 7 cido 3,5-dinitrosaliclico Agua destilada

Desarrollo a) Prepare una serie de 9 tubos, siguiendo las instrucciones de la tabla siguiente. Recuerde mezclar perfectamente los tubos al aadir cada reactivo. b) El tubo 1 ser el testigo negativo t(-) por lo que antes de colocarle la enzima, se le agrega 1 mL de cido 3,5 dinitrosaliclico que acta como inhibidor y como revelador de color. Solucin de Almidn 1 t(-) 7.0 0.5 2 0.5 7.0 3 1.0 6.5 Tubo 4 5 2.0 5.5 3.0 4.5 6 4.0 3.5 7 5.0 2.5 8 6.0 1.5 9 7.0 0.5

Sustrato (8 mg/mL) Sol. Reg. de Fosfato 0.02M. pH = 7

Preincubar 5 minutos a 40C cido 3,5-dinitrosaliclico 1 Enzima 0.5 (b) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 Incubar 15 minutos a 40C cido 3,5-dinitrosaliclico 1 1 1 1 1 1 1 1 Bao Mara a ebullicin por 10 minutos c) Despus de los 10 minutos en bao Mara a ebullicin, los tubos se enfran al chorro de agua y se leen en el espectrofotmetro a 540 nm, empleando el tubo 1 como blanco para ajustar a cero. d) En caso de que las lecturas salgan de la escala, es necesario diluir la mezcla reaccionante 1 a 6 con agua destilada (1 mL de solucin ms 5 de agua), antes de leer. e) Convierta la Densidad ptica en [AR], usando la curva tipo que se le proporcionar. S
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es necesario, multiplique la concentracin calculada por la dilucin (por 6) f) Escriba sus resultados en la tabla siguiente. Tubo Lectura Densidad ptica {AR] 1 0 0 2 3 4 5 6 7 8 9

Cuestionario 1. Elabore la grfica de [AR] en funcin de [S] en mg/mL. 2. Determine los valores de KM y VMAX para el sistema, en estas condiciones. KM = ____________mg de Almidn/L VMAX = ______________[AR]/min

Efecto de la concentracin de enzima sobre la velocidad de una reaccin enzimtica.


Material 6 tubos de ensaye 1 pipetas de 1 mL 2 pipetas de 5 mL 1 vaso de precipitados de 600 mL 2 tubos Klett Reactivos Solucin de enzima Sustrato de almidn Regulador de fosfatos de pH 6.9 cido 3,5-dinitrosaliclico Agua destilada

Desarrollo a) Prepare una serie de 6 tubos, siguiendo las instrucciones de la tabla siguiente. Recuerde mezclar perfectamente los tubos al aadir cada reactivo. b) El tubo 1 ser el testigo negativo t(-) por lo que antes de colocarle la enzima, se le agrega 1 mL de cido 3,5 dinitrosaliclico que acta como inhibidor y como revelador de color. Tubo Solucin 1 t(-) 2 3 4 5 6 Sustrato de Almidn (8 mg/mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 Sol.Reg. de Fosfato 0.02M pH=7 1 1 1 1 1 1 H2O destilada 3.4 4.9 4.8 4.6 4.2 3.4 Preincubar 5 minutos a 40C cido 3,5-dinitrosaliclico 1 Enzima 1.6 (b) 0.1 0.2 0.4 0.8 1.6 Incubar 15 minutos a 40C cido 3,5-dinitrosaliclico 1 1 1 1 1 Bao Mara a Ebullicin por 10 minutos c) Despus de los 10 minutos en bao Mara a ebullicin, los tubos se enfran al chorro de agua y se leen en el espectrofotmetro a 540 nm, empleando el tubo 1 como blanco para ajustar a cero. d) En caso de que las lecturas salgan de la escala, es necesario diluir la mezcla reaccionante 1 a 6 con agua destilada (1 mL de solucin ms 5 de agua), antes de leer. e) Convierta la Densidad ptica en [AR], usando la curva tipo que se le proporcionar. S
Cintica Enzimtica mlvm / maov / 33

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es necesario, multiplique la concentracin calculada por la dilucin (por 6) f) Escriba sus lecturas en la tabla siguiente. Tubo Densidad ptica [AR] 1 0 0 2 3 4 5 6

Cuestionario 1. Trace la grfica de [AR] en funcin de [E] en mg/mL 2. Calcule el Nmero de Recambio de la enzima, en el experimento.

Cintica Enzimtica

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PROPIEDADES DE GLCIDOS
Determinacin de la estructura cristalina de glcidos.
Material Microscopio Portaobjetos Reactivos Glucosa slida Sacarosa slida Almidn Celulosa

Desarrollo a) Examine al microscopio muestras slidas de los siguientes glcidos: Glucosa, Sacarosa, Almidn, Celulosa y el resto que le sean proporcionados. Cuestionario 1. Dibuje los esquemas correspondientes.

Glucosa Sacarosa Almidn Celulosa 2. Anote los glcidos que presenten estructura cristalina. 3. Qu relacin existe entre la estructura de un glcido y su peso molecular?

Formacin de Osazonas
Material 3 tubos de ensaye Pipetas de 5 mL Vaso de precipitados de 600 mL Desarrollo a) Coloque en un tubo de ensaye: 0.1 g de un carbohidrato, ms 0.2 g. de clorhidrato de Fenilhidrazina, ms 0.3 g de acetato de sodio cristalizado y 4 mL de agua. Agitar enrgicamente y tapar el tubo, con un tapn de papel, que permita la salida de vapor. b) Coloque el tubo en bao Mara a ebullicin, agitando ocasionalmente. Observe el tiempo que tardan en aparecer los cristales. S en 20 minutos de calentamiento, no se han formado cristales, retire el tubo del Bao Mara y djelo reposar en fro c) Anote el tiempo de cristalizacin y si fue en fro o en caliente.
Propiedades de Glcidos mlvm / maov / 35

Reactivos Glcido en slido Clorhidrato de Fenilhidrazina Acetato de Sodio Agua destilada

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d) Observe al microscopio, los cristales de osazona preparados por TODOS los equipos del grupo. Dibuje esquemas de cada uno de los cristales.

Cuestionario 1. Escriba la reaccin que se efecta. 2. Escriba la razn por la que Glucosa, Manosa y Fructosa forman la misma osazona.

Reaccin de Molisch-Udransky
Material 8 tubos de ensaye Pipetas de 5 mL Reactivos Solucin de Formaldehido Solucin de Glucosa Solucin de Fructosa Solucin de Arabinosa Solucin de Sacarosa Suspensin de Almidn Agua destilada Reactivo de Molisch-Udransky H2SO4 concentrado

Desarrollo a) Numere 8 tubos de ensaye, y coloque, 3 mL de las soluciones siguientes: (1) H2O destilada, (2) Formaldehido, (3) Glucosa, (4) Fructuosa, (5), Arabinosa (6) Sacarosa, (7) Almidn y (8) la muestra problema. b) Aada a todos los tubos, 6 gotas de reactivo de Molisch-Udransky (solucin de alfa-naftol al 5% en alcohol) Mezcle completamente. c) Posteriormente aada a todos los tubos, 1 mL de H2SO4 concentrado, inclinando el tubo y dejando resbalar cuidadosamente el cido por las paredes para estratificar. La reaccin es positiva si aparece en la interfase un anillo de color violeta (NO caf) Cuestionario 1. Anote las soluciones que den positiva la reaccin, en la tabla al final del captulo. 2. Escriba si esta reaccin se puede usar para diferenciar un glcido de otro y porqu. 3. Escriba la reaccin qumica que se efecta.

Propiedades de Glcidos

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Reaccin de Fehling
Material 8 tubos de ensaye Pipetas de 5 mL Vaso de precipitados de 600 mL Reactivos Solucin de Formaldehido Solucin de Glucosa Solucin de Fructosa Solucin de Arabinosa Solucin de Sacarosa Suspensin de Almidn Solucin A de Fehling Solucin B de Fehling Agua destilada

Desarrollo a) Numere 8 tubos de ensaye, y coloque en cada uno, 2 mL de solucin A y 2 mL de la solucin B del reactivo de Fehling. Mezcle completamente. b) Coloque en el tubo respectivo, 3 gotas de las soluciones de: (1) H2O destilada, (2) Formaldehido, (3) Glucosa, (4) Fructuosa, (5), Arabinosa (6) Sacarosa, (7) Almidn y (8) la muestra problema. c) Coloque los tubos en bao Mara a ebullicin durante 3 minutos. d) Deje enfriar los tubos a temperatura ambiente (no enfriar con agua). la reaccin es positiva si se forma un precipitado rojo ladrillo de xido cuproso (Cu2O) Cuestionario 1. Anote sus resultados en la tabla al final del captulo. 2. Anote porque algunos azcares dan negativa la reaccin. 3. Mencione 3 sustancias que usted considere puedan dar positiva la reaccin de Fehling y no sean azcares. 4. Escriba la reaccin qumica que se efecta.

Reaccin de Barfoed
Material 6 tubos de ensaye Pipetas de 5 mL Vaso de precipitados de 600 mL Reactivos Solucin de Glucosa Solucin de Arabinosa Solucin de Lactosa Solucin de Maltosa Reactivo de Barfoed Agua destilada

Propiedades de Glcidos

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Desarrollo a) Numere 6 tubos de ensaye y agregue a cada uno 3 mL de reactivo de Barfoed. b) Coloque en los tubos, 1 mL de la solucin correspondiente: (1) H2O destilada, (2) Glucosa, (3) Arabinosa, (4), Lactosa (5) Maltosa y (6) la muestra problema. c) Coloque los tubos en bao Mara a ebullicin. Cuestionario 1. En la tabla al final del captulo, anote el tiempo que tarda en aparecer un precipitado color, rojo de xido cuproso. 2. Qu diferencia hay en el tiempo de reaccin de Monosacridos y Disacridos? 3. Escriba la reaccin qumica que se efecta.

Reaccin de Bial
Material 4 tubos de ensaye Pipetas de 5 mL Vaso de precipitados de 600 mL Reactivos Solucin de Glucosa Solucin de Arabinosa Reactivo de Bial Butanol Agua destilada

Desarrollo a) Numere 4 tubos de ensaye GRANDES, en cada uno coloque, 3 mL del reactivo de Bial. PRECAUCIN !!! b) Aada a los tubos, 0.2 mL de la solucin correspondiente: (1) H2O destilada, (2) Glucosa, (3) Arabinosa y (4) la muestra problema. c) Caliente los tubos ligeramente sobre la flama del mechero; cuando se inicie la ebullicin, inmediatamente retire el tubo de la flama. d) Diluya cada tubo con 10 mL de H2O destilada y agregue 5 mL de butanol. Agite enrgicamente los tubos y deje reposar. Mida el tiempo que tarda en aparecer el color. Cuestionario 1. Anote sus resultados en la tabla al final del captulo. 2. Escriba la reaccin qumica que se efecta. 3. Cul es la diferencia entre pentosas y hexosas?

Reaccin de Seliwanoff
Material 4 tubos de ensaye Pipetas de 5 mL Vaso de precipitados de 600 mL
Propiedades de Glcidos

Reactivos Solucin de Glucosa Solucin de Fructosa Reactivo de Seliwanoff Agua destilada


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Desarrollo a) Numere 4 tubos de ensaye. b) Coloque en los tubos 1 mL de la solucin correspondiente: (1) H2O destilada, (2) Glucosa, (3) Fructosa y (4) la muestra problema. c) Agregue a cada tubo, 0.5 mL del reactivo de Seliwanoff. d) Caliente todos los tubos en bao Mara a ebullicin, exactamente 60 segundos. Anote cual glcido cambi de color en la tabla al final del captulo. e) Contine calentando durante 5 minutos y anote el tiempo al que se observa el cambio de color. Cuestionario 1. Escriba sus resultados en la tabla al final del captulo. 2. Escriba la reaccin que se efecta. 3. Cul es la diferencia entre cetosas y aldosas?

Reaccin de Lugol
Material 4 tubos de ensaye Pipetas de 5 mL Vaso de precipitados de 600 mL Desarrollo a) Numere 4 tubos de ensaye. b) Coloque en los tubos 2 mL de: (1) H2O destilada, (2) Almidn, (3) Glucgeno y (4) la muestra problema. c) Aada a cada tubo una gota de Lugol y mezcle, anote el color que se produce, en la tabla al final del captulo. d) Caliente los tubos en Bao Mara a ebullicin, y djelos enfriar nuevamente observando lo que ocurre con la coloracin durante el calentamiento y despus de este. e) Escriba sus resultados en la tabla al final del captulo. Cuestionario 1. Escriba porqu el complejo almidn-yodo es termolbil. 2. Anote si la reaccin del Lugol, es caracterstica para cualquier polisacrido. Reactivos Solucin de Almidn Solucin de Glucgeno Lugol Agua destilada

Propiedades de Glcidos

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GLCIDO Formaldehido Glucosa Fructosa Arabinosa Sacarosa Lactosa Maltosa Almidn Glucgeno Problema

MolischUdransky

Fehling

Barfoed

Bial

Seliwanoff 1a 2a

Lugol

Propiedades de Glcidos

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OXIDACIONES BIOLGICAS
Oxidacin por prdida de electrones
Material 2 Matraces Erlenmeyer de 250 mL Tapn con vlvula de Bunsen Pipeta 10 5 mL Pipeta 1 mL 2 Cpsulas de porcelana 1 Probeta de 50 mL Reactivos 0.5 g de fibra de Fe H2SO4 al 10% agua destilada K3[Fe(CN)6] (ferricianuro de potasio) 0.5% KSCN (sulfocianuro de potasio) 0.5% KMnO4 0.1M

Desarrollo a) Coloque en un matraz provisto de tapn con vlvula de Bunsen abierta, 0.5 g de fibra de Fe y 15 mL de H2SO4 al 10%; mezcle enrgicamente para tratar de disolver el hierro (lo ms posible), antes de calentar. b) Caliente a ebullicin hasta la disolucin del Fe, evitando que se evapore completamente la mezcla. Si es necesario aada ms cido. c) Enfre al chorro del agua en la tarja; disuelva el residuo de FeSO4 (sulfato ferroso), en 50 mL de agua destilada. d) Prueba para sales ferrosas. Se coloca en una cpsula de porcelana 1 mL de solucin de FeSO4 y unas gotas de K3[Fe(CN)6] 0.5%. La obtencin de una coloracin precipitado azul indicar la presencia de sales ferrosas. e) Prueba para sales frricas. En otra cpsula de porcelana, coloque 1 mL de la solucin de FeSO4 y unas gotas de solucin de KSCN 0.5%, un color rojo es indicio de la presencia de sales frricas. f) Oxidacin de la sal ferrosa a sal frrica. Coloque en un matraz Erlenmeyer 10 mL de la solucin de FeSO4 y 3 mL de H2SO4 1 N, caliente a ebullicin (evitando que se evapore) y en caliente, agregue gota a gota KMnO4 0.1M hasta que persista un color rosa muy plido. g) Para comprobar el paso de sal ferrosa a sal frrica, repita las reacciones de los incisos (d) con K3[Fe(CN)6] 0.5% y (e) con KSCN 0.5%. h) Anote sus resultados en la siguiente tabla. Soluciones de: FeSO4 Fe2(SO4)3 Cuestionario 1. Qu gas es el que escapa durante la disolucin del Hierro? 2. Escriba las reacciones qumicas, en cada caso. 3. Si el KMnO4 es capaz de oxidar al FeSO4 Qu compuesto se reduce? 4. Escriba la reaccin de oxido-reduccin efectuada. K3[(Fe(CN)6)] KSCN

Oxidaciones Biolgicas

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Oxidacin por deshidrogenacin


Material 7 tubos de ensaye 3 pipetas de 5 mL Reactivos azul de metileno diluido Na2S2O4 (hidrosulfito de sodio) vaselina H2O2 0.4% FeCl3 1%

Desarrollo a) Prepare una serie de 7 tubos de ensaye y numrelos. b) Aada a cada uno, 5 mL de la solucin de azul de metileno diluido. c) Agregue a cada uno de los tubos, gota a gota una solucin recin preparada de Na2S2O4, no debe estar turbia; cuente el nmero de gotas necesario para decolorar completamente la solucin de azul de metileno. d) El tubo 1 es el testigo en reposo; a temperatura ambiente anote el tiempo que tarda en recuperar el color azul e) Los tubos 2, 3, 4 y 5 se someten a los tratamientos indicados en la tabla siguiente. Anote el tiempo necesario para que recuperen el color azul en la tabla. Tubo 1 2 3 4 5

Tratamiento Reposo 0.5 mL vaselina Bao de hielo Bao Mara a Agitacin estratificando ebullicin Tiempo f) A los tubos 6 y 7, sin agitarlos y a temperatura ambiente, agregue los reactivos indicados en la tabla siguiente, contando el nmero de gotas necesario para que recuperen el color azul, anote el resultado en la tabla. TUBO 6 7

TRATAMIENTO H2O2 0.4% FeCl3 1%, No de Gotas Cuestionario 1. Escriba la reaccin qumica que se ha efectuado.

Obtencin de la fraccin mitocondrial del tejido


Material Estuche de diseccin Mortero Tubos de centrifuga Centrfuga pipetas de 5 y 10 mL Reactivos KCl (cloruro de potasio) 0.15 M Hielo

Desarrollo a) Mate una rata, diseque el hgado y el corazn y mantngalos en bao de hielo hasta el momento de utilizarlo.
Oxidaciones Biolgicas mlvm / maov / 42

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b) Pese los rganos extrados y mantngalo en bao de hielo. c) Trabajando en bao de hielo, fraccione la muestra finamente con tijeras y prepare un homogeneizado en un mortero FRI, aadiendo 9 mL de KCl 0.15M FRI por cada gramo de tejido. d) Centrifugue el homogeneizado en fro, a 500 rpm por 15 minutos. e) Decante el sobrenadante en un recipiente limpio y FRO, y deseche el residuo. f) Vuelva a centrifugar el sobrenadante, pero ahora a 3000 rpm por 15 minutos. g) De los tubos de centrfuga, decante el sobrenadante en un recipiente limpio y guarde el precipitado para usarlo ms adelante. (inciso i) h) Etiquete el recipiente con sobrenadante como "SOBRENADANTE DE HGADO" o SOBRENADANTE DE CORAZN segn corresponda y consrvelo en fro. i) El precipitado de la ltima centrifugacin (inciso g) se suspende en un volumen de KCl 0.15M igual al del sobrenadante, y tambin se conserva en fro, etiquetado como "SUSPENSIN DE HGADO" o SUSPENSIN DE CORAZN, segn corresponda.

Determinacin de la actividad de Deshidrogenasa Succnica


Material 8 tubos de ensaye 5 pipetas de 5 mL Reactivos Azul de metileno 0.002 M Succinato de sodio 0.1 M Malonato de sodio 0.1 M Agua destilada Suspensin de Hgado o Corazn Sobrenadante de Hgado o Corazn

a) Prepare una serie de 6 tubos de ensaye, como se indica en la tabla siguiente. TUBO Reactivos en mL Azul de metileno 0.002M Succinato de sodio 0.1M Malonato de sodio 0.1M H2O destilada Suspensin de Hgado o Corazn Sobrenadante de Hgado o Corazn 1 0.3 0.0 0.0 1.5 0.5 0.0 2 0.3 0.5 0.0 1.0 0.5 0.0 3 0.3 0.5 0.5 0.5 0.5 0.0 4 0.3 0.0 0.0 1.5 0.0 0.5 5 0.3 0.5 0.0 1.0 0.0 0.5 6 0.3 0.5 0.5 0.5 0.0 0.5

Mezclar bien y preincubar a 37 por 10 minutos

b) Mezcle enrgicamente el contenido de cada tubo y aada, resbalando por la pared, 1 mL de vaselina para formar una capa sobre la solucin. NO AGITE LOS TUBOS DESPUS DE AADIR LA VASELINA. c) Mantenga los tubos en incubacin en Bao Mara a 37C, observe el color de los tubos al inicio del experimento y anote sus lecturas respecto a los cambios de coloracin, en los tiempos sealados en el cuadro siguiente.
Oxidaciones Biolgicas mlvm / maov / 43

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Tubo No Tiempo / minutos 0 15 30 60 Cuestionario 1. Escriba en cul de las preparaciones de hgado o corazn considera usted que se encuentran las mitocondrias y por qu. 2. Describa como acta el Malonato de sodio. 1 2 3 4 5 6

Determinacin de la actividad de Citocromo-Oxidasa.


MATERIAL 6 tubos de ensaye 4 pipetas 5 mL REACTIVOS alfa-Naftol 0.15 % en etanol al 10% dimetil-para-fenilendiamina 0.15 % KCN (cianuro de potasio) 0.01% Agua destilada Suspensin de Hgado o Corazn Sobrenadante de Hgado o Corazn

Desarrollo a) Prepare una serie de 6 tubos de ensaye como se indica en la tabla siguiente: TUBO No Reactivos en mL alfa-Naftol 0.15 % en Etanol 10% Dimetil-para-Fenilendiamina 0.15% H2O destilada KCN 0.01% ((0.5 mL = 16 GOTAS) PELIGRO, VENENO NO PIPETEAR!!! Sobrenadante de Hgado o Corazn Suspensin de Hgado o Corazn 1 1 1 0.5 0.5 1.0 2 0.5 0.5 2.0 3 0.5 0.5 0.5 4 0.5 0.5 1.0 5 0.5 0.5 2.0 6 0.5 0.5 0.5

Mezclar bien y preincubar a 37 por 10 minutos 0.5 1 0.5 1

b) Mantenga los tubos en incubacin en Bao Mara a 37C, agitndolos con frecuencia. c) Observe cualquier cambio de color, en el inicio, a los 15, 30 y 60 ms minutos. d) Resuma sus datos en la tabla siguiente.

Oxidaciones Biolgicas

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Cuestionario 1. Describa la reaccin qumica que se ha efectuado. 2. Escriba la razn por la que no se us vaselina en este experimento. 3. Escriba el nombre del inhibidor para cada enzima. 4. Anote la fraccin en que se encontraron las enzimas y cul es la razn.

Oxidaciones Biolgicas

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PROPIEDADES DE LPIDOS
Reaccin de Hanus o ndice de yodo
Material 5 Tubos de ensaye Pipetas de 5 mL Reactivos Cloroformo Aceite de algodn 10% en Cloroformo Aceite de crtamo10% en Cloroformo Monoestearil glicerol10% en Cloroformo Reactivo de Hanus

Desarrollo a) Numere 5 tubos de ensaye, limpios y secos, prepare las mezclas que se describe en la tabla siguiente. Tubo No REACTIVO (mL) Cloroformo Aceite de algodn en cloroformo Aceite de crtamo en cloroformo Monoestearil-glicerol en cloroformo Lpido problema en cloroformo 5 gotas de reactivo de Hanus Cubrir con aluminio SI SI SI SI SI SI SI SI 1 (t-) 6 6 6 6 6 SI SI MEZCLAR ENRGICAMENTE Cuestionario 1. Anote en la tabla siguiente, cada 30 min (durante 2 horas) el grado de decoloracin de cada tubo, con respecto al testigo negativo de cloroformo. 2. Escriba la razn por la que se utiliza como ndice, el grado de decoloracin de la solucin. 3. Escriba la reaccin qumica que se lleva a cabo. TIEMPO / minutos Lpido Lpido problema Aceite de Algodn Aceite de Crtamo Monoestearilglicerol 30 60 90 120 2 3 6 5

Propiedades de Lpidos

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Extraccin de lpidos de Cerebro.


Material 5 g de cerebro Mortero con mano 2 Tubos de centrfuga Pipeta Pasteur Pipetas de 5 mL Reactivos mezcla cloroformo-metanol-HCl (200:100:1) HCl 1N

Desarrollo a) Triture perfectamente 5 g de cerebro, en un mortero con 15 mL de una mezcla de cloroformo-metanol-cido clorhdrico (200:100:1) por 10 minutos. b) Agregue 3 mL de HCl 1N, mezcle completamente y centrifugue a 2000 r.p.m. durante 10 minutos. c) Separe la fase metanlica (transparente), decantndola con cuidado a un tubo de ensaye, rotule para uso posterior. d) La fase clorofrmica (caf claro), la obtendr, perforando con un hisopo de madera la capa intermedia (sedimento) y por el orificio que se forma, introducir cuidadosamente una pipeta Pasteur para tomar el lquido que se encuentra en la parte inferior del tubo y rotule para su uso posterior. Deseche el sedimento.

Identificacin de fosfolpidos de cerebro por cromatografa en capa fina.


Material Placa de cromatografa Pipeta Pasteur Cmara de cromatografa Desarrollo a) En un tubo de ensaye coloque 0.5 mL del lquido de la fase clorofrmica obtenida en la extraccin de lpidos del cerebro, y agrguele 0.5 mL de Cloroformo. b) Utilizando una pipeta Pasteur, aplique 1 gota de esta dilucin en 3 puntos equidistantes en una cromatoplaca previamente preparada, a 2 cm de altura de la base. c) Permita que el Cloroformo se evapore e introduzca la placa en una cmara de cromatografa que contenga como solvente de elusin, una mezcla de cloroformo metanol-cido actico-agua (65: 25:8:4) d) Deje desarrollar el cromatograma hasta que el solvente alcance el frente del solvente ya marcado; saque la placa de la cubeta y djela secar. e) En esta forma se tendrn 3 cromatogramas en la misma placa, los cuales se rocan con Ninhidrina, que revela fosfoaminolpidos.
Propiedades de Lpidos mlvm / maov / 47

Reactivos Cloroformo Fase clorofrmica Ninhidrina

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f) Coloque la placa de cromatografa tratada en el horno a 100C, por 10 minutos para efectuar la reaccin. Cuestionario 1. Calcule los valores de Rf de cada una de las manchas, identifquelas (con respecto a los valores conocidos que se le proporcionen para las diferentes fracciones), anotndolas en una tabla.

Identificacin de cerebrsidos.
Material 1 Tubo de ensaye Pipetas de 5 mL Desarrollo 1. Utilizando 1 mL del lquido de la fase metanlica, obtenido en la extraccin de lpidos de cerebro, trate de demostrar la presencia de cerebrsidos utilizando la reaccin de Molisch-Udransky cuya tcnica y fundamento fue descrito en la prctica de Glcidos. Cuestionario 1. Anote el resultado. 2. Qu porcin de los cerebrsidos se identifica con esta reaccin? Reactivos Fase metanlica Reactivo de Molisch-Udransky H2SO4 concentrado

Reaccin de la Acrolena. Identificacin de acilglicridos.


Material 3 Tubos de ensaye Pipetas de 5 mL Reactivos Glicerina Aceite de algodn KHSO4 (bisulfato de potasio)

Desarrollo a) Coloque en 3 tubos de ensaye limpios, secos y numerados un poco de KHSO4. b) Aada al tubo 1, 5 gotas de glicerina, al tubo 2, 5 gotas de aceite de algodn, crtamo o girasol (sin solvente) y al tubo 3, 5 gotas del lpido problema. c) Caliente cuidadosamente y huela indirectamente los vapores. Anote su resultado. Cuestionario 1. Se puede considerar esta reaccin general para cualquier lpido, Por qu? 2. Escriba la reaccin que se ha efectuado.

Propiedades de Lpidos

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Reaccin de Liebermann-Burchards
Material 4 Tubos de ensaye Pipetas de 5 mL Reactivos Cloroformo Colesterol en cloroformo Fase clorofrmica Anhdrido actico H2SO4 concentrado

Desarrollo a) Prepare 4 tubos de ensaye, siguiendo las instrucciones de la tabla. Tubo No REACTIVO (mL) Cloroformo Sol. Clorofrmica de colesterol puro Fase clorofrmica Problema Anhdrido actico. Usar en la campana H2SO4, Precaucin! deslizar por la pared lentamente Resultado Cuestionario 1. Observe los cambios de coloracin que se producen con respecto al testigo negativo de cloroformo y anote sus resultados en la tabla. 1 1 1 1 1 1 1 (t-) 3 3 3 3 1 1 MEZCLAR COMPLETAMENTE 2 3 4

Grado de permeabilidad de una capa lipdica


Material Reactivos 4 Tubos de ensaye Azul de metileno ms monoestearato de glicerilo en Butanol Pipetas de 5 mL Azul de metileno ms colesterol en Butanol Azul de metileno en Butanol extracto clorofrmico Desarrollo a) Evapore a sequedad 2 mL del lquido de la fase clorofrmica obtenida en la extraccin de lpidos del cerebro. Evaporar agitando, o en Bao Mara, sin hervir. b) El residuo obtenido se disuelve con 2 mL de azul de metileno en butanol. Marque la muestra como Fosfolpidos en butanol. c) Prepare 4 tubos de ensaye como se indica en la tabla siguiente. Las soluciones se agregan al agua, resbalando lentamente
Propiedades de Lpidos mlvm / maov / 49

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por las paredes del tubo, para estratificar. Reactivos / mL Agua Azul de metileno ms monoestearato de glicerilo en Butanol Azul de metileno ms fosfolpidos en Butanol Azul de metileno ms colesterol en Butanol Azul de metileno en Butanol c) Deje los tubos en reposo, procurando moverlos lo menos posible. d) Observe la difusin del azul de metileno despus de que transcurran 1, 2, 4 y 24 horas. e) Registre el grado de difusin del azul de metileno con respecto al tiempo, en la siguiente tabla. Tiempo (horas) Permeabili4 24 dad Final 1 5 2 ---Tubo No 2 3 5 5 -2 ----2 -4 5 --2

Reactivos Azul de metileno ms monoestearato de glicerilo en Butanol Azul de metileno ms fosfolpidos en Butanol Azul de metileno ms colesterol en Butanol Azul de metileno en Butanol

Cuestionario 1. Anote a que se debe la diferencia, en cuanto al grado de difusin del azul de metileno, con respecto al tipo de lpido usado. 2. Escriba la relacin que existe, entre la difusin del colorante con respecto al grado de permeabilidad de las capas lipdicas utilizadas.

Propiedades de Lpidos

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PROPIEDADES DE CIDOS NUCLEICOS


Obtencin de DNA del bazo
Material 2 Tubos de centrfuga Pipetas de 5 mL Vaso de precipitados de 500 mL Reactivos Bazo Solucin reguladora de citrato 0.01 M en NaCl 0.14 N, pH 7.2 NaCl 2.6 M alcohol etlico al 95%

Desarrollo a) Coloque en un vaso de licuadora fro, 450 mL de solucin reguladora de citratos-NaCl. b) Ponga a funcionar la licuadora y vaya aadiendo los trozos de bazo congelado uno a uno, esperando a que se homogenece completamente el primero, antes de aadir el segundo y as sucesivamente SIN QUE SE CALIENTE LA MEZCLA. Una vez terminada la adicin, contine homogeneizando por 60 segundos. c) Coloque el homogeneizado en tubos de centrifuga adecuados y trelos. d) Centrifugue por 15 minutos a 5000 r.p.m. (si es posible, en la centrifuga refrigerada) Deseche el sobrenadante y conserve el residuo 1. e) En cada tubo, lave el residuo de la centrifugacin anterior con 15 mL de solucin reguladora de citratos, agitando hasta resuspender con ayuda de una agitador de vidrio. f) Vuelva a tarar los tubos y nuevamente centrifugue por 5 minutos a 5 000 r.p.m. El segundo sobrenadante tambin se desecha. g) Al residuo de la segunda centrifugacin de cada tubo, adale 15 mL de NaCl 2.6M fro y homogenice por agitacin. h) Nuevamente tare los tubos y centrifugue el homogenizado a 8 000 r.p.m. por 30 minutos. El lquido sobrenadante contiene el DNA, SE ROTULA Y SE GUARDA PARA LA OBTENCIN DEL DNA. El residuo que contiene restos celulares y protenas insolubles, se desecha. i) El lquido sobrenadante con DNA, se coloca en un vaso de precipitados de 150 mL y se aaden lentamente por la pared del vaso, 2 volmenes de alcohol etlico al 95%, procurando que la fase alcohlica quede en la parte superior. Se deber observar la formacin de un precipitado blanco denso en la interfase. j) Introduzca un agitador, con salientes pequeas hasta el fondo del vaso de precipitados, grelo y extrigalo lentamente del vaso procurando enrollar sobre l las fibras de DNA precipitado. k) En la forma anterior recolecte todo el DNA que sea posible y transfiralo a un frasco Gerber que contenga 10 mL de agua. (El DNA debe disolverse) Esta es la solucin problema para determinar DNA en el siguiente experimento. Cuestionario 1. Elabore un esquema de las fibras de DNA obtenidas. 2. Anote la razn de utilizar el bazo como fuente de DNA.
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3. Escriba si es conveniente o no, utilizar regulador de fosfatos para la extraccin del DNA y por qu? 4. Escriba la razn por la que se lleva a cabo la extraccin a baja temperatura.

Identificacin y Cuantificacin de DNA.


Material 6 Tubos de ensaye Pipetas de 5 mL Vaso de precipitados de 500 mL 2 Tubos Klett Reactivos Solucin patrn de DNA 1 mg/mL Solucin DNA problema Reactivo de Dische

Desarrollo a) Prepare una serie de 6 tubos de ensaye, numerndolos. b) Tubo 1, coloque nicamente 2 mL de H2O destilada como testigo negativo. c) Tubo 2, coloque 2 mL de solucin patrn de DNA [1 mg/mL] d) Tubo 3, coloque 2 mL de H2O destilada, ms 2 mL de solucin patrn de DNA [0.5 mg/mL] y mezcle completamente. e) Tubo 4, coloque 2 mL de H2O destilada, ms 2 mL de la solucin del Tubo 3 [0.25 mg/mL] y mezcle completamente. f) Tubo 5, coloque 2 mL de H2O destilada, ms 2 mL de la solucin del Tubo 4 [0.125 mg/mL] y mezcle completamente. Deseche 2 mL. g) Tubo 6, coloque 2 mL de solucin DNA problema, obtenida en la extraccin del DNA del bazo. h) Para desarrollar color, siga las instrucciones de la tabla siguiente. TUBO No Reactivo / mL Reactivo de Dische (en la campana extractora) Agitar vigorosamente Incubar 10 minutos en BAO MARA. a ebullicin Enfriar 5 minutos en bao de hielo, (color azul transparente) i) Mida la intensidad del color en el espectrofotmetro a 600 nm, AJUSTNDOLO A 0 CON EL TUBO 1. j) Anote sus resultados en la tabla siguiente. TUBO No 1 (t-) DENSIDAD PTICA (D.O.) Concentracin (mg/mL) 0 0 1.0 0.5 0.25 0.125 2 3 4 5 6 (p) 1(t-) 4 2 4 3 4 4 4 5 4 6 (p) 4

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Cuestionario 1. Grafique D.O. en funcin de la concentracin de DNA en mg/mL. 2. Interpole el valor de D.O. de la solucin problema y obtenga la concentracin del DNA en mg/mL de la solucin problema.

Identificacin y Cuantificacin de RNA


Material 6 Tubos de ensaye Pipetas de 5 mL Vaso de precipitados de 500 mL 2 Tubos Klett Reactivos Solucin patrn de RNA 0.3 mg/mL Solucin RNA problema Reactivo de Orcinol cido Reactivo de Orcinol alcohol

Desarrollo a) Prepare una serie de 6 tubos de ensaye, numerndolos. b) Tubo 1, nicamente 3 mL de H2O destilada. (t(-), amarillo) c) Tubo 2, coloque 3 mL de sol. patrn de RNA [0.3 mg/mL] d) Tubo 3, coloque 3 mL de H2O destilada, ms 3 mL de solucin patrn de RNA [0.15 mg/mL] y mezcle completamente. e) Tubo 4, coloque 3 mL de H2O destilada, ms 3 mL de solucin del Tubo 3 [0.075] y mezcle completamente. f) Tubo 5, coloque 3 mL de H2O destilada, ms 3 mL de solucin del Tubo 4 [0.0375] y mezcle completamente. Deseche 3 mL. g) Tubo 6, nicamente 3 mL del RNA problema. h) A continuacin, aplique a los tubos el tratamiento de la tabla siguiente. Reactivo / mL Reactivo de Orcinol cido (en la campana extractora) 1 6 2 6 TUBO No 3 4 5 6 6 6 0.4 0.4 0.4 6 6 0.4

Reactivo de Orcinol alcohol (en la campana extracto- 0.4 0.4 ra) Agitar vigorosamente

Incubar 20 minutos en BAO MARA. a ebullicin Incubar 5 minutos en bao de hielo (color verde esmeralda) i) Mida la intensidad del color en el espectrofotmetro a 660 nm, AJUSTANDO A CERO CON EL TUBO 1. j) Anote sus resultados en la tabla siguiente. TUBO No 1 (t-) DENSIDAD PTICA (D.O.) Concentracin (mg/mL)
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2 0.3

3 0.15

4 0.075

5 0.0375

6 (p)

0 0
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Cuestionario 1. Grafique D.O. en funcin de la concentracin de RNA en mg/mL. 2. Interpole el valor de D.O. de la solucin problema y obtenga la concentracin de RNA en mg/mL, de la solucin problema.

Identificacin y Cuantificacin de Fosfato Total


Material 6 Tubos de ensaye Pipetas de 5 mL Vaso de precipitados de 500 mL 2 Tubos Klett Reactivos Buffer acetatos 0.1N pH= 4 Reactivo de Molibdato 2.5% Vitamina C 1% (reciente) Sol. tipo de PO4 1M Sol. tipo de PO4 2.5M Sol. tipo de PO4 5M Problema de DNA Problema de RNA Agua destilada

Desarrollo a) Prepare una serie de 6 tubos como se indica en la tabla siguiente. Reactivo /mL Buffer acetatos 0.1M pH= 4 Reactivo de Molibdato 2.5% Vitamina C 1% (reciente) H2O destilada Sol. tipo de PO4 1M/mL Sol. tipo de PO4 2.5M/mL Sol. tipo de PO4 5M/mL Problema de DNA Problema de RNA Reposar 30 minutos a temperatura ambiente (color azul) b) Mida la intensidad del color desarrollado en el espectrofotmetro a 660 nm, usando como blanco el tubo 1. c) Anote sus resultados en la tabla siguiente. TUBO No 1 (t-) DENSIDAD PTICA (D.O.) Concentracin (M/mL) 0 0 1.0 2.5 5.0 2 3 4 5 (DNA) 6 (RNA) 1 t7 0.5 0.5 2 2 2 2 2 2 2 7 o.5 0.5 TUBO No 3 4 7 7 0.5 0.5 0.5 0.5 5 7 0.5 0.5 6 7 0.5 0.5

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Cuestionario 1. Grafique D.O. en funcin de la concentracin de Fosfato. 2. Interpole los valores de D.O. de las soluciones problema (DNA y RNA) y obtenga la concentracin de Fosfato, en M/mL. 3. Anote como afecta el medio cido y el bsico los enlaces 3'-5' dister fosfato.

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APNDICE I. Curva Tipo de Azucares Reductores


Material 1 matraz aforado de 100 mL 3 pipeta de 5 o 10 mL 1 vaso de precipitados de 600 mL 2 celdas para fotocolormetro 11 tubos de ensayo Reactivos Glucosa (Dextrosa) grado reactivo Regulador de fosfatos de pH 7 cido 3,5-dinitrosaliclico

Desarrollo a) Solucin estndar (0.1 M) Disuelve 1.8 g de Glucosa en 100 mL de agua. b) Solucin tipo (0.02 M) Diluye 20 mL de la solucin estndar a 100 mL con agua destilada. c) Prepara una serie de 11 tubos de ensaye como se indica en la tabla siguiente. Solucin mL de solucin tipo mL regulador de fosfato pH = 7 Ac. 3,5-dinitrosaliclico Testigo 1 0 10 1 1 9 1 2 2 8 1 3 3 7 1 4 4 6 1 5 5 5 1 6 6 4 1 7 7 3 1 8 8 2 1 9 10 9 10 1 1 0 1

d) Coloca todos los tubos en bao mara a ebullicin durante 10 minutos. e) Enfra los tubos al chorro del agua y lee la coloracin en el fotocolormetro a 540 nm (filtro verde), empleando el tubo 1 como blanco para ajustar a cero. f) Registra tus resultados en la tabla siguiente: Tubo No Testigo U.K. MA.R. 0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Cuestionario 1.Calcula la concentracin molar de azucares reductores (MA.R.) en cada tubo. Anota el resultado en la tabla anterior 2.Dibuja la grfica de la curva tipo que obtuviste, en unidades Klett en funcin de la concentracin molar de azcares reductores. 3.Calcula la ecuacin de la recta obtenida, para calcular la concentracin de azucares reductores de los problemas.

Apndice I. Curva Tipo de Azucares Reductores

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APNDICE II. Puente de Wheatstone

COMPONENTES A)Escala del Galvanmetro B)Botn del Seguro de Galvanmetro C)Botn de Ajuste del Galvanmetro D)Botn de Corriente del Galvanmetro E)Terminales para Medir Resistencia F)Terminales para Medir Corriente G)Interruptor de Encendido INSTRUCCIONES DE OPERACIN I. Como fuente de poder 1.Conecte el aparato a la toma de corriente. 2.Conecte los cables conductores a las terminales de batera, (B.A.) 3.El paso de corriente es inmediato, al accionar el interruptor de encendido (G). II. Medicin de la Resistencia 1.Conecte el aparato a una toma de corriente. 2.Libere el galvanmetro deslizando el botn de seguro (B), en direccin de la escala (A). Ajuste la aguja a cero girando el botn de ajuste (C).
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H)Terminales de la Batera I)Perilla de Rango de la Resistencia J)Perilla de Millares K)Perilla de Centenas L)Perilla de Decenas M)Perilla de Unidades

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3.Conecte la resistencia problema a las terminales para medir resistencia (E). El orden no es importante. 4.Ajuste la perilla de Rango de resistencia (H) a su mximo valor (1000). El resto de las perillas (I a L) ajstelas a 9. 5.Presione el botn de corriente del galvanmetro (D) y observe si la aguja de la escala se mueve a la derecha (+) o a la izquierda (-). 6.Mueva la perilla H al valor de 100, vuelva a presionar el botn D y observe si la aguja se mueve en la misma direccin que antes. Si es as, mueva la perilla H al valor inferior siguiente (10) y vuelva a realizar la observacin; contine disminuyendo el valor, hasta que la aguja del galvanmetro cambie de direccin. 7.Despus del cambio de direccin, devuelva la perilla H al ltimo valor en que la aguja se desplaz en la direccin original. 8.A continuacin, mueva la perilla de millares (I) de 9 a 8, presione el botn D y observe si el movimiento de la aguja cambia de direccin. Nuevamente, si no hay cambio, disminuya los valores de la perilla I, hasta encontrar una valor en el cual la direccin del movimiento cambie. 9.De la misma manera, ajuste los valores de las perillas de centenas (J) decenas (K) y unidades (L) en ese orden, hasta que la aguja no se mueva. 10.Una vez logrado el equilibrio, el valor de la resistencia, en ohms, se calcula sumando los valores de obtenidos para las perillas millares, centenas, decenas y unidades, y multiplicando el resultado por el valor del RATIO. Resistencia = (Millares + Centenas + Decenas + Unidades) x RATIO

Apndice II. Puente de Wheatstone

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