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PRODUCCIN DE BIOFERTILIZANTES A PARTIR DE RIZOBACTERIAS AISLADAS DE PLANTAS AGROFORESTALES

lvaro Orlando Gutirrez Baeza


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1. Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrcolas y Pecuarias

INTRODUCCIN. Los biofertilizantes, son una alternativa para los productores de bajos ingresos, stos son microorganismos que viven en el suelo y son capaces de incrementar la produccin agrcola. Los microorganismos de vida libre fijadores de nitrgeno, se encuentran en suelos con alto contenido de materia orgnica, fijan nitrgeno en menor proporcin que los simbiticos, no por ello dejan de ser de inters para la ciencia agrcola OBJETIVO. Fue aislar y caracterizar rizobacterias para conocer su potencial como promotoras de crecimiento vegetal a partir de 14 plantas agroforestales, para ser utilizadas como biofertilizantes

MATERIALES Y METODOS. El mdulo, esta ubicado en los paralelos 18 46` y 18 51` de latitud norte y en los meridianos 88 20` y 88 32` de longitud oeste; 26C de temperatura promedio, precipitacin entre 800 y 1500 mm anuales y suelos vertisoles (FAO/UNESCO). Fue establecido en el ao de 1975, consiste de una superficie de 12 ha de forma rectangular de 200x600 m2. en l se escogieron 14 plantas agroforestales por su importancia agronmica, Pimienta, Caoba, Cedro, Mago, Maculis, Aguacate, Ciricote, Chicozapote, Naranja, Pich, Ramn, Negrito, Achiote y Huaxin, (Chavelas, 1979). La etapa de campo, se realiz de abril de 1999 a abril del 2000, se identificaron cinco plantas por parcela y de ellas se tomaron cinco submuestras a nivel rizsfera a 015 cm de profundidad, para un total de 25, dichas muestras se extrajeron mediante pala recta, depositndolas en bolsas plsticas y en nevera, para su traslado al laboratorio, en donde se conservaron bajo refrigeracin. Se procedi al aislamiento de las bacterias promotoras del crecimiento vegetal (BPCV), utilizando el medio de cultivo carbono combinado especfico para estas bacterias, se realizaron diluciones de 1x 10-1 hasta 1x10-6, de las diluciones 1x10-4, 1x10-5, 1x10-6, se tomaron con micropipeta 0.1 ml y se rastrillaron en cajas petri con el mediode carbono combinado con tres repeticiones, se incubaron por 7 das a 30C. Se identificaron 24 cepas bacterianas de las 14 plantas, las que se agruparon como cremosas, translcidas y semitranslcidas. En matraces erlenmeyer de 50 ml de capacidad contenido 30 ml del medio de carbono combinado lquido, se pusieron a desarrollar las bacterias, se colocaron en agitacin en un Eberbach para favorecer su desarrollo, este se realiz 5 horas diarias por espacio de tres das, posteriormente se realizaron conteos en un espectrofotmetro UV-visible a 600 nm de longitud de onda, utilizando la escala de McFarland. Se utilizaron macetas de plstico con capacidad de 4 kg las cuales se llenaron con 3.5 kg de una mezcla de suelo 3.4 kg y 100 g de abono orgnico; esta mezcla fue esterilizada en autoclave a 18 libras presin por 18 minutos (en dos ocasiones). Las macetas, se desinfectan con alcohol al 95 %, las semillas de ambas plantas se desinfectaron en alcohol 95% por un minuto, despus en hipoclorito de sodio al 3 % por tres minutos y luego se lavaron 6 veces con agua destilada estril, por ltimo

se colocaron en cajas petri con papel filtro previamente esterilizado. Una vez desarrolladas 5-7 das, se transplantaron 4 plntulas por maceta, a la semana se ralearon dejando las dos mejores y se inocularon con 1 ml de la suspensin de BPCV previamente contadas con espectrofotmetro UV-visible, mediante la escala de Mcfarland. Se formaron 26 tratamientos con dos testigos, uno con medio de cultivo y el otro nicamente con agua destilada (ambos sin bacterias), colocndose mediante un diseo de bloques completamente al azar con tres repeticiones, realizando el anlisis de varianza y prueba de medias para diferenciar estadsticamente. Cada semana se tomaron lecturas de las alturas de dichas plantas, asimismo se regaron cada segundo da, hasta su cosecha a los 70 das despus del transplante, determinado la materia seca del follaje y races. RESULTADOS. El mayor nmero de BPCV, se encontr en la rizsfera de la planta de pimienta con 1.7x109 bacterias cremosas, seguido por la planta de caoba con 1.6x109 b. cremosas y en tercer lugar fue para las plantaciones de cedro b. cremosas y negrito b. translcidas con 1.5x109 en ambos casos y el menor nmero se encontr en las plantaciones de aguacate con 1.1x109 b. translcidas. Con excepcin de las plantaciones de mango, maculis, chicozapote y ramn, en la que se encontr una sola cepa, en las dems plantaciones se encontraron dos cepas microbianas con caractersticas distintas. El anlisis de varianza en clitoria de los 26 tratamientos, mostr diferencias significativas P<0.05. La comparacin de medias empleando la prueba de Tukey indic que el tratamiento 5; bacterias cremosas aisladas de la planta de cedro presentaron el mayor promedio con 139 cm, seguido por las b. cremosas de pimienta con 123.2 cm, y de la caoba con 106 cm, mientras que el tratamiento 26 (testigo absoluto, agua destilada) present el promedio ms bajo con 76.2 cm (grfica 1). El anlisis de varianza en lechuga, mostr diferencias altamente significativas P<0.01. La comparacin de medias empleando la prueba de Tukey indic que el tratamiento 5, bacteria cremosa aislada del cedro, obtuvo el mayor promedio con 28.5 cm, seguido del tratamientos 4, b. translucidas de la caoba y 10 b semitranslcidas del ciricote, ambas con 26 cm., mientras que el tratamiento 23, b. cremosa, de Huaxin, present el promedio mas bajo con 17 cm. Los inculos microbianos aislados de la rizsfera de pimienta, caoba, cedro y ciricote, fueron las que promovieron el mayor crecimiento para ambas plantas trampa (clitoria y lechuga). nicamente con la excepcin del achiote y negrito, por tal motivo se escogieron estas 8 cepas bacterianas de las 24 originales, para formar biofertilizantes. El porcentaje de materia seca (MS) del follaje y raz de Lechuga y Clitoria se realiz con la finalidad de comparar los resultados respecto a la altura, que fue la principal caracterstica considerada en la presente evaluacin. El anlisis de varianza de materia seca del follaje en lechuga indic diferencias altamente significativas P<0.01, la prueba de medias DMS, indic que la mejor respuesta fueron las bacterias cremosas del tratamiento 11, correspondiente a la bacteria aislada del aguacate con un promedio de 24.8 g, seguido del tratamiento 16, bacteria cremosa aislada del pich con una media de 20.1 g y del tratamiento 6, bacteria translcida aislada del Cedro con 16.6 g, (grfica 3). Cabe mencionar que no se encontraron diferencias importantes respecto a los tratamientos 25 y 26 correspondientes a los 2 testigos empleados en esta evaluacin, dando el primero un promedio de 13 g y el segundo 9.09 g (grfica 3). En relacin a la materia seca en raz en lechuga, el anlisis de varianza mostr diferencias altamente significativas P<0.01, la prueba de medias DMS, indic que la mejor respuesta se obtuvo con las bacterias

translucidas del tratamiento 22, bacteria aislada del achiote con un promedio de 76.3 g, seguido del tratamiento 2; bacteria translucida aislada de la pimienta con una media de 48.6 g y de la bacteria translcida del tratamiento 6, aislada del cedro con 47.6 g, (grfica 3). Con respecto al porcentaje en materia seca de la parte area en la planta trampa de clitoria el anlisis de varianza encontr diferencias altamente significativas P<0.01, la prueba de medias DMS, indic que la mejor respuesta se encontr al inocular bacterias translucidas promotoras de crecimiento vegetal correspondientes al tratamiento 19 (cuadro 2); bacterias aisladas de la rizsfera de la planta agroforestal de negrito con un promedio de 42.1 g, seguido del tratamiento 24; correspondiente a las bacterias translucidas aisladas de la planta de huaxim con un promedio de 40 g, y del tratamiento 20; bacterias semitranslucidas aisladas del negrito con una media de 38.1 g. (grfica 4). En cuanto al porcentaje de materia seca de raz en la planta tutora de clitoria, el anlisis de varianza arroj diferencias altamente significativas P<0.01, la prueba de medias DMS, indic que la mejor respuesta se encontr al inocular bacterias cremosas promotoras de crecimiento vegetal aisladas de la planta agroforestal de pimienta con un promedio de 39.5 g (tratamiento 1); seguido del tratamiento 2 que corresponde a las bacterias translcidas aisladas de la planta de pimienta con una media de 37.8 g y del tratamiento 5, bacterias cremosas aisladas de la planta de cedro con un promedio de 36.6 g (grfica 4). CONCLUSIONES. De las 24 cepas bacterianas evaluadas, se escogieron las mejores 8 con mayor potencial como bacterias promotoras de crecimiento vegetal (BPCV), aisladas de la rizsfera de 14 plantas agroforestales, para ser utilizadas como biofertilizantes. El mayor nmero de rizobacterias se encontr en la rizsfera de las plantas de pimienta con 1.7x109, caoba con 1.6x109y cedro y negrito ambas con 1.5x109. Se puede mencionar en forma general que la mejor respuesta de las BPCV fueron aisladas en la rizsfera de las plantas agroforestales de pimienta , caoba, cedro y ciricote, as como del achiote y negrito. LITERATURA CITADA. Alvarez, S.J.D. R. Ferrera Cerrato 1994. Los microorganismos del suelo en la estructura y funcin de los agroecosistemas. Instituto de Recursos naturales, programa de Edafologa. Colegio de Postgraduados en ciencias Agrcolas. Montecillo, Estado de Mxico 44 pp. Chavelas, P.J. 1979. Mdulo de uso mltiple del suelo en regiones tropicales (agrosilvocultura). Ciencia Forestal. Instituto Nacional de Investigaciones Forestales. 4 (19) 3-14.