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Universidad Autnoma de Campeche

Facultad de Ciencias Qumico Biolgicas Determinacin de metabolitos secundarios en la hoja de lima ( Citrus aurantium)
O. A Domnguez-Balan , D. A. Justiniano-Canul, E. I. Keb-Tamayo, F. S. Martnez-Arcos, C. A. Quevedo-Castrejn, A. J. Trujillo Lpez, G. A. Wicab Ch.
Universidad Autnoma de Campeche, Facultad de Ciencias Qumico Biolgicas, Qumico Farmacutico Bilogo. INTRODUCCIN El trabajo siguiente tuvo como objetivo la determinacin cualitativa de los metabolitos secundarios de los extractos de la hoja de Citrus aurantium, se realizaron diferentes extracciones con alcohol y agua a distintas temperaturas, para determinar los metabolitos secundarios presentes en la hoja de C. aurantium, se realizaron diferentes tcnicas, como la prueba Fehling para determinar azucares reductores, la prueba de ninhidrinas para aminas, determinacin de principios amargos y astringentes, purba de muclagos, prueba de flavonoides, saponinas entre otras. Obteniendo como resultado de los macerados acuosos (figura 1) la presencias de azcares reductores, muclagos. antocianidinas, flavonoides, fenoles, taninos, alcaloides, quinonas y pricipios amargos. Por su parte, los macerados de procedencia alcohlica (figura 2) presentaron: aminas, terpenos, esteroides, saponinas, fenoles, taninos, alcaloides, quinonas y principios astringentes. Para la deteccin de fenoles y taninos en un tubo de ensayo se dispuso 0.5 mL del extracto; se
le aadio 0.25 mL de cloruro frrico al 5 % en solucin salina. Al extracto acuoso se le adicion acetato de sodio previo al ensayo. en la determinacin especfica de taninos, de la prueba anterior se extrajo 0.5 mL del extracto y se le adicion 0.5 mL de gelatina al 1 % en cloruro de sodio al 0.85 %. Para la deteccin de los alcaloides se utiliz el mtodo de Dragendorff, se ocup un tubo de ensayo para la determinacin aadiendo 0.5 mL de extracto al igual que 0.5 mL del reactivo de Dragendorff. Para la especificacin de quinona en un tubo de ensayo; se agreg 0.5 mL del extracto y se diluyo en proporcin 1:1 en cloroformo y luego se agit, despus de un determinado tiempo se agreg 0.5 mL de hidrxido de sodio al 5 % y se agit vigorosamente.
RESULTADOS Hoja de lima (Citrus aurantium)

Prueba PRUEBADE FEHLING PRUEBA NINHIDRINA (AMINAS)

Agua caliente

Agua fra

Alcohol caliente

Alcohol frio

MATERIALES Y MTODOS Se recolectaron 900 gr de la hoja de C. aurantium aleatoriamenten a una altura de 3, m (figura 1), aproximadamente, se sec la muestra orgnica por 4 horas en una estufa como se muestra en la figura 3 teniendo un peso inicial de 184gr y posteriro al secado un peso de 106.35gr, dando as un porcentaje de humedad de 55.69 %. Posterior al secado se tritur el material orgnico y se someti a maceracin esttica por una semana aadiendo 10gr de la muestra y 100 ml de cuatro diferentes solventes; obteniendo asi cuatro maceraciones: Agua fra, agua caliente, alcohol fro y alcohol caliente.

PRUEBADE MUCLAGOS PRUEBADE ANTOCIANIDINAS PRINCIPIOS AMARGOS Y ASTRINGENTES PRUEBADE TERPENOS Y ESTEROIDES PRUEBADE SAPONINAS

+ +

+ +

Amargo

A margo

A stringente A stringente

Figura .- Estufa de secado.

Figura 3.- Material orgnico secado.

PRUEBADE GLCOSIDOS CARDIOTNICOS

Figura 1.- Planta de lima C. aurantium


Se realizaron una series de pruebas para determinar las propiedades para determinar las propiedades que tiene el extracto de la hoja de C, aurantium, como la determinacin de azcares reductores, la determinacin de muclagos, principios amargos y astringentes, antocianidinas, determinacin de terpenos, esteroides, saponinas, glucsidos cardiotnicos, alcaloides y grupos lactnicos. Para la determinancin de azcares se utiliz la prueba de Fehling. Se realiz tomando una gota del extracto de la maceracin, se trat con una gota de reactivo de Fehlign A y una gota de Fehlign B y se someti a bao mara por tres minutos. La prueba de aminas se determin mediante la tcnica de ninhidrina, se tomaron dos gotas de extracto y se le aadieron dos gotas de ninhidrina al 5 % en etanol, se someti a bao mara por cinco minutos. La determinacin de los muclagos se vio mediante la viscosidad que present el extracto. Para el ensayo de los principos amargos o astringentes se coloc una gota de extracto en placas de ELISA y se diluy con cinco gotas de agua, se prob el resultado. La identificacin de antocianidinas se realiz depositando dos gotas del extracto en uhn tubi se ensayo y se llev a sequedad; el residuo se diluy en 10 gotas de Hcl 2N. Posteriormente se coloc el tubo mara durante 15 minutos y para determinar se le agregaron dos gotas del alcohol amlico. la prueba de los triterpenos y esteroides se realiz agregando en un pozo de la placa de ELISA, dos gotas del extraco con dos gotas de cloroformo, posteriormente se le aadieron dos gotas de anhdrido actico. Se le adicion dos gotas de cido sulfrico concentrado. En el ensayo de saponinas, en un tubo de ensayo se adicion 1 mL de extracto con 1 mL de agua destilada y se agit la mezcla durante dos minutos. Para los gluccidos cardiotnicos se agreg dos gotas del extracto en las placas de ELISA, se mezcl con dos gotas de cido-3,5- dinitrobenzico al 2 % en metanol y dos gotas de hidrxido de potasio en agua. La prueba de sudan se us para determinar lpidos y aceites esenciales, se realiz extrayendo 0.5 mL del extracto y adicionandolo en un tubo de ensayo. Se le aadi 0.5 mL de sudan III al 0.6 % en glicerina-agua 1:1 Para la determinacin de flavonoides se uso el mtodo de Shinoda. En un tubo de ensayo, se aadi 1 mL de agua destilada con1 mL de extract, luego se adicion 0.5 de cido clohdrico y un pequeo trozo de magnesio metalico.Una vez terminada la reaccin se le adicion 0.5 mL de cido amlico y se agit.
Para la identificacin de los agrupamientos lactnicos se agrego a un tubo de ensayo 0.5 mL del extracto obtenido al cual se le agreg 0.5 mL de cido picrico al 1 % en etanol y 0.5 mL de hidrxido de sodio al 10 % en agua, en esta identificacin se obseerv el cambio de color y un precipitado rojo.

PRUEBADE LIPIDOS Y ACEITES ESENCIALES PRUEBADE FLAVONOIDES PRUEBADE FENOLES Y TANINOS PRUEBADE ALCALOIDES PRUEBADE QUINONAS PRUEBADE AGRUPAMIENTO LACTNICOS + + + + + +

CONCLUSIN Al concluir con la serie de pruebas se determin que las extracciones procedentes de las maceraciones acuosas a diferentes temperaturas, poseen una mayor cantidad de metabolitos secundarios que los de procedencia alcohlica. Cabe mencionar que las maceraciones alcohlicas presentaban metabolitos que no se presentaron en las procedentes de las acuosas. Como son las aminas, las saponinas, los terpenos y los esteroides. BIBLIOGRAFA -AVENDAO, C (2001). Intriducci{on a la qumica farmacutica. Madrid: Mc Graw Hill -KUKLINSKLI, C (2000). Far acognosia, estudios de las drogas y sustancias medicamentosas de origen natural. Omega

AGRADECIMIENTOS
Bilogo Ricardo Efran Gngora Chin Tcnico docente del centro de estudios de derarrollo sustentable y aprovechamiento de la vide silvestre (CEDESU)