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ANLISIS DE LA EFICACIA DE PRESERVANTES QUMICOS, UTILIZADOS EN SHAMPOO, QUE SE FABRICAN EN LA INDUSTRIA GUATEMALTECA
Carlos Roberto Mazariegos Lpez Asesorado por: Licenciada Wanda Patricia Gonzles
FACULTAD DE INGENIERA
ANLISIS DE LA EFICACIA DE PRESERVANTES QUMICOS, UTILIZADOS EN SHAMPOO, QUE SE FABRICAN EN LA INDUSTRIA GUATEMALTECA
TRABAJO DE GRADUACIN
CARLOS ROBERTO MAZARIEGOS LPEZ ASESORADO POR: LICENCIADA WANDA PATRICIA GONZLEZ.
Ing. Murphy Olympo Paiz Recinos Inga. Glenda Patricia Garca Soria Inga. Alba Maritza Guerrero de Lpez Ing. Miguel ngel Dvila Caldern Br. Kenneth Issur Estrada Ruiz
Ing. Sydney Alexander Samuels Milson Ing. Williams Guillermo lvarez Meja Ing. Csar Alfonso Garca Garca Ing. Orlando Posadas Valdz Ing. Pedro Antonio Aguilar Polanco
III
II
III
IV
NDICE GENERAL
NDICE DE ILUSTRACIONES................................................................ III GLOSARIO ................................................................................................. V HIPTESIS ................................................................................................. VII RESUMEN................................................................................................... IX OBJETIVOS................................................................................................ XI INTRODUCCIN...XIII JUSTIFICACIN....XV PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA...XVII
1. ANTECEDENTES .................................................................................. 1
II
NDICE DE ILUSTRACIONES
TABLAS
I Control de viabilidad de bacterias y hongos....27 II Control de preservantes.....27 III Determinacin de efectividad de bacterias de tres Preservantes, da cero....28 IV Determinacin de efectividad de bacterias de tres Preservantes, da siete........28 V Determinacin de efectividad de bacterias de tres preservantes, da 14....29 VI Determinacin de efectividad de bacterias de tres preservantes, da 21........29 VII Determinacin de efectividad de Bacterias de tres Preservantes, da 28 ......30
III
IV
GLOSARIO
PATGENO:
ANTISPTICO:
BACILO:
BACTERICIDA:
BACTERIOSTTICO:
ESPORA:
MATERIA PRIMA:
PATGENO:
MICROORGANISMO:
Cualquier organismo diminuto, habitualmente microscpico, capaz de realizar los procesos vitales. Pueden ser patgenos. Entre los diversos tipos figuran las bacterias, hongos, protozoos y virus.
VI
HIPTESIS
Se puede seleccionar un preservante adecuado para la fabricacin de shampoo en la industria guatemalteca, utilizando un mtodo estandarizado que pueda realizarse en los laboratorios microbiolgicos de nuestra industria cosmtica guatemalteca. La base de shampoo formulada con Laurel Sulfato de Sodio (12%)..
VII
VIII
RESUMEN
Los microorganismos son entidades biolgicas que no pueden ser vistas a simple vista, solamente con la ayuda de un microscopio. bacterias, hongos, mohos y levaduras. Entre stos se encuentran las
Estos organismos si se encuentran en un medio que contenga nutrientes y condiciones adecuadas para su crecimiento, proliferan, y en altas cantidades pueden provocar daos a la salud y deterioro del medio donde se encuentren, ya sean alimentos, aguas, cosmticos, etc.
Un Shampoo es un producto cosmtico de uso familiar y tiene como objetivo primordial limpiar el cabello y brindarle sedosidad y un aspecto sano; para lograrlo, el shampoo posee varios nutrientes, entre los que se encuentran protenas, aminocidos, extractos vegetales, todos estos compuestos con carbono, los cuales son fuente de alimento para bacterias y hongos.
Para evitar que en un shampoo proliferen microorganismos, se debe de adicionar a la frmula componentes qumicos antimicrobianos, estos componentes se llaman: preservantes o conservadores.
El presente estudio se realiz con el objetivo de determinar la eficacia de tres distintos preservantes en shampoos elaborados en la industria guatemalteca. Los
preservantes fueron: DMDM Hidantoina (y) Iodopropinil Butilcarbomato, Diazolidinil Urea (y) Iodopropinil Butilcarbomato e Hidroximetilglicinato de Sodio.
IX
Los tres preservantes demuestran ser efectivos contra el crecimiento de los distintos microorganismos involucrados en el estudio, de acuerdo a lo que indica la Farmacopea de los Estados Unidos USP XXVI. Los microorganismos son tres Una
bacterias, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomona aeruginosa. levadura, Candida albicans y un hongo Aspergillus niger.
OBJETIVOS
General Analizar diferentes preservantes utilizados en la fabricacin de shampoo, a travs del mtodo descrito en la Farmacopea de los Estados Unidos USP XXVI.
Especficos
2. Establecer una gua para la industria guatemalteca del anlisis microbiolgico de un preservante utilizado en la fabricacin de shampoo, basado en el mtodo de la Farmacopea de los Estados Unidos USP XXVI.
XI
XII
INTRODUCCIN
Los cosmticos son todos aquellos productos que se fabrican con el fin de embellecer o cuidar el cuerpo humano, entre los que se incluyen cremas para manos, cuerpo y faciales, maquillajes, productos para el cabello, etc.
Un problema que atae a toda industria cosmtica es la inocuidad de sus productos y la contaminacin microbiolgica de los mismos, pues estos productos constituyen, por su composicin, un buen sustrato para que los microorganismos puedan desarrollarse, en especial en los productos para cabello.
Un shampoo es un producto cosmtico destinado para la limpieza y cuidado del cabello, constituido por agua como vehculo, activos como surfactantes, extractos, aditivos como fragancia, colorante y coadyuvante como los preservantes.
Para evitar que exista contaminacin microbiolgica es necesario el empleo de un sistema que evite el desarrollo de microorganismos y las graves consecuencias que esto conlleva, a este sistema se le denomina preservantes.
El evaluar los preservantes disponibles comercialmente es importante, ya que con ellos se determina cules son los que brindan mejores beneficios para cada producto cosmtico.
El conocer los distintos grados de actividad bactericida de los preservantes a estudio, ayudar a identificar aquellos ms promisorios para el uso en la industria cosmtica guatemalteca.
XIII
XIV
JUSTIFICACIN
El shampoo es un producto no estril y debe contener niveles apropiados de microorganismos que segn la norma NG06064 COGUANOR el contenido de bacterias no patgenas debe ser menor de 1,000 unidades formadoras de colonia (UFC) y el contenido de bacterias patgenas debe ser Negativo.
Para lograr obtener estos niveles bacterianos es necesario utilizar productos qumicos capaces de inhibir el crecimiento de microorganismos no deseados, estos productos qumicos son los preservantes.
Actualmente, en el mercado, se dispone de varias opciones de preservantes, cada uno con caractersticas propias, con ventajas y desventajas para cada producto que se elabora y con una actividad bactericida distinta, por lo que es importante determinar qu preservante es el que presenta las mejores cualidades y beneficios para utilizar en los productos que se fabrican en las empresas productoras de shampoo.
En nuestro medio se utilizan los preservantes segn lo indica las investigaciones y no se realiza un anlisis particular para determinar si lo que dice la investigacin concuerda con lo realizado en la prctica, pues generalmente las condiciones en las que fueron evaluados los preservantes por las casas que los proporcionan, no son las mismas en las que se utilizar en la industria cosmtica y por consecuencia no se obtendrn los mismos resultados, es por ello que es importante determinar la actividad bactericida de distintos preservantes en cada industria cosmtica.
XV
Este estudio ser una gua basada en tcnica descrita por la Farmacopea de los Estados Unidos USP XXVI, para seleccionar la mejor opcin en un anlisis de preservantes basndose en su eficacia.
XVI
Debido a que la mayora de empresas guatemaltecas productoras de shampoo, no evalan cul es el preservante ptimo, en las formulaciones no se obtiene el mejor resultado posible en cuanto a contaminacin microbiolgica se refiere. Las empresas confan en la informacin tcnica del producto entregada por su distribuidor.
Si la preservacin de un shampoo no se realiza eficientemente sta puede provocar varios problemas, tanto al productor como al consumidor final.
XVII
1. ANTECEDENTES
1.1 Preservante
Un preservante es una sustancia antimicrobiana que se aade a un producto en cantidades muy pequeas (entre 0.0007 % y 1 % del principio activo, dependiendo del producto) durante el proceso de fabricacin. Su funcin es proteger a los productos frente a la contaminacin por microorganismos durante la fabricacin, almacenaje y uso.
Los microorganismos tales como bacterias y hongos (levaduras y mohos) son susceptibles a propagacin si se encuentran en las condiciones correctas (medios ricos en protenas y compuestos de carbono) y, los productos de cuidado personal proporcionan las condiciones ideales.
1.2 Necesidad de preservar el shampoo Un shampoo con olor desagradable cambio de color y/o apariencia, no es atractivo para el consumidor quien, probablemente, lo desechara (y no comprara la misma marca otra vez). Aunque el riesgo de infeccin por causa de un shampoo
contaminado es bajo, los microorganismos presentes en el producto pueden provocar irritaciones o infecciones especialmente si ste entra en contacto con los ojos o con piel lesionada, por lo tanto, un shampoo contaminado representa un riesgo potencial para la salud.
Entre las consecuencias ms frecuentes de contaminacin de shampoo se encuentran, disminucin en la calidad del producto y una reduccin en la eficacia del
producto, que generalmente se atribuye, a menudo equivocadamente, a otras causas porque la contaminacin permanece o enmascarada durante largo tiempo.
1.3 Causas de contaminacin microbiana en el shampoo Tomando como referencia una formulacin de estos las materias primas. utilizadas:
2. Activos: Surfactantes primarios, los cuales efectan limpieza y espuma. Puede ser tambin agentes contra la casa y activos que cumplan con la promesa bsica del producto.
3. Aditivos: Incluyen diversidad de materias primas como lo son fragancia, agentes parlantes, colorantes.
4.
Coadyuvantes:
Los preservantes.
Todas estas materias primas constituyen un sustrato rico en protenas, y compuestos de carbono, los cuales son alimento bacteriano y por lo tanto crean un ambiente perfecto para el desarrollo de los mismos.
Un mal manejo del producto por el usuario es la causa principal de contaminacin. Cada vez que se utiliza un shampoo y se deja abierto, exponindose a humedad (baos clidos) y aire, las cuales son condiciones de cultivo ideales para microorganismos, as como el uso del mismo shampoo por varios individuos propicia la contaminacin microbiolgica del producto.
La contaminacin microbiana de un shampoo tambin desencadena una serie de cambios, tanto en el olor como color y apariencia del producto, el cual origina que el consumidor final no utilice de nuevo el producto, es por ello importante el uso de preservantes, pues as se evita la contaminacin y por ende se mantiene la calidad, evitando la devaluacin del producto.
2. MARCO TERICO
El problema que atae a toda industria cosmtica es la contaminacin microbiolgica de sus productos y su conservacin. Se realizan estudios sobre cada preservante a evaluar, en otros pases, incluso cada casa proveedora presenta un estudio respectivo de eficacia del preservante contra algunos microorganismos comunes, a continuacin se mencionan las caractersticas de cada preservante a analizar.
2.1 DMDM Hidantoina (Y) iodopropinil butil carbamato Esta es una combinacin con un gran efecto sinrgico. El preservante es efectivo para inhibir el crecimiento de bacterias Gram negativo y Gram positivo, hongos y levaduras, no es necesario adicionar preservantes adicionales. Descripcin Nombre CTFA: DMDM Hydantoin (and) Yodo Propynyl Butyl Carbomato Registro Cas No: Frmula Molecular: 6440-58-0 y 55406-53-6 C8H22N3O6 y C8H12NI
2.1.1
Estructura
2.1.2
Amplio espectro de actividad Activo en un pH de 3 9 Se utiliza a baja concentracin No txico Presenta sinergia con otros preservantes
2.1.3
Propiedades fisicoqumicas a) Color: b) Olor: c) Apariencia: d) Formaldehdo: e) Formaldehdo libre: Blanco Caracterstico Polvo fino 27.50 % 0.05 % 5.00 %
2.2 Diazonlidinil urea (Y) iodopropinil butil carbamato Es una combinacin patentada de 99% de 3-Diazolidinil Urea, el ms efectivo miembro de la familia de 3-Imidazolidinil Urea de preservantes, y Iodopropinil Butilcarbomato (IPBC). 1% de
2.2.1
Descripcin
Nombre CTFA: Diazolidinyl Urea (and) Iodopropynyl Butylcarbamete. Registro Cas No: Frmula Molecular: 78491-02-8 y 55406-536 H6N4O7 y HNO2
2.2.2
Estructura
2.2.3
Caractersticas del preservante Amplio espectro de actividad Activo en un rango de pH 3 9 Eficaz en niveles bajos de concentracin Baja toxicidad Presenta sinergia con otros preservantes Soluble en soluciones y emulsiones
2.2.4
Propiedades fisicoqumicas Blanco Caracterstico Polvo fino 19.00 21.00 % 3.0 % mximo 6.00 7.50
Menor 0.25 g Menor 0.10 g Menor 0.10 g Menor 0.10 g 1.00 g 1.00 g
2.3 Hidroximetilglicina de sodio El producto es una solucin al 50 %, este preservante tiene un espectro antimicrobiano contra las bacterias, Gram-negativo y Gram-positivo, hongos y levaduras. Mantiene su actividad en un rango de pH de 3.50 a 12.00.
2.3.1
2.3.2
Estructura
2.3.3 Caractersticas del preservante Amplio espectro de actividad Activo en un medio de pH alcalino Doble funcin, neutraliza y preserva Baja toxicidad Presenta sinergia con otros preservantes
2.3.4 Propiedades fisicoqumicas Color: Olor: Apariencia: Nitrgeno: Total de slidos: pH: Transparente - levemente amarillo Caracterstico Lquido claro 5.50 6.10 %
10.00 12.00
Solubilidad (g / 100 g de solvente) i. ii. iii. iv. v. vi. vii. Agua: Mayor Propilen Glycol: Glicerina: Butylene Glycol: Aceite Mineral: 119 g Menor 0.10 g Menor 0.10 g 100 g 112 g
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3.1 Universo de trabajo Tres productos qumicos que actan como preservantes en cosmticos, evaluando su eficacia en shampoo elaborados por la industria guatemalteca.
Recursos Institucionales: Laboratorio de Control de Calidad Microbiolgico del Departamento de Aseguramiento de Calidad de Comercial Incoquim.
Recursos Fsicos:
Cepas i. ii. iii. iv. v. Escherichia coli ATCC 10536 Staphylococcus aureus ATCC 6538 Pseudomona aeruginosa ATCC 9020 Candida albicans ATCC 10231 Aspergillus niger ATCC 16404
Medios de cultivo y reactivos i. ii. Agar Tripticasa Soya (TSA) Agar Sabouraud-Dextrosa al 4 % (SAP)
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Agua peptonada Tween 80 Solucin salina estril Estndar de MacFarland No. 1 Alcohol Etlico
Equipo viii. ix. x. xi. xii. xiii. xiv. xv. xvi. xvii. Campana de flujo laminar Incubadora para bacterias Mechero Bunsen Autoclave Contador de colonias Hot Plate Stirer Cajas de Petri Pipetas Serologcas Erlenmeyers Frascos de vidrio de boca ancha estril
xviii. Tubos de ensayo xix. xx. xxi. Asas de nicromo Agitadores mangnticos Cinta Testigo
Se prepara un inculo de las bacterias P. aeruginosa, E. coli y S. aureus que se siembra de las cepas ATCC, en el medio tripticasa soya y luego son incubadas por 48 horas a 37C. Una vez el crecimiento sea vigoroso se toma una asada del cultivo a un tubo con agua peptonada estril, obtenindose una solucin de cada microorganismo que visualmente corresponda a la turbidez del
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estndar de MacFarland No. 1, es decir a una concentracin de entre 105 a 107 UFC / ml de cada microorganismo.
Por aparte, se prepara un inculo de C. albicans sembrando de la cepa ATCC en el medio Sabouraud-Dextrosa agar al 4 %, y luego se incuba por 48 horas a temperatura ambiente. Una vez se observa crecimiento vigoroso se procede a trasladar una asada del cultivo a un tubo con solucin salina estril, la solucin de este microorganismo debe corresponder visualmente a la turbidez del estndar de MacFarland No. 1, es decir a una concentracin de entre 105 a 107 UFC / ml de cada microorganismo.
Se prepara un inculo de A. niger sembrando de la cepa ATCC, en el medio Sabouraud-Dextrosa Agar y luego ser incubado por 7 das a temperatura ambiente. Una vez obtenido el crecimiento vigoroso se procede a trasladar una asada del cultivo a un tubo con solucin salina estril que contiene 0.5 % de Tween 80, la solucin de este microorganismo debe corresponder visualmente a la turbidez del estndar de MacFarland No. 1, es decir a una concentracin de entre 105 a 107 UFC / ml de cada microorganismo.
De estas soluciones se hace una dilucin 1:100,000 con solucin salina estril, a las que luego se les determina el nmero de Unidades Formadoras de Colonia (UFC/ml) por el mtodo de conteo aerbico en placa anteriormente mencionado; estas se constituirn en las soluciones que contienen el inculo inicial.
3.3.2
Se transfieren 20 ml de cada muestra a evaluar a cinco frascos de boca ancha, los cuales se inocularon con 1.0 ml de las soluciones que contienen a cada uno de los microorganismos a evaluar (8).
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Luego por el mtodo de conteo aerbico en placa, se determina el nmero de UFC por mililitro (factor 1:21) de cada microorganismo, presente en cada frasco, a los 7, 14, 21 y 28 das de la inoculacin (8).
Se realiza una determinacin de solucin salina como, para descartar contaminacin externa durante el procedimiento y para establecer la viabilidad de los microorganismos durante la prueba se realizan cultivos directos en cajas petri con agar Tripticasa Soya y agar Sabouraud (8).
Para evaluar la viabilidad de los microorganismos, se siembra 1 ml de cada una de las bacterias y hongos en evaluacin en diferentes cajas de medio de cultivo, se incuban y luego se observa su crecimiento.
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4. DISCUSIN DE RESULTADOS
En el presente estudio se determin la eficacia de tres conservadores qumicos utilizados en shampoo. Se escogieron estos conservadores por ser ampliamente
Los preservantes objeto de estudio fueron: DMDM Hidantoina (y) Iodopropinil Butilcarbomato, Diazolidinil Urea (y) Iodopropinil Butilcarbomato e
Hidroximetilglicinato de Sodio. Para la determinacin de eficacia bactericida de los preservantes se utiliz un mtodo estandarizado descrito en la Farmacopea de los Estados Unidos USP XXVI y ha demostrado confiabilidad y sensibilidad al ser utilizado en anlisis de conservadores qumicos, por lo que se considera que los resultados del presente estudio son confiables.
Los anlisis de conservadores se realizaron a tres distintas concentraciones 0.1%, 0.3% y 0.5% esto con el fin de determinar cul era la concentracin ptima de actividad bactericida del mismo.
Las pruebas se realizaron en tres fechas diferentes con el objetivo de determinar la eficacia de los preservantes en cuanto al tiempo de exposicin de los mismos con el shampoo.
Se realiz un control de bacterias y hongos el cual sirvi para determinar si los microorganismos utilizados se encontraban viables durante todo el tiempo que dur el estudio y en efecto todas las siembras de stos crecieron satisfactoriamente.
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Tambin se realizaron controles de preservantes, es decir, se sembraron conservadores pero sin exponerlos a bacterias, esto con el fin de determinar y con ello descartar la existencia de alguna contaminacin externa que se pudiera presentar. Estos controles indicaron ausencia total de contaminacin, pues en ninguno de ellos presento crecimiento bacteriano como se esperaba.
El preservante que mejor eficacia present fue el Hidroximetilglicinato de Sodio, pues en las tres concentraciones analizadas en las cinco distintas fechas las siembras no presentaron crecimiento bacteriano ni de hongos por lo que se puede inferir que este conservador posee una alta accin en relacin al tiempo, en las sepas utilizadas y puede ser recomendado para su uso y que sea eficiente.
El DMDM Hidantoina (y) Iodopropinil Butilcarbomato presenta una buena eficacia bactericida, pues de las 75 determinaciones realizadas a este preservante (75 determinaciones pues fueron 5 microorganismos, por tres concentraciones por cinco das), solamente 2 de ellas fue imposible determinar la cantidad exacta de crecimiento bacteriano (E. coli en concentracin de 0.1% y P. aeruginosa en la misma concentracin, ambas el da 1). El da 1 estas dos mismas bacterias tambin presentaron crecimiento pero en menor cantidad a una concentracin mayo 0.3% (E. coli 294 UFC y P. aeruginosa 378 UFC). Este mismo da en la concentracin de 0.5% no se observ crecimiento de ningn microorganismo, lo que indica que este conservador presenta una relacin directamente proporcional con la concentracin en la que se encuentra: a mayor concentracin mayor eficacia bactericida.
El Diazolidinil Urea (y) Iodopropinil Butilcarbomato es el que menor actividad bactericida present en comparacin con los otros dos conservadores analizados, pues seis de las siembras fue imposible determinar la cantidad de bacterias existentes pues su
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crecimiento fue masivo (E. coli a concentracin 0.1% y 0.3% y P. aeruginosa en concentracin 0.1% y 0.3%, el primer da). Fue posible determinar para la concentracin de 0.5 % la cantidad de P. aeruginosa (462 UFC) en el primer da lo que indica que este preservante frente a esta bacteria sera ms efectivo utilizarlo a concentraciones altas para no permitir el crecimiento de la misma. El da 7 P. aeruginosa tambin present crecimiento masivo, pero solamente en la concentracin de 0.1% por lo que se entiende que este preservante posee un mejor efecto de eficacia bactericida conforme el paso del tiempo, pues para el da 21 y 28 ya no existi crecimiento alguno de ningn microorganismo.
Los tres conservadores presentan una eficacia satisfactoria frente a hongos pues ninguno de ellos creci durante todo el tiempo en el que dur el anlisis.
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RESULTADOS
Se analizaron tres preservantes qumicos comerciales: DMDM Hidantoina (y) Iodopropinil Butilcarbomato, Diazolidinil Urea (y) Iodopropinil Butilcarbomato y Hidroximetilglicinato de Sodio.
La tabla I muestra los resultados de los controles de bacterias que se corrieron junto con las muestras a analizar, se sembraron nicamente bacterias sin preservante.
La tabla II indica el resultado de los controles de los conservadores, es decir se sembraron muestras de preservantes sin inculo bacteriano.
La tabla III a la tabla VII muestra los resultados de la determinacin de la eficacia de los conservadores sometidos a estudio. Las cepas de bacterias y hongos utilizadas para la actividad bactericida y fungicida son certificadas y la cantidad de crecimiento se expresa como UFC.
Los tres conservadores presentan una actividad bactericida satisfactoria, sin embargo, el que mayor actividad posee es el Hidroximetilglicinato de Sodio.
El preservante que menor actividad bactericida present fue el Diazolidinil Urea (y) Iodopropinil Butilcarbomato.
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CONCLUSIONES
El conservador qumico que menor eficacia present fue el Diazolidinil Urea (y) Iodopropinil Butilcarbomato.
En general, los tres conservadores empleados en las formulaciones de las muestras de shampoo analizados en el presente estudio, elaborados por la industria cosmtica guatemalteca son efectivos de acuerdo a la prueba de eficacia de preservantes descrita en la Farmacopea de los Estados Unidos, USP XXIII.
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RECOMENDACIONES
Utilizar este trabajo de graduacin como gua en la industria cosmtica guatemalteca, para poder asegurar el resultado de sus preservantes ocupados en la actualidad.
Se recomienda utilizar los resultados de este estudio para dar a conocer la eficacia de tres conservadores qumicos utilizados en las industrias cosmticas guatemaltecas.
Determinar la eficacia de estos preservantes en otros productos cosmticos afines a ellos, para determinar si existe variacin de su actividad bactericida.
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BIBLIOGRAFA
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2. Caldern, E.T. Bacteriostticos, Importancia en la Industria Farmacutica y cosmtica. Guatemala: Tesis Universidad de San Carlos de Guatemala,
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5. Milian M.A. Diseo y Funcionamiento de un Sistema de Control de Calidad Microbiolgico para una Planta de Cosmticos. Guatemala: Tesis Universidad de San Carlos de Guatemala, Facultado de Ingeniera, 1975.
6. Orth DS. Preservative Efficacy Testing of Cosmetics Products. Cosm & Toil, 1971.
7. Romanovski et. al. Los Microorganismos y los Productos para el Cuidado Personal. Cosmticos Nuevos. Nmero 2, abril-junio, 1996.
8. The United Status Pharmacopeila Convention. The United Status Pharmacopeia. The National Formulary. USP XXVI, 1995.
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ANEXO
Da/Bacteria Da 0 Da 7 Da 14 Da 21
Hidroximetilglicinato de
Da 0 Da 7 Da 14 Da 21 Da 28
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Concentracin (%)
0.3
0.5
0.1
0.3
378 UFC NHC MNPC MNPC NHC NHC NHC NHC NHC NHC NHC
NHC NHC A. niger MNPC: Muy Numeroso Para Contar UFC: Unidades Formadoras de Colonia NHC: No Hubo Crecimiento.
Concentracin (%)
NHC NHC A. niger MNPC: Muy Numeroso Para Contar UFC: Unidades Formadoras de Colonia NHC: No Hubo Crecimiento.
28
Concentracin (%)
NHC NHC A. niger MNPC: Muy Numeroso Para Contar UFC: Unidades Formadoras de Colonia NHC: No Hubo Crecimiento.
Concentracin (%)
MNPC: Muy Numeroso Para Contar UFC: Unidades Formadoras de Colonia NHC: No Hubo Crecimiento.
29
Concentracin (%)
MNPC: Muy Numeroso Para Contar UFC: Unidades Formadoras de Colonia NHC: No Hubo Crecimiento.
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