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1

2 1
k
K k
K
m
+


CINETICA ENZIMATICA
Estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas. Esta velocidad puede
medirse con relativa facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o aislar
el enzima.
El proceso enzimtico sigue las siguientes etapas:
K1 K2
E + ! E " E# ! E + #
K $1
En primer lugar el sustrato %& y la enzima %E& se unen y forman un comple'o enzima$
sustrato %E&. (na vez formado el comple'o E, este o )ien se disocia en enzima ms el
sustrato o se transforma el sustrato en producto formado el comple'o enzima$producto
%E#&, que se disocia para dar enzima %E& ms producto %#&.
El proceso fue modelizado por *ichaelis y *enten y le permiti+ o)tener la ecuaci+n en
donde la velocidad de la acci+n de un enzima es funci+n de la cantidad de sustrato
presente, la cantidad de enzima y las caracter,sticas del enzima, la afinidad del enzima
por el sustrato y el poder catal,tico del enzima.
-
ma.
/ K
2
.0 E 1
UNAC-FIPA-QUIMICA DE ALIMENTOS Ing. CARLOS CHINCHAY BARRAGAN
, la cantidad de sustrato presente.
E, cantidad de enzima presente.
K
2
, poder catal,tico del enzima. Es el n2mero de mol3culas de sustrato convertidas en
producto por unidad de tiempo.
K
m
%constante para cada enzima&, concentraci+n de , a la que la -
4
es 152de la -
ma.
. Es
una medida del enzima por . cuando menor es Km, mayor es la afinidad del enzima
por . se puede considerar como la afinidad del enzima por el sustrato.
-
ma.
, velocidad m.ima te+rica, la velocidad cuando todos los centros activos estn
ocupados con sustrato. 6a velocidad m.ima depende de 2 cosas. 6a cantidad de
enzima presente y la capacidad catal,tica del enzima %K
2
&.
6a velocidad en funci+n de la concentraci+n del sustrato.
REPRESENTACION LINEWEAVER - BURKE
7 partir de:
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INHIBIDORES
on sustancias que hacen disminuir la actividad enzimtica, a trav3s de interacciones
con el centro activo u otros centros espec,ficos %alost3ricos&.
Esta definici+n e.cluye todos aquellos agentes que inactivan a la enzima a trav3s de
desnaturalizaci+n de la mol3cula enzimtica.
E.isten dos tipos de inhi)idores:
Isostricos: e'ercen su acci+n so)re el centro activo
Alostricos: e'ercen su acci+n so)re otra parte de la mol3cula, causando un cam)io
conformacional con repercusi+n negativa en la actividad enzimtica.
Los inhibidores isos!ri"os pueden ser de dos tipos: inhi)idores irreversi)les e
inhi)idores reversi)les.
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Los inhibidores irreversibles, modifican qu,micamente a la enzima. on los venenos
que ocupan en forma irreversi)le el centro activo de la enzima, )loqueando su accionar.
E + 8 " E9
Los inhibidores reversibles pueden clasificarse en inhi)idores competitivos, inhi)idor
no competitivo e inhi)idores anticompetitiva.
Inhibidores competitivos
El inhi)idor tiene una estructura similar al sustrato y compite con 3l por el centro activo
del enzima. :uando ocupa el centro activo impide la fi'aci+n del sustrato. 6a inhi)ici+n
puede revertirse simplemente por la adici+n de ms sustrato.
6a inhi)ici+n competitiva modifica el K
m
, pero no la velocidad m.ima.

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[ ]
i
K
I
+ 1

; depende de la concentraci+n del inhi)idor y de la afinidad del inhi)idor por el
enzima.
Inhibidores no competitivos
El inhi)idor se fi'a a la enzima independientemente de que lo haga o no el sustrato< el
inhi)idor, por tanto, no impide la fi'aci+n del su)strato a la enzima, pero s, impide la
acci+n catal,tica.

6a uni+n afecta a la velocidad m.ima. 7unque la uni+n del inhi)idor no afecta a la
afinidad del E por el sustrato, la concentraci+n de sustrato necesaria para alcanzar la
-
ma.
aumenta y por lo tanto la Km tam)i3n resulta modificada.
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,
,
1
i
K
I
+

Inhibidores anticompetitiva
El inhi)idor se fi'a 2nicamente al comple'o enzima$su)strato una vez formado,
impidiendo la acci+n catal,tica.
PROBLEMAS
1.$ En un cultivo de )acterias, la velocidad de reacci+n de una enzima E fue de 24
=g5min para una concentraci+n de sustrato de > m*. i la concentraci+n de sustrato es
igual o superior a ? m*, la velocidad no supera los @4 =g5min. 7l aAadir un inhi)idor
competitivo, la velocidad de la reacci+n fue de 24 =g5min para una concentraci+n de
sustrato de B m*. :alcule la -ma., Km para esta enzima y la Ki, sa)iendo que la
concentraci+n de inhi)idor aAadido es C m*.
Solucin
a& i para una 01 D ? m* la velocidad es @4 =g5min , la -ma. / @4 =g5min
)& Km se determina con: E -ma. / 24=g5min, como esta velocidad se consigue
con una 01 / > m*, la Km/ > m*.
Ftra forma es utilizando la ecuaci+n de *ichaelis:
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01 Km
1 .0 ma.
+

S V
V
> Km
> @4
24
+

x
c& :omo es un inhi)idor competitivo -ma. / -ma.G / @4 =g5min y E -ma.G/24
=g5min. Esta velocidad se alcanza con una 01 de B m* en presencia de
inhi)idor, por lo tanto KmG / B m*
KmG / ;.Km
Km
Ki
I
Km .
1 0
1 H
1
]
1

+
> .
C
1 B
1
]
1

+
Ki
#or lo tanto Ii / >,C m*
2.$ las velocidades iniciales a varias concentraciones de sustrato para una reacci+n
catalizada por un enzima son:
#S$ %&o'es(L) V %*&o'es(&in)
J.14
$2
4,2J
J.14
$>
4,2J
J.14
$@
4,2J
J.14
$J
4,24
J.14
$C
4,4?1
J.14
$?
4,44KC
a& :ul es la velocidad m.ima para esta reacci+n
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)& #orque la velocidad permanece constante a una 01 mayor de J.14
$@
*
c& :ul es la concentraci+n de enzima li)re para una 01 de J.14
$@
*
d& :ul es la Km para la enzima
e& :alcular la velocidad para 01 / 1.14
$C
y 01 / 1.14
$1
Solucin
a& -ma. / 4,2J =mol5min, ya que por encima de 01 de J.14
$@
no aumenta
)& #orque todos los enzimas estn ocupados transformando un sustrato.
c& :ero, todos los enzimas estn ocupados, a esa 01 se da la -ma.
d& e puede utilizar de la ta)la la velocidad 4,24< 4,4?4 o 4,44KC y sus
correspondiente 01
01 Km
1 .0 ma.
+

S V
V

1 0J.14 Km
1 14 J .0 2J , 4
24 , 4
J $
J
+


x

Km / 1,2J.14
$J
moles56
e& a)iendo Km y -ma., aplicar *ichaelis utilizando 01
01 Km
1 .0 ma.
+

S V
V
1 01.14 1,2J.14
1 14 1 .0 2J , 4
C $ J $
C
+


x
V
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- / 4,41B=mol5min
>.$ a partir de los siguientes datos de una reacci+n enzimtica, determinar de qu3 manera
est actuando el inhi)idor. Leterminar -ma., Km para el enzima y la Ki para el
comple'o enzima$inhi)idor.
#S$ &M *+ ,rod-"o(hor.
%sin inhibidor)
*+ ,rod-"o(hor.
%/ &M inhibidor)
2 1>K BB
> 1?K 121
@ 21> 1@K
14 >1> 2J?
1J >?4 >1>
Solucin
e resuelve con grafica. e calculan los inversos de 01, producto sin inhi)idor y
producto con inhi)idor, se representa y / 15- frente a M / 1501
in inhi)idor:
6a l,nea corta en N / 2.14
$>
, entonces 15 -ma. / 2.14
$>
, luego -ma. / 4,J.14
>
=g5h.
6a l,nea corta en M / $ 2.14
$1
, entonces $15 Km / $2.14
$1
, luego Km / J m*
:on inhi)idor:
:omo es un inhi)idor competitivo la -ma. es la misma en presencia y ausencia de
inhi)idor.
6a l,nea corta en M / $1,1.14
$1
, entonces $15Km / $1,1.14
$1
, luego Km / K m*.
6a Ki se calcula:
Km
Ki
I
Km .
1 0
1 H
1
]
1

+
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J .
C
1 K
1
]
1

+
Ki
Ki / ?,J m*
@.$ ha)i3ndose conseguido aislar de almonella tiphymurium una enzima que cataliza la
reacci+n 7"#, se decidi+ hacer un estudio estructural y cin3tico de dicha enzima.
#A$ &M 1,44 4,JJ 4,2J 4,24
V%&&o' P(&in) 1,44 4,?1 4,J4 4,@1
V%&&o' P(&in) "on 0 4,CC 4,@1 4,2J 4,24
Londe O es un inhi)idor de E cuya influencia como tal se quiere estudiar 0O1 / 4,2Jm*
a& calcular Km de la enzima estudiada para 7 y -ma. para la transformaci+n 7"#
en presencia de E
)& qu3 tipo de inhi)idor es O, calcular Ki.
c& :ul ser,a el efecto so)re la -ma. de la enzima, de un aumento de la
concentraci+n de O.
Solucin
a& -ma. / -ma.G / 1,CC mmol #5min
Km / 4,J m*
)& KmG / 1,2J m* con inhi)idor
c& Ki / 4,1C m* inhi)ici+n competitiva
J.$ 6a cin3tica de una enzima viene determinada como funci+n de la concentraci+n de
sustrato en presencia y ausencia de inhi)idor 8.
#S$ M123
-4
4,> 4,J 1,4 >,4 K,4
V %5&o'(&in) sin inhibidor
14,@ 1@,J 22,J >>,B @4,J
V %5&o'(&in) "on inhibidor 23
-6
M
2,1 2,K @,J C,B B,1
a& :alcular la Km y la -ma. en presencia y ausencia de inhi)idor
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)& Pu3 tipo de inhi)idor es. :alcular Ki
Solucin
a& -ma. / J4=mol5min
-ma.G / K,J =mol5min
Km / 1,1 .14
$J
)& Ki / 2,>.14
$J
* %inhi)idor no competitivo&
C.$ :ual ser la constante de velocidad de una reacci+n de primer orden cuya vida media
es de 4,> segundos. Pue intervalo de tiempo de)er transcurrir para que desaparezca el
KJ Q del reactivo.
Solucin
t
152
/ 4,CK> I / 4,CK> / 2,>1 s
$1
I 4,>
[ ]
[ ]
t K
f
. ln
4

,
_

[ ] [ ]
O
144
J

6n
[ ]
[ ]
Kt
f
O
6n
[ ]
[ ]
kt
O
O
144
J 6n
[ ]
[ ]
kt
O
O
J
144
6n 24 / It
t /
s t
s
t
k
> , 1
>1 , 2
24 ln 24 ln
1

?.$ qu3 relaci+n num3rica e.iste entre Km y 01 cuando una reacci+n catalizada
enzimticamente alcanza el B4Q de la velocidad m.ima.
Solucin
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01 Km
1 .0 ma.
+

S V
V
-ma..01
1 0 1 S Km
V
+

ma.
1
1 0
1
.
ma. ma. B , 4
1
V S V
Km
V
+
1
1 0 B , 4
1
+
S
Km
@
1 0

Km
S
B.$ 144 Rg de una enzima a 2JS: descomponen en 14 minutos el 1Q de un sustrato 4,1
*. la misma cantidad de enzima, en un minuto, descomponen el JQ del sustrato 14
$>
*.
:alcular la Km, -ma.
Solucin
Km / 1,424 . 14
$>
*
-ma. / 1,41 . 14
$@
*5min
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