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Universidad Autnoma de Coahuila Facultad de Ciencias Qumicas

Desarrollo de la Produccin de Etanol a partir de Agave Tequilero por Fermentacin con Kluyveromyces marxianus

Equipo N 13 Yessica Cecilia Snchez Buentello Ibrahim Eli Rodrguez de Len Ana Patricia Lpez Garca Rosalina Lara Rico

ndice

Introduccin .3 Marco terico.5 Antecedentes....7 Objetivo....11 Hiptesis...11 Justificacin..12 Metodologa..13 Glosario.14 Bibliografas..15

Introduccin

La principal fuente de energa de la sociedad moderna proviene de la combustin de la gasolina, petrleo, carbn y/o gas natural. Estos compuestos, llamados combustibles fsiles, tienen su origen en las plantas y los animales prehistricos. Ante la inminente crisis energtica ocasionada por el agotamiento de las reservas petroleras, el deterioro ambiental y de salud pblica originada por el empleo de combustibles fsiles, surge la necesidad de desarrollar fuentes de bioenerga con alto potencial. Para responder a estos desafos las polticas pblicas se han focalizado particularmente hacia el impulso y desarrollo de los llamados cultivos bioenergticos.Los cultivos energticos son plantaciones de crecimiento rpido que se realizan con el propsito especfico de producir energa mediante su transformacin en biocarburantes1. Mxico cuenta con un alto potencial de recursos bioenergticas resultado de su biodiversidad y de sus condiciones climticas y geogrficas, aprovechar este desarrollo permitir al pas contar con mayor diversificacin de fuentes alternativas no contaminantes como las obtenidas a partir de la biomasa 2 que son una excelente oportunidad para que especies como el Maguey plantas tpicas del pas sean consideradas como recurso bioenergtica. El Maguey (Agave SPP) representa una parte importante de nuestro legado histrico y cultural y actualmente es una fuente importante de empleo y de generacin de recursos para nuestro pas. Mxico, es considerado centro de origen. En la taxonoma clsica se le ubica en la familia Amaryllidaceae, subfamilia Agavoideae. El gnero Agave es el ms grande de esta familia, comprendiendo aproximadamente, doscientas setenta y cinco especies (Lawrence, 1951). Sin embargo, Hutchinson (1934) lo ubic dentro del orden Agavales y especficamente en la familia Agavaceae, en donde se incluye el gnero Agave. Alrededor de 300 especies presentes en el contiene americano,
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272 de ellas reportadas en nuestro pas. Es quizs la planta con mayor utilizacin y aprovechamiento a nivel mundial. De la planta se pueden obtener bebidas alcohlicas y fermentacin, alimentos, forraje para rumiantes, fibras, materiales de construccin, papel y productos teraputicos, entre otros. Recientemente, tambin se le ha encontrado un alto potencial en la produccin de conglomerados para la fabricacin de muebles y como sustrato para la produccin de hongos y compostas. No obstante, se considera que sido subutilizado en la elaboracin de productos agroalimentarios y industriales y de alto valor agregado. El Maguey presenta varias ventajas competitivas en relacin a los cultivos bioenergticas tales como: alta eficiencia productiva, amplio rango de adaptacin, bajos requerimientos de insumo y de tecnologa, por lo que puede establecer y desarrollar en diferentes regiones agroecolgicas de nuestro pas,

constituyndose en opciones energticas con un alto potencial. Un aspecto importante a resaltar es que en su produccin no se desplazan cultivos, ni se abren nuevas tierras y se pueden establecer en suelos pobres y con problemas de erosin.

Marco Terico
El etanol es un compuesto qumico obtenido a partir de la fermentacin de los azcares que puede utilizarse como combustible, solo, o bien mezclado en cantidades variadas con gasolina, y su uso se ha extendido principalmente para reemplazar el consumo de derivados del petrleo. El combustible resultante de la mezcla de etanol y gasolina se conoce como gasohol o alconafta. Dos mezclas comunes son E10 y E85, con contenidos de etanol del 10% y 85%, respectivamente. El etanol tambin se utiliza cada vez ms como aadido para oxigenar la gasolina estndar, reemplazando al ter metil tert-butlico (MTBE). Este ltimo es responsable de una considerable contaminacin del suelo y del agua subterrnea. Para la produccin de etanol en el mundo se utiliza mayormente como fuente biomasa. Este etanol es denominado, por su origen, bioetanol. El etanol es uno de los biocombustibles ms importantes que se produce, a precios muy competitivos, a partir de sustratos renovables como la caa de azcar en Brasil, y el maz en Estados Unidos. Debido a que la produccin mundial actual no es suficiente para satisfacer la demanda de energa, se han desarrollado otros procesos biotecnolgicos que utilizan varios tipos de materias primas para la produccin a gran escala de etanol de origen biolgico (bioetanol):

Sustancias con alto contenido de sacarosa


o o o o

caa de azcar remolacha melazas sorgo dulce

Sustancias con alto contenido de almidn


o

maz patata

yuca

Sustancias con alto contenido de celulosa


o o

madera residuos agrcolas

Sntesis qumica
El etanol para uso industrial se suele sintetizar mediante hidratacin cataltica del etileno con cido sulfrico como catalizador3. El etileno suele provenir del etano (un componente del gas natural) o de nafta (un derivado del petrleo). Tras la sntesis se obtiene una mezcla de etanol y agua que posteriormente hay que purificar mediante destilacin simple.

Kluyveromyces marxianus
Clasificacin cientfica Reino: Filo: Subfilo: Clase: Orden: Familia: Gnero: Fungi Ascomycota Saccharomycotina Saccharomycetes Saccharomycetales Saccharomycetaceae Kluyveromyces

Kluyveromyces marxianus
Las colonias pastosas corresponden a un grupo de hongos conocido como levaduras. stas son organismos unicelulares4 en algn momento de su ciclo de vida y se multiplican por germinacin5 o sexualmente mediante ascosporas6 o basidioesporas7

Kluyveromyces marxianus

es una

levadura aerobia8 se usa comercialmente para producir la enzima lactasa similar al uso de otros hongos como los del gnero Aspergillus.

Especie: K. marxianus Nombre binomial Kluyveromyces marxianus Van der Walt, 1971

K. marxianus

son mesfilas9, con una

temperatura mxima de crecimiento entre 24 y 48C; necesita un pH ligeramente acido de 4.5 a 6.5 para su crecimiento optimo.

Antecedentes
La fermentacin de los azcares es llevada a cabo por microorganismos (levaduras o bacterias) y produce etanol, as como grandes cantidades de CO 2. Adems produce otros compuestos oxigenados indeseables como el metanol, alcoholes superiores, cidos y aldehdos. Tpicamente la fermentacin requiere unas 48 horas. En la actualidad tres pases han desarrollado programas significativos para la fabricacin de bioetanol como combustible: Estados Unidos (a partir de maz), Brasil y Colombia (ambos a partir de caa de azcar). El etanol se puede producir a partir de otros tipos de cultivos, como remolachas, zahna, mijo perenne, cebada, camo, kenaf, patatas, mandioca y girasol. Tambin puede extraerse de mltiples tipos de celulosa "no til". Se pueden obtener cantidades ms reducidas de alcohol combustible de los tallos, de elementos reciclados, de la paja, de las mazorcas de maz, y de productos sobrantes de las granjas que ahora se utilizan para hacer piensos, fertilizantes, o que se utilizan como combustibles de plantas de energa elctrica. De hecho, EEUU podra conseguir todo el etanol que necesita usando una mezcla de, por ejemplo, los tallos (parte no aprovechada) del maz y de la planta de maz, sin roturar ms tierras de labranto. En Mxico, desde hace varios siglos, se producen bebidas alcohlicas y destiladas a partir de agaves, y recientemente subproductos de las industrias tequilera y mezcalera se utilizan en la produccin de bioetanol. Actualmente en la pennsula de Yucatn se desarrollan tecnologas para utilizar el jugo, subproducto de la agroindustria de la fibra de henequn (Agave fourcroydes Lem.). En 2005 esta industria proces 250 millones de hojas para producir 5000 ton de fibra, y origin 75 millones de litros de jugo como residuo. Este sustrato contiene un alto porcentaje de oligofructanos10 que pueden ser utilizados en la produccin de bioetanol. En estudios preliminares Barahona y colaboradores obtuvieron 2.72% de etanol (v/v) al fermentar el jugo con Kluyveromyces marxianus cepa Cicy-Ki, lo que es una produccin baja si se compara con el 6-8% v/v obtenido al fermentar melaza
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con una cepa comercial de Saccharomyces cerevisiae; y el 4-5% v/v producido al fermentar el jugo con esta cepa. Con base en estos resultados se plante el presente estudio para incrementar el rendimiento en la produccin de etanol al fermentar jugo de henequ adicionado con melaza con un inculo mixto de K. marxianus cepa autctona Cicy Ki, aislada de la planta de henequn y S. cerevisiae cepa comercial Safoeno, en diferentes proporciones.

Bioqumica de la reaccin
La gluclisis11 es la primera etapa de la fermentacin, lo mismo que en la respiracin celular, y al igual que sta necesita de enzimas para su completo funcionamiento. A pesar de la complejidad de los procesos bioqumicos una forma esquemtica de la reaccin qumica de la fermentacin alcohlica puede describirse como una gliclisis (en la denominada va Embden-Meyerhof-Parnes) de tal forma que puede verse como participa inicialmente una molcula de hexosa. C6H12O6 + 2 Pi + 2 ADP 2 CH3-CH2OH + 2 CO2 + 2 ATP + 25.5 kcal Se puede ver que la fermentacin alcohlica es desde el punto de vista energtico una reaccin exotrmica12, se libera una cierta cantidad de energa. La fermentacin alcohlica produce gran cantidad de CO2, que es la que provoca que el cava13 (al igual que el Champagne y algunos vinos) tengan burbujas. Este CO 2 (denominado en la edad media como gas vinorum) pesa ms que el aire, y puede llegar a crear bolsas que desplazan el oxgeno de los recipientes donde se produce la fermentacin. Por ello es necesario ventilar bien los espacios dedicados a tal fin. Un clculo realizado sobre la reaccin qumica muestra que el etanol resultante es casi un 51% del peso, los rendimientos obtenidos en la industria alcanzan el 7%. Se puede ver igualmente que la presencia de fsforo (en forma de fosfatos), es importante para la evolucin del proceso de fermentacin. La fermentacin

alcohlica se produce por regla general antes que la fermentacin malolctica, aunque existen procesos de fermentacin especficos en los que ambas fermentaciones tienen lugar al mismo tiempo. La presencia de azcares asimilables superiores a una concentracin sobre los 0,16 g/L produce invariablemente la formacin de alcohol etlico en proceso de crecimiento de levadura (Saccharomyces cerevisiae) incluso en presencia de exceso de oxgeno (aerbico), este es el denominado efecto Crabtree, este efecto es tenido en cuenta a la hora de estudiar y tratar de modificar la produccin de etanol durante la fermentacin. Si bien el proceso completo (va Embden-Meyerhof-Parnes) descrito simplificado anteriormente explica los productos resultantes de la fermentacin etlica de una hexosa, cabe destacar que el proceso se puede detallar en una gliclisis previa gobernada por un conjunto de enzimas en la que se obtiene 2 piruvato tal y como se describe a continuacin: C6H12O6 2 CH3COCOO + 2 H2O + 2H+ La reaccin qumica se describe como la reduccin de dos molculas de Nicotinamid adenina dinucletido (NAD+) de NADH (forma

reducida del NAD+) con un balance final de dos molculas de ADP que finalmente por la reaccin general mostrada anteriormente se convierten en ATP (adenosn trifosfato). Otros compuestos trazados en menores proporciones que se encuentran presentes tras la fermentacin son: el cido succnico, el glicerol, el cido fumrico. En ms detalle durante la fermentacin etlica en el interior de las levaduras, la va de la gluclisis es idntica a la producida en el eritrocito (con la excepcin del piruvato que se convierte finalmente en etanol). En primer lugar el piruvato se descarboxila mediante la accin de la piruvato descarboxilasa para dar como producto final acetaldehdo liberando por ello dixido de carbono (CO 2) a partir de iones del hidrgeno (H+) y electrones del NADH. Tras esta operacin el NADH sintetizado en la reaccin bioqumica catalizada por el GADHP se vuelve a oxidar
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por el alcohol deshidrogenasa, regenerando NAD+ para la continuacin de la gluclisis y sintetizando al mismo tiempo etanol. Se debe considerar que el etanol va aumentando de concentracin durante el proceso de fermentacin y debido a que es un compuesto txico, cuando su concentracin alcanza aproximadamente un 12% de volumen las levaduras tienden a morir.

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Hiptesis
Desarrollar y determinar el potencial agronmico, energtico y sustentable de la produccin de bioetanol a partir del Agave tequilero.

Objetivo general
Desarrollar y determinar el potencial del Agave tequilero para la produccin de etanol.

Objetivos especficos
Recoger y analizar informacin agronmica sobre la produccin de Agave tequilero Evaluar del cultivo de agave tequilero como cultivo para

bioenergticos. Disear mejoras de utilizacin de agave tequilero para obtener etanol

combustible.

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Justificacin
El impacto ambiental del planeta est estrechamente relacionado con un problema social surgido por la utilizacin creciente del petrleo: la reduccin de los niveles de emisin de sustancias txicas y de los llamados " gases de invernadero" tales como: CO2, metano, xido nitroso y los cloro-

flurocarbonatos, reflejan la necesidad de una accin concertada de la sociedad para mitigar dichos efectos. Considerando el potencial del etanol para reducir la contaminacin, es una fuente de combustible que arde formando dixido de carbono y agua, como la gasolina sin plomo convencional. Para cumplir la normativa de emisiones se requiere la adicin de oxigeno para reducir emisiones del monxido de carbono. El aditivo metil tert-butil ter actualmente se est eliminando debido a la contaminacin del agua subterrnea, por lo tanto el etanol se convierte en un atractivo aditivo alternativo. Como aditivo de la gasolina, el etanol al ser ms voltil, se lleva consigo gasolina, lanzando as ms compuestos orgnicos voltiles. El agave es una de las plantas tpicas del pas que podra ser mejor para producir etanol que otras plantas. Debido a sus caractersticas que favorecen la produccin bioenergtica en un mundo en el que las tierras cosechables y el agua escasean cada vez ms, stas son propiedades vitales. El agave es una planta que produce elevados niveles de azcar, zcares que por medio de fermentacin son capaces de ser transformados en etanol y posteriormente en combustible.

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Metodologa Etapa 1
Las hojas de henequn se lavaran y se prensaran para obtener el jugo, que ser filtrado y esterilizado para hidrolizar14 los oligofructanos. Su contenido inicial de slidos totales se ajusta a 8 y 10Brix15 con agua destilada, y despus se incrementa a 12Brix con melaza. Como fuente de nitrgeno se adicionara sulfato de amonio (1.5gL-1), y el pH se debe mantenerse a 4.7 0.2.

Etapa 2
La inoculacin16 se llevara a cabo con K. marxianus Cicy-Ki proporciones 25/75, 50/50, 75/25. en

Etapa 3
La fermentacin se realizara por triplicado, durante 48h a 35 2C, en oscuridad y sin agitacin. Se muestreara cada 12h para cuantificar los slidos totales; los azcares reductores se analizaran por el mtodo DNS al inicio y al final de la fermentacin.

Etapa 4
La destilacin se realizara en una columna Vigreux17, obteniendo las fracciones cabeza, cuerpo y cola. El etanol se evaluara por el mtodo de dicromato y el rendimiento se cuantificara en % (v/v) (volumen de etanol en el cuerpo/volumen de mosto fermentado).

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Glosario
Biocarburantes1: Mezcla de hidrocarburos que se utiliza como combustible en los motores de combustin interna y que deriva de la biomasa. Biomasa2: Fuente energtica puede ser aprovechada mediante su combustin directa a travs de su transformacin en biogs, bioalcohol, etc. Catlisis3: Proceso por el cual se aumenta o disminuye la velocidad de una reaccin qumica, debido a la participacin de una sustancia llamada catalizador Unicelulares4: Un organismo que est formado por una nica clula Germinacion5: Es el proceso mediante el cual una semilla se desarrolla hasta convertirse en una nueva planta.
Ascosporas6: Son las esporas sexuadas internas que se originan en un nmero limitado dentro de una clula llamada asco (capa que envuelve las esporas como si fuera un saco) Basidioespora7: Son las esporas sexuadas externas que se originan en el basidio (estructura encargada de formar las esporas)

Organismo Aerobio8: Organismos que pueden vivir o desarrollarse en presencia de oxgeno diatnico (O2) Mesofilas9: Aquel que tiene una temperatura ptima de crecimiento de entre 15 y 35 C. Oligofructanos 10: Estructura lineal formado por entre 10 y 20 monmeros de fructosa, unidos por enlaces (12) y que pueden contener una molcula inicial de glucosa Gluclisis11: va metablica encargada de oxidar la glucosa con la finalidad de obtener energa para la clula. Reaccin exotrmica12: Cualquier reaccin qumica que desprende calor. El cava13 es un vino espumoso elaborado por el mtodo tradicional Hidrlisis14: reaccin qumica entre una molcula de agua y otra molcula, en la cual la molcula de agua se divide y sus tomos pasan a formar parte de otra especie qumica. Los grados Brix15: (smbolo Bx) sirven para determinar el cociente total de sacarosa disuelta en un lquido.
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Inocular16: es la accin de introducir un organismo vivo menor a uno mayor con la finalidad de causar algn cambio.

Bibliografa
Enciclopedia juvenil ocano Tomo: 4 Enciclopedia interactiva estudiantil siglo XXI ocano Fermentacin alcohlica: Una opcin para la produccin de energa renovable a partir de desechos agrcolas", H.J. Vzquez, INGENIERA Investigacin y Tecnologa VIII. 4. 249-259, 2007 "Produccin discontinua de alcohol con clulas inmovilizadas, Reactor de 200 L"; Garca, Jos L.; Surez, Manuel, pub. en Revista ICIDCA, vol. XXVI, No. 2- 1, l992. Fermentaciones tradicionales indgenas de Mxico", Lappe Patricia y Ulloa Miguel; Instituto Nacional Indigenista, Mxico, 1987. El gnero Agave SPP. en Mxico: Principales Usos de Importancia Socioeconmica y Agroecolgica pub de E. Javier Garca Herrera, S. de Jess Mndez Gallegos, Daniel Talavera Magaa Profesores Investigadores. Campus San Luis Potos, Colegio de Postgraduados Tzec-Gamboa M. 2006. Evaluacin de levaduras de mostos de henequn (Agave fourcroydes) para la produccin de una bebida alcohlica. Tesis de Maestra en Ciencias y Biotecnologa de Plantas. CICY, Yucatn, Mxico. Williams M. y Reese D. 1950. Colorimetric determination of ethyl alcohol. Anal Chem 22: 15561561. SAS Institute. 1985. SAS users guide: Statistics, Version 5 Ed. Gary, NC.

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